Hereditariedade ligada aos CROMOSSOMAS SEXUAIS

Thomas H. Morgan embriologista, desenvolveu trabalho com as moscas

Drosophila Melanogaster (mosca da fruta).
Razes para o uso de Drosophila Melanogaster:
Apresenta um curto perodo de desenvolvimento e apresenta
cromossomas muito grandes, que facilitam o seu estudo e observao.

Aspeto da Drosophila
Melanogaster
Forma
selvagem
Corpo cinzento
Olhos
vermelhos
Asas longas

Forma mutante
Corpo negro
Olhos brancos
Asas vestigiais

Representamos a constituio gentica das formas alternativas pela letra

inicial da palavra inglesa que expressa a caracterstica que elas manifestam.
Exemplo: alelo para olhos brancos -> w (white). Quando da forma
selvagem w+.
Nas experincias de Mendel no era relevante que um determinado
fentipo pertencesse a uma fmea ou a um macho o cruzamento recproco
no interferia nos resultados.
Os resultados obtidos por Morgan eram diferentes ao cruzar uma fmea
de olhos vermelhos com um macho de olhos brancos no obtinha os
mesmos resultados de quando cruzava uma fmea de olhos brancos com
um macho de olhos vermelhos.
No 1 cruzamento todos os indivduos apresentavam olhos vermelhos,
sendo 50% machos e 50% fmeas de acordo com o previsto por Mendel.
No 2 cruzamento as fmeas tm todas olhos vermelhos e os machos
olhos brancos no se verifica a uniformidade fenotpica dos indivduos da
primeira gerao.

COMO EXPLICAR?
Na Drosophila, como na maioria das espcies animais, existe um par de
cromossomas chamado cromossomas sexuais.
Indivduos que
HOMOGAMTIC
apresentam dois
OS
cromossomas sexuais
idnticos
Indivduos que
HETEROGAMTIC
apresentam dois
OS
cromossomas sexuais
diferentes entre si
Como a espcie humana, as fmeas de Drosophila, para alm dos
autossomas, apresentam dois cromossomas sexuais X, enquanto que os
machos apresentam, para alm dos autossomas, um cromossoma sexual X
e outro, mais curto e praticamente desprovido de genes, Y.
O sexo heterogamtico portanto o masculino.
Se considerarmos que o alelo da cor branca dos olhos de Drosophila se
localiza no cromossoma X, podemos justificar o resultado dos dois
cruzamentos.
As caractersticas hereditrias que dependem de genes localizados no
cromossoma X so caractersticas ligadas ao sexo.
Nestes casos, os resultados obtidos no cruzamento direto e no seu
recproco so diferentes. Estes resultados devem-se ao facto de o
cromossoma Y do macho no possuir os alelos correspondentes do
cromossoma X, dado que os dois cromossomas no so totalmente
homlogos.
A maior parte dos genes localizados no cromossoma X no tm alelo
correspondente no cromossoma Y, pelo que existe um nico alelo para esse
gene e esse alelo exprime-se sempre no fentipo dos machos, que so
hemizigticos.
Os genes presentes no cromossoma Y so transmitidos DE PAI PARA
FILHO. Os genes presentes no cromossoma X so transmitidos de PAI PARA
FILHA e de ME PARA FILHO OU FILHA.
Transmisso de um alelo
DOMINANTE ligado ao
cromossoma X
O carter exprime-se sempre
nos homens, de uma forma
mais severa do que nas
mulheres
O carter exprime-se nas
mulheres homozigticas
dominantes e heterozigticas
Um homem afetado tem uma
me afetada
Uma mulher afetada tem uma
me afetada ou um pai afetado

Transmisso de um alelo
RECESSIVO ligado ao
cromossoma X
O carter exprime-se sempre
nos homens
O carter exprime-se apenas
nas mulheres homozigticas
recessivas ( e nos homens?)
Um homem afetado tem uma
me afetada ou portadora
Uma mulher afetada tem
obrigatoriamente um pai
afetado e uma me afetada ou

Sndrome de Rett, hipertricose

portadora
Daltonismo, hemofilia, diabetes
inspidos

Os trabalhos de Morgan so excees s Leis de Mendel contudo,

apoiaram a teoria cromossmica da hereditariedade.

Ligao
fatorial

Descrio

Exemplos de situaes em
que se verifica

Os
genes
localizados
no
mesmo
cromossoma, no sofrem geralmente,
segregao independente na meiose
ficam juntos nos mesmos gmetas e, por
isso, os fentipos da descendncia no
seguem as propores previstas pelas Leis
de Mendel.
Os fenmenos de crossing-over podem
separar genes ligados, o que faz com que
se comportem como se estivessem
localizados em cromossomas diferentes e
apaream recombinados na descendncia.
Quanto mais distantes estiverem dois
genes no mesmo cromossoma, maior a
probabilidade de serem separados por
crossing-over.

O
gene
do
grupo
sanguneo Rh e o gene da
eliptocitose (uma forma
de
anemia)
esto
localizados
no mesmo
cromossoma. Estes dois
cromossomas
so
herdados em bloco por
96% dos indivduos e 4%
dos
indivduos
so
recombinantes.

Explicao do manual
Cada cromossoma tem de ter muitos genes.
Os genes que se dispem linearmente ao longo do mesmo cromossoma
dizem-se em linkage e constituem um grupo de ligao fatorial so
transmitidos em bloco.

Cruzam-se indivduos de duas linhas puras com caractersticas

antagnicas.
Fenotipicam
Corpo
x Corpo cinzento
ente
negro e
e asas longas
asas
vestigiais
Genotipicam
bbvgvg
x
b+b+vg+vg+
ente
b smbolo do alelo responsvel pela cor negra (black)
vg smbolo do alelo responsvel pelas asas vestigiais
( vestigials)
b+ - smbolo do alelo responsvel pela cor selvagem (cinzenta
DOMINANTE)
vg+ - smbolo do alelo responsvel pela forma selvagem das asas
(longas DOMINANTE)

O cruzamento destas linhas puras resulta numa gerao F1 cujos

resultados correspondem a uma situao normal de diibridismo, em que os

descendentes so HETEROZIGTICOS e manifestam as caractersticas do

ALELO DOMINANTE.
Fentipo Corpo cinzento e asas longas
Gentipo heterozigtico b+bvg+vg
para que se mantivessem as previses mendelianas, deviam agora surgir
quatro classes fenotpicas, que seriam:
Fentipo dos
descendentes
Corpo cinzento
e asas longas
Corpo negro e
asas longas
Corpo cinzento
e asas
vestigiais
Corpo negro e
asas vestigiais

Resultados
esperados
em
diibridismo
9/16

Resultados
Estes
observados

3/16

3/16

1/16

1/4

3/4

resultados so explicados
pelo facto de os alelos do corpo
negro e asas vestigiais esto
situados no mesmo cromossoma
so transmitidos em conjunto (no
h
segregao
independente
prevista
por
Mendel)

correspondem a um cruzamento de
Linhas puras em monibridismo.

Nem sempre os genes em linkage se comportam como uma unidade

inseparvel pode acontecer, que como resultado de crossing-over durante
a meiose, os genes se separarem, como se estivessem em cromossomas
separados.
Assim, obtm-se uma descendncia qualitativamente igual prevista
numa segregao independente (em que os alelos so segregados de forma
aleatria). Contudo, estes genes s se transmitem deste modo quando h a
sua separao em crossing-over, e isto ocorre muito menos frequentemente
que a transmisso em bloco.
Embora possam surgir as 4 classes fenotpicas esperadas, as suas
propores so completamente aleatrias.

Organizao e regulao do material gentico

Genoma totalidade do material gentico de um indivduo (contm
todos os genes).
Gene sequncia de nucletidos de uma molcula de DNA que origina
uma molcula de RNA funcional.
Organizao do Material Gentico

Genoma dos procariontes

Molcula circular de DNA associada

a protenas no histnicas, que
forma o seu nico cromossoma e se
concentra na regio do nucleoide.
Algumas
bactrias
tambm
possuem molculas circulares de
DNA chamadas plasmdeos.

Genoma dos eucariontes

Vrias molculas lineares de DNA
nuclear associadas a uma grande
quantidade de protenas, especialmente
histonas, formando a cromatina. Cada
molcula de DNA associada a protenas
constitui um cromossoma.
Tambm
possui
material
gentico
extranuclear.
As mitocndrias e cloroplastos
contm DNA que codifica produtos
essenciais sua funo biolgica e que
muito semelhante ao DNA bacteriano.

Um caritipo organiza os cromossomas metafsicos aos pares com base

no seu tamanho e noutras marcas fsicas, como a posio do centrmero.
O caritipo humano tem 46 cromossomas, organizados em 23 pares.
44 so autossomas e so idnticos nos dois sexos (possuem os mesmos
genes, na mesma sequencia) e 2 so heterossomas (ou cromossomas
sexuais).
A anlise do caritipo til para confirmar diagnsticos clnicos de
certas doenas de transmisso hereditria a comparao de caritipos de
diferentes espcies permite encontrar relaes evolutivas.
Regulao do material gentico
Temos muitos genes no nosso corpo, mas s apenas alguns se
manifestam. Tem de haver portanto uma regulao dos genes. Este
processo foi estudado pelos franceses Franois Jacob e Jacques Monod.
Os organismos unicelulares reagem s variaes do meio ambiente,
variando a expresso dos genes e ajustando o seu metabolismo
desenvolveram mecanismos de resposta RPIDOS face s alteraes das
condies do meio, das quais dependem muito.
Nos eucariontes multicelulares, o controlo da expresso dos genes torna
possvel que as clulas com o mesmo DNA possam divergir (em forma e
funo), tornando-se especializadas.
A transcrio do DNA para mRNA um exemplo da regulao da
expresso dos genes.
Modelo do Opero
(principal mecanismo de controlo da expresso dos
genes em bactrias)
Opero Unidade funcional constituda pelos elementos descritos
Genes
estrutu
rais
Gene
promot
or
Gene
operad
or
Gene

abaixo.
Conjunto de genes que codificam protenas com funes
relacionadas.
Ex.: enzimas de uma determinada via metablica

Sequncia especfica de nucletidos do DNA qual se

liga a RNA polimerase e onde tem incio a transcrio
Sequncia de DNA que controla o acesso da RNA
polimerase ao promotor e que permite ativar ou
desativar a transcrio de todos os genes estruturais
Encontra-se a uma determinada distncia do opero,

regulad tem o seu prprio promotor e codifica o repressor

or
uma protena alostrica
com
duas formas,
ativa e
de um
operao
douma
tipo
Repres Funcionamento
uma inativa. especfico, reconhece e liga-se apenas ao
sor
repressivo
operador de um determinado opero.

NA AUSNCIA DE TRIPTOFANO
O gene regulador produz um
repressor que est inativo;
O operador est livre;
A RNA polimerase pode ligarse ao promotor;
D-se a transcrio;

Ocorre a sntese de
enzimas.

NA PRESENA DE
TRIPTOFANO
O triptofano liga-se ao
repressor, ativando-o;
O repressor liga-se ao
operador;
A RNA polimerase no pode
ligar-se ao promotor;
No se d a transcrio;

No se sintetizam as
enzimas.

Explicao do funcionamento do opero lac.:

Funcionamento de um operao do tipo

NA AUSNCIA DE LACTOSE
O gene regulador determina a
sntese de um repressor;
O repressor bloqueia o
promotor, ao ligar-se ao
operador;
A enzima RNA polimerase no
se liga ao promotor;
Os genes estruturais no so
transcritos;

No ocorre a sntese
das trs enzimas.

indutivo

NA PRESENA DE LACTOSE
A lactose liga-se ao repressor,
inativando-o;
O operador fica desbloqueado;
A enzima RNA polimerase ligase ao promotor;
Os genes estruturais so
transcritos;

D-se a sntese de
enzimas.

Explicao do funcionamento do opero trp.:

Muitos genes de um genoma se destinam a regular o funcionamento de

outros genes.
Os genes que se expressam numa determinada situao dependem das
interaes que o ambiente estabelece com o DNA.

Transmisso Gentica de Genes Mitocndriais

O material gentico contido nas mitocndrias transmitido pela me
para os filhos e filhas. A razo para este facto simples: o citoplasma (e
todos os seus constituintes) que vai dar origem ao zigoto proveniente do
ocito (tem, portanto, todos os organelos celulares da me incluindo a
mitocndria!); o espermatozoide, apenas contribui com o ncleo para a
formao do zigoto, pelo que no so transmitidas as mitocndrias do
progenitor masculino.
Diferenas e semelhanas entre o DNA mitocondrial e o DNA nuclear.

DNA mitocondrial
No possui exes
No ocorre crossing-over
Possui vrias cpias de DNA em
cada mitocndria, permitindo que na
mesma clula existam diferentes
alelos para o mesmo gene
Taxa de mutao muito elevada
No possui enzimas que reparam o
DNA

DNA nuclear
Possui exes
Ocorre crossing-over
S possui uma cadeia (com dupla
hlice) de DNA no ncleo da clula
Taxa de mutao pouco elevada
Possui enzimas que reparam o DNA

Mutaes
Mutao alterao permanente no material gentico que afeta a
expresso de um ou mais genes.

Apesar
de
se
darem
centenas de alteraes do DNA
por dia, as clulas possuem
enzimas capazes de corrigir ou
eliminar pores mutadas do
DNA, diminuindo a hiptese de
esta ser uma mutao que se
manifeste
fenotipicamente.
Podem
ser
gnicas
ou
cromossmicas.
m. gnicas alteram a
estrutura do DNA;
m.
cromossmicas

alteram a estrutura/nmero de
cromossomas;
m.
silenciosas

no
alteram a protena ou a sua
ao;
m. letais provocam a
morte ou doenas e anomalias;
m. benficas levam
evoluo das espcies;
m. prejudiciais provocam a morte do indivduo.
Agentes mutagnicos so fatores do meio que provocam mutaes em
genes e/ou cromossomas.

As mutaes podem ocorrer em clulas somticas ou germinativas.

Mutao somtica
Ocorre durante a replicao do DNA que precede uma diviso
mittica.
Pode originar um conjunto ou um clone de clulas mutantes identicas
entre si, que se distinguem das restantes clulas do indivduo.
A descendncia do indivduo no afetada.
Este tipo de mutao est na origem de certos cancros.
Mutao nas clulas germinativas
Ocorre durante a replicao do DNA que precede a meiose.
A mutao afeta os gmetas e todas as clulas que dela descendem
aps a fecundao.
Mutaes gnicas

Ocorrem quando se d uma alterao pontual ao nvel dos nucletidos de

um gene, constituindo-se uma nova verso do gene.
Alteram a sequencia de nucletidos do DNA, por substituio, adio
(insero) ou remoo (deleco) de bases.
Estas mutaes podem conduzir modificao da molcula de mRNA que
transcrita a partir do DNA e altero da protena produzida. O efeito
desta alterao imprevisvel, dependendo de qual o tipo de mutao e
qual a protena que passa a ser codificada. Pode ter efeitos benficos e
levar evoluo da espcie, ou pode ser prejudicial e causar a morte do
indivduo ou um grande numero de doenas e anomalias. Pode tambm ter
um efeito neutro, no causando quaisquer modificaes.

Mutaes gnicas
Substitui
o
Insero

Deleco

Ocorre a troca de um ou mais pares de bases.

Acontece quando uma ou mais
bases so adicionadas ao DNA,
modificando a ordem de leitura
da molcula durante a
replicao ou transcrio.
Acontece quando uma ou mais
bases so retiradas do DNA,
modificando a ordem de leitura,
durante a replicao ou
transcrio.

A adio/remoo de um
numero que no seja
mltiplo de trs altera
completamente a
mensagem do gene.

Mutaes cromossmicas
Traduzem-se numa alterao da estrutura ou do nmero de
cromossomas. Podem afetar uma determinada regio de um cromossoma,
um cromossoma inteiro ou todo o complemento cromossmico de um
indivduo.

Mutaes cromossmicas numricas

Tipo de
mutao

Definio/causas

Consequncias/exempl
os

Existe pelo menos um conjunto

completo de cromossomas a
mais.

comum nas plantas. As

plantas
poloplides
podem
autopolinizar-se
ou cruzar-se com plantas
semelhantes.
Nos humanos embies
poliploides
no
se

Entre as causas possiveis:

-fecundao de um ocito
espermatozoides;

por

Aneuploidia
Poliploidia

-fecundao de um gmeta diploide

(triploidia);
-falta de diviso do zigoto aps a
replicao dos cromossomas

Existem cromossomas a mais ou

a menos em relao ao numero
normal.
Geralmente, envolve apenas um par de
cromossomas e pode ser autossmica
ou nos cromossomas sexuais.
Podem distinguir-se:
Polissomia um ou mais cromossomas
extra;
Monossomia um cromossoma em
falta;
As aneuploidias so causadas pela nodisjuno dos cromossomas homlogos
ou dos cromatdeos na anafase da
meiose I ou II.
Um gmeta recebe 2 cromossomas do
mesmo par e outro no recebe nenhum.

desenvolvem
e
so
abortados
espontaneamente.
Algumas
clulas
somticas
podem
ser
poliploides.
Anuploidias mais comuns
em seres humanos so as
trissomias
dos
cromossomas 21, 13, 18 e
a monossomia do X.
Aneuploidias de outros
cromossomas
no
permitem
o
desenvlvimento at ao
nascimento e resultam
num aborto espontneo.
As
aneuploidias
nos
cromossomas sexuais so
melhor toleradas que as
dos
autossomas.
Sndrome.

Sindromes estudadas:
Trissomia 21 (47,XX) ou (47,XY) SNDROME DE DOWN
Cromossoma extra no lote 21.
Monossomia do X (45,X0) SNDROME DE TURNER
Afeta apenas mulheres, que carecem de um dos cromossomas sexuais.
(47,XXY) SNDROME DE KLINEFELTER

Mutaes cromossmicas estruturais

Tipo de

Definio/Causas

Consequncias/Exempl

mutao
Deleco

Duplica
o

Transloca
o

Inverso

os
Representa uma perda no material
cromossmico.
As deleces visveis de cromossomas
humanos esto sempre associadas a
grandes incapacidades.
Caracteriza-se pela repetio de uma
poro de cromossoma.
As
duplicaes
so
alteraes
cromossmicas muito importantes sob
o ponto de vistaa evolutivo, porque
fornecem
informao
gentica
complementar, potencialmente capaz
de assumir novas funes.
Ocorre uma inversao quando um
segmento cromossmico experimenta
uma rotao de 180 em relao
posio normal, sem alterar a sua
localizao no cromossoma.
A transferencia de uma poro de um
cromossoma, ou mesmo de um
cromossoma inteiro para outro no
homlogo
designa-se
por
translocao simples.
As translocaes mais comuns so as
translocaes
recprocas,
havendo
troca
de
segmentos
entre
cromossomas no homlogos. As
translocaes
podem
alterar
drasticamente
o
tamanho
dos
cromossomas, assim como a posio
do centrmero.

Poliploidia
Os inivduos poliploides so indivduos em que o nmero de conjuntos
completos de cromossomas multiplo do numero haploide primitivo
existente nos gmetas. Apresentam caritipos triploides (3n), tetraploides
(4n) ou mesmo numeros mais elevados de cromossomas.
A poliploidia surge:
- acidentalmente;
- a partir da no-disjuno dos cromossomas durante a meiose ou mitose.
Tambm pode acontecer que no h citocinese na repartio dos
cromossomas pelas clulas filhas.
- cruzamento entre indivduos de espcies diferentes (o que muito
comum entre as plantas) os indivduos resultantes deste processo so
naturalmente estreis, uma vez que no possuem cromossomas homologos,
no podendo estes emparelhar durante a meiose.
Como que estes indivduos se reproduzem ento?
Atravs de reproduo assexuada no caso dos individuos que resultam
do cruzamento entre espcies diferentes, estes acabam por tornar-se ferteis
apos algumas geraes, devido a uma ocorrencia de uma duplicao
cromossmica resultante de uma no-disjuno dos cromossomas na
diviso celular.

A poliploidia muitas vezes provocada em laboratrio para que se

obtenham plantas mais resistentes, com grandes frutos, sem caroo ou
sementesm gros de trigo maiores, etc.

As Mutaes, a tecnologia e a vida

Um agente mutagnico qualquer agente responsvel por uma
mutao.
O processo que conduz ao aparecimento de mutaes pelo agente
mutagnico a mutagnese.
As nossas clulas tem a capacidade de reparar alguns danos causados ao
DNA. H portanto, um equilbrio entre a proliferao celular, em que as
clulas se renovam e multiplicam e entre a morte das clulas.
Apesar disso, este equilbrio por vezes perde-se umas das
consequncias o aparecimento de um cancro.
Um cancro (neoplasia maligna/tumor maligno) um conjunto muito
heterogneo e multifatorial de doenas que tm em comum o facto de
apresentarem sempre o crescimento de um tecido neoformado.
Outra definio
O cancro uma doena gentica que resulta da perda de controlo do
ciclo celular. A diviso da clula com mais frequncia d origem a uma
populao de clulas em proliferao descontrolada e forma um tumor.
As clulas cancerosas:
-so pouco especializadas e com forma arredondada;
-dividem-se continuamente;
-invadem os tecidos adjacentes;
-podem instalar-se noutros lugares do organismo.
O aparecimento de cancros est normalmente associado a alteraes dos
mecanismos que regulam a diviso celular.
Necrose as clulas morrem devido ao de substncias txicas ou
falta de nutrientes essenciais. Apesar de manterem o ncleo intacto,
aumentam de volume, rompe-se a membrana plasmtica e verte-se o
contedo da clula no meio extracelular, causando uma pequena
inflamao.
Apoptose ocorre um conjunto de
fenmenos programados geneticamente e
que levam morte da clula processo
mais
comum.
Quando
as
clulas
apresentam
anomalias

sobretudo
genticas ou j no so necessrias ao
organismo, desencadeia-se um suicdio
por parte das clulas.
1. A cromatina comea a condensar;
2. A clula isola-se das clulas
vizinhas, compactando o citoplasma e a
cromatina;
3. Uma enzima (endonuclease/enzima
de restrio) fragmenta o DNA em
pequenas unidades;
4. A clula fragmenta-se sem que ocorra rutura nem resposta
inflamatria.
Quando este equilbrio, entre a diviso celular e a apoptose quebrado,
pode surgir um cancro.

As neoplasias tm origem gentica, pois resultam de alteraes no DNA.

No
caso
de
as
alteraes se darem a
nvel
dos
proto-oncogenes:
Estes so genes que
estimulam
a
diviso
celular, mas que esto
inativos em clulas que
no se dividem. Devido
ao de agentes
mutagnicos
podem
tornar-se
ativos,
e
passam
a
estimular
permanentemente a diviso celular, passando a oncogenes.
No caso de as alteraes se dares ao nvel dos genes supressores
tumorais:
Estes genes tm a funo de regulam a proliferao celular,
contrabalanando a ao dos proto-oncogenes, inibindo-os. Estes genes
esto normalmente ativos (bloqueiam a diviso celular), mas devido
influencia de agentes mutagnicos podem desativ-los, fazendo com
que as clulas se continuem a dividir.
As infees por vrus contribuem para o aparecimento de cancro pela
integrao do material gentico do vrus no DNA das clulas infetadas. O
DNA viral pode ser inserido num local onde destrua a atividade de um gene
supressor tumoral ou converta um proto-oncogene num oncogene.
Todos os cancros so genticos, mas quase nenhuns so hereditrios.
Nestes casos, a alterao gentica est presente em todas as clulas do
indivduo, manifestando-se muito cedo.
A maioria dos cancros espordica (95%) e surgem como resultado
de mutaes nas clulas somticas. Estas alteraes so promovidas pela
interao entre o genoma do indivduo e o ambiente.
As componentes gentica e ambiental esto sempre presentes, apesar de
nem sempre assumirem igual importncia.
Ex: melanoma radiaes solares + alterao de um gene supressor
tumoral (MTS) localizado no cromossoma 9.
Todos os dias surgem neoplasias no nosso corpo, que so eliminadas por
apoptose. Quando isto no acontece, inicia-se um cancro, que corresponde
ao momento em que estas clulas se proliferam e invadem tecidos vizinhos.
Pode seguir-se um processo de metastizao, em que as clulas
cancerosas se podem movimentar atravs da corrente sangunea ou
linftica e continuar a desenvolver-se noutras partes do corpo.

Fundamentos da Engenharia Gentica

A engenharia gentica permite manipular diretamente os genes de
determinados organismos com objetivos prticos.
Aps a descoberta de que tambm o DNA podia ser manipulado, a
primeira ferramenta da engenharia gentica foram as enzimas de
restrio (ou endonucleases).
Estas enzimas cortam a hlice dupla do DNA em zonas especficas,
sempre que as encontram.
Funcionamento das enzimas de restrio

Os vrus invadem as bactrias e afetam o seu DNA.

Algumas bactrias tm um mecanismo de defesa contra os vrus, que
consiste na produo de enzimas de restrio.
Ou seja:
1. As enzimas cindem a cadeia de DNA do vrus quando encontram uma
determinada sequncia de pares de bases.
2. Estas enzimas atuam em pontos especficos (ZONAS DE
RESTRIO), catalisando o desdobramento do DNA em fragmentos
menores.
3. Estes fragmentos possuem nas extremidades a sequncia de
nucletidos reconhecida pela enzima de restrio so constitudos por
cadeia simples ligada a cadeia dupla e chamam-se extremidades
coesivas.
As extremidades coesivas podem ligar-se por complementaridade a
outro DNA. Intervm as ligases do DNA, que catalisam o processo que
permite que fragmentos de DNA se voltem a ligar.
Para a transferncia destes genes, tambm necessria a existncia de
um vetor, que ser a entidade que leva o material gentico do genoma de
onde foi retirado para o genoma que o vai receber.
Os plasmdeos das bactrias so exemplos de vetores.

Tcnica do DNA recombinante

A tcnica do DNA recombinante permite combinar na mesma
molcula de DNA genes provenientes de fontes diferentes, mas no
necessariamente de espcies diferentes, obtendo uma molcula de RNA
recombinante (rDNA).
Nesta tcnica, recorre-se a enzimas de restrio para cortar o DNA em
pontos especficos e a ligases do DNA para reconstruir a molcula.
Obteno e expresso da molcula de rDNA:
1. Seleo de uma molcula de DNA (a integrar) contendo um gene
com interesse, que se pretende transferir e clonar; seleo de um vetor
adequado (plasmdeo);
2. A molcula de DNA e o vetor so tratados com a mesma enzima de
restrio, que corta as duas molculas em regies com a mesma
sequncia de nucletidos;
3. Misturam-se os fragmentos de restrio da molcula de DNA e o
vetor, adicionando ligases do DNA. O vetor e os fragmentos de restrio
emparelham pelas extremidades coesivas e a ligase estabelece a
ligao entre eles;
4. O vetor, contendo o DNA dador, transferido para uma
clula/organismo recetor;
5. O DNA dador incorporado no genoma da clula/organismo recetor,
que passa a possuir um DNA recombinante;
Os plasmdeos possuem genes que lhes conferem resistncia a um
antibitico, permitindo localizar as bactrias que tm o DNA recombinante.
O cultivo de bactrias que foram misturadas com plasmdeos num meio com
esse antibitico, possvel isolar as bactrias que resistem essas tm
certamente os plasmdeos recombinantes, porque as que no tm
desaparecem com a aplicao do antibitico.

Os vrus tambm podem ser utilizados como vetores. As clulas

hospedeiras dos genes j no so s bactrias, mas podem ser outras
clulas, como leveduras e mesmo clulas eucariticas.
So comuns as plantas e os animais em cujo genoma foram introduzidos
genes que determinam caractersticas vantajosas, constituindo os OGM.
A tcnica do rDNA utilizada, por exemplo, na produo de insulina

humana.

Tcnica do DNA complementar

Os procariontes so organismos muito utilizados em Engenharia Gentica
como recetores de DNA estranho porque:
So fceis de cultivar,
Tm um crescimento rpido,
Processos bioqumicos bem conhecidos.
No entanto, os seres procariontes no processam o mRNA e se, em
alternativa, recebem genes com intres, no so capazes de os retirar e a
protena produzida no funcional.
Este problema ultrapassado pela obteno e transferncia de DNA
complementar ou cDNA.
Para a tcnica de DNA complementar so necessrios:
Molcula de mRNA;
Transcriptase reversa (enzima que catalisa a formao da
cadeia complementar do DNA transcriptase porque um
processo de transcrio, reversa porque inverso ao processo de
transcrio da molcula de DNA em mRNA);
DNA polimerase que catalisa a formao da cadeia
complementar de DNA;
Nucletidos livres.
O cDNA uma molcula de DNA sem intres, que diretamente
transcrita numa molcula de mRNA funcional. O processo de obteno de
cDNA o seguinte:
1. Isola-se uma molcula de mRNA funcional das clulas;
2. Adiciona-se a trancriptase reversa e nucletidos livres;
3. Junta-se uma enzima que degrada o mRNA que serviu de molde e
DNA polimerase, que catalisa a formao da cadeia complementar do
DNA.
O cDNA pode ser inserido num procarionte atravs de um vetor contendo
o promotor e sequncias reguladoras.

Reaes de polimerizao em Cadeia PCR

O PCR uma tcnica que permite amplificar qualquer poro de DNA
fora das clulas.
Esta tcnica til para quando necessria uma determinada
quantidade de DNA que no se possui, mas que pode ser obtido atravs
desta tcnica.
Esta tcnica consiste nas seguintes etapas:

1. O fragmento de DNA a amplificar aquecido de modo a separar as

duas cadeias da dupla hlice, quebrando as ligaes entre os aminocidos DESNATURAO;
2. Obtm-se duas cadeias simples;
3. So adicionados nucletidos livres e DNA polimerase resistente
ao calor esta DNA polimerase obtida a partir de microrganismos
termfilos, uma vez que vivem a temperaturas muito elevadas, e aguentam
ser mantidos s mesmas, enquanto a DNA polimerase normalmente usada
acaba por sofrer tambm DESNATURAO quando sujeita a temperaturas
muito elevadas;
4. A
DNA
polimerase
catalisa
a
formao
das
cadeias
complementares, restituindo a dupla hlice, formando duas molculas de
DNA a partir de uma;
5. Arrefecimento das novas molculas;
6. Repetio do processo em cada ciclo a quantidade de DNA
duplicada.
Esta tcnica permite a obteno de bilies de cpias de uma poro de
DNA em poucas horas e executada por aparelhos

DNA fingerprint
No genoma humano existem sequncias de DNA repetitivas que so
reconhecidas e cortadas por determinadas enzimas de restrio.
O DNA fica ento fragmentado estes fragmentos apresentam
tamanhos e composio diferentes, variando de pessoa para
pessoa.
Quando submetidos a tcnicas como a eletroforese, o resultado um
padro de bandas que difere de indivduo para individuo, sendo
possvel identificar uma pessoa atravs destas bandas, com quase (ou
mesmo) 100% de certezas.
O processo de identificao por DNA fingerprint feito da seguinte forma:
1. Obteno de fragmentos da molcula de DNA, colocando em
recipientes amostras de DNA e enzimas de restrio, que a fragmentam nas
respetivas zonas de restrio;
2. Os fragmentos obtidos so colocados num meio apropriado (por
exemplo gel) e quando submetidos a um campo eltrico, deslocam-se at
extremidade oposta de onde foram inseridos, a velocidades diferentes,
consoante o tamanho e peso do fragmento;
3. Ao fim de algum tempo, os fragmentos localizam-se em diferentes
seces do gel, permitindo identificar um indivduo pelo padro obtido por
eletroforese.

Tcnica

Aplicaes

DNA
Investigao fundamental torna possvel isolar genes de
Recombinant organismos complexos e estudar as suas funes a nvel
e (rDNA)
molecular
Obteno de organismos geneticamente modificados
(OGM) organismos em cujo genoma foram introduzidos
genes que conferem caractersticas vantajosas. So usados:
-na produo de alimentos em maior quantidade e

qualidade;
-na produo de grandes quantidades de substancias com
aplicao mdica ou farmacutica;
-na com aplicao industrial;
-biorremediao.
DNA
Complement
ar (cDNA)
Polimeriza
o por reao
em cadeia
(PCR)
DNA
fingerprint

Obteno de cpias de genes que codificam produtos

com interesse.
Obteno de grandes quantidades de DNA em pouco
tempo.
-Investigao criminal, forense e histrica;
-Determinao de paternidade.