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Ensaio pr-clnico em ratos tratados com 1,3-diestearil-2-oleil-glicerol (TG1)

Pre-clinical testing in rats treated with 1,3-distearyl-2-oleoyl-glycerol (TG1)
Ensaio pr-clnico em ratos tratados com TG1.

Aldenora Maria Ximenes Rodrigues1; Patricia Rgia Pereira dos Santos1; Guilherme
Antnio Lopes de Oliveira1; Joaquim Soares da Costa Jnior2; Rivelilson Mendes de
Freitas1, 3; Chistiane Mendes Feitosa1
1

Laboratrio de Pesquisa em Neuroqumica Experimental do Programa de Ps-graduao

em Cincias Farmacuticas da Universidade Federal do Piau, Teresina - PI, Brasil.

2

Instituto Federal de Cincia, Educao e Tecnologia do Piau, Teresina - PI, Brasil.

Autor para correspondncia: Universidade Federal do Piau. Campus Universitrio

Ministro Petrnio Portella Bairro Ininga CEP: 64049-550 - Teresina, PI Brasil. E-mail:
rivelilson@pq.cnpq.br. Telefone: (86) 3237-1240

RESUMO

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O composto 1,3-diestearil-2-oleil-glicerol (TG1) corresponde a um triglicerdeo isolado do
extrato hexnico da semente de Platonia insignis Mart, conhecido como bacuri. Um
derivado da trioleina, solvel em solventes apolares. At o momento no h relatos de
estudos desse composto na literatura. O objetivo deste estudo foi avaliar a toxicidade aguda
do TG1 aps administrao via oral para determinao do efeito sobre os parmetros
comportamentais, bioqumicos, hematolgicos e histopatolgicos no hipocampo, corpo
estriado e tecido heptico de ratos Wistar adultos tratados com TG1 na dose de 30 mg kg -1.
O estudo revelou que os parmetros comportamentais no apresentaram alteraes
significativas. Durante o tratamento no foi observada nenhuma morte entre os animais. Os
ratos tratados com TG1 apresentaram alteraes apenas nos ndices hematimtricos
hemoglobina corpuscular mdia (HCM) e na concentrao de hemoglobina corpuscular
mdia (CHCM) nas anlises hematolgicas, quando comparados com grupo controle. As
anlises bioqumicas da aspartato aminotransferase (AST), fosfatase alcalina, cido rico
tiveram seus nveis reduzidos, conferindo preservao dos rins e fgado dos animais na
dose

testada (p<0,05).

Neste estudo, os animais tratados com TG1 no mostraram

comprometimento das reas cerebrais: corpo estriado e hipocampo. Estes resultados

indicam que o tratamento com TG1 no produz alteraes hematolgicas, bioqumicas e
histopatolgicas cerebrais e hepticas em ratos o que caracteriza uma baixa toxicidade.
Esses dados necessitam de futuras pesquisas para comparar os resultados em outras vias,
bem como para realizar anlises anatomopatolgicas dos animais tratados com TG1,
assegurando o uso seguro deste triglicerdeo pela indstria farmacutica e alimentcia.

PALAVRAS-CHAVE:

1,3-diestearil-2-oleil-glicerol;

Histologia; Toxicidade aguda.

ABSTRACT

Bioqumica;

Hematologia;

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The compound 1,3-distearyl-2-oleyl-glycerol (TG1) is a triglyceride isolated from the
hexane extract of Platonia insignis Mart seeds, known as bacuri. It is a derivative of
triolein, soluble in nonpolar solvents. So far there are no reports of this compound in the
literature. The aim of this study was to assess the acute toxicity of TG1 after oral
administration to determine in effects on behavioral, biochemical, hematological and
histopathological parameters upon hippocampus, striatum and liver tissue of adult rats
treated with TG1 at a dose of 30 mg kg-1. This study revealed that the behavioral
parameters were not changed statistically. During the treatment no deaths were observed
among animals. Rats treated with TG1 showed changes only in indices erythrocyte mean
corpuscular hemoglobin (MCH) and mean corpuscular hemoglobin concentration (MCH)
when compared with the control group. Biochemical analysis of serum aspartate
aminotransferase (AST), alkaline phosphatase and uric acid levels were reduced, indicating
preservation of kidneys and livers of animals at the dose tested (p<0.05). In this study,
animals treated with TG1 showed no impairment of brain areas, striatum and hippocampus.
These results indicate that treatment with TG1 not produce hematological, biochemical and
histopathological liver or brain alterations in rats, suggesting low toxicity. These data need
further research to compare the results with others ways and to perform anatomopathologic
examinations in animals treated with TG1, ensuring a safe use of this triglyceride by
pharmaceutical and food industries.

KEYWORDS: 1.3-distearyl-2-oleyl-glycerol, Biochemistry, Hematology, Histology;

Acute toxicity.

INTRODUO

O composto 1,3-diestearil-2-oleil-glicerol (TG1) corresponde a um triglicerdeo

isolado do extrato hexnico da semente de Platonia insignis Mart. um derivado da
trioleina, solvel em solventes apolares. Possui frmula molecular C 58H112O6. Sua
composio qumica definida como C (76,93%), H (12,47%), O (10,60%), e peso
moleuclar 856 g/mol.
A triolena corresponde a um triacilglicerol de Persicae semen (Rosaceae),
recentemente apontada como promissora na teraputica antitrombtica (Chaves et al.,
2010). Esse triacilglicerol compe substratos em tcnicas para seleo de microorganismos
lipolticos, zimograma que consiste na deteco qualitativa da atividade de lipase secretada
em meio slido contendo gar, meio de cultivo e substrato composto com tributirina,
triolena, leo de oliva, Tween-80 (Messias et al., 2011).
Diante desse potencial farmacolgico e da necessidade da realizao da avaliao
toxicolgica de espcies vegetais de grande interesse tanto cientfico quanto comercial a
determinao da toxicidade da triolena em ensaios pr-clnicos, uma vez que os resultados
obtidos podem servir tanto ao conhecimento como ao desenvolvimento de um futuro
fitoterpico a partir desse triacilglicerol isolado de uma espcie vegetal popularmente
utilizada pela populao de nosso estado com finalidade teraputica e alimentcia.
Recentemente a Anvisa publicou o Guia para a Realizao de Estudos de Toxicidade Prclnica de Fitoterpicos (RE N 90) (Craveiro et al., 2008). E nesse estudo foram seguidos
os padres estabelecidos por esse guia para a avaliao da toxicidade aguda do
triacilglicerol em estudo.
Aps reviso da literatura sobre composto 1,3-diestearil-2-oleil-glicerol (TG1) foi
verificado que no h disponveis estudos toxicolgicos sobre esse composto, justificando
a necessidade e a importncia da realizao do presente estudo. Porm h relatos recentes

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sobre a citotoxicidade a partir do extrato hexnico (EH) do qual foi isolado o composto
TG1. Em estudos de toxicidade frente Artemia salina leach, o EH e a frao acetato de
etila apresentaram efeitos moderadamente citotxicos, enquanto que a frao
diclorometano foi fortemente citotxica. Alm disso, os extratos e as fraes de P. insignis
podem se genotxicos aos fibroblastos pulmonares de hamster chins (cls.V79) (Costa
Jnior et al., 2012). Diante disso, importante um estudo mais detalhado sobre as
propriedades toxicolgicas dessa espcie, bem como de compostos obtidos a partir de
estudos fitoquimicos.
Dessa forma, esse estudo teve como objetivo avaliar a toxicidade aguda sobre os
parmetros bioqumicos e hematolgicos, bem como realizar anlises histopatolgicas em
reas cerebrais como hipocampo e corpo estriado, e tecido heptico de ratos adultos
tratados por via oral com 1,3-diestearil-2-oleil-glicerol (TG1). Alm disso, durante o ensaio
pr-clnico tambm foram avaliados os parmetros comportamentais em ratos adultos para
melhor avaliar sua segurana.

MATERIAL E MTODOS

Animais

Foram utilizados, por experimento, Ratos Wistar machos adultos com peso variando
entre 200 a 250 g e 2 meses de idade, provenientes do Biotrio Central do Centro de
Cincias Agrrias da Universidade Federal do Piau. Os animais receberam gua e dieta
(Purina) ad libitum e foram mantidos sob condies controladas de iluminao (ciclo 12 h
claro/escuro) e temperatura (25 2 C). O projeto foi aprovado pelo Comit de tica em
Experimentao com Animais da Universidade Federal do Piau (n 004/2012).

Determinao dos Parmetros comportamentais em Ratos

No protocolo experimental da triagem farmacolgica comportamental, foram

utilizados dois grupos de 10 ratos. Esse protocolo visa avaliar o comportamento dos
animais frente administrao de substncias isoladas de espcies vegetais e/ou sintticas.
Foram estabelecidos alguns critrios comparativos para uma srie de comportamentos, que
na sua maioria so exibidos normalmente pelos animais. Dessa forma foi verificada a
presena ou no de determinadas alteraes comportamentais em decorrncia do
tratamento, possivelmente est relacionada ou no a atividade sobre o sistema nervoso
central de roedores. Essa triagem inicial do composto estudado viabiliza a realizao de
testes mais especficos (Almeida et al., 1999; Almeida, 2006; Omena, 2007).
O grupo controle foi tratado via oral com soluo de Tween 80 a 0,05% dissolvido
em soluo salina 0,9% (veculo; n=10) durante 30 dias consecutivos. E no segundo grupo,
os animais os animais foram tratados com TG1 na dose de 30 mg kg -1 emulsionado no
veculo durante 30 dias consecutivos. Em seguida, os animais foram colocados em gaiolas
com rao e gua ad libitum e observados durante as primeiras 72 horas e por um perodo
de 30 dias para observao dos parmetros comportamentais, segundo teste hipocrtico
descrito por Malone e Robichaud (1962).

Estudo da toxicidade aguda em parmetros bioqumicos e hematolgicos de ratos

tratados com do 1,3-diestearil-2-oleil-glicerol (TG1)

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Nesse protocolo experimental, dois grupos de dez ratos foram tratados da seguinte forma.
O primeiro grupo foi tratado por via oral com TG1 na dose de 30 mg kg -1 em veiculo
durante 30 dias consecutivos. O grupo controle foi tratado com veculo (Tween 80 0,05%
dissolvido em soluo salina 0,9%) durante 30 dias consecutivos.
Aps 30 dias do tratamento agudo, os animais foram anestesiados com 0,3 mL de
pentobarbital sdico (40 mg kg-1, i.p.) e em seguida foi feita coleta de sangue por
rompimento do plexo retro-orbital com auxlio de capilar de vidro (Waynforth, 1980). O
sangue foi acondicionado em dois tipos de tubo, um com anticoagulante HB (Laborlab )
para determinao dos parmetros hematolgicos e o outro, sem anticoagulante, para
obteno do soro para avaliao dos parmetros bioqumicos.
Para anlise bioqumica, o material foi centrifugado a 3500 rpm durante 10 minutos
e, em seguida, determinados os parmetros glicose, uria, creatinina, aspartato
aminotransferase (AST), alanina aminotransferase (ALT) colesterol total, triglicerdeos,
fosfatase alcalina (ALKP), bilirrubinas total e direta e cido rico. Os ensaios foram
realizados em aparelho automatizado Vitros 250 com sistemas comerciais da Jonhson &
Jonhson.
A contagem de eritrcitos, leuccitos totais, plaquetas, hemoglobina, hematcrito e
os ndices hematimtricos volume corpuscular mdio (VCM), hemoglobina corpuscular
mdia (HCM), concentrao de hemoglobina corpuscular mdia (CHCM) foram
determinados imediatamente aps a coleta por meio do analisador automtico de clulas
hematolgicas Advia 120/hematology (Siemens).

Avaliao histopatolgica em crebros e tecido heptico e ratos tratados com do 1,3diestearil-2-oleil-glicerol (TG1).

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Por sua vez, para esse protocolo experimental, dois grupos de seis ratos foram
tratados da seguinte forma. O primeiro grupo foi tratado por via oral com TG1 na dose de
30 mg kg-1 em veiculo durante 30 dias consecutivos. O grupo controle foi tratado com
veculo (Tween 80 0,05% dissolvido em soluo salina 0,9%) durante 30 dias
consecutivos.
Aps 30 dias de tratamento, todos os animais foram eutanasiados por anestesia com
pentobarbital sdico (50 mg kg-1, i.p.). Seus crebros e fgado foram removidos e fixados
em formalina a 10% por 72 h para a realizao das anlises histopatolgicas. Cortes
sagitais, feitos em intervalos de 1 mm, foram obtidos a partir de um corte inicial prximo
aos corpos mamilares. Para o estudo microscpico, seces de 10 m foram feitas, coradas
em hematoxilina - eosina (H & E), e analisadas com auxlio de um microscpio ptico em
um aumento de 40 e 100X. As reas cerebrais e do fgado foram observadas e classificadas
de acordo com as descries do Atlas de Paxinos e Watson (1986). O grau de leso foi
expresso atravs de uma escala percentual de 0 (nenhum) a 100 (total) para cada
hipocampo, corpo estriado e fgado analisados de acordo com o mtodo descrito
anteriormente (Malone & Robichaud, 1977; Al-habori et al., 2002). Os animais foram
definidos como tendo leso cerebral quando havia pelo menos 50% de alterao no
hipocampo, corpo estriado ou tecido heptico (Cmpelo et al., 2011).

Anlises estatsticas

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Os valores foram expressos como mdia erro padro da mdia (E.P.M.). As
diferenas entre os grupos foram determinadas por meio da Anlise de Varincia
(ANOVA), seguida, quando detectada diferena, pelo teste t-Student-Newman-Keuls como
post hoc teste. Os valores foram considerados significativos quando p<0,05.

RESULTADOS

Determinao dos parmetros comportamentais em ratos pelo mtodo do Screening

Hipocrtico

O 1,3-diestearil-2-oleil-glicerol (TG1) no alterou o peso corpreo dos animais

durante os 30 dias de observao. No houve alterao no consumo de gua e rao dos
animais durante os 30 dias de observao. Dentre os sinais clnicos sugestivos de
toxicidade, o nico observado foi piloereo e nenhuma morte foi registrada para a dose
administrada de 30 mg kg-1 durante os dos 30 dias consecutivos de tratamento. Aspectos
quanto ao estado de conscincia e disposio, coordenao motora, tnus muscular,
reflexos, atividade do sistema nervoso central e autnomo foram preservados.

Resultados das anlises dos parmetros hematolgicos e bioqumicos de ratos

tratados com 1,3-diestearil-2-oleil-glicerol (TG1)

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O tratamento dos animais com a dose de 30 mg kg -1 (v.o) do TG1 alterou apenas o
HCM e CHCM nos parmetros hematolgicos, em comparao com o grupo controle
(Tabela 1). Os demais parmetros analisados permaneceram dentro dos valores de
referencia e no demonstram importncia clinica.
A tabela 2 apresenta os valores obtidos da avaliao dos parmetros bioqumicos em
ratos submetidos aos ensaios toxicolgicos, por via oral com TGI durante 30 dias. Nesse
grupo foram verificadas alteraes nas anlises para o cido rico, AST, bilirrubina total e
direta, fostatase alcalina em comparao com o grupo controle (p<0,05) na dose testada.

Resultados das anlises histopatolgicas em ratos Wistar tratados com 1,3-diestearil2-oleil-glicerol (TG1) durante 30 dias consecutivos.

A figura 1 apresenta as alteraes histopatolgicas no tecido heptico de ratos

adultos. Nesse experimento, os animais tratados com TG1 (30 mg kg -1) e com veculo
tiveram o tecido heptico analisado. Na anlise histopatolgica do fgado pode ser
verificado um efeito vascular importante e presente em todos os fragmentos avaliados.
Esse efeito pode ser descrito por uma intensa congesto vascular (provavelmente por
aumento da presso), bem como pelas discretas reas de esteatose em microgotas. No
geral, a arquitetura do fgado foi detectada de forma preservada. Alm disso, observa-se
uma discreta poliploidia nas clulas hepticas, que comum em um rgo como o fgado,
que possui enorme capacidade de regenerao. J o grupo tratado com veculo no
apresentou nenhuma alterao histolgica.
A figura 2 mostra o estudo histopatolgico no corpo estriado de ratos adultos. Nesse
estudo no foi observada nenhuma alterao histopatolgica no corpo estriado dos ratos
tratados com TG1 e veculo durante 30 dias com doses repetidas.

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A figura 3 mostra o estudo histopatolgico no hipocampo de ratos adultos. Nesse
estudo foi verificado apenas no hipocampo algumas clulas com ncleos picnticos. Alm
disso, no foi observada nenhuma alterao histopatolgica no corpo estriado.

DISCUSSO

Os resultados demonstram que a administrao via oral de forma aguda com 1,3diestearil-2-oleil-glicerol (TG1) em ratos Wistar adultos durante 30 dias consecutivos
produz piloereo que pode ser um indicativo clnico sugestivo de toxicidade. De forma
geral, nesse estudo o tratamento com TG1 no produziu efeitos txicos mais severos em
outros parmetros comportamentais observados durante 30 dias, sugerindo que o TG1 pode
ser usado de forma segura, uma vez que demonstrou baixa toxicidade durante o ensaio prclnico.
Complementando esses achados durante o perodo de observao os animais no
perderam massa corporal, e no houve alterao no consumo de rao e gua. Esse achado
pode reforar inicialmente a hiptese de que o composto pode ser usado de forma segura
na indstria farmacutica e alimentcia, uma vez que usado regularmente pela populao
do estado do Piau e outras regies do Nordeste brasileiro com essas duas finalidades. A
literatura demonstra que a massa corporal do animal um importante indicador para a
avaliao da toxicidade de uma substncia isolada de espcies vegetais e/ou no. Portanto,
o monitoramento de espcies vegetais e de compostos isolados dessa espcie importante
durante as pesquisas frmaco e toxicolgicas como forma de ampliar as informaes
quanto a segurana e eficcia (Jahn & GnzeL, 1997).
Os parmetros hematolgicos e bioqumicos podem sofrer alteraes devido a vrios
fatores, dentre eles, a linhagem e a cepa de uma dada espcie, bem como em funo do

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mtodo de coleta de sangue. Assim, fundamental determinar os valores de referncia para
animais de diferentes biotrios de acordo com a espcie, a dieta, a linhagem, o sexo e a
faixa etria. Os roedores tm sido os animais mais utilizados pelos centros de pesquisa,
uma vez que constituem o grupo de animais disparadamente mais utilizados para estudos
cientficos em diversas reas, por possurem caractersticas fisiolgicas e genticas
semelhantes dos humanos (Melo et al., 2012).
Os valores de cido rico, triglicerdeos, AST e fosfatase alcalina dos ratos tratados
com o TG1, diminuram em relao aos valores desses analitos quando comparados aos
obtidos entre os animais do grupo controle. A bilirrubina total e direta aumentaram de
forma significativa em comparao com o grupo controle. Por outro lado, foi visto um
aumento no nvel de ALT, embora essa alterao no tenha sido significativa. Ao passo que
os analitos como a glicose, ureia, creatinina e colesterol total no sofreram alterao em
comparao aos valores de referncia.
Os nveis de glicose no sangue fornecem dados sobre a homeostase geral desse
carboidrato no sangue. A ureia resulta do metabolismo proteico, tanto o seu nvel
sanguneo quanto o nvel da creatinina pode ser caracterstico de insuficincia renal e,
portanto, podem ser usados como marcadores em diagnstico (Sacher & Mcpherson,
2002). Teoricamente, a creatinina mais indicada como marcador da funo renal, uma
vez que a quantidade presente nos rins mais constante, alm de no ser reabsorvida nos
tbulos renais como a ureia (Steven & Scott, 2002). Nesse estudo a ureia e a creatinina no
tiveram seus nveis aumentados, sugerindo que o TG1 pode ser administrado de forma
aguda sem produzir sobrecarga da funo renal em roedores.
Alm disso, esse dado pode ser reforado pela diminuio do nvel de cido rico
durante o tratamento com TG1 em doses repetidas durante os 30 dias consecutivos. A
insuficincia renal, naturalmente acarreta acmulo de ureia, creatinina e cido rico

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(Sacher & Mcpherson, 2002). A reduo dos valores plasmticos de cido rico e ureia,
sugerem uma melhora da performance renal (Dantas et al., 2006). Diante desses dados,
pode ser ento prospectado que no houve comprometimento da funo renal, embora mais
ensaios sobre a toxicidade subcrnica e crnica sejam necessrios para consolidar esse
achado.
Os principais componentes lipdicos do sangue so o colesterol, triglicrides e os
fosfolipdeos. Suas determinaes so cada vez mais comum entre os mdicos e leigos, no
intuito de avaliar o risco de doenas cardacas (Sacher & Mcpherson, 2002). Os adipcitos
correspondem s clulas do tecido adiposo, encontrado sob a pele, nas glndulas mamrias
e cavidade abdominal. Essas clulas respondem pela estocagem de triglicerdeos que serve
como combustvel para as reaes metablicas no organismo (Lehninger et al., 2005). Nas
clulas musculares tambm podem ser encontrados grandes depsitos de triglicrides
(Champe & Harvey, 2000). Um dos fatores de risco mais enfatizados nas doenas
cardiovasculares, o aumento do triglicrides. A reduo do seu nvel de grande
necessidade e urgncia para o tratamento dessas doenas (Austin et al., 1998). Com relao
aos nveis sricos dos triglicerdeos no foi detectada alterao significativa nos animais
tratados com TG1, embora tenha sido visto uma diminuio sem importncia clinica j que
os valores permaneceram dentro dos valores de referencia.
O fgado o rgo central do metabolismo no organismo (Sacher & Mcpherson,
2002). comum pesquisar a atividade das enzimas hepticas em clnica de pequenos
animais, para detectar anormalidades na atividade dessas enzimas, uma vez que so
consideradas marcadores sensveis de alteraes hepatobiliares. As patologias que
acometem o fgado acabam por alterar o perfil das enzimas hepticas elevando seus valores
sricos, e essas mudanas podem ser induzidas por agentes exgenos qumicos, como por
exemplo, um frmaco (Sharon & Center, 1995).

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As anlises das enzimas transaminases (ALT e AST) e da fosfatase alcalina so de
grande importncia como marcadores de leses nas clulas hepticas (Martin et al., 1981).
A fosfatase alcalina a enzima mais frequentemente associada obstruo do ducto biliar
(Sacher & Mcpherson, 2002) e as transaminases esto amplamente distribudas nos
tecidos, sendo que a AST predomina no fgado, corao, msculo cardaco, msculo
estriado, rim e pncreas, ao passo que a ALT predomina no fgado, rim e corao. As
transaminases so consideradas sensveis indicadores de dano hepatocelular (Miller &
Gonalves, 1999; Al-habori et al., 2002). A administrao aguda do TG1 provocou uma
diminuio significativa da AST e ALP. Sugerindo certa preservao do tecido heptico, ou
seja, um possvel efeito hepatoprotetor. No entanto, esses achados precisam de mais
investigao. J a ALT no sofreu nenhuma alterao de interesse clnico. Um estudo
recente aponta que a AST, pode apresentar-se mais elevada, possivelmente pela influncia
da anestesia e estresse muscular aos quais os ratos so submetidos para a coleta de sangue
(Melo et al., 2012).
A fosfatase alcalina (ALP) uma enzima fosfohidrolase, presente em vrios tecidos,
com maiores concentraes no fgado, no epitlio do trato biliar e nos ossos. O aumento da
atividade srica de FAL pode ocorrer em condies de colestase, intra e extraheptica, por
induo com drogas ou hormnios, pela hiperatividade osteoblstica e em processos
necrticos (Wright & Plummer, 1974; Miller & Gonalves, 1999). Essa enzima pode ter
seu aumento associado aos distrbios intestinais (Sacher & Mcpherson, 2002). Nesse
estudo foi observada uma diminuio significativa na fosfatase alcalina, indicando que o
TG1 no induziu nenhuma alterao bioqumica indicativa de hepatopatias no soro de ratos
Wistar.
A bilirrubina um pigmento tetrapirrlico. Cerca de 70 a 80% resulta do
metabolismo da hemoglobina (Hb) de hemcias senescentes ( 300 mg/dia); uma outra

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frao, 20 a 30% so derivadas das clulas eritrides da medula prematuramente e de
hematoprotenas de outros locais do organismo (principalmente fgado). As hemcias ao
sofrerem metabolisno nas clulas reticuloendoteliais (RE) originam a bilirrubina. Esta
transportada ao fgado ligada albumina, para ser conjugada com cido glicurnico e
transportada aos canalculos biliares e, em seguida, ao duodeno. No intestino, a bilirrubina
hidrolisada a bilirrubina no conjugada e reduzida a urobilinognios por bactrias e
aproximadamente 80 a 90% so excretadas nas fezes inalteradas ou oxidadas. Uma frao
bem pequena, menos de 3 mg/dL so filtradas por meio dos glomrulos para a urina como
urobilinognio. Bilirrubina conjugada (direta) aumentada em doenas hereditrias e
durante o dano celular heptico. Bilirrubina no conjugada (indireta) pode estar aumentada
devido ao uso de medicamentos (Wallach, 2009). Nesse estudo observou-se uma elevao
tanto da bilirrubina total, quanto da direta, aps o tratamento com TG1. Como esse
aumento no foi acompanhado nenhuma elevao dos nveis da AST, j que pode ser
considerada como um importante marcador de toxicidade heptica. Dessa forma, os
resultados encontrados no podem inferir que essa alterao pode ser uma manifestao
toxicolgica, mas apenas uma variao fisiolgica.
Um estudo recente aponta que os parmetros hematolgicos dos ratos da linhagem
Wistar podem ser semelhantes aos dos humanos, com exceo da quantidade de hemcias e
de plaquetas. Os ratos possuem uma quantidade maior destes dois parmetros
hematolgicos, o que confere maior viscosidade ao sangue e rpida coagulao. Assim os
ndices hematimtricos (VCM, HCM e CHCM) que so calculados a partir das hemcias,
hemoglobina e hematcrito sofrem tambm uma pequena alterao quando comparados
aos valores de referncia para humanos (Melo et al., 2012). Quanto ao estudo
hematolgico, o tratamento dos animais com a dose de 30 mg kg -1 (v.o), do TG1 em doses
repetidas alterou apenas o HCM e CHCM nos parmetros hematolgicos em comparao

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com o grupo controle. Estes ndices por serem produto de clculos, provavelmente esto
mais suscetveis a variaes analticas.
Estudos anteriores mostraram que a fisiopatologia das doenas neurodegenerativas
envolve vrias alteraes em nvel neuroqumico e histolgico em regies cerebrais que
precisam ser investigadas, por meio da administrao de compostos naturais, buscando um
possvel efeito neuroprotetor (Barros et al., 2007; Xavier et al., 2007; Freitas et al., 2011). O
hipocampo uma das reas cerebrais mais suscetveis ao estresse oxidativo (Siqueira et al.,
2005). O fgado tem um papel importante no equilbrio homeosttico dos processos
biolgicos, uma vez que regula as funes metablicas envolvidas com a sntese,
armazenamento e o catabolismo de substncias qumicas endgena e exgena. A
peroxidao lipdica contribui para o desenvolvimento de processos isqumicos e uma
srie de outros eventos patolgicos causadores de leso heptica (Belo et al., 2012).
Nos estudos histopatolgicos foram observadas apenas no hipocampo algumas clulas
com ncleos picnticos. E no foi observada nenhuma alterao histopatolgica no corpo
estriado. Dessa forma, o uso do TG1 no causou alteraes s reas cerebral estudadas,
revelando segurana quanto ao seu uso. Na anlise histopatolgica do fgado pode ser
verificado um efeito vascular importante e presente em todos os fragmentos avaliados. Este
efeito pode ser descrito por uma intensa congesto vascular (provavelmente por aumento da
presso), bem como pelas discretas reas de esteatose em microgotas. No geral, a
arquitetura do fgado foi detectada de forma preservada. Alm disso, foi observada a
presena de uma discreta poliploidia nas clulas hepticas, que comum em um rgo como
o fgado, que possui enorme capacidade de regenerao sugerindo, assim, que no houve
nenhum grau de comprometimento desses rgos. Mas esses achados devem ser reforados
com estudos em um perodo de tratamento subcrnico e crnico em doses repetidas.

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Esses resultados indicam que o tratamento agudo com 1,3-diestearil-2-oleil-glicerol
(TG1) na dose de 30 mg kg-1 no alterou de forma geral o padro comportamental dos
ratos, e no produziu alteraes hematolgicas, e histopatolgicas nas reas cerebrais e
hepticas analisadas. A reduo dos nveis da AST e ALP pode sugerir at mesmo certa
proteo heptica, que dever ser melhor investigada em modelos animais de
hepatotoxicidade. O aumento da bilirrubina total e direta no chega a caracterizar uma
toxicidade, provavelmente apenas uma alterao fisiolgica. Tanto as reas cerebrais, como
o fgado foram mantidas de forma preservadas durante o tratamento. Diante disso, de
grande importncia a continuao dos estudos com TG1, vislumbrando um possvel agente
teraputico no tratamento de doenas particularmente as neurodegenerativas.

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23

Tabela 1. Resultados dos parmetros hematolgicos de ratos Wistar tratados com 1,3diestearil-2-oleil-glicerol (TG1) por via oral durante 30 dias consecutivos
Parmetros

Controle

TG1

(n=10)

(n=10)

Hemcias (mm3)

7,71 0,19

7,51 0,20

Hemoglobina (g dL-1)

12,60 0,27

13,01 0,72

Hematcrito (%)

41,21 0,94

39,96 0,79

VCM (fL)

53,70 0,81

54,49 0,95

HCM (pg)

16,44 0,35

18,01 0,69*

CHCM (g dL-3)

30,62 0,26

34,09 0,85*

Plaquetas (mm3)

585,3 79,87

552,9 27,8

24

Tabela 2. Resultados dos parmetros bioqumicos de ratos Wistar tratados com 1,3diestearil-2-oleil-glicerol (TG1) por via oral durante 30 dias consecutivos

Parmetros

Controle

TG1

(n=10)
149,50 8,92
45,70 1,55

(n=10)
141,5 5,42
47,14 1,27

Creatinina (mg dL-1)

0,51 0,06

0,41 0,03

cido rico (mg dL-1)

9,06 0,55

1,04 0,18*

Triglicerdeos (mg dL-1)

71,1 11,08

59,4 8,23

CT (mg dL-1)
AST (U mL-1)

75,60 8,64
256,20 16,96

77,17 9,21
151,5 14,63*

ALT (U mL-1)

77,00 1,35

95,0 10,76

Fosfatase alcalina (U L-1)

625,8 27,21

232,1 21,23*

0,39 0,06
0,14 0,02

0,80 0,03*
0,32 0,01*

-1

Glicose (mg dL )
Uria (mg dL-1)

Bilirrubina total (mg dL-1)

Bilirrubina direta (mg dL-1)

25

Legenda da tabela 1: Parmetros hematolgicos obtidos de ratos wistar machos tratados

de forma aguda por via oral com veculo Tween 80 0,05% dissolvido em soluo salina
0,9% (Controle, n = 10 por grupo) e com TG1 na dose 30 mg kg -1 e observados durante 30
dias. Os valores representam a mdia E.P.M. do nmero de animais usados nos
experimentos. n - representa o nmero de animais em cada grupo. *p<0,05, quando
comparados ao grupo controle (ANOVA e teste t- Student-Neuman-Keuls como post hoc
teste).

26

Legenda da tabela 2: Parmetros bioqumicos obtidos de ratos wistar machos tratados de

forma aguda por via oral com veculo Tween 80 0,05% dissolvido em soluo salina 0,9%
(Controle, n = 10 por grupo) e com TG1 na dose 30 mg kg -1 e observados por 24 horas .
Os valores representam a mdia E.P.M. do nmero de animais usados nos experimentos.
n - representa o nmero de animais em cada grupo. *p< 0,05, quando comparados ao grupo
controle (ANOVA e teste t- Student-Neuman-Keuls como post hoc test)e.

27

Figura 1. Avaliao histopatolgicas do efeito do tratamento durante 30 dias com TG1 e

veculo no tecido hepticos de ratos adultos.

28

Figura 2: Avaliao do efeito do tratamento com 1,3-diestearil-2-oleil-glicerol (TG1) e

veculo no corpo estriado de ratos adultos.

29

Figura 3. Avaliao do efeito do tratamento com 1,3-diestearil-2-oleil-glicerol (TG1) e

veculo no hipocampo de ratos adultos.

30

Legenda da figura 1: A, B e C - Alteraes histopatolgicas no fgado de ratos adultos

tratados com TG1 durante 30 dias consecutivos. Observado um efeito vascular importante
representado por uma intensa congesto vascular (provavelmente por aumento da presso),
bem como pelas discretas reas de esteatose em microgotas (seta preta): Hematoxilina Eosina (H & E) 40X e 100X respectivamente; Barra de Escala = 10 m). D Ausncia de
alteraes histopatolgicas no fgado de ratos adultos tratados com TG1 durante 30 dias
consecutivos.

31

Legenda figura 2: A e B - Ausncia de alteraes histopatolgicas no corpo estriado de

ratos tratados com TG1. C e D - Alteraes histopatolgicas no hipocampo de ratos
tratados com TG1, Hematoxilina - Eosina (H & E) 40 e 100X, respectivamente; Barra de
Escala = 10 m).

32

Legenda da figura 3: A e B - Alteraes histopatolgicas no hipocampo de ratos tratados

com TG1, nessa lmina podem ser observadas algumas clulas com ncleos picnticos
(seta preta figura B). C e D- Ausncia de alteraes histopatolgicas no hipocampo de
ratos tratados com veculo. Hematoxilina - Eosina (H & E) 40 e 100X, respectivamente;
Barra de Escala = 10 m).