INVESTIGAO FARMACOLGICA

ARTIGO CIENTIFICO ANLISE CRTICA

TTULO DO ARTIGO

Antidiabetic and antioxidant activities of Toddalia asiatica (L.) Lam. leaves in Streptozotocin
induced diabetic rats

RESUMO DO ARTIGO

Relevncia etnofarmacolgica: As folhas de Toddalia asiatica (L.) Lam. tm sido utilizadas

tradicionalmente para o tratamento da diabetes.
Objectivo: O presente estudo teve como objetivo avaliar os efeitos antidiabticos e
antioxidantes das folhas de T. asiatica em ratos com diabetes induzida pela estreptozotocina
(STZ).
Material e mtodos: realizou-se anlise fitoqumica, determinao do contedo fenlico
total, anlise por HPLC, estudo de toxicidade aguda e teste oral de tolerncia glucose.
Estudou-se o efeito dos extractos de hexano, acetato de etilo e metanol presentes nas folhas
de Toddalia asiatica na diminuio da glucose, em ratos com diabetes induzida pela STZ.
Estudaram-se as actividades antidiabtica e antioxidante do extracto de acetato de etilo.
Tambm se analisaram os efeitos dos extractos na glicose do sangue, no peso corporal, na
insulina do plasma, na protena total, no glicognio heptico, nas enzimas do plasma (SGOT 1,
SGTP1 e ALT1) e na actividade da SOD1, da CAT1 e da GPx1.
Resultados: O extrato de acetato de etilo (TALEe) das folhas de Toddalia asiatica promoveu
uma reduo significativa dos nveis de glucose no sangue. A anlise fitoqumica do TALEe
revelou a presena de alcalides, terpenides, cumarinas, flavonides e compostos fenlicos.
O contedo fenlico total do TALEe foi de 126 mg de equivalentes de cido glico/g do
extracto. A anlise por HPLC revelou a presena de flindersina e ulopterol. O estudo de
toxicidade aguda do TALEe no revelou morte ou toxicidade. O teste oral de tolerncia
glucose nos ratos tratados com o TALEe mostrou uma reduzida rea sob a curva (AUCglucose).
Aps o tratamento com o TALEe (250 e 500 mg/kg) durante 28 dias, houve uma diminuio
significativa da glucose no sangue, das enzimas no plasma (SGOT, SGPT e ALP) e um aumento

11 ABREVIATURAS:

TALEe Extracto de acetato de etilo das folhas de Toddalia asiatica; STZ Estreptozotocina; SGOT Transaminase glutmico-oxalactica
serolgica; SGTP Transaminase glutmico-pirvica serolgica; ALP Fosfatase alcalina; SOD Superxido dismutase; CAT Catalase; GPx Glutationa
peroxidase.

significativo do peso corporal, da protena total, da insulina no soro e dos nveis de glicognio
heptico dos ratos diabticos tratados. A actividade das enzimas antioxidantes SOD, CAT e GPx
voltou a aproximar-se do normal nos ratos diabticos tratados com o TALEe. A histopatologia
do pncreas nos grupos tratados com o TALEe revelou regenerao das clulas-.
Concluso: Os resultados da experincia revelaram que o TALEe tem efeitos antidiabticos e
antioxidantes significativos em ratos com diabetes induzida pela STZ, justificando assim o seu
uso tradicional.
REA DE ESTUDO DO ARTIGO
INTRODUO

Farmacodinamia/Efeito farmacolgico
A diabetes mellitus (DM) uma doena crnica que envolve o metabolismo dos hidratos de
carbono,
das
gorduras
e das protenas, e que se caracteriza pelo aumento dos nveis de glucose no sangue
(hiperglicemia), resultante de uma insuficincia na secreo e/ou actividade da insulina.
Consequentemente, pode causar retinopatia, neuropatia, nefropatia, ataque cardaco, AVC e
doena vascular perifrica, sendo considerada uma doena preocupante a nvel mundial.
A hiperglicemia responsvel pela produo de espcies reactivas de oxignio (ROS), que tm
um papel preponderante nas complicaes da diabetes. Os antioxidantes, presentes nos
alimentos, inactivam os radicais livres, prevenindo ou reparando os danos causados pelas ROS
e tambm pelas espcies reactivas de azoto (RNS), reduzindo o risco dessas complicaes.
Apesar da insulina e de outros medicamentos antidiabticos estarem disponveis no mercado,
nenhum tem a capacidade de controlar a glicemia a longo prazo sem causar efeitos adversos
no organismo. Assim sendo, tem havido um interesse crescente no uso de medicamentos
base de plantas para tratar a DM. A Organizao Mundial de Sade (OMS) tem dado nfase
utilizao de plantas tradicionais para o tratamento da diabetes, visto que para alm de
eficientes e rentveis, no so txicas e apresentam poucos ou nenhuns efeitos adversos. A
Toddalia asiatica (L.) Lam. (Rutaceae), encontrada na frica do Sul, SriLanka e alguns distritos
da ndia, usada tradicionalmente para o tratamento de vrias doenas, dependendo da parte
da planta que utilizada (raiz, ramos, folhas, flores ou frutos). Para tratar a diabetes mellitus
recorre-se s folhas da planta ou a uma frmula multi-herbal, na qual se conjuga a planta
inteira com Terminalia chebula, Terminalia bellirica, Eclipta alba e Enicostemma littorale. Tm
sido isoladas vrias substncias da T. asiatica, nomeadamente flindersina, cido

OBJECTIVO/Identificao do
problema/Hiptese de
trabalho

hexacosanico, -sitosterol e ulopterol das folhas, 7-geranyloxy-5-metoxicumarina e 8geranyloxy-5,7-dimetoxicumarina dos ramos, e nitidina, toddasina, toddanol, toddanona,
toddalenona e toddalidimerina da raiz.
No presente estudo, as anlises preliminares revelaram que o extracto de acetato de etilo
(TALEe) existente nas folhas de T. asiatica aumenta significativamente a tolerncia oral
glucose e tem efeitos antidiabticos, comparativamente aos extractos de hexano e metanol
tambm presentes nas folhas da planta. Isto justificou a realizao da anlise fitoqumica e da
anlise por HPLC, bem como a determinao do contedo fenlico total do TALEe.
A introduo apresenta de forma clara o fundamento do estudo, esclarecendo o leitor sobre o
assunto (diabetes mellitus) que serviu de base realizao da experincia e fornecendo os
dados necessrios (ROS, RNS e Toddalia asiatica) para a compreenso da mesma. Porm, os
autores no referem se o estudo se aplica ao tratamento da diabetes mellitus tipo I ou tipo II,
facto muito importante j que os dois tipos da doena se expressam de formas diferentes.
No ltimo pargrafo da introduo os autores referem-se a concluses a que chegaram aps a
realizao dos estudos preliminares, que no deveriam ser apresentadas aqui mas sim na
parte da discusso.
O objetivo deste estudo consistiu em determinar a base cientfica do uso desta planta no
controlo da diabetes, recorrendo a ratos com diabetes induzida pela estreptozotocina (STZ).
O objectivo do estudo indicado na introduo. Contudo, os autores no identificam
claramente o problema em causa, nem explicitam as hipteses de trabalho (nula e
alternativa).

MATERIAL E MTODOS
Material

Mtodos incluindo:

Folhas frescas de T. asiatica, colhidas na ndia.

Animais: ratos Wistar machos, saudveis, com peso compreendido entre 180 e 200g e
oriundos do Entomology Research Institute (Loyola College). Os ratos foram mantidos em
jaulas de polipropileno, num ambiente com controlo de temperatura (222 C), de humidade
(455 C) e um ciclo de dia e noite de 12 horas. Os animais foram alimentados ad libitum com
rao de laboratrio normal e aclimatizados durante 7 dias antes de se iniciar a experincia.
Preparao dos extractos da planta: As folhas foram sujeitas a um tratamento para
obteno dos extractos de hexano, de acetato de etilo e de metanol, obtendo-se uma
quantidade de cada extracto de 0,82%, 1,53% e 2,84% (w/w) respectivamente.

Posteriormente, esses extractos foram refrigerados e dissolvidos num veculo a fim de serem
administrados nos animais utilizados nesta experincia.
Anlise fitoqumica preliminar do TALEe: recorrendo a mtodos fitoqumicos standard.
Estimativa do contedo fenlico total do TALEe: de acordo com o mtodo FolinCiocalteau. Obteve-se uma curva de calibrao de cido glico standard com recurso
espectrofotometria. A amostra foi testada em triplicado e foi obtida uma curva de calibrao
com cinco pontos de dados para o cido glico. Os resultados foram comparados com a curva
de calibrao de cido glico standard e o contedo fenlico total do TALEe foi expresso em
mg de equivalentes de cido glico por grama de extracto.
Anlise do TALEe por HPLC: o cromatograma obtido do TALEe foi comparado com o de dois
componentes standard, a flindersina e o ulopterol, a um comprimento de onda especfico (330
nm). A estimativa do contedo de flindersina e ulopterol deste extracto foi feita recorrendo a
uma anlise de regresso linear.
Estudo de toxicidade aguda: realizado para saber se os extractos de hexano, de acetato de
etilo e de metanol tinham efeitos txicos nos modelos experimentais. Para isso, os ratos foram
colocados em jejum durante a noite, divididos em grupos de seis e tratados com doses
aumentadas (1000, 2000, 3000, 4000 e 5000 mg/kg) dos trs extractos. Manteve-se um grupo
como controlo, ao qual foi administrado apenas o veculo. Os ratos foram observados durante
uma hora, para averiguar qualquer mudana acentuada de comportamento (sonolncia,
agitao, contoro, convulses, piloereces), sintomas de toxicidade e mortalidade.
Seguidamente, por um perodo de seis horas e depois por vinte e quatro horas nos casos de
toxicidade aguda.
Teste oral de tolerncia glucose (OGTT): realizado em ratos colocados em jejum durante
a noite e divididos em oito grupos, cada um constitudo por seis animais.
Grupo
Grupo
Grupo
Grupo

I ratos normais de controlo tratados apenas com o veculo.

II ratos tratados com extracto de hexano (250 mg/kg de peso vivo).
III ratos tratados com extracto de hexano (500 mg/kg de peso vivo).
IV ratos tratados com extracto de acetato de etilo (250 mg/kg de peso

vivo).
Grupo V ratos tratados com extracto de acetato de etilo (500 mg/kg de peso
vivo).
Grupo VI ratos tratados com extracto de metanol (250 mg/kg de peso vivo).
Grupo VII ratos tratados com extracto de metanol (500 mg/kg de peso vivo).
Grupo VIII ratos tratados com glibenclamida (0,6 mg/kg).
Trinta minutos aps administrao do TALEe e da glibenclamida, forneceram-se 2 g/kg de
glucose aos grupos de ensaio. Colheu-se sangue da veia caudal de cada rato aos 0, 30, 60 e
120 minutos e os nveis de glucose foram estimados pelo mtodo GOD-POD. Posteriormente
calculou-se a rea sob a curva (AUCglucose).
Anlises bioqumicas atravs das quais se determinou:
- Nveis de glucose no sangue, pelo mtodo GOD-POD.
- Nveis de insulina no soro, pelo mtodo de ELISA, recorrendo a um kit comercial.
- Nvel de glicognio heptico, pelo mtodo de Carroll et al. (1956).
- Actividade da SGOT e da SGPT, pelo mtodo de Reitman e Frankel (1957).
- Actividade da ALP do soro, pelo mtodo de Kind e King (1954).
- Protena total, pelo mtodo de Lowry et al. (1951).
- Ureia e a creatinina sricas, pelo mtodo diacetil monoxima e pelo mtodo de Jaffe,
respectivamente.
Foi feita homogeneizao do fgado, numa soluo arrefecida de cloreto de potssio a 10%,
para medio dos nveis e actividade da superxido dismutase (SOD), da catalase (CAT) e da
glutationa peroxidase (GPx), pelo mtodo de Rotruck et al. (1973).

Desenho do estudo

Estudos histopatolgicos: o pncreas foi dissecado imediatamente aps o abate, excisado e

lavado numa soluo salina gelada. Extraiu-se uma poro, que foi fixada em formol a 10%,
embebida em parafina e cortada em seces de 4-5 mm de espessura com o auxlio de um
micrtomo rotativo. As seces foram coradas com hematoxilina-eosina e observaram-se as
preparaes histolgicas com um microscpio ptico (10x).
A diabetes foi induzida em ratos colocados em jejum durante a noite, recorrendo a uma
injeco intraperitoneal de uma soluo de estreptozotocina (STZ) previamente preparada a

40 mg/kg de peso vivo. Aps sete dias de administrao de STZ, colheu-se sangue dos ratos e
determinaram-se os nveis de glucose no plasma. Os animais confirmados como diabticos,
pelos nveis elevados de glucose no plasma ( 200 mg/dl), foram usados na experincia. Os
ratos foram distribudos aleatoriamente em nove grupos, com seis animais cada um.
Grupo
Grupo
Grupo
Grupo
Grupo

I ratos normais de controlo tratados apenas com o veculo.

II ratos diabticos de controlo tratados apenas com o veculo.
III ratos diabticos tratados com extracto de hexano (250 mg/kg de peso vivo).
IV ratos diabticos tratados com extracto de hexano (500 mg/kg de peso vivo).
V ratos diabticos tratados com extracto de acetato de etilo (250 mg/kg de peso

Grupo
peso vivo).
Grupo
Grupo
vivo).
Grupo

VI ratos diabticos tratados com extracto de acetato de etilo (500 mg/kg de

vivo).

Anlise estatstica

Ap Comisso tica

VII ratos diabticos tratados com extracto de metanol (250 mg/kg de peso vivo).
VIII ratos diabticos tratados com extracto de metanol (500 mg/kg de peso
IX ratos diabticos tratados com glibenclamida (0,6 mg/kg de peso vivo).

O tratamento foi realizado por via oral, recorrendo a uma sonda intragstrica, uma vez por dia
e durante 28 dias de forma contnua. Mediram-se os pesos ao incio e fim do tratamento. No
28 dia, os ratos foram submetidos a jejum durante 12 horas, anestesiados com ter dietlico e
eutanasiados por decapitao. Colheu-se sangue para um tubo de ensaio seco e deixou-se
coagular temperatura ambiente durante 30 minutos. O soro foi separado por centrifugao,
durante 10 minutos, para estimativa da SGOT, SGPT e ALP.
Colheu-se ainda sangue em tubos com uma mistura de oxalato de potssio e fluoreto de sdio
(1:3) para a estimativa dos nveis de glucose e da insulina no plasma.
Amostras de fgado foram excisadas, marcadas, pesadas e armazenadas a - 80C para a
determinao do contedo de glicognio.
Os resultados foram apresentados sob a forma de mdias desvio-padro. As anlises
estatsticas de todos os dados obtidos foram avaliadas usando one-way ANOVA, seguida do
teste t-Student. As diferenas foram consideradas significativas para P 0,05.
Todos os estudos foram realizados de acordo com o Animal Ethical Committee of the
Entomology Research Institute (Loyola College, Chennai) (No. 833/a/04/CPCSEA).

Material
Relativamente aos ratos, usados como modelo experimental, so referidas as caractersticas
dos animais, as condies de alojamento, bem como o tipo de alimentao e regime alimentar.
Porm, um aspecto negativo a realar o facto de no indicarem o nmero de animais
utilizados na experincia (factor relevante para tornar a experincia estatisticamente
significativa e validar os resultados).
Mtodos
Os autores explicam de forma precisa como que os extractos da T. asiatica foram obtidos
para serem utilizados na experincia.
Os mtodos utilizados nos estudos que antecederam a experincia, bem como na experincia
propriamente dita esto bem caracterizados no artigo, referindo-se: o nmero e o tipo de
grupos de ensaio (controlo e teste); o nmero e o mtodo de distribuio das unidades
experimentais por grupo; a via de administrao, a dose e a frequncia de exposio dos ratos
substncia indutora da diabetes (STZ) e substncia em estudo (principalmente o TALEe); o
modo como a colheita de amostras foi feita e o seu processamento e indica-se tambm o
produto anestsico utilizado (ter dietlico) e o mtodo de eutansia aplicado (decapitao).
Contudo, existem dois aspectos negativos a apontar: primeiro, no teste oral de tolerncia
glucose os autores no referem a quantidade de glucose que administraram aps o tratamento
com os extractos de hexano e de metanol; segundo, o facto de os autores no referirem o
cronograma de medies do nvel de glucose no desenho experimental e colocarem essa
informao na parte dos resultados.
Relativamente ao mtodo de eutansia, os autores podem no ter recorrido a mtodos
qumicos (por exemplo, aumentar a dose do anestsico ou recorrer a barbitricos), dada a
possibilidade de interferirem com os resultados da experincia, nomeadamente com os
parmetros bioqumicos a analisar. Porm, apesar da anestesia insensibilizar os ratos, o
recurso decapitao deveria ser justificado ou poderia ter sido repensado e substitudo por
outros mtodos. Seria ainda importante saber se os indivduos que realizaram a colheita das
amostras e principalmente a eutansia tinham experincia e habilitaes para o fazer, j que a
execuo deste procedimento exige respeito para com os animais, conhecimento e
profissionalismo por parte de quem o realiza.
Anlise estatstica

Os autores referem de forma breve os mtodos estatsticos utilizados para analisar os

resultados.

RESULTADOS

Aprovao da Comisso de tica

Apesar do estudo ter sido realizado de acordo com as normas do Animal Ethical Committee of
the Entomology Research Institute, os autores no referem se o uso dos animais foi aprovado
por esse Comit. Este dado seria importante para saber se o estudo vlido do ponto de vista
tico.
Anlise fitoqumica preliminar do TALEe: revelou a presena de alcalides, terpenides,
cumarinas, flavonides e compostos fenlicos.
Contedo fenlico total do TALEe: foi de 126 mg de equivalentes de cido glico/g do
extracto, calculado atravs da curva de calibrao do cido glico.
Anlise do TALEe por HPLC: determinou-se a presena de flindersina e ulopterol no extrato
seco do TALEe e quantificou-se em 0,361% e 0,266%, respectivamente, em relao ao peso
das folhas secas.
Estudo de toxicidade aguda: a administrao de doses graduadas dos extractos de hexano,
acetato de etilo e metanol, at dose de 5g/kg, no produziu efeitos adversos quer no
comportamento normal, quer no aspecto dos ratos e todos sobreviveram durante o perodo
experimental. O peso corporal e o consumo de alimentos foram normais, quando comparados
com os ratos tratados somente com o veculo. Para estudos adicionais, as concentraes
estabelecidas foram de 250 e 500mg/kg.
Efeitos do TALEe no teste oral de tolerncia glucose: observou-se que os ratoscontrolo (normais) apresentaram valores superiores de AUC glucose. A administrao do TALEe
(250 e 500mg/kg) revelou valores significativamente mais baixos (p 0.005) de AUC glucose nos
ratos sujeitos ao tratamento, comparativamente aos ratos-controlo. Os extratos de hexano e
metanol revelaram efeitos menos significativos, 30 minutos aps a administrao de glucose,
e apresentaram valores de AUCglucose mais altos.
Efeito do TALEe no nvel de glucose do sangue em ratos diabticos: o nvel plasmtico

de glucose foi medido em ratos normais e nos ratos experimentais nos dias 0, 7,14,21 e 28 do
tratamento. Os ratos com diabetes induzida por STZ revelaram nveis significativamente
aumentados de glucose no sangue, comparativamente com os ratos normais. Aps o
tratamento com o TALEe (250 e 500 mg/kg), verificou-se que o nvel de glucose sofreu uma
reduo significativa (P 0.005), comparativamente aos ratos-controlo diabticos. Os extratos
de hexano e metanol (250 e 500mg/kg) apresentaram efeitos menos significativos no nvel de
glucose sangunea. Os ratos tratados com glibenclamida tambm revelaram uma reduo
significativa (P 0.005) no nvel de glucose no plasma.
Efeito do TALEe no peso corporal, insulina, SGOT, SGPT, ALP e glicognio heptico:
nos ratos diabticos, o peso corporal encontrava-se significativamente diminudo, assim como
o nvel de insulina e de glicognio heptico. Aps 28 dias de tratamento com o TALEe (250 e
500 mg/kg), o peso corporal, o nvel de insulina e a quantidade de glicognio heptico
aumentaram significativamente (P 0.005), em comparao com os ratos-controlo diabticos.
Houve um aumento significativo da actividade da SGOT, da SGPT e da ALP nos ratos
diabticos. Aps o tratamento com o TALEe (250 e 500 mg/kg), a actividade dessas enzimas
sofreu uma reduo significativa, relativamente aos ratos-controlo diabticos.
Efeito da TALEe nos nveis de ureia, creatinina e protena total: observou-se um
aumento significativo dos nveis sorolgicos de ureia e creatinina e uma diminuio da
protena total do plasma nos ratos diabticos. Aps 28 dias de tratamento com o TALEe (250 e
500 mg/kg), os nveis de ureia e creatinina baixaram (P 0.005) e a protena total aumentou
significativamente, em comparao com os ratos diabticos do grupo de controlo.
Efeito do TALEe na CAT, SOD e GPx: houve uma reduo significativa (P 0.005) na
actividade da CAT, da SOD e da GPx nos ratos diabticos. Aps a administrao do TALEe (250
e 500 mg/kg), a actividade dessas enzimas apresentou-se normal.
Efeito do TALEe na seco pancretica em ratos normais e em ratos diabticos: os
estudos histopatolgicos do pncreas dos ratos diabticos revelaram reduo do tamanho dos
ilhus de Langerhans, populaes de clulas- danificadas e alteraes extensas devido a
necrose e subsequente fibrose e atrofia. Os ratos tratados com TALEe, (250 e 500 mg/kg) e
glibenclamida recuperaram das leses necrticas e os ilhus de Langerhans aumentaram em

DISCUSSO

nmero e tamanho.
Os resultados so claramente apresentados sob a forma de grficos, tabelas e imagens e
surgem na mesma sequncia em que foram realizados os procedimentos, estando de acordo
com o estudo realizado. A interpretao que feita igualmente perceptvel e objectiva.
Contudo, quando os autores referem que para estudos posteriores ao da toxicidade aguda as
doses estabelecidas foram de 250 e 500mg/kg, no explicam qual a razo de usarem
especificamente estas doses.
A Toddalia asiatica tem sido tradicionalmente usada para o tratamento da diabetes mellitus. O
presente estudo foi realizado para determinar as actividades antidiabtica e antioxidante das
folhas de T. asiatica em ratos com diabetes induzida pela estreptozotocina (STZ) (muito usada
para esse efeito). A administrao intraperitoneal de STZ (40 mg/kg) danifica parcialmente as
clulas- (produtoras de insulina) do pncreas, ao quebrar as cadeias de DNA, o que resulta na
diminuio da libertao de insulina endgena.
Neste estudo, aps o tratamento dos ratos diabticos com o TALEe (250 e 500 mg/kg),
verificou-se uma reduo significativa do nvel de glucose no plasma e, simultaneamente,
um aumento dos nveis de insulina. O possvel mecanismo atravs do qual a T. asiatica
exerce a sua aco hipoglicmica nos ratos diabticos pode consistir em melhorar o
mecanismo de controlo da glicemia e aumentar a secreo de insulina a partir das clulas-
remanescentes ou regeneradas. O estudo histopatolgico indicou claramente que nos ratos
com diabetes induzida pela STZ, a regio endcrina do pncreas sofreu retraco, necrose e a
populao de clulas- estava danificada. Nos animais diabticos tratados com o TALEe
verificou-se um aumento do nmero de ilhus de Langerhans e menor grau de retraco e de
necrose das clulas- do pncreas. Isto mostra que a diminuio de glucose no sangue e o
aumento da secreo de insulina se devem libertao de insulina pelas clulas-
regeneradas do pncreas. O teste oral de tolerncia glucose utilizado para determinar
a alterao do metabolismo dos hidratos de carbono, aps uma administrao de glucose. Os
ratos tratados com o TALEe apresentaram valores mais baixos de AUC glucose, quando
comparados com os tratados com os extractos de hexano e metanol. Isto indica que o
aumento da tolerncia glucose nos ratos tratados com o TALEe se deve secreo de
insulina a partir das clulas- regeneradas e ao aumento do transporte e utilizao da glucose.
A diabetes induzida pela STZ caracteriza-se por uma perda severa de peso corporal. A
diminuio do peso corporal deve-se ao aumento de destruio muscular ou degradao de
protenas estruturais. Quando os ratos diabticos foram tratados com o TALEe, verificou-se

uma melhoria no seu peso corporal, comparativamente aos ratos-controlo diabticos e ao

grupo standard tratado com glibenclamida, o que significa que o TALEe tem um efeito
protector no controlo da perda muscular, revertendo por exemplo a neoglicognese. Para alm
disso, a proteco contra a perda de peso corporal conferida por este extracto parece resultar
da sua capacidade em reduzir a hiperglicemia.
Nos ratos diabticos observou-se uma reduo da protena total do plasma. Na diabetes
induzida experimentalmente, demonstraram-se alteraes distintas do metabolismo renal, que
levam a um balano azotado negativo, a um aumento da protelise e a uma reduzida sntese
proteica. Aps o tratamento com o TALEe, o nvel de protena no plasma dos ratos diabticos
melhorou.
O soro dos ratos diabticos apresentou nveis significativamente aumentados de ureia e
creatinina, os quais so considerados importantes marcadores de disfuno renal. Neste
estudo, verificou-se uma reduo significativa nos nveis de ureia e creatinina no soro dos
ratos diabticos tratados com o TALEe, o que indica que o extracto impediu a progresso da
leso renal.
O glicognio a principal forma de armazenamento intracelular de glucose e o seu nvel nos
vrios tecidos um reflexo directo da actividade da insulina, dado que esta promove a
deposio de glicognio dentro das clulas, ao estimular a glicognio sintase e inibir a
glicognio fosforilase. O teor de glicognio no fgado reduziu-se significativamente nos
ratos diabticos, o que proporcional deficincia em insulina. Nos ratos diabticos tratados
com o TALEe, o nvel de glicognio no fgado aproximou-se do valor normal, o que se pode
dever ao aumento da secreo de insulina.
A SGOT, a SGTP e a ALP so marcadores fiveis da funo heptica. O fgado dos ratos com
diabetes induzida por SPZ sofreu necrose. Assim sendo, um aumento da actividade da SGOT,
da SGTP e da ALP no plasma deve-se principalmente sada destas enzimas do citosol dos
hepatcitos para a corrente sangunea, o que d indicao do efeito hepatotxico da STZ. Ao
tratar os ratos diabticos com o TALEe, reduziu-se a actividade destas enzimas no plasma, em
comparao com o grupo-controlo de ratos diabticos.
A SOD, a CAT e a GPx so enzimas antioxidantes que desempenham um papel fundamental
na preveno da exposio das clulas a danos oxidativos. A SOD tem a capacidade de reduzir
o radical superxido em perxido de hidrognio (H 2O2). A CAT catalisa a reduo do perxido
de hidrognio e protege os tecidos contra os radicais hidroxilo reactivos. Quando nas clulas os
nveis de SOD aumentam sem um aumento proporcional das peroxidases (GPx), significa que

CONCLUSO

enfrentam uma sobrecarga de perxido. Este pode reagir com metais de transio e gerar o
radical hidroxilo, o mais prejudicial para o organismo. Na diabetes mellitus, o elevado nvel de
glucose pode inactivar as enzimas antioxidantes SOD, CAT e GPx, atravs da glicosilao
destas protenas, produzindo assim stress oxidativo induzido, que por sua vez causa
peroxidao lipdica. Nos ratos diabticos tratados com o TALEe, as actividades da SOD, da
CAT e da GPx aproximam-se da normalidade, o que sugere a eficcia deste extracto em
atenuar o stress oxidativo no fgado destes ratos.
Os compostos fenlicos presentes nas plantas so considerados antioxidantes eficazes. As
plantas aromticas so especialmente ricas em compostos fenlicos e tm sido muito
utilizadas em medicina tradicional para o tratamento de diversas doenas. Estudos anteriores
tambm demonstraram que os compostos fenlicos tm propriedades de eliminao de
radicais livres e reduzem o stress oxidativo associado diabetes mellitus. Neste estudo, a
presena de compostos fenlicos no TALEe, estimada pelo mtodo de Folin-Ciocalteau,
comprovou as propriedades antioxidante e antidiabtica deste extracto. Os principais
compostos do TALEe foram determinados quantitativamente por HPLC, verificando-se a
presena de flindersina e ulopterol na concentrao de 0.361% e 0.266%, respectivamente. A
flindersina uma quinolona alcalide e o ulopterol uma cumarina. Esto disponveis
relatrios sobre a actividade antidiabtica das quinilonas e das cumarinas e, assim sendo, a
actividade das folhas de T. asiatica pode dever-se presena de flindersina e ulopterol.
Os autores esclarecem o leitor sobre o objectivo do estudo e os parmetros analisados,
explicam os resultados que foram obtidos relacionando-os com a doena em causa (diabetes
mellitus) e indicam as principais concluses a que chegaram com esta experincia. de
salientar como aspecto positivo o facto de compararem para cada parmetro analisado os
resultados obtidos nos ratos diabticos tratados com o TALEe com os dos ratos-controlo
diabticos, o que reala os efeitos deste extracto no tratamento da diabetes mellitus.
Este estudo demonstra que o extracto de acetato de etilo (TALEe) das folhas de T. asiatica tem
potenciais propriedades antidiabticas e antioxidantes para tratar a diabetes, justificando
assim o seu uso tradicional.
A concluso foi realizada face ao objectivo do estudo e aos resultados obtidos, mas no
relativamente hiptese de trabalho, que tambm no foi referida na introduo. Pensamos
que a concluso deveria estar mais elaborada, podendo apresentar, por exemplo, sugestes
de trabalhos futuros, tal como a criao de um medicamento baseado no TALEe para
tratamento da diabetes mellitus.

Tendo em conta o objectivo do estudo, os mtodos realizados e os resultados obtidos,

consideramos que ao reproduzir a experincia chegaramos a uma concluso semelhante.
Trabalho realizado por:
- Anabela Martins, n 2010057
- Carolina Fragoso, n 2010008
- Joo Rosrio, n 2012154
- Maria Joana Dias, n 2010079
- Suany Vanderlei, n 2012199
Grupo 004, Turma D