Aula Prtica Saponinas Esteroidais e triterpenicas

Assunto: Identificao de Saponinas e das geninas.

Objetivos:

1 Identificar a presena de saponinas em droga vegetal

2 Identificar o tipo de saponinas (esteroidais ou triterpnicas) atravs da reao de

Liebermann:Burchard.

Introduo:

Saponinas so glicosdeos de esteroides ou de terpenos policclicos. As saponinas em soluo

aquosa formam espuma persistente e abundante. Essa atividade provm do fato de apresentarem na sua
estrutura, uma parte lipoflica e uma parte hidroflica.
So compostos no nitrogenados que se dissolvem em gua originando solues afrgenas
(espumantes), por diminuio da tenso superficial do lquido. Apresentam ainda as propriedades de
emulsionar leos e de produzir hemlise. Esta ltima deve-se capacidade do glicosdeo de se combinar
com as molculas de colesterol presentes na membrana dos eritrcitos, perturbando o equilbrio interno-
externo e promovendo a ruptura da clula com consequente liberao da hemoglobina.

Materiais e reagentes:

1. Saponina padro 12. luvas de procedimento (1)

2. cido sulfrico P.A. 13. Funil (1)
3.Clorofrmio P.A. 14. Becker de 50 mL (2)
4. Salsaparrilha 15. Basto de vidro
5. Ginseng 16. Pipeta de 1 mL
6. Soluo clorofrmica de salsaparrilha 17. Pipeta de 2 mL (3)
7. Sulfato de sdio anidro 18. Tubos de ensaio (4)
8. gua destilada 19. Pera ou pipett
9. Anidrido actico 20. Esptulas (2)
10. Esptulas Plsticas (2) 21. Suporte universal e aro de funil
11. Balana eletrnica 22. Grade para tudo de ensaio

PROCEDIMENTO:

Teste para saponinas

1. Identifique dois tubos de ensaio (1: saponina padro; 2: salsaparrilha).

2. No tubo 1 adicione 0,5g de saponina padro e 2 mL de gua destilada. Agite
fortemente o tubo e observe.
3. No tubo 2 adicione uma pequena quantidade de salsaparrilha e 2 mL de gua
destilada. Agite fortemente o tubo e observe.

REAO POSITIVA: Formao de espuma persistente

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Teste de Liebermann-Burchard

1. E um bquer adicione 1,0 g de saponina/padro e 4 mL de clorofrmio. Filtre em

algodo coberto com pequena quantidade de sulfato de sdio anidro.
2. Identifique dois tubos de ensaio (1: saponina padro; 2: salsaparrilha).
3. No tubo 1 adicione o filtrado da saponina padro + 1 mL de anidrido actico + 3
gts de cido sulfrico.
4. No tubo 2 adicione 2 mL do extrato clorofrmico de salsaparrilha (preparado no
dia anterior) + 1 mL de anidrido actico + 3 gts de cido sulfrico. Cuidado: pode
ocorrer projeo do lquido, portanto, realizar procedimento na capela.

Resultados
1. Esteroides livres: Colorao azul transitria, seguida de verde permanente
2. Triterpenoides pentacclicos: Colorao parda a vermelha

Reativo de Salkowski: Colorao indica a presena de saponinas (Triterpnica ou esteroidal)

1. Em um tubo de ensaio adicionar 3 mL da soluo clorofrmica de salsaparrilha e
evaporar at secura. Esfriar.
2. Adicionar aproximadamente 1 mL de H2SO4 concentrado, e imediatamente adicionar 5
gotas de anidrido actico. Observar o aparecimento de cor

Reativo de Salkowski Variante A:

1. Em um tubo de ensaio adicionar 3 mL da soluo clorofrmica de salsaparrilha e
evaporar at secura. Esfriar.
2. Adicionar 1 mL de clorofrmio e solubilizar, adicionar 10 gotas de anidrido actico
gelado, e em seguida algumas gotas de cido sulfrico pelas paredes. No agitar.
Resultados
1. Ncleo ESTEROIDE: Colorao azul transitria, seguida de verde permanente
2. Ncleo TRITERPENICO: Colorao avermelhada a parda

Reativo de Salkowski Variante B:

1. Em um tubo de ensaio adicionar 3 mL da soluo clorofrmica de salsaparrilha e
evaporar at secura. Esfriar.
2. Adicionar 1 mL de clorofrmio e solubilizar, adicionar 1 mL de H2SO4 concentrado
Resultados
1. Ncleo ESTEROIDE: Vermelho azulado at roxo. Colesterol=vermelho

Reativo de Liebermann-Burchard :
1. Em um tubo de ensaio adicionar 3 mL da soluo clorofrmica de salsaparrilha e
evaporar at secura. Esfriar.
2. Adicionar 5 gotas de cido actico, agitar e em seguida 3 ml da Soluo de anidrido
actico/cido sulfrico concentrado (50:1)
Resultados
1. Ncleo ESTEROIDE: Colorao esverdeada
2. Ncleo TRITERPENICO: Colorao cor-de-rosa ao roxo
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Reagentes Reativo de SALKOWSKI Reativo de

LIEBERMANN-
Clssico Variante A Variante B
BURCHAD
Ncleo Esteroide Vermelho
Esverdeada azulado ao Esverdeado
Castanho
roxo
avermelhado
Ncleo Triterpenico Vermelha ao Cor-de-rosa ao
roxo roxo

Castanho-avermelhado Esverdeada Cor-de-rosa ao roxo Espuma

Liebermann-Burchard
cido sulfrico conc. ....................................... 0,1mL
Anidrido actico ................................................5,0 mL

Reagente Liebermann-Burchard
Para a preparao do reagente Liebermann-Burchard, foram transferidos 50,0 mL de anidrido
actico para um frasco mbar e mantido em banho de gelo. Aps 30 minutos em repouso, foram
adicionados 5,0 mL de cido sulfrico concentrado. (KENNY, 1952).

KENNY, A.P. The Determination of Cholesterol by the Liebermann-Burchard. Reaction Clinical Laboratorie
v.52, p.611-619, 1952.

Livro: SAPONINS

Teste de Liebermann-Burchard.
Triterpenos no saturados e hidroxilados e esterides do uma colorao vermelha, azul ou
verde com anidrido actico e cido sulfrico (Abisch e Reichstein, 1960).
Uma vez que as saponinas terpenoides tendem a produzir uma sombra rosa ou roxa e saponinas
esterides uma colorao azul-verde, a diferenciao das duas classes possvel.

Reagente Liebermann-Burchard. O cido sulfrico concentrado (1 ml) misturado com anidrido actico
(20 ml) e clorofrmio (50 ml). O aquecimento a 85-90 C d a colorao necessria na placa CCD.
.

Preparo da Soluo clorofrmica de salsaparrilha:

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Pesar 10 gramas de salsaparrilha, fazer um cartucho de papel filtro e acondicionar e fechar.

Adicionar 150 mL de soluo alcolica a 25 % em um extrator de refluxo, e extrair por 30 minutos. Esfriar.
Adicionar mais 50 mL de gua e transferir para um funil de separao e extrair com clorofrmio (No
agitar vigorosamente para no formar emulso) em trs pores (30 + 10 + 10) perfazendo um total de
40 mL. Filtrar por algodo com uma quantidade suficiente de SULFATO DE SDIO anidro. Lavar com
clorofrmio at completar 40 mL, se necessrio.