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SOLO
Fontea:http://www.botany.hawaii.edu/faculty/gardner/diseases/Koa%20dieback/koa_wi
lt.htm
Dhingra & Sinclair (3) relatam que alm do fato do mtodo de repicagem peridica implicar
em consumo de tempo e pessoal, muitos fungos podem adaptar-se ao crescimento
saproftico induzido pelo mtodo, levando os organismos a perderem a capacidade de
esporular e a patogenicidade. Este mtodo consiste em transferir, periodicamente, colnias
jovens de fitopatgenos, que crescem em meio de cultura, para novos meios. O fungo de
solo Sclerotinia sclerotiorum pode ser preservado neste mtodo por um curto perodo de
tempo (6).
Os patgenos podem ser preservados por longos perodos de tempo no mtodo chamado
de leo mineral (3). No entanto, neste mtodo, os fitopatgenos continuam a crescer e,
conseqentemente, variaes na sua morfologia, fisiologia e capacidade de esporular
podem ocorrer. O mtodo de preservao em leo mineral consiste primeiramente em
multiplicar o patgeno em meio de cultura dentro de um frasco (por exemplo, tubo de
ensaio) e, em seguida, cobrir essa colnia com leo mineral esterilizado. Posteriormente,
esse frasco pode ser mantido em temperatura ambiente ou de refrigerador. Segundo
Dhingra & Sinclair (3), o mtodo de leo mineral no muito indicado para preservar o
fungo de solo Fusarium sp. Neste mtodo, o fungo de solo Rhizoctonia solani pode ser
preservado por at 5 anos. Culturas de R. solani no podem ser preservadas em
temperatura de refrigerador (0-7C) e em temperatura de freezer (-20C), devido perda de
viabilidade (6). Culturas de Sclerotium rolfsii so armazenadas por longos perodos de
tempo (acima de 5 anos), utilizando o mtodo de preservao em leo mineral, sendo as
culturas mantidas neste mtodo em temperatura ambiente (6). Neste mtodo, ainda h o
relato de presevao de um ano ou mais dos fungos de soloPhytophthora sp. e Pythium sp.
Para o fungo Pythium sp., a preservao em leo mineral deve ser feita em ambiente escuro
e na temperatura de 15 a 23C (6).
Muitos isolados de R. solani podem ser preservados por 10 anos ou mais em gros (6). Os
gros, como por exemplo de arroz, so desinfestados e assim que o fungo coloniz-los,
estes so colocados em placas de Petri estril, seladas e armazenadas em temperatura de
freezer.
Alguns patgenos de plantas podem ser preservados por longos perodos quando utiliza-se
o mtodo de armazenagem de tecidos secos de hospedeiro infectado. Posteriormente, estes
tecidos so mantidos em ambientes com baixa umidade e em temperatura de refrigerador
(3). O fungo de solo Thielaviopsis sp. pode ser preservado neste mtodo por 3 anos ou mais
(6). Para este fungo, as razes infectadas de suas plantas hospedeiras que so
armazenadas.
O mtodo Castellani muito utilizado para preservar fungos fitopatognicos, onde colnias
puras do fungo so colocadas em um pequeno frasco contendo gua destilada esterilizada
ou soluo salina, sendo posteriormente selado e armazenado em temperatura ambiente ou
de refrigerador (3). H relatos de preservao de muitos fungos neste mtodo, inclusive dos
que habitam o solo tais como Fusarium sp., R. solani, V. dahliae e Phytiumsp. (3, 6).
Especificamente para o fungo Pythium sp., h uma variao nesta tcnica, que consiste em
introduzir sementes de linho mais gua deionizada ao invs de utilizar somente gua
destilada ou soluo salina. Aps a repicagem de discos de miclio contendo o fungo para
os frascos, estes so mantidos em ambiente escuro e em temperatura de 15 a 25C. O
fungo Pythium sp. permanece preservado neste mtodo por 5 anos ou mais (6).
O mtodo de liofilizao tambm tem sido muito utilizado para armazenar microrganismos
por longos perodos. Neste mtodo, os patgenos ou suas estruturas perdem gua e so
armazenados na ausncia de oxignio e vapor de gua (3). Este mtodo utilizado para
preservar vrias espcies de Fusarium e de Pythium (6). Desde 1978, o centro de pesquisa
de Fusarium, na Universidade do Estado de Pensilvnia, vem empregando esta tcnica,
sendo que das cerca de 16.000 culturas, todas ainda esto viveis (6). H relato de
preservao do fungo Pythium sp. por 5 anos ou mais (6) quando se utilizada esta tcnica
em suas estruturas de resistncia (osporos).
Figueiredo & Pimentel (4) relatam que quanto menor for a atividade biolgica dos
microrganismos menor a possibilidade de ocorrerem modificaes genticas. Isto ajuda a
preservar as caractersticas de esporulao e patogenicidade dos fitopatgenos. Portanto, a
preservao de estruturas de resistncia de fungos fitopatognicos habitantes do solo deve
ser almejada, pois na natureza, essas estruturas permanecem latentes no solo por longos
perodos de tempo na espera de plantas hospedeiras. Alm disto, outro ponto a ser
almejado descobrir a temperatura adequada para armazenar essas estruturas.
Bueno et al. (2), enfocando a idia de se preservar as estruturas de resistncia dos fungos
fitopatognicos habitantes do solo e de se buscar a melhor temperatura para armazen-las,
desenvolveram novas metodologias de preservao para os fungos Fusarium
oxysporum f.sp. lycopersici raa 2, M. phaseolina, S. sclerotiorum e S. rolfsii. De acordo com
Bueno et al. (2), a produo de clamidsporos de F. oxysporum f.sp.lycopersici raa 2 deve
ser feita em p de talco e a manuteno das estruturas neste mtodo deve ocorrer em
temperatura de geladeira por at um ano. Microesclerdios de M. phaseolina devem ser
produzidos em substrato areno-orgnico (Figura 2) e a manuteno das estruturas neste
mtodo deve ocorrer em temperatura de geladeira por at um ano. A produo de
esclerdios individualizados de S. rolfsii deve ocorrer na superfcie do meio de
BDA+oxitetraciclina e as estruturas precisam ser mantidas em temperatura ambiente por
at um ano. J a produo de esclerdios individualizados de Sclerotinia sclerotiorum deve
ser feita em meio de feijo+fub e suas estruturas devem ser mantidas em temperatura de
freezer por at um ano.
De acordo com Singleton et al. (6), esclerdios de S. sclerotiorum, aps serem removidos de
plantas doentes ou de meios de cultura, podem ser preservados por muito tempo desde que
mantidos em temperatura de 2-5C.
Para finalizar, o tempo mximo de preservao precisa ainda ser determinado para muitos
mtodos j desenvolvidos para alguns fungos de solo.
Referncias
3. DHINGRA, O. D.; SINCLAIR, J. B. Basic plant pathology methods. 2.ed. Boca Raton:
CRC Press, 1995. 434 p.