DOQ Cgcre 8 - 05 PDF

Coordenao Geral de Acreditao
ORIENTAO SOBRE VALIDAO DE

MTODOS ANALTICOS
Documento de carter orientativo
DOQ-CGCRE-008
Reviso 05 Agosto 2016
DOQ-CGCRE-008 Rev. 05 Ago/16 Pgina 2/31
SUMRIO
1. Objetivo
2. Campo de Aplicao
3. Responsabilidade
4. Documentos Complementares
5. Siglas
6. Definies
7. Introduo
8. Validao
8.1. Planejamento e execuo da validao
8.2. Parmetros de desempenho
8.2.1. Seletividade
8.2.2. Linearidade/Faixa de trabalho/Faixa linear de trabalho
8.2.3. Limite de deteco
8.2.3.1. Avaliao/Percepo visual
8.2.3.2. Relao Sinal/Rudo
8.2.3.3. Estimativa a partir da curva analtica
8.2.3.3.1. Mtodo simplificado
8.2.3.3.2. Mtodo completo
8.2.3.4. Estimativa pelo desvio padro do branco
8.2.3.4.1. Branco de amostra
8.2.3.4.2. Branco de amostra com adio da menor concentrao aceitvel do analito
8.2.3.5. Estimativa por meio da curva de desvios padro
8.2.3.6. Consideraes sobre o LD
8.2.4. Limite de quantificao
8.2.4.1. Avaliao/Percepo visual
8.2.4.2. Relao Sinal/Rudo
8.2.4.3. Estimativa a partir da curva analtica
8.2.4.3.1. Mtodo simplificado
8.2.4.3.2. Mtodo completo
8.2.4.4. Estimativa pelo desvio padro do branco
8.2.4.4.1. Branco de amostra
8.2.4.4.2. Branco da amostra com adio da menor concentrao aceitvel do analito
8.2.4.5. Estimativa por meio da curva de desvios padro
8.2.4.6. Consideraes sobre o LQ
8.2.5. Tendncia/recuperao
8.2.5.1. Materiais de referncia certificados
8.2.5.1.1. Erro relativo
8.2.5.1.2. Erro normalizado
8.2.5.2. Ensaios de recuperao
8.2.5.3. Comparao com mtodo de referncia
8.2.6. Preciso
8.2.6.1. Repetibilidade
8.2.6.1.1. Critrios de aceitao para repetibilidade

8.2.6.2. Preciso intermediria
8.2.6.3. Reprodutibilidade
8.2.6.3.1. Critrios de aceitao para reprodutibilidade
8.2.6.4. Limites de preciso
8.2.6.5. Avaliao da aceitabilidade das caractersticas de preciso de um mtodo de
anlise
8.2.6.5.1. Interpretao
8.2.6.5.2. Clculo do valor de Horwitz
8.2.7. Robustez
8.2.8. Comparaes interlaboratoriais
8.2.8.1. Escore-z (z-score)
8.2.9. Acompanhamento do desempenho do mtodo validado
8.2.10. Revalidao do mtodo
8.2.10.1. Alterao no desempenho do mtodo
8.2.10.2. Alterao no procedimento analtico do mtodo
9. Documentao de mtodos validados
10. Documentos de Referncia
11. Histrico das Revises
12. Quadro de Aprovao
ANEXO Relao dos participantes da elaborao deste documento.

1 OBJETIVO
Este documento tem como objetivo auxiliar os laboratrios de ensaio na tarefa de demonstrar que
um mtodo analtico, nas condies em que praticado, tem as caractersticas necessrias para a
obteno de resultados com a qualidade exigida.
Este documento no pretende abordar todas as tcnicas aplicveis validao de mtodos

analticos, cabendo ao laboratrio buscar aquela que mais se aplica ao estudo em questo.
Este documento foi desenvolvido de acordo com as diretrizes internacionais e contm aplicaes
sobre os requisitos da acreditao. Caso o laboratrio siga estas orientaes, atender aos
respectivos requisitos; caso contrrio, o laboratrio deve demonstrar como assegurado o seu
atendimento. As no-conformidades constatadas numa avaliao so registradas contra o
requisito da acreditao e no contra este documento orientativo, porm as orientaes deste
documento sero consideradas pelos avaliadores e especialistas.
2 CAMPO DE APLICAO
Este documento aplica-se Dicla, aos laboratrios acreditados ou postulantes acreditao e aos
avaliadores e especialistas na rea de laboratrios de ensaios.
3 RESPONSABILIDADE
A responsabilidade pela reviso deste documento da Dicla.
4 DOCUMENTOS COMPLEMENTARES
Aplicam-se as ltimas edies dos seguintes documentos:
ABNT NBR ISO/IEC 17000 Avaliao de conformidade Vocabulrio e princpios gerais.

ABNT NBR ISO/IEC 17025 Requisitos Gerais para a Competncia dos Laboratrios de Ensaio
e de Calibrao.
ABNT NBR ISO/IEC 17043 Avaliao da conformidade Requisitos gerais para ensaios de
proficincia.
DOQ-CGCRE-020 Definies de Termos Utilizados nos Documentos Relacionados
Acreditao de Laboratrios, Produtores de Materiais de
Referncia e Provedores de Ensaios de Proficincia.
Eurachem Guide 2014 The Fitness for Purpose of Analytical Methods A Laboratory
Guide to Method Validation and Related Topics. Magnusson, B.
and U. rnemark (Ed.),
ISO 5725-2:1994 Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and
results - Part 2: Basic method for the determination of repeatability
and reproducibility of a standard measurement method.
ISO 5725-3:1994 Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and
results - Part 3: Intermediate measures of the precision of a
standard measurement method.
NIT-Dicla-026 Requisitos para a Participao de Laboratrios em Ensaios de
Proficincia.
NIT-Dicla-030 Rastreabilidade Metrolgica na Acreditao de Organismos de
Avaliao da Conformidade e no Reconhecimento da
Conformidade aos Princpios das BPL.
VIM 2012 Vocabulrio Internacional de Metrologia: conceitos fundamentais e
gerais e termos associados, 1 Edio Luso Brasileira, Duque de
Caxias, Inmetro, 2012.
5 SIGLAS
ABNT Associao Brasileira de Normas Tcnicas

AOAC Association of Official Analytical Chemists
ASTM American Society for Testing and Materials
Cgcre Coordenao Geral de Acreditao
CMD Concentrao Mdia Determinada
CV Coeficiente de Variao
Dicla Diviso de Acreditao de Laboratrios
DOQ Documento Orientativo da Qualidade
DP Desvio Padro
DPR Desvio Padro Relativo
ER Erro relativo
En Erro normalizado
IEC International Electrotechnical Commission
ISO International Organization for Standardization
IUPAC International Union of Pure and Applied Chemistry
LD Limite de Deteco
LQ Limite de Quantificao
MRC Material de Referncia Certificado
NBR Norma Brasileira
NIT Norma Inmetro Tcnica
VIM Vocabulrio Internacional de Metrologia
6 DEFINIES
Para o propsito deste documento, so adotadas as definies contidas no documento DOQ-

Cgcre-020, nas normas ABNT NBR ISO/IEC 17000 e ABNT NBR ISO/IEC 17025 e no VIM.
Algumas delas seguem abaixo:
Validao a confirmao por exame e fornecimento de evidncia objetiva de que os

requisitos especficos para um determinado uso pretendido so atendidos (ABNT NBR ISO/IEC
17025, item 5.4.5.1);
Validao a verificao na qual os requisitos especificados so adequados para um uso

pretendido (VIM, item 2.45);
Verificao o fornecimento de evidncia objetiva de que um dado item satisfaz requisitos

especificados, como por exemplo, a confirmao de que as propriedades relativas ao
desempenho ou aos requisitos legais so satisfeitas por um sistema de medio (VIM, item
2.45).
7 INTRODUO
O laboratrio deve atender aos requisitos da ABNT NBR ISO/IEC 17025 para a seleo de
mtodos de ensaios (item 5.4.2), desenvolvimento de mtodos de ensaio pelo laboratrio (item
5.4.3), utilizao de mtodos no normalizados (item 5.4.4) e validao de mtodos (item 5.4.5).
fundamental que os laboratrios disponham de meios e critrios objetivos para comprovar, por
meio da validao, que os mtodos de ensaio que executam conduzem a resultados confiveis e
adequados qualidade pretendida.
O laboratrio, ao empregar mtodos normalizados, necessita demonstrar que tem condies de

oper-los de maneira adequada, dentro das condies especficas existentes nas suas
instalaes antes de implant-los. Para os mtodos normalizados, o laboratrio deve

obrigatoriamente estudar os parmetros descritos nos itens deste documento, referentes
recuperao/tendncia (8.2.5) e preciso (8.2.6) em toda a faixa de trabalho, LD e LQ (8.2.3 e
8.2.4), desde que os parmetros de validao estejam declarados nos mtodos em questo e
estejam adequados ao uso pretendido. Muitas vezes, esse estudo chamado de verificao. Se o
mtodo normalizado mudar, a verificao deve ser repetida.
Se um mtodo existente for modificado para atender aos requisitos especficos, ou um mtodo
totalmente novo for desenvolvido, o laboratrio deve se assegurar de que as caractersticas de
desempenho do mtodo atendam aos requisitos para as operaes analticas pretendidas. Para
mtodos modificados (normalizados ou no) ou desenvolvidos pelo laboratrio, existe uma srie
de parmetros a serem avaliados para garantir a adequao do mtodo ao uso pretendido. Este
documento apresenta os parmetros mais comumente utilizados no processo de validao. O
laboratrio deve definir os parmetros de validao que melhor evidenciem a adequao do
mtodo ao uso pretendido.
8 VALIDAO
Com o objetivo de confirmar que os mtodos so apropriados para o uso pretendido, o laboratrio
deve validar:
Mtodos no normalizados;
Mtodos criados/desenvolvidos pelo prprio laboratrio;
Mtodos normalizados usados fora dos escopos para os quais foram concebidos;
Ampliaes e modificaes de mtodos normalizados.
A validao deve ser suficientemente abrangente para atender s necessidades de uma

determinada aplicao ou rea de aplicao. O laboratrio deve registrar os resultados obtidos, o
procedimento utilizado para a validao e uma declarao de que o mtodo ou no adequado
para o uso pretendido.
O processo de validao de um mtodo deve estar descrito em um relatrio de validao, e os

estudos para determinar os parmetros de validao devem ser realizados com equipamentos e
instrumentos dentro das especificaes, funcionando corretamente e calibrados.
Do mesmo modo, o responsvel pela realizao dos estudos deve ser competente na rea e
precisa ter conhecimento suficiente sobre o trabalho, sendo capaz de tomar as decises
apropriadas durante a realizao do mesmo.
8.1 Planejamento e execuo da validao

No planejamento e execuo da validao, sugere-se a seguinte sequncia de trabalho:
Definir objetivo e escopo do mtodo;

Definir os parmetros de desempenho;
Definir os critrios de aceitao para cada parmetro de desempenho;
Verificar se as caractersticas de desempenho dos equipamentos esto compatveis com o
exigido pelo mtodo em estudo;
Qualificar os materiais, por exemplo, padres e reagentes;
Planejar os experimentos de validao, incluindo o tratamento estatstico a ser utilizado;
Realizar os experimentos de validao;
Realizar a anlise crtica dos resultados obtidos, considerando os critrios de aceitao;
Concluir se o mtodo adequado ao uso pretendido.
Os resultados devem estar documentados e registrados de modo organizado e facilmente

acessveis.
8.2 Parmetros de desempenho

Os parmetros de desempenho devem estar claramente descritos no procedimento e relatrio de
validao e devem incluir, quando aplicvel:
Seletividade
Linearidade / Faixa de trabalho / Faixa linear de trabalho / Sensibilidade
Limite de Deteco (LD)
Limite de Quantificao (LQ)
Tendncia/Recuperao
Preciso (repetibilidade, preciso intermediria e reprodutibilidade)
Robustez (*)
(*) A robustez um procedimento opcional, normalmente realizado previamente validao do

mtodo, na etapa de otimizao.
Os parmetros que necessitam ser calculados durante o processo de validao podem variar de
acordo com o tipo de ensaio, conforme Tabela 1.
Tabela 1 Parmetros de validao conforme o tipo de ensaio
Tipo de ensaio
Parmetros
Qualitativo Quantitativo
Seletividade
Linearidade / faixa de trabalho /
Faixa linear de trabalho /
Sensibilidade
Limite de deteco
Limite de quantificao
Tendncia / recuperao
Preciso
Robustez (*) (*)
(*) parmetro opcional
NOTA 1: Dependendo da faixa de concentrao do analito, pode no ser necessria a

determinao dos limites de deteco e de quantificao. Por exemplo, quando a faixa de trabalho
estiver muito acima do LQ tpico para o mtodo a ser validado.
NOTA 2: Os mtodos estatsticos empregados neste documento baseiam-se no pressuposto de

que toda variao, seja ela associada amostra (homogeneidade) ou ao processo de medio,
aleatria e segue a distribuio de probabilidade de Gauss (tambm conhecida como distribuio
normal). Caso contrrio, uma pesquisa mais aprofundada ser necessria.
NOTA 3: Para os mtodos qualitativos, a abordagem para determinao da seletividade, do LD e

da robustez pode obedecer a parmetros estatsticos e probabilsticos diferentes dos empregados
para mtodos quantitativos, conforme indica a literatura. Este documento no aborda mtodos
estatsticos especficos para esses problemas; para tanto, dever ser elaborado um documento
especfico ou mtodos especficos para problemas qualitativos sero includos em uma prxima
reviso deste documento.
8.2.1 Seletividade
Seletividade o grau em que o mtodo pode quantificar o analito na presena de outros analitos,
matrizes ou de outro material potencialmente interferente (AOAC, 2002). Um mtodo que produz
respostas para vrios analitos, mas que pode distinguir a resposta de um analito da de outros,
chamado seletivo.
Experimentos para avaliao da seletividade descritos na literatura sobre validao de mtodos

analticos envolvem ensaios com padres ou materiais de referncia, amostras com e sem o
analito, alm da avaliao da capacidade de identificao do analito de interesse na presena de
interferentes (Tabela 2). Quando no h disponibilidade de interferentes, alguns autores sugerem
a avaliao da habilidade de medio do analito por diferentes mtodos, tcnicas ou por meio de
variaes nas condies instrumentais.
Se a seletividade no for assegurada, a linearidade, a tendncia e a preciso estaro seriamente

comprometidas.
Tabela 2 Avaliao da seletividade
Procedimento Demonstrar Comentrios

a) Fazer a anlise com
a amostra e materiais
Habilidade do mtodo em estudo de Evidncias necessrias
de referncia pelo
identificar e dosar o analito na para dar suporte e gerar
mtodo em estudo e
presena de interferentes. confiabilidade suficiente.
outros mtodos
validados.
b) Analisar amostras
Efeito de interferentes - a presena de Se alteram resultados,
contendo vrios
interferente acentua ou inibe a aperfeioar o mtodo ou
possveis interferentes
deteco ou quantificao do analito selecionar outro mais
na presena do analito
de interesse. adequado.
de interesse.
A matriz da amostra pode conter componentes que interferem no desempenho da medio. Esses
interferentes podem aumentar ou reduzir o sinal, comprometendo o resultado. Adicionalmente a
magnitude desse efeito tambm pode depender da concentrao. Logo, no estudo de seletividade
necessrio verificar tambm a existncia de efeito de matriz.
O procedimento adotado para o estudo do efeito de matriz depende da disponibilidade do analito,

da matriz sem o analito e de amostras de referncia nas concentraes de interesse. Alguns
modos como esse estudo pode ser conduzido esto descritos na Tabela 3.
Tabela 3: Estudo de efeito de matriz
Caso Procedimento Hipteses Teste estatstico Concluses

Matriz sem o Preparar dois grupos de 1) a matriz no Teste Se o teste
analito amostras de teste, um com afeta a preciso F(Snedecor) de F(Snedecor) no for
disponvel ou a matriz e o outro sem, do analito nos homogeneidade significativo, a matriz
um grupo ambos os grupos com a nveis de de varincias, por no causa um efeito
satisfatrio de concentrao do analito concentraes nvel de sobre a preciso,
amostras de idntica em cada nvel de estudados concentrao por nvel de
referncia concentrao de interesse. concentrao.
e
disponvel Deve-se testar toda a faixa
e
de estudo (baixa, mdia e 2) a matriz no Teste t (Student)
alta), com no mnimo 3 afeta o sinal do de comparao Se o teste t
replicatas por nvel de analito nos de mdias, por (Student) no for
concentrao. nveis de nvel de significativo, a matriz
concentraes concentrao no causa um efeito
estudados sobre o resultado,
por nvel de
concentrao.
Matriz sem o Preparar duas curvas A matriz no Teste t para Comparam-se as
analito no analticas, interfere na inclinaes das inclinaes
disponvel inclinao da curvas. (coeficiente s
que contenham a mesma
curva de adio angulares) das
adio de analito para cada Este mesmo
padro. curvas analticas. Se
nvel de concentrao. procedimento
as inclinaes
Uma curva preparada tambm pode ser
dessas duas curvas
com adio de analito na aplicado no caso
de regresso linear
matriz da amostra (que j acima.
no diferirem
contm um nvel do analito)
significativamente,
e a outra curva analtica
no h efeito de
no inclui a matriz de
matriz, o que pode
amostra. Devem ser
ser observado
preparados, no mnimo, 5
graficamente pelo
nveis de concentrao
paralelismo
com 3 replicatas por nvel.
aproximado das
duas curvas. Caso
contrrio, a curva
analtica deve ser
preparada na matriz.
Os dados obtidos
nesse procedimento
podem ser usados
para estudo da
linearidade.
NOTA 1: Essas replicatas devem ser preparadas de modo independente.
NOTA 2: Caso haja efeito de matriz, a linearidade, a preciso e a tendncia/recuperao tambm

devero ser estudadas na matriz.
NOTA 3: necessrio esclarecer que o teste t (Student) aplicvel quando a distribuio dos
resultados ou das medies pode ser modelada pela distribuio de probabilidade de Gauss
(tambm conhecida como distribuio normal). Pode-se verificar essa condio graficamente ou
por qualquer teste especfico como, por exemplo, o teste de Shapiro-Wilk. Ressalte-se que os
testes de hipteses, incluindo o teste t (Student), no so adequados se forem poucas as
repeties. No entanto, esse o teste atualmente mais utilizado em validao. Assim, recomenda-
se que, sempre que possvel adotar um nmero maior de repeties por nvel estudado, ou
pesquisar a distribuio adequada para a situao que se tenha.
8.2.2 Linearidade/Faixa de trabalho/Faixa linear de trabalho/Sensibilidade

Linearidade de um procedimento analtico a sua habilidade (dentro de uma dada faixa) em obter
resultados os quais so diretamente proporcionais concentrao do analito na amostra (ICH,
2005).
Faixa de trabalho de um procedimento analtico o intervalo entre a menor concentrao e a

maior concentrao de analito na amostra para o qual se demonstrou que o procedimento
analtico tem um nvel aceitvel de preciso, exatido e linearidade (ICH, 2005).
Faixa linear de trabalho por inferncia a faixa de concentrao do analito em que os resultados
do mtodo so proporcionais concentrao do analito (Eurachem guide, 2014).
Sensibilidade analtica a mudana na resposta do instrumento que corresponde a uma mudana

na quantidade medida (Eurachem guide, 2014). a inclinao da curva analtica.
Todo experimento de determinao da faixa de trabalho iniciado pela escolha de uma faixa
preliminar. A faixa de trabalho deve cobrir a faixa de aplicao para a qual o ensaio vai ser usado
e a concentrao mais esperada da amostra deve, sempre que possvel, se situar no centro da
faixa de trabalho.
No limite inferior da faixa de concentrao, o fator limitante o valor do limite de quantificao

(LQ). No limite superior, os fatores limitantes dependem do sistema de resposta do equipamento
de medio.
A maioria dos equipamentos de medio existentes estabelece a sua faixa dinmica linear.
necessrio, entretanto, verificar at que ponto a faixa de concentrao do analito coincide com a
faixa dinmica linear e assegurar que nenhum outro fenmeno tenha impacto indesejvel na
resposta.
Na Figura 1, esto representados os parmetros de desempenho descritos neste item.
Figura 1: Exemplo tpico de uma curva analtica com a identificao dos parmetros de
desempenho Faixa de trabalho, faixa linear de trabalho, Sensibilidade, LD e LQ (Fonte:
Eurachem Guide 2014)
A quantificao requer que se conhea a relao entre a resposta medida e a concentrao do

analito. A linearidade obtida por padronizao interna ou externa e formulada como expresso
matemtica para o clculo da concentrao do analito a ser determinado na amostra real. A
equao da reta que relaciona as duas variveis :
y = a + bx (1)
Onde:
y : resposta medida (sinal instrumental como absorbncia, altura ou rea do pico, etc.);
x : concentrao;
a : coeficiente linear (interseo com o eixo y, quando x = 0);
b : coeficiente angular (inclinao da curva analtica = sensibilidade).
Os coeficientes da equao de reta so calculados atravs das equaes abaixo:
yi b xi
a y bx (2)
n
( xi x )( yi y)
b 2
(3)
( xi x)
Onde:
x i : valores individuais de concentrao;
y i : valores individuais de sinal instrumental;
x : mdia de valores de x (concentrao);
y : mdia de valores de y (sinal instrumental).
O mtodo mais sensvel quando pequenas variaes de concentrao resultam em maior

variao na resposta, ou seja, maior inclinao (b).
So necessrios vrios nveis de concentrao uniformemente distribudos na faixa de trabalho

pretendida (no mnimo cinco), para construir a curva analtica. O nmero de replicatas analisadas
de cada concentrao deve ser de no mnimo trs, e preferencialmente, com os nveis de
concentrao analisados em ordem aleatria (Thompson, 2002).
A linearidade de um mtodo no pode ser observada apenas por meio do grfico dos resultados
de resposta em funo da concentrao do analito. Antes de fazer a regresso linear, deve ser
verificada a ausncia de valores aberrantes (em ingls, outliers) para cada nvel de concentrao
e a homocedasticidade (igualdade das varincias) dos dados.
A verificao da ausncia de valores aberrantes pode ser feita pelo teste de Grubbs (ISO 5725-
3,1994 e ISO 5725-2, 1994) ou com base nos resduos padronizados Jacknife (SOUZA e
JUNQUEIRA, 2005) e a homocedasticidade, isto , homogeneidade da varincia dos
resduos pelos testes de Cochran (ISO 5725-3:1994), de Levene (SOUZA e JUNQUEIRA, 2005)
ou de Brown-Forsythe (SOUZA; JUNQUEIRA, 2005).
Se o sistema for homocedstico, calcular a equao da regresso linear simples usando o mtodo
dos mnimos quadrados ordinrios no ponderados. Caso seja heterocedstico, calcular a
equao da regresso linear simples usando o mtodo dos mnimos quadrados ordinrios
ponderados. importante ressaltar que o comportamento heterocedstico pode ser causado por
procedimentos analticos inadequados ou realizados com pouco rigor. Nesse caso, o
recomendado investigar essa situao e aplicar aes corretivas pertinentes, porque o mtodo
pode voltar a apresentar comportamento homocedstico.
Calcular os coeficientes do modelo da regresso linear simples, os resduos (resduo a diferena

entre o valor observado e o valor calculado pela equao da reta de regresso para cada valor de
x) e o coeficiente de correlao linear (r). Esse ltimo um bom indicativo do quanto a reta pode
ser considerada adequada como modelo matemtico, porm no conclusivo. Desse modo,
devem ser avaliados os resduos para verificar essa adequao.
Os resduos devem ser representados graficamente e observado se h comportamento aleatrio.

Caso se observe alguma tendncia no grfico de resduos, pode haver indcio de que o modelo
linear seja inadequado.
Deve-se tambm avaliar a linearidade por meio do teste F (tambm conhecido como F-Snedecor)
na anlise da varincia (ANOVA) da regresso.
Algumas curvas analticas no demonstram comportamento linear, mesmo aps qualquer

transformao. Nesses casos, o comportamento pode ser descrito por uma outra funo que
modele a relao entre a concentrao do analito e a resposta medida.
Na Tabela 4 est um resumo das etapas para determinao da faixa linear de trabalho.
Tabela 4 - Resumo das etapas para determinao da Faixa Linear de Trabalho
N Replicatas Matriz Procedimento
Etapa (1): - Branco com adio de Objetivo: Seleo da faixa de trabalho. Identificar
concentraes variadas do inicialmente, por observao visual, a faixa linear
analito ou aproximada e os limites superior e inferior da faixa de
1 (uma) por nvel trabalho
- Branco da amostra com
adio de concentraes - Colocar no eixo x as concentraes do analito e no eixo
variadas do analito do y as respostas das medies.
- Ir para a etapa (2)
Etapa (2) - Materiais de referncia Objetivo: confirmar a linearidade na faixa de trabalho
(diferentes concentraes), na selecionada.
faixa selecionada
- Colocar no eixo x as concentraes do analito e no eixo
3 (trs) por nvel ou do y as respostas das medies.
- Branco da amostra com - Verificar a existncia de valores aberrantes que possam
adio de concentraes interferir na regresso
variadas do analito, na faixa
selecionada Verificar a homocedasticidade da distribuio dos dados .
Aplicar a regresso linear adequada e calcular o
coeficiente de correlao (r).
Obs.: preparar diferentes
concentraes de modo Com base na estimativa dos resduos, construir um
independente e no alquotas grfico e avaliar a tendncia. A distribuio aleatria em
da mesma soluo me torno da linha reta confirma a linearidade. Tendncias
sistemticas indicam a no linearidade.
Usar no mnimo 5 nveis de
concentrao
Observaes: Branco = gua reagente; Branco da amostra = matriz da amostra sem o analito de
interesse
8.2.3 Limite de Deteco (LD)

Limite de deteco (LD) de um procedimento analtico individual a menor quantidade de analito
na amostra que pode ser detectada, mas no necessariamente quantificada sob as condies
estabelecidas para o ensaio (ICH, 2005; NATA, 2013).
Quando so realizadas medidas em amostras com baixos nveis do analito ou de uma

propriedade, como por exemplo, anlise de traos, importante saber qual o menor valor de
concentrao do analito ou da propriedade que pode ser detectado pelo mtodo.
A importncia dessa determinao e os problemas associados a ela advm do fato de que a

probabilidade de deteco no muda rapidamente de 0 para 1 quando seu limiar
ultrapassado.
O limite de deteco para um procedimento analtico pode variar em funo do tipo da amostra.
fundamental assegurar-se de que todas as etapas de processamento do mtodo analtico sejam
includas na determinao desse limite de deteco, tambm importante para ensaios qualitativos.
Existem diversos modos de se calcular o limite de deteco. So apresentadas a seguir algumas

dessas abordagens.
8.2.3.1 Avaliao/Percepo visual

Baseia-se na percepo da resposta da concentrao do analito ou da propriedade observada.
O limite de deteco determinado pela anlise de amostras com concentraes conhecidas de
analito ou por valores de propriedades conhecidos e pela definio de um nvel mnimo em que o
analito/propriedade pode ser detectado com confiana.
Normalmente so realizadas sucessivas diluies at se encontrar a menor concentrao/menor

valor de propriedade que pode ser diferenciado do branco.
8.2.3.2 Relao Sinal/Rudo

Essa abordagem s pode ser aplicada em procedimentos analticos que apresentem rudo de
linha de base.
A relao sinal/rudo determinada pela comparao dos sinais medidos de amostras com baixas
concentraes conhecidas do analito e dos rudos dos brancos de amostras, definindo-se a
concentrao mnima em que o analito pode ser detectado com confiana. Uma relao
sinal/rudo de 3:1 ou 2:1 geralmente considerada aceitvel para estimativa do limite de
deteco. importante ressaltar que a regio do rudo do branco deve ser a mesma do sinal
medido.
8.2.3.3 Estimativa a partir da curva analtica
8.2.3.3.1 Mtodo simplificado

O limite de deteco (LD) pode ser estimado pela equao (4):
LD = 3,3 s / b (4)
Onde: s = desvio padro da resposta do branco

b = inclinao (coeficiente angular) da curva analtica
NOTA 1: Esse mtodo fornece melhores resultados ao nvel de traos. Em altas

concentraes, esse mtodo estima valores de LD acima dos reais.
NOTA 2: Quando o branco no gera sinal, pode-se adotar para o valor de s o desvio padro
do menor nvel da curva analtica.
NOTA 3: A inclinao b pode ser estimada por meio da curva analtica do analito construda
na avaliao da linearidade.
8.2.3.3.2 Mtodo completo

Essa abordagem utiliza sy/x, obtido pela equao (6) no lugar de sB na estimativa do limite de
deteco, na equao (5):
LD = yB 3sB (5)
Onde:
yB: sinal do branco
sB: desvio padro do branco
( yi y i ) 2
i
sy/ x (6)
n 2
Onde:
s y / x : desvio padro residual;
y i : valor individual de sinal instrumental (resposta);
y i : valor da resposta predita pela equao da curva analtica;
n : nmero de medies.
O valor do coeficiente linear da curva analtica pode ser usado como sinal do branco yB, que
uma estimativa mais exata do valor de yB do que uma simples medio do branco. O valor obtido
para LD est em termos de resposta e deve ser convertido para concentrao atravs da equao
de regresso da curva analtica.
Por exemplo, se um mtodo qualquer onde os valores de coeficientes angular e linear so

respectivamente 1,93 e 1,52, e o valor de sy/x de 0,4329, tem-se:
LD = 1,52 + 3 x 0,4329, ou seja, 2,82 em termos de resposta. Usando a equao de regresso, o

LD equivale a 0,67 pg/mL (Fonte: Miller & Miller, 2010).
8.2.3.4 Estimativa pelo desvio padro do branco
8.2.3.4.1 Branco de amostra

O branco de amostra a matriz sem o analito de interesse. O limite de deteco (LD) pode ser
estimado pela equao (7):
LD = X + t (n 1, 1 ) .s (7)
Onde:
X : mdia dos valores dos brancos da amostra;
t : abscissa da distribuio de Student, dependente do tamanho da amostra e do grau de
confiana;
s : desvio padro amostral dos brancos da amostra.
NOTA 1: A mdia e o desvio padro amostral dos brancos da amostra so dependentes da matriz.
NOTA 2: Vlido somente quando os valores dos brancos apresentarem um desvio padro
amostral diferente de zero.
8.2.3.4.2 Branco da amostra com adio da menor concentrao aceitvel do analito

O limite de deteco (LD) pode ser estimado pela equao (8):
LD = 0 + t (n 1, 1 ) .s (8)
sendo:
t : abscissa da distribuio de Student, dependente do tamanho da amostra e do grau de
confiana ;
s : desvio padro amostral dos brancos da amostra, com adio.
NOTA: A menor concentrao aceitvel aquela tida como a concentrao mais baixa para a
qual um grau de incerteza pode ser considerado satisfatrio.
fundamental que avaliaes independentes sejam realizadas em amostras com concentrao

igual ao limite de deteco determinado.
O nmero de replicatas muito elevado pode superestimar o limite de deteco; por essa razo,
esse nmero (n) deve expressar a rotina do laboratrio.
Por exemplo, no caso de se analisar 7 alquotas, tem-se 7-1 = 6 graus de liberdade de uma matriz
de branco da amostra com adio da menor concentrao aceitvel do analito. Para esses graus
de liberdade, o valor de t unilateral, para 99% de confiana 3,143. O LD ser igual a 3,143 vezes
o desvio padro amostral.
8.2.3.5 Estimativa por meio de curva de desvios padro

Nessa abordagem so preparadas solues com adio de concentraes variadas do analito ao
branco, prximas ao LD que se supe para o mtodo. O LD pode ser determinado pela anlise de
7 replicatas de amostra em pelo menos 3 concentraes distintas, sendo a menor concentrao
razoavelmente prxima de zero. Um grfico de concentrao versus desvio padro de cada nvel
construdo e ento extrapolado para estimar o desvio padro concentrao zero (s0). O LD
do mtodo considerado como b+3s0, onde b o valor mdio da amostra branco (NATA, 2013).
8.2.3.6 Consideraes sobre o LD

O mtodo analtico deve ser especificado e o LD para cada analito deve ser expresso nas
unidades apropriadas, de acordo com o preconizado no mtodo analtico. A matriz da amostra
usada para determinar o LD deve ser identificada.
Uma vez estabelecido o LD por uma das abordagens citadas ou outra abordagem contida em
documentos nacionais ou internacionais reconhecidos, esse deve ser confirmado por meio da
anlise de amostras independentes no mesmo nvel de concentrao/propriedade do LD. Quando
cabvel, adota-se um nmero de 6 replicatas (Massart, 1997). Caso alguma das replicatas no
seja detectada, significa que o LD determinado pode ter sido subestimado, devendo o mesmo ser
reavaliado.
8.2.4 Limite de Quantificao (LQ)

Limite de quantificao (LQ) de um procedimento analtico individual a menor quantidade do
analito na amostra que pode ser quantitativamente determinada com preciso e exatido
aceitveis (ICH, 2005).
Na prtica, corresponde normalmente ao padro de calibrao de menor concentrao (excluindo

o branco). Esse limite, aps ter sido determinado, deve ser testado com amostras independentes
no mesmo nvel de concentrao/propriedade do LQ, para averiguar se a recuperao/tendncia e
a preciso conseguidas so satisfatrias. Quando pertinente, adota-se um nmero de 6 replicatas.
O limite de quantificao importante para mtodos quantitativos.
Existem diversos modos de se calcular o limite de quantificao. So apresentadas a seguir

algumas dessas abordagens.
8.2.4.1 Avaliao / Percepo visual

Baseia-se na percepo da resposta da concentrao do analito ou propriedade observada.
O limite de quantificao geralmente determinado pela anlise de amostras com concentraes

conhecidas dos analitos ou valores de propriedades conhecidos e pelo estabelecimento de um
nvel mnimo em que o analito pode ser quantificado com recuperao/tendncia e preciso
aceitveis.
Normalmente so realizadas sucessivas diluies at se encontrar a menor concentrao/menor

valor de propriedade que pode ser quantificado com confiana.
8.2.4.2 Relao Sinal/Rudo

Esta abordagem s pode ser aplicada em procedimentos analticos que apresentem rudo de linha
de base.
A relao sinal/rudo determinada pela comparao dos sinais medidos de amostras com baixas
concentraes conhecidas do analito e dos rudos dos brancos de amostras, definindo-se a
concentrao mnima em que o analito pode ser detectado com confiana. A relao sinal/rudo
tpica para estimativa do limite de quantificao de 10:1. Tambm podem ser adotadas relaes
sinal/rudo de 6:1 e 5:1, em funo do mtodo. importante ressaltar que a regio do rudo do
branco deve ser a mesma do sinal medido.
8.2.4.3 Estimativa a partir da curva analtica

O limite de quantificao (LQ) pode ser estimado pela equao (9):
LQ = 10 s / b (9)
Onde:
s : desvio padro da resposta do branco
b : inclinao (coeficiente angular) da curva analtica
NOTA 1: Esse mtodo fornece melhores resultados ao nvel de traos. Em altas concentraes,
este mtodo estima valores de LQ acima dos reais.
NOTA 2: Quando o branco no gera sinal, pode-se adotar para o valor de s o desvio padro do
menor nvel da curva analtica.
NOTA 3: A inclinao b pode ser estimada por meio da curva analtica do analito construda na
avaliao da linearidade.
8.2.4.4 Estimativa pelo desvio padro do branco
8.2.4.4.1 Branco de amostra

LQ = X + 10.s (10)
Onde:
X : mdia dos valores dos brancos da amostra;
s : desvio padro amostral dos brancos da amostra.
NOTA 1: A mdia e o desvio padro amostral dos brancos da amostra so dependentes da matriz.
NOTA 2: Vlido somente quando os valores dos brancos apresentarem um desvio padro
amostral diferente de zero.
NOTA 3: A IUPAC prope o valor 10 como valor padro da equao (10) (Massart, 1997). Pode-
se adotar tambm os valores 5 ou 6 em funo do rigor analtico exigido.
8.2.4.4.2 Branco da amostra com adio da menor concentrao aceitvel do analito

LQ = 0 + 10.s (11)
Onde:
s : desvio padro amostral dos brancos da amostra, com adio.
NOTA 1: A menor concentrao aceitvel aquela tida como a concentrao mais baixa para a
qual um grau de incerteza pode ser considerado satisfatrio.
NOTA 2: A IUPAC prope o valor 10 como valor padro da equao (11) (Massart, 1997). Pode-
se adotar tambm os valores 5 ou 6 em funo do rigor analtico exigido.
8.2.4.5 Estimativa por meio da curva de desvios padro

Nesta abordagem so preparadas solues com adio de concentraes variadas do analito ao
branco, prximas ao LD/LQ que se supe para o mtodo. O LQ pode ser determinado pela anlise
de 7 replicatas de amostra em pelo menos 3 concentraes distintas, sendo a menor
concentrao razoavelmente prxima de zero. Um grfico de concentrao versus desvio padro
de cada nvel construdo e ento extrapolado para estimar o desvio padro concentrao
zero (s0). O LQ do mtodo considerado como b+10s0, onde b o valor mdio da amostra
branco (NATA, 2013).
8.2.4.6 Consideraes sobre o LQ

O LQ pode ser determinado a partir do LD, porm o mais apropriado determinar o LD a partir do
LQ por meio da equao (12):
LD = LQ / 3,3 (12)
O mtodo analtico deve ser especificado e o LQ para cada analito deve ser expresso nas
unidades apropriadas, de acordo com o preconizado no mtodo analtico. A matriz da amostra
usada para determinar o LQ deve ser identificada.
Uma vez estabelecido o LQ por uma das abordagens citadas ou outra abordagem contida em
documentos nacionais ou internacionais reconhecidos, esse deve ser confirmado
experimentalmente por meio da anlise de amostras independentes no mesmo nvel de
concentrao/propriedade do LQ. Quando cabvel, adota-se um nmero de 6 replicatas
(Massart,1997) e deve-se avaliar se a concentrao do LQ tem preciso e recuperao aceitveis,
calculando-se a recuperao(%) e o coeficiente de variao(%). Caso essa concentrao
estimada como LQ no atenda preciso e recuperao desejadas, significa que o LQ est
subestimado e nova estimativa deve ser realizada com concentraes maiores.
A concentrao do LQ sempre igual ou maior ao primeiro ponto da curva analtica. Para a

anlise em nvel de traos, recomendado adotar o LQ como a concentrao mais baixa da curva
analtica. Nesse caso, importante incluir um controle no mtodo, em concentrao equivalente
ao LQ, para acompanhar o desempenho nessa concentrao e fornecer dados para a
reestimao peridica do mesmo com os dados de controle.
NOTA 1: Para estimar o LQ de um mtodo, anlises devem ser realizadas em amostras, incluindo
todas as etapas do procedimento analtico (NATA,2013). No caso em que o mtodo de medio
tiver etapa de concentrao, em amostras com resultados abaixo do LQ, o laboratrio deve
expressar claramente o fator de concentrao na expresso do resultado (<LQ) em amostras
reais.
Exemplo: Um mtodo cujo LQ 1,0 mg/L e amostra analisada foi pr-concentrada 10 vezes,
sendo a leitura da amostra abaixo de 1,0 mg/L, o resultado dever ser expresso como: < 0,1mg/L
considerando fator de concentrao de 10 vezes.
8.2.5 Tendncia/Recuperao
Os processos normalmente utilizados para avaliar a tendncia de um mtodo so, entre outros:
uso de materiais de referncia certificados (MRC), participao em comparaes
interlaboratoriais, comparao com mtodo de referncia (ou mtodo validado) e realizao de
ensaios de recuperao.
A tendncia, quando aplicada a uma srie de resultados de ensaio, implica numa combinao de
componentes de erros aleatrios e sistemticos.
A determinao da tendncia com relao aos valores de referncia apropriados importante no

estabelecimento da rastreabilidade aos padres reconhecidos.
A tendncia pode ser expressa como recuperao analtica, definida como:
valorobservado
x 100% (13)
valoresperado
Esta tendncia deve ser corrigida ou demonstrada ser desprezvel, mas em ambos os casos, a
incerteza associada determinao da tendncia permanece como um componente essencial da
incerteza global.
NOTA 1: A exatido avaliada numericamente por meio da tendncia.
8.2.5.1 Materiais de referncia certificados

Sempre que disponvel, os materiais de referncia certificados (MRC) devem ser utilizados no
processo de validao de um mtodo de ensaio. Um MRC tem um valor de concentrao, ou
outra grandeza, para cada parmetro, e uma incerteza associada. muito importante, portanto,
que o fornecimento desses MRC seja realizado por organismos competentes conforme
estabelecido na NIT-Dicla-030.
O uso correto dos MRC consiste na sua anlise para avaliar o desempenho do mtodo. Na
avaliao da tendncia utilizando um material de referncia certificado, os valores obtidos pelo
laboratrio mdia e o desvio padro amostral de uma srie de ensaios em replicata devem ser
comparados com os valores certificados do material de referncia. Para essa comparao podem
ser utilizados diversos critrios de deciso, entre os quais:
erro relativo, e
erro normalizado.
Quando o valor obtido no estiver dentro do intervalo da regio de aceitao para o valor
certificado, o laboratrio deve procurar as causas desse desvio e procurar elimin-las.
8.2.5.1.1 Erro relativo (ER)

Um modo de avaliar a exatido do mtodo por meio do clculo do erro relativo (ER), expresso
em percentagem conforme a equao (14):
X lab X v
ER . 100 (14)
Xv
Sendo:
Xlab = valor obtido ou mdia aritmtica de valores obtidos experimentalmente
Xv = valor admitido como verdadeiro (valor certificado do MRC)
8.2.5.1.2 Erro normalizado

Quando o laboratrio calcular a incerteza expandida do seu resultado (Ulab), o valor verdadeiro
(Xv) deve estar dentro do intervalo (Xlab. Ulab). Quando isso no acontece, esse intervalo pode
estar subestimado. Nesses casos empregado o conceito de erro normalizado (En):
( X lab Xv)
En (15)
2 2
U lab U ref
Onde:
Uref : incerteza associada ao MRC.
Se | En | 1, considera-se que o resultado do laboratrio adequado.
8.2.5.2 Ensaios de recuperao

A recuperao do analito pode ser estimada pela anlise de amostras fortificadas com
quantidades conhecidas do mesmo (spike). As amostras podem ser fortificadas com o analito em
pelo menos trs diferentes concentraes (baixa, mdia e alta) da faixa de uso do mtodo.
A limitao deste procedimento a de que o analito adicionado no est necessariamente na

mesma forma que a presente na amostra. A presena de analitos adicionados em uma forma mais
facilmente detectvel pode ocasionar avaliaes excessivamente otimistas da recuperao.
A recuperao calculada segundo a equao (16):
C1 C2
Recuperao (%) 100 (16)
C3
Onde:
C1 : concentrao do analito na amostra fortificada.
C2 : concentrao do analito na amostra no fortificada.
C3 : concentrao do analito adicionado amostra fortificada.
importante que os laboratrios estabeleam critrios de aceitao para recuperao, de

preferncia seguindo as orientaes normativas da legislao aplicvel s reas de atividades,
como por exemplo, meio ambiente. Normalmente os critrios esto atrelados ao nvel de
concentrao. Na Tabela 5, temos, como exemplo, os critrios sugeridos pela AOAC.
Tabela 5: Exemplo de critrio de aceitao para recuperao

Analito, % Razo do analito Unidade Recuperao mdia, %
100 1 100% 98 102
10 10-1 10% 98 102
1 10-2 1% 97 103
0,01 10-3 0,1% 95 105
0,001 10-4 100 ppm 90 107
-5
0,0001 10 10 ppm 80 110
-6
0,00001 10 1 ppm 80 110
-7
0,000001 10 100 ppb 80 110
0,0000001 10-8 10 ppb 60 115
0,00000001 10-9 1 ppb 40 120
Fonte: AOAC, 2012
8.2.5.3 Comparao com mtodo de referncia

Consiste na comparao dos resultados obtidos utilizando um mtodo a ser validado com os
resultados conseguidos por meio de um mtodo de referncia validado. O objetivo estudar o
grau de proximidade dos resultados obtidos pelos dois mtodos, ou seja, avaliar a exatido do
mtodo em processo de validao com o de referncia.
As anlises so efetuadas em replicata, utilizando os dois mtodos, em separado, sobre as

mesmas amostras, em toda faixa de concentrao em que se pretende validar o mtodo.
Existem vrias tcnicas para comparar os resultados obtidos por dois mtodos de ensaio, entre as
quais: testes de hiptese e planejamento de experimentos.
No teste de hiptese, primeiramente aplica-se o Teste F para avaliar se as varincias so

estatisticamente iguais ou diferentes. O teste t (Student) utilizado em seguida para verificar se
as mdias dos resultados de dois mtodos podem ser consideradas estatisticamente iguais.
8.2.6 Preciso
Normalmente determinada para circunstncias especficas de medio e as trs maneiras mais
comuns de express-la so por meio da repetibilidade, preciso intermediria e da
reprodutibilidade, sendo usualmente expressas pelo desvio padro e coeficiente de variao.
O coeficiente de variao (CV, usualmente expresso em %), tambm conhecido como desvio
padro relativo (DPR), calculado da seguinte forma (equao 17):
CV = DPR = (DP / CMD ) x 100 (17)

Sendo:
DP o desvio padro;
CMD a concentrao mdia determinada.
8.2.6.1 Repetibilidade
A condio de repetibilidade de medio, de acordo com o VIM (2012), a condio de medio
num conjunto de condies, as quais incluem o mesmo procedimento de medio, os mesmos
operadores, o mesmo sistema de medio, as mesmas condies de operao e o mesmo local,
assim como medies repetidas no mesmo objeto ou em objetos similares durante um curto
perodo de tempo.
A repetibilidade pode ser expressa quantitativamente em termos da caracterstica da disperso

dos resultados e pode ser determinada por meio da anlise de padres, material de referncia ou
adio do analito ao branco da amostra, em vrias concentraes na faixa de trabalho.
As repeties devem ser independentes, ou seja, incluir todas as etapas de preparo do processo
de medio. Para avaliar a repetibilidade do mtodo, o nmero mnimo de repeties para cada
nvel de concentrao varia de acordo com diferentes documentos de validao, mas tipicamente
so entre 6 e 15 por material usado no estudo. Considerando-se a dificuldade de estimar um
desvio padro confivel a partir de poucas repeties, admissvel que os valores calculados a
partir de vrios pequenos grupos de repeties possam ser agrupados para se obter estimativas
com nmeros suficientes de graus de liberdade (Eurachem, 2014). importante testar as
concentraes baixa, mdia e alta da faixa de trabalho.
NOTA 1: Na avaliao da preciso, quanto maior o nmero de replicatas, melhor avaliao da

disperso do mtodo.
8.2.6.1.1 Critrios de aceitao para repetibilidade

importante que os laboratrios estabeleam critrios de aceitao para o desvio padro relativo
(DPR), tambm chamado de coeficiente de variao (CV), obtido sob condies de repetibilidade,
de preferncia seguindo as orientaes normativas da legislao aplicvel s reas de atividades,
como, por exemplo, meio ambiente. Normalmente os critrios esto atrelados ao nvel de
concentrao. Na Tabela 6 temos, como exemplo, os critrios sugeridos pela AOAC.
Tabela 6: Critrio de aceitao para repetibilidade

Analito, % Razo do analito Unidade DPR, %
100 1 100% 1,3
10 10-1 10% 1,9
1 10-2 1% 2,7
-3
0,01 10 0,1% 3,7
-4
0,001 10 100 ppm 5,3
-5
0,0001 10 10 ppm 7,3
0,00001 10-6 1 ppm 11
0,000001 10-7 100 ppb 15
0,0000001 10-8 10 ppb 21
0,00000001 10-9 1 ppb 30
Fonte: AOAC, 2012
8.2.6.2 Preciso intermediria

A preciso intermediria, de acordo com o VIM (2012), refere-se preciso avaliada sob
condies que compreendem o mesmo procedimento de medio, o mesmo local e medies
repetidas no mesmo objeto ou em objetos similares, ao longo dum perodo extenso de tempo, mas
pode incluir outras condies submetidas s mudanas. Nesse estudo, deve-se definir
exatamente quais condies sero variadas (uma ou mais), tais como:
diferentes analistas;
diferentes equipamentos;
diferentes tempos.
Esta medida de preciso representa a variabilidade dos resultados em um laboratrio.
Na maioria dos casos, o valor de preciso intermediria funo do nvel de concentrao do

ensaio e o seu clculo efetuado, preferencialmente, a partir dos resultados obtidos, aps
eliminao dos resultados discrepantes. A visualizao grfica dos valores tambm pode ser til
para identific-los.
Dependendo do ensaio e do tipo de aplicao do estudo da preciso intermediria, existem vrios

mtodos para determinao e controle desse parmetro, tais como:
por meio de grfico de controle do desvio padro, que poder ser aplicado para
replicatas de amostras e para padres estveis ao longo do tempo;
por meio da equao (18):
t n
1 2
Spi( j ,k ) y jk yj
t (n 1) j 1 k 1
Spi( j ,k ) = desvio padro de preciso intermediria;

(18)
t = total de amostras ensaiadas (no confundir com o t de Student);
n = total de ensaios efetuados por amostra;
j = n da amostra, j = 1, t
k = n do ensaio da amostra j, k = 1, n
yjk = valor do resultado k para a amostra j
y j = representa a mdia aritmtica dos resultados da amostra j.
Nesse caso, a determinao da preciso intermediria feita por meio de t valores de n ensaios
de amostras ou padres. A preciso intermediria baseia-se na disperso entre ensaios.
recomendado que o valor t (n-1), seja, pelo menos, igual a 15.
Quando n = 2 a equao (18) toma a forma da equao (19):
t
1 (19)
Si( j ,k ) . ( y j1 y j 2 )2
2.t j 1
Sendo:
y j1 = primeiro resultado obtido para a amostra j;

y j 2 = segundo resultado obtido para a amostra j
Um mtodo simplificado para estimar a preciso intermediria baseia-se na execuo de n

medies (n 15), em condies pr-definidas, sobre:
uma mesma amostra;

amostras supostamente idnticas;
padres
A estimativa da preciso intermediria Si ( ), neste caso, dada pela equao (20):
n
1 (20)
Si( j ,k ) ( yk y )2
n 1 k 1
em que Si (j,k) o desvio padro de preciso intermediria relativo a esse grupo, onde os
smbolos relativos s condies intermedirias de preciso podem aparecer entre parntesis (Ex:
Si (T.O) significa tempo e operadores diferentes). Esse mtodo revela-se menos eficiente quando
comparado com os anteriores.
Sendo:
n = n de ensaios efetuados por amostra ou padro;
yk = cada resultado obtido;
y = representa a mdia aritmtica de cada resultado obtido.
O desvio padro da preciso intermediria a disperso mais realista do mtodo,

podendo ser usado para clculo de incerteza de medio.
NOTA: uma boa prtica metrolgica avaliar se alguma condio testada influencia
significativamente o valor do desvio padro da preciso intermediria. Para avaliar se os grupos
testados (ex: analistas diferentes) so considerados estatisticamente semelhantes, os resultados
dos estudos efetuados sob condies variadas podem ser comparados pelos testes F e t ou pela
ANOVA.
8.2.6.3 Reprodutibilidade
Embora a reprodutibilidade no seja um componente de validao de mtodo executado por um
nico laboratrio, considerada importante quando um laboratrio busca a verificao do
desempenho dos seus mtodos em relao aos dados de validao obtidos por meio de
comparao interlaboratorial.
8.2.6.3.1 Critrios de aceitao para reprodutibilidade

importante que os laboratrios estabeleam critrios de aceitao para o desvio padro relativo
obtido sob condies de reprodutibilidade, de preferncia seguindo as orientaes normativas da
legislao aplicvel s reas de atividades, como por exemplo, meio ambiente. Normalmente os
critrios esto atrelados ao nvel de concentrao. Na Tabela 7 temos, como exemplo, os critrios
sugeridos pela AOAC.
Tabela 7: Critrio de aceitao para reprodutibilidade

Concentrao (C) Frao mssica (C) DPR predito (%)
100% 1,0 2
1% 0,01 4
0,01% 0,0001 8
1 ppm 0,000001 16
10 ppb 0,00000001 32
1 ppb 0,000000001 45
Fonte: AOAC, 2012
Uma boa prtica avaliar se o desvio padro experimental da reprodutibilidade est

compatvel com o desvio padro predito pela equao de Horwitz, modificada por Thompson, que
baseada na concentrao c do analito:
- para c > 0,138 = 0,01 c 0,5 (21)

- para 1,2x10 7 c 0,138 = 0,02 c 0,8495 (22)
- para c < 1,2 x107 = 0,02 c (23)
A Tabela 8 apresenta um resumo da determinao da repetibilidade, preciso intermediria e

reprodutibilidade.
Tabela 8: Repetibilidade, Preciso Intermediria e Reprodutibilidade
Analisar: Padres, materiais de

referncia ou amostras fortificadas Repeties O qu calcular a
Comentrios
a vrias concentraes ao longo da (independentes) partir dos dados?
faixa de trabalho
Determinar o desvio Determinar o desvio

a) Mesmo analista, equipamento, 6 padro amostral (s) padro amostral da
laboratrio, perodo curto
de cada repetibilidade de cada
(repetibilidade)
concentrao concentrao.
Determinar o desvio
Determinar o desvio
b) Analistas e equipamentos 6 padro da
padro amostral (s)
diferentes, mesmo laboratrio, perodo reprodutibilidade
de cada
estendido (preciso intermediria) intralaboratorial de cada
concentrao
concentrao.
Determinar o desvio
padro da
Determinar o desvio
c) Analistas, equipamentos e 6 reprodutibilidade
padro amostral (s)
laboratrios diferentes, perodo interlaboratorial de cada
de cada
estendido (reprodutibilidade) concentrao.
concentrao
Requer estudo
colaborativo
Fonte: Eurachem, 2014
O Laboratrio deve realizar o maior nmero de repeties tcnica e economicamente viveis, pois
se no nmero de repeties for reduzido, as concluses, para uma determinada confiabilidade,
podem no ter utilidade prtica ou o erro maior que o admissvel.
8.2.6.4 Limites de preciso

A partir do desvio padro s til calcular os limites de preciso. Isso permitir ao analista decidir
quando h uma diferena significativa, a um determinado nvel de confiana, entre os resultados
de anlises duplicadas de uma amostra obtida sob condies especificadas. O limite de
repetibilidade (r) calculado conforme a equao (24):
r t(n-1,1- ) 2 .sr (24)
Onde o fator 2 reflete a diferena entre 2 medies, t o valor da abscissa da distribuio t

(Student) bilateral para determinado nmero de graus de liberdade (relacionados estimativa do
sr) e nvel de confiana. Para graus de liberdade relativamente altos, t aproximadamente igual a
2 para 95,35% de confiana; assim, o limite de repetibilidade frequentemente aproximado como:
r = 2,8 . sr (25)
O limite de preciso intermediria e limite de reprodutibilidade (R) so calculados de maneira

similar, substituindo sr por sI e sR, respectivamente (Eurachem, 2014).
8.2.6.5. Avaliao da aceitabilidade das caractersticas de preciso de um mtodo de

anlise
No caso de no haver mtodos com os quais possam ser comparadas as caractersticas de
preciso, ento, valores tericos de repetibilidade e reprodutibilidade podem ser calculados a
partir da equao de Horwitz. A forma mais adequada o uso dos valores da HORRAT (HORwitz
RATio) para avaliar a aceitabilidade das caractersticas de preciso de um mtodo.
O valor de HORRAT dado por:
DPR(R) derivado do estudo colaborativo (26)
DPR(R) previsto da equao de Horwitz
Assim, HOR, o valor HORRAT para reprodutibilidade, o valor do desvio padro relativo (DPR ou
CV) da reprodutibilidade dividido pelo valor do desvio padro relativo (DPR ou CV) da
reprodutibilidade calculado a partir da equao de Horwitz, na concentrao de interesse.
8.2.6.5.1 Interpretao
Se os valores de HORRAT forem menores ou iguais a 2, os valores da reprodutibilidade dos
mtodos podem ser considerados satisfatrios. Os laboratrios devem se assegurar de que os
mtodos que eles empregam atendem a esse critrio.
8.2.6.5.2 Clculo do valor de Horwitz

O valor de Horwitz derivado da equao de Horwitz, que estabelece para qualquer mtodo:
DPRR = 2 (1 0,5 logC) (27)
E que este valor independe da matriz/analito. Os principais valores esto na Tabela 9:

Tabela 9: Valores de Horwitz
Razo de Concentrao PDPRR
1 (100%) 2
10-1 2,8
10-2 (1%) 4
10-3 5,6
10-4 8
10-5 11
10-6 (ppm) 16
-7
10 23
10-8 32
10-9 (ppb) 45
8.2.7 Robustez
A robustez de um mtodo analtico a capacidade do mtodo em no ser afetado por pequenas
variaes nos parmetros de execuo do mtodo. A robustez fornece uma indicao da
confiana do mtodo durante uma aplicao rotineira (Eurachem, 2014).
A robustez um parmetro opcional dentro dos estudos de validao, muitas vezes estando mais
associado a estudos de otimizao. Para determinar a robustez de um mtodo de ensaio, pode-se
recorrer ao planejamento de Youden (2002/657/EC) ou de Plackett-Burman (Sergent, 2007), por
exemplo. Trata-se de um estudo que permite no s avaliar a robustez do mtodo, como tambm
ordenar a influncia de cada uma das variaes nos resultados finais, indicando qual o tipo de
influncia de cada uma dessas variaes. Convm salientar que quanto maior for a robustez de
um mtodo, maior ser a confiana desse relacionamento sua preciso.
8.2.8 Comparaes Interlaboratoriais

A norma ABNT NBR ISO/IEC 17043 faz distino entre o uso de comparaes interlaboratoriais
para ensaios de proficincia para a determinao do desempenho do laboratrio, e para outros
propsitos tais como: estabelecer a eficcia e a comparabilidade de novos mtodos de ensaio ou
de medio, acompanhar mtodos estabelecidos e determinar as caractersticas de desempenho
de um mtodo, geralmente conhecidos como estudos colaborativos.
Para a avaliao dos resultados das comparaes interlaboratoriais so utilizadas ferramentas

estatsticas, como, por exemplo, o escore z.
Nos processos de comparao interlaboratorial, caso no se alcancem as condies satisfatrias,

deve ser efetuado um plano de aes corretivas para verificar as causas e reavaliar o ensaio. A
NIT-Dicla-026 estabelece os requisitos para a participao de laboratrios acreditados em ensaios
de proficincia.
8.2.8.1 Escore z (z-score)

O ndice z tambm um modo de avaliar o desempenho do laboratrio em comparaes
interlaboratoriais.
( X lab Xv)
z (28)
s
Onde:
Xlab : valor obtido pelo laboratrio;
Xv : valor admitido como verdadeiro;
s : desvio padro do ensaio de proficincia.
A avaliao feita com o seguinte critrio de deciso, de acordo com a ABNT NBR ISO/IEC
17043:
|z| 2 => resultado satisfatrio;

2 < |z| < 3 => resultado questionvel;
|z| 3 => resultado insatisfatrio.
8.2.9 Acompanhamento do desempenho do mtodo validado

Aps validado o mtodo, preciso implantar procedimentos de controle de qualidade para
acompanhar o desempenho do mtodo na rotina laboratorial. Dentre os procedimentos que
podem ser utilizados, esto o uso de materiais de referncia certificados (MRC), materiais de
referncia secundrios, participao em comparaes interlaboratoriais, realizao de ensaios
replicados, reensaio de itens retidos entre outros (ABNT NBR ISO/IEC 17025, item 5.9).
NOTA 1: importante que esses controles contemplem os principais parmetros da validao,

como recuperao/tendncia, preciso e limites de deteco/quantificao.
NOTA 2: Os controles de qualidade podem ser acompanhados ao longo do tempo por meio de
grficos de controle, se pertinente.
8.2.10 Revalidao do mtodo
8.2.10.1 Alterao no desempenho do mtodo

O mtodo validado dever ser acompanhado na rotina laboratorial por meio de procedimentos de
controles de qualidade, conforme estabelecido no item 5.9 da norma ABNT NBR ISO/IEC 17025.
Se esses controles demonstrarem uma perda de desempenho do mtodo, e se as aes
corretivas aplicadas no forem suficientes para manter o desempenho esperado, o mtodo dever
ser revalidado de forma a se conhecer seu novo desempenho.
8.2.10.2 Alterao no procedimento analtico do mtodo

Quando forem efetuadas alteraes no procedimento analtico, o laboratrio deve fazer uma
avaliao estatstica para saber se a alterao causa impacto no resultado do ensaio. Essas
diferenas podem ser avaliadas, por exemplo, por meio dos testes F e t, comparando-se com o
mtodo original. Caso as alteraes sejam significativas, o mtodo dever ser revalidado. A
extenso dessa validao dever ser estabelecida conforme o impacto causado pela alterao,
avaliando-se no mnimo os parmetros recuperao/tendncia, preciso e limites de
deteco/quantificao.
9 DOCUMENTAO DE MTODOS VALIDADOS
Todos os dados relevantes no estudo de validao de um mtodo, como o planejamento,

experimentos e resultados obtidos, devem ser documentados e registrados de modo a possibilitar
a rastreabilidade de todo o processo. Documentaes que registrem etapas da validao so
necessrias tambm para fins de avaliao e podem ser exigidas por razes contratuais ou at
mesmo por organismos regulamentadores.
Depois de cumpridas todas as etapas do processo de validao, importante elaborar o

procedimento operacional de modo que o mtodo possa ser implementado de maneira clara e
sem ambiguidades. A documentao apropriada auxilia na aplicao consistente do mtodo,
possibilitando sua execuo conforme descrito; caso contrrio, o desempenho real do mtodo no
ir corresponder quele previsto nos dados de validao. Portanto, a documentao deve
minimizar a introduo de variao acidental no mtodo.
Os mtodos documentados formam uma parte importante do sistema da qualidade do laboratrio

e devem estar sujeitos a um controle eficaz de documentos, assegurando desse modo que
somente mtodos e procedimentos validados sejam utilizados. O mtodo documentado deve
informar quando foi autorizado para uso.
Convm que a documentao seja clara, precisa e concisa, dentro dos limites estabelecidos pelo
seu campo de aplicao. Um formato padronizado assegura que nenhum ponto importante foi
esquecido, que as informaes a serem includas no procedimento so fornecidas sempre na
mesma ordem e que qualquer assunto desejado pode ser encontrado rapidamente.
10 DOCUMENTOS DE REFERNCIA
AMERICAN PUBLIC HEALTH ASSOCIATION. Standard Methods for the Examination of
Water and Wastewater, 21st ed. Washington, 2005.
AOAC (Association of Official Analytical Chemists). AOAC Official methods of analysis.
Appendix D: guidelines for collaborative study procedures to validate characteristics of a
method of analysis. Washington: AOAC, 2002.
AOAC International., Official methods of analysis of AOAC International, in Guidelines for
Standard Method Performance Requirements (Appendix F). Gaithersburg: AOAC International,
2012.
ASTM E178:2002 Standard Practice for Dealing With Outlying Observations.

BARRET, V.; LEWIS, T. Outliers in statistical data. 3 ed. New York: John Wiley, 1994. 604 p.
BELSLEY, D.A.; KUH, E.; WELSCH, R.E. Regression diagnostics: identifying influential data
and sources of collinearity. New York: Wiley, 1980. 292 p.
BROWN, M.B.; FORSYTHE, A.B. Robust tests for the equality of variances. J. Am. Stat.
Assoc., v. 69, p. 364-367, 1974.
BRUCE, P.; MINKKINEN P.; RIEKKOTA M.L. Practical Method Validation: Validation Sufficient
for an Analysis Method. Mikrochim. Acta. 128, 93-106. 1998.
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their total, Ann. Eugenics, 11, 47, 1941.
EAL.- P11. Validation of Test Methods - General principles and concepts. EAL European
cooperation for Accreditation of Laboratories. 1997.
EC (2002) Commission decision 2002/657/EC of 12 august 2002 implementing council
directive 96/23/EC concerning the performance of analytical methods and the interpretation of
results. Off. J. Eur. Commun.: L221, p. 8-36.
EURACHEM Guide: The Fitness for Purpose of Analytical Methods A Laboratory Guide to
Method Validation and Related Topics. Magnusson, B. and U. rnemark (Ed.), 2014.
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1997.
GREEN, J.M. A Practical Guide to Analytical Method Validation. Analytical Chemistry. 1996.
(68) 305A-309A
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tests of outlying observations. Technometrics, 14:847-856, 1972.
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HORWITZ, W. Evaluation of Analytical Methods Used for Regulation of Food and Drugs.
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HUBER, Ludwig, Validation and Qualification in Analytical Laboratories. Interpharm Press.
1999.
ICH: Validation of Analytical Procedures: Text and Methodology, in Q2(R1). ICH Harmonised
Tripartite Guideline: London, 2005.
ISO 5725-1:1994. Accuracy (trueness and precision) of Measurement Methods and Results -
Part 1: General principles and definitions.
ISO 5725-2:1994(1998). Accuracy (trueness and precision) of Measurement Methods and
Results - Part 2: basic method for the Determination of Repeatability and Reprodutibility of a
Standard Measurement Method.

Results - Part 3: Intermediate Measures of Precision of a Standard Measurement Method.
ISO 5725-4:1994. Accuracy (trueness and precision) of Measurement Methods and Results -
Part 4: Basic Methods for the Determination of the Trueness of a Standard Measurement
method.
Results - Part 6: Use in Practice of Accuracy Values.
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NATA. Technical Note 17: Guidelines for the validation and verification of quantitative and
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RELACRE. Guia Relacre 13. Validao de Mtodos Internos de Ensaio em Anlise Qumica.
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12, p. 635-635, 2007.
SOUZA, S.V.C.; JUNQUEIRA, R.G. A procedure to assess linearity by ordinary least squares
method. Analytica Chimica Acta, Vol. 552, issue 1-2, November 2005, p. 25-35.
TAYLOR, J.K . Quality Assurance of Chemical Measurements. Lewis Publishers, 1987.
THOMPSON, M. Recent trends in inter-laboratory precision at ppb and sub-ppb concentrations
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Thompson, M., S.L.R. Ellison, and R. Wood, Harmonized guidelines for single-laboratory
validation of methods of analysis - (IUPAC technical report).Pure and Applied Chemistry, 74(5):
p. 835-855, 2002.
VIM - Vocabulrio Internacional de Metrologia: conceitos fundamentais e gerais e termos
associados (VIM 2012), 1 Edio Luso Brasileira, Duque de Caxias, Inmetro, 2012.
WEISBERG, S. Applied linear regression. New York: Wiley, 1985. 324 p.
WOOD, R., How to validate analytical methods. Trends in Analytical Chemistry, v. 18, n. 9, 10
September 1999, pp. 624-632(9).
11. HISTRICO DAS REVISES
Reviso Data Itens revisados

4 JUL/2011 Reviso geral do documento, que inclui:
a mudana do ttulo de Orientao sobre a Validao de Mtodos de
Ensaios Qumicos para Orientao sobre Validao de Mtodos
Analticos.
reordenao de itens para tornar mais claro o documento.
retirada das definies de termos referenciando-as a documentos
normativos.
atualizao do documento adequando-o terminologia e
metodologias de validao mais recentes.
retirada de frmulas para clculos, por exemplo, no teste de
seletividade do mtodo, por entender-se que h bastante bibliografia
da qual os laboratrios podem se utilizar para este fim.
5 AGO/2016 Reviso geral do documento, que inclui:
atualizao do documento adequando-o terminologia e
metodologias de validao mais recentes.
reordenao de itens para tornar mais claro o documento.
incluso de definies de termos referenciando-as a documentos
normativos.
12. QUADRO DE APROVAO
Quadro de aprovao
Responsabilidade Nome Funo
Conforme Anexo a este
Elaborado por: Conforme Anexo a este documento
documento
Verificado por: Renata Borges Assessora da Dicla
Aprovado por: Joo Carlos Antunes de Souza Chefe da Dicla
____________________
ANEXO RELAO DOS PARTICIPANTES DA ELABORAO DESTE DOCUMENTO
De forma a auxiliar os laboratrios de ensaios, especialmente os postulantes acreditao, na

tarefa de validar os mtodos por eles desenvolvidos, a Diviso de Acreditao de Laboratrios
(Dicla) da Cgcre reuniu a sua Comisso Tcnica de Qumica (CT-05), congregando os
especialistas, a seguir listados, que dedicaram um tempo de suas atividades elaborao e
reviso deste documento.
A Dicla agradece pela contribuio prestada no apoio ao fortalecimento da atividade de

acreditao de laboratrios.
Emisso e reviso 01: Hlio Lionel (in memoriam) Especialista em Qumica do Petrleo; Snia
Elisa Pereira (Coordenadora do trabalho) - Instituto Nacional de Tecnologia / INT; Suzana Saboia
de Moura - INMETRO / Dicla; Eduardo Castello Branco T. Guimares - UERJ / LABCON;
Margareth Westin D. de Azevedo - CETEC / Fundao Centro Tecnolgico de Minas Gerais;
Lina Yamachita Oliveras - CIENTEC / RS; Tnia Barreto Simes Corra - EMBRAPA / CTAA;
Alfredo Rodrigues de Oliveira - Hidroqumica; Vanderla de Souza - INMETRO / DQUIM;
Albert Hartmann - Millennium Chemicals; Lcia Helena Noanta de Souza - PETROBRAS /
CENPES; Vera Harcar - Rede de Tecnologia do Rio de Janeiro; Srgio Motta - SENAI / CETIND;
Kikue Higashi - Especialista em Qumica Ambiental; Paulo Afonso Lopes da Silva - Ph. D.,
Estatstico; Reginaldo Ramos - Especialista em Qumica Ambiental; Walderez Bindilatti -
Qumica
_________________________
Membros do Grupo Tcnico responsvel pela reviso 02: Eduardo Castello Branco T.
Guimares (Coordenador do trabalho) - UERJ / LABCON; Akie Kawakami vila - FIOCRUZ /
Biomanguinhos; Alfredo Rodriguez de Oliveira - Especialista em Qumica Ambiental; Ilse Maria
Guilhermino Lemos - Especialista em Qumica do Petrleo; Janana Marques Rodrigues
Caixeiro - INMETRO / DQUIM; Kikue Higashi - Especialista em Qumica Ambiental; Olga
Benrio Ramos Leal - INMETRO / DICLA; Patrcia Ritter Martins - PETROBRAS / CENPES,
com a colaborao de: Paulo Afonso Lopes da Silva - Ph. D., Estatstico; Renata M. Borges -
INMETRO / Dicla
__________________________
Membros do Grupo Tcnico responsvel pela reviso 03: Eduardo Castello Branco T.
Guimares - Coordenador do trabalho - IQ / UERJ; Adriane Castro Pereira - Laboratrio
Biominerais Ltda.; Akie Kawakami vila - Fundao BIO RIO; Eliane Cristina Pires do Rego
INMETRO / DQUIM; Ilse Maria Guilhermino Lemos - Especialista em Qumica do Petrleo; Lina
Yamachita Oliveras - CIENTEC/RS; Luzia Cristina Valente Rodrigues - LAMIM / CPRM;
Neimar Arajo IBP; Olga Benrio Ramos Leal; Dicla / INMETRO; Paula Fernandes de
Aguiar - IQ / UFRJ; Paulo Afonso Lopes da Silva - Ph. D, Estatstico; Paulo Paschoal Borges
INMETRO / DQUIM; Patrcia Ritter Martins - CENPES / PETROBRAS; Renata M. Borges
INMETRO / DICLA; Roberto Gonalves Junqueira - ALM/FAFAR /UFMG; Tnia Barretto
Simes Corra - Especialista em Alimentos
______________________
Membros do Grupo Tcnico responsvel pela reviso 05: Eliane Cristina Pires do Rego
(Coordenadora do trabalho) INMETRO / Dquim; Alice Sakuma (vice-coordenadora do trabalho)
- IAL; Akie Kawakami vila - Fundao BIO RIO; Carlos Henrique Brasil Bizarri
- Coca-cola; Elcio Cruz de Oliveira - Transpetro / PETROBRAS; Felipe Del Castillo Evagon;
Ilse Maria Guilhermino Lemos - Especialista em Qumica do Petrleo; Lina Yamachita Oliveras
- CIENTEC/RS; Luzia Cristina Valente Rodrigues - LAMIM / CPRM; Paula Fernandes de
Aguiar - IQ / UFRJ; Paulo Afonso Lopes da Silva - Ph. D, Estatstico; Patrcia Ritter Martins -
CENPES / PETROBRAS; Thiago de Oliveira Arajo - INMETRO / Dquim; Margareth Westin
Duarte de Azevedo Especialista em Qumica; Alfredo G. H. Rodrigues de Oliveira
Especialista na rea ambiental; Elsa Fuchshuber Rodrigues de Oliveira - Especialista em
ensaios biolgicos; Marise Tenrio Wanderley Hbner INCQS; Patricia Weigert de
Camargo INMETRO / Dicla.

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Coordenao Geral de Acreditao

ORIENTAO SOBRE VALIDAO DE

8.2.6.1.1. Critrios de aceitao para repetibilidade

ANEXO Relao dos participantes da elaborao deste documento.

Este documento no pretende abordar todas as tcnicas aplicveis validao de mtodos

A responsabilidade pela reviso deste documento da Dicla.

Aplicam-se as ltimas edies dos seguintes documentos:

ABNT NBR ISO/IEC 17000 Avaliao de conformidade Vocabulrio e princpios gerais.

ABNT Associao Brasileira de Normas Tcnicas

Para o propsito deste documento, so adotadas as definies contidas no documento DOQ-

Validao a confirmao por exame e fornecimento de evidncia objetiva de que os

Validao a verificao na qual os requisitos especificados so adequados para um uso

Verificao o fornecimento de evidncia objetiva de que um dado item satisfaz requisitos

O laboratrio, ao empregar mtodos normalizados, necessita demonstrar que tem condies de

instalaes antes de implant-los. Para os mtodos normalizados, o laboratrio deve

A validao deve ser suficientemente abrangente para atender s necessidades de uma

O processo de validao de um mtodo deve estar descrito em um relatrio de validao, e os

8.1 Planejamento e execuo da validao

Definir objetivo e escopo do mtodo;

Os resultados devem estar documentados e registrados de modo organizado e facilmente

8.2 Parmetros de desempenho

(*) A robustez um procedimento opcional, normalmente realizado previamente validao do

Tabela 1 Parmetros de validao conforme o tipo de ensaio

NOTA 1: Dependendo da faixa de concentrao do analito, pode no ser necessria a

NOTA 2: Os mtodos estatsticos empregados neste documento baseiam-se no pressuposto de

NOTA 3: Para os mtodos qualitativos, a abordagem para determinao da seletividade, do LD e

Experimentos para avaliao da seletividade descritos na literatura sobre validao de mtodos

Se a seletividade no for assegurada, a linearidade, a tendncia e a preciso estaro seriamente

Tabela 2 Avaliao da seletividade

Procedimento Demonstrar Comentrios

O procedimento adotado para o estudo do efeito de matriz depende da disponibilidade do analito,

Tabela 3: Estudo de efeito de matriz

Caso Procedimento Hipteses Teste estatstico Concluses

NOTA 1: Essas replicatas devem ser preparadas de modo independente.

NOTA 2: Caso haja efeito de matriz, a linearidade, a preciso e a tendncia/recuperao tambm

8.2.2 Linearidade/Faixa de trabalho/Faixa linear de trabalho/Sensibilidade

Faixa de trabalho de um procedimento analtico o intervalo entre a menor concentrao e a

Sensibilidade analtica a mudana na resposta do instrumento que corresponde a uma mudana

No limite inferior da faixa de concentrao, o fator limitante o valor do limite de quantificao

Na Figura 1, esto representados os parmetros de desempenho descritos neste item.

A quantificao requer que se conhea a relao entre a resposta medida e a concentrao do

Os coeficientes da equao de reta so calculados atravs das equaes abaixo:

O mtodo mais sensvel quando pequenas variaes de concentrao resultam em maior

So necessrios vrios nveis de concentrao uniformemente distribudos na faixa de trabalho

Calcular os coeficientes do modelo da regresso linear simples, os resduos (resduo a diferena

Os resduos devem ser representados graficamente e observado se h comportamento aleatrio.

Algumas curvas analticas no demonstram comportamento linear, mesmo aps qualquer

Tabela 4 - Resumo das etapas para determinao da Faixa Linear de Trabalho

N Replicatas Matriz Procedimento

8.2.3 Limite de Deteco (LD)

Quando so realizadas medidas em amostras com baixos nveis do analito ou de uma

A importncia dessa determinao e os problemas associados a ela advm do fato de que a

Existem diversos modos de se calcular o limite de deteco. So apresentadas a seguir algumas

8.2.3.1 Avaliao/Percepo visual

Normalmente so realizadas sucessivas diluies at se encontrar a menor concentrao/menor

8.2.3.2 Relao Sinal/Rudo

8.2.3.3 Estimativa a partir da curva analtica

8.2.3.3.1 Mtodo simplificado

Onde: s = desvio padro da resposta do branco

NOTA 1: Esse mtodo fornece melhores resultados ao nvel de traos. Em altas

8.2.3.3.2 Mtodo completo

Por exemplo, se um mtodo qualquer onde os valores de coeficientes angular e linear so

LD = 1,52 + 3 x 0,4329, ou seja, 2,82 em termos de resposta. Usando a equao de regresso, o