http://dx.doi.org/10.21577/0100-4042.20170180 Quim. Nova, Vol. 41, No.

3, 284-291, 2018

ENZIMÁTICA BIODIESEL SÍNTESE DE ÁCIDO OIL usando uma mistura LIPASE

Kelly CNR Pedro uma, Juliana M. Parreira uma, Igor N. Correia uma, Cristiane A. Henriques uma,* e Marta AP Langone a, b
uma Departamento de Química Analítica, Instituto de Química, Universidade do Estado do Rio de Janeiro, Rua São Francisco Xavier,
Artigo

524, 20550-900, Rio de Janeiro - RJ, Brasil

b Instituto Federal de Educação, Ciência e Tecnologia, Rua Senador Furtado, 121, 20260-100 Rio de Janeiro - RJ, Brasil

Recebido em 2017/09/08; aceito em 2017/04/12; publicado na web em 21/12/2017

O processo de produção de biodiesel convencional tem algumas desvantagens. É necessário o uso de óleos vegetais refinados, com ácidos gordos livres baixas (AGL) conteúdo.

Uma via alternativa é a utilização de óleos de ácido de baixo custo em um processo enzimático. O uso de lipases permite esterificação simultânea de FFAs e transesterificao de

triglicidos presentes na matéria-prima que forma ésteres de alquilo. O objectivo deste trabalho foi estudar a produção de biodiesel utilizando óleos de soja com teores diferentes de

ácido (valor ácido de 8,5, 50, 90) e etanol catalisados ​por lipases imobilizadas comerciais (Novozym 435, RM Lipozyme IM e Lipozyme TL IM). Um decréscimo significativo do valor

ácido foi observada principalmente com Novozym 435 e Lipozyme IM RM. A utilização de uma mistura de dois lipases imobilizadas foi também investigada para diminuir o custo do

catalisador e aumentar a quantidade de éster produzido. Os três lipases imobilizadas comerciais foram misturados num sistema dual e testados para a síntese de biodiesel a partir

de óleo de ácido (AV de 8,5, 50 e 90). Um efeito sinergético positivo ocorreu principalmente para Lipozyme TL IM (lipase 1,3 específica) e Novozym 435 (lipase não específica)

mistura. O teor de éster duplicou quando esta mistura lipase foi utilizado em etanólise de óleo de ácido com AV de 90.

Palavras-chave: mistura de lipase; óleo de ácido; biodiesel; óleo de soja; transesterificação.

INTRODUÇÃO reduzir o teor de FFA. de ácidos gordos livres e glicerol podem reagir para produzir glicéridos e
água. A água produzida deve ser removido para favorecer a conclusão da reacção, a utilização de

O biodiesel é uma mistura de ésteres alquílicos de ácidos gordos que é não tóxico, altas temperaturas (200-220 ° C) com uma pulverização de gás inerte ou vácuo. Os glicéridos

biodegradável e um excelente substituto para o combustível diesel. O processo convencional formados também irá ser transesterificado durante o processo catalisado por alcalina.

para a produção de biodiesel é o de transesterificação de óleos vegetais refinados, com processamento ácido é a técnica mais comum utilizada como matéria-prima com mais do que

álcoois de cadeia curta de carbono (metanol ou etanol), na presença de catalisadores básicos 10% dos FFAs. Um ácido inorgânico, tal como ácido sulfúrico, é utilizado como catalisador para

homogéneos, tais como hidróxidos de sódio ou de potássio, carbonatos ou alcidos. Esta converter ésteres em FFAs. Em seguida, o catalisador ácido e a água, formada durante a

reacção produz os ésteres alquílicos de ácidos gordos como o seu principal produto e glicerol reacção, são removidos antes de catalisador alcalino é adicionado para promover a reacção de

como co-produto. No entanto, estes sistemas catalíticos têm alguns problemas tecnológicos: a transesterificação. 3

recuperação e purificação de glicerol, a dificuldade para remover os catalisadores básicos e

água a partir do biodiesel, a produção de uma grande quantidade de águas residuais, e a
emulsificação. Além disso, elas requerem a utilização de óleos vegetais refinados que têm
ácidos gordos livres baixo (inferior a 0,5 em peso. 1 Por conseguinte, o custo elevado destes
matéria-prima representa 60-80% do custo de produção total de biodiesel. 2
Um processo enzimático utilizando lipases pode superar os inconvenientes da
transesterificação catalisada por alcalina de óleos de ácidos. Lipases de triacilglicerol
(hidrolases, CE. 3.1.1.3) são hidrolases que catalisam na natureza a hidrólise dos triglicéridos
em ácidos gordos e glicerol. No entanto, em condições termodinâmicas favoráveis, eles
também são capazes de catalisar reacções sintéticas como esterificação, transesterificação,
acidólise, alcoólise, e aminólise. O uso de lipases permite esterificação simultânea de FFAs e
de transesterificação de triglicéridos presentes nos ésteres de alquilo de matérias-primas que

O uso de óleos não comestíveis, óleos usados ​(óleo de cozinha usado) e gorduras formam. Além disso, a enzima catalisada reacções são altamente selectivos, envolver menos

animais foram investigados considerando a viabilidade econômica do processo. No consumo de energia, requer condições de reacção suaves, proporcionar uma mais fácil

entanto, a matéria-prima de baixo custo tem algumas desvantagens, devido ao seu recuperação de glicerol, e produzem menos desperdício. 2,4

elevado teor de ácido gordo livre (FFA). FFAs são produtos da hidrólise dos triglicéridos, e
que interfere com a conversão catalisada por alcalina habitual de óleo em biodiesel
porque reagem com o catalisador para formar o sabão, o qual desactiva o catalisador. 3
etapas de processamento adicionais são necessários para usar alta matéria-prima FFA. O
procedimento mais comum, quando o nível de FFA é 5% ou menos, é o de adicionar uma
quantidade extra de catalisador alcalino e permitir a sua reacção com FFAs produzir sabão. A
perda de rendimento associada com este processo vai ser, pelo menos, duas vezes a
percentagem de FFAs. 3 Outra estratégia para a matéria-prima que contém 5-10% de FFA é
arrastamento com vapor. Este processo envolve o aquecimento do óleo para 290 ° C sob alto
vácuo e destila FFAs de triglicéridos. No entanto, estes dois métodos não converter FFAs em
O meio de reacção de síntese de biodiesel por transesterificação de óleos
vegetais é uma mistura de triglicéridos, diglicéridos ou regioisómeros de
monoglicéridos e ácidos gordos. Esta mistura contém uma ampla gama de substratos
para a acção da enzima. 5 As lipases obtidas a partir de fontes diferentes podem exibir
diferentes selectividade e actividade na presença destas matérias-primas muito
complexas. Além disso, o suporte das lipases imobilizadas poderia alterar o
comportamento biocatalisador na presença de substratos naturais como óleos
vegetais. 5,6 A utilização de uma mistura de lipases, que foram obtidos a partir de
diferentes fontes, têm especificidades diferentes, e foram imobilizadas em diferentes
suportes, pode aumentar a taxa de biodiesel e de rendimento. Há vários relatos em

biodiesel. Glicer�ise também pode ser usado para que misturas de diferentes tipos de lipases foram utilizados com sucesso para
catalisar reações de transesterificação e interesterificação. 4,6-10

* e-mail: cah@uerj.br
Vol. 41, N ° 3 síntese enzimática de biodiesel a partir de óleo de ácido utilizando uma mistura de lipase
Cerca de 75% do biodiesel produzido no Brasil é derivado de óleo de soja. No entanto,
no Brasil, existem outras fontes de óleos vegetais, como Jatropha curcas, Acrocomia
aculeados, e óleos de palma que são interessantes para a produção de biodiesel, pois eles
têm maior produtividade em comparação com óleo de soja. Por outro lado, estes materiais
têm a desvantagem de apresentar elevado teor de ácidos gordos livres. Assim, o
desenvolvimento de tecnologias baseadas no uso de óleos ácidos para a produção de
biodiesel tem sido objecto de estudos destinadas a reduzir os custos de produção de
biodiesel.
O objectivo deste trabalho foi estudar a produção de biodiesel a partir de óleo de soja ácido
com etanol num sistema descontínuo, utilizando misturas de lipase. Tanto quanto temos
conhecimento a utilização de combinações de lipases para catalisar a síntese de biodiesel a
partir de óleo de soja ácido não foi relatada na literatura. As lipases comerciais foram
seleccionados Novozym
435, RM Lipozyme IM e Lipozyme TL IM (Novozymes). Os efeitos da temperatura de
reacção, concentração de enzima, e a acidez do óleo em biodiesel síntese com um
único lipase imobilizada também foram investigados.
EXPERIMENTAL
material e métodos
reagentes
óleo de soja refinado foi fornecida pela Sadia (Rio de Janeiro, Brasil) e
apresentou um valor de ácido (AV) de 0,5 (mg KOH g- 1
de óleo). óleo de soja ácido Modelo foi preparado por meio da adição de ácido oleico
ao óleo de soja refinado, a fim de obter amostras de óleo com AV = 8,5, 50 e 90. O
etanol (PA), butanol (PA), acetona (PA), hidróxido de sódio (PA ), n-hexano (99%), e
acetato de etilo (PA) foram obtidos a partir de Vetec Química Fina Ltda (Rio de Janeiro,
Brasil). ácido oleico (extra puro) e ácido láurico foram adquiridos a Merck (Darmstadt,
Alemanha). heptadecanoato de metilo (99%), monolaurina (99%), dilaurina (99%),
trilaurina (97%) foram obtidos a partir de Sigma-Aldrich (St. Louis, EUA).
lipases comerciais
As lipases comerciais utilizados foram Lipozyme IM RM (lipase 1,3 específica de Rhizomucor
análise volumétrica ácido-base.
miehei imobilizada sobre uma resina aniónica), Lipozyme TL IM (lipase específica 1,3-a
partir de Thermomyces lanuginosus imobilizado num gel de sílica granulado), Novozym
435 (lipase não específica a partir de Candida antarctica imobilizado numa resina acrílica
macroporosa). Estes biocatalisadores foram gentilmente doados pela Novozymes Latin
America Ltda (Brasil).
Determinação atividade enzimática
actividade de esterificação foi determinada pelo consumo de ácido oleico, numa
reacção de esterificação com butanol (ácido oleico / butanol razão molar de 1) utilizando
3 wt.% do biocatalisador a 45 ° C. A concentração de ácido oleico nas amostras foi
analisada por acidbase análise volumétrica. 11 Uma unidade de esterificação (U) foi
definida como a quantidade de enzima que consome um umol de ácido oleico por
minuto sob as condições experimentais. As actividades de esterificação de lipases
imobilizadas comerciais Novozym 435, RM Lipozyme IM e Lipozyme TL IM foram 3.876;
1.864 e 688 U g- 1, respectivamente.
actividade de transesterificação foi medido pelo consumo de trilaurina na reacção
de transesterificação com etanol (etanol trilaurina rácio / molar de 3) utilizando 5 wt.%
do biocatalisador a 50 ° C. A concentração de trilaurina nas amostras foi analisado por
cromatografia gasosa capilar de acordo com o método descrito por Langone e
Sant'Anna. 12 Uma unidade de transesterificação (U) foi definida como a quantidade de
enzima que consome um umol de trilaurina por minuto sob as condições
experimentais. As atividades de transesterificação de
285
comercial lipases imobilizadas Novozym 435, RM Lipozyme IM e Lipozyme TL IM
foram 3.202; 721 e 3898 L g- 1, respectivamente.
O biodiesel Síntese
As reacções de transesterificação entre óleo de soja e de etanol foram realizadas num
reactor fechado, em lotes de 15 mL magneticamente agitado, acoplado a um condensador, a fim
de evitar perda de álcool por volatilização. A temperatura de reacção foi mantida constante através
da circulação de etileno glicol a partir de um banho termostático (Haake DC-10) para dentro do
invólucro do reactor.
A massa de óleo de soja utilizada foi de 8 g em todas as experiências. Este valor
corresponde a 0,01 moles de triglicéridos e baseia-se na massa molar de óleo, calculada a
partir da composição de óleo (801 g mol 1).
A adição do álcool foi efectuada em três fases a 0, 30 e 60 min de reacção. A adição passo a
passo de etanol foi usado para evitar a desnaturação da lipase causada por uma
concentração inicial mais elevado de álcool. A quantidade de éster de ácido gordo de etilo
(FAEE) produzida foi determinada em amostras de 20 uL em duplicado, retiradas do meio
reaccional, por cromatografia em fase gasosa.
Efeito da temperatura
O efeito da temperatura (40, 50, 60, 70 e 78 ° C) foi estudada
nas reacções levadas a cabo usando a razão molar estequiométrica de etanol / petróleo
(01/03) e 5 wt.% (com base no peso de óleo de soja), do biocatalisador (Novozym 435, RM
Lipozyme IM e Lipozyme TL IM).
Efeito da concentração de enzima
A concentração de enzima (1, 3, 5, 7, e 9 wt.% Baseado em peso de óleo de
soja) foi investigada no etanólise de óleo de soja (etanol / óleo de razão molar
01/03) a 50 ° C.
Efeito do teor de ácido
O efeito do teor de ácido no óleo de soja (valor ácido de 0,5, 8,5, 50 e 90), foi
investigada nas reacções levadas a cabo a 50 ° C usando álcool estequiométrica
ascende em relação a ambos os reagentes (proporção molar etanol / óleo = 3/1 e etanol
/ ácido oleico = 1/1), e 5 p.% De lipase comercial. Para o Novozym 435, as reacções
foram também investigados, a 70 ° C. O consumo de ácido oleico foi monitorizada por
Efeito do uso de mistura de lipases
Inicialmente, o efeito da utilização da mistura de lipases comerciais
imobilizadas foi investigada nas reacções de transesterificação de óleo de soja
com etanol efectuadas a 50 ° C utilizando Lipozyme TL IM e Lipozyme RM IM
adicionado em momentos diferentes (no início ou depois 30 min) e diferentes
quantidades.
A stese de biodiesel a partir de óleo de ácido foi estudada usando 5 p.% De lipase
imobilizada (Novozym 435, Lipozyme RM IM e Lipozyme TL IM) no início da reacção e,
depois de 240 minutos, a adição de mais de lipase (2 wt.%) De o meio de reacção.
Nestas experiências, a concentração total de lipase foi de 7 em peso.% E a reacção foi
efectuada durante 5,5 h.
teor de ésteres
O teor de éster etílico de ácido gordo (FAEE) no meio reaccional foi determinada por
cromatografia em fase gasosa de acordo com o método descrito por Corrêa et al. 13 As amostras
foram analisadas num cromatógrafo de gás Varian (CP-3380 modelo), equipado com um
detector de ionização de chama (FID), uma coluna capilar 52 CB CERA CP 30 mx 0,25 mm x
0,25 mm, e um sistema de injecção de divisão com um 1 / 20 proporção. temperaturas de
injector e de detector foram mantidos a 280 e 300 ° C, respectivamente. O forno foi inicialmente
mantida a 200 ° C durante 4,5 min, em seguida aquecida até 250 ° C, a uma C min-20 ° 1 taxa, e
mantém-se constante à temperatura final
286 Pedro et al. Quim. Nova

durante 5 min. De hidrogénio foi utilizado como gás portador a uma min- 2 ml 1 quociente de vazão;
pressão da coluna foi regulada para 20 psi. Metil heptadecanoato foi utilizado como padrão interno. O
teor de éster foi expressa como gramas de ésteres etílicos produzidos por grama de amostra.
RESULTADOS E DISCUSSÃO
Embora os melhores resultados foram encontrados para as concentrações de enzimas igual
ou superior a 7 wt.%, A investigação da influência dos parâmetros experimentais (temperatura,
campo de tempo e valor ácido do óleo) foi realizada utilizando 5 wt.% Do biocatalisador para
alcançar níveis mais baixos de conteúdo de éster (conversões mais baixas) e, assim, permitir que
mais evidente o efeito de cada parâmetro.

Mesa 2. O teor de éster (p.%) após 240 minutos de reacção de transesterificação entre o óleo de
stese de biodiesel utilizando um único lipase imobilizada comercial
soja refinado (AV = 0,5) e etanol a 50 ° C

Conteúdo enzima (p.%) 1

A síntese enzimática de biodiesel utilizando óleo de ácido é afectada por muitos lipase
3 5 7 9
factores, tais como temperatura, concentração de enzima, e o teor de ácido. Portanto,
inicialmente, estes factores foram estudados na reacção de transesterificação de óleo de soja Novozym 435 12.2 24.2 35 50 73

com etanol catalisada por cada uma das lipases comerciais seleccionados imobilizada Lipozyme RM IM 3,4 21,5 32 50,7 51,1
(Novozym 435, RM Lipozyme IM e Lipozyme TL IM). O etanol foi escolhido para ser o álcool
Lipozyme TL IM 2 19 50 50 48
utilizado na reação devido à sua produção em larga escala no Brasil, e sua produção a partir
As condições reaccionais: razão molar etanol / óleo de soja de 3, etanol adicionado, em três passos (1/3 a
de fontes renováveis. Além disso, o etanol tem um efeito inibidor baixo sobre a actividade
0 min, depois 03/01 e 03/01 30 min após 60 min).
biocatalisador de metanol.

Efeito de acidez do petróleo

Efeito da temperatura sobre a stese de biodiesel A influência do teor de ácido na síntese enzimática de biodiesel foi estudada a 50 ° C
A síntese de biodiesel utilizando óleo de soja refinado foi investigada em 40, 50, 60, usando 5 p.% De lipase (Novozym 435, RM Lipozyme IM e Lipozyme TL IM). Os
70 e 78 ° C. Os resultados são resumidos na Tabela 1. resultados são apresentados na Tabela 3.

Tabela 1. O teor de éster (p.%) após 240 minutos de reacção de transesterificação entre o óleo de Tabela 3. O teor de éster (p.%) após 240 minutos de reacção de transesterificação entre o óleo de

soja refinado (AV = 0,5) e etanol soja e ácido de etanol, a 50 ° C

Temperatura (° C) Valor ácido

lipase lipase
40 50 60 70 78 0,5 8,5 50 90

Novozym 435 34 35 40 60 39 Novozym 435 32 35 39 43

Lipozyme RM IM 39 31 29 27 22 Lipozyme RM IM 31 32,2 52 46,9

Lipozyme TL IM 50 52 40 30 30 Lipozyme TL IM 50 48 36 32

As condições reaccionais:. 5% em peso de lipase comercial, etanol / soja razão molar de óleo 3, etanol As condições reaccionais:. 5% em peso de lipase comercial, etanol / soja razão molar de óleo 3, etanol
adicionado, em três passos (de 1/3 a 0 min, depois 03/01 e 03/01 30 min após 60 min). adicionado, em três passos (de 1/3 a 0 min, depois 03/01 e 03/01 30 min após 60 min).

Os ésteres etílicos de ácidos gordos (FAEE) concentração aumentou com o aumento
da temperatura de reacção para as reacções catalisadas por Novozym 435 até 70 ° C. Em
contraste, quando Lipozyme TL IM foi usado, o conteúdo de biodiesel diminuiu
significativamente com o aumento da temperatura acima de 50 ° C. Com Lipozyme IM RM,
uma ligeira diminuição no teor de éster de etilo foi observada a temperaturas superiores a 40 °
C. As diferenças entre estas lipases comerciais pode ser explicado considerando que a
sensibilidade de uma enzima para a desnaturação térmica pode variar com diversos factores
(pH, solventes, substratos, produtos, etc) e pode ser diferente de uma proteína para outra. 14
De modo a evitar a desnaturação das lipases Lipozyme IM RM e Lipozyme TL
IM, as expericias subsequentes foram realizados a 50 ° C.
Influência da concentração de enzima
O teor de éster usando concentração de enzima de 1 a 9 em peso.% Após 240 minutos é
apresentada na Tabela 2. O FAEE aumentou à medida que a quantidade de lipase
aumentou-se a 7 wt.%, Acima de que a concentração de éster de etilo do permaneceu
praticamente constante para as reacções realizada com Lipozyme RM IM e TL IM. Conforme
relatado na literatura, 15,16
Como pode ser visto na Tabela 3, o biodiesel foi produzido a partir dos óleos de ácido com
todos os biocatalisadores. Matassoli et al. 17 Estudou síntese de biodiesel por meio de alcoólise de
óleo de palma (AV = 6,2) e verificado apenas 3,5% de teor de éster utilizando um peso.% de
hidróxido de potássio. Portanto, os resultados obtidos por síntese enzimática de biodiesel a partir
de óleos de ácido resultou em maior produção de ésteres do que observados para o processo
alkalinecatalyzed.
Lipozyme TL IM apresenta o mais elevado teor de éster (perto de 50%) de óleo de soja
com AV até 8,5, mas para o ácido superior eleva o conteúdo FAEE diminuiu continuamente.
Esses resultados refletem a maior atividade de transesterificação (3.898 U g- 1) deste
biocatalisador associada com a sua actividade de esterificação menor (688 L g- 1).
Novozym 435 tem alta tolerância à acidez do óleo. Um ligeiro aumento no teor de
éster de (32-43%) foi observado com o aumento do teor de ácido oleico em óleo, o que
pode ser explicado pela sua alta esterificação (3,876 L g- 1) e transesterificação (3.202 U g- 1)
atividade. É importante destacar que a Novozym 435 é muito estável na presença de alto
teor de álcoois de baixo peso molecular, como o etanol. 18,19 Assim, o Novozym 435 pode
ser uma boa biocatalisador para a stese de biodiesel utilizando óleo de soja com elevado
AV, porque esta síntese é levada a cabo na presença de um grande excesso de etanol. 20-22

este efeito pode ser explicado pela formação de agregados do biocatalisador, o que limita os

processos de transferência de massa.
No entanto, na reacção empregando Novozym 435 o mais elevado teor de éster (73%)
foi alcançado com 9% em peso, e a velocidade inicial de formação do produto foi
directamente proporcional à Novozym 435 de concentração na gama estudada. (1-9% em
peso). (resultados não mostrados).
O maior teor de éster (52%) foi verificada na reacção com o óleo de soja com um
valor ácido de 50 utilizando Lipozyme IM RM. Na verdade, a literatura relata que Lipozyme
RM IM apresenta atividade esterificação alta e alta estabilidade em meio anidro. O
conteúdo FAEE diminuição quando o valor de ácido de óleo de ácido é de 90,
provavelmente devido à
Vol. 41, N ° 3 síntese enzimática de biodiesel a partir de óleo de ácido utilizando uma mistura de lipase 287

aumentar em teor de água, devido à reacção dos ácidos gordos livres com etanol. A água é
produzido durante a reacção de esterificação e deve ser removida para deslocar o equilíbrio
químico para os produtos. Além disso, a elevada concentração de água na reacção de
transesterificação catalizada por RM Lipozyme IM poderia levou a hidrólise do éster
formado. 23

O efeito negativo de água foi verificada por Li et al. 9 na metanólise de resíduos e de

óleo de colza refinado. O rendimento do éster metílico final (ME) de óleo de resíduos (AV =
135) foi muito menor do que a de óleo refinado (AV = 3,5). O rendimento final obtido ME na
presença de peneiros moleculares para o meio de reacção de resíduos de óleo foi tão
elevada quanto a obtida com óleo refinado.

Desde Novozym 435 apresentaram maior desempenho catalítico a 70 ° C (Tabela 1), as

experiências foram também realizadas a esta temperatura com óleo de soja de ácido e os
resultados são apresentados na Tabela 4. O teor de éster diminuiu com o aumento do valor de
ácido nas reacções realizadas para fora a 70 ° C: 44%, 41% e 28% para os óleos com valores
de ácido de 8,5, 50, e 90, respectivamente. Provavelmente, o aumento de temperatura
associado com o aumento de etanol (reagente hidrofílico) quantidade no meio de reacção,
devido ao alto teor de ácido, resultou numa diminuição da estabilidade da enzima. De acordo
com estes resultados, o uso de misturas de lipases comerciais imobilizadas para a stese de
biodiesel a partir de óleos de ácido foi estudada a 50 ° C.

Tabela 4. O teor de éster (p.%) após 240 minutos de reacção de transesterificação entre o óleo de

soja e ácido de etanol, a 70 ° C

Valor ácido
biocatalisador
0,5 8,5 50 90

Novozym 435 60 44 41 28

As condições reaccionais:. 5% em peso de lipase comercial, etanol / soja razão molar de óleo 3, etanol
adicionado, em três passos (de 1/3 a 0 min, depois 03/01 e 03/01 30 min após 60 min).

Os valores do ácido também foram determinados na síntese enzimática de biodiesel a

partir de óleo de ácido. Pode ser visto na Figura 1a que Novozym 435 convertido quase todos
FFA em éster etílico após 240 min. Um perfil semelhante foi observado nas reacções catalisadas
por RM Lipozyme IM usando óleo de soja com um valor ácido de 8,5 e 50 (Figura 1b). A
conversão mais elevada do que 75% foi obtido utilizando o óleo com AV = 90 e 5 em peso.% De
RM Lipozyme IM. Como esperado, considerando a baixa actividade de esterificação de Lipozyme
TL IM, o índice de acidez não fizeram muito significativamente para todos testados ácido óleo
(Figura 1c).

Síntese de biodiesel utilizando misturas de lipases comerciais

Imobilizados

Um óleo de soja típico é composto de 2,3 - ácido palmítico 11%,

2,4-6% de ácido esteárico, 23,5-31% de ácido oleico, 49-51,5% de ácido linoleico, 2- 10,5% de ácido

linolénico. 24 Esta diversidade de ácidos gordos de alquilo poderiam afectar a actividade da enzima.

As lipases obtidas a partir de microrganismos diferentes podem exibir diferentes selectividades e

actividades, de modo que a utilização combinada de duas lipases imobilizadas na reacção de

transesterificação de óleo de soja foi investigado tentando diminuir o custo do catalisador e

aumentar o rendimento de biodiesel.

Figura 1. O valor ácido (mg de KOH g- 1 de óleo) na reacção de transesterificação de óleo de soja

Inicialmente, para explorar a possibilidade de efeito sinérgico, Lipozyme IM RM e utilizando ácido (AV de 8,5, 50 e 90) durante 240 min. As condições de reacção:. 5% em peso de lipase,

Lipozyme TL IM foram misturados em baixas concentrações e em diferentes tempos de etanol rácio / óleo de soja molar de 3, de ácido oleico / razão molar etanol de 1, etanol adicionado, em

reacção. Estas lipases são menos caros do que Novozym 435 e sua combinação pode três passos (de 1/3 a 0 min, depois 30 min 1/3 e 1 / 3 depois de 60 min), a 50 ºC. (A) Novozym 435; (B)

representar um biocatalisador de custos mais eficiente e mais baixo. O uso de uma quantidade Lipozyme IM RM; (C) Lipozyme TL IM

menor de biocatalisador (3 wt.%) Nestas experiências visa prevenir o nivelamento efeito que
pode ser observado quando as conversões mais elevadas foram obtidas. O decurso de tempo
para a transesterificação de óleo de soja catalisado por lipases combinados puros ou é
apresentada na Figura 2.
As enzimas foram adicionadas no início e / ou depois de 30 minutos de reacção, em
uma concentração de 1,5 p.%. As experiências de controlo utilizando 3 wt.% de lipase
(Lipozyme TL IM ou Lipozyme IM RM) foram
288
Figura 2. O teor de éster (p.%) na reacção de transesterificação entre o óleo de soja e etanol,
utilizando etanol / soja razão molar de óleo 3, etanol adicionado, em três passos (de 1/3 a 0 min,
03/01 após 30 min e após 1/3 60 min) a 50 ° C (a) 1,5% em peso Lipozyme IM RM e 1,5% em peso
Lipozyme TL IM em t = 0 min..; (B) 1,5% em peso Lipozyme IM RM em t = 0 min e 1,5% em peso
Lipozyme TL IM em t = 30 min..; (C) 1,5% em peso Lipozyme TL IM em t = 0 min h e 1,5% em peso
Lipozyme IM RM em t = 30 min..; (D) 3,0% em peso Lipozyme TL IM em t = 0 min.; (E) 3.0 wt.%
Lipozyme IM RM em t = 0 min
realizado para avaliar a influência da mistura de Lipozyme TL IM (1,5% pt.) e Lipozyme IM
RM (1,5 wt.%) na quantidade do éster produzido. Claramente, a mistura de lipases deu os
melhores resultados. Todas as experiências levadas a cabo com o uso combinado de
lipases resultou num aumento em ésteres etílicos de conteúdo principalmente após 180
minutos de reacção, mas a adição de preparações de enzimas em diferentes tempos de
reacção (a 0 ou 30 minutos) e a ordem de adição de lipase não fez resultar em uma
diferença significativa no teor de éster após 240 min. Estas enzimas são reconhecidos
como lipases específicos de 1,3, mas as suas especificidades de ácidos gordos não são
iguais 5 e poderia justificar o aumento do teor de ésteres. A mistura de Lipozyme TL IM e
Lipozyme RM IM, adicionados no início da reacção (Figura 2A), resultou em um aumento
de 75% no teor de éster após 240 min, quando comparado com o valor obtido com 3 wt.%
De Lipozyme TL IM.
Rodrigues e Ayub 5 observou-se que a mistura de Lipozyme IM RM e Lipozyme TL
IM deu melhores resultados para a transesterificação de óleo de soja, produzindo perto
de 10% mais do que o biodiesel Lipozyme TL IM e 50% mais do que RM Lipozyme IM.
Ibrahim et al. 6 também observaram um efeito sinergético para a Lipozyme TL IM - RM IM
sistema dual no interesterificação de estearina de palma e óleo de coco.
Uma outra experiência foi realizada utilizando-se diferentes quantidades de
Lipozyme TL IM (2, 4 e 6 em peso.%) E o mesmo conteúdo de Lipozyme RM IM (1 wt.%),
Em comparação com reacções catalisada por lipase individuais (3, 5, e 7 wt.%). Os
resultados na Figura 3 indicou um efeito sinergético positivo para combinações de lipase,
que depende da quantidade de lipase. O uso da enzima combinada resultou em maior
quantidade de éster produzido quando a quantidade total de lipases era inferior a 7 wt.%.
Ibrahim et al. 6 demonstraram que uma interacção positiva entre duas lipases mistos nem
sempre acontece. De acordo com estes autores, o efeito interactivo difere para diferentes
combinações de lipase e proporções de mistura, e algumas experiências com misturas de
diferentes lipases mostrou um efeito antergic. 6
Tendo em conta estes resultados, a síntese enzimática de biodiesel a partir de óleo de
ácido utilizando uma mistura de lipases em uma concentração total de 7 em peso.% Foi mais
investigada. De acordo com os resultados apresentados na Tabela 2 e Figura 3, uma
quantidade de Lipozyme TL IM IM e RM superior a 7 wt.% Não resultou em maior teor de
éster.
Pedro et al. Quim. Nova
Figura 3. O teor de éster (p.%) depois de 4 h de reacção de transesterificação entre o óleo de soja e etanol,
utilizando etanol / soja razão molar de óleo 3, etanol adicionado, em três passos (de 1/3 a 0 h, 1/3 após 0,5
h e 1 / 3 após 1 h) a 50 ° C (a) 3% em peso de lipase:... 3% em peso Lipozyme RL MI, 3% em peso
Lipozyme TL IM, e mistura com 1% em peso Lipozyme RM IM e 2 em peso Lipozyme%.. TL IM (B) 5% em
peso de lipase:..... 5% em peso Lipozyme RL MI, 5% em peso Lipozyme TL IM, e mistura com 1% em peso
Lipozyme RM IM e 4% em peso Lipozyme TL IM (C) 7 wt .% lipase: 7% em peso de RL Lipozyme IM, 7%
em peso Lipozyme TL IM, e mistura com 1% em peso Lipozyme IM RM e 6% em peso Lipozyme TL IM....
Assim, as experiências com óleo de ácido foram realizados adicionando 5 wt.% Do
primeiro lipase no início da reacção. A segunda lipase foi adicionado após 240 min. Uma
experiência de controlo foi feita a adição de mais de 2 p.% Da lipase inicial após 240 min,
considerando que a inactivação da enzima pode ocorrer ao longo da reacção e que o
aumento da quantidade de catalisador pode promover um aumento na produção de ésteres
etílicos. O curso de tempo de transesterificação enzimática de óleo de ácido com uma
mistura de lipase foi mostrado nas Figuras 4-6.
Pode ser notado que a adição de enzima após 240 minutos o aumento da síntese
FAEE em todas as experiências. Além disso, este efeito é mais significativa para a
mistura de lipases. O máximo efeito sinérgico foi conseguida com o uso combinado de
Lipozyme TL IM e Novozym 435 na reacção de transesterificação de óleo de soja com o
ácido AV = 50 e 90 (Figuras 5c, 6a, 6c). Um aumento significativo no teor de éster, após
330 minutos, foi observada nessas reacções.
Como observado por vários autores, 4-9 uma mistura de dois ou mais lipases podem contribuir
para aumentar o rendimento em éster de produção de biodiesel. Este aumento pode ser explicado
por as diferentes especificidades de cada lipase e diferentes substratos presentes no óleo de soja.
O rendimento teórico mais elevada utilizando lipase com especificidade 1,3-posicional deve ser
67%. Rendimento superior a 67% pode ser devido a migração de acilo a partir da
sn- 2 posição para o sn- 1,3 posição que ocorre durante a reacção. O uso de uma lipase
não-específica pode catalisar a transesterificação de 2-monoglicérido para dar ácido
gordo de éster de etilo e glicerol.
Huang et al. 4 observou-se que durante os primeiros 0,5 h, a taxa de reacção da
reacção de transesterificação de óleo de banha de porco com metanol catalisada por
lipases combinados (Lipozyme TL IM + Novozym 435) foi o mais rápido, seguido por
aqueles da Lipozyme TL IM e Novozym 435. Segundo os autores, este fenómeno pode ser
devido ao facto de se juntar uma lipase não específica (Novozym 435) e uma lipase
específica 1,3-(Lipozyme TL IM) podem acelerar a velocidade da reacção de
transesterificação em 1- e 3-locais e, entretanto eliminar a limitação da migração de acilo
em 2-local, que é considerado como sendo o passo da reacção de transesterificação
confinado.
Nas experiências levadas a cabo com óleo de ácido de AV = 8,5 (Figuras 4 a,
b, c), a maior taxa de reacção foi obtido com Lipozyme TL IM. O teor de éster era
de cerca de 30%, após 60 minutos,
Vol. 41, N ° 3 síntese enzimática de biodiesel a partir de óleo de ácido utilizando uma mistura de lipase 289

Figura 4. O teor de éster (p.%) na reacção de transesterificação entre o óleo de ácido de soja (AV = 8,5) Figura 5. O teor de éster (p.%) na reacção de transesterificação entre o óleo de ácido de soja (AV = 50) e

e etanol a 50 ºC. As condições de reacção: mistura de lipases comerciais (5% em peso de biocatalisador de etanol a 50 ºC. As condições de reacção: mistura de lipases comerciais (5% em peso de biocatalisador

uma adicionado no tempo zero e 2% em peso de biocatalisador 2 adicionado após 4 h de reacção..), uma adicionado no tempo zero e 2% em peso de biocatalisador 2 adicionado após 4 h de reacção..), etanol

etanol rácio / óleo de soja molar de 3, de ácido oleico / razão molar etanol de 1, etanol adicionado, em rácio / óleo de soja molar de 3, de ácido oleico / razão molar etanol de 1, etanol adicionado, em três passos

três passos (1/3 a 1/3 0 h, após 0,5 h e 1/3 após 1 h). Biocatalisador 1: (a) o Novozym 435, (b) RM (de 1/3 a 0 h, depois 03/01 0. 5 h e 1/3 após 1 h). Biocatalisador 1: (a) o Novozym 435, (b) RM Lipozyme

Lipozyme IM, (c) Lipozyme TL IM IM, (c) Lipozyme TL IM

usando Lipozyme TL IM enquanto que para Novozym 435 e Lipozyme IM RM foi de 13% e conteúdo (Figuras 5c, 6c) conteúdo FAEE diminuiu. Ele pode ser previsto, considerando que
20%, respectivamente. No entanto, o aumento do ácido Lipozyme TL IM tem a menor atividade de esterificação
290
Figura 6. O teor de éster (p.%) na reacção de transesterificação entre o óleo de ácido de soja (AV = 90) e
de etanol a 50 ºC. As condições de reacção: mistura de lipases comerciais (5% em peso de biocatalisador
uma adicionado no tempo zero e 2% em peso de biocatalisador 2 adicionado após 4 h de reacção..), etanol
rácio / óleo de soja molar de 3, de ácido oleico / razão molar etanol de 1, etanol adicionado, em três passos
(de 1/3 a 0 h, depois 03/01 0. 5 h e 1/3 após 1 h). Biocatalisador 1: (a) o Novozym 435, (b) RM Lipozyme
IM, (c) Lipozyme TL IM
em comparação com Novozym 435 e Lipozyme IM RM. Portanto, a adição de lipase
fresca com elevada actividade de esterificação, como
Pedro et al. Quim. Nova
RM Lipozyme IM e Novozym 435, após 240 minutos, síntese aumentada de biodiesel. Além
disso, o conteúdo de ésteres inferiores obtidos nas reacções realizadas com óleo de ácido
com AV = 90 pode estar relacionado com o efeito negativo da presença da água produzida
por esterificação FFAs. É bem conhecido que a actividade de água do meio de reacção é um
parâmetro importante, que influencia as taxas de reacção / rendimento em enzima catalisada
reacções em meios de baixa água. 25 Além disso, a quantidade de etanol mais elevada utilizada
nestas experiências também poderia causar inactivação enzimática.
Nas experiências apresentadas nas Figuras 4-6, que pode também ver que as reacções
de estéril icação são mais rápidos do que aqueles de transesterificação. 8 As taxas iniciais
observados nas reacções com alto teor de ácido (AV = 50 e 90) foram mais elevadas do que
as obtidas com AV = 8,5 usando Lipozyme IM RM e Novozym 435 (Figuras 4a, b) e as Figuras
5a, b). Li et al. 9 igualmente observado que a velocidade de reacção inicial de metanólise de
óleo de resíduos (AV = 135) catalisada por mistura de Lipozyme TL IM (3%) com Novozym
435 (1%) foi mais rápida do que a da metanólise de óleo refinado (AV = 3,5) devido ao teor de
FFAs alta.
CONCLUSÃO
lipases imobilizadas Lipozyme IM RM, Lipozyme TL IM e Novozym 435 foram usadas
para catalisar a stese de biodiesel a partir de óleo de soja, com diferentes níveis de acidez
(AV = 0,5, 8,5, 50 e 90). Todos os biocatalisadores testados foram activos para produção
foram obtidos de biodiesel e conteúdo de éster de perto de 50%, mesmo sem optimizar as
condições experimentais. conversão elevada de ácidos gordos foi obtida com Novozym
435 e Lipozyme IM RM. Portanto, as lipases imobilizadas comerciais podem ser usadas
para produzir biodiesel a partir de óleos de acidez elevados níveis que representam uma
matéria-prima mais barata do que os óleos vegetais refinados. Este processo tem potencial
para ser utilizado como uma pré-passo de transesterificação catalisada por alcalina. O uso
de misturas de lipases imobilizadas comerciais foi proposta a fim de garantir uma produção
de biodiesel eficaz e de custo eficiente de óleos de ácido. A mistura de Lipozyme TL IM e
Novozym 435 é a melhor opção de custo tendo em conta biocatalisador e rendimento de
biodiesel. A principal razão é o baixo custo de Lipozyme TL IM que é menos caro do que
Novozym 435.
AGRADECIMENTOS
Os autores gostariam de agradecer ao CNPq pelo apoio financeiro.
REFERÊNCIAS
1. Jegannathan, KR; Wang Ting, VF; Pogaku, R .; biomassa Bioenergia
2011, 35, 4221.
2. Aarthy, M .; Saravanan, P .; Gowthaman, MK; Rose, C .; Kamini, NR;
Chem. Eng. Res. Des. 2014, 92, 1591.
3. Shrestha, DS; Van Gerpen, J. Em Culturas e utilizações industriais; Singh, B.
P., ed .; CABI: Oxfordshire de 2010.
4. Huang, Y .; Zheng, H .; Yan, Y .; Appl. Biochem. Biotechnol. 2010, 160,
504.
5. Rodrigues, RC; Ayub, MAZ; Processo Biochem. 2011, 46, 682.
6. Ibrahim, NA; Guo, Z .; Xu, X .; Geléia. Óleo. Chem. Soc. 2008, 85, 37.
7. Lee, DH; Kim, JM; Shin HY; Kang, SW; Kim, SW; Biotechnol.
Bioprocessos Eng. de 2006, 11, 522.
8. Guan, F .; Peng, P .; Wang, L .; Yin, T .; Peng, Q .; Huang, J .; Guan, G .; Li,
Y .; Processo. Biochem. 2010, 45, 1677.
9. Li, L .; Du, W .; Liu, D .; Wang, L .; Li, Z .; J. Mol. Catal. B: Enzym. de 2006,
43, 58.
10. Banerjee, A .; Singh, V .; Solanki, K .; Mukherjee, J .; Gupta, MN;
Sustentar. Chem. processos 2013, 1, 1.
Vol. 41, N ° 3 síntese enzimática de biodiesel a partir de óleo de ácido utilizando uma mistura de lipase 291

11. Souza, MS; Aguieiras, ECG; Silva, MAP; Langone, MAP; 18. Rosset, IG; Tavares, MCH; Assaf, EM; Porto, ALM; Appl.
Appl. Biochem. Biotechnol. 2009, 154, 253. Catal., A 2011, 392, 136.
12. Langone, MAP; Sant'Anna, GL Jr .; Appl. Biochem. Biotechnol. 19. Rosset, IG; Tavares, MCH; Assaf, EM; Porto, ALM; Catal.
1999 77, 759. Lett. 2013, 143, 863.
13. Corrêa, INS; Souza, SL; Catran, M .; Bernardes, OL; Portilho, M. 20. Talukder, MMR; Wu, JC; Lau, SK; Cui, LC; Shimin, G .; Lim,
F .; Langone, MAP; Enzima Res. 2011, 1. UMA.; Energy Fuels 2009, 23, 1.

14. Bulcholz, K .; Kasche, V .; Bornscheuer, UT; Biocatálise e Enzyme
Tecnologia; Wiley-VCH: Weinheim de 2005.
15. Aguieiras, ECG; Caetano, CO; Bevilaqua, JV; Rosas, fazer; Silva,
MAPA; Langone, MAP; Enzima Res. 2011, 1.
16. Cerveró, JM; Alvarez, JR; Luque, S .; biomassa Bioenergia 2014, 61,
131.
17. Matassoli, ALF; Corrêa, INS; Portilho, MF; Caetano, C. O; Langone, MAP; Appl.
Biochem. Biotechnol. 2009, 155, 44.
21. Hernández-Martin, E .; Otero, C .; Bioresour. Technol. 2008, 99, 277.
22. Torres, CF; Hill, CG; Otero. C .; Biotechnol. Prog. 2004 20, 756.
23. Rodrigues RC; Fernandez-Lafuente, R .; J. Mol. Catal. B: Enzym.
2010, 66, 15.
24. Rinaldi, R .; Garcia, C .; Marciniuk, LL; Rossi, AV; Schuchardt, L .;
Quim. Nova 2007, 30, 1374.
25. Adlercreutz, P. Em Síntese Orgânica com enzimas em não aquosos
Meios de comunicação; Carrea, G., Riva, S., eds .; Wiley-VCH: Weinheim, 2008.

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