Avaliação Experimental Do Modelo Animal de Recaída Ao Uso de Drogas Cue-Induced

UNIVERSIDADE DE SÃO PAULO
INSTITUTO DE PSICOLOGIA
PÓS-GRADUAÇÃO EM PSICOLOGIA EXPERIMENTAL
FERNANDA LIBARDI GALESI
AVALIAÇÃO EXPERIMENTAL DO MODELO ANIMAL DE
RECAÍDA AO USO DE DROGAS CUE-INDUCED
São Paulo
2012
FERNANDA LIBARDI GALESI
Avaliação experimental do modelo animal de recaída ao uso de
drogas cue-induced
Projeto de Pesquisa para Exame Geral de

Qualificação apresentado junto ao Programa de
Pós-Graduação em Psicologia Experimental da
Universidade de São Paulo como parte dos
requisitos necessários à obtenção do título de
Doutor em Psicologia Experimental.
Área de concentração: Psicologia Experimental
Orientadora: Profa. Dra. Miriam Garcia Mijares
São Paulo
2012
2
RESUMO
A recaída ao uso de álcool é um dos principais obstáculos para o tratamento do adicto.

Um dos modelos animais mais utilizados para o estudo da recaída ao uso de álcool é o
cue-induced, que mimetiza como os estímulos ambientais (estímulo discriminativo e
reforçador condicionado) associados ao consumo de álcool podem influenciar na
recaída ao uso de álcool. Tem sido apontado que o estímulo olfativo, treinado como
discriminativo nesse modelo animal, não adquire controle sobre a resposta de procura
pelo álcool e, portanto, esse modelo pode não ser apropriado para o estudo do controle
de estímulos discriminativos sobre o uso de álcool. Porém, estabelecer o controle de
ambos os estímulos sobre a resposta de recaída é fundamental para a validade desse
modelo animal uma vez que o consumo de álcool em humanos se caracteriza pela
presença tanto de estímulos discriminativos quanto de reforçadores condicionados que
podem controlar em conjunto a resposta de procura e consumo do álcool. Outro
problema com o procedimento desse modelo animal é o fato dos testes serem realizados
em extinção. A extinção pode ser um evento estressante e a exposição a eventos
estressantes pode estar associado com à recaída ao uso de álcool. Se há alguma
exposição ao estresse nos testes é possível que os resultados obtidos utilizando-se esse
modelo animal sejam não apenas resultado do controle dos estímulos ambientais, mas
também da condição de extinção imposta durante os testes. Os principais objetivos
desse trabalho são avaliar experimentalmente e aprimorar o procedimento utilizado no
modelo animal de recaída ao uso de drogas cue-induced. Para atingir esse objetivo serão
realizados três experimentos. O primeiro experimento pretende verificar se o esquema
de reforço razão variável 5 (VR5) produz maior controle discriminativo do odor
utilizado no treino sobre a resposta de pressão à barra do que o esquema de reforço
contínuo (CRF). Nesse experimento serão utilizados dois grupos experimentais, um
grupo será submetido ao procedimento do modelo cue-induced sob o esquema de
reforço CRF e o outro grupo será submetido ao procedimento sob o esquema VR5. O
segundo experimento tem o objetivo avaliarprocedimentos experimentais que podem
evitar um possível sombreamento do reforçador condicionado sobre o estímulo
discriminativo na fase de treino desse modelo animal. Nesse experimento os estímulos
discriminativos e reforçadores condicionados serão treinados primeiramente sozinhos e
em seguida serão treinados ou em conjunto ou separadamente novamente. O terceiro
experimento tem como objetivo analisar a função do estresse em relação ás respostas
de reinstalação. Nesse experimento o nível de corticosterona no sangue dos animais será
comparado entre as diferentes fases experimentais. Além disso, será administrado em
um grupo de ratos durante a fase de teste o antagonista do receptor CRH1R Antalarmin
para verificar se o bloqueio da liberação do corticosterona previne a recaída ao uso de
álcool no modelo cue-induced.
Palavras-chave: modelo cue-induced, recaída, álcool, controle de estímulos, estresse.
3
SUMÁRIO
RESUMO ................................................................................................................ 3
LISTA DE TABELAS ............................................................................................ 4
LISTA DE FIGURAS ............................................................................................. 5
INTRODUÇÃO ...................................................................................................... 7
Modelo de estresse ...................................................................................... 9
Modelo cue-induced ................................................................................... 11
O modelo cue-induced e o estresse ............................................................. 15
MÉTODO GERAL ................................................................................................. 19
Sujeitos ....................................................................................................... 19
Drogas e soluções ....................................................................................... 19
Equipamentos ............................................................................................. 20
Procedimento .............................................................................................. 21
EXPERIMENTO 1 ................................................................................................. 23
Método ........................................................................................................ 23
Resultados ................................................................................................... 28
Discussão .................................................................................................... 31
EXPERIMENTO 2 ................................................................................................ 34
Método ....................................................................................................... 34
EXPERIMENTO 3 ................................................................................................ 41
Método ...................................................................................................... 41
REFERÊNCIAS ................................................................................................... 46
4
LISTA DE TABELAS
Tabela 1- Concentração e período de administração das soluções de etanol durante a
fase de auto-administração de etanol ............................................................................ 22
Tabela 2 - Combinações em que os estímulos serão apresentados nas sessões de treino
de cada grupo ............................................................................................................... 35
5
LISTA DE FIGURAS
Figura 1 – Ilustração do procedimento utilizado no treino para os dois grupos
experimentais. SD1 = estímulo discriminativo 1, R = resposta, VR5 = esquema de razão
variável 5, SR1 = reforçador primário 1, Sr1 = reforçador condicionado 1, SD2 =
estímulo discriminativo 2, CRF = esquema de reforçamento contínuo, SR2 = reforçador
primário 2, Sr2 = reforçador condicionado 2 ............................................................ 25
Figura 2 – Médias de consumo (± SEM) (g/kg) dos sujeitos das soluções de etanol ao
longo dos dias da fase de auto-administração de etanol. A concentração da solução
começou com 10% de etanol e 10% de sacarose (10E/10S) e a sacarose foi sendo
retirada da solução até a mesma passar a conter apenas 10% de etanol (10E) ............. 28
Figura 3 – Mediana do número de respostas dos sujeitos do grupo VR5 e do grupo CRF
ao longo das fases de treino e extinção ......................................................................... 29
Figura 4 – Média (± SEM) de respostas dos três últimos dias da fase de extinção (EXT)
e das sessões de testes em que o SD1 (odor de laranja) foi apresentado em conjunto
com Sr1 (luz), o SD2 (odor de erva-doce) foi apresentado em conjunto com Sr2 (som) e
das sessões em que esses estímulos foram apresentados separadamente. Houve
diferença significativa entre EXT e SD1/Sr1 (p = 0,001) e entre EXT e Sr1 (p = 0,001).
Também houve diferença significativa entre SD1/Sr1 e SD2/Sr2 (p = 0,019). As
sessões de teste estão representadas na ordem em que ocorreram ................................ 30
Figura 5 – Razão entre as taxas de respostas das sessões de teste e a média da taxa de
respostas dos últimos três dias de extinção (EXT) de ambos os grupos
experimentais................................................................................................................. 31
6
INTRODUÇÃO
De acordo com o Manual Diagnóstico e Estatístico de Transtornos Mentais – IV
(DSM-IV) a característica essencial da dependência de drogas é indicada por um padrão
de auto-administração repetida da droga e compreende sintomas como tolerância,
abstinência e uso compulsivo da droga. Comumente, esses sintomas causam grandes
prejuízos na vida do indivíduo que, apesar disso, não deixa de consumir a droga
(Associação Americana de Psiquiatria, 1994).
Dentre as drogas que podem causar adicção, uma das mais comuns e que pode
acarretar em grandes prejuízos na vida do usuário é o álcool (McKim, 2006). Segundo o
Centro Brasileiro de Informações sobre Drogas Psicotrópicas (CEBRID) o alcoolismo
chega a atingir cerca de 10% da população brasileira adulta, sendo considerado um
importante problema de saúde pública (http://www.cebrid.emp.br). Ainda de acordo
com o CEBRID um dos fatores agravantes na dependência de álcool é o fato desta
droga ser lícita e muitas vezes seu consumo ser incentivado, além de ser de fácil acesso
para a população (http://www.cebrid.emp.br).
Outro fator importante no alcoolismo é a retomada recorrente do consumo de
álcool (recaída) mesmo após a desintoxicação e a abstinência (Associação Americana
de Psiquiatria, 1994; Bachteler, Economidou, Danysz, Ciccocioppo, & Spanagel, 2005;
Epstein, Preston, Stewart, & Shaham, 2006; O'Brien, Childress, Ehrman, & Robbins,
1998; Woody, McLellan, & O'Brien, 1990; Zironi, Burattini, Aicardi, & Janak, 2006).
Alguns dos fatores centrais que levam à recaída ao uso de álcool são respostas
aprendidas – eliciadas e evocadas – por estímulos anteriormente associados ao seu
consumo. Quando o adicto é exposto a estes estímulos as respostas condicionadas são
eliciadas e inicia-se a fissura (descrito pelos usuários como “forte desejo de usar a
droga”). Como o desconforto causado pela fissura é, em geral, muito grande aumenta-se
7
a probabilidade do adicto emitir respostas que possam resultar na obtenção e consumo
do álcool. Portanto, entender o papel dos estímulos ambientais no consumo de álcool é
fundamental para que o tratamento do alcoolismo seja bem-sucedido.
Modelos animais de dependência de álcool têm sido criados com o objetivo de
entender algumas variáveis deste fenômeno. Os modelos animais têm sido muito
utilizados com a finalidade de reproduzir, em situações controladas de laboratório,
fenômenos análogos aos transtornos mentais em humanos1. O uso de modelos animais é
importante na medida em que permitem que as variáveis que determinam algumas
psicopatologias possam ser especificadas e isoladas.
Um bom modelo animal de psicopatologia requer que as contingências
específicas que mantém o comportamento em estudo controlem “desempenhos
específicos comuns ao homem e ao animal, de maneira que possamos reconhecer a
forma e a função do comportamento” (Guerra & Silva, 2002, p.234). Ou seja, deve
haver uma similaridade do processo básico que determina os comportamentos animal e
humano; e é esta similaridade que irá determinar a validade dos procedimentos
experimentais usados como modelos do comportamento humano no laboratório.
Willner (1991) propõe o uso de três critérios para avaliar a validade dos modelos
animais. O primeiro critério – chamado de validade nominal ou de face – postula que a
topografia da resposta que o animal deve emitir na situação de laboratório seja similar à
topografia da resposta que o ser humano apresenta na condição a ser mimetizada. O
segundo critério é a validade preditiva que estabelece que haja um isomorfismo
farmacológico, ou seja, que as manipulações farmacológicas que produzem alterações
no comportamento humano a ser modelado também produzam alterações no
1
O termo “transtorno mental” é utilizado aqui com base na nomenclatura do DSM-IV, porém não indica
que os modelos animais pretendem reproduzir a “ processos mentais” no laboratório.
8
comportamento dos animais. O terceiro e último critério – a validade de construto –
estabelece que deve haver similaridade entre o processo básico que determina os
comportamentos animal e humano.
Assim, para ser completo, um modelo animal ideal deve simular um transtorno
mental em sua etiologia, nos seus mecanismos fisiológicos, nos comportamentos típicos
(evocados e eliciados) apresentados por pessoas que tenham o transtorno, no tratamento
do transtorno e na prevenção (Silva, Guerra, & Alves, 2005).
Existem diversos modelos animais que utilizam ratos com a finalidade de
mimetizar aspectos da dependência de álcool (Silva, 2003). Mais especificamente,
quando aborda-se a recaída ao uso de álcool existem dois modelos animais amplamente
utilizados: o modelo cue-induced e o modelo de estresse (Epstein & Preston, 2003;
Sanchis-Segura & Spanagel, 2006), que serão descritos a seguir.
Modelo de estresse
O modelo animal de recaída pelo estresse tem como principal objetivo
mimetizar o papel da exposição a eventos estressantes na recaída ao uso de álcool.
Nesse modelo os animais primeiramente passam por um treino onde aprendem a
pressionar a barra da caixa operante e tem como consequência a liberação da solução de
álcool. Em seguida passam por uma fase de extinção da resposta de pressão à barra e,
posteriormente, os animais são expostos a um evento estressante (em geral, choque na
pata). Após a exposição ao evento estressante, observa-se que os animais voltam a
emitir as respostas de pressão à barra, apesar delas já não terem mais como
consequência a solução de álcool. Essas respostas são consideradas respostas de procura
pelo álcool e indicativas de que a exposição ao evento estressante levou a recaída (Liu
& Weiss, 2003; Mason, Shaham, Weiss, & Le, 2009; Sanchis-Segura & Spanagel,
2006).
9
Marcadores fisiológicos de estresse são frequentemente analisados pelas
pesquisas que estudam a recaída de drogas por estresse. Em ratos, o estresse é medido
pela habilidade de alguns estímulos de ativarem o eixo hipotálamo-pituitária-adrenal
(HPA) . Quando ativado, o eixo HPA libera o hormônio liberador de corticotropina
(CRH) que estimula a adrenohipófise onde será liberado o hormônio
adrenocorticotrófico (ACTH). Por sua vez, o ACTH estimula o córtex adrenal que
responde liberando a corticosterona, um hormônio glicocorticóide diabetogênico e
imunossupressor ligado a respostas de estresse. Os níveis de corticoesterona no sangue
são usualmente considerados como marcadores confiáveis do estresse eliciado por
condições ambientais (Ciccocioppo et al., 2009; Kawasakit & Iwasaki, 1997; Touma,
Palme, & Sachsera, 2004).
Existem vários dados que ligam o eixo HPA e, consequentemente, o CRH e a
corticosterona à dependência de álcool. Por exemplo, ratos Marchigian Sardinian
alcohol-preferring (msP) são ratos que foram geneticamente selecionados pela
preferência por álcool, porem, Ciccocioppo et al., 2009; Economidou et al., 2008
verificaram que como resultado dessa seleção esses animais apresentam uma mutação
do gene que codificada a proteína CRH1R (receptor do CRH), fato que confere aos
animais uma alta sensibilidade ao estresse. Além disso, nesses ratos, o tratamento com
antagonistas seletivos de CRH1R como o Antalarmin atenuam a auto-administração de
etanol e a recaída à procura de álcool (Cippitelli et al., 2012). Segundo Economidou et
al., 2008 o alto consumo de álcool dos ratos msP é determinado por uma contingência
de reforço negativo: o álcool teria como efeito atenuar a sensibilidade ao estresse. O
autor ainda propõe que o consumo de de álcool por ratos de outras cepas, por exemplo
Wistar, é função de uma contingência de reforço positivo: o álcool teria como efeito a
ativação do “circuito do reforço” .
10
Tendo em vista esses dados, o hormônio liberador de corticotropina (CRH) tem
sido recentemente apontado por estudos pré-clínicos de farmacologia como um
candidato a novas medicações para o tratamento do alcoolismo (Ciccocioppo et al.,
2009; Lowery & Thiele, 2010).
Modelo cue-induced
O modelo animal de recaída cue-induced tem como objetivo mimetizar o papel
de estímulos ambientais na recaída ao uso de álcool. Neste modelo os animais são
submetidos a um treino discriminativo com dois componentes diferentes, cada um
apresentado em sessões experimentais distintas. Em um dos componentes, as respostas
de pressão à barra na presença de um estímulo discriminativo (SD1) têm como
consequência a apresentação de um reforçador condicionado (Sr1) e a liberação de uma
solução de álcool (SR1). No outro componente, pressões à barra na presença de outro
estímulo discriminativo (SD2) têm como consequência a apresentação de outro
reforçador condicionado (Sr2) e a liberação de água (SR2). Em seguida, é realizada a
fase de extinção, onde a resposta de pressão à barra é colocada em extinção na ausência
dos estímulos discriminativos e dos reforçadores condicionados. Após a fase de
extinção os animais são submetidos à fase de teste na qual as condições da fase de treino
são reintroduzidas em extinção, ou seja, as respostas de pressão à barra na presença do
SD1 têm como consequência a apresentação do Sr1 e as respostas de pressão à barra na
presença do SD2 têm como consequência a apresentação do Sr2, porém os reforçadores
primários (álcool ou água) não são liberados. Nessa última fase, se os sujeitos voltarem
a responder na presença de SD1 e Sr1, mas não na presença de SD2 e Sr2, é
considerado que houve procura pela droga, ou seja, indicação de recaída induzida por
esses estímulos ambientais (Bachteler, et al., 2005; Ciccocioppo, Angeletti, & Weiss,
11
2001; Ciccocioppo, et al., 2004; Ciccocioppo, Lin, Martin-Fardon, & Weiss, 2003).
Apesar do modelo cue-induced ser um modelo animal amplamente utilizado
para o estudo do papel dos estímulos ambientais na recaída ao uso de álcool, seu
procedimento não diferencia o papel de cada um dos estímulos ambientais que são
associados com o álcool. Especificamente, não permite diferenciar se as respostas de
procura pelo álcool emitidas na fase de teste ocorrem em função do estímulo
discriminativo, do reforçador condicionado ou de ambos (Fuchs, Lasseter, Ramirez, &
Xie, 2009; Galesi, Silva, & Mijares, no prelo).
Para verificar o papel de cada estímulo ambiental utilizado no modelo animal
cue-induced separadamente Galesi, Silva e Mijares (no prelo) programaram um
experimento no qual ratos foram expostos a um treino discriminativo em que as
respostas de pressão à barra na presença de um odor de laranja (SD1) tinham como
consequência o acionamento de um estímulo luminoso (Sr1) e liberação de etanol
(SR1). Respostas na presença de um odor de erva-doce (SD2) tinham como
consequência o acionamento de um estímulo sonoro (Sr2) e a liberação de água (SR2).
Posteriormente, as respostas de pressão à barra foram extintas na ausência dos estímulos
utilizados no treino. Na fase de teste os SDs e Srs foram reintroduzidos, mas as
respostas de pressão à barra não foram seguidas por etanol ou água. Inicialmente, os
estímulos associados ao álcool (SD1/Sr1) e os estímulos associados à água (SD2/Sr2)
foram apresentados juntos em sessões distintas e em seguida cada um dos quatro
estímulos foi apresentado isoladamente em sessões separadas. Os resultados deste
experimento mostraram que apenas quando o estímulo luminoso (Sr1) estava presente
houve reinstalação da resposta de pressão à barra. Ou seja, o odor de laranja (SD1)
sozinho não mostrou controle discriminativo sobre a resposta de pressão à barra. Estes
resultados são importantes pois mostram que, ao contrário do previsto por alguns
12
autores (Bachteler, et al., 2005; Cannella, et al., 2009; Ciccocioppo, Angeletti, & Weiss,
2001; Ciccocioppo, et al., 2003; Ciccocioppo, et al., 2004), o modelo cue-induced pode
não ser apropriado para o estudo do controle de estímulos discriminativos sobre o uso
de álcool.
Galesi, Silva e Mijares (no prelo) levantaram a hipótese de que o esquema de
reforço contínuo (CRF) utilizado na fase de treino poderia ser uma das hipóteses a
explicar os resultados do seu experimento. Segundo as autoras, o esquema CRF
utilizado no experimento, e em outros experimentos que utilizam o modelo animal de
recaída ao uso de drogas cue- induced (Bachteler, et al., 2005; Ciccocioppo, Angeletti
& Weiss, 2001; Ciccocioppo, et al., 2003; Ciccocioppo, et al., 2004; Ciccocioppo,
Martin-Fardon, & Weiss, 2002; Williams & Schimmel, 2008), poderia ter dificultado o
estabelecimento da função discriminativa dos odores. Isto porque, segundo Jenkins
(1965), o CRF é uma contingência de reforço que facilita o controle pela consequência
por não favorecer que o sujeito atente para o estímulo antecedente à resposta. De acordo
com o mesmo autor, é por esse motivo que seu uso em treinos discriminativos é
frequentemente evitado. Fundamentadas na proposta de Jenkins (1965), Galesi, Silva e
Mijares (no prelo) propuseram que o treino da resposta de pressão à barra sob o
esquema CRF favoreceu o controle da resposta pelos estímulos que eram consequência
desta (i.e reforçador condicionado e primário) e não dos estímulos que a antecediam (i.e
estímulos discriminativos).
Galesi, Silva e Mijares (no prelo) também argumentaram que o procedimento de
treino intra-sessão e entre-sessões utilizado no seu experimento, e em outros
experimentos que usaram o modelo de recaída cue-induced (Bachteler, et al., 2005;
Ciccocioppo, Angeletti, & Weiss, 2001; Ciccocioppo, et al., & Weiss, 2003;
Ciccocioppo, et al., 2004), poderia ser outra variável explicativa dos seus resultados. No
13
procedimento de treino discriminativo do modelo cue-induced os dois estímulos
discriminativos utilizados são apresentados em sessões distintas, ou seja, é realizada
uma discriminação sucessiva. Sabe-se que a discriminação sucessiva é mais difícil de
ser aprendida do que a discriminação simultânea (Catania, 1999; Matos, 1981); além de
haver o agravante da diferença de 24h entre a apresentação de um estímulo e do outro.
Assim, as autoras argumentam que a apresentação em sessões separadas e a longa
duração da apresentação do SD em cada sessão (que fica presente durante toda a
sessão), foram fatores que podem ter dificultado o estabelecimento do odor como
estímulos discriminativo.
Katner, Magalong e Weiss (1999) e Katner e Weiss (1999) obtiveram controle
discriminativo de odores da resposta de pressão à barra em ratos submetidos a um
procedimento de treino similar ao usado no experimento de Galesi, Silva e Mijares (no
prelo), mas sem a manipulação experimental de reforçadores condicionados. Portanto, é
possível supor que o uso do reforçador condicionado e não apenas o tipo de treino é a
principal variável que deve ser considerada para explicar os resultados obtidos por
Galesi, Silva e Mijares. Em outras palavras, a apresentação do reforçador condicionado
durante o treino pode ter interferido no estabelecimento do estímulo olfativo como
discriminativo.
Ainda, Galesi, Silva e Mijares (no prelo) discutiram que o desempenho
observado nas sessões de reinstalação do experimento pode ter sido decorrente de uma
cadeia de respostas estabelecida pelo treino. Nessa cadeia, as respostas de pressão à
barra eram seguidas da apresentação do reforçador condicionado, que pode ter adquirido
a função de estímulo discriminativo para respostas de aproximação ao bebedouro, cuja
consequência era o consumo de etanol ou de água. Portanto, o estímulo olfativo, por
ficar presente durante toda a sessão experimental, pode não ter sido um evento
14
ambiental relevante da cadeia. Por sua vez, o reforçador condicionado foi parte
essencial da cadeia pois as respostas de aproximação ao bebedouro consequenciadas
pela liberação de etanol ou água apenas na presença dos reforçadores condicionados.
Em resumo, os resultados alcançados por Galesi, Silva e Mijares (no prelo)
replicaram os dados obtidos com o modelo animal cue-induced, porém, sugerem que a
reinstalação da resposta de pressão à barra pode ser função do reforçador condicionado
e não do controle discriminativo estabelecido no treino.
Dessa forma, faz-se necessária a realização de novos experimentos que
manipulem, por exemplo, o esquema de reforço utilizado, o treino discriminativo, a
modalidade de estímulos utilizados, entre outras variáveis. Tal empreitada é
fundamental para o desenvolvimento de um modelo animal com uma melhor validade
experimental.
O modelo cue-induced e o estresse
É possível identificar pelo menos uma variável relevante do procedimento do
modelo cue-induced que frequentemente não é considerada nas pesquisas sobre recaída
ao uso do álcool: o estresse produzido pela situação de extinção da fase de testes. Como
mencionado, nos testes de reinstalação desse modelo as respostas são emitidas sob uma
condição de extinção (i.e. o etanol não é liberado como consequência das respostas de
pressão à barra).
É bem estabelecido que a remoção ou até mesmo a redução de reforçadores
apetitivos resultam em aumento de estresse quando medido pela concentração de
corticosterona no plasma (Coover, Goldman, & Levine, 1971; Kawasakit & Iwasaki,
1997). Na literatura comportamental, por outro lado, a condição de extinção tem sido
caracterizada por alguns autores como uma situação de “frustração”, associada muitas
vezes a episódios de agressão e considerado como uma situação aversiva para o animal
15
(Azrin, Hutchinson, & Hake, 1966; Rilling & Caplan, 1973). Portanto, tanto as medidas
fisiológicas quanto as comportamentais sugerem que os procedimentos de extinção
podem ser considerados situações estressantes (Amsel, 1992; Fallon, 1971; Wagner,
1963).
Considerar a condição de extinção como um evento estressante levanta a
possibilidade de que as respostas emitidas durante a fase de reinstalação do modelo cue-
induced sejam função da interação entre os estímulos ambientais (i.e estímulos
discriminativos e reforçadores condicionados) e o estresse produzido pelo próprio
procedimento. Em outras palavras, é possível que o estresse ocasionado pela condição
de extinção seja uma variável a ser considerada quando se estuda o controle dos
estímulos ambientais sobre a recaída de drogas pelo modelo cue-induced.
Tendo em vista os levantamentos aqui realizados acerca de alguns problemas de
procedimento relacionados ao modelo animal cue-induced, esse trabalho tem como
objetivo principal avaliar experimentalmente e aprimorar o procedimento desse modelo.
Como objetivos específicos é proposto:
1. Estabelecer o controle da resposta de auto-administração e de recaída por
álcool tanto pelo estímulo discriminativo, quanto pelo reforçador
condicionado. Justifica-se o objetivo pela importância de se contar com um
modelo que permita estabelecer o controle de ambos os estímulos sobre a
resposta de recaída, pois o consumo de álcool por humanos se caracteriza
pela presença tanto de estímulos discriminativos quanto de reforçadores
condicionados que podem interagir no controle da resposta de procura e
consumo do álcool.
2. Estudar o efeito da extinção, como evento estressante, sobre a resposta de
reinstalação emitidas na fase de teste do modelo cue-induced modelo. Os
16
resultados obtidos nessa fase são sempre atribuídos ao controle dos estímulos
ambientais que anteriormente foram associados ao consumo de álcool
(Bachteler, et al., 2005; Cannella, et al., 2009; Ciccocioppo, Angeletti, &
Weiss, 2001; Ciccocioppo, et al., 2003; Ciccocioppo, et al., 2004; Sanchis-
Segura & Spanagel, 2006). Se as respostas emitidas nessa fase forem
também função da exposição a um evento estressante, a explicação causal
desse modelo deverá ser mudada e as interações entre o estresse produzido
pelo procedimento e o controle dos estímulos ambientais deverão ser
consideradas na análise dos desempenhos produzidos pelo modelo. Além
disso, se há a influência do estresse nessas respostas, medicamentos que
diminuem a recaída ao uso de álcool no modelo de estresse também deverão
diminuir a recaída ao uso de álcool no modelo cue-induced.
Para se alcançar os objetivos específicos serão realizados três
experimentos. No primeiro experimento será verificado se o esquema de reforço VR5
produz maior controle discriminativo dos odores utilizados no treino sobre a resposta de
pressão à barra do que o esquema de reforço contínuo utilizado por Galesi, Silva e
Mijares (no prelo). No segundo experimento serão testados dois procedimentos
experimentais que podem evitar o possível sombreamento do reforçador condicionado
sobre o estímulo discriminativo observado em Galesi et al (in press). No terceiro e
último experimento será estudado o estresse produzido pela condição de teste do
modelo cue-induced e sua função como variável independente das respostas de
reinstalação. Como marcador fisiológico da resposta ao estresse será medida a
corticoesterona no sangue dos animais em várias fases do experimento. Ainda, para
avaliar a função do estresse na relação entre os estímulos ambientais e a resposta de
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reinstalação será administrado Antalarmin -antagonista do receptor CRH1R que
bloqueia a liberação de CRH e, consequentemente, de corticoesterona.
Os três experimentos constarão de cinco fases: auto-administração de álcool,
modelagem, treino, extinção e teste de reinstalação. Os aspectos do método comuns a
todos os experimentos serão primeiro apresentados no método geral do estudo, seguidos
da descrição do método específico de cada experimento2.
MÉTODO GERAL
Sujeitos
Serão utilizados 20 ratos da cepa Wistar provenientes do biotério do Instituto
Butantan (Experimento 1), 36 ratos da cepa Lewis provenientes do biotério do CEMIB-
UNICAMP (Experimento 2) e 30 ratos da cepa Marchigian Sardinian3 (msP)
provenientes do biotério da faculdade de farmácia da Universidade de Camerino
(Experimento 3).
Os animais serão mantidos isolados em gaiolas-viveiro em uma sala com o ciclo
claro/escuro invertido 12:12 (luzes apagadas às 20h), com temperatura entre 20 a 22°C
e humidade entre 45 a 55%. Os ratos terão livre acesso a comida e água exceto quando
descrito no procedimento.
Todos os procedimentos serão conduzidos em aderência com as normas do
Comitê de Ética de Pesquisa com Animais da Universidade de São Paulo e, no caso do
Experimento 3, das entidades europeias European Community Council Directive for
Care and Use of Laboratory Animals e National Institutes of Health Guide for the Care
and Use of Laboratory Animals.
2
A descrição do Experimento 1 incluirá também a apresentação dos resultados e discussão.
3
A cepa de ratos Lewis será utilizada pois dados da literatura (Files, Samson, & Denning, 1997) apontam
que o álcool se estabelece facilmente como reforçador positivo para ratos dessa cepa; e a cepa msP será
usada pois essa é uma cepa de ratos geneticamente selecionados para consumirem álcool amplamente
utilizada na Universidade de Camerino.
18
Drogas e Soluções
As soluções de álcool serão preparadas por diluição de álcool etílico (99,5% -
marca Synth) em água (volume/volume - v/v). As soluções de sacarose serão preparadas
por diluição de açúcar de mesa em água (peso/volume - w/v).
No experimento 3 será utilizado o antagonista do receptor CRH-R1 antalarmin
(N-butyl-N-ethyl-[2,5,6-trimethyl-7-(2,4,6-trimethylphenyl)7Hpyrrolo[2,3d]pyrimidin4-
yl]-amine) que será suspenso em um veículo composto por 10% Tween 80 e água
destilada (Cippitelli et al., 2012) e será injetado intraperitonialmente (i.p.) na dose de 20
mg/kg em um volume de 1 ml/kg.
Estímulos
Estímulos discriminativos. Serão utilizados dois estímulos olfativos para o
treino discriminativo: extrato de laranja (S1) e extrato de erva-doce (S2). Nas sessões de
treino e de teste de reinstalação em que serão apresentados esses estímulos, serão
depositadas cinco gotas dos respectivos extratos (laranja ou erva-doce) na serragem da
bandeja das caixas operantes de cada sujeito, antes do início da sessão.
Reforçadores Condicionados. Serão utilizados dois estímulos como reforçador
condicionado: luz (Sr1) e som (Sr2). As características dos reforçadores condicionados
são detalhadas na descrição dos equipamentos.
Equipamentos
Auto-administração
Na fase de auto-administração a solução de álcool será oferecida aos animais em
suas gaiolas-viveiro em tubos de bebidas graduados com um bico de aço inoxidável.
Caixas Operantes
Para os Experimentos 1 e 2 serão usadas caixas de condicionamento operante de
19
fabricação Med Associates de dimensões 32cm x 25cm x 21cm, separadas por caixas de
isolamento acústico. O bebedouro estará localizado no centro da parece frontal. Nesta
mesma parede serão colocadas duas barras de aproximadamente 5 cm de largura, a 8 cm
do chão. Uma das barras (barra direita) estará localizada a 3,5 cm do lado direito do
bebedouro e a outra (barra esquerda) a 3,5 cm do lado esquerdo. Na mesma parede do
bebedouro estarão localizados um estímulo luminoso de 1 W (luz), localizado a 7 cm
acima da barra esquerda, e um estímulos sonoro de 2900 Hz / 65 Db (som), localizado
atrás da parede a 6 cm acima da mesma barra.
Para o Experimento 3 também serão utilizadas caixas operantes fabricação Med
Associates separadas por caixas de isolamento acústico, porém a configuração das
caixas operantes será diferente. Cada caixa será equipada com um reservatório de
bebida (com capacidade para 0,30 ml) posicionado 4 cm abaixo do chão no centro do
painel frontal da caixa operante. Duas barras retráteis estarão localizadas 3 cm para a
direita e 3 cm para a esquerda do bebedouro. Uma bomba de infusão será ativa apenas
por respostas na barra esquerda (ativa), enquanto respostas na barra direita (inativa)
serão gravadas, mas não resultarão na ativação da bomba. Estímulos auditivos e visuais
serão apresentados via uma caixa de som (2900 Hz / 65 Db) e uma luz (1 W)
localizados no painel frontal.
O controle das sessões experimentais e o registro dos dados serão feitos pelo
programa MED-PC e um microcomputador conectado à interface da caixa em todos os
experimentos.
Procedimento
Como mencionado, todos os experimentos constarão de cinco fases
consecutivas: auto-administração de álcool, modelagem, treino, extinção e teste de
reinstalação.
20
Os procedimentos de modelagem e auto-administração serão similares em todos
os experimentos e serão descritos a seguir.
Auto-administração de etanol
A fase de auto-administração será iniciada após os sujeitos atingirem o peso
médio de 150 g. O objetivo desta fase é desenvolver a auto-administração voluntária de
álcool através da adaptação do procedimento utilizado por Burattini, Gill, Aicard e
Janak (2006). Conforme apresentado na Tabela 1, os animais terão livre acesso a
soluções de álcool nas suas gaiolas-viveiro por 23,5h/dia. Primeiramente, os animais
recebem uma solução contendo 10% de álcool e 10% de sacarose (10E/10S) por 14
dias. Em seguida, eles recebem uma solução contendo 10E/5S por sete dias. Então essa
solução é trocada por 10E/2S por sete dias e, finalmente, a solução é substituída por
uma solução de etanol a 10% (10E) por mais onze dias. Os sujeitos permanecem com
água e comida ad lib ao longo desta fase experimental. O consumo das soluções
oferecidas para cada rato será registrado diariamente.
Tabela 1 - Concentração e período de administração

das soluções de etanol durante a fase de auto-
administração de etanol.
Período Solução disponibilizada
2 semanas 10E/10S*
1 semana 10E/5S
1 semana 10E/2S
11 dias 10E
*10E/10S = o número representa a concentração da
solução e a letra E representa etanol e a letra S
representa sacarose. Nesse caso, lê-se solução de
10% de etanol e de 10% de sacarose.
Modelagem
Após o término da fase de auto-administração todos os animais serão privados
21
de água por 24 h e seguidamente serão iniciadas as sessões de modelagem. Na primeira
sessão de modelagem os sujeitos serão submetidos ao treino de pressão à barra esquerda
sob um esquema conjuntivo de reforçamento contínuo - tempo fixo (CRF-FT), com o
bebedouro sendo acionado a cada 5 s. Nas sessões seguintes de modelagem será
utilizado o esquema CRF e as sessões terminarão após os sujeitos pressionarem 100
vezes a barra da esquerda. Nessas sessões os animais permanecem com acesso restrito à
água por 1h ao dia. Tanto no esquema CRF-FT quanto no esquema CRF, cada resposta
terá como consequencia a liberação de 0,1 ml da solução de 10E.
EXPERIMENTO 1
O experimento visou verificar se o esquema de reforço utilizado por Galesi,
Silva e Mijares (no prelo) durante o treino discriminativo poderia ter dificultado que o
estímulo olfativo se tornasse um estímulo discriminativo para as respostas de pressão à
barra. Os dados desse estudo já foram coletados e, portanto, serão referidos no passado.
MÉTODO
Procedimento
As fases de auto-administração e de modelagem foram realizadas conforme
descrito no método geral.
Treino
No início desta fase os sujeitos foram divididos em dois grupos: grupo CRF
(n=10) e grupo VR5 (n=10). O critério para a divisão dos ratos nos dois grupos foi a
média de consumo de etanol dos últimos três dias da fase de auto-administração. Ou
seja, os sujeitos foram distribuídos nos dois grupos de forma que a média de consumo
22
de etanol dos sujeitos do grupo VR5 fosse similar à média de consumo dos sujeitos do
grupo CRF.
Antes do início do treino propriamente dito, os sujeitos do grupo VR5 foram
treinados a pressionar a barra sob razão fixa 2 (FR2) e em seguida para razão variável 5
(VR5). Foram realizadas 10 sessões no total: 5 sessões de FR2 e 5 sessões de VR5. Os
animais do grupo CRF permaneceram sob o esquema CRF em todas as 10 sessões.
Durante esse treino todos os animais permaneceram com o acesso restrito à água por 1h
e como consequência da resposta de pressão à barra era disponibilizado 0,1 ml da
solução de 10E.
Uma vez finalizadas as 10 sessões antes descritas foi iniciado o treino
propriamente dito. Os sujeitos do grupo VR5 (n=10) passaram por um treino sob o
esquema múltiplo de reforço mult VR5 VR5 e os sujeitos do grupo CRF (n=10)
passaram por um esquema múltiplo mult CRF CRF.
No primeiro componente do esquema múltiplo o odor de laranja foi utilizado
como estímulo discriminativo 1 (SD1) e respostas de pressão à barra esquerda em VR5
(grupo VR5) ou em CRF (grupo CRF) tinham como consequência o acionamento de um
estímulo luminoso (reforçador condicionado 1 – Sr1) e a liberação de 0,1 ml da solução
de 10E. Após 4 s a luz e o bebedouro eram desligados. No segundo componente, o odor
de erva-doce foi utilizado como estímulo discriminativo 2 (SD2) e respostas de pressão
na barra esquerda em VR5 (grupo VR5) ou em CRF (grupo CRF) tinham como
consequência o acionamento de um estímulo sonoro (reforçador condicionado 2 – Sr2) e
a liberação de 0,1 ml de água. Após 4 s o som e o bebedouro eram desligados.
Uma ilustração do procedimento utilizado no treino pode ser observada na
Figura 1.
23
Cada um desses componentes foi apresentado em sessões distintas com 24 h de
intervalo entre elas. Todos os sujeitos passaram por 20 sessões de treino na caixa
operante; destas 20 sessões, 10 foram realizadas com o componente em que o etanol era
utilizado como consequência para as respostas de pressão à barra e 10 com o
componente em que a água era a consequência. A ordem das sessões de cada
componente foi definida através de sorteio, com a condição de que não houvesse mais
do que três sessões seguidas de cada componente.
Treino
Grupo VR5
mult VR5 VR5 (20 sessões)
Componente 1 Componente 2
SD1 R SR1 SD2 R SR2

(odor laranja) (VR5) (etanol) (odor erva- (VR5) (água)
Sr1 doce) Sr2

(luz) (som)
Grupo CRF
mult CRF CRF (20 sessões)
Componente 1 Componente 2
SD1 R SR1 SD2 R SR2

(odor laranja) (CRF) (etanol) (odor erva- (CRF) (água)
Sr1 doce) Sr2

(luz) (som)
Figura 1 – Ilustração do procedimento utilizado no treino para os dois grupos

experimentais. SD1 = estímulo discriminativo 1, R = resposta, VR5 = esquema de
razão variável 5, SR1 = reforçador primário 1, Sr1 = reforçador condicionado 1, SD2
= estímulo discriminativo 2, CRF = esquema de reforçamento contínuo, SR2 =
reforçador primário 2, Sr2 = reforçador condicionado 2.
Todas as sessões desta fase tiveram 30 minutos de duração. Ao final das sessões
experimentais as caixas eram limpas com água e as bandejas lavadas com água e sabão.
As sessões foram realizadas de segunda-feira a sexta-feira (cinco dias por semana).
Nos dois componentes do esquema múltiplo de ambos os grupos, respostas na
barra da direita eram registradas, porém não tinham consequência programada.
Extinção
24
Ao término do treino, todos os animais foram submetidos a sessões diárias de
extinção das respostas de pressão à barra esquerda, sem a presença dos estímulos
discriminativos, reforçadores condicionados ou primários (água ou álcool) usados no
treino.
Com a finalidade de extinguir qualquer função de estímulo do som do bebedouro
e da serragem da caixa, nas sessões desta fase foi colocada serragem na bandeja da
caixa experimental sem a adição de essência e as respostas emitidas sob o esquema
correspondente (VR5 ou FR1) tiveram como consequência apenas o acionamento do
bebedouro vazio. Essa fase teve 10 sessões diárias de 30 minutos cada.
Teste de reinstalação
Nas sessões de teste, os estímulos discriminativos e reforçadores condicionados
usados no treino foram reintroduzidos, mas as respostas de pressão à barra não davam
acesso aos reforçadores primários (etanol e água).
Foram realizadas seis sessões de teste de 30 minutos cada, com 24 h de intervalo
entre elas. No primeiro dia de teste metade dos animais de cada grupo (n=5 por grupo)
foi testado na condição SD1/Sr1. Portanto, para o grupo VR5, na presença do odor de
laranja (SD1), a última resposta que completava a exigência do esquema VR5 teve
como consequência o acionamento do bebedouro e do estímulo luminoso (Sr1); e para o
grupo CRF cada resposta na presença de SD1 teve como consequência o acionamento
do bebedouro e a apresentação de Sr1.
A outra metade dos ratos (n=5 por grupo) foi testado na condição SD2/Sr2.
Portanto, para o grupo VR5, na presença do cheiro de erva-doce (SD2), a última
resposta que completava a exigência do esquema VR5 acionava o bebedouro e o
estímulo sonoro (Sr2); e para o grupo CRF cada resposta na presença de SD2 teve como
consequência o acionamento do bebedouro e a apresentação de Sr2.
25
No segundo dia de teste, os animais que tinham sido submetidos à condição
SD1/Sr1 foram submetidos à condição SD2/Sr2 e os animais que tinham sido
submetidos à condição SD2/Sr2 foram submetidos à condição SD1/Sr1.
Nos outros dias de teste, os estímulos utilizados no treino foram apresentados
separadamente. A ordem de apresentação dos estímulos foi: cheiro de laranja, luz, som,
cheiro de erva-doce. Esta ordem foi escolhida com a finalidade de que o cheiro de
laranja, que era o estímulo mais relevante para esse experimento, fosse apresentado em
primeiro lugar para minimizar os efeitos de extinção. Novamente, nestas sessões de
testes, os estímulos Sr1 e Sr2 foram apresentados para o grupo VR5 num esquema de
VR5 e para o grupo CRF em CRF.
Todos os testes foram realizados em extinção, ou seja, as respostas de pressão à
barra não tiveram como consequência álcool ou água, porém o bebedouro continuava a
ser acionado depois da última resposta que completava a exigência do esquema VR5,
para o grupo VR5 e a cada resposta para o grupo CRF. A serragem também foi colocada
na bandeja das caixas experimentais, mesmo nas sessões em que os odores não foram
utilizados.
Análise de dados
Para a análise dos dados da fase de treino utilizou-se o teste não-paramétrico
Wilcoxon matched pairs. Os dados da fase de extinção e dos testes de reinstalação
foram analisados em conjunto por meio de ANOVA mista com um fator entre-sujeitos
de dois níveis (etanol X água) e um fator intra-sujeito de sete níveis (a média das três
últimas sessões de extinção e seis sessões de teste de reinstalação). Foi utilizado o teste
de Mauchly para verificar a esfericidade e, quando a esfericidade não foi garantida, foi
utilizada a correção Greenhouse-Geisser. As diferenças das sessões de teste em relação
à extinção foram analisadas pelo post-hoc Scheffé. Foram considerados valores
26
significativos p<0,05. Todos os dados são apresentados com o erro da média (±SEM)
com a exceção dos dados do treino, pois para o treino foi realizada uma análise não-
paramétrica.
RESULTADOS
Auto-administração de etanol
Todos os sujeitos aprenderam a auto-administrar oralmente a solução de 10E. A
Figura 2 mostra as médias de consumo de etanol de todos os sujeitos durante a fase de
auto-administração de etanol. Pode-se observar que os sujeitos iniciaram esta fase com
uma grande variabilidade de consumo da solução que diminuiu ao longo da fase e das
mudanças da concentração da solução. Nos três últimos dias da fase de auto-
administração de etanol os sujeitos consumiram em média 1,05±0,36 (mean± SEM)
g/kg de etanol da solução de 10E. O consumo desta quantidade de etanol é considerado
como “dose ativa”, ou seja, uma dose que produz mudanças significativas no sistema
dopaminérgico do sistema nervoso central dos animais (Williams-Hemby & Porrino,
1997a, 1997b).
10.00
Consumo (± S.E.M.) de Etanol g/kg
9.00
8.00
7.00
6.00
5.00
4.00
3.00
2.00
1.00
0.00
10E/10S
10E/10S
10E/10S
10E/10S
10E/10S
10E/10S
10E/10S
10E/10S
10E/10S
10E/10S
10E/10S
10E/10S
10E/10S
10E/10S
10E/5S
10E/5S
10E/5S
10E/5S
10E/5S
10E/5S
10E/5S
10E/5S
10E/2S
10E/2S
10E/2S
10E/2S
10E/2S
10E/2S
10E
10E
10E
10E
10E
10E
10E
10E
10E
10E
10E
Concentração das soluções

Figura 2 – Médias de consumo (± SEM) (g/kg) dos sujeitos das soluções de etanol ao longo dos dias da
fase de auto-administração de etanol. A concentração da solução começou com 10% de etanol e 10% de
sacarose (10E/10S) e a sacarose foi sendo retirada da solução até a mesma passar a conter apenas 10% de
etanol (10E).
Modelagem
27
A média de consumo da solução de álcool nos três últimos dias da fase de auto-
administração dos sujeitos do grupo CRF foi 1,07±0,6 g/kg e a média de consumo dos
sujeitos do grupo VR5 foi 0,93±0,4 g/kg. Todos os sujeitos de ambos os grupos
aprenderam a pressionar a barra esquerda da caixa operante.
Treino e Extinção
A mediana da frequência de respostas dos sujeitos durante as fases de treino e
extinção é apresentada na Figura 3. Pode-se observar que no inicio da fase de treino a
frequência de respostas de ambos os grupos foi similar nos dois componentes (etanol e
água), porém, nota-se nas curvas de ambos os grupos que ao longo do treino foi
aumentando progressivamente a mediana da frequência de respostas no componente que
liberava álcool como consequência, e diminuindo a mediana das respostas no
componente que liberava água como consequência. Ao final da fase de treino, a
mediana das respostas seguidas de etanol foi significativamente maior que o número de
respostas seguidas de água, tanto para o grupo CRF (Z (10) = 2,29; p= 0,022), quanto
para o grupo VR5 (Z (10) = 2,80; p= 0,005).
Pode-se também observar na Figura 3 que a mediana da frequência de respostas
dos sujeitos de ambos os grupos caiu rapidamente assim que se iniciou a fase de
extinção. Para grupo VR5 verifica-se que a frequência de respostas diminuiu de
28,5±13,6 respostas na primeira sessão para 10,2±3,2 respostas na última sessão e, no
grupo CRF, diminuiu de 13,6±4,3 respostas na primeira sessão para 6,2±2,0 respostas
na última sessão de extinção.
28
VR5
Álcool
250 Água
Extinção
200
150
100
50
0
1a 2a 3a 4a 5a 6a 7a 8a 9a 10a 1a 2a 3a 4a 5a 6a 7a 8a 9a 10a
CRF
250
200
150
100
50
0
1a
2a
3a
4a
5a
6a
7a
8a
9a
10a
1a
2a
3a
4a
5a
6a
7a
8a
9a
10a
Sessões
Treino Extincção
Figura 3 – Mediana do número de respostas dos sujeitos do
grupo VR5 e do grupo CRF ao longo das fases de treino e
extinção.
Teste de Reinstalação
A análise dos dados do teste de reinstalação mostrou que houve diferenças
significativas entre as medidas repetidas -média dos três últimos dias de extinção e seis
dias de teste de reinstalação- (F (6, 108) = 11,16; Padj = 0,001) e diferença significativa
entre os grupos (F (1,18) = 5,59; p = 0,029). O ANOVA não acusou interação entre
esses fatores (F (6, 108) = 3,31; Padj = 0,07). Como mostrado na Figura 4 o teste post-
hoc Sheffé mostrou que para ambos os grupos houve diferenças significativa entre o
número de respostas emitidas na condição SD1/Sr1 e na condição de extinção (p =
0,001 para ambos os grupos). Esse teste também acusou diferenças entre o número de
respostas emitidas na apresentação de Sr1 e na condição de extinção (p = 0,001, para
ambos os grupos). Não houve diferenças significativas entre frequência de respostas
emitidas na presença dos outros estímulos e a extinção. Ainda, o teste post-hoc também
revelou que houve diferença significativa (p = 0,019) entre a apresentação de SD1/Sr1 e
a apresentação de SD2/Sr2.
29
140
Frequência de Respostas
* VR5
120
* CRF
100
80
60
40 *
*
20
0
EXT SD1/Sr1 SD2/Sr2 SD1 Sr1 Sr2 SD2
Sessões de extinção e teste
Figura 4 – Média (± SEM) de respostas dos três últimos dias da

fase de extinção (EXT) e das sessões de testes em que o SD1 (odor
de laranja) foi apresentado em conjunto com Sr1 (luz), o SD2
(odor de erva-doce) foi apresentado em conjunto com Sr2 (som) e
das sessões em que esses estímulos foram apresentados
separadamente. Houve diferença significativa entre EXT e
SD1/Sr1 (p = 0,001) e entre EXT e Sr1 (p = 0,001). Também
houve diferença significativa entre SD1/Sr1 e SD2/Sr2 (p = 0,019).
As sessões de teste estão representadas na ordem em que
ocorreram.
Na Figura 5 é a apresentada a razão entre as taxas de respostas das sessões de teste e a
média da taxa de respostas dos últimos três dias de extinção (EXT) de cada grupo experimental. Nota-se
que apesar da taxa de respostas do grupo VR5 ter sido maior, o padrão de respostas é
semelhante entre os grupos: o maior número de respostas foi emitido quando Sr1 foi
apresentado em conjunto com SD1 ou sozinho e o menor número de respostas foi
emitido na presença dos estímulos discriminativos sozinhos (SD1 e SD2).
15
VR5
12 CRF
0
EXT SD1/Sr1 SD2/Sr2 SD1 Sr1 Sr2 SD2
Sessões de extinção e teste
Figura 5 – Razão entre as taxas de respostas das sessões de

teste e a média da taxa de respostas dos últimos três dias de
extinção (EXT) de ambos os grupos experimentais.
30
DISCUSSÃO
O modelo animal de recaída cue-induced tem sido amplamente utilizado para avaliar o
papel dos estímulos ambientais na recaída ao uso de álcool, pois tem mostrado
consistentemente que a reapresentação de estímulos ambientais (estímulos
discriminativos e reforçadores condicionados) associados aos efeitos do álcool evocam
respostas de procura pelo álcool mesmo após um período sem a administração do
mesmo (Bachteler, et al., 2005; Cannella, et al., 2009; Ciccocioppo, Angeletti, & Weiss,
2001; Ciccocioppo, et al., 2002; Ciccocioppo, et al., 2003; Ciccocioppo, et al., 2004).
Porém, um problema encontrado nesses estudos é que não analisam a função dos
estímulos discriminativos da função dos reforçadores condicionados na aquisição e
manutenção do comportamento de auto-administração do álcool (Galesi, Silva, &
Mijares, no prelo; Fuchs, et al., 2009).
Galesi et al (no prelo) observaram que o reforçador condicionado, mas não o
estímulo discriminativo, adquiria controle sobre a resposta de pressão à barra quando
analisaram o controle de variáveis estabelecido peloprocedimento de treino do modelo
cue-induced em ratos . As autoras propuseram que uma das variáveis que poderia
explicar esse achado é o uso do esquema de reforço contínuo no treino, pois, segundo
Jenkins (1965), esse esquema é uma contingência de reforço que facilita o controle pela
consequência e não favorece que o sujeito atente para o estímulo antecedente à resposta.
No presente estudo foi verificado que o treino sob o esquema de reforço
intermitente VR5 não facilitou que o odor de laranja (SD1) adquirisse função
discriminativa sobre a resposta de procura por álcool. Semelhante ao achado de Galesiet
al (no prelo), foi observado nos resultados aqui mostrados que a apresentação do Sr1,
mas não do SD1, controlou a reinstalação da resposta de pressão à barra em ambos os
grupos experimentais (VR5 e CRF). Portanto, o esquema de reforço parece não ser uma
31
das variáveis que explica os resultados obtidos por Galesi et al (no prelo).
Ainda, foi observado que o treino sob os dois esquemas de reforço, VR5 e CRF,
produz desempenhos na fase de teste de reinstalação que são semelhantes aos relatados
pela literatura, pois a frequência de resposta na presença de SD1/Sr1 foi
significativamente maior do que a frequência de respostas na presença de SD2/Sr2
(Bachteler, et al., 2005; Cannella, et al., 2009; Ciccocioppo, Angeletti, & Weiss, 2001;
Ciccocioppo, et al., 2002; Ciccocioppo, et al., 2003; Ciccocioppo, et al., 2004).
Os resultados do presente experimento também mostraram que nas fases de
treino e reinstalação a taxa de resposta do grupo submetido ao treino sob o esquema de
reforço VR5 foi maior do que a taxa do grupo submetido ao treino sob o esquema de
reforço CRF. Tem sido amplamente descrito na literatura da análise do comportamento
que maiores taxas de respostas são obtidas quando esquemas de reforço intermitentes
são utilizados se comparados ao esquema de reforço contínuo (Catania, 1999).
Outrossim, essa literatura tem mostrado consistentemente que o treino sob esses
esquemas produzem desempenhos diferentes quando é imposto um esquema de
extinção, pois maiores taxas de respostas são observadas após o treino sob esquemas
intermitentes do que após o treino sob o esquema de reforço contínuo. Portanto,
considerando que o teste de reinstalação do presente estudo foi realizado em extinção, é
possível afirmar que a maior taxa de respostas exibida pelo grupo VR5 nos testes de
reinstalação é compatível com a literatura e sugere que esse grupo apresentou maior
resistência à extinção do que os sujeitos do grupo CRF4.
Em resumo, os resultados obtidos neste experimento mostraram que a mudança
do esquema de reforço não foi eficaz em estabelecer um estímulo olfativo -o odor de
4
Segundo Catania (1999) o número de respostas emitidas durante a extinção é um dos critérios utilizados
para medir a resistência à extinção.
32
laranja- como estímulo discriminativo da resposta de procura pelo álcool, mas foi
determinante na taxa de respostas obtidas no treino e no teste de reinstalação, sugerindo,
portanto, que o treino sob esquemas intermitentes de reforço é mais adequado do que o
treino sob esquemas contínuos para o estudo da recaída ao uso de drogas através do
modelo cue-induced.
EXPERIMENTO 2
O experimento tem o objetivo de verificar se a apresentação de reforçadores
condicionados é um fator que dificulta o condicionamento de estímulos discriminativos
pelo procedimento do modelo cue-induced. Além disso, o estudo visa analisar a
interação entre esses dois estímulos e se o treino discriminativo prévio sem a presença
do reforçador condicionado previne o possível sombreamento do segundo sobre o
primeiro, sugerido por Galesi et al (in press).
MÉTODO
Procedimento
33
As fases experimentais de Auto-administração de Etanol e Modelagem foram
realizadas conforme descrito no Método Geral.
Treino
Depois de instalada a resposta de pressão à barra sob o esquema de reforço CRF,
o esquema será aumentado para FR2 e em seguida para VR5, para todos os sujeitos.
Cada esquema ficará em vigência por cinco sessões consecutivas. Como consequência
da resposta de pressão à barra será disponibilizado 0,1 ml da solução de 10E.
Uma vez estabelecida a resposta de pressão à barra sob o esquema de reforço
VR5 os sujeitos serão divididos em quatro grupos experimentais que serão denominados
“Grupo 1”, “Grupo 2” ,“Grupo 3” e “Grupo 4”. O critério para a divisão dos sujeitos
nos quatro grupos será a média de consumo de etanol dos últimos três dias da fase de
auto-administração. Ou seja, os sujeitos serão distribuídos nos quatro grupos de forma
que a média de consumo de etanol de todos os sujeitos de um grupo seja o mais
semelhante possível com a média de consumo de todos os sujeitos dos outros grupos.
Serão realizadas 40 sessões de treino, dividas em Treino 1 (sessões 1 a 20) e
Treino 2 (sessões 21 a 40). Conforme mostrado na Tabela 2, no Treino 1 os sujeitos dos
grupos 1 e 2 (n=9 sujeitos por grupo) serão submetidos ao treino de condicionamento
dos reforçadores condicionados enquanto os sujeitos dos grupos 3 e 4 (n=9 por grupo)
passarão por um treino discriminativo simples. No Treino 2, os animais dos grupos do
grupo 1 serão submetidos a um treino discriminativo simples e os animais do grupo 3
serão submetidos ao treino de condicionamento dos reforçadores condicionados. Já os
sujeitos dos grupos 2 e 4 serão submetidos a um treino discriminativo com a
apresentação do reforçador condicionado (mesmo treino utilizado no modelo cue-
induced). Entre os dois treinos haverá uma fase de extinção e um teste de reinstalação.
Tabela 2 - Combinações em que os estímulos

serão apresentados nas sessões de treino de cada
grupo.
34
Grupos Sessões
Treino 1 Treino 2
Sr1 SD1
Grupo 1
Sr2 SD2
Sr1 SD1+ Sr1
Grupo 2
Sr2 SD2 + Sr2
SD1 Sr1
Grupo 3
SD2 Sr2
SD1 SD1+ Sr1
Grupo 4
SD2 SD2 + Sr2
Sr1: luz, Sr2: som, SD1: odor de laranja e SD2:
odor de erva-doce
Treino 1
1) Treino de condicionamento dos reforçadores condicionados
Os animais dos grupos 1 e 2 (n=9 por grupo) passarão por um treino que terá
dois componentes, nos quais as consequências para as respostas de pressão à barra serão
liberadas no esquema de reforço VR5. No primeiro componente respostas de pressão na
barra esquerda terão como consequência a liberação de 0,1 ml da solução de 10E e a
apresentação de um estímulo luminoso (Sr1). Após 4 s a luz e o bebedouro serão
desligados. No segundo componente, respostas de pressão na barra esquerda terão como
consequência a liberação de 0,1 ml de água e a apresentação de um estímulo sonoro
(Sr2). Após 4 s o som e o bebedouro serão desligados.
Cada componente será apresentado em sessões distintas com 24 h de intervalo
entre elas. Serão realizadas 20 sessões de treino, 10 sessões com o componente em que
a luz e o etanol serão utilizados como consequência para as respostas de pressão à barra
e 10 sessões com o componente em que o som e a água serão utilizados consequência
para as respostas de pressão à barra.
2)Treino discriminativo simples
Os animais dos grupos 3 e 4 (n=9 por grupo) passarão por um treino realizado
sob um esquema múltiplo de reforço mult VR5 VR5. No primeiro componente o odor
35
de laranja será utilizado como estímulo discriminativo (SD1) e respostas de pressão à
barra esquerda terão como consequência a liberação de 0,1 ml de 10E. Após 4 s o
bebedouro será desligado. No segundo componente, o odor de erva-doce será utilizado
como estímulo discriminativo (SD2) e respostas de pressão na barra esquerda terão
como consequência a liberação de 0,1 ml de água. Após 4 s o bebedouro será desligado.
entre elas. Serão realizadas 20 sessões de treino, 10 sessões com o componente em que
o odor de laranja é utilizado como SD1 e o etanol como consequência para as respostas
de pressão à barra e 10 sessões com o componente em que o odor de erva-doce é
utilizado como SD2 e a água é utilizada como consequência para as respostas de pressão
à barra.
Todas as 20 sessões de treino dos quatro grupos experimentais terão duração de
30 min e serão realizadas de segunda-feira a sexta-feira (cinco dias por semana). Para
cada treino a ordem das sessões em que cada componente será apresentado será definida
através de sorteio, com a condição de não haver mais do que três sessões seguidas de
cada componente. Cada sessão será realizada na caixa operante com as duas barras
disponíveis e as respostas na barra da direita serão registradas, porém não terão
consequência programada. Ao final das sessões experimentais as caixas serão limpas
com água e as bandejas com água e sabão.
Extinção 1
Ao término do Treino 1 todos os sujeitos serão submetidos a sessões diárias de
extinção de respostas de pressão à barra esquerda, sem a presença dos estímulos
discriminativos, reforçadores condicionados ou primários (água ou etanol) usados no
treino. Portanto, as respostas de pressão à barra não terão nenhuma consequência
programada, porém o bebedouro será acionado a cada resposta. Também será colocada
36
serragem na bandeja da caixa experimental. Esta fase terá cinco sessões experimentais
de 30 minutos cada realizadas diariamente e será seguida pelo teste de reinstalação.
Teste de reinstalação 1
usados no treino serão reintroduzidos, mas as respostas de pressão à barra não darão
acesso aos reforçadores primários (etanol e água). Serão realizadas duas sessões de teste
de 30 minutos cada, com 24 h de intervalo entre elas.
Para os grupos 1 e 2, no primeiro dia de teste, cinco sujeitos serão apresentados
ao estímulo Sr1 e quatro sujeitos ao estímulo Sr2. No segundo dia de testes, os animais
serão apresentados ao estímulo que não haviam sido apresentados no primeiro dia.
Para os grupos 3 e 4, no primeiro dia de teste, cinco sujeitos serão apresentados
ao estímulo SD1 e quatro sujeitos ao estímulo SD2. No segundo dia de testes, os
animais serão apresentados ao estímulo que não haviam sido apresentados no primeiro
dia.
Treino 2
1) Treino discriminativo com a apresentação do reforçador condicionado
Os animais dos grupos 2 e 4 (n=9 por grupo) passarão por um treino
discriminativo simples sob um esquema múltiplo de reforço mult VR5 VR5 com a
presença do reforçador condicionado, similar ao realizado ao descrito no Experimento 1
– grupo VR5. No primeiro componente do esquema o odor de laranja será utilizado
enquanto SD1 e respostas de pressão à barra esquerda em VR5 terão como
consequência a liberação de 0,1 ml de 10E e o acionamento do estímulo luminoso (Sr1).
Após 4 s a luz e o bebedouro serão desligados. No segundo componente do esquema, o
odor de erva-doce será utilizado como SD2 e respostas de pressão na barra esquerda em
37
VR5 terão como consequência a liberação de 0,1 ml de água e o acionamento do
estímulo sonoro (Sr2). Após 4 s o som e o bebedouro serão desligados.
entre elas. Serão realizadas 20 sessões de treino, 10 sessões de cada componente.
2) Treino discriminativo de dois odores
Os sujeitos do grupo 1 (n=9) serão submetidos ao mesmo treino discriminativo a
que foram submetidos os sujeitos do grupo 3 e 4 no Treino 1.
3) Treino de condicionamento dos reforçadores condicionados
Os sujeitos do grupo 3 serão submetidos ao mesmo treino de condicionamento
do reforçador condicionado a que foram submetidos os sujeitos do grupo 2 e 4 no
Treino 1.
Todas as 20 sessões do Treino 2 dos quatro grupos experimentais terão duração
de 30 min e serão realizadas de segunda-feira a sexta-feira (cinco dias por semana). Para
cada treino a ordem das sessões em que cada componente será apresentado será definida
através de sorteio, com a condição de não haver mais do que três sessões seguidas de
cada componente. Cada sessão será realizada na caixa operante com as duas barras
disponíveis e as respostas na barra da direita serão registradas, porém não terão
consequência programada. Ao final das sessões experimentais as caixas serão limpas
com água e as bandejas com água e sabão.
Extinção 2
Ao término das fases de treino todos os sujeitos serão submetidos a sessões
diárias de extinção de respostas de pressão à barra esquerda, sem a presença dos
estímulos discriminativos, reforçadores condicionados ou primários (água ou etanol)
usados nos treinos. Portanto, as respostas de pressão à barra não terão nenhuma
consequência programada, porém o bebedouro será acionado a cada resposta. Também
38
será colocada serragem na bandeja da caixa experimental. Essa fase terá 10 sessões
experimentais de 30 minutos cada realizadas diariamente e será seguida pelo teste de
reinstalação 2.
Teste de reinstalação 2
usados no treino serão reintroduzidos, mas as respostas de pressão à barra não darão
acesso aos reforçadores primários (etanol e água).
Serão realizadas seis sessões de teste de 30 minutos cada, com 24 h de intervalo
entre elas. No primeiro dia de teste, os sujeitos dos grupos 1, 2, 3 e 4 (n=5 por grupo)
passarão pela reapresentação dos estímulos que foram associados ao consumo de álcool
(SD1/Sr1). Ainda no primeiro dia, o restante dos sujeitos dos grupos 1, 2, 3 e 4 (n=4
por grupo) passarão pela sessão de teste com a reapresentação dos estímulos que foram
associados à água no treino (SD2/Sr2).
No segundo dia de testes, os animais que foram submetidos à condição SD1/Sr1
serão submetidos à condição SD2/Sr2 e os animais que foram submetidos à condição
SD2/Sr2 serão submetidos à condição SD1/r1.
Nos outros dias de teste, os estímulos utilizados no treino serão apresentados
separadamente. A ordem de apresentação dos estímulos será sorteada aleatoriamente.
Análise de dados
Para a análise das fases de treino, diferenças na frequência de pressão à barra
entre álcool X água serão analisadas por uma ANOVA de um fator (álcool X água). A
frequência de respostas de pressão à barra na fase de extinção 1 e no teste de
reinstalação 1 serão analisadas por uma ANOVA de dois fatores, um fator entre sujeitos
(álcool X água), e três fatores intra-sujeitos (média dos últimos três dias de extinção e as
duas condições do teste de reinstalação).
39
A frequência de respostas de pressão à barra na fase de extinção 2 e no teste de
reinstalação 2 serão analisadas por uma ANOVA de dois fatores, um fator entre sujeitos
(álcool X água), e sete fatores intra-sujeitos (média dos últimos três dias de extinção e
as seis condições do teste de reinstalação).
EXPERIMENTO 3
Este experimento será realizado na Universidade de Camerino na Itália, como
parte do programa de estágio de doutorado do exterior. O experimento será realizado
com a supervisão do Prof. Roberto Ciccocioppo.
O terceiro experimento tem como objetivo compreender se a exposição, em
extinção, aos estímulos previamente associados ao álcool no teste de reinstalação pode
ser um evento estressante para os animais e, portanto, influenciar as respostas emitidas
durante essa fase. Para avaliar o estresse serão tomadas medidas de corticosterona do
sangue dos animais durante todas as fases experimentais. Além disso, será utilizado um
antagonista do receptor CRH1R chamado Antalarmin durante a fase de reinstalação
40
para observar se o bloqueio do eixo HPA altera o controle dos estímulos discriminativos
e/ou reforçadores condicionados sobre a resposta de reinstalação.
MÉTODO
Procedimento
No inicio do experimento os animais serão divididos em três grupos
experimentais: ET, ANT e SUC. Os animais do grupo ET (n=10) serão submetidos ao
procedimento do modelo animal cue-induced com álcool como consequência. Os
animais do grupo ANT (n=10) serão submetidos ao mesmo procedimento que os
animais do grupo ET, mas será injetado Antalarmin antes das sessões de teste de
reinstalação. Animais do grupo SUC (n=10) serão submetidos ao mesmo procedimento
que os animais do grupo ET, porém uma solução de sacarose, em vez de etanol, será
usada como consequência de pressão à barra durante o experimento.
Fase de Auto-administração de Álcool ou Sacarose
Os animais do grupo ET e ANT serão submetidos ao procedimento de auto-
administração de álcool descrito no Método Geral do projeto. Já os animais do grupo
SUC (n=10) terão livre acesso em suas gaiolas-viveiro a uma solução de sacarose
14,5%5 (14,5S). A solução de sacarose será disponibilizada 23,5h ao dia por 28 dias
consecutivos.
Modelagem
Os animais do grupo ET e ANT serão submetidos ao procedimento de
modelagem detalhado no Método Geral. Os animais do grupo SAC passarão por um
procedimento semelhante, mas será utilizado como reforçador da resposta de pressão à
5
A solução de sacarose na concentração de 14,5% de sacarose é isocalórica à solução de etanol 10%.
41
barra a solução 14,5S .O número de respostas tanto na barra ativa (esquerda), quanto na
barra inativa (direita) será registrada durante o experimento.
Treino
Uma vez instalada a resposta de pressão à barra sob o esquema de reforço CRF,
o esquema será gradualmente aumentado a FR4, seguindo a sequência: FR2, FR3 e
FR4. Em seguida, será implementado um esquema de VR5. Ao longo desse treino os
animais dos grupos ET e ANT (n=10 por grupo) terão livre acesso à água 1h por dia e
os animais do grupo SAC (n=10) terão livre acesso à comida 1h por dia. As respostas
dos animais dos grupos ET e ANT serão consequenciadas com a disponibilização de
10E e as respostas dos animais do grupo SAC serão consequenciadas com a
disponibilização de 14,5S. Depois de estabilizada a resposta mantida sob VR5, será
iniciado o treino discriminativo sob esquema mult VR5 VR5. No primeiro componente,
na presença do odor de laranja (SD1), respostas de pressão à barra sob VR5 produzirão
0,1 ml da solução de 10E (grupos ET e ANT) ou de 14,5S (grupo SUC) e ativarão o
estímulo luminoso (Sr1). No segundo componente, respostas na presença do odor de
erva-doce (SD2) sob VR5 terão como consequência 0,1 ml de água e a ativação do
estímulo sonoro (Sr2). Todos os estímulos utilizados como consequência ficarão
disponíveis por 4 s.
Cada condição do treino discriminativo será apresentada em sessões separadas
com 30 minutos cada e 24 horas de intervalo entre elas. Todos os animais serão
submetidos a 20 sessões de treino, nas quais 10 sessões serão realizadas com a solução
de 10E (grupos ET e ANT) ou 14,5E (grupo SUC) como consequência para as respostas
de pressão à barra e 10 sessões serão realizadas com água como consequência.
Os estímulos olfativos serão gerados com o depósito de seis gotas dos
respectivos extratos na bandeja da caixa operante. Após cada sessão de treino todas as
42
caixas serão limpas com água e as bandejas com água e detergente neutro.
Extinção
Após o término da fase de treino, os ratos serão submetidos a 10 sessões diárias
de extinção de 30 minutos cada. Nestas sessões nenhum dos estímulos discriminativos
(odor de laranja e de erva-doce) e dos reforçadores condicionados (luz e som) utilizados
no treino serão apresentados. Respostas na barra esquerda ativarão a bomba, mas não
terão consequência programada.
Efeitos do Antalarmin nas respostas de reinstalação
Animais do grupo ANT (n=10) irão receber o antagonista seletivo de CRH-R1
antalarmin (20 mg/kg) e os animais do grupo ET (n=10) serão injetados com uma
solução isotônica de salina. A droga e a solução de salina serão dadas i.p. 30 min antes
das sessões de teste de reinstalação.
Teste de Reinstalação
O teste de reinstalação se iniciará no dia seguinte ao término da fase de extinção.
Serão realizadas duas sessões de teste, separadas por um intervalo de 24h. No primeiro
dia de teste, metade dos animais (n=5 por grupo) será testada na condição SD1/Sr1.
Sob essa condição, respostas de pressão à barra na presença do odor de laranja (SD1)
terão como consequência o acionamento da bomba e do estímulo luminoso (Sr1) sob o
esquema de reforço VR5. A outra metade dos ratos (n=5 por grupo) será testado na
condição SD2/Sr2, na qual respostas de pressão à barra na presença do cheiro de erva-
doce (SD2) acionarão a bomba e o estímulo sonoro (Sr2) sob o esquema VR5.
No segundo dia de teste, os animais que foram submetidos à condição SD1/Sr1
serão submetidos à condição SD2/Sr2 e os animais que foram submetidos à condição
SD2/Sr2 serão submetidos à condição SD1/Sr1.
43
As sessões de todas as fases experimentais terão inicio no ZT14 6 (10h) para
evitar picos de corticosterona que ocorrem ao final do ciclo claro (Cavigelli, Monfort,
Whitney, Mechref, Novotny, & McClintock, 2005; Kalsbeek & Buijs, 2002; Lepschy,
Touma, Hruby, & Palme, 2007).
Coleta e medida dos níveis de corticosterona no sangue
Serão realizadas sete coletas de sangue de todos os ratos durante o experimento,
todas no horário ZT 14.
Todas as amostras de sangue (0,5 ml) serão tiradas da veia um do rabo dos ratos
e serão obtidas no mesmo tempo ZT para evitar a influência do ritmo circadiano nos
níveis de corticosterona. Para a coleta de sangue, os animais sempre serão retirados e
devolvidos para as gaiolas-viveiro.
A primeira amostra de sangue será coletada um dia antes do início do
experimento. A segunda e terceira medidas serão coletadas durante a fase de treino, uma
após os animais terem sido expostos a condição SD1/Sr1 e outra após os animais terem
sido expostos a condição SD2/Sr2. A coleta será realizada sempre após a última sessão
em que cada condição será apresentada. A quarta medida será realizada após a última
fase de extinção. A quinta e sexta medidas serão realizadas após os dois dias de teste e a
sétima medida será realizada uma semana após o término do experimento.
As coletas de sangue ocorrerão no máximo 30 min após o término das sessões.
Cada amostra de sangue coletada será colocada em tubos heparinizados
Eppendorf. O plasma será separado por centrifugação a 4°C, 5000 r.p.m. por 5 minutos
e congelado a -80°C até o ensaio. As concentrações de corticosterona no plasma serão
6
Lembrando que ZT0 (de tempo zeitgeber) é o início do ciclo claro.
44
medidas pelo kit de enzima-imunoensaio ELISA7.
Análise de Dados
Para a análise da fase de treino, as diferenças na frequência de respostas de
pressão à barra entre álcool ou sacarose X água serão analisadas por uma ANOVA com
um fator intra-sujeitos (álcool ou sacarose X água) e um fator entre sujeitos (grupo). A
frequência de respostas de pressão à barra na fase de extinção e no teste de reinstalação
serão analisadas por uma ANOVA de dois fatores, um fator entre-sujeitos (grupo), e um
fator intra-sujeitos (média das últimas três sessões de extinção e cada uma das duas
sessões de teste).
A comparação entre os níveis de corticosterona no sangue será realizada por
uma ANOVA de dois fatores, um entre sujeitos (grupo) e sete fatores intra-sujeitos (sete
amostras de sangue). A significancia estatística será definida em p < 0.05.
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UNIVERSIDADE DE SÃO PAULO

PÓS-GRADUAÇÃO EM PSICOLOGIA EXPERIMENTAL

FERNANDA LIBARDI GALESI

AVALIAÇÃO EXPERIMENTAL DO MODELO ANIMAL DE

RECAÍDA AO USO DE DROGAS CUE-INDUCED

Avaliação experimental do modelo animal de recaída ao uso de

Projeto de Pesquisa para Exame Geral de

Área de concentração: Psicologia Experimental

Orientadora: Profa. Dra. Miriam Garcia Mijares

A recaída ao uso de álcool é um dos principais obstáculos para o tratamento do adicto.

Palavras-chave: modelo cue-induced, recaída, álcool, controle de estímulos, estresse.

LISTA DE TABELAS ............................................................................................ 4

LISTA DE FIGURAS ............................................................................................. 5

Modelo de estresse ...................................................................................... 9

Modelo cue-induced ................................................................................... 11

O modelo cue-induced e o estresse ............................................................. 15

MÉTODO GERAL ................................................................................................. 19

Drogas e soluções ....................................................................................... 19

Tabela 1- Concentração e período de administração das soluções de etanol durante a

fase de auto-administração de etanol ............................................................................ 22

Tabela 2 - Combinações em que os estímulos serão apresentados nas sessões de treino

de cada grupo ............................................................................................................... 35

Figura 1 – Ilustração do procedimento utilizado no treino para os dois grupos

experimentais. SD1 = estímulo discriminativo 1, R = resposta, VR5 = esquema de razão

variável 5, SR1 = reforçador primário 1, Sr1 = reforçador condicionado 1, SD2 =

estímulo discriminativo 2, CRF = esquema de reforçamento contínuo, SR2 = reforçador

primário 2, Sr2 = reforçador condicionado 2 ............................................................ 25

longo dos dias da fase de auto-administração de etanol. A concentração da solução

ao longo das fases de treino e extinção ......................................................................... 29

das sessões em que esses estímulos foram apresentados separadamente. Houve

Também houve diferença significativa entre SD1/Sr1 e SD2/Sr2 (p = 0,019). As

sessões de teste estão representadas na ordem em que ocorreram ................................ 30

respostas dos últimos três dias de extinção (EXT) de ambos os grupos

De acordo com o Manual Diagnóstico e Estatístico de Transtornos Mentais – IV

(DSM-IV) a característica essencial da dependência de drogas é indicada por um padrão

de auto-administração repetida da droga e compreende sintomas como tolerância,

abstinência e uso compulsivo da droga. Comumente, esses sintomas causam grandes

(Associação Americana de Psiquiatria, 1994).

acarretar em grandes prejuízos na vida do usuário é o álcool (McKim, 2006). Segundo o

Centro Brasileiro de Informações sobre Drogas Psicotrópicas (CEBRID) o alcoolismo

chega a atingir cerca de 10% da população brasileira adulta, sendo considerado um

importante problema de saúde pública (http://www.cebrid.emp.br). Ainda de acordo

com o CEBRID um dos fatores agravantes na dependência de álcool é o fato desta

para a população (http://www.cebrid.emp.br).

Outro fator importante no alcoolismo é a retomada recorrente do consumo de

álcool (recaída) mesmo após a desintoxicação e a abstinência (Associação Americana

de Psiquiatria, 1994; Bachteler, Economidou, Danysz, Ciccocioppo, & Spanagel, 2005;

aprendidas – eliciadas e evocadas – por estímulos anteriormente associados ao seu

consumo. Quando o adicto é exposto a estes estímulos as respostas condicionadas são

do álcool. Portanto, entender o papel dos estímulos ambientais no consumo de álcool é

fundamental para que o tratamento do alcoolismo seja bem-sucedido.

Modelos animais de dependência de álcool têm sido criados com o objetivo de

utilizados com a finalidade de reproduzir, em situações controladas de laboratório,

fenômenos análogos aos transtornos mentais em humanos1. O uso de modelos animais é

importante na medida em que permitem que as variáveis que determinam algumas

psicopatologias possam ser especificadas e isoladas.

Um bom modelo animal de psicopatologia requer que as contingências

específicas que mantém o comportamento em estudo controlem “desempenhos

específicos comuns ao homem e ao animal, de maneira que possamos reconhecer a

haver uma similaridade do processo básico que determina os comportamentos animal e

humano; e é esta similaridade que irá determinar a validade dos procedimentos

experimentais usados como modelos do comportamento humano no laboratório.

animais. O primeiro critério – chamado de validade nominal ou de face – postula que a