Técnicas Espectroanalíticas

Luciane Bastos
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Análise Química

Radiação Matéria
 3

Espectrofotometria
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Espectrofotometria - aplicação
Princípio da Espectrofotometria
Luz: campo elétrico e campo magnético
Baseia-se na absorção de radiação fundamentada na
interação da radiação eletromagnética com as espécies
químicas.
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Radiação Eletromagnética
Campo elétrico
Campo magnético

Campo elétrico
• Absorção
• Emissão
Campo magnético

• Ondas de rádio freqüência

• Ressonância magnética nuclear
Propriedades da Radiação
Eletromagnética

CARACTERÍSTICAS
• Velocidade: A velocidade da luz no vacuo (c) E = hc
• Comprimento de Onda (λ) λ
• Freqüência (ν)
• Relação entre freqüência e comprimento de onda: c = ν. λ
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O espectro de luz visível

A luz visível é uma forma de energia, que pode ser descrita

por duas teorias: a teoria ondulatória e a teoria
corpuscular.
 10

Espectro eletromagnético - processos moleculares

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Definições
Espectroscopia

É a ciência da interação da matéria com a

radiação eletromagnética.

Métodos espectrométricos

Abrangem um grupo e métodos analíticos

baseados em espectroscopia atômica e
molecular.
Interações da radiação eletromagnética
com o meio material

Absorção: quando uma molécula absorve um fóton, a

energia da molécula aumenta. Diz-se que a molécula e
promovida para um estado excitado.
Se uma molécula emite um fóton, a energia da molécula
diminui. O estado de menor energia de uma molécula e
chamado de estado fundamental.
Medidas Espectrométricas

M + hν M*
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Excitação eletrônica Moléculas

Átomos
E2

E2
E1

E1
E0
▪ Transições eletrônicas
E0 ▪ Vibração
▪ Rotação
▪ Transições eletrônicas
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Absorção de radiação
ABSORÇÃO ATÔMICA
Absorção da energia eletromagnética por
átomos
espectros de
linhas
Espectro de linhas
transições eletrônicas de um ou mais
elétrons
ABSORÇÃO MOLECULAR
Absorção da energia eletromagnética por
moléculas
espectros de
bandas

Espectro de banda
E = Eeletrônica + Evibracional + Erotacional
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Espectro de absorção molecular

Moléculas

E
2

E
1

E
0

A
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Diagrama esquemático de um experimento

espectrofotométrico de feixe simples

Energia radiante = P
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Transmissão de
radiação

RADIAÇÃO
MONOCROMÁTICA

A transmitância T da solução é a fração da radiação incidente

transmitida através da solução:

P
T= T está entre 0 e 1.
Po
A transmitância percentual é simplesmente 100xT e fica entre 0 e 100%.
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Absorção de radiação
Interação entre fótons e espécies absorventes

RADIAÇÃO
MONOCROMÁTICA

A absorvância da solução é a fração da radiação absorvida pelas

espécies absorventes e é relacionada com a transmitância:

P/Po %T A
1 100 0
0,1 10 1
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Quando podemos explorar a

Espectrofotometria de Absorção Molecular no UV - VIS?

▪ Quando o analito é uma espécie absorvente (direta).

▪ Uma amostra sem coloração reage com um regente cromogênico

promovendo um produto colorido.

▪ Um analito colorido reage com um reagente que promove um

produto sem coloração e as análises são realizadas por
descolorimetria.

▪ Titulações fotométricas em que um ou mais reagentes ou produtos

sofrem absorção de radiação.
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Lei de Lambert-Beer

A= abc
A = Absorvância
a = coeficiente de absortividade
b = caminho ótico
c = concentração da espécie absorvente

A = adimensional Se unidade de c = mol/L e b = cm

ε= M-1 cm-1
a=ε
b = cm Aλ= ελbc
c=M ε = absortividade molar
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Lei de Lambert-Beer

A
α=
εb
A= εbc
c
A absorvância é diretamente proporcional a concentração c, de espécies
absorventes de luz na amostra em um recipiente de caminho óptico b.
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As cores

CROMÓFORO: A parte da molécula responsável pela absorção de luz

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Procedimento para análise quantitativa

▪A espécie a ser analisada deve absorver luz em λ conhecido.

▪O λ de absorção deve ser diferenciado de outras substâncias

presentes na amostra.

▪Preparo do branco analítico: contém todos os reagentes

presentes na solução da espécie a ser analisada, menos a espécie
a ser analisada.

▪Construção da curva analítica de calibração: medida da

absorbância de várias soluções de concentração conhecida da
espécie a ser determinada.
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 26

Lei de Lambert-Beer
Soluções de
Branco referência Amostra

Adição de reagente

Desenvolvimento da reação
 27

Lei de Lambert-Beer
Produto da reação

Soluções de
Branco referência Amostra

Curva padrão
 28

L.O.D. e L.O.Q.
+

Região de quantificação

5, 6 ou 10 Sb/S = L.O.Q.

Região de detecção

3 - 5 Sb/S = L.O.D.
Região de decisão

Sinal do branco analítico

0
Harmonized guidelines for single-laboratory validation of methods of analysis. 2002 IUPAC, Pure and Applied
Chemistry 74, 835–855
 29

Faixa Linear de trabalho

S= ΔA
ΔC
 30

Aplicações da lei de Lambert-Beer

Determinação de Ferro (II) com o reagente 1,10-o-fenantrolina
 31

Desvios da Lei de Lambert-Beer

É observado quando a absorvância varia de maneira não
linear com as concentrações
Desvio
positivo
A Ideal
Desvio
negativo

Desvios Reais Desvios aparente

 32

Desvios da Lei de Lambert-Beer

Desvios Reais

A lei de Beer é válida para baixas concentrações do analito.

▪Interação soluto-solvente e soluto-soluto

▪Variação do índice de refração

Desvio químico

Espécies absorventes envolvidas em

equilíbrio químico facilmente afetado.
 33

Desvios da Lei de Lambert-Beer

Desvio instrumental

Relação linear válida para radiação monocromática (λ)

Banda A
Banda B Banda A

Banda B

Absorbancia
Absorbancia

Comprimento de Concentraçã
onda o

Absorvância desejável: 0.200 – 0.800

 34

Instrumentação
▪ Fonte
▪ Monocromador
▪ Cela com amostra
▪ Detector
▪ Amplificador e
Processador de dados

•ESPECTROFOTOMETRO DE FEIXE SIMPLES

Fonte Monocromador Amostra Detector SINAL

Branco
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Recipientes para amostras – celas de medidas

Cubetas de
fluxo

Microcubet
as

Cubetas
Cubetas
retângulares
cilíndricas
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Fontes de radiação
Radiação constante com intensidade elevada emitir em
ampla faixa de comprimento de onda.

Lâmpada Região do espectro

Visível e Infravermelho
Tungstênio 320 a 2500 nm
próximo

Deutério Ultravioleta 200 a 400 nm

Gás xenônio Visível e ultravioleta 250 a 600 nm

 37

Fontes de radiação

■ Condições para uma fonte ser de boa qualidade

para atuar nessa faixa:
→ gerar radiação contínua;
→ ter intensidade de potência radiante suficiente
para permitir a sua detecção pelo sistema
detector;
→ ser estável.

■ Além disso deve ter um tempo de vida longo e

preço baixo.
 38

Instrumentação
•ESPECTROFOTOMETROS DE FEIXE DUPLO

Fonte Monocromador Amostra Detector

SINAL
Branco Detector

Fonte Monocromador Amostra

Branco Detector

SINAL
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Monocromadores
Restrição de um pequeno intervalo de comprimento de onda

Pré requisitos
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Monocromadores

Prismas

Lente colimadora
Lente focal

Fenda de entrada Prisma

Fenda de saída
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Monocromadores

Redes de difração

Espelhos côncavos

Grade
Fenda de entrada
Fenda de saída

Dispositivo constituído de uma série de ranhuras muito próximas, paralelas e

eqüidistantes traçadas sobre uma placa de vidro, metálica ou de um polímero.
 42

Detectores
Sistema eletrônico que permite detectar a radiação (luz) transmitida
através do sistema e converte-la em um sinal capaz de ser medido
(elétrico).

• Apresentar a maior relação entre o sinal e ruído

• Resposta rápida em uma ampla faixa de

comprimento de onda

• Sinal elétrico proporcional a radiação transmitida

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Detectores
Fototubo
▪ Resposta baseada no efeito fotoelétrico

▪ Cátodo revestido por um metal que emite elétrons quando iluminado

▪ Medida de corrente após a aplicação de uma ddp entre o cátodo e o

anodo.
ânodo
cátodo
radiação
e-
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Detectores
Fotomultiplicador
▪ Resposta baseada no efeito fotoelétrico
▪ Superfície do cátodo semelhante a superfície do fototubo
▪ Dinodos com voltagem mais positiva que o cátodo. Cada
elétron que atinge o dinodo causa a emissão de inúmeros
elétrons adicionais.

quartzo
radiação
cátodo
ânodo
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Aplicações Analíticas e tendências

Análise de águas:
NO3-,NO2-,PO43-,Cl-,SO42-, CN-,S2-,F-,SiO43-
NH4+,Al3+, Cd2+,Cr2O72-,Fe2+,Fe3+,Pb2+, Mn2+, Ni2+
Fenóis, antioxidantes

Gases:
SO2, NO2,H2S, O3, Cl2

Análise de solos:
Fosfatos, nitrogênio total, NO3-
 Espectroscopia molecular
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Vantagens e limitações da técnica

Vantagens
• Aplicação extensiva a muitas espécies químicas
• Passível de automação e miniaturização
• Análises seguras, de fácil execução e de baixo custo
• Tempo gasto por análise: moderado
• Custo relativamente baixo
• Tipos de amostras: sólidas liquidas e gasosas

• Limitações
• Restrita a espécies que atendem à lei de Beer
• Restrita à faixa de concentração de 10-3 a 10-6 mol L-1
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 48

Referências Bibliográficas
SKOOG, D.A.; WEST, M.W.; HOLLER, F.J.; CROUCH, S.R. Fundamentos de
Química Analítica, 1a ed., Thomson, São Paulo, 2006.

HARRIS, D.C. Análise Química Quantitativa, 5a ed., LTC – Livros Técnicos e

Científicos, Rio de Janeiro, 2001.

HOLLER, F.J.; NIEMAN, T. SKOOG, D.A. Princípios de Análise Instrumental,

6a ed., Artmed, Rio de Janeiro, 2009.

Leitura complementar:
WEINERT, P.L., PEZZA, L., PEZZA, H.P. Determinação espectrofotométrica de
citrato de sildenafil em formulações farmacêuticas. Química Nova 29 (2008)
1112-1116.

TEIXEIRA, L.S.G., BRASILEIRO, J.F., BORGES, M.M., CORDEIRO, P.W.L.,

ROCHA, S.A.N., COSTA, A.C.S. Determinação espectrofotométrica
simultânea de cobre e ferro em álcool etílico combustível com reagentes
derivados da ferroína. Química Nova 29 (2006) 741-745.