CENTRO UNIVERSITÁRIO DE RIO PRETO

UNIRP
CURSO DE AGRONOMIA

COLORAÇÃO DE GRAM

NOMES:
Allisson Hernandes
Dannilo dos Santos Ribeiro
Kristiano Soares Almeida
Marco Aurélio Silva Lemos
Naro castelhano
Roberto Antoni Taveres Queiroz Junior
Pedro Angelo
Theophilo Ribeiro Pontes Neto
PROFESSOR :
Eliane

SÃO JOSÉ DO RIO PRETO

2011
1. INTRODUÇÃO

A coloração de Gram é muito utilizada em bacteriologia permitindo a distinção

entre bactérias gram positivas e gram negativas. A diferença entre os 2 tipos de células
relacciona-se com a estrutura da parede celular das bactérias. Assim a parede celular de
bactérias ditas gram (+) é formada por uma camada espessa de peptideoglicano,
enquanto que a parede celular de bactérias gram (-) é formada por uma camada fina de
peptidoglicano, rodeada por uma camada externa de lipopolissacarideo e proteína.
As diferenças na permeabilidade destas membranas aos reagentes químicos, é o
que levam a diferenças de coloração. Na técnica de Gram, utiliza-se primeiro um
corante básico, o violeta de cristal; seguido de um mordente, o iodo de Gram que
aumenta a afinidade da célula para o corante; um agente descolorante, o álcool a 95%
que remove o corante e finalmente um segundo corante básico, por exemplo a safranina.
As células que retêm o primeiro corante chamam-se gram (+) e as que descoram ficarão
coradas pelo segundo corante e são as gram (-). Nas gram (-) o solvente álcool ou
acetona remove a membrana externa da parede destas bactérias, e como a camada de
mucocomplexo é pouco espessa, ela não consegue reter o corante violeta de cristal que
é assim retirado da célula por lavagem.
A técnica de coloração de Gram consiste em expor as células bacterianas à
seguinte sequência:

• Corante primário – violeta de cristal: cora o citoplasma de púrpura,

independentemente do tipo de célula.
• Mordente – solução de iodo: aumenta a afinidade entre o violeta de
cristal e a célula e forma com o corante um complexo insolúvel dentro da
célula.
• Agente descolorante – álcool, acetona ou ambos: solvente lipídico.
• Contra contraste – safranina ou fucsina básica: cora o citoplasma de
vermelho.
 2. OBJETIVO

Diferenciar bactérias Gram (+) das Gram (-).

3. MATERIAIS

• Suporte para lâmina

• Bandeja
• Béquer
• Pipeta Pasteur
• Pisseto
• Pinça
• Lâmina
• Estante para tubo de ensaio
• Kit para coloração de gram
• Bico de Bunsen
• Microscópio

4. MÉTODOS

Sobre uma lâmina limpa e flambada, colocar uma gota de água destilada;
b. Com uma alça de inoculação tomar uma pequena
porção de cultura com assepsia;
c. Emulsionar n° cultura, n° gotas até obter
suspensão uniforme. Isso deve ser feito com cuidado para evitar romper os arranjos
das células. Espalhar um esfregaço fino;
d. Secar a suspensão ao ar;
e. Fixar o esfregaço à chama e deixar a lamina
resfriar;
 f. Cobrir o esfregaço com solução de cristal violeta
por um minuto (corante básico);
g. Deixar escorrer o corante básico e cobrir cm
solução de lugol (mordente) por um minuto;
h. Deixar escorrer o mordente e mantendo a lamina
inclinada, gotejar o álcool a 95% (descolorante) por cerca de 30 segundos;
i. Lavar a lâmina;
j. Cobrir a lâmina com solução de safranina (contra
corante) por 30-60 segundos;
k. Lavar e
l. Examinar ao microscópio.

5. RESULTADOS e DISCUSSÃO
 6. BIBLIOGRAFIA

Livro de Pelezar
Microbiologia : Conceitos e aplicação vol.1
Mecanismo da coloração de gran