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Manuscrito aceito

Uma nova abordagem para a síntese total de espilantol e análogo com melhor
atividade anestésica

Isabella G. Alonso, Lais T. Yamane, Verônica S. de Freitas-Blanco, Luiz FT Novaes,

Michelle FMB Leite, Eneida de Paula, Marili VN Rodrigues, Rodney AF Rodrigues,
Julio C. Pastre
PII: S0040-4020 (18) 30733-6

DOI: 10.1016 / j.tet.2018.06.034

Referência: TET 29630

Aparecer em: Tetraedro

Data de recebimento: 20 de fevereiro de 2018

Data de revisão: 12 de junho de 2018 Data de

aceitação: 14 de junho de 2018

Como citar este artigo: Alonso IG, Yamane LT, de Freitas-Blanco VerôS, Novaes LFT, Leite MFMB, de
Paula E, Rodrigues MVN, Rodrigues RAF, Pastre JC, Uma nova abordagem para a síntese total de
espilantol e análogo com melhor atividade anestésica, Tetraedro ( 2018), doi: 10.1016 /
j.tet.2018.06.034.

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 MANUSCRITO ACEITO

Resumo Gráfico

Uma nova abordagem para a síntese total Deixe esta área em branco para informações abstratas.
de espilantol e análogo com melhor
atividade anestésica.
Isabella G. Alons uma o, Lais T. Yaman b e, Verônica S. de Freitas-Blan b c, oLuiz FT Novae uma s, Michelle FMB
b, Rodney AF Rodrigue b areia Julio C. Passado uma ré ∗
Leite c, Eneida de Pau d eu, aMarili VN Rodrigues
uma Instituto de Química, Universidade Estadual de Campinas, PO Box 6154, Campinas, SP 13084-971, Brasil
b Centro de Pesquisa Química, Biológica e Agrícola (CPQBA), Universidade de Campinas, Campinas, SP
13148-218, Brasil
c Instituto de Biologia, Universidade Estadual de Campinas, Campinas, SP 13083-862, Brasil
d Faculdade de Odontologia de Piracicaba, Universidade Estadual de Campinas, Piracicaba, SP 13414-903, Brasil

TO
EI
AC
O
IT
CR
US
AN
M
 1
MANUSCRITO ACEITO

Tetraedro
página inicial do jornal: www. el sevi er .com

Uma nova abordagem para a síntese total do análogo de spilalntahnod com melhor
atividade anestésica

Isabella G. Alons uma o, Lais T. Yaman b e, Verônica S. de Freitas-Blan b c, oLuiz FT Novae uma s, Michelle FM
b, Rodney AF Rodrigue b areia Julio C. Passado uma ré ∗
B. Leite c, Eneida de Pau d eu, aMarili VN Rodrigues
uma Instituto de Química, Universidade Estadual de Campinas, PO Box 6154, Campinas, SP 13084-971, Brasil
b Centro de Pesquisa Química, Biológica e Agrícola (CPQBA), Universidade de Campinas, Campinas, SP 13148-218, Brasil
c Instituto de Biologia, Universidade Estadual de Campinas, Campinas, SP 13083-862, Brasil
d Faculdade de Odontologia de Piracicaba, Universidade Estadual de Campinas, Piracicaba, SP 13414-903, Brasil

TO
ART ICLE INFO RESUMO

Historia do artigo:
Recebido
Recebido na forma EI
Uma síntese de 5 etapas de espilantol (afinina) é retpeodr, em que a rota apresenta
geometria completa de alceno durante a montagem oe
vde
ínculos
dth uble, com o uso de um Sonogas
reação de acoplamento cruzado, Z semi-redução de alcino a-seletiva e ação de oleifoinn HWE nas etapas
AC
revisada Aceito principais. Um análogo simplificado também foi prreedpa em 4 etapas. Ambos os compostos foram fou
Disponível para permear a pele da orelha de porco dermatomizada através de no um vitro Célula de difusão do tipo
Franz. O análogo simplificado apresentou um efeito anestésico superior na Vivo, usando o modelo tailflick,
Palavras-chave:
quando comparado ao spilanthol e ao commerctaianldsard EMLA ®. Esses resultados sugerem que tanto o
Anestésico espilantol quanto seu análogo podem ser anestésicos taospicaisfuais úteis na prática clínica.
O

Movimento da cauda

Spilanthol 2009 Elsevier Ltd. Todos os direitos reservados.

Síntese total
Reação sonogashira
IT
CR
US
AN
M

---
∗ Autor correspondente. Tel .: +55 19 35213143; e-: m l pastre@iqm.unicamp.br
jualiio
2 Tetraedro
1. Introdução ACEITO MA eeag variedade
N s você n S t CR r eu e P uma
pr T de compostos com conteúdo flutuante
do mesmo, dependendo do procedimento de extração eoarsosnal
Novas estruturas químicas podem ser isoladas de fatores naal tur, pretendemos explorar ainda mais a anti-retetividade
fontes, e eles têm sido aplicados para o deisrcyoovver de drogas nas com espilantol obtido por síntese química.
últimas décadas com grande sucesso. Na verdade, entre a1n9 d821014,
produtos naturais e moléculas inspirados em theiar ffo sclds Aqui, relatamos uma nova abordagem sintética para obter espilantol
cuolleedrugs 1
representam mais da metade de todos os pequenos m aprovados em alta pureza, bem como um diário simplificado. Os perfis de
permeação de ambos os compostos foram avaliados por meio de
Spilantol, também conhecido como afinina Figura 1), é um em vitro experimentos com uma célula de difusão do tipo Franz, anhd eirt
membro do N- família alquilamida e foi encontrada em severatu
l rnaal
efeito anestésico foi testado no ed vivo usando o modelo de movimento da cauda.
fontes, como Acmella oleracea ( jambu), A. ciliate, A.
oppositifolia, A. radicans, Welelia parviceps e Heliopsis 2. Resultados e discussão
longipes. 2,3 O espilantol é um composto de alto valor agregado e é
disponível comercialmente, no entanto, é vendido com aopxpimr atamente 2.1. Síntese química
80% de pureza isomérica a preços tão altos quanto $ 150,0r01fomg ou 3, quatro no total
Desde seu primeiro isolamento por Gerber em 190
27

4
$ 1.400,00 por 10 mg
sínteses de espilantol foram relatadas para daantd e, estes
Extratos contendo espilantol, ou mesmo o aerpia Alrts de trabalhos são resumidos em Figura 2A. A primeira síntese bem-
sucedida foi relatada por Crombie e colaboradores9i6n3, 2 1 8
jambu, têm sido usados há séculos na medicina tradicional
e culinária em todo o mundo 5 ld. Assim, vários estudos que permitem a elucidação estrutural a respeito das ligações duplas
realizada com espilantol, ou mais comumente com ecn hreid estereoquímica para este produto natural.
extratos de plantas, exibiram uma variedade de características biológicas,
incluindo antipiréticos 6, diurético, 7,8 antimalárico 9, afrodisíaco 1,0,11 Yamamoto e colegas de trabalho abordaram a estratégia
12,13 espécie ni
convergente de síntese de uasina com a adição de aliltituam
anti-inflamatório e, curiosamente, analgésico e anestésico sobre um aldeído como uma etapa fundamental. Spilanthol wasnoebdtaiin 88%

TO
, 1,3-14
atividade, entre muitos outros 5 s
pureza determinada por análises GC-FID 2 eu 9 s, 3,0
Anestésicos locais, um dos mais importantes adevm histórias em
Em 1998, Lu e colegas de trabalho relataram a menor tese de
remédios, são substâncias químicas que causam perda de
espilantol, onde a transformação chave empregou a cotrimerização
sensibilidade devido a um bloqueio da condução nervosannadrothe site
de aplicação 1,6 Quando aplicados topicamente, os anestésicos
produzem perda superficial de sensibilidade na conjuntiva, ucmous
EI da acroleína com dois equivalentes de ocfeatileno, que montou o
fragmento de dieno conjugado weithretq Huired
geometria em 43% de rendimento. No entanto, o uso de acetileisnéia tem
AC
membranas ou pele e, portanto, são usados em nouum sem r edical
desvantagem dessa síntese, uma vez que esse gás é exetrlyem inflamável
especialidades, tal Como odontologia, otorrinolaringogênio, logia
e potencialmente explosivo, apresentando alguma segurança em escala.
oftalmologia, urologia, cirurgia estética, amonh minimizar a para
gerost,
ansiedade, dor ou desconforto causado durante os De 2009 a 2012, Takasago International Corpoonrah tias
procedimentos 16., 17 entrou com várias patentes para a síntese e ussepoilaf nthol 3,1-35
O

A síntese foi desenvolvida em multi-grama escalado, upcrio ng

Os anestésicos tópicos mais amplamente usados são
67,0 g de espilantol de um único lote, e oe nxlitração,
lidnoec, ia benzocaína e prilocaína na forma de géis, creme spsr, ays,
IT

destilação e cristalização foram etapas necessárias para a purificação.

soluções ou pomadas. EML ® A (Mistura Eutética de Anestésicos
No entanto, um controle insuficiente sobre o benefício duplo d afção
Locais), que é composto por 2,5% de lidocaína 2,5%
foi observado: espilantol foi obtido com 78% para
de prilocaína F( figura 1), é frequentemente considerado como o isômero padrão ouro, 18,0% para o a E
CR

11- isômero, e 4% para o E ( 2,6 Z, 8 Z) -

para anestesia tópica 1 uma 8
isômero.

Tendo essas sínteses e suas limitações no interior , eu Nós

procurou desenvolver uma breve síntese de spilanth não

dlsaome simples
US

análogos que não requerem o uso de extryem toexlic ou

produtos químicos perigosos e podem fornecer spilanthothl w giood
controle da geometria do alceno. Assim, propusemos o treosryenthesis
Figura 1. Estruturas químicas de lidocaína, prilocaína asn pd
ilantol. retratado em Figura 2B. Inicialmente, a ligação dupla C2-C3 seria
AN

Apesar de ser geralmente considerado seguro, o usto epoicfal forjada por um oleifoinna de Horner-Wadsworth-Emmons (HWE). O
anestésicos requer cautela. Quando o limite recomendado é produto desta reação é geralmente mais fácil u y quando
torifp

excedido, podem ocorrer efeitos sistêmicos, com a hipertensão, em comparação com uma reação de Wittig, a escolha de
Yamaomaontd Lu, que produz óxido de trifenilfosfina e pode passar
causando sintomas como tontura, dificuldade respiratória sss, s lof
M

por purificações múltiplas 3,6

consciência e até ar cardíaco 1 r 9 Além disso, há relatos de reações
alérgicas, neurotoxicidade, anadrdciotoxicidade que levaram alguns
pacientes a morrer 2 t 0 h- 2,2
Nesse cenário, a investigação de um tolpa mais seguro icnaesthetics é
altamente desejada e oportuna. Quanto ao espilantol oisnccerned, é
considerado seguro pelo European Food Safety Auyth (oEriFt SA) e a
oleorresina de jambu é classificada como um Generallyog Rneiczed como
A olefina C6-C7 pode surgir de um processo seletivo remissão
de alcino 2, que por sua vez, poderia ser gerar vi d uma uma reação
de acoplamento cruzado de Sonogashira entre alquin 5 e e 1-
bromo-1propeno como uma mistura de isômero E s / Z ( 60:40), que é
quase 20 vezes mais barato que o E) (- 1-bromo-1-propeno. A
produção do desejado E- isômero do composto
2 baseou-se em estudos anteriores

Substância segura (GRAS) pela Flavor and Extract Maacntuurfers que demonstrou que E t) (- 1-bromo-1-propeno reage mais rápido em
Association (FEMA), sendo incluída em vários alimaern yt Reações Sonogashira do que t Z h-eisômero 3,7 e que a isomerização da
produtos 2,3-24 dupla ligação pode ocorrer sob certas condições de reaçãoionnds. 38,39

Em nosso trabalho anterior, descobrimos que partes aéreas etanólicas Síntese de fragmen 3 t foi planejado para ser conduzido com
de extsracotf de Acmella oleracea exibiu atividade anestésica significativa, uma amidação direta do correspondente éster etílico com
® efeito. 25,26 Uma vez que extratos geralmente
semelhante ao EMLA isobutilamina.
 3
rr oCu C te
Análogo 8 estaria preparado através da uma simila UMA ex TE , DPparaetr
c Ep Mo
CARA imo
r nós tCo
, R O eu h P shima
T e colegas de trabalho podem ser benéficos
a ausência de semi-redução de alcino F n ig (ure 2C). O alcino sintetizar este fosfonoacetam 4 eu 5 de T. a reação foi realizada
foi pensado para dar mais rigidez à molécula, o que poderia na ausência de solvente, com um pequeno excesf so isobutilamina,
impactar seu perfil de bioatividade e estabilidade. na presença de triflato de lantânio (III) amounotfs catalítico à
temperatura ambiente. Phoosnpohacetamida
3 foi obtido com 93% de rendimento e sem produtos colaterais woe
brseerved,
o que facilitou sua purificação.

Em seguida, voltamos nossa atenção para o fragmento de dieno

conjugado S( cheme 1B). O esqueleto de carbono foi construído usando
uma reação de acoplamento cruzado Sonogashira entre 4e
- peenntyn-1-
ol e 1-bromo-1-propeno como uma mistura E ré/ Z ( 60:40). 46

Nosso primeiro conjunto de otimizações para o Sonogashie raacrtion

Entrada uma Desvio do acima E: Z Razão b Produção (%) c brometo de vinil usado 4 como o reagente limitante e excesso de
alcino 5 Em uma tentativa de favorecer a isomerização de ligação
1 Nenhum 91: 9 56
dupla, experimentos realizados em temperaturas mais altas (1i.0e0. °
2 100 ° C 81:19 44 C) forneceram seletividades e rendimentos baixos Tabela 1, entradas
3 100 ° C, K 2 CO 3 como base 42:58 77 2-4). Quando a reação foi realizada aos 60 T ° aCb (le 1, entradas 5-9)
maiores seletividades foram obtidas, embora os valores sejam baixos para a
4 100 ° C, E 3 tN como base 77:23 64 maioria das bases investigadas. Curiosamente, tuhsee de piperidina como
5 60 ° C 93: 7 45 base forneceu o produto em rendimento almqousatntitativo (entrada 9), mas
com isomerização marginal de fornecimento do isômero indesejado,
6 60 ° C, C 2 sCO 3 como base 60:40 64

TO
enquanto o uso de diisopropilam (em DeIPA,
7 60 ° C, K 2 CO 3 como base 57:43 55 a entrada 5) levou à maior seletividade, com um rendimento de mroadtee.
8 60 ° C, E 3 tN como base 88:12 39 Como brometo de vinil 4 é um composto volátil (p.e. 58-63 ° C), também
tentamos a reação à temperatura ambiente (en) t, que forneceu um
9 60 ° C, piperidina como base 54:46 98
resultado semelhante ao do teste a 60 ° C. Dto mais fácil

EI
configuração experimental, ela foi escolhida como a melhor opção neste
ponto e a reação foi investigada posteriormente. T e uma d b (le 2).
AC
Tabela 1. Otimização da reação chave Sonogashira.
O

uma Escala: 1 mmol de 1-bromo-1-propeno E e / Z ( 60:40), usando um tubo selado, até 15 h. b

Determinado por 1 Análise H NMR do produto bruto c. Rendimento isolado para duplicatas.
IT

Para a segunda rodada de otimizações, alkyn 5 e foi empregado

como o reagente limitante sem alteração significativa no rendimento e
CR

seletividade Mesa 2, entrada 1). Trifenilfosfina foi encontrada como

um aditivo importante para incrementar a seletividade para o E- alceno
2; este reagente diminuiu a formação de sólido escuro, o que foi
atribuído ao paládio blaacnkd
US

, nas próximas

modificações incluíram a presença de P 3 PAhlso, observamos

um aumento na cinética da reação como o renacw tioent para
conclusão em apenas 2 horas.
AN

Dos solventes avaliados, o DMF favoreceu uma maior

seletividade, variando de 94: 6 a> 95: 5 com modeeraytield
(entradas 2-4). Uso de Pd (P 3 P) 2 hCl 2 em vez de Pd (PP 3) h 4 ou
diminuindo o carregamento do catalisador de paládio levou a todos r
M

seletividades ou rendimentos (entradas 5-7). Notavelmente, eynt3r apresenta

maior rendimento, mas não foi escolhido durante o esfilo síntese sintética
porque o isômero menor não poderia ser separatesdtabnydard
técnicas, como apontado anteriormente. Embora ytiheeld não
pudesse ser melhorado além de 53%, DIPA foi a base de cálculo,
pois forneceu o melhor compromisso entre rendimento e
diastereosseletividade do produto. Sob o conjunto bco en
condições,

Fig. 2. (A) Sínteses anteriores de spilantho B l;) (retrosíntese de espilantol e ( o desejado E 6-isômero de 2 foi obtido em 53% de rendimento em mais
C) análogo 8 nesse trabalho. razão diastereomérica de 95: 5, conforme determinado por N1M RH
análise.
Inicialmente, exploramos a síntese de (2- (isobuatm ilino) -2-
oxoetil) fragmen de fosfonato 3 t ( Esquema 1A). Este andaime
foi sintetizado por diferentes métodos que irreedqu várias
etapas, o uso de reagentes tóxicos ou fuhrendismoderate
rendimentos. 40-44 Imaginamos que uma metodologia descrita por
4 Tetraedro
Mesa 2. Otimização adicional do UMA k C e Cy E S P
nãooET
gDarsh M uma ANUSCRIPT
reação uma

Escala: 1 mmol de 4-pentin-1-ol, salvo indicação em contrário

uma
. b iDeterminado por 1 H
Análise NMR do produto bruto
c. Rendimento isolado para duplicatas d. Escala: 1 mmol a Entrada uma Desvio do acima E: Z Razão b Produção (%) c

10 mmol de 4-pentin-1-ol; seletividades mais baixas são mantidas em escalas maiores.

e 15 h. 1 Sem PPh3 91: 9 56
2d Nenhum 93: 7 a> 95: 5 53
A diastereosseletividade obtida para o Sonogra ascrioss-
a reação de acoplamento foi confirmada pelo uso de pu E r) e-1 (-bromo- 3 THF como solvente 79:21 77
1-propeno (obtido após isomerização de E º/ Z e mistura sob 4 MeCN como solvente 84:16 38
condições básicas 3) 9 e ( Z) - 1-bromo-1-propeno (obtido de fontes
5 Pd (PPh3) 2 Cl 2 como fonte de Pd 83:17 49
comerciais). Assim, empregando piperidinebaasse em DMF em
temperatura ambiente, a Sonogashira addu E c) -tsa (nd ( Z) - 6e 2,5 mol% de Pd (PP 3 h) 4 > 95: 5 20
2 foram obtidos em 81% e 68%, respectivamente, com 7e 1,0 mol% de Pd (PP 3 h) 4 78:22 11
isomerização de ligação dupla perceptível (> 95: 5 d.cr.oardcing
para 1 Análise de H NMR). Os picos em 6,04 e 5,90 ppm em 1 HthN eMR
espectros foram inequivocamente atribuídos a t Eh) e- (e ( Z) - isômeros,
respectivamente, e permitiu uma fácil avaliação

TO
diastereomeriiocarastos (ver Figuras S7, S10, S12 e S14 nas
Informações de Apoio).
A etapa subsequente para produzir a chave d 9 ieinnevolveu um Z-
semi-redução seletiva de alcino com uma liga de cz, icnopper e
prata na presença de trimetilsilil cloridemo (protocolo de Boland
diferente), com base no relatório de Han 4 s 7 A redução do alcino
eTnh.e prosseguiu com 59% de rendimento com esterco completo ivlietyc
EI
AC
para o expectador Z isômero d (> 95: 5 por 1 Análise de H NMR).

Finalmente, a conclusão do spilanthol syntherseiq procurado o

conexão dos fragmentos e geração de rad thdiouble vínculo
com E- geometria. Para realizar esta tarefa, alcoh 9 ai eu como
O

submetido a uma oxidação de Swern, e o anúncio cru ldeehwyas então

empregado em uma reação de Horner-Wadsworth-Emmons com
fosfonoacetamida 3 e. O alceno recém-criado apresentava
IT

exclusivamente um E- geometria (> 95: 5 por 1 Análise de H NMR) e

espilantol foi assim obtido com rendimento de 63%, ao longo de duas
CR

etapas. Seus dados espectroscópicos 1 Mão 13 C NMR) eram idênticos

cercial
aos de uma amostra autêntica de espilantol obtida de ummilímetros
fonte (consulte as informações de suporte para obter detalhes).

A síntese de analogu 8 e exigiu uma sequência semelhante

US

Esquema 1. Síntese de espilantol e análogo 8 ue

( Esquema 1C), mas nenhuma redução de alcino foi necessária. Para
kene com
este produto final, o isômero menor constituído por tahle
8 Z- a geometria pode ser removida após o flash padrão 2.2. Avaliação biológica
cromatografia. Por outro lado, o min Z o-ris8ômero de
AN

o espilantol não pôde ser removido pela mesma prorcia, por esse
motivo, estudamos extensivamente o acoplamento Sgoansohira
inicial com o objetivo de E seletividade r.
M
2.2.1. Estudos de permeação in vitro
Visando a aplicação de espilantol e analoeg 8 u como
anestésicos tópicos, ambos os compostos foram incorporados
à formulação dos filmes bioadesivos (ver experimentoação para

detalhes). o em vitro a permeabilidade foi avaliada usando células de

difusão vertical Franztype, um dispositivo de comunicação tu nsl ed para
avaliar a permeação de compostos através deste não
skr
mucosa 4,8 Como barreira, foi usada pele de orelha de porco dermatomizada,
devido às semelhanças entre os tecidos de porco e a pele de porco. 4,9

Outros grupos de pesquisa descreveram que spilawntahsolable

para permear a pele e a mucosa, e também poderia ser um
potenciador, aumentando a permeação de alguns sucbesstatn
hrough
a derme 5,0-52 Em nosso estudo, espilantol e análogo 8 exibiu um perfil de
permeação semelhante através de paigr sekin dermatomed, como pode
ser visto em Figura 3 e o perfil de permeação do espilantol
era compatível com os observados na litera 5 t 1 fluxo urTeh.e
(espilantol: 0,78 ± 0,11, analógico 8: 0,88
e ± 0,09 µ g.cm -2. h -1) e
 5
tempo de atraso (espilantol: 0,66 ± 0,41, analógico 8 u: e UMA0,8 C 1 C ± E 0. P43TE uma
h) D para MA ouNparaSC nseReu t P ação
sh você oT f (5 min). Ambas as composições tratado
espilantol e analogu 8 e eram idênticos dentro dos limites de anestesia semelhantes ou superiores ao EM ® L, Athe anestésico atualmente
erro experimental. considerado o padrão ouro em análises tópicas. É importante
destacar que o efeito observado sfoprilantol e seu análogo
exigiram doses extremamente baixas (approtxeilm ya100
µ g).

A)

T
IP
B)

Fig. 3. Perfis de permeação de espilantol e análogo 8 uaplicado sob

condições de dose finita (valores médios ± SEM)

Este resultado pode ser entendido a partir do m cuollaer

estruturas e parâmetros físicos, como a área de superfície logndPpaolar

que ambos os compostos compartilham. Sincentshpoillaand
análogo 8 exibiram perfis de permeação semelhantes, então
avaliamos sua atividade anestésica.
2.2.2. In v ivo anes o efeito t ic
O modelo de movimento da cauda foi empregado para a avaliação
anestésica de espilantol e análogos 8 e. Este modelo, descrito pela
3, tem sido usado para avaliar o
primeira vez por D'Amour e Smit 5 h
efeito anestésico de formulações tópicas por vários grra
oups 5,4-56
Fig. 4. Efeitos da administração tópica de EML ® A, espilantol e ana logu 8 e
Os filmes bioadesivos contendo spilantol e loagnuae 8 no ensaio de movimento da cauda. O decurso do tempo (min) mostra a porcentagem
foram preparados de acordo com nosso trabalho anterior usando elevada de animais com anestesia (A) e a duração da anestesia ((nB) =. 5-6 / grupo). Os
7( Vejo
hidroxietilcelulose de polímero estrutural (HEC) e alguns adnjutsv 5 uma dados expressos como média ± SEM AUC para MPE (%) p <0,001 wshpeilnantol e EMLA
seção experimental e informações de apoio fm orore foram comparados com análogos 8 e . Duração da anestesia: ** p <0,01. 1-
forma de análise de variância com teste postthoc de Tukey.
detalhes). Inicialmente, um filme bioadesivo composto de hidroxietil
M

celulose, Twee ® n80, glicerina e transcut ® o, lprepared sem um 3. Conclusões

composto anestésico foi avaliado como um nega otnivtreolc, e
não mostrou efeito antinociceptivo (dados não mostrados FIG no ure 4), Este trabalho combinou química sintética moderna e bioensaios
TO

que confirmou que a base do filme está inativa. para abordar o desenvolvimento de anestésicos csentistry,
cirurgias, entre outras aplicações. Nós apresentamosee anão
Observamos através do teste de movimento da cauda que sptihlaonl e
para a síntese do N espilantol de e-alquilamida, que apresenta
EMLA ® mostrou anestesia semelhante duratio F n ig (ure 4), enquanto
controle total sobre a geometria de seus threebdleoubonds. UMA
análogo 8 apresentou um efeito anestésico aumentado (p <0,01s). análogo simplificado também foi preparado com um alcrenpelacing
EI

Levando em consideração os estudos anteriores w ja isto m h bu extratos, nosso

a Z- alceno, que exigia um passo a menos quando comparado com o espilantol.
trabalho confirma que a atividade antinociceptiva n isde
eu ed devido a
Ambos os compostos apresentaram perosffilor semelhante em vitro
a presença de espilantol, e não a um asso ocniaotif vários
permeação através da pele da orelha de porco dermatomed. Theeirsth um
etic
AC

componentes químicos.
Em vista da atividade superior exibida pelo anauloeg 8,
formulamos a hipótese de que o grupo alcino em compou 8
ndimpo restrições conformacionais na molécula quando caormedp para
espilantol, que pode aumentar a afinidade ou seletividade com um
receptor de dor. Novos estudos estão sendo realizados brygorouup a fim
de elucidar o modo de ação dos análogos do spilantahnodl.
perfil foi avaliado na Vivo com o modelo de movimento da cauda e analógico
8 mostrou um efeito superior quando comparado ao espilantol e ao
anestésico comercial EM ® L.Estes resultados abrem a porta para a
exploração de novos derivados de espilantol por outras investigações de
compostos 8 das uma ferramenta potencial para a medicina.
4. Seção experimental

Apesar dos avanços recentes na anestesia tópica e, rewah 4.1. Síntese química
variedade de novos sistemas de entrega de drogas têm sido
Os materiais de partida e os reagentes foram obtidos de fontes
usados para aprimorar e melhorar a anestesia, anestesia tópicacsain
retim
58 comerciais e usados como recebidos, a menos que ee
pouco usado. Este cenário é parcialmente devido ao longo início do especificado. Ação de diclorometano, trietilamina, diisopirloapmina

que a maioria dos anestésicos tópicos requer, também sem deficiência (DIPA) foram tratados com hidreto de cálcio e destilado ee
antes
de eficácia em algum procedimento 5 r 9 esT. os resultados apresentados aqui usam. O tetrahidrofurano (THF) foi tratado com metassiloicídio
mostrou que o análogo 8 e o espilantol são anestésicos potentes com
6 Tetraedro
e benzofenona e destilada antes UMA seE P . T D
minério CC você NE y D MA
r, N- 6 2N Hz S ,2h
você CR ), 5 T3 (dsext J, = 15,8, 1,9 Hz, 1H), 6,04 (dq J, =
IP4
dimetilformamida (DMF) e dimetilsulfóxido (DMSO nós) re 15,8, 6,8 Hz, 1H). 13 C NMR (62,9 MHz, CDC 3 eu): δ 15,8 (CH 2),
obtido de Aldrich. As reações anidras foram realizadas com 18,3 (CH 3), 31,3 (CH 2), 61,7 (CH 2), 79,7 (C), 87,4 (C), 110,8 (CH),
agitação contínua sob uma atmosfera de nitrogênio. 138,3 (CH). Dados obtidos para th Z e) - (isômero: 1 H NMR
O progresso das reações foi monitorado por thinr-laye (CDCl 3, 400 MHz): δ 1,57 (s, 1H), 1,81 (quin J t, = 6,5 Hz, 2H),
análise de cromatografia (TLC) (Merck, sílica gel F 62054 em 1,85 (dd, J = 6,8, 1,7 Hz, 3H), 2,49 (td J, = 6,9, 2,1 Hz, 2H), 3,79
placas de alumínio), salvo indicação em contrário. As purificações de (t, J = 6,1 Hz, 2H), 5,45 (sexo d J t, = 10,7, 1,9 Hz, 1H), 5,90 (dq J,
flasohmcahtrography foram realizadas com sílica gel 60, 242400- = 9,7, 6,8 Hz, 1H). 13 C NMR (101 MHz, CDC 3 eu): δ 15,7 (CH 3),
mesh, Sigma-Aldrich. 1 H NMR, 13 C NMR e 31 Os espectros de P NMR 16,1 (CH 2), 31,5 (CH 2), 61,9 (CH 2), 77,8 (C), 93,8 (C), 110,1 (CH),
foram registrados no Bruker 250, 400 e 600 MHz espectrom s, ette hre 137,3 (CH).
mudanças químicas δ () foram relatados em partes por milhão (ppm)
4.1.3. (4Z, 6E) -octa-4, 6-di en-1-ol ( 9)
em relação ao solvente deuterado como o dsatradn interno (CDC 3 eu:
7,26 ppm para 1 H NMR e 77,0 ppm para 13 C NMR), acoplamento Pó de zinco (5,00 g, 76 mmol, 76 eq.) E
2 OH (30 mL) foram

constantes J () estão em hertz (Hz). As seguintes abreviaturas foram adicionadas a um frasco de fundo redondo, e argônio foi usado bd heubtblrough
para
designar multiplicidades de deslocamento químico =: ssinglet, d = a mistura com agitação em temperatura ambiente por m 15 pol. Próximo,

dupleto, t = tripleto, q = quarteto, quint = quintm et, = multipleto, br. o borbulhamento foi interrompido e a atmosfera de argônio foi
= sinal amplo. Os espectros de NMR foram processados usando ACD / NMR mantido, Cu (OAc 2 •) H 2 O (1,00 g, 4,9 mmol, 4,9 eq.) Foi
Processor Academic Edition versão 12.01. Alta retsioonlumassa adicionada removendo o septo e adicionando o souliicdklqy e
15 pol. Então
espectros (HRMS) foram registrados em um Waters Xevo Q-T da mistura de reação deixada em agitação por mais um
aparelho operando em eletrospraydemo de íon positivo (ESI +). Os espectros
AgNO 3 ( 600 mg, 3,5 mmol, 3,5 eq.) Foram adicionados removendo o septo
de infravermelho da transformada de Fourier (FTIR) foram re dceodr em um
e adicionando o sólido rapidamente. Esta etapaxiosteérmica e
Thermo Scientific Nicolet iS5, o principal absoiorp nts estão listados
a temperatura da mistura reaccional diminuiu ligeiramente. o

TO
em cm -1. Os nomes IUPAC dos compostos foram gerados usando-se a reação foi agitada por 30 min. Em seguida, o tecido sólido; classificado por
ChemBioDraw Ultra 12.0. filtração sob uma corrente de nitrogênio, e foi lavada ele com
d H2 O
(3 x 25 mL), metanol (3 x 25 mL), acetona (3 xm 2L
5), e
4.1.1. Die til (2- (i sobut ilamino) -2oxoetil) Et 2 O (3 x 25 mL). A liga ainda úmida com E 2 Ot foi coletado
fosfonato ( 3) e adicionado a uma solução de alquin 2 e (124 mg, 1,0 mmol, 1 eq.)

carregado com triflato hidratado de lantânio (III) (La (fO ) 3 T • xH 2 O,

325 mg, 10 mol%), o frasco foi aquecido com uma galinha ato
- gvuer 220
EI
Um frasco de fundo redondo de 5 mL com um agitador magnético foi diluído em MeOH / H 2 O (15 mL, 1: 1) sob um 2 Natmosphere, e
Foi adicionado TMSCl (1,3 mL, 10 mmol, 10 eq.). O rio en acwt como

agitada durante 30 h e uma segunda porção de TMSCl (1m.3L, 10 mmol,

AC
° C por 15 min sob vácuo (<1 mbar), e foi filw leid
o seco 10 eq.) foi adicionada. A reação foi agitada por um fsoercond
N 2 Em seguida, trietil fosfonoacetato 7 e, (1,136 g, 4,9 mmol, período de 1,0 de 30 h, então a mistura de reação foi produzida atravéseq.)
de um
e isobutilamina 6, ( 507 mg, 6,9 mmol, 1,4 eq.) Foram coluna de Celite e o sólido foi lavado com EtOAcx (840
adicionado através da seringa n (o reação exotérmica foi observada durante mL). A fase líquida foi lavada com salmoura (50 mLh) e, t
adição de todos os produtos químicos). A reação foi agitada durante 4 h na fase orgânica foi seca (MgS 4) ,Oconcentrado in vacuo e a
O

temperatura ambiente, então a mistura bruta foi fundida revendo um produto em bruto foi purificado por cromatografia flash SyiO 2 (,
coluna de sílica usando C 2 HCl 2: MeOH (100: 0 a 90:10) como eluente hexanos: EtOAc, 75:25) para fornecer a matriz 9 ne (74,4 mg, 0,59 para
IT

fornecer a amida 3 ( 1,15 g, 4,6 mmol) como um óleo incolor em mmol) como um óleo incolor com 59% de rendimento. f R0,46 (SiO 2,
Rendimento de 93%. R f 0,19 (SiO 2, EtOAc). 1 H NMR (250 MHz, CDC 3 eu): hexanos / EtOAc 60:40 1) H. NMR (250 MHz, CDC 3 eu): δ 1,51 (br.
δ 0,85 (d, J = 6,6 Hz, 6H), 1,27 (t J, = 7,1 Hz, 6H), 1,72 (não J, = s, 1H), 1,66 (quint. J, = 7,0 Hz, 2H), 1,77 (d J, = 6,5 Hz, 3H),
CR

6,9 Hz, 1H), 2,75 (s, 1H), 2,83 (s, 1H), 3,02 J ( t =, 6,3 Hz, 2H),
4,07 (dq, J = 8,2, 7,1 Hz, 4H), 6,92 (s, 1H 3) 1 P . NMR (101 MHz,
CDCl 3): δ 22,8-23,5 (m, 1P) 1,3 C NMR (62,9 MHz, CDC 3 eu) δ:
16,2 (d, J CP = 6,4 Hz, CH 3), 19,9 (2xCH 3), 28,2 (CH), 34,8 (d,
US
2,25 (q, J = 7,2 Hz, 2H), 3,66 (t J, = 6,5 Hz, 2H), 5,29 (dt J, =
10,7, 7,6 Hz, 1H), 5,68 (dq J, = 14,9, 6,6 Hz, 1H), 5,97 ( J t, =
10,9 Hz, 1H), 6,04 (ddt J, = 15,0, 11,1, 1,3 Hz) 1,3 C NMR (62,9
MHz, CDCl 3): δ 18,7 (CH 3), 23,9 (CH 2), 32,4 (CH 2), 62,2 (CH 2),

J CP = 131 Hz, CH 2), 47,0 (CH 2), 62,5 (d, J CP = 6,9 Hz, 2CH 2), 126,7 (CH), 128,5 (CH), 129,1 (CH), 129,5 (CH).
165,8 (d, J CP = 3,2 Hz, C).
4.1.4. Spi lantol ( 1)
4.1.2. (E) -oc t -6-en-4-in-1-ol ( 2) Um frasco de fundo redondo sob um 2 A natmosfera foi carregada
AN

Um frasco de fundo redondo foi carregado com P 3 P(3h47 mg, 1,3 com CH seco 2 Cl 2 ( 8 mL) e cloreto de oxalil (14 µ 4L, 1,7 mmol,
mmol, 10 mol%), CuI (382 mg, 2,0 mmol, 15 mol%) e 2 eq.). A solução foi resfriada a -78 ° C, e arnohuysdDMSO Pd (PPh
3) 4 ( 757 mg, 0,65 mmol, 5 mol%), a atmosfera era (181 µ L, 2,5 mmol, 3 eq.) Foi adicionado (a evolução do gás foi
trocado por seco 2 N. Em seguida, DMF anidra (26 mL), observada). A reação foi agitada durante 15 min, ta hlecnohol 9
diisopropilamina (3,7 mL, 26 mmol, 2 eq.), 1-brom 1-op-ropeno (107 mg, 0,85 mmol, 1 eq.) Foi adicionado à mistura
M

( 4, 60:40 mistura de E / Z isômeros, 1,4 mL, 16 mmol, 1,2 eq.) e solução em CH 2 Cl 2 ( 2 mL + 2 mL de lavagem). O pent-4-in-1-ol
resultante 5 (, 1,3 mL, 13 mmol, 1 eq.) Foram adicionados à solução foi agitada por 1 h a -78 ° C. A seguir, seque 3 NEt (711 µ EU,
frasco por esta ordem, à temperatura ambiente. O rie oa
ncw
tão mexido 4,2 mmol, 6 eq.) Foi adicionado, o banho de resfriamento foi muito ed
moand
por 24 h em temperatura ambiente, então 2 OH (200 mL) e E 2 Ot (200 a reação foi ainda agitada durante 30 min. Thectrieoan era
mL) foram adicionados, a mistura foi agitada vigorosamente sley, otrganic diluído com E 2 tO (15 mL), e a fase orgânica foi extraída com H 2 O
fase foi separada, lavada com 2 para h H (100 mL) e salmoura (100 (2 x 10 mL), salmoura (10 mL), seca (MgS 4) O ,e
mL), seco (MgSO 4) e concentrado in vacuo ( 35 ° C, 600-50 concentrado sob pressão reduzida (u1r0e0 mbar, 25 ° C, devido à
mbar). Uma amostra foi retirada para medir E º/ Z e proporção do volatilidade do aldeído). O produto bruto foi usado na etapa HWE
produto (variando de 93: 7 a> 95: 5 o E f / Z Razão). A seguir, o sem purificação adicional.
em bruto foi purificado por cromatografia em coluna flashiO 2 (, S
Fosfonato 3 ( 278 mg, 1,1 mmol, 1,3 eq.) Foi colocado em um frasco
hexanos: EtOAc, 85:15 a 75:25) para fornecer álcool 2 ho (1862 mg,
de fundo redondo com uma barra de agitação, a atmosfera Ehewras
6,9 mmol) como um óleo marrom alaranjado com rendimento de 53% f. 0R . 42 (SiO 2,
trocado por seco 2 Nand THF anidro (10 mL) foi adicionado. Em
hexanos / EtOAc 60:40 1) H. NMR (250 MHz, CDC 3 eu): δ 1,67-1,85
(m, 5H), 1,96 (s, 1H), 2,38 (td J, = 6,9, 1,7 Hz, 2H), 3,72 ( J t, =
seguida, a solução foi resfriada a 0 ° C, e NaH em mailne oril
 7
(60% p / p, 170 mg, 4,2 mmol, 5 eq.) Foi um UMA dd ir D
C ed C b E y P ré T nm E tvhie MA
H N
RM : m / z calculado para C
você S SC ( E R S eu I + P ) T 14 H 22 NÃO + [M + H +]
septo e adicionando o sólido rapidamente. Em seguida, cruddeehaylde (da 220,1696, encontrado 220,1710.
etapa de Swern) foi adicionado à reação como um soluntiT Oh
nFi (2 mL
4.2. Ensaios biológicos
+ 2 mL de lavagem), o banho de resfriamento foi removido, a thned

a reação foi agitada durante 30 min. A reação foi rápida ueed por
adição de solução aquosa de HCl (1 M, 10 mL), o ixtm
você era
extraída com EtOAc (15 mL), e as fases orgânicas w
lavado com salmoura (15 mL), seco (MgS 4) Oand concentrado
sob pressão reduzida. O produto foi purificado flabsyh
cromatografia (Si 2 O, hexanos: EtOAc, 75:25) para fornecer
Todos os reagentes e solventes eram de qualidade analítica.
Mistura de acetato de lidocaína 2,5% e prilocaína 2,5% (5% MLEA ®
creme) foi obtido na AstraZeneca (São Paulo, il) B. raz
4.2.1. Bioadesivo íon produto de filme
Hidroxietil celulose (2,5 g) foi adicionado para desdobrar comedor

espilantol ( 1, 118 mg, 0,53 mmol) como um óleo incolor em 63% dy.iel
-1
R f 0,20 (SiO 2, hexanos / EtOAc 75:25). FTIR (ATR, c ): 3280,
2957, 2927, 2870, 1668, 1627, 1545, 1235, 1159 ,, 994748, 818,
618. 1 H NMR (600 MHz, CDC 3 eu): δ 0,89 (d, J = 6,8 Hz, 6H),
1,70 (d, J = 6,4 Hz, 3H), 1,70-1,81 (m, 1H), 2,23 ( J q = , 7,2 Hz,
2H), 2,29 (q, J = 7,2 Hz, 2H), 3,12 (t J, = 6,3 Hz, 2H), 5,23 (dt J,
= 10,3, 7,5 Hz, 1H), 5,67 (dq J, = 14,7, 7,0 Hz, 1H), 5,81 (d J, =
15,2, 1H), 5,78-5,88 (m, 1H), 5,94 J ( t, = 10,9, 6,8 Hz, 1H), 6,26 (dd,
J = 13,4, 12,6 Hz, 1H), 6,80 (d J t, = 15,3, 7,0 Hz, 1H) 1,3 C
(100 mL) sob aquecimento (55 ± 2 ° C) e agitação, gel
m translúcido de tiluna foi obtido. A agitação foi pará-lo thne
a mistura atingiu a temperatura ambiente. A seguir, Tw ® ee8n0 (0,7
g), glicerina (0,7 g) e Transcu ®
tol (2,5 g) foram adicionados e
homogeneizado. Spilantho 1 1, (4,14 mg, 18,7 µ mol) ou analógico 8
(4,12 mg, 18,8 µ mol) foram diluídos com metanol (máximo de
0,5 mL) e as soluções foram adicionadas a um portio3n0ogf de gel. As
misturas resultantes foram colocadas em moldes de Nylon, um filmes thnedse
foram secos durante 24 h a 40 ° C. Então, os filmes foram criados cu
com um

NMR (151 MHz, CDC 3 eu): δ 18,3 (CH 3), 20,1 (2CH 3), 26,4 (CH 2),
28,6 (CH), 32,1 (CH 2), 46,9 (CH 2), 124,2 (CH), 126,7 (CH),
127,6 (CH), 129,4 (CH), 129,9 (CH), 143,5 (CH), 166C
punção circular (17 mm de diâmetro).
4.2.2. Estudos de permeação in vitro
. 1). (
Em vitro estudos de permeação foram realizados usando células de

TO
HRMS (ESI +): m / z calculado para C 14 H 24 NO + [M + H +] 222,1852,
difusão vertical do tipo Franz encamisadas (Manual DiffusnioTest
encontrado 222,1846.
System l, Hanson Research Corporation, ChatsworAth,, UCSA) com uma
4.1.5. (2E, 8E) -N- i sobuty ldeca-2, 8-dien-6-inamida ( 8) área de permeação de 1,77 2 cm e um compartimento receptor
volume de 7 mL. A jaqueta foi acoplada a um watehr b (F Aitsher

EI
Um frasco de fundo redondo sob um 2 Natmosphere foi carregada como científica ®) a 32 ° C. Pele dermatomizada de orelha de porco
(Nouvag AG), com CH seca 2 Cl 2 ( 10 mL) e cloreto de oxalil (16 µ 9L, 2,0 mmol, obtido em um matadouro local (Frigoríficoge
2 eq.). A solução foi resfriada a -78 ° C, e arnohuysdDMSO localizado em Piracicaba, SP, Brasil, 22 ° 40'09.2 "S4407'2 ° 6,6" W)
Alnelli,
AC
(213 µ L, 3,0 mmol, 3 eq.) Foi adicionado (a evolução de gás foi usada como barreira em todos os experimentos. Skaisn extirpado
observado). A reação foi agitada durante 15 min, ta hlecnohol 2 da parte externa da orelha, separada de fora hdassustador
(124 mg, 1,0 mmol, 1 eq.) Foi adicionado à cartilagem da solução reacatsioan usando um bisturi, dermatomizado até 500µicmk, e
polegada 2 Cl 2 ( 2 mL + 2 mL de lavagem). A solução resultante foi congelada em −20 ° C até ser usado. 55,60 Bioadesivo e pele eram
agitado por 1 h a -78 ° C. A seguir, seque 3 E Nt (836 µ L, 6,0 mmol, 6 preso entre o compartimento doador e receptor
O

Tnhtes.

eq.) foi adicionado, o banho de resfriamento foi removido, e t reacção bioadesivos foram aplicados em condições de dose finita,
foi ainda agitado durante 30 min. A reação foi tdeidluwith Et 2 onssa, linemetanol (70:30, v / v) solução foi usada no re tocar
IT

O (20 mL), e a fase orgânica foi extraída com 2 iO 2x

th (H compartimento para garantir condições de afundamento e agitação
10 mL), salmoura (10 mL), seca (MgS 4 O ), e concentrado no magnética constante maindtaiunneder (350 rpm). As amostras (4µ0L0)
vácuo ( 120 mbar, 25 ° C, devido à volatilidade do aldeído e) ele foram periodicamente retiradas do compartimento receptor e
CR

produto foi usado na etapa HWE sem picuartiifon adicional.
Fosfonato 3 ( 327 mg, 1,3 mmol, 1,3 eq.) Foi colocado em frasco
de fundo redondo com uma barra agitadora, a atmosfera phwas
US
imediatamente substituídas pelo mesmo volume de solução,
titoanqueando os efeitos da diluição.
uma
As amostras foram transferidas para cromatografia vfo iarls

trocado por seco 2 Nand THF anidro (10 mL) foi adicionado. quantificação de espilantol e análogo por HPLCala ysnis usando
Em seguida, a solução foi resfriada a 0 ° C, e NaH em mailne oril um sistema Waters Alliance HPLC-DAD (Waters Corp., Mridlf, o MA,
(60% p / p, 200 mg, 5 mmol, 5 eq.) Foi adicionado por remotvhineg EUA) operando com um XTerr   coluna aMS C18 (150 mm x 2,1 mm
septo e adição do sólido rapidamente. Em seguida, o heildde bruto id, 5 µm; Waters) a 40 ° C. O mobilheaspe consistia em
AN

obtido foi adicionado à reação como um solutioTnHiFn (2 mL + acetonitrila / água 40:60 v / v, com fluorato de 0,3 mL / min. A
2 mL de lavagem), o banho de resfriamento foi removido, e a reação absorvância foi monitorada a 232 nm. A quantificação de espilantol
tônica foi agitada durante 30 min. A reação foi rápida ueed por e análogo 8 foi conduzido usando
adição de NH 4 Solução saturada de Cl (15 mL), a mistura foi a curva de calibração externa com 6 pontos em um controle faixa de íons
- 1, usando metanol como diluente. O volume de
extraído com EtOAc (15 mL), e as fases orgânicas foram de 2 a 50 µg.mL
M

lavado com salmoura (15 mL), seco (MgS 4) A injeção concentrada de Oe foi de 20 µL. Todas as soluções foram filtradas a 0,45
sob pressão reduzida. O produto bruto foi removido da membrana flash µm de PVDF antes da análise.
cromatografia em coluna (S 2 iO , hexanos: EtOAc, 75:25 a 60:40)
A quantidade cumulativa de espilantol ou analogu 8 e
fornecer a amida 8 ( 112 mg, 0,51 mmol) como um sólido branco em
transportado pela pele foi traçado como um funncotfiotime.
Rendimento de 51%. R f 0,15 (SiO 2, hexanos / EtOAc 75:25). FTIR (ATR,
Seu fluxo através da barreira foi calculado a partir dee sth galope do
cm- 1): 3291, 2959, 2914, 2870, 1666, 1625, 1545, 1313243,6,
porção linear da curva e o intervalo de tempo que ocorreu a partir do
1220, 950, 650 1 H NMR (250 MHz, CDC 3 eu): δ 0,87 (d, J = 6,6
interceptar com o eixo do tempo.
Hz, 6H), 1,70 (dd J, = 6,3, 1,6 Hz, 3H), 1,70-1,84 (m, 1H), 2,30-
2,45 (m, 4H), 3,09 (t J, = 6,3 Hz, 2H), 5,43 (dq J, = 15,8, 1,7 Hz, 1H), 4.2.3. Efectuar a avaliação da eficácia ic tica na vi vo
5,85 (d, J = 15,3, 1,7 Hz, 1H), 6,00 (dq J, = 15,6, 6,8 Hz, 1H), Camundongos machos suíços (25-40 g) da Multidisciplinary
5,96-6,12 (m, 1H), 6,69-6,84 (d J t, = 15,3, 6,4 Hz, 1H) 1,3 C Cteernof Biological Investigation of Laboratory Animals (CEB MI
NMR (62,9 MHz, CDC 3 eu): δ 18,3 (CH 3), 18,4 (CH 2), 20,0 Universidade Estadual de Campinas) foram mantidos em ciclos claro / escuro
(2CH 3), 28,4 (CH), 31,2 (CH 2), 46,8 (CH 2), 79,9 (C), 86,6 (C), de 22 ± 2u ° nCder de 12 h. Aprovação para estes assw ayass fornecido
110,7 (CH), 124,7 (CH), 138,4 (CH), 141,8 (CH), 165C . 8). ( pelo Comitê de Ética Animal da Universidade de Cam napsi
8 Tetraedro
(protocolo nº 4137-1). Os ratos estavam divididos UMA
ed C eu não
C t EP
rs gufT o E op D 6 MANU
SC R. Seua
10 h r m , VT
P uma .; Boonen, J .; Chauhan, NS; Thakur, M De .;

animais. Spiegeleer, B .; Dixit, V. K P . itomedicina. 2011, 18, 1161-1169.

11. da Rocha, CF; Lima, YMS; Carvalho, H. Oi.n; para P, RC;
Eficácia anestésica tópica de filmes bioadesivos para cobertura de Ferreira, IM; Castro, AN; Lima, CS Carvoa, lhJ. CT J.
espilantol ( 1) ou analógico 8 foi avaliada com o ensaio de movimento da Ethnopharmacol. 2018, 214, 301-308.
12. Wu, LC; Fan, NC; Lin, MH; Chu, IR; HuanSg., J .; Hu, CY; Han, SY J.
cauda. O mouse foi colocado em um restw de acrílico Rahinilte o Agric. Food Chem. 2008, 56, 2341-2349.
a porção distal de sua cauda (10 cm) foi mantida (ver Informações 13. Escobedo-Martínez, C .; Guzmán-Gutiérrez, SL; nH áned
r ez-
de Apoio). A cauda foi submetida a rtroadi iação de uma lâmpada Méndez, MM; Cassani, J .; Trujillo-Valdivia, AO ; rozco-
incandescente (55 ° C), e o agudo de tempo para retirada da cauda Castellanos, LM Enríquez, R. G Ré. v. Bras. Farmacogn. 2017,
(latência) foi considerado como um averrseisvp. eonse para
27, 214-219.
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aquecer. A linha de base foi registrada para cada animal após o Nascimento, AM; de Souza, LM; Cipriani, T .; R B.aggio, C.
início do experimento, e apenas aqueles com ae
ss abaixo H .; Werner, MF J. Ethnopharmacol. 2013, 150, 583-589.
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máximo mathgee para irradiação da cauda foi estasbhlei d em 10 s Reyes-Agüero, J. A P.harm. Biol. 2010, 48, 195-200.
(valor de corte). Filmes bioadesivos contendo spnitlhaol ( 1) ou 16. Cantisani, C .; Macaluso, L .; Frascani, F .; PaoliG nº;, D'Andrea
V .; Richetta, AG; Calvieri, S R . ecent Pat. Inflamação. Alergia
analógico 8 foram comparados com EML ® A (150 mg / animal, 7,5
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TO
retirada da cauda, que foi de pelo menos 50% hheig r do que o 2006, 142, 1024-1026.
valor da linha de base. Os dados foram relatados como o pte argumento do 22. Hasan, B .; Asif, T .; Hasan, M C.ureus 2017, 9, e1275.
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partir da seguinte relação. 24. Materiais EPoFC. Parecer científico sobre FlavouringroG

EI
acima

Avaliação 303, Revisão 1 (FGE.303Rev1): Spilan l thfroom

% MPE = [(latência de teste - latência de linha de base) / (corte tim
ff e - grupo químico 30. EFSA Journ 2 uma 0 eu. 15, 13
latência de linha de base) x 100], área sob a curva wecaosrdr ed para 25. de Freitas-Blanco, VS; Franz-Montan, M .; Gropp Fo. , C .; de
AC
cada grupo experimental. Carvalho, JE; Figueira, GM; Serpe, L .; SouIs.aM ,. O .;
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Os autores declaram os seguintes concorrentes finos um l ci R .; Rodrigues, RA Evid. Complemento baseado. Alternat. Med.
O

interesses: duas patentes foram depositadas no hseytnrota ict 2016, 2016, 3606820.
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Os autores agradecem apoio financeiro da Fundação de Amparo à
Pesquisa do Paio São Paulo - FAPESP (Prêmio nº 201748 / 2-63
2, 2014 / 25770-6, 2014 / 16186-9, 2014 / 06461-2 e 5 / 20081199-
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Yagi, K .; Mei, JB; Verde, CB; Mankoo, AS US2010 / 0184863A1.

6), CNPq (Prêmio nº 453862 / 2014-4), e CAPES. Nós la tão

é um
grato a Renan Galaverna e ao Prof. Marcos Eberlin (Universidade de
Campinas, Brasil) pela HRMS analysish.isTwork é dedicado em
memória de Sir Derek Barton em ococnasoif seu centenário.
AN
33. Tanaka, S .; Yagi, K .; Ujihara, H .; Ishida, K. US210 / 01105773A1.
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 9
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UMA E h D d. MANUSC
v E eomto Como T
plasticizador, Tween® 80 foi usado como um emeurlsaifni d
R uma IP
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TO
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