Cinética de Contração de Equivalentes Dérmicos Para Aplicação em Engenharia Tecidual

SOUZA,C.; MÔNICO,D.A.; TEDESCO,A.C

Departamento de Química-FFCFRP/USP

Matrizes de colágeno contendo fibroblastos humanos têm sido extensivamente usados como suportes
para o crescimento de queratinócitos e formação de modelos de pele organotípico, contendo derme e
epiderme. O objetivo deste estudo foi avaliar a cinética de contração de equivalentes dérmicos (EqD) em
diferentes concentrações de colágeno e densidades celulares. Fibroblastos humanos (NHF) foram isolados de
pele de prepúcio (CAAE no. 76759717.7.0000.5407), pelo método de explante e mantidas em DMEM
(SFB10% v/v, penicilina 100 UI/mL e estreptomicina 100 g/mL) à 37C e 5% de CO2. Colágeno tipo I foi
extraído do tendão da cauda de ratos Wistar em ácido acético 0,5N e armazenada à 4C até o uso. EqD
foram obtidos mediante a adição de NHFs (1,8x10 5, 2,5x105 e 3,75x105 células/mL) ressuspendidos em SFB
e colágeno tipo I reconstituído (0,8; 1,7; 2,0 e 2,5 mg/mL), com pH corrigido pela adição de meio F12 de
Ham concentrado (10X) e tampão de reconstituição. Após solidificação, 1mL de DMEM foi adicionado em
cada poço e mantidos à 37C e 5% de CO2 por 10 dias. Diariamente, o diâmetro dos EqD foi medido. Uma
matriz de colágeno, sem NHF, foi avaliada como controle negativo. NHF isolados apresentaram morfologia
característica de células saudáveis e proliferativas. Colágeno tipo I foi obtido na forma de gel hidratado e
estéril, na concentração final de  4,0 mg/mL. Após 24h, foi obervado contração de 71% e 29% da área
inicial, respectivamente, para EqD com 0,8 e 2,5 mg de colágeno/mL. Após 6 dias, todos os EqD alcançaram
contração máxima de 82%, exceto EqD com 0,8 mg de colágeno/mL (92% de contração). EqD com 3,75 e
2,5x105 cél/mL apresentaram contração de 82% após 24h, enquanto os EqD com 1,25x105 cél/mL
apresentaram contração de 71%. Após 6 dias, todos os EqD alcançaram contração máxima igual a 92%,
independente da densidade celular inicial. Logo, podemos concluir que a concentração de colágeno e o
número de fibroblastos presentes influenciam de maneira direta a contração do EqD, que é induzida pela
reorganização das estruturas de colágeno pelos fibroblastos.

AGRADECIMENTOS: À FAPESP pela bolsa de pós-doutorado (Processo 2017/01272-5) de Carla Souza.

REFERÊNCIAS:
BELL,E.; IVARSSON,B.; MERRILL,C.(1979).Proc Natl Acad Sci U S A,76(3).
FÜLLER,J.; MÜLLER-GOYMANN,C.(2018).Eur J Pharma Biopharma,126.
RAJAN,N. et al.(2007).Nat Protoc, 1.
VAN BEURDEN, H.E. et al.(2005).J Dent Res,84(10).