Processo de replicação do DNA
1. Iniciação: origem da replicação
.) Consiste em desenrolar a dupla hélice de DNA em
uma sequencia particular de nucleótidos; consiste em
preparar a dupla hélice para usar como um modelo na
replicação.
Acontecimentos:
Inúmeras proteínas ligam-se à origem da replicação
(nome dado, ao local x específico do DNA, onde se irá
se desenrolar a dupla hélice em uma pequena
sequência específica de nucleótidos), começando pela
proteína inicial. A proteína inicial atrai a helicase e esta
desliza sobre a molécula do DNA, no sentido 5´-3´,
quebrando as ligações de hidrogénio entre
nucleótidos, desenrolando, assim, as cadeias duplas de
DNA. A abertura na região do DNA é chamada de bolha
de replicação e cada y extremidade dela é chamada de
forquilha de replicação.
PS: a topoisomerase relaxam o DNA super-
helicoidizado. Atopoisomerase e a helicase (com
energia ATP) desenrolam e abrem a dupla-hélice
na preparação para a replicação do DNA. O DNA
desenrolado é estabilizado por proteínas de ligação a
filamento simples (SSB “single-strand-binding”), que
se ligam ao DNA unifilamentar e evitam a
reestruturação do dúplex (que volte a enrolar).
Depois, liga-se às cadeias de DNA a RNA primase
(=RNA primer) que são sintetizados pela RNA
polimerease (enzima primase). A RNA primer sintetiza
um primer (uma sequência de bases de RNA, com cerca
de 1 a 60 ribonucleotídeos, que iniciam a síntese do
DNA), em ambos sentidos da bolha de replicação.
PS: Elas são importantes porque a DNA polimerase III
não é capaz de iniciar a síntese, usando apenas o molde
de DNA, devido a ausência de grupos hidroxila (OH-)
expostos, pois ela somente adiciona nucleótidos na
extremidade 3´ de uma cadeia pré-existente de ácidos
nucleótidos, isto é, necessita de uma extremidade 3'
(grupo hidroxilo) livre para iniciar a síntese de DNA. A
partir do primer sintetizado, e complementar ao
molde, é disponibilizado uma extremidade 5´ livre para
que DNA Polimerase dê continuidade ao processo da
síntese de DNA.
2. Alongamento: coneta a correta sequência de
nucleótidos numa cadeia continua de DNA.
Acontecimentos:
A síntese de replicação ocorre em ambos os lados da
origem de replicação. Assim, a cadeia sintetizada no
sentido da replicação (5´-3´) é chamada contínua,
filamento leading/líder, pois a replicação é contínua,
tem o mesmo sentido da forquilha e a do sentido
contrário (3´-5´) é descontinua, filamento
lagging/tardia, pois a replicação é descontínua,
sentido contrário a forquilha.
Nota: Após a síntese do primer, a DNA pol (adiciona
novos nucleotídios no sentido 5´-3´ por
complementaridade de bases à ponta do radical
hidroxil 3´ OH-, da cadeia que em formação (ligação
fosfodiéster), processo conhecido como
polimerização), une o nucleótido corretamente
emparelhado à extremidade 3´hidroxila do iniciador de
RNA e, em seguida, continua a adicionar os nucleótidos
apropriados à extremidade 3' da cadeia de
crescimento, fazendo, assim que a cadeia de DNA em
construção cresce na direção de 5 'a 3', enquanto a
molécula de DNA polimerase se move na verdade ao
longo da cadeia de modelo antiparalela na direção de
3 'a 5'.
.) cadeia continua: a medida que a replicação do DNA
prossegue, o helicase desenrola progressivamente a
dupla hélice. A DNA polimerase III se move na mesma
direção que a forquilha para sintetizar a cadeia
principal. Uma proteína acessória importante, a
grampo β, circunda o DNA como uma rosquinha e
mantém a pol III ligada à molécula de DNA,
transformando ela de enzima distributiva (que
adiciona apena 10 nucleotídios antes de sair do molde)
para enzima processiva (adiciona dezenas de milhares
de nucleotídios).
.) cadeia descontínua é sintetizada descontinuamente
e distanciada da forquilha, pois a DNA pol atua
somente no sentido 5´-3´. Assim a RNA primase vai
sintetizar vários primes ao longo da cadeia,
inicialmente, próximo da origem de replicação e
posteriormente a maior distância, na direção 5´-3´. A
replicação é sintetizada descontinuamente, em
pequenos fragmentos, fragmentos de Okazaki e cada
um deles são iniciados por um curto RNA prime e
alongados, depois, por DNA pol III. Depois, a DNA pol I
remove os primers de RNA com sua atividade de
exonuclease 5′ para 3′ e preenche as lacunas/ substitui
(por DNA) com sua atividade de polimerase 3′ para 5.
PS: A DNA pol I e pol III têm atividade de exonuclease
3´-5´, que atua como função de “revisão” por meio de
excisão de bases incorretamente inseridas; por isso, no
geral, são inseridos menos de um erro por 1010
nucleotídios (precisão/ fidelidade do DNA);.
PS: O RNA primer não toca na proteína grampo, pois é
uma enzima distributiva (só adiciona alguns
ribonucleotídios) antes de dissociar do molde, visto
que só o é necessário para síntese inicial da DNA pol III.
3. Terminação: em procariontes: DNA circular,
quando as duas forquilhas de replicação se
encontram ela termina; em eucariontes:
sequências de nucleotídios específicas no final dos
cromossomos, incorporadas a telômeros.
Acontecimentos:
A enzima DNA ligase une os fragmentos do DNA ao
catalisar a formação de uma ligação fosfodiéster entre
a extremidade 5′-fosfato de um fragmento e o grupo
3′-OH adjacente de outro fragmento.
O DNA circular pode ser torcido e espiralado. O
desenrolar da forquilha de replicação pelas helicase
causa torção extra em outras regiões e são formadas
superespirais para liberar a tensão da torção extra.
Tanto as torções quanto as superespirais têm de ser
removidas para possibilitar que a replicação continue.
Essa super-helicoidização pode ser criada ou relaxada
por enzimas, as topoisomerases, um exemplo disso é a
DNA girase. Elas relaxam o DNA super-helicoidizado
por meio da quebra de um único filamento de DNA ou
de ambos os filamentos, possibilitando que o DNA gire
tornando-se uma molécula relaxada. As
topoisomerases encerram reunindo os filamentos da
molécula de DNA, agora relaxada.
.
As partes finais da cadeia de DNA denominadas
telômeros (são lineares com sequências repetitivas e
encontram-se nos cromossomas eucariontes) são
sintetizadas pela enzima telomerase.

A telomerase é uma DNA polimerase com atividade de

transcriptase reversa. Apresenta um molde interno de
RNA e a partir daí é capaz de sintetizar o DNA das
extremidades cromossômicas, evitando a perda
progressiva e encurtamento dos telômeros.

A sequência de RNA 3′-AAUCCC-5′ atua como o

As extremidades dos cromossomos lineares
(telômeros) apresentam um problema para o
sistema de replicação, tendo em vista que sempre há
um trecho curto em um filamento que não pode ser
iniciado. Isto é, a síntese contínua no filamento leading
pode perseguir até ponta do molde, em contrapartida
da síntese do filamento descontinuo, que necessita de
primers a frente do processo; assim, quando o último
primer é removido, faltam sequências no final daquele
filamento; consequentemente, uma ponta
unifilamentar permanece em uma das moléculas
filhas de DNA.
molde para a unidade de repetição 5′TTAGGG-3′.
Brevemente, a RNA telomerase primeiro se liga ao
prolongamento 3′ do DNA, que em seguida é
estendido com a utilização dos dois componentes da
telomerase: o pequeno RNA (como molde) e a
proteína (como atividade de polimerase). Após a
adição de alguns nucleotídios ao prolongamento 3′,
a RNA telomerase se movimenta ao longo do DNA,
de modo que a extremidade 3′ possa ser
adicionalmente estendida por meio da sua atividade
de polimerase. A extremidade 3′ continua a ser
estendida pela movimentação repetida da RNA
telomerase. A primase e a DNA polimerase,
em seguida utilizam o prolongamento 3′ muito longo
como molde para preencher a extremidade do
outro filamento de DNA.

A enzima telomerase adiciona várias sequências curtas

e repetitivas (cópias de sequências não codificadoras)
à extremidade 3´para manter o comprimento do
DNA. (preveni a erosão do material genético após
cada rodada de replicação)

A telomerase carrega um RNA curto que atua como o

molde para a síntese das repetições teloméricas
(atividade de transcriptase reversa). Essas repetições
teloméricas não codificadoras associam-se a proteínas
para formar um revestimento telomérico (forma um
capuz que “esconde” as extremidades dos
cromossomos do maquinário de reparo do DNA da
célula, preservando assim a integridade
cromossómica).
Telômeros e envelhecimento das células
Os telômeros encurtam com a idade nas células
somáticas, tendo em vista que a telomerase não é
produzida naquelas células. Indivíduos que
apresentam telômeros defeituosos sofrem de
envelhecimento precoce.
Indivíduos com síndrome de Werner apresentam
telômeros mais curtos que pessoas normais, pela
mutação do gene WRN, que codifica uma proteína,
helicase (associada a proteínas que formam a estrutura
de revestimento do telômero). Formula-se a hipótese
de que essa mutação rompe o telômero normal,
resultando em instabilidade cromossômica e no
fenótipo de envelhecimento precoce.
15 anos 48 anos
A síndrome de Werner (WRN) é causada por mutação
homozigótica ou heterozigótica composta no gene
RECQL2 (604611), que codifica um homólogo da DNA
helicase de E. coli RecQ, no cromossomo 8p12.
▼ Descrição: A síndrome de Werner (WRN) é uma
síndrome progeroide segmentar autossômica
recessiva rara. Os pacientes exibem não apenas uma
aparência de envelhecimento acelerado
(envelhecimento prematuro, queda de cabelo, atrofia
da pele e atrofia da gordura subcutânea), mas também
vários distúrbios comumente associados ao
envelhecimento, incluindo catarata bilateral, diabetes
mellitus, osteoporose, arteriosclerose prematura e
uma variedade de doenças. de neoplasias benignas e
malignas (resumo de Oshima et al., 1996).
▼ Características clínicas: as características da
síndrome de Werner são alterações cutâneas
semelhantes à esclerodermia, especialmente nas
extremidades, catarata, calcificação subcutânea,
arteriosclerose prematura, diabetes mellitus e fácies
envelhecida e prematuramente. Um pedigree
particularmente instrutivo foi relatado por McKusick
(1963). O habitus é característico, com baixa estatura,
membros delgados e tronco atarracado. O nariz é
bicudo. (OMIM).
Uma outra síndrome de envelhecimento precoce,
disqueratose congênita, apresenta também telômeros
mais curtos do que de pessoas saudáveis da mesma
idade e apresentam mutações em genes
necessários para a atividade da telomerase.
Intervenientes na replicação (funções-síntese):
Durante todo o processo de replicação atuam outras
enzimas entre elas as SSB e as topoisomerases que têm
como função evitar o enrolamento da cadeia durante a
síntese.
Proteína iniciais: Liga-se à origem e separa as fitas do
DNA para iniciar a replicação
Helicase/ DNA helicase: abrir as duas hélices do DNA
por quebra de ligações de hidrogénio para expor as
bases, utilizando a energia de hidrolise ATP.
RNA primer: sintetiza primer de RNA para fornecer a
extremidade 3OH- necessária para a DNA polimerase
adicionar novas bases.
SSB: “single strand binding” ligam em cada uma das
fitas ligam ao DNA unifilamentar e evitam a
reestruturação do dúplex (que volte a enrolar),
mantendo o DNA estável. Atua em todas as etapas de
replicação.
Topoisomerases (DNA girase): atua com a helicase
para abrir as cadeias e tem a função de aliviar torção
na parte da fita onde não está sendo replicada. Depois
de sua atuação o DNA deixa de ser heliocal. Relaxam o
DNA super-helicoidizado por meio da quebra de um
único filamento de DNA ou de ambos os filamentos,
possibilitando que o DNA gire tornando-se uma
molécula relaxada (aliviam a tensão). As
topoisomerases encerram reunindo os filamentos da
molécula de DNA, agora relaxada. Atua em todas as
etapas de replicação.
 Grampo β: circunda o DNA e mantém a DNA pol III nas e/ou substitui por DNA com sua atividade
Erros na Replicação do DNA:
ligada à molécula de DNA, transformando ela de dolimerase 3′ para 5
enzima distributiva para enzima processiva. • Fidelidade/Precisão de replicação: é inserido menos
de 1 nucleótido incorreto a cada 10 milhões de pares de
DNA polimerase III: adiciona novas bases à ponta do
bases (~ 3 bilhões de pb: 300 erros por rodada de
radical hidroxil 3´ OH-, polimerizando a nova fita de
replicação)
DNA crescente (alonga-a), a medida que a helicase vai
abrindo as cadeias de DNA, no sentido 5´-3´ (atividade • Processo de Revisão: – maioria dos erros, são
de polimerização); tem atividade reguladora, com sua removidas e corrigidas, por excisão de bases
atividade de exonuclease no sentido 3´-5´ incorretamente inseridas, pelas enzimas reparadoras de
DNA (pol I e pol III, com atividade de exonuclease 3´-5´)
.A síntese de DNA é catalisada pela DNA-polimerase;
que:
DNA-polimerase precisa de um filamento primer , que
é amplificado, e um filamento molde, que é copiado  reconhecem uma base alterada → removem ao
DNA polimerase I: remove os primers de RNA com sua cortar o filamento do DNA → substituem pela
atividade de exonuclease 5′ para 3′ e preenche as base correta (determinada pelo filamento
lacunas e/ou substitui por DNA com sua atividade de complementar) → recompondo o DNA
polimerase 3′ para 5. • Mecanismos corrigem 99,9% dos erros iniciais.
DNA ligasse: une os fragmentos do Ozaki ao catalisar a Tautomerização é processo de adição de bases
formação fosfodiéster entre a extremidade 5´fosfato de incorretas. Cada uma das bases pode apresentar
um fragmento e o grupo 3´OH- adjacente de um outro diversas formas (tautómeros), que estão normalmente
fragmento. em equilíbrio. Mas, em casos raros, uma base se altera
Telemorase/ proteína de térmio: com atividade de de sua forma para imino ou enol e elas paream
transcriptase reversa. Apresenta um molde interno de formando um par erróneo (C – A, por ex).
RNA e a partir daí é capaz de sintetizar o DNA das Felizmente, eles são detetados e corrigidos.
extremidades cromossômicas, evitando a perda
progressiva e encurtamento dos telômeros. Ele atua
prevenindo a erosão do material genético e a
preservação da integridade cromossómica. Atua na
extremidade final do DNA para evitar a perda
progressiva e o encurtamento dos telômeros.
Replissomo (engloba todas as outras enzimas
que participam na síntese de DNA
PS :Os eventos múltiplos que têm de ocorrer com precisão
e rapidezna forquilha de replicação são realizados por uma
máquina biológica denominada replissomo. Ele inclui duas
unidades de DNA polimerase, uma para atuar no filamento
contínuo e uma para atuar no filamento descontínuo.
Assim, a síntese é mais demorada e a união dos fragmentos
de Okazaki em um filamento contínuo pode ser
temporalmente coordenada com a síntese menos
complicada do filamento contínuo. Onde e quando a
replicação ocorre é cuidadosamente controlado pela
montagem ordenada do replissomo em determinados
locais nos cromossomos, denominados origens. Os
genomas eucarióticos podem apresentar dezenas de
milhares de origens, devido a complexidade do Ps: Como a RNA não tem a função de revisão tem maior
genoma. A montagem dos replissomos nessas origens probabilidades de cometer erros do que DNA, daí a
ocorre apenas em uma fase específica no ciclo celular. necessidade de serem removidos e substituídos.