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Tese 6810 Dissertação Mirleide
Tese 6810 Dissertação Mirleide
ALEGRE-ES
2013
2
ALEGRE-ES
2013
3
4
COMISSÃO EXAMINADORA
________________________________________
Profa. Dra. Lenir Cardoso Porfírio
Universidade Federal do Espírito Santo
Orientadora
_______________________________________
Prof. Dr. Marcos Santos Zanini
Universidade Federal do Espírito Santo
____________________________________________
Profa. Dra. Mariana Drummond Costa Ignacchiti
Universidade Federal do Espírito Santo
5
AGRADECIMENTOS
À Deus pela oportunidade concedida e pela ajuda nos momentos mais difíceis
porque só por portas abertas por Ele, foi possível a realização desde trabalho.
À Professora Dra. Lenir Cardoso Porfírio e ao Msc. Leonardo Oliveira Trivilin, pelo
voto de confiança, dedicação e ensinamentos de seriedade à pesquisa. Muito
obrigado!
Ao meu noivo Cleber Tófoli Vieria, pelos longos períodos de estrada, execução e
incentivo, em todas as partes desde trabalho.
À Tatiane Fiorotti, Lohaine Tosi Stocco, Giuliana Porfírio Passos, Fabiana Bravo,
Luciana Medeiros, Sabrina de S. Miranda, Henrique Venial Jordem.
RESUMO
ABSTRAT
LISTA DE FIGURAS
SUMÁRIO
1.INTRODUÇÃO......................................................................................................... 12
4. REFERÊNCIAS...........................................................................................................21
CAPÍTULO 1 ............................................................................................................... 25
RESUMO .................................................................................................................... 26
ABSTRACT ................................................................................................................ 27
INTRODUÇÃO........................................................................................................... 27
RESULTADOS .......................................................................................................... 31
DISCUSSÃO .............................................................................................................. 31
CONCLUSÃO..................................................................................................................35
REFERÊNCIAS .......................................................................................................... 35
ANEXO 1 - Figuras..........................................................................................................38
1 INTRODUÇÃO
.
14
2. REVISÃO DE LITERATURA
2.1 Auto-hemoterapia
2.2.1 Hemoparasitoses
A Erlichiose canina é causada por uma bactéria a Erlichia canis
pertencente a família Anaplasmataceae (GREENE, 2012), são microrganismos
pleomórficos Gram-negativas, imóveis e que se replicam somente nas células dos
hospedeiros. Tem predileção por leucócitos e plaquetas (QUINN, 2005).
Na medicina veterinária, Santin & Brito (2004) e Silva (2004) incluíram que
a auto-hemoterapia no tratamento de papilomatose cutânea em bovinos leiteiros
se mostrou estatisticamente eficaz, quando comparado aos demais tratamentos.
O fator de necrose tumoral alfa (TNF-α), foi descoberto por Carswell et al.
(1975), é uma das cinco famílias mais importante de citocinas observado nos
últimos quinze anos e o emprego de técnica da biologia molecular tornou possível
a descrição dos vários polimorfismos presentes. Acredita-se que a presença
destes polimorfismos possa desempenhar papel crucial na regulação das funções
do gene, propiciando em algumas situações a produção diferencial da citocinas
que, por sua vez, desempenham papéis centrais nos mecanismos inflamatórios
usualmente presente na resposta imunológica mediada por células. Para Thomas,
(2001), Genov et al., (2007) e Ohkawara, et al., (1992) é reconhecido como
importante mediador em muitos eventos inflamatórios dependentes de citocina,
com base em estudos realizados em camundongos.
4. REFERÊNCIAS
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24
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25
CAPÍTULO 1
Mirleide de Araújo CáoI, 1; Lorraine Stoco TosiII Tatiane FiorottiI Henrique Jordem
VenialI Leonardo Oliveira TrivilinII Cleber Tofoli VieiraIII Lenir Cardoso PorfírioI*
RESUMO
Grupo controle e G2: Grupo AH. Com as amostras de sangue obtidas dos animais e
e a determinação dos níveis de TNF-α por meio do teste ELISA, com plasma sanguíneo,
em três momentos. Nos resultados observa-se aumento na produção de TNF-α dentro dos
___________________________________
I
Programa de Pós-Graduação em Ciências Veterinárias da Universidade Federal do Espírito Santo (UFES),
Rua Alto Universitário, sn, Bairro Centro, 295000-000, Alegre, ES, Brasil. E-mail: lenircp@yahoo.com.br
II
Departamento de Medicina Veterinária, Centro de Ciências Agrárias (CCA-UFES, Alegre, ES,
Brasil
III
Administrador, Técnico de Suprimentos da Empresa Fibria Celulose S.A.
27
ABSTRACT
levels of protection for pets. The experimental groups consisted of G1: control
group and G2: AH group. Venipuncture was performed in the animals' blood into a tube
with anticoagulant to perform the WBC in three stages. The determination of TNF-α was
performed by ELISA using blood plasma. The results showed that there is
increased production of TNF-α in the groups G1 and G2 (p <0.05), after the application of
data obtained in this work, it is speculated that the AH, significantly interferes,
significantly the values of lymphocytes and monocytes, after a week of applying auto-
hemotherapy.
INTRODUÇÃO
origem desconhecida. Observa-se que a técnica foi usada em humanos (TEIXEIRA, 1940)
O sangue extraído por punção venosa é rico em CO2 e em contado com corpo
e, por isso, quando injetado no organismo, atua como proteína estranha. Há efeito
citocinas para a modulação da resposta inflamatória com ação mitógena para os timócitos,
células nucleadas. Quando liberado em baixas concentrações age nas células endoteliais
ação quimiotáxica em relação aos leucócitos, promovendo processo inflamatório local que
hemoterapia.
MATERIAL E MÉTODOS
Este trabalho foi delineado como um ensaio clínico pareado e obedeceu aos
do Espírito Santo, com protocolo experimental aprovado sob o número 067 – 2012.
todo foram utilizados 12 ratos (Rattus norvegicus) machos hígidos, da linhagem Wistar,
com 60 dias de idade e peso em torno de 500g. Foram alocados em caixa de polipropileno
exsanguinação total.
Delineamento experimental
Grupo 1 (Controle) – grupo de seis animais. Cada animal, após sedação com a associação
intracardíaca.
plasma para dosagem de TNF-α. Neste grupo, após a coleta aplicou-se 0,2 mL de soro
M2: Após 8 horas da aplicação do soro fisiológico foram retirados mais 0,5 mL de sangue
pela mesma via, com sedação, para nova análise do leucograma e dosagem de TNF-α.
M3: Após 7 dias da aplicação do soro fisiológico, os animais foram submetidos a sedação,
por via intramuscular, para nova coleta de 0,5 mL de sangue, realização do leucograma,
Grupo 2 (Autohemoterapia) – grupo de seis animais. Cada animal, após sedação com a
plasma para dosagem de TNF-α. Neste grupo, após a coleta aplicou-se 0,2 mL de sangue
M2: Após 8 horas da aplicação do sangue fresco foram retirados mais 0,5 mL de sangue
pela mesma via, com sedação, para nova análise do leucograma e dosagem de TNF-α.
M3: Após 7 dias da aplicação do sangue fresco, os animais foram submetidos a sedação
sangue foi centrifugado em macro centrífuga sorológica marca Centribio® a 1800 g, para
duplicata, por meio do teste ELISA (ABCAM (ab100784 TNF alfa Rat)) com sensibilidade
Para análise dos dados foi utilizado o teste estatístico não paramétrico de Kruskal –
Wallis para a verificação das possíveis alterações dos níveis de TNF-α para cada célula e
verificação da associação entre a leucometria e níveis de TNF-α. Foi utilizado ainda o teste
hemoterapia. Para os testes foi utilizado o nível de 5% de probabilidade uma vez que foi
verificada a não normalidade, via pós-teste de Siegel e Castellan (p<0,05) dos erros
amostrais.
31
RESULTADOS
(p<0,05), o que demonstra significância entre M1 e M2, com o numero de linfócitos menor
para o grupo M2 no G2, com (p=0,018) (Fig.2). Esta diferença não ocorreu com as demais
(p=0,489) para o G2. No G1(Grupo controle) não se observou diferenças em nenhuma das
Na análise dos níveis de TNF-α, diferença significativa dentro dos grupos sendo
que para o G1(Grupo controle) para o pós-teste de Siegel e Castellan (p<0,05) entre M1 e
TNF-α com (p<0,05), considerando entre os M1 e M3. Para a análise entre os grupos (G1 e
G2) da produção de TNF-α foi usado o teste de Wilcoxon que mostrou diferença não
DISCUSSÃO
Outra célula que tem importante diminuição em M2 são os linfócitos que segundo
linfoides ocupadas com a resposta imune sistêmica e como resultado, grande número de
linfócitos pode ser exposto a um antígeno depositado localmente no tecido (LOPES, 2007).
produção de TNF-α e, como é uma citocina pró-inflamatória, o seu valor elevado estimula
o aumento dos macrófagos nos tecidos, de acordo com MACKAY, (1993) a estimulação
da adesão de leucócitos ao endotélio é uma das muitas atividades do TNF-α, com ações
2001).
inflamatória (BALDAIA, 2002). Sabendo disso, tem-se mais uma alternativa para a
estimulem essa diferenciação e os retirem da corrente sanguínea, visto que as citocinas são
respostas, como também novos receptores na superfície das células. Para Basile filho
amplificam a resposta inflamatória, portanto, uma explicação para o declínio dessas células
na corrente sanguínea.
que aja estimulando e modulando a resposta inata, mas em M3, ele continua a aumentar,
mesmo com a diminuição na leucometria total, mas sabe-se que seu excesso pode levar a
piora do prognóstico dos pacientes segundo AZEVEDO, (2011), mas este fato não tem
sido relatado em estudos feitos com pacientes que utilizaram a auto-hemoterapia como
tratamento.
34
Sendo assim, o objetivo do presente trabalho foi verificar se há resposta imunológica, após
as aplicações.
curativa e mais uma opção terapêutica, além de seguro, outro exemplo, de pacientes que
A auto-hemoterapia pode ser empregado como uma alternativa para contribuir com
IL-1 exercida pelo TNF-α, e a função anti-inflamatória da IL-6, pois pode inibir grandes
pela auto-hemoterapia. Sugere-se também que o local de aplicação seja avaliado, por meio
região de aplicação. Por isso é importante estudos que mostrem os efeitos dessa técnica
CONCLUSÃO
sanguínea.
AGRADECIMENTO
Superior (CAPES).
REFERÊNCIAS
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36
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ZHAO, Z.Z. et al. Mast cell degranulation and the role of T cell Rantes in oral lichen
Anexo: Figuras
1000
Monócitos/mcL
500
0
M1 M2 M3
Momentos
Tempo
7000
6000
5000
Linfócitos/mcL
4000
3000
2000
1000
M1 M2 M3
Momentos
Tempo