Traduzido do Inglês para o Português - www.onlinedoctranslator.

com

Perspectivas

Testes sorológicos para COVID-19

Os ensaios sorológicos para SARS-CoV-2 apresentam desafios e oportunidades

T
Imediatamente, testes diagnósticos escaláveis e
precisos são cruciais na prevenção e controle da
pandemia de doença coronavírus 2019 (COVID-19).1
Com opções de tratamento limitadas e nenhuma vacina
disponível, a identificação precisa e oportuna de pacientes
infecciosos com COVID-19 é fundamental para a resposta ao
surto de saúde pública. O isolamento de pacientes com
COVID-19, rastreamento de contato e medidas de quarentena,
além do distanciamento físico dentro da comunidade, têm se
mostrado eficazes na redução do número de casos.2 Devido à
alta sensibilidade e especificidade em indivíduos sintomáticos,
a detecção de infecção por síndrome respiratória aguda grave
coronavírus 2 (SARS-CoV-2) por reação em cadeia da
polimerase transcriptase reversa (RT-PCR) é o método padrão
ouro para confirmação de casos de COVID-19 .3 Em contraste,
os ensaios sorológicos têm menor utilidade na investigação
inicial de casos suspeitos, mas são essenciais no
desenvolvimento e avaliação de agentes terapêuticos e para
informar a modelagem e a política de saúde pública à medida
que a pandemia avança.
Como parte das respostas laboratoriais iniciais, os investigadores
chineses divulgaram a sequência do genoma viral completo no
início de janeiro de 2020, o que permitiu o rápido desenvolvimento
de fluxos de trabalho de RT-PCR para a detecção de SARS-CoV-2.4
No entanto, a escala sem precedentes de testes de diagnóstico RT-
PCR impôs demandas extraordinárias aos sistemas de cuidados de
saúde e laboratoriais, tanto com desafios relacionados às cadeias
de suprimento de reagentes quanto aos recursos da força de
trabalho necessários para apoiar os testes em nível populacional.
Desde o início da pandemia, uma série de testes diagnósticos
disponíveis comercialmente foi lançada, incluindo ensaios RT-PCR,
pontos de atendimento e testes sorológicos laboratoriais. Esses
testes variam tanto em desempenho analítico quanto em sua
utilidade particular na resposta geral de saúde pública ao
COVID-19.
Aspectos de desempenho de testes sorológicos
Katherine Bond1,2 Após a infecção por SARS-CoV-2, são gerados anticorpos
Eloise Williams1 específicos para diferentes componentes desse vírus. Dependendo
do antígeno alvo utilizado pelo ensaio, a detecção desses
Benjamin P
anticorpos (IgM, IgA, IgG ou anticorpo total) pode indicar
Howden2
exposição (anticorpos não neutralizantes) ou potencial imunidade
Deborah A
demonstrou se correlacionar bem com a produção de
anticorpos neutralizantes,5 enquanto alguns estudos
mostraram que o N é imunodominante, produzindo uma
resposta imunológica mais precoce ou mais forte.6 A
maioria dos pacientes com COVID-19 soroconverte no dia
10–14 (~ 80%) após o início dos sintomas, com quase 100%
de soroconversão no dia 20.7 No entanto, as comparações
entre os estudos publicados são desafiadoras devido aos
diferentes antígenos usados nos ensaios, diferenças na
complexidade das populações de pacientes, variações nos
ensaios RT-PCR usados como o padrão ouro para
determinar a sensibilidade dos ensaios sorológicos e,
frequentemente, dados limitados sobre o momento da
coleta da amostra após o início dos sintomas do COVID-19.
Além disso, não está claro se o tipo e a quantidade de
anticorpo se correlacionam com a gravidade da doença ou,
mais importante, com a proteção imunológica contra a
reinfecção. Conforme observado pela Organização Mundial
da Saúde, o Australian Public Health Laboratory Network
(PHLN) e o Royal College of Pathologists da Australasia
(RCPA), um resultado negativo usando um teste sorológico
não exclui a infecção por SARS-CoV-2, particularmente em
indivíduos com fortes fatores de risco epidemiológico,8,9
Teste de ponto de atendimento
Como alguns dos primeiros ensaios sorológicos COVID-19
disponíveis, publicidade significativa acompanhou o
lançamento do PoCT. PoCT envolve a detecção de anticorpos
anti-SARS-CoV-2 através da ligação a antígenos imobilizados,
geralmente ligados ao ouro coloidal em uma tira de teste (Box
2) A natureza relativamente barata e simples dos ensaios de
fluxo lateral significa que a produção é adequada para
aumentar a capacidade de teste. Estudos de validação pós-
mercado demonstraram características de desempenho
variáveis, muitas vezes inferiores às relatadas pelos
fabricantes, com sensibilidades para IgG relatadas na faixa de
53-100% para amostras coletadas mais de 14 dias após o início
dos sintomas e especificidades de 91,7-100% .10,11 A seleção
cuidadosa do teste e a consideração da utilidade clínica antes
da aplicação são, portanto, essenciais. O National Pathology
Accreditation Advisory Council tem diretrizes existentes sobre o
uso de PoCT na Austrália.12 Essas diretrizes cobrem questões
como supervisão clínica para realizar o PoCT, garantindo a
MJA 213 (9) ▪ 2 de novembro de 2020

(anticorpos neutralizantes). Até o momento, uma série de testes

Williamson1,2
1 Royal Melbourne
Hospital, Melbourne
Saúde, Melbourne, VIC.
2 Microbiológico
Unidade de Diagnóstico
Saúde pública
Laboratório, Universidade de
Melbourne, Melbourne,
VIC.
deborah.
williamson @
unimelb.edu.au
doi: 10.5694 / mja2.50766
sorológicos para COVID-19 foram desenvolvidos, cada um com
características de teste particulares (Box 1) Em termos gerais, esses
testes sorológicos podem ser divididos em testes que (i) podem ser
realizados no local de atendimento; (ii) pode ser realizado em
laboratórios de diagnóstico de rotina, e (iii) só pode ser realizado
em laboratórios de referência especializados (Box 1)
A maioria dos testes de ponto de atendimento e baseados em
laboratório incorporaram o antígeno do nucleocapsídeo (N) ou
parte da proteína do pico (S), frequentemente a região S1 ou o
domínio de ligação ao receptor (RBD). O RBD
qualidade do teste, o treinamento e competência da equipe
para realizar o PoCT e o relato apropriado dos resultados do
teste. Mais recentemente, este conselho foi estendido ao PoCT
sorológico para COVID-19, com ênfase em uma estrutura de
qualidade robusta para apoiar a implementação e implantação
de tais testes. Digno de nota, na Austrália, o fornecimento de
kits de autoteste (por exemplo, teste em casa) para muitas
doenças infecciosas, incluindo COVID-19, é proibido sob outro
regulamento da Administração de Produtos Terapêuticos, a
Especificação 2010 de Produtos Terapêuticos (Fins Excluídos).13
397
 Perspectivas

1 Principais ensaios sorológicos usados até o momento para a detecção de coronavírus da síndrome respiratória aguda grave 2
(SARS-CoV-2)
Ensaio sorológico Método de detecção Vantagens Desvantagens Implicações

Neutralização • Determina a capacidade dos soros
de teste de inibir a replicação do
vírus vivo
• Padrão-ouro
• Altamente específico
• Requer recursos PC3
• Tecnicamente exigente
• Tempo de resposta lento
• Baixo rendimento
• Realizado apenas em
laboratórios especializados
• Padrão ouro para
validação inicial de outros
ensaios e desafiadores
estojos

• Não adequado para testes

de rotina

Indireto • Vírus inteiro inativado e • Pode ser realizado nas • A preparação de slides • Não disponível em
fluorescente fixado em uma lâmina instalações do PC2 requer instalações PC3 laboratórios de rotina
anticorpo (IFA) • Adição de soros de teste com uma vez slides • Menos específico do • Não adequado para testes

detecção fluorescente de preparado que a neutralização em grande escala

ligação de anticorpos • Menos tecnicamente • Tecnicamente exigente

exigente do que • Ponto final subjetivo
neutralização • Baixo rendimento
ensaios

Enzima • Antígeno recombinante • Boa sensibilidade • Menos específico do • Geralmente depende de

imunoensaio (EIA) fixado à superfície sólida • Menos tecnicamente
(geralmente placa de 96 poços), exigente
soro de teste aplicado e ligação do que IFA ou
antígeno-anticorpo detectada neutralização
pela enzima • Semiautomático
mudança de cor mediada • Alto rendimento
• Ponto final objetivo
com máquina
óptica baseada
leitura de densidade
que a neutralização
• Experiência inicial e
tempo necessário para
determinar, testar e
fabricar adequado
antígeno recombinante
empresas comerciais
para fabricar e
distribuir kits de teste
• Adequado para testes
de rotina
• Bom para triagem

EIA de fluxo lateral • Um tipo particular de EIA • Sensibilidade variável • Pode ser menos sensível e • Adequado para testes de ponto de

• Recombinante • Pelo menos tecnicamente específico do que atendimento

antígeno presente em exigente baseado em laboratório • Pode ser realizado por

imunocromatográfico
papel, soros de teste aplicados à
almofada de teste, ligação de
antígeno-anticorpo
detectado visualmente por
• Resposta rápida
tempo para individual
testes
• Teste sob demanda
ensaios
• Escalabilidade limitada
• Ponto final subjetivo
• Captura de dados menos
robusta
pessoal não laboratorial
• Sistemas para captura de
dados de resultados precisam
ser implementados

mudança de cor em uma

membrana

PC2 = nível de contenção física 2; PC3 = nível de contenção física 3. ◆

2 Esquema de um imunoensaio de fluxo lateral para detecção de coronavírus de síndrome respiratória aguda grave 2
(SARS-CoV-2) anticorpos IgM e IgG *
MJA

* A amostra é adicionada à almofada de amostra e, em seguida, viaja por movimento capilar para a almofada de conjugação. Anticorpos anti-SARS-CoV-2 IgM e / ou IgG no paciente
a amostra então se liga ao antígeno SARS-CoV-2 específico. Este antígeno está ligado ao ouro coloidal, que atua como um indicador colorimétrico. O complexo de ouro ligado ao antígeno-
anticorpo então viaja para a membrana de nitrocelulose e se liga a anticorpos IgM ou IgG anti-humanos específicos, com uma alteração colorimétrica resultante. Para monitorar a validade
do teste, o excesso de ouro coloidal conjugado liga-se ao anticorpo na linha de controle, o que permite avaliar se o fluido migrou com sucesso pela tira de teste. Fonte: Adaptado de Li Z, Yi Y,
◆
398 Luo X, et al. Desenvolvimento e aplicação clínica de um teste rápido de anticorpos combinados IgM-IgG para o diagnóstico de infecção por SARS-CoV-2.J Med Virol 2020; 92: 1518-1524.

Ensaios de laboratório
Uma ampla variedade de ensaios sorológicos baseados em
laboratório estão agora disponíveis, mais comumente
ensaios de imunoabsorção enzimática (ELISA) ou formato de
imunoensaio quimioluminescente (CLIA / CMIA). Os ensaios
podem ser semiautomáticos ou totalmente automatizados,
prestando-se a testes e relatórios em grande escala. Em
geral, as características de desempenho foram mais
consistentes e mais próximas do relatado pelo fabricante em
comparação com PoCT, com sensibilidades de IgG na faixa
de 80-100% para amostras coletadas mais de 14 dias após o
início dos sintomas, e especificidade geralmente caindo
entre 95% e
100%.10,11,14
Uso de ensaios sorológicos
Dado o intervalo de tempo entre o início dos sintomas e o
anticorpo detectável, o PoCT sorológico não tem papel na
detecção de COVID-19 agudo. No entanto, existem alguns locais
onde os ensaios sorológicos, incluindo PoCT, podem ter utilidade
potencial, incluindo a definição da prevalência de anticorpos em
populações-chave, como trabalhadores de linha de frente, e a
determinação da extensão da transmissão de COVID-19 na
comunidade. Para outras aplicações, como a identificação de
indivíduos para avaliação adicional da doação de imunoglobulina
terapêutica e desenvolvimento e avaliação de vacinas, é provável
que sejam necessários ensaios que avaliem a resposta de
anticorpos neutralizantes.
Independentemente do tipo de ensaio sorológico utilizado,
para implantar o teste sorológico de forma adequada, é
fundamental entender as limitações do desempenho do teste
no contexto epidemiológico em que os testes são usados.
Isso é particularmente importante em um ambiente como a
Austrália, onde, com base no número de casos relatados de
COVID-19 (24 236 casos em 20 de agosto de 2020), há uma
prevalência de período de COVID-19 estimada de 0,095%
(janeiro a Agosto de 2020). Assim, mesmo com testes
sorológicos altamente sensíveis e específicos, a maioria dos
testes positivos provavelmente representam resultados falso-
positivos. Ao considerar o uso da sorologia para informar as
políticas relacionadas ao relaxamento das intervenções de
distanciamento físico, a especificidade do ensaio torna-se
crítica. Se a maioria dos indivíduos considerados imunes
realmente representam resultados falsos positivos, o limite
para manter a imunidade (se isso realmente se correlacionar
com a detecção de anticorpos) dentro da comunidade não
será alcançado. Portanto, deve-se considerar a confirmação
dos resultados positivos iniciais por meio de reteste em um
ensaio com um alvo alternativo ou reteste com ensaios
sorológicos padrão-ouro, como microneutralização ou
ensaios de western blot.15
Perspectivas
Aplicação de ensaios sorológicos e futuras
necessidades de pesquisa
Compreender a dinâmica de transmissão local e / ou risco de
exposição por meio de pesquisas sorológicas pode informar a
política de saúde local em nível institucional, estadual ou
nacional. Por exemplo, uma grande pesquisa sorológica
recente na Espanha, incluindo mais de 50.000 residentes, usou
o PoCT e um CLIA baseado em laboratório para estimar uma
soroprevalência em todo o país de 5,0%, após um surto inicial
de COVID-19 em fevereiro a abril.16 Estima-se que cerca de um
terço dos casos sejam assintomáticos, enquanto os
profissionais de saúde apresentam soropositividade superior à
comunidade (10,2% v 5,0%). Isso está em contraste com os
profissionais de saúde na Bélgica, onde o contato direto com
pacientes com COVID-19 não aumentou as chances de serem
soropositivos.17
O grau e a duração da imunidade após a infecção por SARS-CoV-2
são desconhecidos, mas se estiver em conformidade com outros
coronavírus (aproximadamente 40 semanas), é improvável que a
imunidade seja vitalícia e pode ser mais curta em infecções mais
leves.7 A duração da imunidade é uma área crítica para pesquisas
futuras, pois é o componente-chave em modelos que estimam a
frequência da incidência de infecção por SARS-CoV-2 nos próximos
anos (por exemplo, segunda ou terceira ondas, ou atividade anual
sazonal de COVID-19 semelhante influenza), e para determinar a
utilidade de políticas como “passaportes de imunidade”.18
Conclusão
As demandas sem precedentes sobre os laboratórios para testar
rapidamente o COVID-19 levaram necessariamente a um
rastreamento acelerado de requisitos regulatórios normalmente
rigorosos para a aprovação de testes, tanto globalmente quanto
na Austrália. Após a recente publicação de dados de validação de
alta qualidade revisados por pares, os testes sorológicos estão
agora disponíveis em muitos laboratórios australianos. O teste
sorológico complementará a utilidade clínica atual do RT-PCR
para o diagnóstico de infecção por SARS-CoV-2, destacará a
dinâmica da transmissão local e aumentará nossa compreensão
do que o futuro traz para a pandemia de COVID-19.
Reconhecimentos: Katherine Bond é apoiada por um National Health and
Medical Research Council (NHMRC) da Austrália Postgraduate Scholarship
(GNT1191321). Benjamin Howden é apoiado por uma NHMRC Practitioner
Fellowship (APP1105905). Deborah Williamson é apoiada por uma bolsa de
investigação NHMRC (APP1174555).
Interesses competitivos: Sem divulgações relevantes.
Proveniência: Não comissionado; revisado externamente por pares. ■
MJA 213 (9) ▪ 2 de novembro de 2020
A versão não editada deste artigo foi publicada como uma pré-impressão em mja.com.au em 23 de junho
de 2020.
© 2020 AMPCo Pty Ltd
As referências estão disponíveis online.
399
 Perspectivas
1 Sharfstein JM, Becker SJ, Mello MM.
teste de diagnóstico para o novo
coronavírus.JAMA 2020; 323: 1437.
2 Okell LC, Verity R, Watson OJ, et al. As mortes por
COVID-19 na Europa atingiram um patamar
devido à imunidade coletiva?Lanceta2020; 395:
e110–111.
3 Rede de Laboratórios de Saúde Pública da
Austrália. Orientação de PHLN sobre testes de
laboratório para SARS-CoV-2 (o vírus que
causa COVID-19) [site]. PHLN, 2020.https://
www.health.gov.au/resources/ Publicações /
phln-guidance-on-labour atory-testing-for-
sars-cov-2-the-virusthat-cause-covid-19 (visto
em julho de 2020).
4 Corman VM, Landt O, Kaiser M, et al.
Detecção de novos coronavírus 2019 (nCoV
2019) por RT-PCR em tempo real. Euro
Surveill 2020; 25: 2000045.
5 Quinlan BD, Mou H, Zhang L,
et al. O domínio de ligação ao receptor
SARS-CoV-2 elicia uma resposta
neutralizante potente sem aumento
dependente de anticorpos [preprint].
bioRxiv 2020; https: // doi. org /
10.1101 / 2020.04.10.036418.
6 Hachim A, Kavian N, Cohen C, et al.
Além do pico: identificação de alvos virais da
resposta de anticorpos ao SARS-CoV-2 em
pacientes com COVID-19 [preprint]. medRxiv
2020; https://doi.org/
10.1101 / 2020.04.30.20085670.
7 Kellam P, Barclay W. A dinâmica de
respostas imunes humorais após
infecção por SARS-CoV-2 e o potencial
para reinfecção. J Gen Virol 2020; https: //
MJA 213 (9) ▪ 2 de novembro de 2020
34
90
9.0e1
doi.org/10.1099/jgv.0.001439. [Epub
ahead of print].
8 Rede de Laboratórios de Saúde Pública
Austrália. Declaração de PHLN sobre o
teste de sorologia pointof-care para SARS-
CoV-2 (o vírus que causa COVID-19) [site].
https://www.health.gov. au / resources /
publicações / phln-state ment-on-point-of-
care-sorology-testi ng-for-sars-cov-2-the-
virus-that-causescovid-19(visto em julho de
2020).
9 Royal College of Pathologists da Australásia.
Declaração de posição: Testes PoCT rápidos
COVID-19 IgG / IgM. Sydney: RCPA, 2020.
https://www.rcpa.edu.au/getattachm ent /
bf9c7996-6467-44e6-81f2-e2e0c d71a4c7 /
COVID19-IgG-IgM-RAPID-POCT-TESTS.aspx
(visto em julho de 2020).
10 Lisboa Bastos M., Tavaziva G., Abidi SK, et al.
Acurácia diagnóstica de testes sorológicos
para COVID-19: revisão sistemática e meta-
análise.BMJ 2020; 370: m2516.
11 Deeks JJ, Dinnes J, Takwoingi Y, et al. Testes
de anticorpos para identificação de
infecção atual e passada com SARS-CoV-2.
Banco de dados Cochrane de Syst Rev2020;
(6): CD013652.
12 Conselho Consultivo Nacional de Credenciamento
de Patologia. Diretrizes para teste de ponto de
atendimento, 1ª ed. Comunidade da Austrália,
2015.https://www1.health.gov. au / internet /
main / publishing.nsf / Conte nt /
35DE5FC4786CBB33CA257EEB0 07C7BF2 / $ File /
Guidelines% 20PoCT% 20 1st% 20Ed% 202015.pdf
(visto em julho de 2020).
13 Administração de bens terapêuticos. Aviso
aos consumidores e anunciantes sobre os
kits de teste COVID-19 [site].https://
www.tga.gov.au/media-release/ warning-
consumer-and-advertisersabout-covid-19-
test-kits (visto em julho de 2020).
14 Public Health England. COVID-19:
avaliações laboratoriais de ensaios
sorológicos [site]. Public Health England,
2020.https://www.gov.uk/government/
Publicações / covid-19-Laboratory-Evalu
ations-of-serological-assays (visto em julho
de 2020).
15 Rede de Laboratórios de Saúde Pública. Orientação
da Rede de Laboratórios de Saúde Pública para
testes sorológicos em COVID-19. Canberra:
Departamento de Saúde, 2020.https://
www1.health.gov. au / internet / main /
publishing.nsf / Content / Publications-13(visto em
julho de 2020).
16 Pollán M, Pérez-Gómez B, Pastor-Barriuso R,
et al. Prevalência de SARS-CoV-2 na Espanha
(ENE-COVID): um estudo soroepidemiológico
de base populacional de âmbito nacional.
Lanceta2020; https://doi.org/10.1016/S0140-
6736 (20) 31483-5. [Epub ahead of print]
17 Steensels D, Oris E, Coninx L, et al.
Rastreamento de anticorpos SARS-CoV-2 em
todo o hospital em 3056 funcionários em um
centro terciário na Bélgica.JAMA 2020; 324: 195.
18 Kissler SM, Tedijanto C, Goldstein E, et al.
Projetando a dinâmica de transmissão do
SARS-CoV-2 durante o período pós-
pandêmico.Ciência 2020; 368: 860–868.■