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Bioqumica/pH, pKa e solues tampo

Bioqumica/pH, pKa e solues tampo


pH, pKa e solues tampo
Autoionizao da gua
A gua sofre no autoionizao, ionizando-se a H+ e OH-. Na realidade, o prton, H+, no tem existncia prpria: capturado por uma molcula de gua, originando o ion H3O+ (ion hidrnio ou hidroxnio). Esta ionizao expressa como um equilbrio qumico:

Estrutura do io H3O+.

A extenso desta ionizao bastante pequena: ambos os ons encontram-se a uma concentrao cerca de 10-7 M-1. A capacidade da gua em ionizar-se tem consequncias de grande relevncia fisiolgica. Diversas reaces bioqumicas dependem da transferncia de H+ entre molculas e enzimas, e a transferncia de protes atravs das redes formadas por molculas de gua possibilitada pelo seu pequeno tamanho. A existncia de espcies qumicas com possibilidade de se ionizarem em soluo altera o equilbrio da reaco de autoionizao da gua. A extenso do equilbrio das espcies inicas H3O+ e OH- expresso como um normal equilbrio qumico, ou seja, como a razo entre o produto das concentraes dos ons e o produto dos reagentes.

2 H2O

H3O+ + OH-

Sendo o solvente tambm o nico reagente, a concentrao da gua numa soluo aquosa constante: a 25C, igual a 55,5 M. A expresso de equilbrio pode ser rearranjada da seguinte forma:

em que Kw designado produto inico da gua. O valor de Keq tambm conhecido (1,810-16M), pelo que

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O conceito de pH
Quando [H+]=[OH-], a concentrao de cada uma destas espcies 1,010-7M, a 25C. Nestas condies diz-se que a soluo se encontra a pH neutro. O pH definido como o inverso do logaritmo da concentrao de H+:

Por esta definio, o pH neutro define-se como sendo numericamente igual a 7 (sem unidade). Quando [H+]<[OH-], a soluo ter um pH superior a 7 e diz-se que bsica ou alcalina. Quando [H+]>[OH-], a soluo tem um pH inferior a 7, dizendo-se que uma soluo cida. Pela definio dada acima, possvel estabelecer uma escala numrica de pH que vai de 1 a 14. De notar que quando o pH sobe de um valor, na realidade a soluo de pH maior dez vezes mais bsica, devido natureza logartmica da escala. Dois valores de diferena correspondem a uma diferena de cem vezes, trs valores a mil vezes, etc. De referir que tambm possvel estabelecer uma escala de pOH, de forma similar de pH. No entanto, esta no vulgarmente usada porque em processos biolgicos refere-se normalmente a presena ou ausncia de protes, sendo a escala de pH mais prtica para o efeito.

A escala de pH (e pOH). Quanto menor o pH, mais cida uma soluo: a extrema acidez do suco gstrico ajuda a digesto. O sangue humano tem um pH ligeiramente superior a 7. Produtos comerciais de limpeza tm muitas vezes carcter alcalino.

Que importncia tem o pH de uma soluo? Muitas substncias possuem grupos que podem sofrer protonao, isto , incorporar um ou mais protes; da mesma forma, podem sofrer desprotonao, ou seja perder protes. Em muitos casos, o estado de protonao de uma molcula afecta a sua actividade biolgica. Exemplo disto o estado de protonao de diversas cadeias laterais de aminocidos que constituem enzimas: por vezes, basta um aminocido no possuir um proto para uma enzima inteira no funcionar. O pH de uma soluo pode ser medido de vrias formas. O mtodo de maior sensibilidade o uso de um elctrodo de pH, um dispositivo electroqumico que mede a concentrao de H+ em soluo. O elctrodo parcialmente submergido na soluo a medir; produz ento uma corrente elctrica proporcional concentrao de H+, que convertida a um valor numrico. Para
Protonao da cadeia lateral do aminocido histidina.

Bioqumica/pH, pKa e solues tampo leituras de menor sensibilidade, podem usar-se fitas de pH ou solues indicadoras. As solues indicadoras mudam de cor no chamado ponto de viragem, tendo uma determinada cor abaixo desse valor de pH e outra acima. As fitas de pH usam o mesmo princpio mas em geral usam combinaes de indicadores para uma medio mais precisa do pH.

A constante de ionizao
Qualquer soluo aquosa tem um determinado valor de pH. No s a gua tem capacidade de se ionizar: muitas substncias ionizam-se em soluo aquosa. Como tal, tambm podem ser divididas em cidos, se provocam o abaixamento de pH da soluo, e bases, se aumentam o pH. Neste contexto, um cido pode ser definido simplesmente como uma substncia que doa protes, enquanto uma base uma aceitadora de protes. Um cido que perde os seus protes torna-se numa base, enquanto uma base que ganha protes passa a ser por definio um cido. Tais pares so denominados pares conjugados cido/base. Quando um cido forte, dissocia-se totalmente em soluo. Se o cido for representado como HA, a sua dissociao representada pela equao qumica 2 HA H+ + Aem que A- a base conjugada de HA. Em Bioqumica, estes cidos tm pouco interesse porque no so usuais em sistemas biolgicos. So no entanto mais usuais os cidos fracos, ou seja, aqueles que no se dissociam totalmente em soluo. Estabelece-se ento um equilbrio qumico entre a espcie protonada e a espcie desprotonada; neste caso, a ionizao do cido representada como: 2 HA H+ + A-

Tal como para a autoionizao da gua, pode definir-se uma constante de equilbrio para a ionizao de um cido. Neste contexto, a constante denominada constante de acidez, Ka.

Um exemplo comum de cido fraco o cido actico, CH3COOH, que se ioniza a anio acetato e doa um proto nesse processo: 2 CH3COOH H+ + CH3COO-

cuja respectiva constante de acidez ento definida por:

Neste caso, o grupo carboxilo, -COOH, que sofre ionizao. Este um dos grupos encontrados em diversas molculas biolgicas cujas propriedades acdicas so importantes de reconhecer. Quanto mais forte um cido, mais este se dissocia em soluo aquosa e maior Ka. O caso demonstrado assume que o cido monoprtico, ou seja, que doa apenas um proto. Este no sempre o caso, existindo cidos diprticos (que doam dois protes) e triprticos (doam trs protes). Os cidos que doam mais de um proto tm constantes de acidez especficas para cada ionizao: a primeira ionizao tem um Ka1 relativamente baixo, a segunda ionizao um Ka2 um pouco maior e a terceira (a haver) tem o Ka3 mais elevado. Da mesma forma como se definiu pH, possvel definir o pKa de um cido, sendo o logaritmo do inverso de Ka:

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Titulao e zona tampo de um par conjugado cido/base


O pKa uma grandeza que permite saber a fora de um cido de forma mais intuitiva que atravs do valor de Ka. Quanto menor o pKa de um cido, maior a sua tendncia a ionizar-se e, consequentemente, mais forte o cido. Quando o pH de uma soluo aquosa contendo um cido fraco igual ao pKa desse cido, [HA]=[A-]. O valor de pKa de um cido pode ser facilmente calculado atravs de uma curva de titulao. Uma titulao consiste na adio de uma base a uma soluo aquosa de um cido (ou um cido a uma soluo aquosa de uma base) em pequenas quantidades, medindo-se o pH da soluo aps cada adio. A soluo que se adiciona chamada titulante e a que sofre a adio titulada. O resultado de tais medies (ttulo) uma curva de forma sinusoidal em que o centro geomtrico corresponde ao pKa do cido. Num contexto bioqumico, interessa saber as propriedades de cidos e bases fracos, pelo que as titulaes destes so sempre feitas com bases e cidos fortes, respectivamente. Porque tem a curva de titulao uma forma sinusoidal? Considere-se que numa soluo aquosa de um cido fraco tm-se dois equilbrios qumicos, nomeadamente o da autoionizao da gua e a dissociao do cido:

Animao de uma titulao cido-base.

2 H2O 2 HA

H+ + A-

H3O+ + OH-

Esta soluo ter um dado pH, de valor relativamente baixo, pois o cido encontra-se ligeiramente dissociado. Ao adicionar-se uma base forte como por exemplo o hidrxido de sdio (NaOH), esta dissocia-se totalmente em soluo, havendo ento anies OH- que podem combinar-se com o H+ "livre", formando H2O. Esta reaco fora a diminuio da concentrao de H+ em soluo; pelo princpio de Le Chatelier, o cido ter de se dissociar um pouco mais para compensar esta "falta" de H+, atingindo-se novo equilbrio entre cido e a sua base conjugada. medida que se acrescenta mais OH-, cada vez mais cido se dissocia. Chega-se ento a um ponto em que metade de HA que existia no incio encontra-se sob a forma da sua base conjugada, A-: est-se a meio da titulao, forma adicionados 0,5 equivalentes de OH- ao cido e o pH neste ponto igual ao pKa do cido. medida que se acrescenta mais OH-, o pH continua a subir e o cido a dissociar-se. No fim da titulao, todo o cido encontra-se dissociado sob a forma de A-. Como se pode notar, na zona central do grfico a variao de pH diminui (O GRFICO EST ERRADO, NELE O pH EST AUMENTANDO MAIS RPIDO NA FAIXA CENTRAL DO GRFICO. NO TENHO A FIGURA PARA CORRIGIR, ENTO O RESPONSVEL FAA!) com a adio de quantidades equivalentes de base. Esta zona chamada zona tampo e tem grande importncia biolgica, como ser evidente mais adiante. A zona tampo existe porque durante essa parte da titulao existem dois equilbrios (o da autoionizao da gua e o da dissociao

Bioqumica/pH, pKa e solues tampo do cido) que se compensam mutuamente, fazendo com que a concentrao de H+ no se altere significativamente. possvel relacionar a concentrao do tampo com o pH e o pKa atravs da chamada equao de Henderson-Hasselbalch. Partindo-se da definio de constante de acidez e pondo em evidncia a concentrao de H+, pode rearranjar-se a relao sob a forma:

Se se aplicar o logaritmo negativo a ambos os termos da equao, tem-se:

Como -logX = pX, a equao pode ser escrita da forma:

ou ainda

sendo esta a forma mais conhecida da equao de Henderson-Hasselbalch. Esta relao matemtica explica a forma quasi-sinusoidal da curva de titulao e mostra tambm que pH = pKa quando as concentraes de cido e da sua base conjugada so iguais.

As solues tampo em sistemas biolgicos


Uma soluo tampo uma soluo aquosa de um cido e da sua base conjugada que no sofre variaes significativas de pH quando se adicionam pequenas quantidades de cidos ou bases. So portanto solues cujo pH ideal se encontra no centro da zona tampo do par conjugado cido/base. Como j referido, muitos processos biolgicos dependem do estado de protonao de molculas como as enzimas, sendo portanto fundamental o controlo rigoroso do pH do meio em que esses processos se desenrolam. Fluidos como o sangue e o citoplasma tm um pH definido, geralmente em torno de 7, e que no muda significativamente graas presena de diversas substncias dissolvidas que actuam como tampo. O citoplasma rico em protenas; os grupos laterais ionizveis de aminocidos que constituem essas protenas tm um papel fundamental no tamponamento do meio intracelular. Outras molculas ionizveis, como o ATP, cidos nucleicos e compostos intermedirios de vias metablicas, entre outros, contribuem tambm para a manuteno de um valor mais ou menos estvel de pH no interior da clula. Dois dos tampes fisiolgicos mais importantes, especialmente em fluidos como o sangue, so o tampo de carbonatos e o tampo de fosfatos. O dixido de carbono (CO2), um gs em condies normais de presso e temperatura, pode dissolver-se em solues aquosas formando cido carbnico, H2CO3. Estabelece-se ento o equilbrio CO2 (g) + H2O (l) H2CO3 H2CO3 (aq)

Por sua vez, o cido carbnico dissocia-se em soluo aquosa, estabelecendo-se um segundo equilbrio: A quantidade de io hidrogenocarbonato (HCO3-) em soluo depende em primeira instncia da presso parcial do CO2, pois esta determina o equilbrio entre CO2 dissolvido e no dissolvido em soluo. Assim, quanto mais dixido de carbono for dissolvido, maior ser a acidificao da soluo aquosa em que este se dissolve. O tampo de fosfatos, em situao fisiolgica, refere-se especificamente ao equilbrio H2PO4HPO42- + H+ HCO3- + H+

Bioqumica/pH, pKa e solues tampo sendo um tampo natural no citoplasma de todas as clulas, j que o grupo fosfato est presente em diversas molculas biolgicas. Em trabalho laboratorial biolgico e bioqumico comum trabalhar-se com solues tampo para manter o material de estudo (clulas, enzimas, tecidos, etc.) num meio com pH definido. Diversas solues tampo podem ser feitas, dependendo do pH a que se pretende manter o material. Para isto. necessrio saber qual o pH ptimo desse material, ou seja, o pH a que se pode detectar um mximo de actividade fisiolgica. Esta actividade est relacionada no s com o estado de protonao dos metabolitos envolvidos em reaces bioqumicas, mas tambm (e principalmente) com a estabilidade e estado de protonao das enzimas envolvidas nessas reaces. Os tampes de carbonatos e fosfatos so vulgarmente usados, mas outros de origem sinttica, como o Tris-HCl (base Tris(hidroxilamina)aminometano, cido HCl) ou o HEPES (cido N-(2-hidroxietilo)-piperazina-N'-2-etanesulfnico, uma molcula anfotrica), so tambm de uso comum.

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