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com
 Marsh e Martins
Microbiologia Oral
Dedicatórias
Para: Jane, Katherine, Thomas, Jonathan,
Heather, Christopher e Andrew
Mike, Ben e Sam
Lorna, Daniel, Ailish, Calum e Sioned
Andrew, Coren, Arran e Elinor

Para Elsevier
Estrategista de Conteúdo: Alison Taylor
Especialista em Desenvolvimento de Conteúdo: Veronika Watkins
Gerente de Projetos: Andrew Riley
Designer/Direção de Design: Christian Bilbow
Gerente de Ilustração: Karen Giacomucci / Amy Naylor
Ilustrador: MacPS
 6ª edição

Microbiologia Oral
de Marsh e Martin
Professor Philip D. Marsh BSc, PhD
Líder Científico Chefe, Public Health England, Salisbury, Reino Unido;
Professor de Microbiologia Oral, Faculdade de Odontologia, Universidade
de Leeds, Reino Unido

Professor Michael AO Lewis PhD, BDS, FDSRCPS,

FDSRCS (Ed e Eng), FRCPath, FHEA, FFGDP (Reino
Unido)
Professor de Medicina Oral e Reitor, Faculdade de Odontologia, Faculdade
de Ciências Biomédicas e da Vida, Universidade de Cardiff, Heath Park,
Cardiff, Reino Unido

Dra Helen Rogers, MB ChB BDS BSc MFDS

FDS (OMed) RCS Eng
Consultor e Professor Honorário em Medicina Oral, University of Bristol Dental
Hospital, Bristol, Reino Unido

Professor David W. Williams BSc (Hons), PhD

Professor de Microbiologia Oral, Faculdade de Odontologia, Faculdade de
Ciências Biomédicas e da Vida, Universidade de Cardiff, Heath Park, Cardiff,
Reino Unido

Dr Melanie Wilson BSc (Hons), BDS, PhD,

FDSRCS, FRCPath
Palestrante Sênior e Consultor Honorário em Microbiologia Oral, Faculdade de
Odontologia, Faculdade de Ciências Biomédicas e da Vida, Universidade de Cardiff,
Heath Park, Cardiff, Reino Unido

Ilustrações de MacPS
Edimburgo Londres Nova York Oxford Filadélfia St Louis Sydney Toronto 2016

iii
© 2016 Elsevier Ltda. Todos os direitos reservados.

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Este livro e as contribuições individuais nele contidas são protegidas por direitos autorais da Editora
(exceto conforme indicado aqui).

Primeira edição 1980

Segunda Edição 1984
Terceira edição 1992
Quarta Edição 1999
Quinta Edição 2009
Sexta Edição 2016

ISBN 978-0-7020-6106-6

Catalogação da Biblioteca Britânica em Dados de Publicação

Um registro de catálogo para este livro está disponível na Biblioteca Britânica

Catalogação da Biblioteca do Congresso em Dados de Publicação

Um registro de catálogo para este livro está disponível na Biblioteca do Congresso

Avisos
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O
do editor
política é usar
papel fabricado
de florestas sustentáveis

Impresso na China
Conteúdo

Prefácio vi
Agradecimentos vii
1 Introdução 1
2 A boca como habitat microbiano 10
3 A microbiota oral residente 26
4 Distribuição, desenvolvimento e benefícios da microbiota oral 51
5 Placa dentária 81
6 Doenças mediadas por placa: cárie dentária e doenças
periodontais 112
7 Infecções bacterianas orofaciais 159
8 Infecções fúngicas orais 175
9 Infecções virais orofaciais 190
10 Agentes antimicrobianos 202
11 Microbiota oral e doenças sistêmicas 217
12 Controle de infecção 237
Respostas de múltipla escolha 249

v
Prefácio
O objetivo da última edição deste livro de sucesso
continua sendo descrever a complexa relação entre a
microbiota oral residente e o hospedeiro na saúde e
na doença. A Sexta Edição foi completamente
reescrita e atualizada, mas mantém sua filosofia de
explicar essa relação em termos ecológicos. Essa
abordagem é benéfica para o leitor, fornecendo um
conjunto claro de princípios para explicar as questões
subjacentes que determinam se a microbiota terá ou
não uma relação benéfica ou adversa com o
hospedeiro em um determinado local. Essas
informações fornecem uma base que pode ser
explorada por pesquisadores ou profissionais de
saúde para entender, prevenir ou controlar doenças.
Esta nova edição reflete o impacto que a era
genômica teve na área temática. A aplicação de técnicas
de biologia molecular revolucionou o nosso
conhecimento da riqueza e diversidade dos
microrganismos que podem ser encontrados na boca e
destacou que, mesmo com as técnicas mais sofisticadas,
apenas cerca de 50% a 70% dos microbiota podem ser
cultivadas em laboratório. Essas abordagens
moleculares também implicaram o envolvimento de
complexos consórcios de microrganismos na etiologia
vi
de doenças bucais. Esta edição inclui novas seções
sobre os benefícios da microbiota oral residente para
o hospedeiro e sobre os conceitos atuais de fatores
que impulsionam a disbiose na doença periodontal.
Há um novo capítulo sobre o papel emergente dos
microrganismos orais em doenças sistêmicas,
enquanto as visões contemporâneas sobre o uso
terapêutico e profilático de antibióticos e sobre o
controle de infecções foram expandidas.
Esta nova edição baseia-se no sucesso das
anteriores e oferece uma cobertura ainda mais
abrangente do campo da microbiologia oral. O layout
do livro foi reformulado, com pontos-chave
destacados para facilitar o aprendizado, e cada
capítulo agora tem um conjunto de perguntas de
múltipla escolha para ajudar no auto-aprendizado. O
livro será adequado para estudantes de graduação e
pós-graduação, pesquisadores e uma ampla gama de
profissionais clínicos odontológicos.
Phil Marsh
Mike Lewis
Helen Rogers
David Williams
Melanie Wilson
Agradecimentos
Gostaríamos de agradecer aos muitos colegas que deram
permissão para reproduzir figuras usadas em edições
anteriores, e a Mike Curtis, Deirdre Devine, Thuy Do,
Josephine Meade, Wendy Rowe, Kirsty Sands, Owain
Dafydd Thomas, Adam Jones e William Wade que
forneceu novas informações ou imagens para a Sexta
Edição. Os autores também gostariam de agradecer
as contribuições herdadas de edições anteriores do
Dr. Mike Martin. Agradecimentos especiais também
vão para nossas famílias que nos apoiaram durante a
preparação desta edição, e aos editores por suas
contribuições úteis.
vii
Esta página foi intencionalmente deixada em branco

Introdução
Microbiota humana
Benefícios da microbiota humana
Microbiota oral na saúde e na doença
Princípios de ecologia microbiana
Escala de doenças bucais
Microbiota oral e doenças sistêmicas
Resumo do capítulo
Leitura adicional
CAPÍTULO1
Osaúde geral está intrinsecamente ligada à saúde geral,
e vice versa. Continuam a acumular-se evidências que
demonstram que os microrganismos que habitam a boca
têm uma função crucial no desenvolvimento normal da
fisiologia da cavidade oral, e desempenham um papel
mais amplo na manutenção do bem-estar do hospedeiro.
A boca é a porta de entrada do corpo para o mundo
externo e representa um dos locais biologicamente mais
complexos do corpo. É aqui que ocorrem as primeiras
etapas do processo digestivo e, consequentemente, a
boca é ricamente dotada de funções sensoriais (sabor,
cheiro, temperatura e textura). Também desempenha um
papel crítico na comunicação, seja pela fala ou pelas
expressões faciais, e contribui significativamente para a
nossa aparência. Manter uma boca saudável é, portanto,
de vital importância para a auto-estima e a saúde geral
de uma pessoa.
A boca é uma parte do corpo facilmente acessível e,
portanto, pode fornecer aos profissionais de saúde uma
'janela' para a saúde bucal e geral de uma pessoa.
Doenças localizadas em outras partes do corpo podem
se refletir na boca e, como resultado, a saliva está se
tornando cada vez mais reconhecida como um fluido
diagnóstico fundamental. Por exemplo, candidíase oral
(Capítulo 8) em adultos jovens previamente saudáveis
pode ser o primeiro sinal de infecção pelo vírus da
imunodeficiência humana (HIV), enquanto anticorpos
contra uma variedade de vírus podem ser detectados na
saliva. Fatores de risco para a saúde geral, como
tabagismo, abuso de álcool e alimentação inadequada,
também podem ter um efeito deletério na saúde bucal,
enquanto, de forma análoga, a doença bucal também
pode impactar na saúde geral do indivíduo. Estudos
recentes sugerem que a doença periodontal grave em
algumas populações pode ser um fator de risco para
bebês prematuros ou com baixo peso ao nascer, doenças
cardíacas, doenças pulmonares, artrite reumatóide,
algumas formas de câncer e diabetes mellitus (ver
adiante eCapítulo 11).
1
2 Microbiologia Oral de Marsh e Martin cada microbiota em uma pessoa em um determinado
local é relativamente
A boca é uma das principais interfaces entre o corpo
e o ambiente externo e pode atuar como local de entrada
de alguns patógenos microbianos, principalmente do ar
ou via ingestão durante a alimentação. Portanto, está
equipado com uma ampla gama de estratégias de defesa
que incluem elementos do sistema imunológico inato e
adaptativo (verCapítulo 2). De fato, a capacidade do
hospedeiro de reconhecer e responder a patógenos
invasores, ao mesmo tempo em que tolera uma
microbiota residente diversificada (verCapítulo 3)
continua sendo um dos feitos mais notáveis da evolução,
e os mecanismos precisos que permitem esse nível de
discriminação ainda não são totalmente compreendidos.

MICROBIOTA HUMANA
Estima-se que o corpo humano seja composto por
mais de 1014células das quais apenas cerca de 10%
são de mamíferos. O restante são os microrganismos
que compõem a microbiota humana residente. A
microbiota é o termo usado para definir o conjunto
completo de microrganismos em um determinado
local. Outro termo é o microbioma, que descreve a
microbiota e seu material genético coletivo em um
local no corpo humano ou em outro lugar.
A microbiota humana residente não tem apenas
uma relação passiva com seu hospedeiro, mas
contribui direta e indiretamente para o
desenvolvimento normal da fisiologia, nutrição e
sistemas de defesa do organismo. Em geral, a
microbiota humana existe em harmonia com o
hospedeiro e ambas as partes se beneficiam da
associação (simbiose). A perda ou perturbação da
microbiota residente pode levar à colonização por
microrganismos exógenos (e muitas vezes
patogênicos), predispondo assim os locais a doenças,
e ter um impacto deletério sobre aspectos da
fisiologia do hospedeiro (ver adiante eCapítulo 4).
O genoma humano é composto por
aproximadamente 23.000 genes, mas coletivamente o
microbioma humano tem mais de 1 milhão de genes.
Atualmente, apenas cerca de 50 a 70% da microbiota
humana pode ser cultivada em laboratório. Estudos
moleculares (independentes de cultura) mostraram
que, embora a composição da microbiota varie em
locais específicos do corpo em indivíduos saudáveis,
as funções metabólicas de cada microbiota são
semelhantes. Uma vez formada, a composição de
 raramente se estabelecem em números significativos na
boca de uma pessoa saudável. Da mesma forma, menos
de 30 em mais de 700+tipos de microrganismos que
Nasofaringe podem ser encontrados na boca são capazes de colonizar
Estreptococo o trato gastrointestinal, apesar da passagem contínua
Neisseria (pela deglutição de saliva) desses micróbios para o
Moraxela intestino. Além disso, as espécies predominantes de
Pele bactérias podem diferir marcadamente em superfícies
Haemophilus distintas na boca, apesar de esses organismos terem
Estafilococo oportunidades iguais para colonizar cada local, e isso se
Micrococcus deve novamente a variações sutis na
Boca
Corynebacterium
Estreptococo
Propionibacterium
Actinomyces
Prevotella
Intestino
Fusobacterium
Peptoestreptococo
Eubactéria
Trato urogenital
Clostridium
Estreptococo
Bifidobactéria
Estafilococo
Bacteroides
Lactobacillus
Candida

FIGURA 1.1Distribuição da microbiota humana residente.

Os grupos de microrganismos predominantes em alguns
sítios anatômicos distintos são listados.

estável ao longo do tempo, e a variação dentro de

uma pessoa ao longo do tempo em cada local é
menor do que a variação de sujeito para sujeito em
locais equivalentes.
A colonização microbiana de todas as superfícies
ambientalmente acessíveis do corpo (externas e
internas) começa no nascimento. Tais superfícies estão
expostas a uma ampla gama de microrganismos
provenientes do meio ambiente e de outras pessoas. No
entanto, devido às diferenças nas propriedades físicas e
biológicas, cada superfície é adequada para colonização
por apenas uma proporção desses micróbios. Isso resulta
na aquisição, seleção e desenvolvimento natural de uma
microbiota diversificada, mas característica em locais
distintos.FIGO. 1.1). Por exemplo, estafilococos e
micrococos predominam na superfície da pele, mas
 promovem o desenvolvimento de vilosidades e redes
capilares nas vilosidades.
Os seres humanos existem em um estado de
PONTOS CHAVE
equilíbrio natural (home-ostasia) com sua microbiota,
Os seres humanos são compostos de dez vezes mais mas uma mudança neste
células microbianas do que células de mamíferos. Esses
microrganismos formam a 'microbiota humana' e
conferem benefícios essenciais ao hospedeiro. A
composição da microbiota varia em diferentes
superfícies do corpo e é característica desse local. Isso
demonstra que a microbiota é diretamente influenciada
pelo ambiente local que prevalece em cada local e
superfície, e é responsiva a mudanças.

parâmetros-chave que influenciam o crescimento

microbiano e a competitividade (verCapítulo 4).

BENEFÍCIOS DA MICROBIOTA HUMANA

Estudos microbiológicos contemporâneos continuam
a identificar mecanismos pelos quais nossa
microbiota humana natural está contribuindo
ativamente para o bem-estar e desenvolvimento
normal do hospedeiro. A maioria das informações foi
obtida a partir de estudos da microbiota intestinal.
Esses consórcios microbianos demonstraram:
• auxiliar a digestão de compostos dietéticos que
de outra forma seriam indigestos;
• sintetizar compostos benéficos, como vitaminas
B (ácido fólico, biotina) e vitamina K;
• metabolizar compostos potencialmente nocivos,
como ácidos biliares, colesterol, nitrosaminas, etc.;
• gerar ácidos graxos de cadeia curta a partir do
metabolismo de polissacarídeos dietéticos que atuam
como fontes de energia chave para a mucosa colônica
humana;
• prevenir a colonização por microrganismos
exógenos (resistência à colonização); e
• promover o desenvolvimento de um sistema
imunológico competente e modular as vias pró-
inflamatórias.
Os ácidos graxos de cadeia curta gerados por
bactérias contribuem com até 10% das necessidades
calóricas diárias do hospedeiro; em particular, os
colonócitos derivam de 60% a 70% de suas
necessidades energéticas do butirato, que é um
produto final comum do metabolismo bacteriano no
intestino e que também pode ser anticarcinogênico.
Essas interações são importantes para a renovação da
mucosa intestinal e a motilidade intestinal, e também
 1Introdução comportar dessa maneira. De fato, a maioria das pessoas
sofre

o equilíbrio pode levar ao desenvolvimento de um

relacionamento deletério; este processo é denominado
disbiose. No intestino, isso pode resultar em doenças
inflamatórias intestinais (por exemplo, colite ulcerativa
e doença de Crohn) e câncer colorretal. Alterações na
composição e no metabolismo da microbiota intestinal
também estão ligadas à obesidade e à resistência à
insulina. Assim, as microbiotas humanas residentes não
são mais passageiros em nossas superfícies mucosas,
mas são parte integrante e íntima de nossa constituição;
eles desempenham um papel essencial na promoção da
saúde geral e na garantia de nosso desenvolvimento
fisiológico normal.

MICROBIOTA ORAL NA SAÚDE E NA DOENÇA

A boca assemelha-se a outros sítios do corpo por possuir

uma microbiota natural com composição característica e
existir na maioria das vezes numa relação harmoniosa e
positiva com o hospedeiro, onde proporciona inúmeros
benefícios (verCapítulo 4) de maneira análoga à descrita
anteriormente para a microbiota intestinal. A microbiota
oral é descrita em detalhes emCapítulo 3e sua
distribuição intraoral é apresentada emCapítulo 4. No
entanto, e talvez mais comumente do que em outras
partes do corpo, esse relacionamento pode se romper na
boca (disbiose) e a doença pode ocorrer. Isso geralmente
está associado a:
• grandes alterações na biologia da boca de fontes
exógenas (exemplos incluem: tratamento com
antibióticos ou a ingestão frequente de carboidratos
fermentáveis na dieta) ou de alterações endógenas,
como alterações na integridade das defesas do
hospedeiro após terapia medicamentosa, que
perturbam a estabilidade natural da microbiota;
• falha das práticas de higiene bucal para manter
a microbiota bucal em níveis compatíveis com a
saúde; ou
• a colonização de locais normalmente não
acessíveis aos microrganismos orais; por exemplo,
quando bactérias orais entram na corrente sanguínea
após extração dentária ou outros traumas e são
disseminadas para órgãos distantes, onde podem
causar abscessos ou endocardite.Capítulo 7), ou
condições sistêmicas mais graves (Capítulo 11).
Microrganismos com potencial para causar doenças
dessa maneira são denominados patógenos oportunistas,
e muitos microrganismos orais têm a capacidade de se
4 Microbiologia Oral de Marsh e Martin microbiana) pode ser perturbada se as condições
ambientais se alterarem. Os primeiros estudos
mostraram que a oclusão do antebraço
algum tempo de sua vida de episódios localizados de
doença na boca causados por desequilíbrios (disbiose)
na composição de sua microbiota oral residente. As
manifestações clínicas mais comuns de tais
desequilíbrios são a cárie dentária e as doenças
periodontais (verCapítulo 6), ambos muito prevalentes
em sociedades industrializadas e estão agora a aumentar
nos países em desenvolvimento. Outras infecções
agudas e crônicas ocorrem, mas com menos frequência
(verCapítulo 7). A cárie dentária é a dissolução do
esmalte ou superfícies radiculares (desmineralização)
por ácido produzido principalmente a partir do
metabolismo de carboidratos fermentáveis na dieta por
bactérias que colonizam a superfície do dente (placa
dental). A placa dentária também está associada à
etiologia das doenças periodontais nas quais o
hospedeiro monta uma resposta inflamatória inadequada
a um aumento da carga microbiana (causada pelo
acúmulo de placa) ao redor da gengiva, resultando em
danos aos tecidos de suporte dos dentes.
Cáries e doenças periodontais apresentam desafios
distintos quando se trata de determinar sua etiologia
microbiana. Essas doenças ocorrem em locais com uma
microbiota residente natural diversa preexistente,
embora consórcios de microrganismos ainda mais
complexos, mas distintos, estejam implicados com a
patologia. É necessário, portanto, determinar quais
espécies microbianas estão diretamente implicadas na
doença ativa, quais estão presentes como resultado da
doença e quais são meros espectadores inocentes.
Numerosos estudos mostraram que essas doenças
comuns são causadas por alterações no equilíbrio da
microbiota residente, em que alguns componentes
menores da placa dentária tornam-se predominantes
devido a uma mudança nas condições ambientais locais.
Essas mudanças na composição da placa dental em
cáries e doenças periodontais são descritas em detalhes
emCapítulo 6.

PRINCÍPIOS DE ECOLOGIA
MICROBIANA
Existe uma relação íntima e dinâmica entre a microbiota
humana e o hospedeiro. A composição microbiana da
microbiota varia em superfícies distintas (pele, boca,
trato gastrointestinal, etc.) devido às condições
ambientais predominantes, mas é razoavelmente estável
ao longo do tempo em cada uma dessas superfícies. No
entanto, esta estabilidade (denominada homeostase
 Doença

Chave oral Suscetível

microorganismos hospedeiro

De Meio Ambiente
acionar

FIGURA 1.2As inter-relações que levam à doença bucal. Os

gatilhos ambientais incluem uma dieta rica em açúcar e
antibioticoterapia, embora a suscetibilidade do hospedeiro
possa aumentar devido ao fluxo reduzido de saliva ou
imunossupressão.

(para aumentar os níveis de umidade e umidade

locais) resultou no aumento da microbiota da pele em
várias ordens de magnitude, com uma mudança de
uma microbiota dominada por estafilococos para uma
com altas proporções de corinebactérias cutâneas.
Assim, o microbioma responde às mudanças nas
condições ambientais locais e segue princípios
ecológicos.
As doenças dentárias (incluindo cáries e doenças
periodontais) resultam de uma interação complexa do
meio ambiente (por exemplo, a natureza e frequência da
dieta e fatores de estilo de vida, como tabagismo), a
microbiota residente e o hospedeiro.FIGO. 1.2). Para
determinar a etiologia e os mecanismos biológicos por
trás dessas doenças, é necessário entender os fatores que
influenciam essas interações. Isso pode ser alcançado
pela aplicação dos princípios da ecologia microbiana.
Neste livro, serão exploradas as relações entre
microrganismos orais e entre esses microrganismos e o
hospedeiro. A composição geral da microbiota oral está
bem caracterizada, e agora está surgindo mais sobre
como as propriedades da boca influenciam a
composição e o metabolismo da microbiota residente na
saúde e na doença. A microbiota oral está em equilíbrio
dinâmico com o hospedeiro, e uma mudança em um
parâmetro chave que influencia o crescimento
microbiano pode perturbar esse equilíbrio e determinar
se a microbiota oral terá uma relação simbiótica ou
disbiótica com o hospedeiro.

Saliva Estilo de vida
Em todos os lugares
microbiano
ecologia
Hospedeiro
Microbiota defesas
FIGURA 1.3As inter-relações que influenciam a ecologia microbiana
da boca na saúde e na doença. Os micro-organismos predominantes
na boca podem se alterar devido a mudanças no fluxo salivar, estilo
de vida (por exemplo, hábito de fumar, dieta) ou alterações na
integridade das defesas do hospedeiro. Essas alterações podem
predispor os locais à doença.
A filosofia deste livro é que a chave para uma
compreensão mais completa do papel dos
microrganismos nas doenças orais depende de uma
mudança de paradigma dos conceitos derivados de
estudos de doenças com um simples e específico (talvez
única espécie) etiologia a uma apreciação dos princípios
ecológicos. A maioria das doenças da boca tem etiologia
polimicrobiana (múltiplas espécies). A capacidade dos
consórcios de bactérias de causar doenças depende do
resultado de várias interações entre os próprios
micróbios e entre esses microrganismos e o hospedeiro.
Pode ser necessário, portanto, adotar uma abordagem
mais holística ao relacionar a microbiota oral à doença.
A atividade e o comportamento desses micróbios estão
intimamente ligados a outros sistemas biológicos na
boca (verFIGO. 1.2eFIGO. 1.3). Assim, a composição e
o metabolismo das bactérias em um local serão
influenciados pela taxa de fluxo e propriedades da
saliva, o estilo de vida de um indivíduo (em particular, a
presença do hábito de fumar, a natureza da dieta e a
exposição a medicamentos), e a integridade das defesas
do hospedeiro. Por exemplo, o risco de cárie pode
aumentar não apenas devido à ingestão frequente de
carboidratos fermentáveis na dieta, mas também como
consequência da medicação de longo prazo para uma
queixa médica não relacionada, porque um efeito
colateral de tal tratamento pode ser uma saliva reduzida
fluxo. Da mesma forma, fumar tabaco pode prejudicar o
funcionamento das defesas do hospedeiro,
1Introdução
levando a uma falha no controle do crescimento de
microrganismos potencialmente patogênicos. As
infecções fúngicas orais surgem após o uso de
dentaduras, supressão das defesas do hospedeiro ou
antibioticoterapia que remove bactérias residentes
concorrentes. A aceitação de tais princípios
ecológicos pode explicar mais prontamente a
transição da microbiota oral de uma relação comensal
para uma relação patogênica com o hospedeiro
(disbiose), e também abrir novas oportunidades de
prevenção, tratamento e controle.
Grande parte da terminologia usada neste livro para
descrever eventos na ecologia microbiana será definida
porAlexandre (1971). O local onde os microrganismos
crescem é o habitat. Vários termos têm sido usados para
descrever as misturas características de microrganismos
associados a um sítio. Estes incluem a microbiota
normal, nativa ou comensal, mas algumas dificuldades
na nomenclatura surgem se algum dos organismos
estiver associado a doenças em algumas
ocasiões.Alexandre (1971)propuseram que as espécies
encontradas caracteristicamente em um habitat
particular deveriam ser denominadas microorganismos
autóctones. Eles se multiplicam e persistem em um local
(sem distinção quanto ao potencial de doença) e podem
ser contrastados com organismos alóctones que se
originam de outros lugares e geralmente são incapazes
de colonizar com sucesso, a menos que o ecossistema
seja severamente perturbado. Alternativamente, uma
abordagem mais simples tem sido usar o termo
microbiota residente para incluir a coleção completa de
microrganismos que são regularmente isolados de um
local; novamente, nenhuma distinção em relação à
doença potencial é feita.
As espécies microbianas que compõem a microbiota
local interagem entre si e funcionam como uma
comunidade microbiana (ou consórcio microbiano)
formada por populações de espécies individuais ou
grupos menos definidos (taxa); as propriedades dessas
comunidades é mais do que a soma das espécies
componentes. Essas comunidades microbianas crescem
nas superfícies orais de maneira organizada para formar
estruturas complexas denominadas biofilmes.capítulo
5). O significado de um estilo de vida de biofilme é que
esse microrganismo é mais tolerante a agentes
antimicrobianos e menos suscetível ou acessível às
defesas do hospedeiro. A microbiota em um habitat
específico, juntamente com o ambiente biótico e
abiótico ao qual esses organismos estão associados, é
conhecido como ecossistema. O nicho
6 Microbiologia Oral de Marsh e Martin
é definida aqui como a função de um organismo em
um habitat particular. Assim, o nicho não é a
localização física de um organismo, mas é o seu
papel dentro da microbiota. Este papel é ditado pelas
propriedades biológicas de cada população
microbiana. Espécies com funções idênticas em um
determinado habitat competirão pelo mesmo nicho,
embora a coexistência de muitas espécies em um
habitat se deva ao fato de cada população ter um
papel diferente (nicho) e, assim, evitar a competição.
Os microrganismos que têm o potencial de causar
doenças são denominados patógenos. Como afirmado
anteriormente, aqueles que causam doenças apenas
em circunstâncias excepcionais são descritos como
patógenos oportunistas e podem ser distinguidos de
patógenos verdadeiros ou evidentes que estão
consistentemente associados a uma doença
específica.
ESCALA DE DOENÇAS Orais
Embora raramente ameacem a vida, as doenças bucais
são um grande problema para os prestadores de serviços
de saúde em países desenvolvidos devido à sua alta
prevalência na população em geral e aos enormes custos
associados ao seu tratamento. Esses custos aumentam
ainda mais com o tratamento de uma série de infecções
agudas (predominantemente abscessos dentoalveolares)
e condições crônicas, como actinomicose e infecções
fúngicas; estes são descritos emCapítulos 7e8,
respectivamente. Por exemplo, o National Health
Service (NHS) no Reino Unido gastou mais de £ 3
bilhões por ano em tratamento odontológico entre 2010
e 2011, e esse número aumenta para quase £ 6 bilhões
quando os custos crescentes do setor privado são
incluídos. Apesar desse investimento, em uma pesquisa
nacional com cerca de 14.000 crianças na Inglaterra,
País de Gales e Irlanda do Norte em 2013, 34% das
crianças de 12 anos e 46% das de 15 anos tinham cárie
dentária em seus dentes permanentes, enquanto quase
um terço das crianças de 5 anos e quase metade das
crianças de 8 anos tiveram cárie em seus dentes
decíduos. As taxas de cárie dentária foram maiores entre
as crianças de famílias carentes. A razão mais comum
para crianças em idade escolar primária serem
internadas no hospital é a extração de vários dentes.
Tendências semelhantes ocorrem em outros países.
A cárie ainda afeta mais de 25% das crianças de 2 a 5
anos e 50% das de 12 a 15 anos. As doenças
periodontais avançadas afetam 4% a 12% dos adultos
nos Estados Unidos, enquanto 25% dos adultos com
mais de 65 anos não têm dentes naturais. A cárie
dentária não tratada em dentes permanentes foi
relatada como a condição mais prevalente em todo o
mundo, com 2,4 bilhões de pessoas afetadas,
enquanto a cárie não tratada em dentes decíduos foi a
décima condição mais prevalente, afetando 621
milhões de crianças.
Em geral, a saúde bucal nos países em
desenvolvimento está melhorando devido a uma
melhor higiene bucal, o uso de produtos de higiene
bucal mais eficazes e uma maior conscientização
sobre doenças dentárias entre a população em geral.
Como resultado, a incidência de cárie dentária vem
caindo em crianças nas últimas décadas. A meta da
Organização Mundial da Saúde (OMS) de que 50%
das crianças de 5 anos não tenham cárie já foi
alcançada por muitos países. Isso foi acompanhado
por um aumento no número de pessoas que retêm
seus dentes na vida adulta.
Essas tendências não devem induzir a um
sentimento de complacência; o aumento no número
de dentes mantidos significa que os locais e
superfícies suscetíveis correm o risco de doenças
dentárias (incluindo cáries) ao longo da vida de um
indivíduo. Na Europa, 80% dos idosos já têm alguns
dentes naturais, e o número médio de dentes retidos
por esses indivíduos também aumentou. As crianças
que atualmente estão desfrutando de baixos níveis de
cárie precisarão desenvolver um estilo de vida que
inclua boa higiene bucal, uma dieta adequada e
visitas regulares a dentistas para evitar problemas
mais tarde na vida devido a doenças periodontais ou
cáries na superfície radicular. .
Existem profundas disparidades em saúde bucal
dentro de uma população devido a diferenças de status
socioeconômico e raça ou etnia; pesquisas mostram que
cerca de 80% das cáries infantis são encontradas
em<20% das crianças na Europa, e tendências
semelhantes existem em outros lugares. Há evidências
de um aumento gradual da cárie dentária em áreas
urbanas de países em desenvolvimento, provavelmente
como resultado de mudanças nos hábitos alimentares.
Descobriu-se que três quartos dos adultos em algumas
partes do mundo em desenvolvimento sofrem de doença
periodontal. Poucos indivíduos nessas comunidades
tomam medidas corretivas por causa de uma falta geral
de consciência da presença ou consequência de tais
doenças. Avanços na prevenção
 microrganismos orais, incluindo patógenos periodontais,
podem entrar na corrente sanguínea durante bacteremia
transitória, onde podem desempenhar um papel no
PONTOS CHAVE
desenvolvimento e
As doenças dentárias são altamente prevalentes e
representam um enorme fardo económico para os
prestadores de cuidados de saúde. A cárie não tratada em
dentes permanentes tem sido relatada como a condição
mais prevalente em todo o mundo, afetando 2,4 bilhões de
pessoas.
Doenças como cárie e doenças periodontais são
consequência de desequilíbrios na microbiota oral
normal (disbiose). Portanto, entender as relações
dinâmicas que existem entre o hospedeiro, o ambiente
local, o estilo de vida e a microbiota oral (ecologia
microbiana oral) é fundamental para educar os pacientes
e prevenir doenças, podendo identificar os fatores de
risco que impulsionam essas alterações deletérias na
microbiota.

poderia levar a uma grande redução na prevalência

dessas doenças, com potencial para economias
maciças nos orçamentos de saúde.

MICROBIOTA ORAL E DOENÇAS SISTÊMICAS

A microbiota oral é geralmente considerada apenas no

contexto da saúde e da doença na boca, mas acumulam-
se evidências que sugerem que esses micro-organismos
têm impacto na saúde geral de um indivíduo. Nas
doenças periodontais, por exemplo, um grande número
de bactérias Gram-negativas se acumula ao redor das
raízes dos dentes e produz fatores de virulência, como
lipopolissacarídeo (LPS), metabólitos citotóxicos e
moléculas imunorreativas. O hospedeiro monta uma
resposta inflamatória ao insulto microbiano e são
produzidas prostaglandinas e citocinas pró-
inflamatórias. Esses fatores bacterianos e do hospedeiro
podem entrar na corrente sanguínea devido à alta
vascularização do periodonto e podem afetar locais
distantes do corpo.
Recentes estudos epidemiológicos humanos e
experimentos com animais demonstraram que as
doenças periodontais representam um fator de risco não
reconhecido anteriormente e potencialmente
clinicamente significativo para bebês prematuros de
baixo peso, seja como consequência direta do trabalho
de parto prematuro ou da ruptura prematura de
membranas, embora isso não tenha ocorrido.
confirmados em todos os grupos populacionais. Além
disso, as alterações inflamatórias associadas aos
microrganismos periodontais podem predispor ao
diabetes ou afetar o controle glicêmico. Além disso,
 1Introdução estratégias para controle de infecção na cirurgia
odontológica (Capítulo 12).
progressão da aterosclerose, aumentando assim o risco
de doença cardíaca coronária. Estudos também
relataram associações entre bactérias orais e artrite
reumatóide, pneumonia inalatória e câncer colorretal. O
papel das bactérias orais na doença sistêmica será
discutido com mais detalhes emCapítulo 11.
A boca também pode afetar a saúde geral, agindo
como um reservatório para patógenos oportunistas. A
higiene oral é precária entre os pacientes em terapia
intensiva, e a placa dental desses pacientes contém um
grande número de patógenos respiratórios potenciais.
Aspiração desses patógenos (e bactérias implicadas na
doença periodontal;Capítulo 6) no trato respiratório
inferior pode aumentar a probabilidade de infecção
pulmonar grave, especialmente em pessoas
imunocomprometidas ou idosas. Heli-cobacter pylori
também é detectado na placa dental em algumas
ocasiões, e este organismo está fortemente associado à
gastrite crônica e úlceras pépticas, sendo um fator de
risco para câncer gástrico. O H. pylori não é um
habitante bacteriano normal da boca, e sua presença
pode estar associada ao refluxo gastroesofágico. Sua
persistência intermitente na boca está ligada à presença
de bolsas periodontais profundas, e esse transporte pode
auxiliar sua transmissão de pessoa para pessoa. A
fibrose cística (FC) é frequentemente acompanhada por
infecção pulmonar causada por patógenos oportunistas,
como Pseudomonas aerugi-nosa, Haemophilus
influenzae, Burkholderia cepacia e estafilococos.
Estudos têm demonstrado que vários sítios bucais em
pacientes com FC podem ser colonizados por P.
aeruginosa, sugerindo que a boca poderia atuar como
reservatório desse organismo. Evidências de
transferência dessas bactérias para equipamentos
odontológicos foram relatadas, o que destaca a
necessidade de estratégias eficazes de controle de
infecções cruzadas.Capítulo 12).
As propriedades da boca que influenciam sua
função como habitat microbiano, juntamente com os
principais grupos de microrganismos que aí residem,
serão descritas nos próximos dois capítulos. Os
capítulos subsequentes descreverão a aquisição e o
desenvolvimento da microbiota oral (Capítulo 4),
especialmente placa dentária (capítulo 5). O restante
do livro considerará o papel da microbiota oral nas
doenças, incluindo infecções na boca causadas por
micróbios exógenos, e o papel da microbiota oral nas
doenças sistêmicas.Capítulo 11), e descreverá
8 Microbiologia Oral de Marsh e Martin A saúde bucal tem forte influência na qualidade de
vida de um indivíduo e é mais do que meramente
preservar
PONTOS CHAVE
Os microrganismos orais podem ter um impacto na saúde
geral de um indivíduo. Patógenos periodontais, juntamente
com a resposta inflamatória do hospedeiro a bactérias
subgengivais, podem ser fatores de risco para doenças
cardiovasculares, bebês prematuros ou de baixo peso ao
nascer, artrite reumatóide ou diabetes. As bactérias orais
podem atuar como patógenos oportunistas em locais
distantes do corpo, por exemplo, após a entrada na
corrente sanguínea (bacteremia) ou aspiração nos
pulmões. As bactérias orais podem estar ligadas a algumas
formas de câncer. A boca também pode atuar como
reservatório de bactérias patogênicas como Pseudomonas
aeruginosa e Helicobacter pylori, enfatizando a
necessidade de estratégias eficazes de controle de
infecção em cirurgia odontológica.

RESUMO DO CAPÍTULO
O corpo humano tem dez vezes mais células
microbianas do que células humanas. Esses
microrganismos compõem a microbiota humana;
cada superfície corporal possui uma microbiota com
composição característica. A microbiota humana é
natural e benéfica e é essencial para o
desenvolvimento normal da fisiologia e dos sistemas
de defesa do hospedeiro. A boca assemelha-se a
outras superfícies do corpo por possuir uma
microbiota residente com composição característica
que existe, na maioria das vezes, em harmonia com o
hospedeiro, e que também traz benefícios
importantes.
Componentes da microbiota podem atuar como
patógenos oportunistas quando o habitat é perturbado
ou quando microrganismos são encontrados em
locais normalmente não acessíveis a eles. As doenças
dentárias são causadas por desequilíbrios na
microbiota residente (disbiose) e são altamente
prevalentes e extremamente dispendiosas de tratar.
As doenças dentárias também podem atuar como
fatores de risco para condições médicas mais graves,
como doenças cardíacas e pulmonares, diabetes,
partos ruins e artrite reumatóide; a boca também pode
atuar como reservatório de patógenos exógenos como
H. pylori e P. aeru-ginosa, enfatizando a necessidade
de estratégias eficazes de controle de infecção.
 <www.cdc.gov/chronicdisease/resources/publications/aag/
doh.htm>.

a integridade dos dentes e seus tecidos de suporte. Uma

compreensão da relação entre a microbiota oral e o
hospedeiro, e como essa relação pode ser perturbada por
fatores exógenos e endógenos (ecologia microbiana
oral), é fundamental para entender as doenças bucais e
desenvolver novos métodos preventivos.
estratégico.
LEITURA ADICIONAL
Alexander M. Ecologia microbiana. Nova York: John Wiley; 1971.
Bengmark S. Microbiota intestinal, desenvolvimento imunológico
e função.
Pharmacol Res. 2013; 69: 87-113.
Cho I, Blaser MJ. O microbioma humano: na interface da saúde e
da doença. Nat Rev Genet. 2012; 13: 260-270.
Dowset SA, Kowolik MJ. Oral Helicobacter pylori: Podemos
engolir? Crit Rev Oral Biol Med. 2003; 14: 226-233.
Hooper LV, Littman DR, Macpherson AJ. Interações entre a
microbiota e o sistema imunológico. Ciência. 2012; 336 (6086):
1268-1273.
Kassebaum NJ, Bernabé E, Dahiya M, et ai. Carga global de cárie
não tratada: uma revisão sistemática e metaregressão. J Dent
Res. 2015; 94: 650-658.
Maddi A, Scannapieco FA. Biofilmes orais, infecções orais e
periodontais e doenças sistêmicas. Am J Dent. 2013; 26: 249-
254.
P. Marsh. As doenças dentárias são exemplos de catástrofes
ecológicas? Microbiol. 2003; 149: 279-294.
Olsen I. Da palestra do prêmio acta 2014: A conexão periodontal-
sistêmica vista do ponto de vista microbiológico. Acta Odontol
Scand. 2015; 73: 563-568.
Relman DA. O microbioma humano: resiliência e saúde do
ecossistema. Nutr Rev. 2012; 70 (supl 1): S2-S9.
Ruby J, Goldner M. Natureza da simbiose na doença oral. J Dent Res.
2007; 86: 8-11.
Wade WG. O microbioma oral na saúde e na doença. Farmaco
Res. 2013; 69: 137-143.
Walker AW, Lawley TD. Modulação terapêutica da disbiose
intestinal. Farmaco Res. 2013; 69: 75-86.
Wilson M. Habitantes microbianos de humanos. Sua ecologia e papel
na saúde e na doença. Cambridge: Cambridge University Press; 2005.
Wilson M. Bacteriologia de humanos: Uma perspectiva ecológica.
Oxford:
Blackwell; 2008.
Wade WG. Novos aspectos e novos conceitos de manutenção da
saúde 'microbiológica'. J Dent. 2010; (supl. 1): S21-S25.
Links Úteis
Programa Nacional de Epidemiologia Dental para a Inglaterra:
Pesquisa de saúde bucal de crianças de cinco anos de idade
2012.
Relatam a prevalência e a gravidade da odontologia
decair.
<www.nwph.net/dentalhealth/survey-results5.aspx?id=1>.
CDC. Saúde bucal. Prevenção de cáries, doenças gengivais e
câncer bucal.
 1Introdução

QUESTÕES DE MÚLTIPLA ESCOLHA

Respostas na pág. 249
1 Qual das seguintes afirmações é verdadeira sobre a microbiota residente de um hospedeiro?
a. A microbiota tem uma relação passiva com
seu hospedeiro
b. A microbiota residente contribui diretamente
para o desenvolvimento normal dos sistemas
de defesa do hospedeiro
2 Em ecologia microbiana, qual dos seguintes termos descreve o local onde os microrganismos crescem?
uma.
Nicho b.
Habitat
3 A boca pode atuar, às vezes, como reservatório para quais dos seguintes patógenos:
uma. Helicobacter pylori
b. Pseudomonas aeruginosa
4 Estima-se que o corpo humano seja composto por 1014células; qual a proporção de microorganismos?
uma.<0,01% c. 20%
b. 1% d. 90%
5 Qual é o termo usado para descrever o crescimento de microorganismos em uma superfície?
uma. Comunidade
microbiana b. Biofilme
6 As doenças dentárias podem ser um fator de risco para qual das seguintes doenças sistêmicas?
uma. Diabetes
b. Doença cardiovascular
7 Que proporção da microbiota oral pode ser cultivada em laboratório?
uma. 50-
70% b.
30-50%
8 A composição da microbiota humana permanece relativamente estável ao longo do tempo, a menos que
haja uma mudança nas condições ambientais. Qual termo é usado para descrever essa estabilidade?
um
a. Simbiose microbiana c. Disbiose
b. Homeostase microbiana d. Resistência à colonização
 CAPÍTULO2

A boca como habitat microbiano

A BOCA COMO HABITAT A boca como habitat microbiano

MICROBIANO Superfícies da mucosa
As propriedades da boca a tornam ecologicamente Dentes
distinta de todas as outras superfícies do corpo, e isso Saliva
determina os tipos de micróbios capazes de persistir. Fluido crevicular gengival
Como consequência, nem todos os microrganismos que Implantes e próteses
entram na boca são capazes de colonizar. Além disso, FATORES QUE AFETAM O
existem habitats distintos mesmo dentro da boca, cada CRESCIMENTO DE MICRORGANISMOS
um dos quais suporta o crescimento de uma microbiota NA CAVIDADE ORAL
característica devido às suas características biológicas Temperatura
particulares. Habitats que fornecem condições Potencial redox/anaerobiose
ecológicas obviamente diferentes incluem superfícies pH
mucosas (como lábios, bochecha, palato e língua), Nutrientes
dentes e qualquer aparelho ortodôntico ou protético
Defesas do hospedeiro
introduzido (Tabela 2.1). As propriedades da boca como
Genética do hospedeiro
habitat microbiano são dinâmicas e mudam ao longo da
Estilo de vida do anfitrião
vida de um indivíduo. Durante os primeiros meses de
vida, a boca fornece apenas superfícies mucosas para Observações finais
colonização microbiana. A erupção dos dentes fornece Resumo do capítulo
uma superfície única e dura que não descama, que Leitura adicional
permite que massas muito maiores de microorganismos
(placa dental) se acumulem como biofilmes. Além
disso, é produzido fluido crevicular gengival (GCF) que
pode fornecer nutrientes adicionais permitindo o
crescimento dos microrganismos fastidiosos
encontrados subgengivalmente. A ecologia da boca
mudará com o tempo devido à erupção ou extração de
dentes, a inserção de bandas ortodônticas ou dentaduras
e qualquer tratamento odontológico, incluindo raspagem
e restaurações.

Características que ajudam a tornar a cavidade oral

distinta de outras áreas do corpo são superfícies mucosas
especializadas, dentes, saliva e fluido crevicular gengival,
enquanto os dispositivos protéticos também criam um novo
ambiente. Estes serão agora considerados mais
detalhadamente.

10
 A boca é o único local normalmente acessível no
corpo que possui superfícies duras que não
descamam para colonização microbiana. Os dentes
TABELA 2.1 Habitats microbianos não aparecem na boca até depois dos primeiros meses
distintos dentro da boca de vida. O primário
Habitat Comente
Lábios,
bochechas, • biomassa restrita por descamação
• algumas superfícies possuem
palato hospedeiro especializado
tipos de células
Língua • superfície altamente papilada
atua como um reservatório para
• obrigatoriedade
anaeróbios
• superfície sem derramamento
Dentes permitindo grandes
massas de micróbios para acumular
(biofilmes da placa dentária)
• dentes têm superfícies distintas para
colonização microbiana; cada
superfície
(por exemplo, fissuras, superfícies
lisas,
proximal, fenda gengival)
suportam uma microbiota distinta
porque
de suas propriedades biológicas
intrínsecas.

SUPERFÍCIES DA MUCOSA
A boca é semelhante a outros ecossistemas do trato
digestivo, fornecendo superfícies mucosas para
colonização microbiana. A carga microbiana é
relativamente baixa nessas superfícies devido ao
processo de descamação. No entanto, a cavidade oral
possui superfícies especializadas que contribuem para a
diversidade da microbiota em determinados locais. A
estrutura papilar do dorso da língua oferece refúgio para
muitos microrganismos que de outra forma seriam
removidos pela mastigação e fluxo salivar. Esses locais
na língua podem desenvolver um baixo potencial redox
(ver adiante), o que estimula o crescimento de bactérias
obrigatoriamente anaeróbicas. De fato, a língua pode
atuar como um reservatório para alguns dos anaeróbios
Gram-negativos que estão implicados na etiologia das
doenças periodontais.Capítulo 6) e são responsáveis
pelo mau odor (Capítulo 4). A boca também contém
epitélio escamoso estratificado queratinizado (como no
palato) e não queratinizado que pode influenciar a
distribuição intraoral de alguns microrganismos.

DENTES
 2 A boca como habitat microbiano 11 calcificado do corpo e normalmente é a única parte
do dente exposta ao meio ambiente. Cimento
Esmalte

Dentina Cárie

Polpa Periodontal
bolso
Chiclete

Cimento

Acessório
fibras

Alveolar
osso

FIGURA 2.1Estrutura dentária na saúde e na

doença.

a dentição geralmente está completa aos 3 anos de

idade, e por volta dos 6 anos os dentes permanentes
começam a erupcionar; este processo está completo por
volta dos 12 anos de idade. As condições ecológicas
locais variam durante esses períodos de mudança, o que,
por sua vez, influenciará a composição da microbiota
residente em um local.
Os dentes (e dentaduras) permitem o acúmulo de
grandes massas de microrganismos (predominantemente
bactérias) e seus produtos extracelulares, denominados
placa dentária. A placa é um exemplo de biofilme
(verCapítulo 5) e, embora seja encontrado naturalmente
na saúde e confere importantes benefícios ao
hospedeiro, também está associada a processos
patológicos, incluindo cárie dentária e doença
periodontal. Na doença, há uma mudança na
composição da microbiota da placa para longe das
espécies que predominam na saúde (verCapítulo 6).
Cada dente é composto por quatro tecidos: polpa,
dentina, cemento e esmalte.FIGO. 2.1). A polpa
recebe sinais nervosos e suprimentos de sangue dos
tecidos da mandíbula através das raízes. Assim, a
polpa é capaz de nutrir a dentina e atuar como órgão
sensorial detectando a dor. A dentina compõe a maior
parte do dente e funciona apoiando o esmalte e
protegendo a polpa. A dentina é composta por feixes
de filamentos de colágeno circundados por cristais
minerais. Os túbulos percorrem todo o corpo da
dentina desde a polpa até a dentina-esmalte e as
junções dentina-cemento. O esmalte é o tecido mais
12 Microbiologia Oral de Marsh e Martin

UMA Aspecto oclusal

Superfície lisa Aproximado

placa placa

Supra-
gengival
placa
Fenda gengival
Sub- placa
gengival
placa
Margem de goma

B Aspecto bucal ou lingual (vista lateral)

FIGURA 2.2Diagrama que ilustra as diferentes superfícies de um dente e a terminologia usada para descrever os locais de amostragem da
placa dentária.
nutricionalmente rico (ver adiante), particularmente
durante a inflamação. Assim, a região aproximada
é um tecido conjuntivo calcificado especializado que
cobre e protege as raízes do dente. O cimento é
importante para a ancoragem do dente; Embutidas no
cemento estão as fibras do ligamento periodontal que
ancoram cada dente ao osso periodontal da
mandíbula. Com o envelhecimento, a recessão dos
tecidos gengivais pode expor o cemento à
colonização microbiana e aumentar o risco de cárie
na superfície radicular.Capítulo 6).
A complexidade ecológica da boca é aumentada
ainda mais pela variedade de habitats encontrados no
dente. Os dentes não fornecem um habitat uniforme e
possuem várias superfícies distintas (Tabela 2.1,FIGO.
2.2), cada um dos quais é ótimo para colonização e
crescimento por diferentes comunidades de
microrganismos. Isso se deve à natureza física da
superfície específica e às propriedades biológicas
resultantes da área. As áreas estagnadas entre os dentes
adjacentes (aproximadamente) e no sulco gengival
proporcionam maior proteção aos microrganismos
colonizadores de condições adversas na boca. Ambos os
locais podem se tornar anaeróbicos e, além disso, a
região da fenda gengival é banhada pelo GCF
e a fenda gengival geralmente suporta uma microbiota
mais diversificada. Superfícies lisas estão mais expostas
ao meio ambiente e só podem ser colonizadas por um
número limitado de espécies bacterianas adaptadas a
condições tão extremas. As cavidades e fissuras das
superfícies de mordida (oclusais) dos dentes também
oferecem proteção contra forças de deslocamento, como
o fluxo de saliva, e podem conter restos de alimentos
impactados como fonte de nutrientes. As áreas
protegidas nos dentes estão associadas às maiores
comunidades microbianas e, em geral, à maioria das
doenças.
A relação entre o ambiente e a comunidade
microbiana não é unidirecional. Embora as propriedades
do ambiente ditem quais microrganismos podem ocupar
um determinado local, o metabolismo da microbiota
modificará as propriedades físicas e químicas de seu
entorno. Para exemplificar isso, os primeiros
colonizadores consumirão oxigênio e liberarão dióxido
de carbono e hidrogênio para criar um ambiente
adequado para bactérias obrigatoriamente anaeróbicas.
As condições ambientais no dente também variam em
saúde e doença (verFIGO. 2.1). Por exemplo, à medida
que a cárie progride, a frente de avanço da lesão penetra
na dentina. Isso, por sua vez, significa que as fontes
nutricionais vão mudar e as condições locais podem

tornam-se ácidas e mais anaeróbicas devido ao acúmulo
de produtos do metabolismo bacteriano. Da mesma
forma, na doença, a fenda gengival se desenvolve em
uma bolsa periodontal e o fluxo de GCF é aumentado.
Esses novos ambientes selecionarão a microbiota mais
adaptada às condições predominantes. Esta é uma
relação dinâmica com cada mudança no ambiente local,
invocando uma nova resposta por parte dos
microrganismos residentes, que pode conduzir a uma
mudança na composição e metabolismo da microbiota.
SALIVA
A boca é mantida úmida e lubrificada pela saliva que
flui para formar uma película fina (aproximadamente
0,1 mm de profundidade) sobre todas as superfícies
internas da cavidade oral. A saliva entra na cavidade
oral através dos ductos das glândulas parótidas maiores,
submandibulares e sublinguais, bem como das glândulas
menores da mucosa oral (glândulas labial, lingual, bucal
e palatina), onde é produzida. Existem diferenças na
composição química das secreções de cada glândula,
mas a mistura complexa é denominada "saliva total". A
saliva é composta principalmente de água (99%) mais
proteínas (0,3%), moléculas inorgânicas (0,2%), lipídios
e hormônios. O fluxo salivar médio é inferior a 1 mL
por minuto, mas cerca de 1,0 a 1,5 litros são produzidos
diariamente. A saliva é multifuncional e desempenha
um papel na mastigação, paladar, digestão, deglutição e
lubrificação, assim como a cicatrização de feridas. A
saliva também ajuda a manter a integridade dos dentes,
protegendo contra a desmineralização e promovendo a
remineralização, limpando os alimentos e tamponando
os ácidos potencialmente prejudiciais produzidos pela
placa dentária após o metabolismo dos carboidratos da
dieta. O bicarbonato é o principal componente tampão
na saliva, mas fosfatos, peptídeos e proteínas também
estão envolvidos. O pH médio da saliva está entre 6,75 e
7,25, embora o pH e a capacidade tampão variem com a
taxa de fluxo. Dentro da boca, a taxa de fluxo e a
concentração de componentes como proteínas, cálcio e
fosfato têm ritmos circadianos, com o fluxo mais lento
de saliva ocorrendo durante o sono. Assim, é importante
evitar o consumo de alimentos ou bebidas açucaradas
antes de dormir, pois as funções protetoras da saliva
serão reduzidas nesse momento.
Os principais constituintes orgânicos da saliva são
proteínas e glicoproteínas, incluindo amilase, rica em
prolina.
2A boca como habitat microbiano
proteínas, estaterina, histatinas, cistatinas,
imunoglobulinas e mucinas. Mais de 2.000 proteínas (o
pró-teoma salivar) foram identificadas na saliva total,
embora a função de muitas delas ainda seja
desconhecida.
A saliva desempenha um papel importante tanto
na promoção da colonização quanto na remoção de
microrganismos da boca. A saliva contém
aproximadamente 108micro-organismos viáveis por
mL, que são derivados de superfícies orais, como
placa dentária e língua, mas esses organismos são
incapazes de se manter na saliva apenas por divisão
celular porque são perdidos em uma taxa ainda mais
rápida pela deglutição, que é um hospedeiro
importante mecanismo de defesa. Paradoxalmente, a
saliva também desempenha um papel importante em
facilitar a colonização microbiana e o subsequente
crescimento de microrganismos na boca. Dessa
forma, a saliva desempenha um papel fundamental na
determinação de quais microrganismos fazem parte
da microbiota oral residente e quais são inibidos e
removidos. A fixação microbiana será descrita com
mais detalhes emCapítulos 4e5. As proteínas e
glicoproteínas presentes na saliva podem influenciar
a microbiota oral por:
• adsorvendo à superfície do dente para formar
um filme condicionador (película adquirida), que
protege as superfícies orais e fornece receptores aos
quais apenas certos micróbios são capazes de se
ligar.capítulo 5);
• atuando como fontes primárias de nutrientes
(carboidratos e proteínas) para a microbiota residente;
• agregar microrganismos exógenos, facilitando
assim sua eliminação da boca pela deglutição; e
• inibindo o crescimento de alguns
microrganismos exógenos.
Foi feita uma comparação do proteoma da saliva
total e do plasma, e aproximadamente 27% das
proteínas da saliva se sobrepõem ao proteoma do
plasma. Talvez importante para o futuro, cerca de
40% das proteínas plasmáticas que foram propostas
como potenciais biomarcadores para doenças
sistêmicas, como câncer, doenças cardiovasculares e
acidente vascular cerebral, podem ser detectadas na
saliva, o que abre a possibilidade de projetar kits de
diagnóstico para use com saliva para detectar sinais
precoces de doença em outras partes do corpo.
Outros compostos nitrogenados fornecidos pela
saliva incluem uréia e numerosos aminoácidos. Os
microrganismos orais requerem aminoácidos para o
crescimento, mas nem todos
14 Microbiologia Oral de Marsh e Martin

8,0

7,0
pH

6,0
Placa

pH crítico *
5,0

8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 Horas
UM café da
A manhã café almoço suor chá bolacha jantar café café
suor suor suor
8,0

7,0
pH

6,0
Placa

pH crítico *
5,0

8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 Horas
café da
manhã café almoço chá jantar café
B
FIGURA 2.3Representação esquemática das mudanças no pH da placa em um indivíduo que (A) tem ingestão frequente de
carboidratos fermentáveis durante o dia, ou (B) limita sua ingestão de carboidratos apenas às refeições principais. * O pH
crítico é o pH abaixo do qual a desmineralização do esmalte é aumentada.
incluem IgA secretora (sIgA), que é a classe
predominante de imunoglobulina; IgG e IgM também
destes estão presentes livres na saliva, e são obtidos a estão presentes, mas em concentrações mais baixas.
partir de proteínas e peptídeos salivares pela ação de Uma gama de peptídeos com atividade antimicrobiana,
proteases e peptidases microbianas. A concentração incluindo
de carboidratos livres é baixa na saliva, e a maioria
das bactérias orais produz glicosidases para degradar
as cadeias laterais das glicoproteínas do
hospedeiro.FIGO. 5.11). O metabolismo de
aminoácidos, peptídeos, proteínas e uréia pode levar
à produção líquida de álcali, o que contribui para o
aumento do pH após a produção de ácido após a
ingestão dietética de carboidratos
fermentáveis.FIGO. 2.3).
Fatores antimicrobianos, incluindo lisozima,
lactoferrina e o sistema sialoperoxidase, estão presentes
na saliva (ver adiante;Tabela 2.2) e desempenham
papéis fundamentais no controle da colonização
bacteriana e fúngica da boca. Os anticorpos detectados
polipeptídeos ricos em histidina (histatinas),
cistatinas e defensinas também estão presentes na
saliva. Uma descrição mais completa desses
peptídeos antimicrobianos e uma discussão de seu
papel no controle da microbiota oral residente podem
ser encontradas mais adiante neste capítulo. As
propriedades da saliva são fundamentais para a
manutenção de uma boca saudável,
consequentemente, é muitas vezes referida como a
'defensora da cavidade oral'.

PONTOS CHAVE
A saliva desempenha um papel fundamental na
manutenção da saúde bucal, estando envolvida na
lubrificação, depuração de alimentos e tamponamento de
ácidos microbianos. Reduz a desmineralização e promove
a remineralização dos tecidos dentários. A saliva promove
a fixação e o crescimento de microrganismos
selecionados, além de fornecer componentes da resposta
inata e adaptativa do hospedeiro para restringir a
colonização por outros micróbios.
 2A boca como habitat microbiano

LÍQUIDO CREVICULAR GENGIVAL (GCF)

TABELA 2.2 Fatores de defesa do
hospedeiro específicos e não específicos da Os componentes do soro podem chegar à boca pelo
boca fluxo de um fluido semelhante ao soro através do
epitélio juncional da gengiva.FIGO. 2.6). O fluxo
Fator de defesa Função principal deste GCF é relativamente lento em locais saudáveis,
Não específico: mas a taxa aumenta na gengivite e aumenta muitas
Fluxo salivar e gengival Remoção física de vezes em doenças periodontais avançadas. O fluxo
fluxo de fluido crevicular frouxamente anexado GCF faz parte da resposta inflamatória ao acúmulo
microorganismos de biofilme ao redor da margem gengival. O GCF
Mucina / aglutininas Agregação e física pode influenciar a ecologia microbiana por:
remoção de • remoção de células microbianas não aderentes;
microorganismos
• introdução de componentes das defesas do
Anião lisozima protease Lise celular hospedeiro, especialmente anticorpos e neutrófilos; e
Lactoferrina Sequestro de ferro • atuando como uma nova fonte de nutrientes
Apo-lactoferrina Morte celular para os microrganismos residentes.
Sistema Sialoperoxidase Hipotiocianato Muitas bactérias da placa subgengival são
produção (pH neutro) proteolíticas e interagem sinergicamente para quebrar
Ácido hipociano proteínas e glicoproteínas do hospedeiro para
produção (pH baixo) fornecer peptídeos, aminoácidos e carboidratos para o
Histatina Antifúngico com alguns crescimento. Cofatores essenciais para o crescimento,
atividade antibacteriana incluindo heme para anaeróbios pigmentados de
Defensinas (α- & β-) Antimicrobiano e preto, também podem ser obtidos a partir da
imunomodulador degradação de moléculas contendo heme, como
atividade transferrina, hemopexina e hemoglobina.
Cistatinas, SLPI e TIMP Cisteína, serina e O aumento da produção de GCF durante a doença
metaloprotease
está associado a um aumento no pH da bolsa periodontal
inibidores
de aproximadamente 6,90 na saúde para entre 7,25 e
Quitinase e cromogranina Antifúngico
7,75 durante a inflamação na gengivite e na doença
Catelicidina Antimicrobiano periodontal. Mesmo uma mudança tão modesta no pH
Calprotectina Antimicrobiano pode alterar a competitividade de bactérias individuais,
Específico: o que pode afetar as proporções de bactérias,
especialmente porque o crescimento de alguns dos
Intraepitelial Barreira celular para
linfócitos e bactérias penetrantes supostos patógenos periodontais é favorecido por um
Células de Langerhans e/ou antígenos ambiente alcalino.FIGO. 2.4). Além disso, a atividade
sIgA Prevenção microbiana de algumas proteases associadas à virulência desses
adesão e metabolismo patógenos oportunistas é aumentada em pH alcalino (7,5
IgG, IgA, IgM Prevenir micróbios a 8,0).
adesão; opsoninas; O GCF contém componentes das defesas do
ativadores do hospedeiro, que desempenham um papel importante na
complemento
regulação da microbiota da fenda gengival na saúde e na
Complemento Ativa os neutrófilos doença. Em contraste com a saliva, a IgG é a
Neutrófilos/macrófagos Fagocitose imunoglobulina predominante, com IgM e IgA
IgA, Imunoglobulina A; IgG, imunoglobulina G; IgM, presentes, assim como as proteínas do complemento. O
imunoglobulina M; sIgA, secretora de Imunoglobulina A; GCF contém leucócitos, dos quais 95% são neutrófilos,
SLPI, inibidor da protease leucocitária secretora; TIMP, sendo o restante linfócitos e monócitos. Vários
inibidores teciduais ou metaloproteinases. peptídeos e enzimas antimicrobianos podem ser
detectados no GCF, incluindo colagenases e elastases,
que são derivadas tanto de células hospedeiras
fagocíticas (como neutrófilos) quanto de bactérias
subgengivais. Essas enzimas podem degradar o
hospedeiro
16 Microbiologia Oral de Marsh e Martin constante de agentes potencialmente infecciosos para o
palato.
pH

3,0 4,0 5,0 6,0 7,0 8,0 9,0

Estreptococo
sangüíneo
Estreptococo
mutans
Actinomyces
naeslundii
Lactobacillus
spp.
Prevotella
intermediário
Porphyromonas
gengival
FIGURA 2.4Uma representação diagramática da faixa de
pH para o crescimento de algumas espécies bacterianas
orais.

tecidos e, portanto, contribuem para a destruição do

tecido (verCapítulo 6). A composição do GCF está
sob avaliação para potenciais marcadores de
diagnóstico de degradação periodontal ativa para uso
na clínica como kits de consultório.

IMPLANTES E DISPOSITIVOS PROTÉTICOS

Além dos tecidos orais do hospedeiro, outras superfícies
que podem suportar a colonização e o crescimento de
microrganismos incluem materiais restauradores,
implantes dentários e aparelhos ortodônticos e protéticos
que são colocados na boca. Tais superfícies são
rapidamente revestidas com um filme condicionador
(vercapítulo 5) oriundos da saliva ou GCF, e geralmente
é a esse filme condicionador que os micro-organismos
se aderem. Além disso, irregularidades na superfície do
biomaterial introduzido podem fornecer locais para
aprisionamento de microrganismos e, muitas vezes, a
remoção desses microrganismos é difícil devido ao
acesso limitado aos locais por fatores de defesa do
hospedeiro. Frequentemente, a infecção dos tecidos
orais pode seguir a colonização microbiana desses
materiais de biomateriais, particularmente se houver
higiene bucal subótima. No caso de próteses acrílicas, a
colonização microbiana, particularmente pelo fungo
Candida, está associada à candidíase eritematosa crônica
(verCapítulo 8). A superfície de encaixe da prótese
superior é geralmente pouco limpa pela saliva, e a
Candida crescendo nesta superfície fornece uma fonte
 A boca humana é mantida a uma temperatura
relativamente constante (35° a 36°C), o que
proporciona condições estáveis adequadas para o
Nos últimos anos, um número crescente de implantes
crescimento de uma ampla gama
dentários está sendo colocado na boca dos pacientes
para substituir dentes perdidos e restaurar a função. O
titânio é talvez o biomaterial mais utilizado para
implantes devido às suas propriedades físicas e natureza
inerte. Uma característica fundamental do titânio é o
rápido desenvolvimento do óxido de titânio em sua
superfície que promove a osseointegração quando
colocado dentro do osso, e essa interação com as células
ósseas é um processo favorável. No entanto, as células
microbianas também podem aderir ao titânio e mais
frequentemente são os microrganismos encontrados na
placa subgengival. Em locais saudáveis, podem ser
detectadas bactérias pertencentes aos gêneros
Actinomyces, Streptococcus, Neisseria, Prevotella e
Selenomonas. Nos casos em que o crescimento de
patógenos é favorecido,Capítulo 7).

PONTOS CHAVE
As propriedades da boca que a tornam distinta de outros
habitats microbianos no corpo incluem a presença de
dentes, saliva e fluido crevicular gengival (GCF).
Os dentes são únicos porque são superfícies que
não descamam, permitindo o acúmulo de grandes
massas de microrganismos e seus produtos (biofilmes
da placa dentária), especialmente em locais
estagnados que oferecem proteção contra as forças
de remoção oral. Da mesma forma, uma variedade de
biomateriais usados para restaurar a dentição fornece
novas superfícies e ambientes que não descamam
para a formação de níveis significativos de biofilme.
A saliva e o GCF fornecem componentes das
defesas do hospedeiro e também são importantes
fontes de nutrientes para os microrganismos,
enquanto a saliva também atua como tampão para
manter um pH favorável à saúde bucal. A saliva
também suporta o crescimento de muitas bactérias
residentes que possuem propriedades benéficas para
o hospedeiro.

FATORES QUE AFETAM O CRESCIMENTO

DE MICRORGANISMOS NA CAVIDADE
ORAL
Muitos fatores influenciam o crescimento de
microrganismos, e aqueles de particular relevância para
a cavidade oral serão considerados nas seções seguintes.

TEMPERATURA
 Eh inicial de mais de+200 mV (altamente oxidado)
para-141 mV (altamente reduzido) após 7 dias. O
desenvolvimento da placa dessa maneira está
de microorganismos. As bolsas periodontais com
associado a uma sucessão específica de
doença ativa (inflamação) apresentam temperatura
microrganismos colonizadores.Capítulos 4e5). Cedo
mais elevada (até 39°C) em comparação com locais
saudáveis. Mesmo esses aumentos relativamente
pequenos de temperatura podem alterar
significativamente a expressão do gene bacteriano e
possivelmente a competitividade de espécies
individuais.

POTENCIAL REDOX / ANAEROBIOSE

Apesar da acessibilidade da boca ao ar com uma
concentração de oxigênio de aproximadamente 20%, a
microbiota oral compreende poucas, ou nenhuma,
espécies verdadeiramente aeróbicas (requerentes de
oxigênio). A maioria dos organismos são anaeróbios
facultativos (podem crescer na presença ou ausência de
oxigênio) ou anaeróbios obrigatórios (requer condições
reduzidas, pois o oxigênio é tóxico para esses
organismos). Além disso, existem alguns cap-nofílicos
(CO2-exigindo) e espécies microaerofílicas (requerendo
baixas concentrações de oxigênio). A anaerobiose é
frequentemente descrita em termos rígidos, e os
microrganismos orais são separados em aeróbios e
anaeróbios em sua capacidade de crescer na presença ou
ausência de oxigênio. No entanto, existe um amplo
espectro de tolerância ao oxigênio entre esses
organismos e distinções nítidas não podem ser feitas
entre esses grupos.
A concentração de oxigênio é o principal fator que
limita o crescimento de bactérias obrigatoriamente
anaeróbicas. O oxigênio é o aceptor de elétrons mais
comum e mais prontamente reduzido na maioria dos
habitats microbianos, e sua presença resulta na
oxidação do ambiente. As espécies anaeróbicas
requerem condições reduzidas para seu metabolismo
normal; portanto, é o grau de oxidação-redução
(potencial redox; Eh) em um local que governa a
sobrevivência e o crescimento relativo desses
organismos. Em geral, a distribuição de anaeróbios
na boca estará relacionada ao potencial redox em um
determinado local, embora alguns sobrevivam em
habitats abertamente aeróbicos por existirem em
estreita parceria com espécies consumidoras de
oxigênio. Os anaeróbios obrigatórios também
possuem mecanismos de defesa molecular
específicos que lhes permitem lidar com baixos
níveis de oxigênio; estes são descritos emCapítulo 4.
O potencial redox cai durante o desenvolvimento
da placa em uma superfície de esmalte limpa de um
 2A boca como habitat microbiano

colonizadores usarão O2e produzir CO2, embora

colonizadores posteriores possam produzir H 2e
outros agentes redutores, tais como compostos
contendo enxofre e produtos de fermentação voláteis.
Assim, à medida que o Eh é gradualmente reduzido,
os locais tornam-se adequados para a sobrevivência e
o crescimento de um padrão de organismos em
mudança e, particularmente, anaeróbios obrigatórios.
O Eh da fenda gengival é normalmente em torno
de+70 mV, mas cai durante a inflamação associada a
gengivite para cerca de –50 mV, enquanto valores ainda
mais baixos ocorrerão na doença periodontal avançada
(ca. –300 mV). Gradientes de O2concentração e Eh
existirão na cavidade oral, particularmente em biofilmes
espessos, e assim a placa dentária será adequada para o
crescimento de bactérias com uma gama de tolerâncias
ao oxigênio. O metabolismo ou propriedades de
bactérias particulares serão influenciados pelo Eh do
ambiente. A atividade das enzimas glicolíticas
intracelulares e o padrão dos produtos de fermentação
de Streptococcus mutans variam sob condições
estritamente anaeróbicas. Durante a glicólise, os
açúcares são convertidos em lactato em condições
aeróbicas, mas os formatos, acetato e etanol são gerados
em ambientes anaeróbicos. Portanto, a perturbação do
potencial redox em um local pode ter um impacto
significativo na composição e no metabolismo da
comunidade microbiana. Esta abordagem está sendo
buscada como uma estratégia para controlar a placa
subgengival na doença periodontal,Capítulo 6).

pH
Muitos microrganismos requerem um pH próximo da
neutralidade para o crescimento e são sensíveis a
extremos de acidez ou alcalinidade. O pH da maioria
das superfícies da boca é regulado pela saliva; o pH
médio para saliva total não estimulada está entre 6,75
e 7,25, proporcionando assim um pH ideal para o
crescimento microbiano.
O pH médio varia em diferentes locais orais na
saúde. O pH mais alto é encontrado no palato (pH
médio=7,34±0,38) e o menor na mucosa bucal (pH
médio=6,28±0,36). O pH do palato em pacientes com
próteses dentárias tende a ser menor do que em
indivíduos controle, embora o pH palatal seja ainda
maior em pacientes com líquen plano do que em
controles saudáveis.
Mudanças nas proporções de bactérias dentro da
placa dental podem ocorrer após flutuações na
18 Microbiologia Oral de Marsh e Martin os nutrientes necessários para o crescimento estão
presentes. DentroCapítulo 3tornar-se-á evidente que a
boca pode suportar uma microbiota de grande
pH ambiental. Após o consumo de açúcar, o pH da
diversidade e riqueza, e satisfazer as necessidades
placa pode cair rapidamente abaixo de pH 5,0 pela
produção de ácidos (predominantemente ácido lático)
pelo metabolismo bacteriano (verFIGO. 2.3); o pH
então se recupera lentamente aos valores de repouso.
Dependendo da frequência de ingestão de açúcar, as
bactérias na placa serão expostas a vários desafios de
baixo pH. Muitas das bactérias da placa
predominantes que estão associadas a locais
saudáveis podem tolerar condições breves de baixo
pH, mas são inibidas ou mortas por exposições mais
frequentes ou prolongadas a condições ácidas, como
ocorre em indivíduos que comumente consomem
lanches ou bebidas contendo açúcar entre as refeições
(verFIGO. 2.3). Isso pode resultar na seleção e
aumento do crescimento de espécies tolerantes a
ácidos (acidúricas), especialmente estreptococos
mutans, espécies de Bifidobacterium e Lactobacillus
(verFIGO. 2.4). Essas bactérias estão normalmente
ausentes ou são apenas componentes menores na
placa dentária em locais saudáveis, e essa mudança
na composição bacteriana da placa predispõe uma
superfície à cárie dentária. A tolerância ácida dessas
bactérias é alcançada pela posse de estratégias
metabólicas particulares e pela indução de um
conjunto específico de proteínas de resposta ao
estresse.Capítulo 4).
Em contraste, o pH da fenda gengival pode se
tornar alcalino durante a resposta inflamatória do
hospedeiro na doença periodontal, provavelmente
como resultado do metabolismo bacteriano, por
exemplo, produção de amônia a partir da uréia e da
desaminação de aminoácidos. O pH da fenda
gengival saudável é de aproximadamente 6,90 e sobe
para entre 7,2 e 7,4 durante a doença, com alguns
pacientes apresentando bolsas com pH ainda mais
alto. Esse grau de mudança pode aumentar a
competitividade de alguns patógenos putativos, por
exemplo, ao favorecer o crescimento de anaeróbios
patogênicos, como P. gingivalis, que têm um pH
ótimo para crescimento em torno de 7,5 (verFIGO.
2.4).

NUTRIENTES
Populações dentro de uma comunidade microbiana
dependem exclusivamente do habitat para os
nutrientes essenciais para o seu crescimento.
Portanto, a associação de um organismo com um
habitat particular é uma evidência direta de que todos
 anaeróbicas, como as espécies de Prevotella. Um
aumento em Prevotella intermedia e Prevotella
necessidades de muitas populações bacterianas
nutricionalmente exigentes.

(i) Nutrientes endógenos

A persistência e diversidade da microbiota oral residente
é causada principalmente pelo metabolismo dos
nutrientes endógenos fornecidos pelo hospedeiro, e não
por fatores exógenos na dieta. A principal fonte de
nutrientes endógenos é a saliva, que contém
aminoácidos, peptídeos, proteínas e glicoproteínas (que
também atuam como fonte de açúcares e aminoácidos) e
vitaminas. Além disso, a fenda gengival é suprida com
GCF, que não apenas fornece componentes das defesas
do hospedeiro, mas também fornece nutrientes
potencialmente novos, como albumina e outras
proteínas e glicoproteínas do hospedeiro, incluindo
moléculas contendo heme. Isso explica as diferenças na
microbiota da fenda gengival em comparação com
outros locais orais.Capítulos 4e5).
A importância dos nutrientes endógenos pode ser
avaliada a partir da persistência de uma microbiota
relativamente diversa na boca de humanos e animais
alimentados por intubação (tubo estomacal). As
proporções de bactérias do grupo S. mitis aumentam na
saliva de crianças em dieta de inanição antes do
transplante de medula óssea e, nesses casos, os
estreptococos satisfazem suas necessidades nutricionais
e energéticas principalmente a partir do metabolismo
das glicoproteínas do hospedeiro. Além disso, a
microbiota oral de animais com hábitos alimentares que
variam de insetívoros e herbívoros a carnívoros é
amplamente semelhante em nível de gênero.
Os microrganismos orais interagem
sinergicamente para quebrar esses nutrientes
endógenos, pois poucas espécies têm o complemento
enzimático completo para catabolizar de forma
independente essas moléculas estruturalmente
complexas. Organismos individuais possuem padrões
de atividade enzimática diferentes, mas sobrepostos
(glicosidases, pró-teases, peptidases, etc.), de modo
que cooperam e interagem com espécies com
atividades degradativas complementares para
alcançar a quebra completa desses
substratos.Capítulo 4).
A microbiota oral pode ser influenciada por
alterações nos níveis hormonais, por exemplo, durante a
puberdade e na gravidez. Os hormônios podem ser
usados como uma nova fonte de nutrientes por bactérias
exigentes, incluindo algumas espécies obrigatoriamente
 plasmáticas. Este nitrato é reduzido a nitrito por
bactérias orais facultativamente anaeróbicas, o que
reduz a pressão arterial e estimula a
nigrescensdurante a gravidez foi relatada em alguns
(mas não em todos) estudos, e essas alterações foram
associadas com a inflamação gengival característica
observada durante o segundo trimestre (gin-givite da
gravidez) (verCapítulo 6).

(ii) Nutrientes exógenos (dietéticos)

Sobreposto a esses nutrientes endógenos está o
complexo conjunto de alimentos ingeridos
periodicamente na dieta. Não houve grande diferença na
microbiota oral quando a saliva foi comparada entre
indivíduos saudáveis nas dietas onívora,
ovolactovegetariana e vegana, confirmando a
importância dos nutrientes endógenos para a
persistência de microrganismos orais, embora houvesse
biomarcadores específicos da dieta que poderiam
discriminar entre os indivíduos com base em sua dieta.
Os carboidratos fermentáveis são a única classe de
compostos que influencia marcadamente a ecologia da
boca. Esses carboidratos podem ser decompostos em
ácidos, embora, adicionalmente, a sacarose possa ser
convertida por enzimas bacterianas (glicosiltransferases
[GTF] e frutosiltransferases [FTF]) em duas classes
principais de exopolímeros (glucanos e frutanos) que
podem ser usados para consolidar a fixação ou atuam
como compostos extracelulares de armazenamento de
nutrientes, respectivamente (Capítulo 4).
O consumo frequente de carboidratos na dieta está
associado a uma mudança nas proporções da microbiota
da placa dental. Os níveis de espécies tolerantes a
ácidos, especialmente estreptococos mutans e
lactobacilos aumentam, enquanto o crescimento de
espécies sensíveis a ácidos (por exemplo, algumas cepas
de Streptococcus sanguinis e S. gordonii) é inibido. O
metabolismo da placa muda de modo que o produto de
fermentação predominante torna-se o lactato. Tais
alterações na microbiota e seu metabolismo podem
predispor um local à cárie dentária.
Os produtos lácteos (leite, queijo) têm influência
limitada na ecologia da boca. O leite pode modificar
a estrutura da película do esmalte in vivo, produzindo
uma estrutura globular distinta. Demonstrou-se que o
queijo aumenta as taxas de fluxo salivar e eleva
rapidamente o pH da placa após uma lavagem com
sacarose.
O nitrato em vegetais verdes influencia o ambiente
do hospedeiro e a microbiota. O nitrato derivado da
dieta é concentrado pelas glândulas salivares, de modo
que as concentrações salivares são maiores que as
 2A boca como habitat microbiano
Defesa não imunológica
Fluxo de saliva
Mucina / aglutininas
Sistema de ânions lisozima protease
Lactoferrina / APO-lactoferrina
Sistema lactoperoxidase salivar
Peptídeos de defesa do hospedeiro
não requerem exposição prévia a um organismo ou
antígeno para atividade e, portanto, fornecem um
amplo e contínuo espectro de proteção.
(i) Imunidade inata
Conforme discutido anteriormente, o fluxo de saliva
pode remover bactérias frouxamente aderentes da
superfície oral. A descamação garante que a carga
microbiana na maioria

Fisico quimica Imunológico

barreiras barreiras

Mucinas Saliva sIgA

Revestimento de
membrana
Intra-epitelial camada de grânulos

barreira Células de
Langerhans
Porão
membrana Intra-epitelial
linfócitos

barreira
Membrana basal
Soro IgG

FIGURA 2.5Defesas do hospedeiro associadas às superfícies da

mucosa oral.

produção de muco. O nitrito é então acidificado no

estômago e convertido em óxido nítrico, que também
tem funções benéficas para o hospedeiro e também é
antimicrobiano.Capítulo 4).

DEFESA DO HOSPEDEIRO
A saúde da boca depende da integridade da mucosa e
do esmalte, que atuam como barreiras físicas para
impedir a penetração de microrganismos ou
antígenos.FIGO. 2,5). O hospedeiro possui uma série
de mecanismos de defesa adicionais que
desempenham papéis essenciais na manutenção da
integridade dessas superfícies orais, e estes estão
listados emTabela 2.2e suas esferas de influência são
indicadas esquematicamente emFiguras 2.5e2.6.
Essas defesas são divididas em imunidade inata (não
específica) e adaptativa (específica). Os primeiros
20 Microbiologia Oral de Marsh e Martin podem interagir com outros componentes salivares,
incluindo IgA secretora, para aumentar suas ativações
antimicrobianas. Uma molécula relacionada (aglutinina
Saliva Quociente de vazão
Mucina / aglutininas salivar; peso molecular 340 kDa) também é altamente
Sistema de ânions lisozima glicosilada e transporta A ligação da mucina às bactérias
protease
parece envolver componentes reativos do grupo
Lactoferrina / apo-
lactoferrina sanguíneo, como N-acetilgalactose e ácido siálico.
Sistema de peroxidase Mucinas como MG2 podem interagir com outros
salivar componentes salivares, incluindo IgA secretora, para
Polipeptídeos ricos em aumentar suas ativações antimicrobianas. Uma molécula
histidina
sIgA relacionada (aglutinina salivar; peso molecular 340 kDa)
também é altamente glicosilada e transporta A ligação
Adquirido da mucina às bactérias parece envolver componentes
película reativos do grupo sanguíneo, como N-acetilgalactose e
ácido siálico. Mucinas como MG2 podem interagir com
outros componentes salivares, incluindo IgA secretora,
para aumentar suas ativações antimicrobianas. Uma
molécula relacionada (aglutinina salivar; peso molecular
IgG (IgA, IgM) 340 kDa) também é altamente glicosilada e transporta
complemento
polimorfos
Fluido crevicular
gengival
FIGURA 2.6Defesas do hospedeiro associadas à superfície do
dente.

superfícies mucosas é controlada. A capacidade dos

microrganismos de se fixarem firmemente às superfícies
orais e evitarem a remoção da boca pela deglutição é
uma estratégia fundamental de sobrevivência. A saliva
também contém uma série de moléculas que podem
regular a microbiota oral. As mucinas são glicoproteínas
de alto peso molecular contendo mais de 40% de
carboidratos que podem aglutinar microrganismos. Sua
estrutura proteica possui cadeias laterais de
oligossacarídeos de diferentes comprimentos e
composição; algumas dessas cadeias laterais são
ramificadas e o ácido siálico e a fucose são açúcares
terminais comuns. Duas mucinas quimicamente distintas
foram identificadas na saliva humana e são
denominadas glicoproteínas de mucina 1 e 2 (MG1 e
MG2, respectivamente); MG1 tem um peso molecular
superior a 103 kDa enquanto MG2 é apenas 130 a 150
kDa. Essas mucinas não apenas aglutinam bactérias
orais, mas também podem interagir com patógenos
exógenos, como Staphylococcus aureus e Pseudomonas
aeruginosa, bem como vírus (por exemplo, vírus
influenza), o que facilita sua remoção por deglutição. A
ligação da mucina às bactérias parece envolver
componentes reativos do grupo sanguíneo, como N-
acetilgalactose e ácido siálico. Mucinas como MG2
 inflamatórias encontradas na superfície dos micróbios
(como o lipopolissacarídeo [LPS]) e são quimiotáticos
para as células de defesa do hospedeiro (neutrófilos e
antígenos ativos do grupo sanguíneo, e é semelhante
a outra glicoproteína de defesa presente no pulmão.
Lisozimaé uma proteína básica de 14 kDa que pode
agregar bactérias Gram-positivas (incluindo
estreptococos) e Gram-negativas (incluindo patógenos
periodontais), e também pode lisar bactérias
hidrolisando peptidoglicano, o componente que confere
rigidez às suas paredes celulares. Em pH ácido, a ação
lítica da lisozima é potencializada por ânions
monovalentes (bicarbonato, flúor, cloreto ou tiocianato)
e proteases encontradas na saliva. A quitinase foi
detectada na saliva e pode funcionar atacando as paredes
das células da levedura. O ferro é essencial para o
crescimento microbiano e o hospedeiro irá sequestrar
avidamente este cátion usando proteínas de alta
afinidade e ligantes de ferro, como a lactoferrina
(MW=75 kDa). A lactoferrina livre de ferro
(apolactoferrina) pode ser bactericida para uma
variedade de bactérias, embora seja necessária a ligação
direta da proteína à superfície celular. A lactoferrina é
uma proteína multifuncional com propriedades
bacteriostáticas, bactericidas, fungicidas, antivirais e
antiinflamatórias e imunomoduladoras.
O sistema enzimático da peroxidase salivar
(sialoper-oxidase) produz hipotiocianato em pH
neutro ou ácido hipotiociano em pH baixo na
presença de peróxido de hidrogênio (gerado por
Streptococcus san-guinis e S. mitis), e ambos inibem
a glicólise pelas bactérias da placa. A
mieloperoxidase é encontrada em leucócitos
polimorfonucleares (PMNLs), que migram para a
fenda gengival como parte da resposta inflamatória
do hospedeiro ao acúmulo de placa e podem
contribuir para a atividade total da peroxidase medida
na saliva.
Uma mistura complexa de mais de 45 peptídeos
antimicrobianos (também chamados de peptídeos de
defesa do hospedeiro porque seus efeitos também
podem ser imunomoduladores) foi identificada na saliva
e alguns também são encontrados no GCF. Exemplos de
tais peptídeos antimicrobianos incluem histatinas e
defensinas. Os peptídeos antimicrobianos são peptídeos
catiônicos pequenos (geralmente<50 aminoácidos) que
podem atuar sinergicamente com outras moléculas de
defesa inatas para não apenas inibir patógenos
exógenos, mas também fornecer um meio pelo qual o
hospedeiro pode exercer algum controle sobre a
microbiota oral residente. Esses peptídeos também se
ligam e neutralizam moléculas potencialmente
 inflamação, ou de microrganismos. Outras proteínas
inibitórias incluem:
• inibidor de proteinase de leucócitos
linfócitos). Desta forma, os peptídeos
secretores(SLPI), que inibe várias proteases envolvidas
antimicrobianos podem desempenhar um importante
na
papel imunomodulador.
Histatinasão uma família de peptídeos básicos, ricos
em histidina, encontrados nas glândulas salivares
parótidas e submandibulares/sublinguais humanas. As
principais histatinas encontradas na saliva são as
histatinas 1, 3 e 5. Existem inúmeras outras histatinas, a
maioria das quais são fragmentos de degradação de duas
moléculas originais, histatina 1 e histatina 3. As
histatinas individuais podem ter papéis distintos, ou
podem funcionar de forma otimizada sob condições
específicas. As histatinas também podem inibir
proteases e adesinas do hospedeiro e das bactérias, e
prevenir a indução de citocinas por proteínas da
membrana externa bacteriana. No geral, esses peptídeos
têm um amplo espectro de atividade antifúngica e
antibacteriana e possuem propriedades que podem servir
para ligar o sistema imunológico inato e adquirido.
Defensinassão uma família de peptídeos
antibacterianos com um amplo espectro de atividade
antibacteriana, antifúngica e antiviral (incluindo o vírus
da imunodeficiência humana [HIV]). Alguns são
expressos constitutivamente (p.β-defensina-1) nas
glândulas salivares, enquanto outras são induzidas por
bactérias e mediadores inflamatórios. HumanoβAs -
defensinas (HBDs) protegem as superfícies mucosas,
incluindo a gengiva, a mucosa bucal e a língua. Os
HBDs podem estar associados à mucina, o que pode
protegê-los da degradação e facilitar seu contato com
bactérias agregadas à mucina. HBDs também foram
detectados na saliva, GCF e epitélio juncional gengival,
provavelmente devido à liberação de células fagocíticas
do hospedeiro e outras células de defesa, como
neutrófilos, macrófagos, monócitos e células
dendríticas. A catelicidina (peptídeo LL-37) é outro
peptídeo antimicrobiano secretado pelas células
epiteliais e também encontrado nos neutrófilos. O LL-37
pode se ligar a moléculas inflamatórias, como
lipopolissacarídeos bacterianos, e também atua como
quimioatraente para monócitos, células T e neutrófilos.
Isso levou à proposta de que LL-37 e outros peptídeos
antimicrobianos podem funcionar como alarminas; isso
é, eles ativam outros componentes da resposta imune
inata e adaptativa. As cistatinas são um grupo
diversificado de inibidores de cisteína protease; seus
papéis incluem o controle da atividade proteolítica, seja
do hospedeiro, como proteases liberadas durante a
 2A boca como habitat microbiano inflamatória. Outros componentes (IgG, IgM,Tabela
2.2) que também

destruição tecidual inflamatória. O SLPI

também possui propriedades antimicrobianas e
antivirais;
• inibidores teciduais de
metaloproteinases(TIMPs);
• calprotectina(uma proteína de ligação de cálcio
e zinco que pode inibir o crescimento bacteriano);
• proteína secretora da parótida, PSP,(PSP
pertence a uma família de proteínas orais e das vias
aéreas que estão relacionadas ao Clone epitelial do
Palato, Pulmão e Nasal, PLUNC). O PSP tem várias
funções, incluindo a capacidade de agregar bactérias e
ligar LPS; e
• cromogranina A(com propriedades
antifúngicas). Os análogos sintéticos de peptídeos
antimicrobianos são
sendo investigado em novas estratégias para inibir
micróbios orais específicos e como terapia
imunomoduladora.

PONTOS CHAVE
A boca tem muitos componentes das defesas inatas
do hospedeiro. Estes incluem: mucinas, aglutininas,
lisozima, lactoferrina, sialoperoxidase, histatinas,
defensinas, catelicidina e cistatinas. Essas moléculas
geralmente trabalham juntas sinergicamente.

(ii) Imunidade adaptativa

Componentes das defesas específicas do hospedeiro
(linfócitos intra-epiteliais e células de Langerhans,
imunoglobulinas: IgG e IgA) são encontrados na
mucosa e dentro dela.FIGO. 2,5), onde atuam como
barreiras à penetração de antígenos. A imunoglobulina
predominante na boca saudável é a IgA secretora
(sIgA), que é produzida por plasmócitos na glândula
salivar. A IgA secretora é composta por cadeias pesadas
e leves de IgA (300 kDa), componente secretor (70 kDa)
e cadeia J (15 kDa). A cadeia J conecta as duas
moléculas de IgA em um dímero, enquanto o
componente secretor estabiliza a molécula e reduz sua
suscetibilidade ao ataque de ácidos ou proteases gerais.
A IgA secretora pode aglutinar bactérias orais, modular
a atividade enzimática e inibir a aderência das bactérias
ao epitélio bucal e ao esmalte. A IgA secretora é apenas
fracamente ativadora e opsonizante do complemento e,
portanto, é menos provável de causar danos aos tecidos
por qualquer efeito indireto de uma resposta
22 Microbiologia Oral de Marsh e Martin
contém leucócitos, dos quais aproximadamente 95%
são neutrófilos.
A produção de anticorpos específicos pode ser
estimulada por antígenos bacterianos associados à placa
na margem gengival ou na mucosa oral. Anticorpos
salivares foram detectados com atividade contra uma
variedade de bactérias orais, incluindo estreptococos,
enquanto anticorpos circulantes (particularmente IgG)
para uma variedade de antígenos microbianos orais
estão presentes, mesmo na saúde. Na ausência de
inflamação, os níveis naturalmente baixos de
complemento e neutrófilos reduziriam a fagocitose
mediada por anticorpos, mas os anticorpos podem
funcionar interferindo na colonização ou inibindo o
metabolismo. Combinações dos fatores de defesa do
hospedeiro adaptativo e inato podem funcionar
sinergicamente. Por exemplo, lisozima e sIgA podem
reagir com aglutininas salivares (mucinas) e se
apresentar diretamente às células imobilizadas.
Talvez surpreendentemente, apesar dessa rica
gama de fatores antimicrobianos, a boca ainda
suporta uma microbiota diversificada, que confere
muitas funções benéficas ao hospedeiro.
PONTOS CHAVE
A boca tem componentes da resposta imune
adaptativa. A imunoglobulina predominante é a IgA
secretora na saliva, enquanto a IgG está presente no
GCF juntamente com complemento e neutrófilos.
GENÉTICA HOSPEDEIRA
A microbiota oral pode apresentar uma variação
considerável na composição tanto dentro como entre
os indivíduos, o que dificulta o estudo do efeito da
genética do hospedeiro. O projeto Microbioma
Humano resultou na identificação de um 'microbioma
central' que é comum a todos os indivíduos, com o
reconhecimento de que pode haver variação
considerável nos outros gêneros presentes (genoma
acessório). Certos grupos étnicos podem abrigar
assinaturas microbianas distintas. Em um estudo da
microbiota na saliva e na placa dental de pessoas que
vivem nos Estados Unidos, potenciais patógenos
pertencentes aos gêneros Filifactor, Staphylococcus,
Mycoplasma e Treponema foram encontrados em
níveis mais elevados em populações chinesas e
latino-americanas do que em outros grupos étnicos .
Estudos de doença periodontal sugeriram que
gênero, genética do hospedeiro e etnia podem
influenciar a suscetibilidade à doença e
possivelmente também afetar a microbiota. As razões
para isso são desconhecidas, mas podem refletir
alguma variação na resposta imune local.
Curiosamente, parece que a presença de alguns
patógenos periodontais em indivíduos de diferentes
origens étnicas é influenciada pelo tempo que os pais
viveram em seu novo país hospedeiro, sugerindo um
papel importante para fatores ambientais. Por
exemplo, em um estudo nos Estados Unidos, menos
patógenos periodontais potenciais foram detectados
em crianças cujos pais viviam nos Estados Unidos há
mais tempo. Polimorfismos genéticos associados à
interleucina-1 (IL-1), ou outras citocinas,
Os adultos jovens do noroeste da África abrigam
mais comumente Aggregatibacter (anteriormente
Actinobacil-lus) actinomycetemcomitans, que está
implicado na periodontite agressiva (verCapítulo 6).
Adolescentes que carregavam a cepa sorotipo b
tiveram um risco 18 vezes maior de desenvolver
periodontite agressiva localizada.
A microbiota subgengival de gêmeos também foi
comparada. A microbiota de crianças gêmeas
vivendo juntas era mais semelhante do que a de
crianças não aparentadas da mesma idade. Análises
posteriores mostraram que a microbiota de gêmeos
idênticos era mais semelhante do que a de gêmeos
fraternos, novamente sugerindo alguma influência
genética. Nenhuma diferença no número de espécies
compartilhadas, nem na composição da microbiota
oral, foi encontrada quando biofilmes supragengivais
e subgengivais de pares de gêmeos adultos
monozigóticos e dizigóticos foram comparados.
ESTILO DE VIDA DO ANFITRIÃO
O estilo de vida de um indivíduo pode ter um impacto
profundo em seu microbioma oral pessoal. Como foi
mencionado anteriormente, e que será discutido em
detalhes emCapítulos 4e6, uma dieta que inclui a
frequente A ingestão de açúcares dietéticos faz com que
o biofilme tenha exposições regulares e prolongadas a
pH baixo.FIGO. 2.3). Tais condições selecionam e
enriquecem as bactérias que crescem preferencialmente
em condições ácidas, resultando no biofilme com
maiores proporções de
 de superfícies mucosas, dentes e biomateriais
restauradores introduzidos. No caso das duas últimas
superfícies,
espécies produtoras de ácido e tolerantes a ácido, tais
como estreptococos mutans, bifidobactérias e
lactobacilos. Isso também aumenta o risco de
desenvolver cáries dentárias. O tabagismo é um fator
de risco para doenças periodontais, e estudos
transversais da microbiota subgengival de fumantes
periodontalmente saudáveis encontraram mais
anaeróbios obrigatórios, mais patógenos periodontais
(por exemplo, Filifactor alocis, Dialister sp.,
Fusobacterium nucle-atum, etc. ) e menos bactérias
orais benéficas do que não fumantes. A cessação do
tabagismo pode levar a uma redução nos níveis ou
prevalência desses patógenos periodontais. Da
mesma forma, fumar também perturba a microbiota
subgengival em pacientes com implantes, levando a
uma seleção de patógenos periodontais putativos,
aumentando assim o risco de periimplantite ou
mucosite periimplantar.

OBSERVAÇÕES FINAIS
Apesar do potencial para perturbações ambientais
regulares em alguns dos hospedeiros e fatores
ambientais descritos anteriormente, uma vez
estabelecida em um local, a microbiota oral
permanece relativamente estável em composição e
proporções ao longo do tempo. Essa estabilidade é
denominada homeostase microbiana e é discutida
mais adiante emcapítulo 5.

PONTOS CHAVE
A boca oferece condições capazes de suportar o
crescimento de uma coleção diversificada de
microrganismos (a microbiota oral), apesar da presença de
um complexo conjunto de componentes das defesas inatas
e adaptativas do hospedeiro. A microbiota residente é
fornecida com uma ampla gama de nutrientes endógenos e
exógenos, juntamente com heterogeneidade suficiente em
pH e potencial redox, para acomodar micróbios com uma
variedade de requisitos. O estilo de vida do indivíduo (por
exemplo, dieta e tabagismo) pode influenciar
negativamente a composição da microbiota oral.

RESUMO DO CAPÍTULO
A boca não é um habitat uniforme para o crescimento
microbiano e colonização. Uma variedade de superfícies
produz habitats distintos devido à sua natureza física e
propriedades biológicas. Estes incluem uma diversidade
 Feller L, Altini M, Khammissa RA, et al. Imunidade da mucosa
2A boca como habitat microbiano
oral. Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol. 2013; 116:
576-583.
Gorr SU. Peptídeos antimicrobianos na defesa inata periodontal.
a formação substancial de biofilme (placa dental) Biol Oral Frontal. 2012; 15: 84-98.
pode surgir em virtude de serem superfícies que não
descamam.
As superfícies da boca são lubrificadas pela saliva,
enquanto a fenda gengival é banhada com GCF.
Ambos os fluidos removerão microorganismos
fracamente aderidos por meio de sua ação de
lavagem e entregam componentes da resposta imune
inata e adaptativa que ajudam a regular a colonização
bacteriana e fúngica. A saliva e o GCF contribuem
para a película adquirida e também são fontes
primárias de nutrientes para os microrganismos orais.
Consórcios de diferentes espécies bacterianas com
padrões complementares de atividades de glicosidase
e protease são necessários para quebrar as
glicoproteínas do hospedeiro. Desta forma, a saliva e
o GCF desempenham papéis fundamentais na
ecologia microbiana da boca. Os componentes da
dieta têm menos influência na composição da
microbiota da boca, embora a ingestão frequente de
carboidratos fermentáveis possa levar a aumentos de
organismos acidogênicos e tolerantes a ácidos
(acidúricos) que são potencialmente cariogênicos
devido ao baixo pH gerado pelo seu catabolismo,
enquanto o nitrato dietético pode ser convertido em
nitrito e óxido nítrico acidificado, que têm
propriedades benéficas importantes para o
hospedeiro. Outros fatores que influenciam o
crescimento de microrganismos na boca incluem o
Eh (potencial redox) e o pH de um local, a
integridade das defesas do hospedeiro e o estilo de
vida do indivíduo.
Existe uma interação dinâmica entre o ambiente oral
e a composição e metabolismo da microbiota oral
residente. Portanto, uma mudança substancial em um
parâmetro ambiental chave que afeta o crescimento
microbiano pode perturbar o equilíbrio natural da
microbiota e selecionar organismos que são potenciais.
cialmente patogênico.

LEITURA ADICIONAL
Baker OJ, Edgerton M, Kramer JM, et ai. Interações saliva-micróbios e
disfunção das glândulas salivares. Adv Dent Res. 2014; 26: 7-14.
Filippis F, Vannini L, La Storia A, et al. A mesma microbiota e um
metaboloma potencialmente discriminante na saliva de
indivíduos onívoros, ovolacto-vegetarianos e veganos. PLoS
UM. 2014; 9: e112373.
Devine DA, Cosseau C. Peptídeos de defesa do hospedeiro
antimicrobiano na cavidade oral. Adv Appl Microbiol. 2008; 63:
281-322.
24 Microbiologia Oral de Marsh e Martin

Kakubovics NS. Saliva como única fonte nutricional no
desenvolvimento de comunidades multiespécies na placa dental.
Microbiol Spectr. 2015; 3: doi: 10.1128 / microbiolspec.
Kapil V, Haydar SMA, Pearl V, et ai. Papel fisiológico das
bactérias orais redutoras de nitrato no controle da pressão
arterial. Free Radic Biol Med. 2013; 55: 93-100.
Loo JA, Yan W, Ramachandran P, et al. Comparativo de
proteomas salivares e plasmáticos humanos. J Dent Res. 2010;
89: 1016-1023.
Marsh PD, Do T, Beighton D, et al. Influência da saliva na
microbiota oral. Periodontol 2000. 2016; 70: 80-92.
Mason MR, Nagaraja HN, Joshi V, et al. O sequenciamento
profundo identifica assinaturas bacterianas específicas da etnia
no microbioma oral. PLoS UM. 2013; 8: e77287.
Papapostolou A, Kroffke B, Tatakis DN, et ai. Contribuição do
genótipo do hospedeiro para a composição dos microbiomas
supragengivais e subgengivais associados à saúde. J Clin
Periodontal. 2011; 38: 517-524.
Siqueira WL, Dawes C. O proteoma salivar: Desafios e
perspectivas. Proteômica Clin Appl. 2011; 5: 575-579.
Tsigarida AA, Dabdoud SM, Nagaraja HN, et al. A influência do
tabagismo no microbioma periimplantar. J Dent Res. 2015; 94:
1202-1217.
van't Hof W, Veerman EC, Nieuw Amerongen AV, et al. Sistemas de
defesa antimicrobianos na saliva. Mongr Oral Sci. 2014; 24: 40-51.
Yoshizawa JM, Schafer CA, Schafer JT, et al. Biomarcadores
salivares: Rumo a futuras utilidades clínicas e de diagnóstico.
Clin Microbiol Rev. 2013; 26: 781-791.

QUESTÕES DE MÚLTIPLA ESCOLHA

Respostas na pág. 249
1 O principal sistema tampão na saliva é composto de qual c. Peptídeos
dos seguintes? d. Proteínas
uma.
Bicarbonato
B. Fosfatos
2 Os microrganismos são incapazes de se manter na saliva apenas por divisão celular devido a qual dos
seguintes fatores?
uma. Mastigar c. Deglutição
b. Fluxo de fluido crevicular gengival (GCF) d. Fluxo salivar reduzido
3 Quais dos seguintes não são peptídeos inatos de defesa do hospedeiro?
uma. sIgA c. SLPI
b. Cistatinas c.
d. IgA
TIMP
d. Lisozima
4 Qual dos seguintes não faz parte da resposta adaptativa do
hospedeiro na boca?
uma. c. Fornecendo um pH neutro e agindo como um
IgG b. tampão para o crescimento microbiano
IgM d. Entrega de neutrófilos e complemento para
matar microorganismos
5 Qual dos seguintes não é um fator pelo qual a saliva
influencia a microbiota da boca?
uma. Formação de um filme condicionador c. Frutosiltransferase d.
b. Fornecendo proteínas e glicoproteínas Amilase
para o crescimento bacteriano

c. pH alcalino
6 Qual é a classe de enzima responsável pela remoção de d. Tudo acima
carboidratos das cadeias laterais das mucinas salivares?
uma.
Glicosiltransferase b. c. IgG
Glicosidase d. IgM

7 As espécies de Lactobacillus preferem crescer em qual pH?

 uma. pH
neutro b. pH
ácido
8 Qual é a imunoglobulina predominante na saliva?
uma. IgA
b. IgA secretora
 2A boca como habitat microbiano

9 A boca recebe ar livremente; portanto, qual das seguintes afirmações éfalso?

a. A maioria dos microrganismos orais são
aeróbios
b. A maioria dos microrganismos orais são
anaeróbios facultativos.
10 Qual dos seguintes é a principal fonte de nutrientes para a microbiota oral?
uma. Açúcares
dietéticos b.
Nitrato dietético
 CAPÍTULO3

A microbiota oral residente

Tradicionalmente, um sistema hierárquico é
usado para nomear as bactérias, de modo
que grupos de

TA microbiota oral residente é diversa e consiste de

uma ampla gama de vírus, micoplasmas, bactérias,
leveduras e até mesmo em algumas ocasiões,
protozoários e Archaea. Os últimos são procariontes que
são distintos das bactérias e incluem metanógenos. Esta
diversidade microbiana é um reflexo dos numerosos e
variados habitats presentes na boca que são abastecidos
com uma gama de nutrientes endógenos e exógenos.
Além disso, em biofilmes como a placa dental,
gradientes se desenvolvem em parâmetros de
significância ecológica, como tensão de oxigênio e pH,
proporcionando condições adequadas para o
crescimento e sobrevivência de microrganismos com um
amplo espectro de necessidades. Sob tais condições,
nenhuma população bacteriana isolada tem uma
vantagem particular e numerosas espécies podem
coexistir. A placa também funciona como uma
verdadeira comunidade microbiana, e ocorrem
numerosos exemplos de interações metabólicas
sinérgicas. Isso permitirá que algumas bactérias
exigentes sobrevivam e cresçam quando fazem parte de
um consórcio em condições que não seriam capazes de
tolerar se estivessem em cultura pura ou em um
ambiente mais homogêneo. Existem mais de 700
espécies procarióticas que foram isoladas da cavidade
oral humana; aproximadamente 49% são oficialmente
nomeados, 17% não nomeados (mas cultiváveis) e 34%
são conhecidos apenas como filotipos não cultivados.

Antes que a comunidade microbiana em locais

individuais na boca possa ser considerada em detalhes
(Capítulos 4e5), serão descritos os tipos e propriedades
dos organismos comumente encontrados na saúde e na
doença. Em primeiro lugar, no entanto, é benéfico
discutir os princípios de classificação e identificação
microbiana e descrever brevemente alguns dos métodos
usados. A classificação é o arranjo de organismos em
grupos (taxa) com base em suas semelhanças e
diferenças. Em contraste, a identificação é o processo de
determinar se um novo isolado pertence a um
determinado táxon. O objetivo da classificação é definir
esses táxons em nível de gênero ou espécie.
 Micoplasma
Fungos
Archaea
Vírus
Princípios de classificação microbiana Protozoários
Princípios de identificação microbiana Resumo do capítulo
convencional Leitura adicional
Impacto da ecologia microbiana molecular
Dificuldades decorrentes dos recentes avanços
na classificação microbiana
Cocos Gram-positivos
Estreptococo
Outros cocos Gram-positivos
Bastões e filamentos Gram-positivos
Actinomyces
Eubactériae gêneros relacionados
Lactobacillus
Outros gêneros
Cocos Gram-negativos
Bastões Gram-negativos
Gêneros anaeróbicos facultativos e capnofílicos
Gêneros anaeróbios obrigatórios
26
 analisaram apenas uma fração dos componentes
codificados pelo material genético da célula (o genoma).
organismos intimamente relacionados formam uma
espécie, e espécies relacionadas são colocadas em um
gênero e assim por diante.Tabela 3.1). As espécies são
designadas por binômios latinos ou 'latinizados' (por
exemplo, Streptococcus mutans; o gênero é Streptococ-
cus e a espécie é mutans,Tabela 3.1). Se um isolado não
pertence a um táxon existente, uma nova espécie pode
ser proposta. A nomenclatura de bactérias para refletir
essa classificação (nomenclatura) é regulamentada por
comitês internacionais. Uma vez que um organismo
tenha sido colocado em uma espécie, pode ser possível
subtipar cepas individuais; essa abordagem pode ser
valiosa em estudos epidemiológicos, como os que
investigam a transmissão de organismos entre
indivíduos. As inter-relações entre essas abordagens
(classificação, identificação, tipagem de cepas) são
mostradas emFIGO. 3.1. O processo de classificação,
nomenclatura e A identificação de microrganismos é
chamada de taxonomia, embora, às vezes, os termos
classificação e taxonomia sejam usados de forma
intercambiável.

PONTOS CHAVE
A boca pode suportar o crescimento de diversas
comunidades de microrganismos.
Mais de 700 espécies procarióticas foram isoladas
da boca humana. Destes, aproximadamente 49% são
oficialmente nomeados, 17% não nomeados (mas
cultiváveis) e 34% são conhecidos apenas como
filotipos não cultivados. Além disso, vírus,
micoplasmas, leveduras, protozoários e Archaea
também estão presentes.

PRINCÍPIOS DE CLASSIFICAÇÃO MICROBIANA

Como afirmado anteriormente, o propósito dos

esquemas de classificação é desenvolver um arranjo
lógico dos organismos com base em suas semelhanças e
relacionamentos. Isso requer a determinação e
comparação de tantas características quanto possível,
embora em esquemas de identificação, apenas alguns
testes discriminatórios-chave possam ser necessários
para distinguir entre certos organismos. Os primeiros
esquemas de classificação dependiam fortemente de
critérios morfológicos e fisiológicos simples, como a
forma da célula e o padrão de fermentação de açúcares
simples.Tabela 3.2). Com efeito, essas abordagens
 27 FIGURA 3.1Representação esquemática para distinguir
3 A Microbiota Oral Residente
classificação, identificação e tipagem de estirpes
bacterianas.
TABELA 3.1 Classificações hierárquicas em
micróbios Quimiotaxonomia, em que houve uma análise mais
classificação ampla de componentes mais complexos da célula (por
Classificação exemplo, a composição química da parede celular ou de
taxonômica Exemplo lipídios de membrana, perfis de proteínas de células
Reino Procariota inteiras, etc.) levou a grandes melhorias nos esquemas
Divisão Firmicutes de classificação. As características antigênicas dos
microrganismos também podem ser comparadas por
Subdivisão baixo teor de G + C de DNA
meio de técnicas imunológicas (sorologias), nas quais
Ordem - anticorpos específicos (policlonais ou monoclonais) são
Família Streptococcaceae utilizados para detectar antígenos de superfície celular.
Gênero Estreptococo
Espécies Streptococcus mutans
Sorotipo* Streptococcus mutans
sorotipo c
Variedade* Streptococcus mutans
NCTC 10449**

* Essas classificações não são formalmente reconhecidas

em taxonomia, mas são de grande importância prática.
ADN,Ácido desoxirribonucleico; ** NCTC, = Coleção
Nacional de Culturas Tipo.

Classificação
Taxonomia
esquema

Características discriminatórias
selecionadas
para
identificação

Estudos para associar

Atribuir isolados a
espécies com saúde
espécies
e doença

Digitando Estudos de transmissão,

esquemas epidemiologia, etc
28 Microbiologia Oral de Marsh e Martin e longo o suficiente para fornecer informações
discriminatórias valiosas.

TABELA 3.2 Algumas características

usadas na classificação microbiana e
esquemas de identificação
Característica Exemplos
Forma; Reação da coloração
Morfologia celular de Gram
(morfologia celular e
estrutura); flagelos;
esporos; Tamanho
Aparência colonial Pigmento; hemólise;
forma; Tamanho
Carboidrato Produção de ácido ou gás
fermentação
Hidrólise de aminoácidos Produção de amônia
Padrão de fermentação Butirato; lactato; acetato
produtos
Enzimas pré-formadas Glicosidases (por exemplo,
α-glicosidase)
Antígeno Monoclonal / policlonal
anticorpos para a superfície
celular
proteínas
Menaquinonas de cadeia
Lipídios longa
ácidos graxos
ADN Guanina + Citosina (G + C)
Razão; gene 16S rRNA
seqüência; genoma inteiro
seqüência
Perfil enzimático Presença/ausência;
mobilidade eletroforética
Peptidoglicano Composição de aminoácidos
ex., lisina

ADN,Ácido desoxirribonucleico; RNA, ácido ribonucleico.

Os esquemas de classificação contemporâneos

baseiam-se mais na determinação do parentesco
genético entre cepas, por exemplo, comparando a
sequência de genes de ácido ribonucleico ribossômico
(RNA) 16S (16S rRNA). Dentro do gene rRNA de
bactérias e fungos, alguns trechos da sequência de ácido
desoxirribonucleico (DNA) são conservados, enquanto
outras regiões são altamente variáveis e refletem
divergência evolutiva. Os genes de rRNA bacterianos
tendem a ter cerca de 1500 pares de bases, o que é curto
o suficiente para o sequenciamento rápido usando
equipamento automatizado de sequenciamento de DNA
para demonstrar semelhanças e diferenças entre as
cepas. As regiões conservadas podem ser usadas como
um modelo para o projeto de primers oligonucleotídicos
de reação em cadeia da polimerase (PCR) 'universais'
para amplificar o resto do gene 16S rRNA, que pode
então ser sequenciado para identificar diferenças nas
regiões variáveis. As sequências podem ser comparadas
com aquelas de outros microrganismos e aquelas
mantidas em bancos de dados de nucleótidos, para que a
relação de um isolado com uma espécie conhecida possa
ser determinada e árvores evolutivas (filogenéticas)
possam ser desenvolvidas. A técnica é relativamente
rápida e facilitou a análise de uma gama muito maior de
bactérias do que era possível anteriormente.Tabela 3.3)
e bastonetes Gram-positivos anaeróbios anteriormente
agrupados como espécies de Eubacterium (FIGO. 3.6).
Além de classificar cepas desconhecidas, este A
abordagem também pode ser usada para identificar
isolados e tem muitas vantagens sobre as abordagens
culturais convencionais (veja mais adiante;FIGO. 3.2).
Da mesma forma, o recente desenvolvimento de
sequenciadores de DNA de bancada de última geração
permitiu que grupos de pesquisa sequenciassem
rapidamente, a baixo custo, todo o genoma de bactérias
isoladas (sequenciamento de genoma inteiro [WGS] ou
sequenciamento de próxima geração [NGS]). As
sequências do genoma podem então ser alinhadas com
as de espécies autenticadas em bancos de dados
internacionais de microrganismos de referência. Essa
abordagem também pode ser aplicada a amostras
retiradas diretamente do ambiente ou de espécimes
clínicos (metagenômica), embora a análise de múltiplos
genomas em uma amostra complexa, como a placa
dentária, requeira um suporte bioinformático
sofisticado. A metagenômica é uma nova abordagem
poderosa para determinar a composição de comunidades
microbianas e é especialmente vantajosa quando
algumas das espécies componentes ainda não podem ser
cultivadas em cultura pura em laboratório.
Uma consequência da classificação é a proposta de
novas espécies. Uma espécie representa uma coleção de
linhagens
 3 A Microbiota Oral Residente 29

TABELA 3.3 Espécies de estreptococos Cultura Molecular

orais isolados de humanos

Amostra

Grupo Espécies Dispersão e diluição Extração de DNA

mutans- S. mutans sorotipos c, e, f, k
grupo* S. sobrinus sorotipo d, g
S. criceti sorotipo a Não seletivo e Amplificação do gene 16S
ágares seletivos rRNA
S. ratti sorotipo b
com primers universais
salivarius- S. salivarius
grupo S. vestibularis Incubar em condições
atmosféricas apropriadas
anginoso- S. constellatus Clonagem e parcial
por vários momentos sequenciamento
grupo S. intermediário
S. anginosus
grupo mitis S. sanguinis Contagens de
Procure por homologia
S. gordonii colônias
em bancos de dados
S. parasanguinis
S. oralis
Construção de específicos
S. mitis Esquemas de sondas para análise posterior
S. cristatus identificação
S. oligofermentans Vantagens:Relativamente pouco
S. sinensis Vantagens:Bactérias cultivadas viés - todas as bactérias produzem
S. australis pode ser estudado para o DNA, independentemente de sua

S. peroris metabolismo predominância ou propriedades.

estudos e para Rápido.
S. infantis antimicrobianos Desvantagens:As propriedades
S. dentisani testes de sensibilidade. devem ser inferidas a partir de
S. tigurinus Quantitativo dados de sequência; às vezes
Desvantagens:Apenas 50-70% apenas dados limitados
* estreptococos mutans também incluem S. ferus (isolado de de bactérias podem ser disponíveis. O teste de
cultivadas; tendendo para sensibilidade antimicrobiana não
organismos predominantes e de é possível. Semiquantitativo
crescimento mais rápido.
Processo lento. Trabalho
intensivo
ratos), S. macacae e S. downei (sorotipo h) (isolados FIGURA 3.2As principais etapas na determinação da
de macacos).
composição microbiana da microbiota de amostras da boca
usando métodos de cultura ou moleculares.

de linhagens dentro de uma espécie podem às vezes

que compartilham muitas características em comum e ser distinguidos por uma característica especial. Por
que diferem consideravelmente de outras linhagens. exemplo, cepas com uma propriedade bioquímica ou
Uma vez que uma espécie é reconhecida, então é fisiológica especial são denominadas biovares ou
nomeada uma cepa tipo que possui propriedades biótipos, enquanto cepas com uma composição
representativas da espécie. As cepas de tipo são antigênica distinta são descritas como sorovares ou
mantidas em coleções nacionais, como a American sorotipos.
Type Culture Collection (ATCC) ou a National
Collection of Type Cultures (NCTC), localizada no
Reino Unido.
Uma espécie pode ser dividida em subespécies se
variações fenotípicas menores, mas consistentes,
puderem ser reconhecidas. Da mesma forma, grupos
e pode ser reconhecido usando anticorpos apropriados.
As abordagens moleculares também podem ser
adaptadas para subtipagem de cepas dentro de uma
espécie. Com exceção do sequenciamento direto, a
maioria dos métodos envolve amplificação por PCR e
perfil eletroforético de amplicons ou fragmentos
digeridos destes. Além disso, todo o DNA genômico
pode ser digerido por diferentes enzimas de restrição
(endonucleases), que cortam o ácido nucleico em locais
específicos. Os digeridos são então submetidos a
eletroforese em gel de agarose para gerar uma impressão
digital de DNA. Cepas diferentes gerarão padrões
diferentes (polimorfismos de comprimento de fragmento
de restrição, RFLPs), embora as cepas que pareçam
fornecer padrões semelhantes precisem ser comparadas
após a digestão com mais de uma enzima. O software de
computador dedicado para impressão digital é
30 Microbiologia Oral de Marsh e Martin desvantagem potencial é que essas abordagens podem
detectar células mortas e viáveis, e elas são apenas
comercialmente disponível para análise dos perfis
eletroforéticos. Para perfis altamente complexos,
fragmentos de restrição podem ser transferidos para
membranas de nitrocelulose ou nylon e hibridizados
com uma sonda devidamente marcada para dar um perfil
mais simples.

PRINCÍPIOS DA IDENTIFICAÇÃO
MICROBIANA CONVENCIONAL

Uma vez que os organismos tenham sido corretamente

classificados usando técnicas rigorosas, esquemas de
identificação mais simples podem ser elaborados nos
quais apenas um número limitado de propriedades
discriminatórias-chave são comparados (verFIGO.
3.1,Tabela 3.2). A primeira fase pode envolver a reação
de um organismo com a coloração de Gram e a
determinação da morfologia celular. As bactérias são
então descritas como sendo, por exemplo, cocos Gram-
positivos ou bastonetes Gram-negativos, e assim por
diante. Dependendo do resultado dessa divisão, testes
fisiológicos simples podem ser realizados, como a
determinação dos padrões de fermentação do açúcar, os
perfis dos produtos ácidos da fermentação após o
metabolismo da glicose ou atividades enzimáticas
selecionadas. A detecção rápida (cerca de 4 horas) de
enzimas expressas constitutivamente por concentrações
concentradas de bactérias simplificou a identificação de
alguns grupos de bactérias. Substratos ecologicamente
relevantes que detectam enzimas como as gli-cosidases
que clivam resíduos de açúcar de mucinas salivares são
agora mais comumente usados para diferenciar grupos
de bactérias que antes eram difíceis de separar, por
exemplo, estreptococos orais. Alguns desses testes
foram incorporados em kits e estão disponíveis
comercialmente, juntamente com bancos de dados
informatizados, para facilitar a identificação.
Anticorpos monoclonais e sondas de ácidos
nucleicos (oligonu-cleotídeos) foram desenvolvidos para
a rápida identificação de algumas espécies e
principalmente para aquelas associadas a doenças. Esses
anticorpos e sondas podem ser marcados com uma
molécula repórter para permitir a detecção. Exemplos
desses repórteres incluem corantes fluorescentes (FIGO.
3.3), radiomarcadores ou enzimas repórter, como
peroxidase de rábano. Essas técnicas têm a vantagem de
que os organismos podem ser detectados diretamente
em uma amostra clínica, como a placa dentária, sem a
necessidade de longos cultivos. No entanto, uma
aplicável para espécies predeterminadas para as quais
os reagentes já estão disponíveis.
Os esquemas convencionais de identificação
microbiana só podem ser usados quando os organismos
foram isolados e cultivados em cultura pura.
Inevitavelmente, o procedimento para obtenção de
cultura pura (dispersão e diluição da amostra,
crescimento em placas de ágar seletivas e não seletivas,
condições de incubação, etc.) marFIGO. 3.2). Técnicas
alternativas independentes de cultura evoluíram a partir
de abordagens moleculares modernas, e estas estão
fornecendo uma imagem mais precisa da diversidade
(riqueza) da microbiota de uma ampla variedade de
habitats. Muitas bactérias orais são difíceis de cultivar e
cerca de 30 a 50% não são cultiváveis atualmente em
cultura pura (estas são descritas como espécies não
cultiváveis). Kits moleculares estão disponíveis
comercialmente para identificar bactérias selecionadas
que estão associadas a doenças, especialmente à doença
periodontal. Atualmente, há um serviço disponível no
The Forsyth Insti-tute, EUA, chamado HOMINGS
(identificação de micróbio oral humano usando
sequenciamento de próxima geração), que oferece
identificação em nível de espécie de cerca de 600
táxons, com mais 100+alvos de nível de gênero, usando
DNA submetido a partir de espécimes clínicos orais.

IMPACTO DA ECOLOGIA
MICROBIANA MOLECULAR
Como afirmado anteriormente, a relação genética de
microrganismos é agora principalmente determinada por
comparações de sequências de genes de RNA
ribossômico 16S (rRNA) ou por sequenciamento de
genoma completo (WGS ou NGS). O maior impacto
dessas abordagens tem sido na análise de diversas
comunidades de microrganismos de vários habitats
(ecologia microbiana molecular ou metagenômica),
incluindo a boca. Comparações entre o número de
células em amostras que podem ser observadas por
microscopia versus aquelas que podem ser cultivadas
em laboratório, mesmo usando as técnicas mais
avançadas, demonstraram que apenas uma parte da
microbiota de um local pode ser cultivada. A fração
cultivável pode variar de menos de 1% da contagem
total de células em alguns habitats marinhos a cerca de
50-70% da microbiota oral. Como mencionado
anteriormente,
 3A Microbiota Oral Residente

UMA

FIGURA 3.3Exemplos de bactérias atualmente não cultiváveis em placa subgengival visualizadas usando técnicas de
hibridização in situ fluorescente (FISH). (A) Sondas oligonucleotídicas de ácido ribonucleico ribossômico 16S (rRNA) foram
usadas para detectar bactérias (verde) e espécies de Treponema (vermelho). Cortesia da Dra. Annette Moter e produzido com
permissão da Springer-Verlag GmbH & Co. (Norris SJ, Paster BJ, Moter A e Gobel UB, O gênero Treponema, em The
Prokaryotes, Terceira Edição; Berlim: Springer, 2007). (B) Sondas de oligonucleotídeos de rRNA 16S foram usadas para
detectar bactérias (verde) e membros do filo TM7 (azul). Cortesia do Dr. Cleber Ouverney e da Sociedade Americana de
Microbiologia (ver Ouverney et al. Appl Environ Microbiol 2003 69: 6294–6298).
32 Microbiologia Oral de Marsh e Martin cultiváveis, como sua estrutura de parede celular, seus
atributos de virulência, o metabolismo
as razões para isso podem ser a ignorância de um
nutriente essencial ou outro requisito de crescimento, ou
porque a bactéria evoluiu para crescer como parte de
uma comunidade de células, e não como uma cultura
pura isolada.
A análise de sequências bacterianas de rRNA 16S
tem sido crucial para melhorar a taxonomia bacteriana.
Embora tais abordagens moleculares tenham permitido a
construção de árvores filogenéticas que incluem
organismos atualmente não cultivados, em muitos casos,
um nome de gênero e espécie ainda não pode ser
atribuído devido à incapacidade de caracterizar
fenotipicamente o organismo. No caso do microbioma
oral, um banco de dados baseado em filogenia, o Human
Oral Microbiome Database (HOMD), foi
disponibilizado na Internet em 2008 e fornece um
esquema taxonômico provisório para as bactérias orais
humanas não identificadas. Atualmente, o HOMD
indica que existem 707 espécies bacterianas na cavidade
oral humana, com 49% destas oficialmente nomeadas,
17% sem nome (mas podem ser cultivadas) e 34%
permanecem como filotipos não cultiváveis. O HOMD
agrupa estas 707 espécies (taxa;Figura 3.4ilustra a
predominância atualmente aceita gêneros (e respectivos
filos) da microbiota oral com base no sequenciamento
do gene 16S rRNA. Até 96% dos táxons orais
pertencem a Firmicutes, Bacteroidetes, Proteobacteria,
Actinobacteria, Spirochaetes e Fusobacteria. Os
restantes 4% dos táxons são colocados nos filos Euryar-
chaeota, Chlamydiae, Chloroflexi, SR1, Synergistetes,
Tenericutes, Chlorobi, Gracilibacteria (GN02), WPS-2 e
Saccharibacteria (TM7).
Sondas de oligonucleotídeos também podem ser
usadas para que a presença desses organismos possa ser
determinada de forma relativamente simples em
amostras clínicas usando testes rápidos, como PCR ou
por hibridização in situ, geralmente com um marcador
fluorescente (FISH, verFIGO. 3.3). Um benefício
importante dessas abordagens moleculares baseadas em
PCR é seu potencial para detectar organismos que estão
presentes em baixo número. Embora as propriedades
desses organismos incultiváveis não possam ser
determinadas usando testes convencionais (como
padrões de fermentação de açúcar ou seu perfil de
sensibilidade a antibióticos), existem bancos de dados
de genes que podem ser interrogados para procurar
sequências homólogas com funções conhecidas. Isso
pode fornecer informações sobre propriedades
potencialmente importantes desses organismos não
 rRNA em uma lâmina e permitiu uma tela muito mais
ampla da microbiota em amostras clínicas. Novo
baseou-se em hibridizações da sequência do gene 16S
caminhos que eles podem usar e até mesmo sua
rRNA em uma lâmina e permitiu uma tela muito mais
provável resistência a agentes antimicrobianos.
ampla da microbiota em amostras clínicas. Novo
Duas grandes famílias de novas bactérias que não são
baseou-se em hibridizações da sequência do gene 16S
cultiváveis em cultura pura foram identificadas na
rRNA em uma lâmina e permitiu uma tela muito mais
boca.FIGO. 3.3) e são comumente detectados em bolsas
ampla da microbiota em amostras clínicas. Novo
periodontais profundas; mais detalhes destes serão
apresentados mais adiante neste capítulo. Além disso,
alguns gêneros contêm exemplos de espécies cultiváveis
e não cultiváveis. Existem cerca de 50 espécies de
Treponema que, embora observadas microscopicamente
e detectadas por abordagens moleculares, não podem ser
cultivadas (verFIGO. 3.3, UMA). Da mesma forma, a
análise molecular da microbiota associada a abscessos
dentoalveolares e infecções endodônticas identificou
consistentemente novos grupos de bactérias que não
foram reconhecidos, ou foram grosseiramente
subestimados, em estudos culturais paralelos (verFIGO.
3.2). A existência de bactérias não cultiváveis não pode
ser ignorados porque podem formar uma grande
proporção da microbiota e sua presença em um local
pode ser clinicamente significativa. Vale lembrar que o
agente etiológico da sífilis é a espiroqueta, Treponema
pallidum, que ainda não pode ser cultivada em
laboratório.
Abordagens moleculares também foram
desenvolvidas para comparar a diversidade de
comunidades microbianas orais de diferentes locais na
saúde e na doença. Essas abordagens originalmente
incluíam o perfil da comunidade microbiana usando
eletroforese em gel de gradiente desnaturante (DGGE).
Nesse método, o DNA genômico total é extraído de
amostras clínicas, amplificado por PCR usando primers
universais para genes de 16S rRNA bacteriano e
produtos resolvidos em géis de poliacrilamida em um
gradiente desnaturante. Perfis de DGGE podem ser
analisados usando software apropriado, e bandas novas
ou discriminatórias podem ser extirpadas do gel,
clonadas e sequenciadas, permitindo que uma
identificação presuntiva seja feita. Uma técnica
alternativa empregou a hibridização de DNA checker-
board – DNA usando sondas genômicas inteiras
marcadas e membranas de nylon para rastrear
simultaneamente várias amostras clínicas para cerca de
40 espécies microbianas pré-selecionadas diferentes.
Posteriormente, foi desenvolvido um microarray
baseado em DNA que poderia detectar 300 das bactérias
orais mais prevalentes. Denominado Human Oral
Microbe Identification Microarray (HOMIM), foi
baseado em hibridizações da sequência do gene 16S
3
33

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FIGURA 3.4Árvore a
filogenética baseada i
na comparação de s
genes de ácido
ribonucleico
h
ribossômico 16S
u
34 Microbiologia Oral de Marsh e Martin estudo inicial pode ter sido posteriormente reclassificada
e, portanto, renomeada, e assim novas e antigas
terminologias coexistem na literatura científica. Por
As ferramentas de sequenciamento baseadas em PCR
exemplo, Strep-tococcus sanguis foi descrito em artigos
para perfis de comunidades substituíram muitas dessas
científicos
abordagens, incluindo abordagens de sequenciamento de
genoma inteiro (metagenômica). Várias plataformas
estão disponíveis para realizar análises metagenômicas e
a chave para o sucesso de todas elas é a capacidade de
compartimentar ampli-cons de PCR individuais,
permitindo assim que sejam sequenciados sem a
necessidade de etapas de clonagem prévias
(consulteCapítulo 4).
As abordagens independentes da cultura estão
mudando radicalmente nossa percepção da
diversidade da microbiota oral na saúde e na doença.
O trabalho está em andamento para identificar as
sequências de DNA de assinatura de todos os
microrganismos na boca (cultiváveis e não
cultiváveis) e desenvolver kits ou serviços para
permitir que os médicos rastreiem rapidamente a
presença ou ausência de centenas de espécies,
levando assim à promessa de melhorias
oportunidades de diagnóstico e tratamento.

PONTOS CHAVE
O conhecimento da microbiota oral depende de sistemas
de classificação precisos e robustos a partir dos quais
esquemas de identificação mais simples podem ser
desenvolvidos. Ambos os processos foram
revolucionados pelo advento de abordagens
moleculares, especialmente aquelas baseadas no gene
16S rRNA e na análise da sequência do genoma
completo. Comparações de dados de cultura e
abordagens moleculares sugerem que cerca de 30 a
50% da microbiota oral é atualmente classificada como
'não cultivável'.

DIFICULDADES DECORRENTES DOS

RECENTES AVANÇOS NA CLASSIFICAÇÃO
MICROBIANA
Embora avanços recentes tenham levado a melhorias na
classificação de bactérias orais, eles também apresentam
vários desafios ao interpretar ou comparar dados iniciais
quando uma nomenclatura anterior (e às vezes falha)
estava em uso. A classificação de muitos grupos de
bactérias orais mudou muito em um período de tempo
relativamente curto, com muitos novos gêneros e
espécies descritos. Uma espécie destacada em um
 mostram todos os 3 tipos de hemólise (alfa, beta e
gama). Os estreptococos podem ser distinguidos dos
estafilococos e micrococos por
por muitas décadas, mas, a partir de 1989, sua
descrição tornou-se mais limitada e os organismos
que foram previamente identificados como esta
espécie são agora conhecidos por serem
suficientemente diferentes para justificar um epíteto
de espécie distinto, por exemplo, S. gordonii.
Consequentemente, algumas cepas relatadas em
estudos anteriores como S. sanguis podem não ter as
mesmas propriedades que cepas identificadas mais
recentemente como S. sanguis sensu stricto. Além
disso, os nomes latinos originalmente dados a alguns
estreptococos orais mostraram-se errôneos, e assim S.
sanguis é agora denominado S. sanguinis. Por razões
semelhantes, S. parasanguis, S. rattus, S. cricetus e S.
crista foram renomeados como S. parasanguinis, S.
ratti, S. criceti e S. cristatus, respectivamente. Assim,
muito cuidado deve ser tomado ao interpretar
literatura científica mais antiga (e, de fato, não tão
antiga).
A taxonomia microbiana é uma área dinâmica
com espécies existentes sendo reclassificadas devido
à aplicação de testes mais rigorosos, juntamente com
o reconhecimento de espécies genuinamente recém-
descobertas de locais como bolsas periodontais e
canais radiculares infectados. A ênfase dada à
classificação e identificação da microbiota oral é
necessária porque sem subdivisão válida e
identificação precisa dos isolados, a associação
específica de espécies com doenças particulares
(etiologia microbiana) não pode ser determinada. Da
mesma forma, deve-se aceitar que novas mudanças
nos esquemas de classificação microbiana ocorrerão
no futuro, com a identificação de novos gêneros e
espécies.
As propriedades dos principais grupos de
microrganismos encontrados na boca (a microbiota
oral) serão agora descritas.

COCCI GRAM-POSITIVO
STREPTOCOCCUS
Estreptococos foram isolados de todos os locais da boca
e compreendem uma grande proporção da microbiota
oral cultivável residente. Os estreptococos orais são
geralmente alfa-hemolíticos (hemólise parcial) em ágar
sangue, e os primeiros trabalhadores os chamavam de
estreptococos viridans. No entanto, a hemólise não é
uma propriedade distinta e confiável desses
estreptococos, e muitas espécies orais contêm cepas que
 distinguir entre essas espécies, e alguns meios de ágar
seletivos comumente usados para o isolamento de
estreptococos mutans contêm
sem a enzima catalase. Os estreptococos orais são
agrupados em quatro grupos (verTabela 3.3) e agora
será descrito.

Grupo Mutans (estreptococos mutans)

Há grande interesse nos estreptococos mutantes devido
ao seu potencial papel na etiologia da cárie dentária.
Streptococcus mutans foi originalmente isolado de
dentes humanos cariados por Clarke em 1924 e pouco
depois, foi recuperado de um caso de endocardite
infecciosa (crescimento de bactérias em válvulas
cardíacas danificadas;Capítulo 11). Pouca atenção foi
dada a esta espécie até a década de 1960, quando foi
demonstrado que a cárie poderia ser induzida
experimentalmente e transmitida em animais
artificialmente infectados com cepas semelhantes a S.
mutans. O nome desta espécie deriva do fato de que as
células podem perder sua morfologia coco e muitas
vezes aparecem como bastonetes curtos ou como
cocobacilos. Nove sorotipos foram reconhecidos (a – h e
k), com base na especificidade sorológica de antígenos
de carboidratos localizados na parede celular, embora
alguns sorotipos sejam encontrados apenas em animais.
Trabalhos subsequentes mostraram que existiam
diferenças suficientes entre os agrupamentos desses
sorotipos para garantir a subdivisão em sete espécies
distintas.Tabela 3.3); estas espécies são descritas col-
selectivamente como estreptococos mutans. Os
estreptococos mutans são recuperados quase que
exclusivamente de superfícies duras e que não
descamam na boca, como dentes ou dentaduras, e
podem atuar como patógenos oportunistas, sendo
isolados de casos de endocardite infecciosa.Capítulo
11). Os estreptococos mutans são regularmente isolados
de placa dental em locais cariados, mas sua prevalência
é baixa em esmalte sadio.

O epíteto específico, S. mutans, está agora limitado a

isolados humanos anteriormente pertencentes aos
sorotipos c, e, f e k. Esta é a espécie mais comumente
isolada de estreptococos mutans, e estudos
epidemiológicos têm implicado S. mutans como um dos
principais organismos causadores na etiologia da cárie
de esmalte e superfície radicular (verCapítulo 6). A
próxima espécie mais comumente isolada do grupo de
estreptococos mutans é S. sobrinus (anteriormente, S.
mutans sorotipos d e g) e também está associada à cárie
dentária humana. Pouco se sabe sobre o papel de S.
sobrinus na doença porque alguns estudos não tentam
 3A Microbiota Oral Residente podem se comunicar com outros estreptococos mutans
pela liberação de moléculas de sinalização difusíveis
que podem induzir a competência genética (uma
bacitracina, que pode inibir o crescimento de S. capacidade de absorver DNA extracelular) e tolerância
sobrinus e S. criceti (anteriormente S. cricetus e ácida nas células vizinhas.
anteriormente denominado S. mutans sorotipo a).
Algumas pessoas abrigam mais de uma espécie de
estreptococos mutans na boca.
A estrutura antigênica dos estreptococos mutans
foi estudada em detalhes para estabelecer esquemas
de tipagem sorológica e para o desenvolvimento de
uma vacina prospectiva contra a cárie (verCapítulo
6). Os estreptococos mutans possuem antigénios de
hidratos de carbono da parede celular, ácido
lipoteicóico, lipoproteínas e proteínas da parede
celular ou associadas à parede celular. O antígeno I/II
(também denominado antígeno B, SpaP ou Pac) tem
gerado considerável interesse por ser
(a) uma adesina importante envolvida na adesão
inicial de S. mutans à superfície do dente (vercapítulo
5) e
(b) um possível componente de uma vacina de cárie
de subunidade (verCapítulo 6). Algumas cepas de S.
mutans carregam um gene de ligação ao colágeno, e
essas cepas foram isoladas de pacientes com micro-
hemorragias cerebrais.
Os estreptococos mutans produzem polissacarídeos
extracelulares solúveis e insolúveis (glucano, mutano e
frutano) a partir da sacarose que estão associados à
maturação da placa dentária.Capítulos 4e5) e
cariogenicidade (verCapítulo 6). Os glucanos e frutanos
são produzidos por glicosiltransferases e
frutosiltransferases, respectivamente. Mutan é um
glucano altamente insolúvel que é produzido apenas por
estreptococos mutans, enquanto o frutano é incomum
por ter uma estrutura semelhante à inulina. Esses
polímeros contribuem para a morfologia colonial
característica de estreptococos mutans quando crescem
em placas de ágar contendo sacarose.FIGO. 3.5, B). Os
estreptococos mutantes também podem sintetizar
polissacarídeos intracelulares quando há excesso de
açúcar, e estes podem atuar como reservas de
carboidratos e ser convertidos em ácidos durante os
períodos em que os carboidratos da dieta são limitados.
Os estreptococos mutantes podem eliminar os açúcares
da dieta com muita eficiência e convertê-los
rapidamente em produtos de fermentação ácida
(principalmente lactato). Significativamente, os
estreptococos mutantes são capazes de crescer e
sobreviver sob as condições ácidas que geram pela
indução de respostas específicas ao estresse molecular
(verCapítulo 4eFIGO. 2.4). Os estreptococos mutans
36 Microbiologia Oral de Marsh e Martin

UMA B

C D

FIGURA 3.5Exemplos de bactérias Gram-positivas encontradas na boca. (A) A morfologia celular de Streptococcus oralis
quando visto por microscopia eletrônica de varredura (MEV). (B) A morfologia da colônia de Streptococcus mutans crescendo
em ágar contendo sacarose. (C) coloração de Gram de Actinomyces israelii. (D) coloração de Gram de Eubacterium yurii. As
imagens coradas por Gram foram gentilmente cedidas por Owain Dafydd Thomas, Cardiff e Vale UHB. SEM foi gentilmente
cedido por Wendy Rowe, Cardiff University.
têm atividade de urease. Strep-tococcus salivarius
raramente é isolado de pacientes
Grupo salivarius
Este grupo compreende S. salivarius e S. vestibularis.
Cepas de S. salivarius são comumente isoladas da
maioria das áreas da boca, embora colonizem
preferencialmente as superfícies mucosas,
especialmente a língua. O Streptococcus salivarius
produz grandes quantidades de um frutano extracelular
incomum (polímero de frutose com uma estrutura de
levana) a partir da sacarose.Capítulo 4), bem como uma
levanase que pode degradar esse tipo de frutano. Este
levan dá origem a colônias mucóides
caracteristicamente grandes quando S. salivarius é
cultivado em ágar contendo sacarose. Streptococcus
salivarius também produz glucanos extracelulares
solúveis e insolúveis a partir da sacarose; algumas cepas
locais e não é considerado um patógeno oportunista
significativo.
Streptococcus vestibularisé isolado principalmente
da mucosa vestibular da boca humana. Essas
bactérias não produzem polissacarídeos
extracelulares a partir da sacarose, mas produzem
uma urease (que pode gerar amônia e, portanto,
aumentar o pH local) e peróxido de hidrogênio (que
pode contribuir para o sistema sialoperoxidase
[verCapítulo 2], e inibem o crescimento de bactérias
competidoras).

Grupo Anginoso
Espécies representativas deste grupo, Streptococcus
constellatus (subespécie constellatus, subespécie vibor-
gensis e subespécie pharyngis), S. intermedius e
 esse processo é facilitado em biofilmes como a placa
dentária, onde as bactérias estão em contato próximo.
S. anginosus(subespécie anginosus e subespécie
whileyi), são facilmente isoladas da placa dentária e das
superfícies mucosas e são causas importantes de
doenças graves e purulentas em humanos, incluindo
infecções maxilofaciais. Membros do grupo anginosus
são comumente encontrados em abscessos de órgãos
internos, especialmente do cérebro e fígado, e também
foram recuperados de casos de apendicite, peritonite,
meningite e endocardite. Streptococcus intermedius é
isolado principalmente de abscessos hepáticos e
cerebrais, enquanto S. anginosus e S. constellatus são
derivados de infecções purulentas de uma ampla
variedade de locais. O Streptococcus intermedius pode
produzir uma citotoxina, a intermedilisina, que também
pode interferir na função dos neutrófilos e permitir que a
célula escape das defesas do hospedeiro durante a
formação do abscesso.

Grupo Mitis
A aplicação de técnicas filogenéticas moleculares
(envolvendo a determinação de sequências do gene
16S rRNA) resolveu muitas das anomalias anteriores
na classificação deste grupo, resultando na
identificação de novas espécies.
Streptococcus sanguinise S. gordonii são
colonizadores precoces da superfície do dente, e
ambos produzem glucanos extracelulares solúveis e
insolúveis (verCapítulo 4) da sacarose que
contribuem para a formação de biofilme. Ambas as
espécies podem gerar amônia a partir da arginina. S.
sanguinis produz uma protease que pode clivar sIgA
(IgA protease), enquanto S. gordonii pode se ligar
salivarα-amilase permitindo que esses organismos se
decomponham amido. A ligação da amilase também
pode mascarar os antígenos bacterianos e permitir
que essas bactérias evitem o reconhecimento pelas
defesas do hospedeiro (mimetismo do hospedeiro).
Ambas as espécies são compostas por vários biótipos.
Duas das espécies estreptocócicas mais comuns na
boca são S. mitis e S. oralis. Cepas de S. oralis
produzem neuraminidase (uma enzima que remove o
ácido siálico das cadeias laterais de oligossacarídeos de
mucinas salivares) e uma protease IgA, mas não pode se
ligarα-amilase (FIGO. 3.5, UMA). Streptococcus mitis é
subdividido em dois biótipos, e estes apresentam
padrões de distribuição diferentes na boca. As cepas
dessas duas espécies são capazes de captar DNA
extracelular (ou seja, são geneticamente competentes), e
 3A Microbiota Oral Residente

proximidade uma da outra. Consequentemente, talvez

não seja surpreendente que haja considerável
heterogeneidade genética e fenotípica quando as
propriedades de um grande número de cepas de S. mitis
e S. oralis são comparadas. Algumas, mas não todas,
cepas dessas duas espécies são capazes de produzir
glucano extracelular a partir da sacarose.
Outros membros deste grupo incluem S. parasan-
guinis (anteriormente S. parasanguis) que foi isolado de
amostras clínicas (garganta, sangue, urina). As cepas
podem hidrolisar a arginina, mas não a uréia, e podem
se ligar à salivaα-amilase, mas não pode produzir
polissacarídeos extracelulares a partir da sacarose.
Streptococcus cristatus caracteriza-se pela presença de
tufos de fibrilas em sua superfície celular. Foram
descritas espécies mais recentes incluindo S.
oligofermentans, S. sinensis, S. australis, S. infantis, S.
peroris, S. tigurinus e S. dentisani. O significado de
algumas dessas espécies para a ecologia da boca ainda
não foi determinado, mas espécies como S. tigurinus e
S. sinensis podem atuar como patógenos oportunistas,
tendo sido isoladas de casos de endocardite infecciosa.
Os membros do grupo mitis são patógenos
oportunistas, particularmente na endocardite
infecciosa (verCapítulo 11). Streptococcus
pneumoniae pode ser isolado da nasofaringe e é um
patógeno oportunista significativo, que pode adquirir
e transferir genes de resistência a antibióticos entre
outros membros do grupo mitis.

OUTROS COCCI GRAM-POSITIVOS

As cepas que foram originalmente descritas como
sendo estreptococos nutricionalmente variantes
(NVS) foram isoladas da boca quando meios de
isolamento apropriados são usados. Estes foram
reclassificados como Granu-licatella adiacens
(anteriormente S. adiacens e Abiotrophia adiacens) e
Abiotrophia defectiva (anteriormente S. defecti-vus).
Granulicatella adiacens é comum na boca e é um
colonizador precoce da superfície do dente, embora
seja negligenciado na maioria dos estudos devido à
necessidade de meios de isolamento serem
suplementados com fatores de crescimento como
cisteína ou piridoxal. Essas bactérias geralmente
exibem satélites, vistos como um padrão de
crescimento aprimorado em torno de colônias de
certas outras bactérias que produzem esses cofatores.
Outros cocos Gram-positivos incluem espécies de
Gemella (G. haemolysans e G. morbil-lorum),
38 Microbiologia Oral de Marsh e Martin descoberta enfatiza as principais diferenças que devem
existir na ecologia desses habitats particulares.
Cocos gram-positivos anaeróbios são comumente
recuperados de biofilmes dentários, especialmente de
dentina cariada, câmaras pulpares e canais radiculares
infectados.Capítulo 6), formas avançadas de doença
periodontal (marCapítulo 6) e de abscessos dentários
(verCapítulo 7). Essas bactérias também são
recuperadas de abscessos profundos em outras partes do
corpo e geralmente são isolados em cultura mista
(infecções polimicrobianas). A taxonomia deste grupo
de organismos foi esclarecida. Originalmente, as cepas
foram colocadas no gênero Peptostreptococcus, e as
espécies representativas incluíram P. micros, P. magnus
e P. anaerobius. No entanto, P. micros e P. magnus
foram movidos para novos gêneros e agora são
chamados de Parvimonas micra e Finegoldia magna,
respectivamente, enquanto cepas orais de P. anaero-bius
são agora designadas Peptostreptococcus stomatis.
Os enterococos foram recuperados em baixo
número de vários sítios orais quando meios seletivos
apropriados foram usados; a espécie mais
frequentemente isolada é Enterococcus faecalis. Os
enterococos podem ser isolados da boca de pacientes
imunocomprometidos e clinicamente comprometidos,
e foram isolados de bolsas periodontais que não
respondem à terapia e de canais radiculares
infectados. Os estreptococos do grupo A de
Lancefield (S. pyogenes) geralmente não são isolados
da boca de indivíduos saudáveis, embora muitas
vezes possam ser cultivados a partir da saliva de
pessoas que sofrem de dores de garganta
estreptocócicas e podem estar associados a uma
forma particularmente aguda de gengivite.
marCapítulo 6).
Estafilococos e micrococos também não são
comumente isolados em grande número da cavidade
oral, embora os primeiros sejam encontrados na placa da
prótese, bem como em pacientes imunocomprometidos
e indivíduos que sofrem de uma variedade de infecções
orais (verCapítulos 7e11). Essas bactérias geralmente
não são considerados membros da microbiota oral
residente, mas podem estar presentes de forma
transitória, e foram isolados de alguns locais com cárie
na superfície radicular e de algumas bolsas periodontais
que não respondem à terapia convencional. Isso
contrasta fortemente com outras superfícies do corpo
humano próximas à boca, como a superfície da pele e as
membranas mucosas do nariz, onde estão entre os
componentes predominantes da ota microbiana. Esta
 espécie intimamente relacionada encontrados em
animais.
Actinomyces israeliipode atuar como um patógeno
Microrganismos das superfícies mucosas da pele e
oportunista causando uma condição inflamatória
nariz devem ser passados consistentemente para a
crônica
boca e, no entanto, esses organismos normalmente
são incapazes de colonizar ou competir contra a
microbiota oral residente.

HASTES E FILAMENTOS GRAM-

POSITIVOS
ACTINOMYCES
ActinomycesAs espécies formam a maior parte da
microbiota da placa dentária, particularmente em locais
proximais e na fenda gengival. Essas bactérias têm sido
associadas a cáries na superfície radicular e seus números
aumentam durante a gengivite (verCapítulo 6). As células
das espécies de Actinomyces aparecem como bastonetes
curtos, mas geralmente têm forma pleomórfica; algumas
células mostram uma verdadeira morfologia ramificada,
enquanto as de A. israelii podem às vezes parecer
filamentosas (FIGO. 3.5, C). Algumas espécies
(particularmente A. naeslundii) são fortemente fimbriadas
(estruturas de superfície celular envolvidas na fixação),
enquanto outras têm superfícies relativamente lisas.
Algumas espécies recentemente descritas foram
identificadas em uma variedade de espécimes clínicos (A.
radingae, A. neuii, A. johnsonii, A. europaeus, A.
graevenitzii, A. funkei, A. den-talis e A. turicensis),
incluindo endocardite infecciosa e abscessos, mas a origem
e o habitat dessas espécies ainda não são totalmente
compreendidos. Actinomyces radici-dentis foi isolado de
infecções endodônticas.

O bacilo Gram-positivo mais comum na placa é o

Actinomyces naeslundii, que foi originalmente
subdividido em duas genoespécies (A. naeslundii geno-
espécie 1 e genoespécie 2). A genoespécie 2 de
Actinomyces naeslundii é agora classificada como A.
oris. Algumas cepas de A. naeslundii produzem um lodo
extracelular e um frutano a partir da sacarose com uma
estrutura semelhante ao levan, bem como enzimas que
podem hidrolisar frutanos. Algumas cepas também
produzem urease (esta enzima pode ter um papel na
modulação do pH da placa) e neuraminidase (pode
modificar receptores na película adquirida do esmalte).
Dois tipos de fímbrias podem ser encontrados na
superfície das células de A. naeslundii. Cada tipo tem
uma função específica e está implicado no contato
célula a célula (coagregação) ou na interação célula-
superfície.Capítulo 5). Actinomyces viscosus é uma
 recuperados de canais radiculares infectados. Outros
novos gêneros incluem Cryptobacterium (por exemplo,
C. curtum),
chamada actinomicose (verFIGO. 3.5, CeCapítulo 7).
A doença geralmente está associada à região
orofacial, mas pode se disseminar para causar
infecções profundas em outros locais do corpo, como
o abdômen. As cepas de A. israelii
caracteristicamente formam grânulos e estes podem
contribuir para a capacidade desses organismos de se
disseminarem pelo corpo, proporcionando proteção
física do ambiente, das defesas do hospedeiro e do
tratamento com antibióticos. Actinomyces israelii
também foi encontrado em esfregaços cervicais de
mulheres usando dispositivos contraceptivos
intrauterinos.
As cepas originalmente classificadas como A.
israelii sorotipo II foram agora designadas como uma
espécie separada, A. gerencseriae, que é um
componente comum, mas menor, da microbiota da
fenda gengival saudável, e também foi isolada de
abscessos. As cepas de A. gerencseriae também
podem formar 'grânulos' protetores (ver comentários
anteriores sobre A. israelii). Actinomyces georgiae é
anaeróbio facultativo e também é encontrado
ocasionalmente na fenda gengival saudável. Outras
espécies incluem A. odontolyticus e A. meyeri; o
primeiro tem sido associado a lesões precoces de
cárie, enquanto o último foi encontrado em baixo
número na fenda gengival na saúde e na doença, e de
abscessos cerebrais.

EUBACTÉRIAE GÊNEROS RELACIONADOS

Até recentemente, Eubacterium era um gênero mal
definido que continha uma variedade de bactérias
obrigatoriamente anaeróbicas e filamentosas que muitas
vezes parecem Gram-variáveis quando coradas.FIGO.
3.5, D). Muitas cepas são asac-carolíticas e, portanto,
podem parecer não reativas em esquemas de
classificação e também podem ser difíceis de cultivar.
Quando recuperadas e identificadas, essas espécies
asacarolíticas podem compreender mais de 50% da
microbiota anaeróbia das bolsas periodontais e são
comuns em abscessos dentoalveolares. Abordagens
taxonômicas moleculares identificaram muitos novos
gêneros bacterianos.FIGO. 3.6), e as eubactérias orais
estão agora restritas a Eubacterium saburreum, E. yurii,
E. infirmum, E. sulci, E. safenum, E. minutum, E.
nodatum e E. brachy. Novos gêneros incluem
Mogibacterium (por exemplo, M. timidum, M. vescum e
M. pumilum), Pseudoramibacter (por exemplo, P.
alactolyticus) e Slackia (por exemplo, S. exigua), todos
 3 A Microbiota Oral Residente 39 Propionibacterium(por exemplo, P. acnes, P. propionicus)
são bactérias obrigatoriamente anaeróbicas que são
encontradas na placa dental. Propionibacterium propionicus
foi isolado de casos de actinomicose e canaliculite lacrimal
Pseudoramibacter (infecção do ducto lacrimal). Corynebacte-rium matruchotii
e Rothia dentocariosa também são
Bulleidia Slackia

Solobactéria Eubactéria Mogibacterium

Criptobactéria Shuttleworthia

FIGURA 3.6Mudanças recentes na nomenclatura de bactérias

originalmente agrupadas como espécies de Eubacterium.

Shuttleworthia(por exemplo, S. satelles),

Solobacterium (por exemplo, S. moorei) e Bulleidia
(por exemplo, B. extructa). Muitas dessas bactérias
também foram encontradas em bolsas periodontais
e/ou abscessos, mas o significado clínico completo
desses organismos ainda não foi determinado.

LACTOBACILLUS
Os lactobacilos são comumente isolados da cavidade
oral, especialmente da placa dentária e da língua,
embora geralmente representem menos de 1% da
microbiota cultivável total na boca saudável. Essas
bactérias são altamente acidogênicas e tolerantes a
ácidos, e suas proporções e prevalência aumentam em
lesões de cárie avançada do esmalte e da superfície
radicular. Várias espécies homofermentativas e
heterofermentativas foram identificadas, produzindo
lactato, ou lactato e acetato, respectivamente, a partir da
glicose. As espécies mais comuns são L. casei, L.
rhamnosus, L. fermentum, L. acidophilus, L. salivarius,
L. plantarum, L. paracasei, L. gasseri e L. oris, mas a
maioria dos estudos ainda as agrupa apenas como '
lactobacilos 'ou espécies de Lactobacillus. Testes
simples com meios seletivos foram projetados para
estimar o número de lactobacilos na saliva dos pacientes
para dar uma indicação do potencial cariogênico de uma
boca. Alguns lactobacilos estão sendo considerados
como possíveis cepas probióticas orais (verCapítulo 6).

OUTROS GÊNEROS
40 Microbiologia Oral de Marsh e Martin propriedades ajudariam sua sobrevivência no ambiente
periodontal.
regularmente isolados da placa dentária.
Corynebacterium matruchotii tem uma morfologia
celular incomum com um filamento longo crescendo a
partir de uma célula curta e gordurosa em forma de
bastonete, ganhando assim sua descrição de célula
'chicote'. A Rothia mucilaginosa produz um muco
extracelular e é isolada quase exclusivamente da língua.
As espécies de Rothia podem ser isoladas em ocasiões
muito raras de casos de endocardite infecciosa.
As bifidobactérias sofreram várias mudanças na
nomenclatura; bifidobactérias orais incluem
Bifidobacterium dentium e B. longum. Duas antigas
espécies de bifidobactérias foram reclassificadas como
Scardovia inopinata e Parascardovia denticolens, mas
seu papel na boca ainda não foi determinado. Outros
táxons relacionados incluem Alloscardovia omnicolens
e Parascardovia denticolens (que foi detectado em cárie
oclusal). Muitas bifidobactérias são acidogênicas e
tolerantes a ácidos, o que apóia as propostas de que elas
podem desempenhar um papel na cárie dentária.
Espécies não orais de bifi-dobactérias podem ser
encontradas na placa de prótese de pacientes com
estomatite por prótese, incluindo B. breve, mas B.
dentium (embora presente na placa dentária) não pode
ser isolada do palato em uma boca edêntula saudável.

Algumas bactérias anteriormente classificadas como

Actinomyces foram colocadas nos novos gêneros,
Arcanobacterium (por exemplo, A. bernardiae) e
Actinobaculum. Bactérias originalmente descritas como
'lactobacilos anaeróbicos' foram colocadas em novos
gêneros como Olsenella, por exemplo, Olsenella uli, que
foi isolada de bolsas periodontais, e espécies de
Atopobium (por exemplo, Atopobium rimae e A.
parvulum).
Filifactor alocisé uma bactéria Gram-positiva em
forma de bastonete assacarolítica e obrigatoriamente
anaeróbica, considerada um patógeno periodontal
potencialmente importante. Também foi encontrado em
infecções endodônticas, periimplantite e formas
agressivas de doença periodontal. Assim como outros
patógenos periodontais putativos, F. alocis é proteolítico
e também pode utilizar arginina, gerando ornitina e
amônia (contribuindo assim para o aumento do pH
observado na bolsa periodontal inflamada); Outros
aminoácidos usados incluem lisina e cisteína. Filifactor
alocis também é mais tolerante ao estresse oxidativo do
que os patógenos periodontais Gram-negativos, e pode
ser capaz de modular a função dos neutrófilos; ambas as
 importante na ecologia da placa dentária e na etiologia
da cárie dentária. O ácido lático é o ácido mais forte
produzido
PONTOS CHAVE
Bactérias Gram-positivas são comumente distribuídas
na maioria das superfícies da boca. Os gêneros
predominantes são Streptococcus e Actinomyces;
espécies representativas são encontradas em locais
saudáveis, embora muitas também possam atuar como
patógenos oportunistas. Por exemplo, estreptococos
mutans estão implicados em cáries dentárias, enquanto
o grupo anginosus e o grupo mitis de estreptococos são
comumente recuperados de abscessos e endocardite
infecciosa, respectivamente; Actinomyces israelii está
implicado na actinomicose.

COCCI GRAM-NEGATIVO
Neisseriasão cocos Gram-negativos aeróbicos ou
facultativamente anaeróbios que são isolados em baixo
número da maioria dos locais da cavidade oral. Essas
bactérias estão entre os primeiros colonizadores dos
dentes e fazem uma importante contribuição para a
formação da placa, consumindo oxigênio e criando
condições que permitem o crescimento de anaeróbios
obrigatórios. Algumas espécies de Neisseria podem
produzir polissacarídeos extracelulares, e algumas cepas
de estreptococos podem metabolizar esses polímeros,
efetivamente utilizando-os como reservas externas de
carboidratos. A taxonomia deste grupo permanece
confusa, mas as espécies comuns incluem N. subflava,
N. mucosa, N. flavescens e N. pharyngis. Moraxella
catarrhalis é um comensal do trato respiratório superior,
mas também é um patógeno oportunista bem
estabelecido; muitas cepas produzemβ-lactamase que
pode levar a complicações durante o tratamento com
antibióticos.
Veillonellasão cocos Gram-negativos pequenos,
estritamente anaeróbios (FIGO. 3.7, UMA); várias
espécies são reconhecidas: Veillonella parvula, V.
dispar, V. atypica, V. denticariosi (mais comum em
dentina cariada), V. tobetsuensis (isolada da língua) e V.
rogosae (mais comum em indivíduos livres de cárie ).
As espécies de Veillonella foram isoladas da maioria
das superfícies da cavidade oral, embora ocorram em
maior número na placa dentária. As espécies de
Veillonella carecem de glucoquinase e frutoquinase e,
portanto, são incapazes de metabolizar carboidratos. Em
vez disso, eles utilizam vários metabólitos
intermediários, em particular o lactato, como fontes de
energia e, consequentemente, desempenham um papel
 3A Microbiota Oral Residente

UMA B

C D

FIGURA 3.7Exemplos de bactérias Gram-negativas encontradas na boca. (A) coloração de Gram de Veillonella parvula, (B)
Porphyromonas gingivalis, quando visto por MEV. (C) coloração de Gram de Porphyromonas gingivalis. (D) Coloração de Gram de
Prevotella nigrescens. (E) Coloração de Gram de Fusobacterium nucleatum. As imagens coradas por Gram foram gentilmente cedidas
por Owain Dafydd Thomas, Cardiff e Vale UHB. SEM foi gentilmente cedido por Barry Dowsett, Porton, e a cor falsa aplicada por
Wendy Rowe, Universidade de Cardiff.
42 Microbiologia Oral de Marsh e Martin osteomielite e doença periodontal. Recentemente, foi
reconhecido um clone altamente virulento de A.
actinomycetemcomitans, cuja distribuição é restrita a
em quantidade pelas bactérias orais e está implicado determinados adolescentes com alto risco de
na dissolução do esmalte (cárie dentária;Capítulo 6).
Veillonella pode converter ácido lático em ácidos
mais fracos (predominantemente ácido propiônico) e,
assim, melhorar o dano potencial de bactérias
sacarolíticas, como estreptococos. Outros cocos
Gram-negativos incluem espécies de Anaeroglobus
geminatus e Megasphaera (por exemplo, M.
micronuciformis).

RAÍZES GRAM-NEGATIVAS
GÊNEROS FACULTATIVOS
ANAERÓBICOS E
CAPNOFÍLICOS
A hemofilia requer meios de isolamento que
contenham os fatores de crescimento essenciais:
hemina (fator X) e/ou nicotinamida adenina
dinucleotídeo, NAD (fator V). A única espécie de
Haemophilus comumente encontrada na boca é H.
parainfluenzae (exigindo fator V); H.
parahaemolyticus é isolado de infecções de tecidos
moles da cavidade oral, mas provavelmente não é um
membro regular da microbiota oral.
Organismos anteriormente classificados como
haemophili foram colocados no gênero Aggregatibacter.
Exemplos incluem Aggregatibacter aphrophilus, que
pode causar abscessos cerebrais e endocardite
infecciosa, A. segnis, que só ocasionalmente é isolado
de infecções, e A. actinomycetemcomitans
(anteriormente classificado como Actinobacillus
actinomycetemcomitans), e que está implicado em uma
forma particularmente agressiva de perio- doença
odontológica em adolescentes. As cepas são
capnofílicas, muitas vezes exigindo 5% a 10% de
CO2para o crescimento. As células têm camadas
superficiais contendo moléculas que estimulam a
reabsorção óssea, bem como polissacarídeos que
determinam o sorotipo. Aggregatibacter
actinomycetemcomitans produz uma série de fatores de
virulência, incluindo uma poderosa leucotoxina,
colagenase, fatores imunossupressores e proteases
capazes de clivar a imunoglobulina G (IgG); além disso,
as cepas podem ser invasivas para células epiteliais.
Aggregatibacter actinomycetemcomitans também é um
patógeno oportunista, sendo isolado de casos de
endocardite, abscessos cerebrais e subcutâneos,
 para esses organismos e é obtido no hospedeiro a partir
da
periodontite, a maioria das quais geralmente tem
origem no noroeste da África.
Eikenella corrodensfoi isolado de uma variedade de
infecções orais, incluindo endocardite e abscessos, e tem
sido implicado na doença periodontal. Cap-nocytophaga
são CO2bastonetes Gram-negativos dependentes que
exibem uma motilidade deslizante. Essas bactérias são
encontradas na placa subgengival e aumentam em
proporções na gengivite. Várias espécies foram
reconhecidas, incluindo Capnocytophaga gingivalis, C.
ochracea, C. sputigena, C. granulosa, C. haemolytica e
C. leadbet-teri. Capnocytophaga são patógenos
oportunistas e foram isolados de várias infecções em
pacientes imunocomprometidos; algumas cepas
produzem uma protease IgA1. Kingella (por exemplo,
K. oralis) é um cocobacilo que foi isolado de vários
sítios orais. A bactéria deslizante Simonsiella foi isolada
de superfícies epiteliais da cavidade oral de humanos e
de uma variedade de animais. Esses organismos têm
uma morfologia celular única, sendo compostos de
filamentos multicelulares extraordinariamente grandes
em grupos ou múltiplos de oito células. Houve relatos
de Helicobacter pylori na placa dentária; esta espécie é
microaerofílica e geralmente é isolada do estômago
onde está associada a gastrites, úlceras pépticas e câncer
gástrico. Pode estar presente na boca transitoriamente
após o refluxo do estômago.

GÊNEROS OBRIGATÓRIOS ANAERÓBICOS

Os bastonetes Gram-negativos obrigatoriamente
anaeróbios compreendem uma grande proporção da
microbiota da placa dentária e da língua. Muitas
espécies são difíceis de cultivar ou são descritas
como não cultiváveis; consequentemente, abordagens
moleculares têm sido necessárias para classificar e
identificar muitos desses organismos.
A maioria dos anaeróbios obrigatórios orais
cultiváveis pertence aos gêneros Prevotella e
Porphyromonas.FIGO. 3.7, B e D). Alguns organismos
desses gêneros produzem colônias com pigmento
marrom ou preto característico quando cultivados em
ágar sangue.FIGO. 3.8). O pigmento atua como um
mecanismo de defesa para proteger as células dos
efeitos tóxicos do oxigênio. Esses organismos são
referidos coletivamente como anaeróbios pigmentados
de preto. O heme é um fator de crescimento essencial

FIGURA 3.8Pigmentação de colônias de Porphyromonas
gingivalis em ágar sangue. A imagem foi gentilmente cedida
por Owain Dafydd Thomas, Cardiff e Vale UHB.
catabolismo ou moléculas contendo heme, como a
hemoglobina.
Prevotellaespécies são moderadamente sacarolíticas (ou
seja, capazes de fermentar carboidratos); espécies que
produzem colônias de pigmentação incluem P. intermedia,
P. nigrescens, P. melaninogenica, P. loescheii, P. pallens, P.
fusca, P. scopos e algumas cepas de P. denticola. Prevotella
intermedia e P. nigrescens (verFIGO. 3.7, D) são difíceis de
distinguir usando testes fisiológicos simples, mas é
importante ressaltar que P. intermedia está associada à
doença periodontal, enquanto P. nigrescens é isolado com
mais frequência e em maior número de locais saudáveis.
Existe um grande número de espécies orais não
pigmentadas, incluindo P. buccae, P. buccalis, P. oralis, P.
oris, P. oulora, P. veroralis, P. dentalis, P. enoeca, P.
bergensis, P. multisaccharivorax, P. marshii, P. baroniae, P.
shahii, P. multiformis, P. salivae, P. micans, P. maculosa,
P. histicola e P. zoogleoformans. A maioria dessas espécies
pode, em algumas ocasiões, ser isolada da placa dentária,
particularmente de sítios subgengivais. Algumas espécies
estão associadas a doenças e aumentam em número e
proporções durante a doença periodontal e também foram
recuperadas de abscessos (verCapítulos 6e7). Um gênero
recentemente descrito, mas relacionado, é Alloprevotella, e
exemplos incluem Alloprevo-tella rava e A. tannerae.
3A Microbiota Oral Residente
Porphyromonasespécies são principalmente
assacarolíticas e usam proteínas e peptídeos para o
crescimento. Porphyrom-onas gingivalis (verFiguras
3.7, B, 3,7, C e3.8) é isolado principalmente de sítios
subgengivais, especialmente em lesões periodontais
avançadas, embora também tenha sido recuperado da
língua e amígdalas. Seis sorotipos são reconhecidos com
base em polissacarídeos capsulares (antígenos K).
Porphyromonas gingivalis é altamente virulenta em
estudos de infecção experimental em animais e produz
uma série de fatores de virulência putativos associados à
destruição tecidual e subversão das defesas do
hospedeiro. Estes incluem proteases com especificidade
para ligações arginina-x e ligações lisina-x (arg-
gingipains e lys-gingipains, respectivamente), que
podem degradar moléculas como imunoglobulinas,
complemento e proteínas e glicoproteínas sequestrantes
de ferro e heme, bem como moléculas do hospedeiro
que regulam a resposta inflamatória do hospedeiro.
Porphyrom-onas gingivalis também produz uma
hemolisina, enzimas que degradam o colágeno,Capítulo
6). Porphyromonas gingivalis tem numerosas fímbrias
em sua superfície celular que medeiam a aderência às
células epiteliais orais e às superfícies dos dentes
revestidas de saliva, e produz grandes quantidades de
vesículas superficiais que podem ser liberadas para o
meio ambiente.FIGO. 3.7, B). Porphyromonas
gingivalis também está ligado com doenças sistêmicas,
incluindo doença cardiovascular (onde foi encontrada na
placa aterosclerótica) e artrite reumatóide (possui
exclusivamente uma peptidilarginina deiminase que
pode citrulinar proteínas do hospedeiro, que podem
gerar autoanticorpos) (verCapítulo 11). Outras espécies
incluem Porphyrom-onas endodontalis, que foi
recuperada principalmente de canais radiculares
infectados, e Porphyromonas catoniae, que é encontrada
principalmente em locais saudáveis ou em bolsas
periodontais rasas.
Outro grande grupo de bactérias Gram-negativas
obrigatoriamente anaeróbicas pertence ao gênero
Fusobacterium. As células formam caracteristicamente
filamentos longos (5 a 25µm de comprimento; FIGO.
3.7, E) ou bastonetes pleomórficos, e produzem ácido
butírico como seu principal produto final do
metabolismo. A espécie mais comum é F. nucleatum, e
várias subespécies foram reconhecidas, incluindo subsp.
nucleatum, subsp. polymorphum e subsp. vicentii. Essas
subespécies podem ter diferentes associações com saúde
e doença; F. nucleatum subsp.
44 Microbiologia Oral de Marsh e Martin
polimorfoé comumente isolado da fenda gengival
normal, enquanto a subespécie nucleatum é recuperada
principalmente de bolsas periodontais. Outras fuso-
bactérias orais incluem F. periodonticum, que é isolado
de locais que exibem doença periodontal. Fusobactérias
são frequentemente descritas como assacarolíticas,
embora possam absorver carboidratos para a síntese de
compostos de armazenamento intracelular compostos de
poliglicose. Fusobactérias catabolizam aminoácidos
como aspartato, glutamato, histidina e lisina para
fornecer energia. Esses aminoácidos podem ser obtidos
a partir do metabolismo de peptídeos se os aminoácidos
livres não estiverem disponíveis. Fusobacterium
nucleatum é capaz de remover enxofre da cisteína e
metionina para produzir amônia, butirato, sulfeto de
hidrogênio e metil mercaptano, e esses compostos
contribuem para o mau odor associado à
halitose.Capítulo 5). Fusobacterium nucleatum é
comumente isolado de infecções extrabucais, o que pode
estar relacionado à sua capacidade de aderir e invadir
células epiteliais e endoteliais mediadas por uma
adesina, FadA. Fusobacterium nucleatum está associado
ao câncer colorretal; FadA está envolvido na ligação às
células epiteliais intestinais, permitindo modular as vias
de sinalização celular, resultando no aumento da
expressão de oncogenes (verCapítulo 11).
Outros gêneros bacterianos anaeróbios e As espiroquetas são numerosas na placa subgengival
microaeróbicos Gram-negativos orais incluem
Leptotrichia (espécies incluem L. buccalis, L. hofstadii,
L. shahii e L. wadei), Wolinella (por exemplo, W.
succinogenes) e Campylobacter (as células têm uma
morfologia espiral ), e as espécies incluem
Campylobacter concisus, C. gracilis, C. showae, C.
sputo-rum, C. curvus e C. rectus (as duas últimas
espécies foram previamente classificadas como
Wolinella curva e W. recta, respectivamente).
Campylobacter concisus é isolado em maiores
proporções de bolsas periodontais relativamente rasas e
sítios subgengivais saudáveis, enquanto C. rectus é
encontrado mais comumente em sítios com doença
periodontal ativa, especialmente em pacientes
imunocomprometidos, e algumas cepas produzem uma
citotoxina. Selenomonas sputigena, S. noxia, S.
flueggei, S. infelix, S. dianae e S.
Algumas das espécies descritas anteriormente têm
flagelos e são móveis. As espécies Wolinella e
Campylo-bacterianas têm um único flagelo, enquanto as
espécies Seleno-monas são curvadas a bacilos
helicoidais com um tufo de flagelos. Outro anaeróbio
oral gram-negativo helicoidal ou curvo é o Centipeda
periodontii que possui inúmeros flagelos espiralando ao
redor da célula. Outros gêneros incluem Johnsonii (J.
ignava) e Cantonella (C. morbi), que estão associados à
gengivite e periodontite, respectivamente; Dialister (D.
pneumosintes e D. invisus, que podem ser encontrados
em infecções endodônticas e periodontites);
Flavobacterium e Tannerella for-sythia (comumente
isolados de doença periodontal avançada).
Bactérias redutoras de sulfato (por exemplo,
aquelas pertencentes a gêneros como Desulfobacter,
Desulfobulbus, Desul-fomicrobium e Desulfovibrio)
foram isoladas ocasionalmente da placa dentária e
das bolsas periodontais. Eles obtêm energia oxidando
ácidos orgânicos ou hidrogênio, enquanto reduzem o
sulfato a sulfeto de hidrogênio, o que pode contribuir
para o mau odor bucal. Essas bactérias são
extremamente difíceis de crescer em laboratório por
causa de sua sensibilidade a pequenas quantidades de
oxigênio e sua necessidade de um potencial redox
muito baixo para crescimento.
e podem ser facilmente detectadas usando microscopia
de campo escuro ou eletrônica. Vários tipos
morfológicos podem ser distinguidos de acordo com o
tamanho da célula e o arranjo dos flagelos
periplasmáticos (endoflagelos). Algumas espiroquetas
orais aderem às superfícies em uma orientação polar, e
esse tipo de adesão resulta em alterações grosseiras na
morfologia da célula hospedeira, facilitando a
penetração nos tecidos subjacentes. O número de
espiroquetas aumenta em doenças periodontais
avançadas e é diagnóstico para periodontite ulcerativa
necrosante (verCapítulo 6). No entanto, se causam
doenças ou apenas aumentar após a infecção ainda está
para ser resolvido. As espiroquetas orais pertencem ao
gênero Treponema, e um grande número de espécies foi
reconhecido, incluindo T. denticola, T. socranskii
(subespécie socranskii; subespécie buccale; subespécie
paredis), T. maltophilum, T. amylovorum, T. parvum ,
T. pectinorumum, T. putidum, T. lecitinolyticum, T.
medium e T. vincentii (verFIGO. 3.3, UMA). Essas
espécies foram isoladas de sítios com inflamação
periodontal e infecções endodônticas. Pouco se sabe
sobre o
 taxonomia de bactérias Gram-negativas foi transformada
por técnicas moleculares como o sequenciamento do
gene 16S rRNA.
fisiologia destes organismos devido às dificuldades
associadas ao seu cultivo laboratorial e, como tal, são
detectados principalmente por meio de técnicas
moleculares. No entanto, T. denticola foi cultivada
usando métodos apropriados e possui uma protease
específica da arginina ('semelhante à tripsina') e
também pode degradar o colágeno e a gelatina.
Como afirmado anteriormente neste capítulo, apenas
cerca de 50 a 70% dos microrganismos que podem ser
visualizados na boca por microscopia podem ser
cultivados atualmente. Isso não se deve apenas à
ignorância das necessidades de crescimento desses
organismos, mas também porque algumas bactérias
evoluíram para crescer em parceria (física e
nutricionalmente) com outros micróbios. Novas famílias
de bactérias não cultiváveis estão sendo identificadas
por abordagens moleculares, por exemplo, Bacteroidales
e Lachnospiraceae, enquanto algumas das bactérias não
cultiváveis mostram similaridade genética suficiente
com espécies cultiváveis conhecidas que podem ser
colocadas dentro de um gênero, por exemplo,
espiroquetas não cultiváveis para o gênero, Treponema
(verFIGO. 3.3, UMA). Outros representam novas
linhagens evolutivas, que são encontradas em vários
habitats e são designadas simplesmente pelos filos em
que estão agrupados. A maioria dos exemplos orais
pertencem ao filo TM7 e podem ser detectados na placa
subgengival por hibridização fluorescente in situ
(FISH), que envolve a combinação de sondas
oligonucleotídicas (acopladas a uma etiqueta
fluorescente) com técnicas de microscopia
especializadas (epifluorescência ou microscopia
confocal de varredura a laser) ( marFIGO. 3.3, B).
Alguns organismos detectados por abordagens
moleculares em

PONTOS CHAVE
As bactérias orais Gram-negativas são diversas e
incluem espécies que são anaeróbias facultativas e
obrigatórias, bem como espécies que são
microaerofílicas e capnofílicas. Veillonella são cocos
gram-negativos anaeróbios que desempenham um papel
importante na placa dentária, convertendo o lactato em
ácidos mais fracos. A maioria dos bacilos Gram-
negativos anaeróbios é encontrada na placa dentária,
possui metabolismo assacarolítico e depende de
proteínas e glicoproteínas para sua nutrição; alguns
gêneros comuns incluem Prevotella e Fusobacterium. A
diversidade de espécies aumenta na doença periodontal,
e muitas delas não são cultiváveis no momento. A
 3A Microbiota Oral Residente avançada. Os principais fungos perfeitos causadores de
infecção oral são Aspergillus, Geotrichum e

amostras de placa subgengival, lesões periodontais e

infecções endodônticas, pertencem a um novo filo
candidato Synergistetes. Avanços estão sendo feitos
em sua classificação; exemplos desses organismos
incluem Jonqueteella anthropic, Pyramidobacter
piscolens e Fretibacterium fastidiosum. Aumentar
nossa compreensão do papel dessas bactérias não
cultiváveis na saúde e na doença é agora um objetivo
importante para microbiologistas orais.

MICOPLASMA
As bactérias pertencentes ao gênero Mycoplasma são
caracterizadas principalmente pela ausência de
parede celular, o que as torna Gram-negativas quando
coradas. Devido ao seu pequeno tamanho (<1µm; são
as menores de todas as células de crescimento livre),
são difíceis de visualizar por microscopia de luz
normal.
A análise das sequências do genoma de
Mycoplasma (16S rDNA) sugere que eles estão mais
intimamente relacionados aos subgrupos Bacillus –
Lactobacillus e Streptococcus de bactérias Gram-
positivas. Os micoplasmas são notoriamente de
crescimento lento e requerem meios de cultura
microbiológicos especializados enriquecidos em
proteínas e com uma atmosfera elevada de dióxido de
carbono para o crescimento. Os micoplasmas são
pleomórficos e vários formatos de células podem
ocorrer dependendo do ambiente.
Os micoplasmas são mais prevalentes nas superfícies
mucosas. Taxas de transporte oral entre 6% e 32%
foram relatadas em humanos com várias espécies
recuperadas da saliva (Mycoplasma salivarium, M.
pneumoniae, M. hominis), da mucosa oral (M. buccale,
M. orale, M. pneumoniae) e placa dentária (M.
pneumoniae, M. buccale, M. orale). Mycoplasma orale e
M. salivarium também foram isolados de glândulas
salivares onde foi postulado que desempenham um
papel na hipofunção da glândula salivar.

FUNGOS
Os fungos geralmente constituem uma proporção
relativamente pequena da microbiota oral. Os fungos
perfeitos (fungos que se dividem por reprodução
sexuada) raramente são isolados da cavidade oral, mas
ocasionalmente são encontrados infectando pacientes
com síndrome da imunodeficiência adquirida (AIDS)
46 Microbiologia Oral de Marsh e Martin Vários vírus podem ser detectados na boca usando
técnicas moleculares (verCapítulo 9). É agora
Mucorespécies. As espécies perfeitas de levedura
observadas em indivíduos saudáveis podem ser membros
transitórios e não residentes da microbiota oral. Em
contraste, as leveduras imperfeitas, por exemplo, espécies
de Candida (que se dividem por reprodução assexuada), são
comuns na boca.Capítulo 8). Candida albicans é de longe o
mais comum espécies, mas um grande número de outras
espécies de leveduras foram isolados, incluindo C. glabrata,
C. tropicalis, C. krusei, C. parapsilosis e C. guilliermondii,
bem como espécies de Rhodotorula e Saccharomyces. As
estimativas das taxas de transporte de Candida na boca
variam muito por causa das diferentes técnicas de
isolamento usadas e dos grupos populacionais investigados
(verCapítulo 8). As taxas de transporte variam de 2% a
71% em adultos assintomáticos, mas isso aumenta e se
aproxima de 100% em pacientes clinicamente
comprometidos ou naqueles em agentes antibacterianos de
amplo espectro.

Candidasão distribuídos uniformemente por toda a

boca, mas o local mais comum de isolamento é o
dorso da língua. O isolamento de Candida aumenta
com a presença de dispositivos intrabucais como
próteses ou aparelhos ortodônticos, principalmente
no maxilar superior na superfície de encaixe; As
espécies de Candida podem aderir tenazmente ao
acrílico.

ARCHAEA
Archaeatêm características que os tornam distintos de
Bacteria ou Eukarya e constituem um ramo distinto da
árvore filogenética da vida. Archaea são encontradas em
comunidades microbianas complexas no intestino e na
boca, e Methanobrevibacter oralis é a principal espécie
na cavidade oral, detectada em placa dentária
subgengival e canais radiculares infectados. Esses
organismos obtêm energia pela redução de CO 2ao
metano, e associações entre metanogênios e bactérias
redutoras de sulfato com Synergistes e outros patógenos
periodontais putativos foram relatadas, sugerindo que
essas bactérias podem funcionar como degradadores
terminais durante o catabolismo de moléculas
complexas do hospedeiro (vercapítulo 5). Outras
Archaea isoladas da boca incluem Methanobacterium e
Methanosarcina.

VÍRUS
não é mais necessário usar métodos demorados e muitas
vezes não confiáveis de detecção de vírus, como cultura
de tecidos ou microscopia eletrônica. De fato, alguns
vírus só foram detectados pelo uso de abordagens
moleculares e nunca foram cultivados em laboratório
(por exemplo, vírus da hepatite C e vírus da hepatite G).
O vírus mais frequentemente encontrado na saliva e
na área orofacial é o Herpes simplex tipo 1 (HSV-1). A
grande maioria (80% a 90%) dos adultos no mundo
ocidental sofreram de infecção primária pelo HSV-1,
que quando reativado de sua forma latente causa lesões
de infecção secundária conhecidas como herpes labial
nos tecidos orofaciais. Técnicas moleculares revelaram
que o HSV-1 é persistente nos tecidos orais e também
pode ser detectado ocasionalmente por cultura na saliva
na ausência de quaisquer sinais ou sintomas clínicos, o
que indica eliminação periódica. O vírus também
permanece latente no tecido neural, em particular no
nervo trigêmeo, onde pode ser reativado por vários
fatores, incluindo luz UV ou estresse. Uma vez
reativado,

O citomegalovírus está presente na maioria dos

indivíduos. Esses vírus foram detectados na saliva de
adultos assintomáticos, mas sua porta de entrada na
cavidade oral não é clara. O vírus Coxsackie A2, 4, 5,
6, 8, 9, 10 e 16 foram todos detectados na saliva e no
epitélio oral. A detecção desses vírus geralmente tem
sido associada à doença da mão, pé e boca ou
herpangina.
Existem mais de 100 tipos de vírus do papiloma
humano (HPV), dos quais os tipos 2 e 4 têm sido
freqüentemente encontrados em lesões epiteliais
hiperplásicas semelhantes a verrugas localizadas dos lábios
e da boca (verruga vulgar, condiloma acuminado). Os tipos
de HPV 2, 4, 6, 11 e 16 também foram detectados com
relativa frequência nos tecidos orais de pacientes HIV-
positivos. Estudos recentes exploraram o possível papel do
HPV no câncer de boca, e agora está estabelecido que os
tipos 16 e 18 são a causa de alguns casos de carcinoma
orofaríngeo.
Bacteriófagos (vírus para os quais as bactérias são os
hospedeiros naturais) foram observados em amostras de
saliva e placa dentária, mas poucos foram isolados.
Bacteriófagos específicos para espécies de S. mutans,
Lactobacillus, Actino-myces, Veillonella e Aggregatibacter
foram
 anaeróbicas e, embora geralmente consideradas
comensais inofensivas, há relatos associando sua
presença à doença periodontal. Trichomonas tenax
descrito. O papel do bacteriófago na ecologia
microbiana da boca não é totalmente compreendido.
Alguns bacteriófagos com atividade contra bactérias não
orais (por exemplo, Proteus mirabilis) foram detectados,
e isso pode contribuir para a capacidade da microbiota
oral residente de excluir espécies exógenas (resistência à
colonização; verCapítulo 4). O bacteriófago também
pode conduzir a diversidade molecular em biofilmes
orais, fornecendo novas funções genéticas em resposta à
terapia antimicrobiana ou outras perturbações
ambientais.
Em raras ocasiões, vírus potencialmente patogênicos
podem ser encontrados na cavidade oral, especialmente
na saliva, onde sua presença pode representar uma
ameaça significativa de infecção cruzada. Embora
alguns pacientes possam ter doença óbvia, muitos
podem ser assintomáticos. O vírus da hepatite B é um
exemplo específico de vírus patogênico que pode se
espalhar pela saliva de um paciente aparentemente
saudável (verCapítulo 12). Outros vírus que foram
detectados na saliva incluem vários vírus respiratórios,
vírus da imunodeficiência humana (HIV), vírus do
sarampo e vírus da caxumba.

PROTOZOÁRIOS
Os protozoários são definidos como microrganismos
eucarióticos unicelulares que não possuem parede
celular. Duas espécies de protozoários
frequentemente recuperadas da boca são
Trichomonas tenax e Entamoeba gingivalis. Sua
prevalência oral é variável, mas as estimativas
relatam taxas de transporte entre 4% e 52% na
população saudável. Técnicas moleculares podem ser
usadas para detectar esses organismos e a PCR
detectou T. tenax em 2% das cavidades orais
saudáveis, aumentando para 21% em pacientes com
doença periodontal.
Ambas as espécies de protozoários orais acima são
móveis e, no caso de T. tenax, sua motilidade rolante
característica é mediada pela presença de quatro flagelos
anteriores e um quinto flagelo recorrente, preso a uma
membrana ondulante ao longo do comprimento do
célula. Trichomonas tenax e E. gingivalis são
heterotróficos, adquirindo suas necessidades de carbono
através da ingestão de outros microrganismos,
leucócitos do hospedeiro e matéria orgânica morta
dentro da boca e, nesse sentido, são verdadeiramente
parasitas. Ambas as espécies são estritamente
 3A Microbiota Oral Residente

produz cisteína proteinases e metaloproteinases, que

podem danificar os tecidos conjuntivos do
hospedeiro. No entanto, se esses organismos
desempenham ou não um papel ativo na doença
periodontal ainda não está claro, embora seja
aparente que sua incidência aumenta em indivíduos
com má higiene bucal.

RESUMO DO CAPÍTULO
A boca saudável suporta o crescimento de uma ampla
gama de microrganismos, incluindo bactérias, leveduras,
micoplasmas, Archaea, vírus e até protozoários. As
bactérias são os componentes predominantes da
microbiota oral residente, e uma lista dos principais
gêneros é dada emTabela 3.4. Muitas dessas bactérias
são exigentes em suas necessidades nutricionais, embora
outras sejam anaeróbicas obrigatórias e altamente
sensíveis ao oxigênio, e algumas evoluíram para crescer
em cultura mista. Atualmente, apenas cerca de 70% dos
organismos em placa podem ser isolados em cultura
pura em laboratório. Abordagens moleculares, baseadas
em comparações de sequências do gene 16S rRNA e
sequenciamento completo do genoma, revolucionaram
nossa compreensão da complexidade da microbiota oral
residente e resolveram muitos problemas de longa data
com a classificação de vários grupos de bactérias orais
(por exemplo, , VejoFIGO. 3.6). Essas abordagens
identificaram muitos novos gêneros e espécies,
incluindo filos como TM7 que não são cultiváveis
quando o crescimento é tentado em cultura pura
(verFIGO. 3.3, B). As abordagens moleculares oferecem
o potencial para técnicas rápidas (e relativamente
simples) para detectar, visualizar e identificar até
mesmo o micróbio oral mais exigente em amostras
clínicas. Os benefícios resultantes na classificação e
detecção aumentarão a probabilidade de encontrar
associações mais próximas entre espécies ou táxons
específicos com locais em saúde e doença.
A alta diversidade da microbiota oral reflete a
ampla gama de nutrientes disponíveis endogenamente
na boca, os variados tipos de habitat para colonização
e a oportunidade oferecida por biofilmes, como a
placa, para sobrevivência em superfícies. Apesar
dessa diversidade, muitos microrganismos
comumente isolados de ecossistemas vizinhos, como
a pele e o intestino, não são encontrados na boca,
enfatizando as propriedades únicas e seletivas da
boca para colonização microbiana.
48 Microbiologia Oral de Marsh e Martin

TABELA 3.4 Os principais gêneros bacterianos encontrados na cavidade oral

GRAM-POSITIVO GRAM-NEGATIVO
Cocos Bastões Cocos Bastões
Abiotrofia Actinobaculum Anaerglobo Aggregatibacter
Enterococcus Actinomyces Megasphaera Campylobacter
Finegoldia Aloscardóvia Moraxela Cantonela
Gemela Arcanobactéria Neisseria Capnocytophaga
Granulicatela Atopóbio Veillonella Centopéia
Peptoestreptococo Bifidobactéria Desulfomicrobium
Estreptococo Corynebacterium Desulfovibrio
Criptobactéria Discadores
Eubactéria Eikenella
Filifactor Flavobacterium
Lactobacillus Fusobacterium
Mogibacterium Haemophilus
Olsenella Johnsonii
Parascardovia Kingella
Propionibacterium Leptotriquia
Pseudoramibacter Metanobrevibacter
Rothia Porphyromonas
Scardovia Prevotella
Shuttleworthia Selenomonas
Slackia Simonsiella
Solobactéria Tannerela
Treponema
Wolinella

Nem todos os gêneros bacterianos foram listados. O Mycoplasma também é isolado da boca.
Existem também bactérias não cultiváveis que ainda não foram colocadas em um gênero; alguns pertencem ao filo TM7.

LEITURA ADICIONAL Edlund A, Santiago-RodriguezTM, Boehm TK, et al. Bacteriófago

Aas JA, Paster BJ, Stokes LN, et al. Definição da flora bacteriana
normal da cavidade oral. J Clin Microbiol. 2005; 43: 5721-5732.
Asam D, Spellerberg B. Patogenicidade molecular de
Streptococcus anginosus. Mol Oral Microbiol. 2014; 29: 145-
155.
Aruni W, Chioma O, Fletcher HM. Filifactor alocis: o garoto
recém-descoberto no quarteirão com talentos especiais. J Dent
Res. 2014; 93: 725-732.
Chen T, Yu WH, Izard J, et al. The Human Oral Microbiome
Database: um recurso acessível na web para investigar
informações taxonômicas e genômicas de micróbios orais. Base
de dados. 2010; doi: 10.1093 / banco de dados / baq013; ID do
artigo baq013.
Dewhirst FE, Chen T, Izard J, et al. O Microbioma Oral Humano.
J Bacteriol. 2010; 192: 5002-5017.
e seus potenciais papéis na cavidade oral humana. J Oral
Microbiol. 2015; 7: 27423.
Han YW. Fusobacterium nucleatum: um patógeno comensal
transformado.
Curr Opin Microbiol. 2015; 23: 141-147.
Henderson B, Ward JM, Ready D. Aggregatibacter
(Actinobacillus) actinomycetemcomitans: um triplo A *
periodontopatógeno? Período-ontol 2000. 2010; 54: 78-105.
Ghannoum MA, Jurevic RJ, Mukherjee PK, et al. Caracterização
do microbioma fúngico oral (micobioma) em indivíduos
saudáveis. PLoS Pathog. 2010; 8 (6): e1000713.
Consórcio do Projeto Microbioma Humano. Estrutura, função e
diversidade do microbioma humano saudável. Natureza. 2012;
486 (7402): 207-214.
 3A Microbiota Oral Residente

Könönen E, Wade WG. Actinomyces e organismos relacionados
em infecções humanas. Clin Microbiol Revs. 2015; 28: 419-442.
Li L, Redding S, Dongari-Bagtzoglou A. Candida glabrata: um
patógeno oportunista oral emergente. J Dent Res. 2007; 86: 204-215.
Matarazzo F, Ribeiro AC, Faveri M, et al. O domínio Archaea em
superfícies mucosas humanas. Clin Microbiol Infect. 2012; 18: 834-
840.
Murphy EC, Frick IM. Cocos anaeróbios Gram-positivos -
patógenos comensais e oportunistas. FEMS Microbiol Rev.
2013; 37: 520-553.
Nair RG, Salajegheh A, Itthagarun A, et al. Infecções virais orofaciais -
uma atualização para clínicos. Atualização do Dente. 2014; 41: 518-
520, 522-524.
Nakayama K. Porphyromonas gingivalis e bactérias relacionadas:
da pigmentação colonial ao sistema de secreção tipo IX e
motilidade deslizante. J Res. Periodontal. 2015; 50: 1-8.
Nguyen-Hieu T, Khelaifia S, Aboudharam G, et al. Archaea
metanogênica em sítios subgengivais: uma revisão. APMIS. 2013;
121: 467-477.
Sharma A. Mecanismos de virulência de Tannerella forsythia.
Periodontol 2000. 2010; 54: 106-116.
Visser MB, Ellen RP. Novos insights sobre o papel emergente de
espiroquetas orais na doença periodontal. Clin Microbiol Infect.
2011; 17: 502-512.
Wade WG. O microbioma oral na saúde e na doença. Farmaco
Res. 2013; 69: 137-143.
Whitmore SE, Lamont RJ. A persona patogênica de estreptococos
orais associados à comunidade. Mol Microbiol. 2011; 81: 305-
314.
O Human Oral Microbiome Database (HOMD) fornece
informações completas sobre os microrganismos encontrados na
cavidade oral humana. Este é um projeto em andamento e o
banco de dados será atualizado continuamente. A base de dados
pode ser acessada em:<www.homd.org>

QUESTÕES DE MÚLTIPLA ESCOLHA

Respostas na pág. 249
1 A classificação de microrganismos é o processo de qual dos c. Desenvolvimento de um esquema de
seguintes? identificação d. Descrevendo a aparência
colonial
estirpede um
a. Agrupar microrganismos logicamente com bacteriana
base em suas semelhanças e diferenças
c. Aeróbica
b. Dando um nome aos microorganismos d. capnofílico
2 As bactérias que são dependentes de dióxido de carbono para
seu crescimento são chamadas de quê?
c. Frutano (estrutura de
uma. Obrigatoriamente levan) d. Glicogênio
anaeróbico b.
Facultativamente
anaeróbico c. Fusobacterium nucleatum
d. Veillonella atípica
3 Cepas deO Streptococcus salivarius produz grandes quantidades
de que tipo de exopolímero a partir da sacarose?
uma. Heteropolissacarídeo
b. Frutano (estrutura da inulina)
4 Qual das seguintes é uma bactéria que é capnofílica?
uma. Capnocytophaga
gingivalis b. Porphyromonas
gingivalis
5 Qual das seguintes espécies produz colônias com pigmento marrom ou preto em ágar sangue?
uma. Aggregatibacterium actinomycetemcomitans c. Prevotella oralis
b. Porphyromonas gingivalis d. Eikenella corrodens
b. Trichomonas tenax
6 As espiroquetas orais se enquadram em qual gênero?
a. Bacteroides
b. Centopéia
7 Quais dos seguintes protozoários são encontrados na
boca?
a. Paramécio
c. Treponema c. Entamoeba histolytica
d. Selenomonas d. Giardia lamblia

8 Testes iniciais em colônias alfa-hemolíticas em ágar sangue fornecem os seguintes resultados: cocos
Gram-positivos em cadeia; reação negativa da catalase; produzir amônia a partir da arginina; ligar alfa-
amilase; produzir glucano a partir da sacarose. Qual é a identificação mais provável dessas bactérias?
uma. Streptococcus mutans c. Streptococcus gordonii
b. Streptococcus vestibularis d. Streptococcus intermediário
50 Microbiologia Oral de Marsh e Martin

9 Qual das seguintes espécies é o bacilo Gram-positivo facultativamente anaeróbio mais comumente isolado?
isoladas de biofilmes dentários?
um c. Lactobacillus casei
a. Actinomyces naeslundii
d. Bifidobacterium dentium
b. Actinomyces israelii
c. Eikennela corrodens
10 Qual dos seguintes é o coco
d. Megasphaera micronuciformis
anaeróbio Gram-negativo que é
encontrado mais comumente em grande número?
na boca?
uma. Neisseria
subflava b. Veillonella
parvula

Distribuição, desenvolvimento e
benefícios da microbiota oral
Aquisição da microbiota oral residente
Comunidade pioneira e sucessão microbiana
Sucessão microbiana alogênica e autogênica
Envelhecimento e a microbiota oral
Métodos de determinação da composição
da microbiota oral residente
Aquisição de amostra
Transporte e dispersão de
amostras Cultivo
Enumeração e identificação
Microscopia
No localmodelos
Abordagens moleculares
Distribuição da microbiota oral residente
Lábios e paladar
Bochecha
Língua
Dentes e dentaduras
Saliva
Metabolismo de bactérias orais
Metabolismo de carboidratos
Metabolismo do nitrogênio
Metabolismo do oxigênio
Mau odor oral (halitose)
Benefícios da microbiota oral
Resistência à colonização
Conversa cruzada de micróbios
hospedeiros
Metabolismo de nitrato
Resumo do capítulo
Leitura adicional
CAPÍTULO4
TO feto no útero é normalmente estéril, mas a partir de
nascimento, o bebê é exposto e colonizado por uma
grande variedade de microrganismos. Estes são
derivados predominantemente da mãe, mas apenas uma
pequena proporção é capaz de se estabelecer na boca do
bebê. As propriedades biológicas e físicas de cada
habitat determinam quais organismos irão aderir e
crescer, e ditam quais serão os componentes maiores ou
menores da microbiota humana em cada local. Isso
resulta em diferentes superfícies com microbiotas
distintas e características.
AQUISIÇÃO DO RESIDENTE
ORAL MICROBIOTA
A aquisição microbiana depende da transmissão de
microrganismos para o local de potencial colonização.
Inicialmente, na boca, é por inoculação passiva
principalmente da mãe, mas também de outros
indivíduos próximos ao bebê e do leite e água ingeridos.
O modo de parto do bebê influencia a microbiota do
recém-nascido. Os bebês nascidos convencionalmente
abrigam comunidades bacterianas semelhantes à
comunidade microbiana vaginal da mãe. Estes incluem
representantes de gêneros como Lactobacillus,
Prevotella e Atopobium. Em contraste, os bebês
nascidos por cesariana têm comunidades bacterianas que
se assemelham à microbiota da pele e incluem muitas
espécies de Staphylococcus. A microbiota oral de bebês
amamentados difere da de bebês alimentados com
fórmula durante os primeiros meses de vida.
Com o tempo, novos episódios de transmissão
ocorrem, principalmente pela saliva, mas as
propriedades de cada local exercem pressões
seletivas e a microbiota torna-se
51
52 Microbiologia Oral de Marsh e Martin condições propícias à colonização por uma sucessão
de outras populações. Isso pode ser por:
mais diferenciada e característica de cada superfície. A
capacidade de digitar (impressão digital) cepas
(consulteCapítulo 3,FIGO. 3.1) habilitou a confirmação
da transferência de Streptococcus salivarius,
estreptococos mutans e algumas outras espécies
bacterianas orais de mãe para filho via saliva
(transmissão vertical). Há pouca evidência de
transmissão pai-bebê (ou pai-mãe) de estreptococos
mutans, embora a transmissão horizontal entre os
cônjuges e a transmissão vertical dentro das unidades
familiares possam ocorrer com alguns patógenos
periodontais, como Porphyromonas gingivalis e
Aggregatibacter actinomycetemcomitans. Foi
demonstrado que as bactérias orais são transferidas
através de beijos íntimos repetidos entre parceiros,
embora isso não leve necessariamente à colonização.

COMUNIDADE PIONEIRA E
SUCESSÃO MICROBIANA
A boca é altamente seletiva para a colonização
microbiana. Muito poucas das espécies comuns à
cavidade oral de adultos, e ainda menos do grande
número de bactérias encontradas no ambiente, são
capazes de se estabelecer na boca do recém-nascido.
Os primeiros microrganismos a colonizar são
denominados espécies pioneiras e, coletivamente,
formam a comunidade microbiana pioneira. Essas
espécies pioneiras continuam a crescer e colonizar até
que a resistência ambiental (física e química) seja
encontrada. Na boca, os fatores físicos que
promovem a remoção incluem o derramamento de
células epiteliais (descamação) e as forças de
cisalhamento da mastigação e do fluxo salivar,
enquanto a disponibilidade de nutrientes e condições
desfavoráveis de potencial redox (Eh; verCapítulo 2)
ou pH, e as propriedades antibacterianas da saliva,
são barreiras químicas que podem limitar o
crescimento.
Um gênero ou espécie é geralmente predominante
durante o desenvolvimento da comunidade pioneira.
Na boca dos bebês, os organismos cultiváveis
predominantes são os estreptococos, e em particular
S. salivarius, S. mitis e S. oralis. Muitas das espécies
pioneiras possuem imunoglobulina A1 (IgA 1)
atividade de protease, o que pode permitir que os
organismos produtores evitem os efeitos desse
importante fator de defesa da mucosa. Ao longo do
tempo, a atividade metabólica da comunidade
pioneira modifica o ambiente proporcionando
 todos os bebês são colonizados por pelo menos duas
espécies de Streptococcus, sendo S. salivarius e S. mitis
biovar 1 as mais comuns
Aquisição e Pioneiro
Transmissão
colonização espécies

Meio Ambiente
modificação

Clímax Aumentando Microbiano

diversidade de
comunidade espécies sucessão

FIGURA 4.1Etapas ecológicas no estabelecimento de uma

comunidade microbiana. À medida que a diversidade microbiana
aumenta, o metabolismo das espécies pioneiras modifica o ambiente
local tornando as condições adequadas para colonizadores
secundários.

• modificando ou expondo novos receptores para

fixação (criptótopos, vejacapítulo 5),
• alterando o pH local, ou reduzindo os níveis de
oxigênio e diminuindo o potencial redox, Eh, ou
• gerando nutrientes adicionais, por exemplo,
como produtos finais do metabolismo (lactato,
succinato) ou produtos de degradação (peptídeos,
heme) que podem ser usados por outros organismos
como parte de uma cadeia alimentar.
Conforme descrito anteriormente, a comunidade
pioneira influencia o padrão de sucessão microbiana.
Isso envolve o desenvolvimento progressivo da
comunidade pioneira (contendo poucas espécies) através
de vários estágios em que o número de grupos
microbianos aumenta, até que o equilíbrio seja
alcançado; esta é chamada de comunidade clímax e
geralmente tem uma alta diversidade de espécies (FIGO.
4.1). A sucessão está associada a uma mudança de um
site que possui poucos nichos (funções; verCapítulo 1)
para um com uma infinidade de nichos potenciais. Uma
comunidade clímax reflete uma situação altamente
dinâmica entre o hospedeiro, o ambiente e a microbiota,
e não deve ser considerada como um estado estático.
A cavidade oral dos bebês contém apenas superfícies
mucosas para colonização. As populações pioneiras
consistem principalmente de espécies bacterianas
aeróbias e anaeróbicas facultativas; estreptococos são
comumente isolados após os primeiros dias, e S. oralis,
S. mitis biovar 1 e S. salivarius são numericamente
dominantes.Mesa 4.1). A diversidade da microbiota
estreptocócica aumenta com o tempo; após um mês,
 4Distribuição, Desenvolvimento e Benefícios da Microbiota Oral

maior diversidade de espécies foi recuperada ao redor

da margem gengival de dentes recém-erupcionados
TABELA 4.1 Espécies estreptocócicas (média idade dos bebês: 32 meses) (Tabela 4.2).
cultivadas a partir das superfícies mucosas de Esses achados confirmam que a erupção dos dentes
bebês tem um impacto ecológico significativo no ambiente
bucal e na microbiota residente.
PORCENTAGEM DE CONTAGEM VIÁVEL Durante o primeiro ano de vida, os membros dos
gêneros Neisseria, Veillonella, Actinomyces,
Estreptococo IDADE Streptococcus, Lacto-bacillus e Rothia são comumente
isolados, principalmente
1-3 dias 2 semanas 1 mês

S. oralis 41 24 20

S. mitisbiovar 1 30 28 30

S. mitisbiovar 2 4 1 1

S. salivarius 10 30 28

S. sanguinis 4 3 2

S. anginosus 3 5 5

S. gordonii 1 2 4

(Tabela 4.1). Actinomyces odontolyticus pode ser

isolado das superfícies da mucosa oral em bebês a
partir dos dois meses de idade. Em contraste, a
prevalência de S. sanguinis, estreptococos mutans e
A. naeslundii aumenta após a erupção dos dentes.
A diversidade da comunidade oral pioneira continua
a aumentar durante os primeiros meses de vida, e
bactérias Gram-negativas obrigatoriamente anaeróbicas
começam a colonizar. Em estudos baseados em cultura,
Prevotella mela-ninogenica foi o anaeróbio obrigatório
mais frequentemente isolado, sendo recuperado de 76%
dos bebês edêntulos (idade média: 3 meses; intervalo: 1
a 7 meses) (Tabela 4.2). Outras bactérias comumente
isoladas foram Fusobacterium nucleatum (presente em
67% dos lactentes), Veillonella spp. (63%) e Prevotella
spp. não pigmentada. (62%) (Tabela 4.2); o número de
anaeróbios cultiváveis em uma única boca variou de 0 a
7 espécies.
Em um estudo longitudinal do desenvolvimento da
microbiota durante a erupção da dentição decídua,
bactérias Gram-negativas obrigatoriamente
anaeróbicas foram isoladas mais comumente, e uma
 aproximadamente 10% a 30% dos lactentes de 18
meses. As proporções de supostos patógenos
TABELA 4.2 O efeito da erupção dentária na periodontais, como P. gingivalis, T. forsythia e
composição da microbiota oral Gram- Treponema denticola, em biofilmes de superfícies
negativa cultivável em crianças pequenas mucosas (especialmente a língua e os dentes)
aumentaram ao longo do tempo em crianças de 3 a 12
PERCENTAGEM DE ISOLAMENTO
anos. Quando presentes, essas bactérias geralmente
FREQUÊNCIA
estão em níveis muito baixos e, portanto, não têm
IDADE relevância clínica. No entanto, essas bactérias podem ser
Bactéria MÉDIA transportadas e podem, em algum momento, explorar
uma mudança no local
3 meses 32 meses

Prevotella melaninogenica 76 100

Prevotella não pigmentada 62 100

Prevotella loescheii 14 90

Prevotella intermedia 10 67

Prevotella denticola ND 71

Fusobacterium nucleatum 67 100

Fusobacteriumspp. ND 71

Selenomonasspp. ND 43

Capnocytophagaspp. 19 100

Leptotriquiaspp. 24 71

Campylobacterspp. 5 43

Eikenella corrodens 5 57

Veillonellaspp. 63 63
Foram amostradas 21 crianças, tanto edêntulas (média
de idade = 3 meses) quanto dentadas (média de idade:
32 meses).
ND, Não detectado.

após a erupção dentária. Métodos independentes de

cultura (moleculares) detectaram, em algumas ocasiões,
algumas das espécies obrigatoriamente anaeróbicas
implicadas em doenças periodontais a partir de amostras
de dentes e língua de crianças pequenas (18 a 36 meses).
Porphyromonas gin-givalis, Tannerella forsythia e A.
actinomycetemcomi-tans foram detectados na boca de
54 Microbiologia Oral de Marsh e Martin
condições ambientais ou uma supressão das defesas
do hospedeiro, para competir com espécies
associadas à saúde bucal, predispondo esses locais a
doenças. Uma apreciação desta relação dinâmica
entre o hospedeiro e a microbiota oral é fundamental
para a compreensão da etiologia da maioria das
doenças dentárias.
PONTOS CHAVE
A mãe é a principal fonte da microbiota oral do
recém-nascido.
As propriedades biológicas da boca ditam
quais microrganismos são capazes de colonizar
com sucesso e quais serão predominantes.
Cada superfície oral suportará uma microbiota
distinta, mas característica. Existe uma relação
dinâmica entre o ambiente do hospedeiro e a
composição e atividade da microbiota oral.
SUCESSÃO MICROBIANA
ALOGÊNICA E AUTOGÊNICA
O estabelecimento de uma comunidade clímax em
qualquer sítio oral envolve uma série de fases de
desenvolvimento durante as quais a complexidade da
microbiota aumenta (sucessão microbiana; vejaFIGO.
4.1). Dois tipos distintos de sucessão foram
identificados (FIGO. 4.2). Na sucessão alogênica,
fatores de origem não microbiana são responsáveis por
um padrão alterado de desenvolvimento da comunidade.
Por exemplo, a frequência de detecção de estreptococos
mutans e S. sanguinis aumenta acentuadamente quando
superfícies duras e sem derramamento aparecem na
boca. Tal situação surgiria após o dente
Alogênico Autogênico
sucessão sucessão
• Erupção dentária • O2consumo
criando anaerobiose
• Dentadura
vestindo Microbiano • Cadeias
sucessão alimentares
erupção, ou após a inserção de próteses ou aparelhos
ortodônticos removíveis, ou obturadores de acrílico
em crianças com fissura palatina.
O aumento no número e diversidade de anaeróbios
obrigatórios, uma vez que os dentes estão presentes, é
um exemplo de sucessão autogênica em que o
desenvolvimento da comunidade é influenciado por
fatores microbianos.FIGO. 4.2). O metabolismo das
espécies pioneiras aeróbicas e anaeróbicas facultativas
reduz o potencial redox na placa e cria condições
adequadas para a colonização por anaeróbios
estritos.capítulo 5). Outros exemplos de sucessão
autogênica são o desenvolvimento de cadeias e teias
alimentares, em que o produto final metabólico de um
organismo se torna um nutriente primário para outro:
primário secundário
substrato complexoalimentador→produtos
alimentador
→produto
mais simples
Outro exemplo de sucessão autogênica é a
exposição de novos receptores para adesão bacteriana
(criptótopos; vercapítulo 5) após modificação
microbiana de macromoléculas hospedeiras.
A composição bruta da microbiota oral pode
permanecer relativamente estável ao longo do tempo em
locais individuais (homeostase microbiana),
especialmente quando analisada em nível de gênero ou
espécie. As espécies que compõem a microbiota humana
residente geralmente exibem um grande número de
clones, e estes podem variar ao longo do tempo. Clones
de algumas espécies parecem persistir por longos
períodos em um local, enquanto outros parecem ser
transitórios e sofrem substituição por clones frescos.
Esta pode ser uma estratégia para ajudar tais espécies a
evadir as defesas do hospedeiro.
• Exposição do
• Antimicrobiano receptor
agentes para anexo
comunidade clímax
FIGURA 4.2Papel da sucessão autogênica e alogênica no
desenvolvimento de comunidades microbianas orais.
PONTOS CHAVE
A boca é geralmente estéril ao nascimento. A aquisição da
microbiota oral normal começa no nascimento e segue
uma progressão ecológica específica de um pequeno
número de espécies pioneiras, especialmente S. salivarius,
S. mitis e S. oralis, para uma comunidade clímax
diversificada contendo muitas bactérias obrigatoriamente
anaeróbicas e nutricionalmente exigentes . Esse
desenvolvimento envolve sucessão alogênica e
autogênica; na sucessão alogênica, o desenvolvimento da
comunidade é influenciado por fatores não microbianos,
enquanto os fatores microbianos são responsáveis pela
sucessão autogênica. Uma vez estabelecida, a microbiota
permanece relativamente estável ao longo do tempo
(homeostase microbiana), a menos que haja uma
mudança significativa no ambiente local.
 4Distribuição, Desenvolvimento e Benefícios da Microbiota Oral

terapia citotóxica ou mielossupressão combinada com a

própria doença está associada ao aumento do transporte
ENVELHECIMENTO E A MICROBIOTA de Candida albicans e patógenos oportunistas não orais,
ORAL como

O desenvolvimento da microbiota oral continua com a

idade. Após a erupção dentária, a frequência de
isolamento de espiroquetas e anaeróbios pigmentados de
preto aumenta. Em um estudo baseado em cultura,
anaeróbios pigmentados de preto foram recuperados de
18% a 40% das crianças de 5 anos e foram
posteriormente encontrados em mais de 90% dos
adolescentes de 13 a 16 anos. O aumento da prevalência
de espiroquetas e anaeróbios pigmentados de preto
durante a puberdade pode ser devido aos hormônios que
entram na fenda gengival e atuam como uma nova fonte
de nutrientes para essas bactérias. O aumento de
Prevotella intermedia na placa durante o segundo
trimestre de gravidez também foi atribuído aos níveis
séricos elevados de estradiol e progesterona que podem
satisfazer a necessidade de naftoquinona para o
crescimento desse organismo. Aumentos no número de
anaeróbios pigmentados de preto também foram
observados em mulheres que tomam contraceptivos
orais. No entanto, outros estudos não conseguiram
mostrar associações semelhantes entre anaeróbios
pigmentados de preto e gravidez. Curiosamente, a
aplicação recente de técnicas moleculares mais sensíveis
detectou esses organismos em crianças pré-púberes,
implicando que as alterações hormonais não podem ser
o único fator que afeta a prevalência dessas bactérias
fastidiosas.
Em adultos, a composição e as proporções da
microbiota oral residente permanecem razoavelmente
estáveis ao longo do tempo, e essa microbiota
coexiste em relativa harmonia com o hospedeiro.
Esta estabilidade (denominada homeostase
microbiana;capítulo 5, VejoFIGO. 5,18) não é uma
resposta passiva ao meio ambiente, mas é por causa
de um equilíbrio dinâmico sendo alcançado a partir
de inúmeras interações interbacterianas e hospedeiro-
bacterianas. A diversidade da microbiota oral em um
indivíduo saudável é tipicamente da ordem de várias
centenas de espécies.
Algumas variações na microbiota oral foram
discernidas na vida adulta e podem ser atribuídas a
efeitos diretos e indiretos do envelhecimento.FIGO.
4.3). No caso deste último, podem ocorrer variações se o
habitat ou ambiente for severamente perturbado. Por
exemplo, o risco de câncer aumenta com a idade, e a
 ser uma explicação para o aumento da suscetibilidade à
doença observada em idosos. Alterações relacionadas à
Direto Indireto idade nos anticorpos salivares também foram relatadas.
efeitos efeitos No geral,

• Mediado por células

imunidade diminui
• Uso de dentadura

• Alteração na saliva Em todos os

anticorpos lugares • Medicamento
microbiota • Terapia do
câncer
• Alterações hormonais
Mudanças na
• dieta
• Fisiologia alterada
da mucosa oral
FIGURA 4.3Efeitos diretos e indiretos do envelhecimento na
microbiota bucal.

enterobactérias (por exemplo, Klebsiella spp.,

Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa) e
Staphylococcus aureus. O uso de próteses também
aumenta com a idade e isso também promove a
colonização por C. albicans. Em idosos edêntulos que
usam dentaduras, o dorso da língua abriga a
microbiota mais diversificada, com muitas bactérias
anaeróbicas Gram-negativas presentes (por exemplo,
Veillonella, Fusobacterium, espécies de Prevotella e
espiroquetas). Patógenos periodontais como
Tannerella forsythia, Porphyromonas gingivalis e
Treponema denticola também podem ser detectados.
Muitos idosos tomam uma variedade de
medicamentos, cujos efeitos colaterais podem reduzir
o fluxo de saliva e, assim, perturbar o equilíbrio
normal da microbiota oral residente.
Foram detectadas alterações diretas relacionadas à
idade na microbiota oral, incluindo proporções e
frequências de isolamento significativamente maiores de
lactobacilos e estafilococos (principalmente S. aureus)
na saliva de indivíduos saudáveis com 70 anos e o
aumento do isolamento de leveduras naqueles com 80
anos ou mais. A imunidade mediada por células diminui
com a idade, mas o efeito preciso da velhice nas defesas
inatas e adaptativas do hospedeiro da boca ainda não foi
estabelecido definitivamente. Os títulos de anticorpos
IgM séricos para bactérias comensais orais e intestinais
selecionadas são menores em indivíduos mais velhos.
Esses anticorpos representam a resposta inicial do
hospedeiro à infecção, e tal diminuição no título pode
56 Microbiologia Oral de Marsh e Martin
os idosos, enquanto os anticorpos secretores
específicos de imunoglobulina A (sIgA) aumentam
com a idade.
A incidência de candidíase oral é mais comum em
idosos, e isso tem sido atribuído não apenas ao aumento
da probabilidade de uso de próteses, mas também a
alterações fisiológicas na mucosa oral, desnutrição e
deficiências de oligoelementos. Há relatos de aumento
do isolamento de enterobactérias da orofaringe de
idosos, mas isso parece estar relacionado em muitos
casos à saúde do indivíduo e não à sua idade em si,
sendo as maiores incidências nos mais debilitados.
indivíduos. Um dos problemas fundamentais para
determinar se a microbiota oral muda ou não na velhice
é que a idade cronológica de uma pessoa nem sempre
equivale à sua idade fisiológica!
Os hábitos sociais mudam com a idade e podem
perturbar o equilíbrio da microbiota oral. A ingestão
regular de carboidratos na dieta ou bebidas ácidas pode
levar ao enriquecimento de espécies acidúricas
(tolerantes a ácidos) e cariogênicas, como estreptococos
mutans e lactobacilos. Além disso, estreptococos mutans
e S. sanguinis geralmente não são detectados na boca de
indivíduos que têm próteses totais quando essas
superfícies não são usadas, embora ambos os grupos de
bactérias possam reaparecer quando essas “superfícies
duras” são inseridas novamente. Foi demonstrado que o
tabagismo afeta a composição da microbiota e é um
fator de risco significativo para doenças periodontais. O
tabagismo está associado ao aumento da prevalência de
membros dos gêneros: Parvimonas, Fusobacterium,
Porphyromonas, Treponema e Campylobacter e à
redução de Veillonella, Espécies Neis-seria e
Streptococcus. No entanto, uma combinação de
tratamento não cirúrgico e aconselhamento para parar de
fumar resultou na reversão de algumas dessas
tendências, com níveis mais baixos de alguns patógenos
associados ao periodonto, incluindo Filifactor alocis,
Dial-ister pneumosintes, Parvimonas micra e T.
denticola, e um aumento de algumas bactérias benéficas.
PONTOS CHAVE
A composição da microbiota oral muda durante a vida
de um indivíduo. Essas alterações se correlacionam
com alterações significativas na biologia da boca, como
erupção (ou perda) de dentes, uso de próteses,
alterações no estado imunológico e no estilo de vida
(dieta, tabagismo, etc.).
MÉTODOS PARA DETERMINAR O
COMPOSIÇÃO DO RESIDENTE
MICROBIOTA ORAL
Há uma série de desafios ao tentar determinar a
composição da microbiota oral. Estes vão desde o
problema básico de remover a maioria dos
microrganismos do seu habitat (muitos dos quais, por
necessidade, estão tenazmente ligados como biofilmes a
uma superfície ou uns aos outros, e o local pode ser de
difícil acesso) até a sua eventual identificação. -ção
(Tabela 4.3; marCapítulo 3). As principais abordagens
para determinar a composição microbiana da microbiota
oral são ilustradas emFigura 4.4, enquanto as principais
diferenças entre abordagens dependentes de cultura e
independentes de cultura já foram destacadas emFigura
3.2(marCapítulo 3). Algumas das questões são
discutidas com mais detalhes nas seções a seguir.
AQUISIÇÃO DE AMOSTRA
A qualidade da amostra original é fundamental para o
resultado da determinação subsequente da composição
da microbiota oral, independentemente de serem usados
métodos dependentes de cultura ou independentes de
cultura (base molecular). A microbiota pode variar em
composição em distâncias relativamente pequenas e,
portanto, grandes amostras de placas ou um número de
amostras agrupadas de diferentes locais podem ser de
pouco valor porque diferenças importantes específicas
do local serão obscurecidas. Conseqüentemente,
amostras pequenas de locais discretos são preferíveis,
mas o método de amostragem dependerá da anatomia e
das propriedades do local a ser estudado.
A mucosa oral pode ser amostrada por swab, técnicas
de impressão direta ou pela remoção de células epiteliais
por raspagem ou esfregando com um instrumento sem
corte em um recipiente. As contagens microbianas
podem então ser relacionadas a uma área fixa ou a uma
célula epitelial individual. A saliva pode ser coletada
por expectoração em um recipiente estéril; o fluxo
salivar pode estar em uma taxa normal de repouso (não
estimulado) ou pode ser estimulado por meios químicos
ou pela mastigação. Embora um volume maior seja
coletado por estimulação, essas amostras também
conterão muito mais organismos que foram desalojados
das superfícies orais; as contagens microbianas são
expressas como unidades formadoras de colônias
(UFCs) por mililitro de saliva.
 Não existe uma maneira universalmente aceita de
amostragem de placa dental. As superfícies lisas
acessíveis do esmalte
 4Distribuição, Desenvolvimento e Benefícios da Microbiota Oral

apresentam poucos problemas e uma variedade de

instrumentos odontológicos têm sido usados. Sondas
TABELA 4.3 Algumas propriedades da dentárias, raspadores, fio dental e tiras abrasivas têm
microbiota oral que contribuem para a sido usados para remover o biofilme das superfícies
dificuldade em determinar sua composição aproximadas entre os dentes. Sondas finas, pedaços
Propriedade Comente de fio, agulhas hipodérmicas rombas e palitos de
dente têm sido usados para amostrar a placa das
Espécies altas A microbiota oral, e especialmente
diversidade placa dental, consiste em uma fissuras, embora a quantidade de biofilme removido
número diverso de micróbios possa depender da anatomia do local. A placa
espécies, algumas das quais subgengival é difícil de ser amostrada devido à
presente apenas em números inacessibilidade e
baixos.
Os microrganismos orais aderem
Superfície firmemente ao
acessório / superfícies e entre si e,
coagregação portanto, são difíceis de remover
(coadesão) e tem que ser disperso
eficientemente sem perda de
viabilidade.
Muitas bactérias orais morrem se
Obrigar expostas a
anaeróbios ar por longos períodos, e
são necessários cuidados especiais
para
preservar sua viabilidade.
Algumas bactérias são difíceis de
Exigente crescer em
nutrição / cultura pura e pode exigir
cofatores específicos etc. para o
incultivável crescimento.
Alguns grupos (por exemplo, certos
espiroquetas; grupo TM7) não pode
como
ainda ser cultivada em laboratório.
Algumas bactérias evoluíram para
crescem em cocultura com outras
espécies.
O crescimento lento de alguns
Crescimento lento organismos
faz tempo de enumeração
consumindo (por exemplo, eles
podem
requerem 14–21 dias de
incubação).
Identificação A classificação de muitos orais
microorganismos ainda
permanecem
não resolvido ou confuso; simples
critérios de identificação não são
sempre disponível (especialmente
para
alguns anaeróbios obrigatórios).
Métodos moleculares estão sendo
mais comumente usado para
identificar
microorganismos orais.
 quais diferentes procedimentos de amostragem foram
utilizados, que os resultados irão, em certa medida,
natureza anaeróbica do local. Um grande número de refletir o método adotado.
bactérias anaeróbicas obrigatórias são encontrados na
fenda gengival e na bolsa periodontal, a maioria das
quais perderá sua viabilidade se exposta ao ar (oxigênio TRANSPORTE E DISPERSÃO DE AMOSTRAS
atmosférico). Na doença, a anatomia do local significa As amostras devem ser transportadas para o
que os organismos na base da bolsa, perto da frente de laboratório para processamento o mais rápido
avanço da lesão, são provavelmente de maior relevância possível para
(verCapítulo 6). Novamente, é importante evitar a
remoção de placa de outras áreas dentro da bolsa para
não obscurecer relações significativas entre bactérias
específicas e doenças. Uma abordagem comum é inserir
pontas de papel nas bolsas, mas isso não removerá todos
os organismos firmemente aderentes da raiz do dente.
Amostras também foram colhidas por irrigação do local
e retirada do material por meio de agulhas de seringa;
entretanto, este método inevitavelmente removerá a
placa de toda a profundidade da bolsa. Um método
particularmente sofisticado empregava um espeto
mantido retirado em uma cânula que era constantemente
lavada com nitrogênio livre de oxigênio. A brocha foi
usada para amostrar a placa apenas quando a cânula
estava em posição próxima à base da bolsa. Após a
amostragem, o broche foi retraído para dentro da cânula
e retirado. Outra abordagem tem sido usar uma cureta
ou escamador após a limpeza da área supragengival. As
pontas do scaler podem ser destacadas e colocadas
imediatamente em tubos com fluxo de gás contendo
fluido de transporte anaeróbico para entrega ao
laboratório. Alternativamente, quando a cirurgia
periodontal é necessária, a placa foi removida de dentes
extraídos ou de superfícies expostas quando os retalhos
gengivais são rebatidos. As amostras podem ser usadas
para estudos baseados em cultura ou o ácido nucleico
pode ser extraído para análises moleculares. a placa foi
removida de dentes extraídos ou de superfícies expostas
quando os retalhos gengivais são rebatidos. As amostras
podem ser usadas para estudos baseados em cultura ou o
ácido nucleico pode ser extraído para análises
moleculares. a placa foi removida de dentes extraídos ou
de superfícies expostas quando os retalhos gengivais são
rebatidos. As amostras podem ser usadas para estudos
baseados em cultura ou o ácido nucleico pode ser
extraído para análises moleculares.

PONTOS CHAVE
Uma variedade de métodos pode ser usada para
coletar amostras de superfícies orais. A escolha
refletirá a anatomia do local. Pequenas amostras de
locais discretos são preferíveis. É importante notar,
principalmente quando se comparam estudos nos
58 Microbiologia Oral de Marsh e Martin

Coleta de amostras
• A metodologia depende da anatomia do local de amostragem

• Amostras pequenas e discretas são preferidas

Microscopia Análise molecular

• Microscopia de luz - morfologia e motilidade microbiana • Amplificação do gene 16S rRNA (Fig. 3.2)
• PEIXE * - estrutura da comunidade • PEIXE * - estrutura da comunidade
• Localização de micróbios 'não cultiváveis' †
• DGGE - perfil da comunidade
• Microscopia confocal - arquitetura de biofilme • Checkerboard DNA-DNA - para detectar
microorganismos pré-selecionados

Cultura
• Transporte para o laboratório em fluido de transporte reduzido
• Dispersão - sonicação; vórtice misturando com contas de vidro
• Diluição em série em fluido de transporte reduzido
* FISH = hibridização in situ
• Incubação em condições apropriadas (temperatura, gás, etc.)
fluorescente
• Contagens de colônias em placas de ágar seletivas e não seletivas
†
DGGE = eletroforese em
• Subcultura e identificação; sensibilidade a drogas
gel de gradiente
desnaturante
FIGURA 4.4Etapas da análise microbiológica da microbiota oral. Cultura, microscopia e abordagens moleculares podem ser
usadas para caracterizar a microbiota oral.
determinar qual microrganismo estava presente.
Esses métodos são trabalhosos
estudos. Fluidos de transporte especialmente
projetados contendo agentes redutores para manter
um baixo potencial redox reduzirão a perda de
viabilidade de organismos anaeróbios durante a
entrega ao laboratório.
Aglomerados e agregados de bactérias devem ser
dispersos de forma eficiente (idealmente para células
individuais) antes da diluição e plaqueamento da
amostra. A placa apresenta um problema particular a
este respeito porque, por definição, é um biofilme
contendo uma gama diversificada de microrganismos
ligados tenazmente uns aos outros. Um dos métodos
mais eficientes, particularmente para a placa
subgengival, é agitar as amostras em vórtice com
pequenas esferas de vidro estéreis, idealmente em um
tubo cheio de gás inerte. A sonicação suave produz o
número máximo de partículas de uma amostra, mas
exerce um efeito seletivo por espiroquetas danificando
especificamente e algumas outras bactérias Gram-
negativas, particularmente espécies de Fusobacterium.

CULTIVO
Durante décadas, os métodos baseados em cultura
foram as únicas abordagens disponíveis para
e relativamente caro. Após a dispersão, as amostras são
diluídas em série em um fluido adequado (geralmente
um fluido de transporte projetado para preservar a
viabilidade de bactérias anaeróbicas obrigatórias) e
alíquotas são espalhadas em vários ágares recém-
preparados, pré-reduzidos (ou seja, já anaeróbicos)
placas e incubadas para permitir que as células formem
colônias microbianas. Esses meios são projetados para
crescer (a) o número máximo de bactérias (por exemplo,
ágar sangue) ou (b) apenas um número limitado de
espécies (meios seletivos) para recuperar componentes
menores da microbiota. Por exemplo, a adição de
vancomicina a placas de ágar sangue inibe a maioria das
bactérias Gram-positivas, enquanto uma alta
concentração de sacarose estimula o crescimento de
estreptococos orais e placas com pH baixo favorecem os
lactobacilos. Deve-se enfatizar que esses meios são
seletivos e não específicos para qualquer tipo de
micróbio. A identidade das colônias nestas placas deve
ser confirmada; aparência colonial ou mero crescimento
em um meio específico não é diagnóstico. Os meios
precisam ser incubados por diferentes tempos e sob
diferentes condições atmosféricas, dependendo das
bactérias que estão sendo cultivadas. Para
 4Distribuição, Desenvolvimento e Benefícios da Microbiota Oral

bactérias podem ser identificadas usando critérios

simples, por exemplo, testes de fermentação de açúcar
exemplo, 7 a 14 dias de incubação a 37 ° C em um
ou a detecção de enzimas pré-formadas usando kits
frasco anaeróbico ou gabinete anaeróbico preenchido
comerciais. Outras bactérias requerem uma abordagem
com uma mistura de gás contendo CO 2/ mais sofisticada e, mais comumente agora, métodos
H2/UMA2será necessário para cultivar alguns moleculares
anaeróbios obrigatórios. Em contraste, Neisseria
requer apenas 2 dias de incubação no ar, enquanto
outros organismos são capnofílicos (CO2-loving) e
crescer otimamente em 10% CO2no ar. Alguns meios
de laboratório são suplementados com fatores de
crescimento para permitir o crescimento de certos
organismos exigentes.Capítulo 3). Atualmente,
apenas cerca de 50 a 70% da microbiota oral
residente pode ser cultivada em laboratório.

ENUMERAÇÃO E IDENTIFICAÇÃO
Após a incubação adequada, as bactérias formam
colônias visíveis que podem ser contadas, e sua
concentração na amostra original é determinada por
compensação matemática das etapas de diluição; os
dados são normalmente expressos como UFC. As
colônias representativas são subcultivadas para verificar
a pureza e a identificação subsequente; isolados também
podem ser testados quanto à suscetibilidade
antimicrobiana. A contagem de colônias assume que:
(a) células do mesmo microrganismo produzem
colônias com morfologia idêntica;
(b) células de espécies diferentes produzem
morfologias distintas; e
(c) uma colônia surge de uma única célula.
Geralmente, essas suposições são verdadeiras, exceto
para (c), pois as colônias podem surgir de pequenos
agregados de células; isso enfatiza a necessidade de
dispersão eficiente de amostras. Também é aconselhável
tomar vários exemplos de um tipo de colônia específico
para garantir que algumas espécies não sejam
negligenciadas por causa de sua aparência ser
semelhante a um organismo numericamente dominante.
Uma estratégia para determinar a microbiota
predominante envolve a identificação de 30 a 50
colônias aleatórias, independentemente de sua
morfologia, em vez de selecionar apenas os tipos de
colônias que parecem diferentes.
O primeiro nível de discriminação envolve a
coloração de Gram de colônias subcultivadas; as
bactérias são então agrupadas de acordo com se suas
células são Gram-positivas ou Gram-negativas, e são em
forma de bastonete ou coco. Isso determina quais testes
serão necessários para atingir a especiação. Algumas
 fissuras artificiais ou naturais montadas em uma coroa ou
em uma obturação oclusal. Partes removíveis de esmalte
testes (por exemplo, reação em cadeia da polimerase
[PCR] ou sequenciamento completo do genoma) são
usados para identificar essas espécies desafiadoras
(ver seção posterior).

MICROSCOPIA
Técnicas de iluminação de campo escuro ou contraste de
fase têm sido usadas para quantificar o número de
bactérias móveis (incluindo espiroquetas) diretamente
na placa dentária (particularmente em locais
subgengivais). Tais organismos estão relacionados com
a gravidade de algumas doenças periodontais, e esta
abordagem tem sido utilizada na clínica para monitorar
locais submetidos ao tratamento. No entanto, a maioria
dos patógenos putativos não pode ser reconhecida
apenas pela morfologia. Para superar este problema, as
células podem ser identificadas por reação com anti-
soros (monoclonais ou policlonais específicos), sondas
de oligonucleotídeos ou marcadas com um marcador
fluorescente (verFiguras 3.3e4.4).
A microscopia eletrônica de varredura e transmissão
provou ser útil no estudo da formação de placa e
também tem sido usada para mostrar que as bactérias
invadem os tecidos gengivais em formas agressivas de
doença periodontal. A microscopia eletrônica requer que
as amostras sejam processadas antes da visualização, e
isso pode distorcer a estrutura da placa. Técnicas não
invasivas, como a microscopia confocal de varredura a
laser, são amplamente utilizadas, com e sem o uso de
sondas específicas (anticorpos ou oligonucleotídeos),
para determinar a verdadeira arquitetura da placa e a
localização de bactérias selecionadas dentro do biofilme
(verFIGO. 3.3ecapítulo 5). A microscopia confocal
envolve a geração de inúmeras imagens focalizadas em
toda a profundidade de uma amostra não tratada (seções
ópticas); software de análise de imagem é então usado
para combinar essas seções e reconstruir a estrutura
tridimensional do espécime original (por exemplo,
consulteFIGO. 4.7). A microscopia confocal mostrou
que a placa tem uma arquitetura mais aberta do que a
indicada anteriormente pela microscopia eletrônica.

NO LOCALMODELOS
Como resultado de alguns dos problemas metodológicos
descritos anteriormente, foram desenvolvidos vários
dispositivos que podem ser usados na boca por voluntários,
contendo superfícies modelo para colonização microbiana,
e que podem ser removidos da boca para amostragem. A
microbiologia da placa de fissura tem sido estudada usando
60 Microbiologia Oral de Marsh e Martin da comunidade microbiana. Este DNA extraído é
fragmentado e sequências adaptadoras curtas são ligadas
em
ou próteses acrílicas foram colocadas em dentes
naturais ou dentaduras em uma posição desejada e
têm sido usadas para estudos do desenvolvimento
estrutural da placa dentária. Os aparelhos removíveis
têm as vantagens adicionais de que experimentos
podem ser realizados nas superfícies quando fora da
boca, o que não seria permitido em dentes naturais,
como o efeito de aplicações regulares de açúcar ou a
avaliação de novos agentes antimicrobianos.

ABORDAGENS MOLECULARES
As limitações e vieses das abordagens de cultura podem
ser evitadas aplicando análises moleculares para
detecção e identificação microbiana, e estas estão sendo
cada vez mais aplicadas para determinar a composição
da microbiota oral (verFIGO. 4.4). Mais comumente, as
sequências do gene do ácido ribonucleico ribossômico
16S (rRNA) são amplificadas por PCR usando primers
oligonucleotídicos bacterianos universais. O gene 16S
rRNA representa um alvo adequado para a identificação
de bactérias, pois as sequências de certas regiões tendem
a ser altamente conservadas para uma determinada
espécie, e a identificação pode ser alcançada usando
primers oligonucleotídicos adequadamente projetados
que são específicos para locais conservados, mas
sequências de flanco que diferem entre as espécies
bacterianas. Originalmente, a abordagem envolveria
primeiro separar os ampli-cons de PCR por clonagem
antes de sequenciar clones individuais e depois fazer a
comparação com sequências existentes em bancos de
dados internacionais. Outros métodos incluem a
extração de ácido nucleico de amostras clínicas seguida
de hibridização com sondas para aproximadamente 40
espécies predeterminadas em uma membrana, em uma
abordagem de tabuleiro de xadrez de ácido desoxi-
riribonucleico (DNA)-DNA. A diversidade de espécies
pode ser comparada executando géis de gradiente em
que a mistura de DNA é separada por tamanho e a
diversidade é medida pelo número de bandas
observadas.
Nos últimos anos, surgiu uma metodologia
metagenômica mais poderosa que contorna a
necessidade de etapas laboriosas de clonagem. O
sequenciamento de alto rendimento é agora a
abordagem metagenômica preferida para analisar
comunidades microbianas e, atualmente, existem vários
métodos diferentes que podem ser usados.
Essencialmente, todas as abordagens de sequenciamento
de alto rendimento envolvem a extração inicial de DNA
cada extremidade dos fragmentos. O DNA é então
desnaturado em DNA de fita simples e capturado
através do uso de primers imobilizados específicos para
uma das sequências adaptadoras. Existem diferentes
plataformas agora disponíveis para sequenciar o DNA.
Os mais comuns são o Roche 454, que usa uma química
de pirosequenciamento, e a Illumina (por exemplo,
MiSeq e HiSeq), que é baseada em uma química de
terminador de corante reversível. A plataforma 454
fornece comprimentos de leitura mais longos do DNA,
mas está sendo substituída pela plataforma Illumina; a
duração da leitura não é tão longa, mas a plataforma
Illumina oferece maior produção e, atualmente, a custos
mais baixos. A tecnologia nesta área está mudando e
evoluindo rapidamente e revolucionou nossa capacidade
de determinar o que está presente em uma amostra
clínica. No entanto, o sequenciamento ainda é tão bom
quanto a qualidade da amostra que é coletada, e essas
abordagens ainda têm algumas limitações e vieses, por
exemplo, os primers não funcionam igualmente bem
para todas as espécies e é mais difícil lisar determinado
órgão -ismos. Pacotes de software dedicados podem ser
usados para montar corretamente as leituras de
sequência e depois compará-las com aquelas mantidas
em bancos de dados como o Human Oral Microbiome
Database (HOMD) (Capítulo 3). Desta forma, pode-se
não só averiguar a composição de comunidades
microbianas inteiras, mas também a detecção de
espécies atualmente classificadas como não cultiváveis.
A metatranscriptômica está sendo desenvolvida para
analisar o RNA mensageiro (mRNA) sintetizado por
comunidades microbianas para determinar o perfil de
expressão gênica desses consórcios. Esta abordagem
não está preocupada com quais organismos estão
presentes, mas está focada no que eles estão fazendo (ou
seja, sua função) no momento da amostragem. Outras
abordagens estão sendo aplicadas para determinar a
função e atividade da microbiota, e estas incluem
metaproteômica (proteínas da comunidade total que são
expressas) e metabolômica (produtos metabólicos que
são produzidos por uma comunidade microbiana).Figura
4.5. As análises moleculares também facilitam a
detecção e localização de microrganismos combinando
hibridização fluorescente in situ (FISH) e microscopia
confocal de varredura a laser (CLSM) (consulteFIGO.
3.3eFIGO. 4.7).
 4Distribuição, Desenvolvimento e Benefícios da Microbiota Oral

Abordagens à análise oral

comunidades microbianas

O que O que é
microorganismos atividade do
estão presentes? comunidade microbiana?

Metagenômica Metatranscriptômica Metaproteômica Metabolô

ADN RNA Proteína Substra

produt

FIGURA 4.5Abordagens moleculares complementares para determinar a composição e atividade metabólica de comunidades microbianas orais.

DISTRIBUIÇÃO DA
MICROBIOTA ORAL
Existe agora um serviço que é fornecido pelo The
Forsyth Dental Institute, Boston, EUA, que permite
RESIDENTE
identificar cerca de 600 espécies bacterianas orais e As populações que compõem a microbiota residente
obter a identificação ao nível de gênero para os 129 da cavidade oral não são encontradas com igual
táxons restantes. A ferramenta de pesquisa Human Oral frequência
Microbe Identification using Next Generation
Sequencing (HOMINGS) é baseada na análise de 16S
rDNA de amostras clínicas usando o sequenciamento de
alto rendimento da Illumina.

PONTOS CHAVE
Existem duas abordagens principais para
determinar a composição da microbiota oral:
- Métodos de cultura: requerem o crescimento de
microrganismos em placas de ágar não
seletivas e seletivas em condições adequadas.
Apenas 50-70% da microbiota oral pode ser
cultivada.
- Métodos moleculares (independentes de
cultura):
abordagens metagenômicas permitem a
detecção de microrganismos cultiváveis
e não cultiváveis.
A função e a atividade da microbiota oral podem
ser determinadas por metatranscriptômica (perfil de
RNA), metaproteômica (perfil proteico) e
metabolômica (produtos metabólicos produzidos).
por toda a boca. A composição do biofilme varia em
superfícies distintas devido às diferenças nas
propriedades biológicas e físicas de cada local. Nas
seções seguintes, a microbiota predominante de
vários locais característicos na cavidade oral será
comparada (FIGO. 4.6,Tabela 4.5). Os detalhes do
principal microrganismo são apresentados
emCapítulo 3.

LÁBIOS E PALATO
Os lábios formam a fronteira entre a microbiota da pele
(que consiste predominantemente de estafilococos,
micrococos e bastonetes Gram-positivos como
Corynebacterium e Propionibacterium spp.) e a da boca
(que contém muitas espécies Gram-negativas e poucos
dos organismos comumente encontrados na superfície
da pele). Os estreptococos anaeróbios facultativos
compreendem uma grande parte da microbiota dos
lábios. Veil-lonella e Neisseria também foram
encontrados, mas apenas em números muito baixos
(<1% do total da microbiota cultivável). Streptococcus
vestibularis é mais comumente recuperado da 'calha'
entre o lábio inferior e as gengivas, e ocasionalmente
anaeróbios pigmentados de preto e fusobactérias foram
detectados; estudos baseados em cultura detectam
apenas entre 3 e 9 espécies desta região. A Candida
albicans pode colonizar as superfícies danificadas da
mucosa labial nos cantos da boca, potencialmente
causando queilite angular.Capítulo 8). Técnicas
moleculares confirmaram a presença de uma variedade
de estreptococos nos lábios, especialmente S. mitis, S.
62 Microbiologia Oral de Marsh e Martin

Bochechas, lábios, palato Dentes

• Descamação • Superfície sem derramamento
Locais estagnados: possível impactação
• A saliva é uma grande influência • alimentar
• A microbiota tem baixa diversidade • Várias microbiotas; variação do site
• Anaeróbios opcionais • Muitos anaeróbios obrigatórios
• Streptococcus spp. predominar • Influenciado pela saliva e GCF
• Alguns patógenos periodontais • Streptococcus, Actinomyces, Veillonella,
persistem invadindo as células bucais Fusobacterium, Prevotella, Treponema,
organismos não cultiváveis

Língua
• Superfície altamente • Anaeróbios facultativos e obrigatórios
papilada
• Streptococcus, Actinomyces, Rothia, Neisseria,alguns anaeróbios Gram-
• Alguns locais negativos
anaeróbicos
• Descamação
• Várias microbiotas
FIGURA 4.6Distribuição da microbiota em locais distintos na boca.
Prevotella spp.). O número de espécies normalmente variou
de 4 a 21 por pessoa em uma pesquisa com 5 pessoas.

orale S. constellatus; alguns anaeróbios obrigatórios

também são detectados ocasionalmente, incluindo P.
melaninogenica.
A microbiota do palato saudável pode apresentar
grandes variações entre os indivíduos, não apenas no
total de unidades formadoras de colônias recuperadas (o
que pode refletir diferenças na área amostrada ou no
sucesso na remoção de organismos), mas também nas
proporções das espécies individuais. A maioria das
bactérias cultiváveis são estreptococos e actinomyces;
veillonel-lae, hemophili e anaeróbios Gram-negativos
também são recuperados regularmente, mas em níveis
mais baixos.Tabela 4.4). A Candida não é isolada
regularmente do palato saudável, exceto quando são
usadas dentaduras; nesta situação, a mucosa do palato
pode ser infectada por C. albicans (estomatite por
dentadura; verCapítulo 8).
Abordagens moleculares independentes de cultura
indicaram uma microbiota mais diversificada em amostras
do palato de adultos saudáveis, incluindo uma variedade de
estreptococos (S. mitis, S. oralis e S. infantis), bem como
Gemella spp., Neisseria spp., Veillonella spp., Capno-
cytophaga gingivalis e Prevotella melaninogenica (e outras
 TABELA 4.4 Microbiota cultivável
predominante da mucosa palatina humana
saudável
Porcentagem de Percentagem
total cultivável isolamento
frequência
Microrganismo microbiota (%) (%)
Estreptococo 52 100
Actinomyces 15 100
Lactobacillus 1 87
Neisseria 2 93
Veillonella 1 100
Prevotella 4 100
Candida +* 7
* Presente, mas em números muito baixos para contar.

BOCHECHA
Os estreptococos são as bactérias predominantes
cultivadas da bochecha (mucosa bucal),
especialmente membros do grupo mitis, e o H.
parainfluenzae também é comumente isolado (Tabela
4.5). Simonsiella spp. está
 4Distribuição, Desenvolvimento e Benefícios da Microbiota Oral

TABELA 4.5 Proporções de algumas populações bacterianas cultiváveis em diferentes

locais na cavidade oral normal
Bactéria Mucosa bucal Dorso da língua Placa supragengival Placa subgengival
Streptococcus sanguinis - - ●●● -
S. salivarius ●● ●●● ● -
S. oralis / S. mitis ●● ●● ●●●● ●●
estreptococos mutantes - - ● -
Actinomyces naeslundii ● ●● ●●● ●●
Neisseriaespécies ● ● ● -
Veillonellaespécies ● ●● ●●● ●●
Prevotellaespécies - ● ●● ●●●
Fusobacteriumespécies - ● ●● ●●●
Porphyromonasespécies - - ● ●●
Treponemaespécies - - - ●●
Normalmente não está presente neste site
● detectado ocasionalmente, mas geralmente em números baixos ●● detectado geralmente, em números moderados
●●● detectado com frequência e em números substanciais
●●●● sempre detectado e em grande número

isolado principalmente das células da bochecha de
humanos e animais. Os anaeróbios obrigatórios não
estão presentes em grande número, embora espiroquetas
e outros organismos móveis tenham sido observados por
microscopia como aderidos à mucosa bucal. As técnicas
moleculares confirmaram a presença de várias espécies
de estreptococos nas células bucais, bem como
Granulicatella e Gemella spp.; anaeróbios obrigatórios
são menos comumente detectados, embora Veillonella e
Prevotella spp. pode estar presente. Entre 4 e 20
espécies podem ser detectadas em uma amostra da
mucosa bucal.
Estudos recentes, nos quais FISH foi combinado com
microscopia confocal, mostraram que algumas das
espécies implicadas na doença periodontal (A. actino-
mycetemcomitans, P. gingivalis, F. nucleatum, P.
intermedia, T. forsythia) podem ganhar refúgio dentro
das células epiteliais bucais em pessoas saudáveis, onde
elas persistem como comunidades polimicrobianas
intracelulares (verFIGO. 4.7). Além disso, F. nucleatum
pode transportar espécies não invasivas, como S.
cristatus, em células epiteliais orais humanas via
coagregação interbacteriana (vercapítulo 5).
Estreptococos foram os organismos mais comuns
encontrados
intracelularmente em cerca de 30% das células
epiteliais bucais, seguido por Granulicatella adiacens
e Gemella haemo-lysans. Esses estudos implicam que
as células da mucosa oral podem servir como um
reservatório para potenciais patógenos periodontais.
LÍNGUA
O dorso da língua tem uma superfície altamente papilada
que fornece uma grande área de superfície e suporta uma
maior densidade bacteriana e uma microbiota mais
diversificada do que outras superfícies da mucosa
oral.Tabela 4.5). Os estreptococos são o grupo de bactérias
mais numeroso (aproximadamente 40% da microbiota
cultivável total) com predominância de organismos do
grupo salivarius e mitis. Estreptococos anaeróbicos também
foram isolados enquanto Rothia mucilaginosa é encontrada
quase exclusivamente na língua. Outros grandes grupos de
bactérias (e suas pró-porções) incluem Veillonella spp.
(16%), bastonetes Gram-positivos (16%) dos quais
Actinomyces naeslundii e A. odon-tolyticus são comuns e
hemofilia (15%). Tanto os anaeróbios obrigatórios
pigmentantes (Prevotella intermedia, P. melaninogenica)
quanto os não pigmentantes podem ser recuperados
64 Microbiologia Oral de Marsh e Martin

UMA

FIGURA 4.7Colonização intracelular de células epiteliais bucais. (A) Reconstrução tridimensional de uma célula epitelial bucal (BEC). Bactérias
reconhecidas apenas por uma sonda bacteriana universal são mostradas em vermelho sólido, enquanto a colocalização de Aggregatibacter
actinomycetemcomitans e sondas universais é representada por uma estrutura de arame verde sobre um interior vermelho. As superfícies BEC
reconstruídas são apresentadas em azul. As cores vermelha e verde são atenuadas quando as massas bacterianas são intracelulares e mais
brilhantes quando as bactérias parecem se projetar para fora da superfície. A grande massa indicada pelas setas vermelhas e verdes é uma
unidade coesa contendo A. actinomycetemcomitans em proximidade direta com outras espécies. Publicado com permissão: Rudney et al, J
Dent Res 2005 84: 59–63. (B) Célula bucal dominada por estreptococos presumidos que foram marcados por uma sonda bacteriana universal
(vermelho). A amostra também foi tratada com uma sonda específica para Fusobacterium nucleatum, e a célula bucal mostrada continha várias
células amarelas de F. nucleatum (setas) em estreita associação com cocos. Publicado com permissão: Rudney et al, J Dent Res 2005 84:
1165–1171.
 4Distribuição, Desenvolvimento e Benefícios da Microbiota Oral 65

TABELA 4.6 A microbiota cultivável predominante da língua de crianças pré-escolares

Frequência de
Bactéria Proporção média (%) isolamento (%)
Streptococcus anginosus 4.7 42
Streptococcus oralis 3.8 30
Streptococcus mitis 11,8 75
Streptococcus mutans 1,0 8
Streptococcus sobrinus 0,5 2
Streptococcus salivarius 22,3 94
Streptococcus sanguinis 7.6 58
Estreptococos totais 51,7
Actinomyces naeslundii 4.2 46
Actinomyces odontolyticus 1.1 17
Rothia dentocariosa 0,9 21
Rothia mucilaginosa 5,5 46
Corynebacterium matruchotii 0,1 4
Lactobacillusspp. 0,3 6
Bastonetes Gram-positivos totais 12.1
Neisseriaspp. 20.2 > 90
Veillonellaspp. 6.3 73
Cocos Gram-negativos totais 26,5
Prevotellaspp. 0,4 15
Fusobacteriumspp. 0,6 25
Leptotriquiaspp. 0,2 13
Haemophilusspp. 0,6 19
Aggregatibacterspp. 0,1 4
Capnocytophagaspp. 0,1 6
Bastonetes Gram-negativos Aeróbios 2.3 40
Bastonetes Gram-negativos Anaeróbios 1,8 40
Leveduras 1,0 4

Os dados são de 9 crianças, de 8 a 13 meses.

da língua, e este local é considerado um potencial em lactentes (de 8 a 13 meses). Os estreptococos

reservatório (junto com as amígdalas) para alguns dos
organismos implicados nas doenças periodontais.
Organismos incluindo lactobacilos, leveduras,
fusobactérias, espiroquetas e outras bactérias móveis
foram encontrados em baixo número.<1% da microbiota
total) na língua.
Achados semelhantes foram obtidos a partir de um
estudo abrangente da superfície dorsal anterior da língua
representaram cerca de 50% da microbiota, sendo S.
salivarius e S. mitis as espécies predominantes.Tabela
4.6). Rothia mucilaginosa foi recuperada em quase
metade das amostras. Altas proporções de Neisseria
(20%) também foram encontradas, juntamente com
Actinomyces (5%) e espécies Gram-negativas
ocasionais, incluindo hemofilia, fusobacteria, Prevotella,
Capnocytophaga e Aggregatibacter.
66 Microbiologia Oral de Marsh e Martin os principais grupos de bactérias cultivadas a partir da
placa.Tabela 4.5). Estreptococos mutantes
Estudos moleculares demonstraram uma microbiota
ainda mais diversificada a partir de amostras do dorso
da língua. DNA – Técnicas de checkerboard de DNA
encontraram uma série de bactérias Gram-negativas na
língua, incluindo P. melaninogenica, V. parvula e C.
gingivalis, enquanto outros estudos comumente
detectaram espécies de Granulicatella e Gemella.
Estudos de sequências do gene 16S rRNA (verCapítulo
3) mostraram que cerca de 30% das populações
bacterianas detectadas eram exclusivas da língua,
sugerindo que as propriedades desse habitat eram
distintas das de outras superfícies orais. Os isolados
mais comuns foram Rothia muci-laginosa, S. salivarius
e Eubacterium spp.; cerca de 16 a 22 espécies foram
detectadas em cada amostra de língua.
O mau odor oral está associado à microbiota da
língua (veja mais adiante). Uma maior carga bacteriana,
especialmente de anaeróbios Gram-negativos (incluindo
Porphy-romonas, Prevotella e Fusobacterium spp.), foi
isolada da língua de indivíduos com odor elevado. Uma
microbiota ainda mais diversificada foi encontrada
quando métodos moleculares independentes de cultura
foram aplicados; As espécies associadas à halitose
incluem Atopobium parvulum, Dialister spp.,
Eubacterium sulci, Solobacte-rium moorei, um
Streptococcus não caracterizado e membros do grupo
não cultivável, TM7 (verFIGO. 3.3, B). O mau odor oral
envolve a produção de compostos de enxofre pela
microbiota residente (ver mais adiante neste capítulo).

DENTES E PRÓTESES
A comunidade microbiana associada aos dentes e
dentaduras é referida como placa dentária e placa de
dentadura, respectivamente. A composição do
biofilme varia em superfícies dentárias distintas
(como superfície lisa, proximal, fissura ou sulco
gengival) devido a diferenças nas condições
ambientais locais.Capítulo 2). Os termos
supragengival e subgengival placa descrevem
amostras colhidas acima e abaixo da margem da
gengiva, respectivamente (verFIGO. 2.2). A
composição detalhada da placa dental desses locais e
dentaduras é fornecida emcapítulo 5. Como os dentes
e as próteses são superfícies que não descamam, os
maiores números de microrganismos são encontrados
em locais estagnados que proporcionam proteção
contra as forças de remoção.
Os bastonetes e filamentos Gram-positivos
(principalmente espécies de Actino-myces) estão entre
 nutrientes, potencial redox e receptores para
fixação.Capítulo 2).

e membros dos grupos mitis e anginosus de

estreptococos são encontrados em maior número nos
dentes, enquanto que, em contraste com as
superfícies mucosas, S. salivarius é apenas um
componente menor da placa dentária. Os anaeróbios
obrigatórios são encontrados em grande número,
particularmente na fenda gengival, e as espiroquetas
orais são quase exclusivamente associadas a essa
região. Anaer-obes obrigatórios também são
comumente isolados de dentaduras. Na placa, há altas
proporções de bactérias pertencentes a grupos que
ainda não podem ser cultivados em laboratório.

SALIVA
Embora um mililitro de saliva contenha até 10 8micro-
organismos, não é considerado como tendo sua própria
microbiota residente. A taxa normal de deglutição
garante que as bactérias não possam ser mantidas na
boca pela multiplicação na saliva. Os organismos
encontrados são derivados de outras superfícies,
principalmente da língua (Tabela 4.5), de onde são
deslocados por forças de remoção oral, como fluxo de
saliva e fluido crevicular gengival, mastigação e
procedimentos de higiene bucal. O perfil microbiano da
saliva (em particular, o nível de estreptococos mutans
e/ou lactobacilos) tem sido usado como um indicador da
suscetibilidade à cárie de um indivíduo, e kits
comercialmente disponíveis para sua cultura são um
meio conveniente de detectá-los. Pessoas com altas
contagens dessas bactérias potencialmente cariogênicas
são consideradas “em risco” e podem ser alvo de
higiene oral intensa, terapia antimicrobiana e
aconselhamento dietético (verCapítulo 6).

PONTOS CHAVE
As populações microbianas orais não são distribuídas
uniformemente na boca. Grandes diferenças ocorrem
na prevalência de espécies individuais em
determinados sítios orais.Tabela 4.5;
FIGO. 4.6), resultando em cada habitat tendo uma
característica microbiota. A descamação garante que a
carga microbiana na maioria das superfícies mucosas seja
baixa, embora as superfícies papiladas da língua
promovam o acúmulo de comunidades microbianas
complexas, incluindo anaeróbios obrigatórios. A placa
dentária, especialmente em locais estagnados nos dentes,
abriga a microbiota mais diversificada.
Os principais fatores que influenciam a distribuição
da microbiota oral incluem pH, disponibilidade de
 4 Distribuição, Desenvolvimento e Benefícios da Microbiota Oral

Polímeros extracelulares [EPS]: Polímeros intracelulares [IPS]:

• tipo glicogênio
• glucano; mutan (glucosiltransferases) (armazenamento)
• frutano (frutosiltransferase)

SUCROSE

Produtos finais da glicólise:

Ácido lático, outros ácidos
e energia

FIGURA 4.8O metabolismo da sacarose por bactérias orais.

fome) e mudanças ambientais exigem que a

microbiota oral possua flexibilidade bioquímica.

METABOLISMO DAS BACTÉRIAS

Orais
A persistência da microbiota oral residente depende
da capacidade dos micróbios de se fixarem às
superfícies orais, obterem nutrientes e se
multiplicarem. Os nutrientes são derivados
principalmente do metabolismo de substratos
endógenos presentes na saliva e no fluido crevicular
gengival (GCF), e estes muitas vezes requerem a
ação concertada de consórcios de
microrganismos.capítulo 5; marFiguras 5.11e5.14).
Sobrepostos a esses componentes estão os nutrientes
exógenos que são fornecidos intermitentemente pela
dieta; os mais significativos para a microbiota oral
são carboidratos dietéticos fermentáveis e nitrato. A
expressão gênica microbiana responderá a mudanças
nas condições ambientais; As bactérias são capazes
de detectar seu ambiente através de vias de
transdução de sinal de dois componentes ligados à
membrana, consistindo em um sensor de histidina
quinase e um regulador de resposta. Esses sistemas
permitem que as bactérias detectem sinais e
respondam às mudanças ambientais por ativação ou
repressão de genes específicos. As condições
flutuantes de fornecimento de nutrientes (festa e
METABOLISMO DE CARBOIDRATOS
A maior atenção tem sido dada ao metabolismo dos
carboidratos por causa da relação entre os açúcares da
dieta, a produção de ácido e a cárie dentária.Indivíduo-
ter 2e6). O destino metabólico dos carboidratos
dietéticos é ilustrado de forma simplificada emFigura
4.8.
A sacarose (um dissacarídeo de glicose e frutose)
é o agente adoçante dietético mais amplamente
utilizado e pode ser:
• degradado por invertases bacterianas
extracelulares (α-glicosidases) e as moléculas
resultantes de glicose e frutose absorvidas diretamente
pelas bactérias;
• transportado intacto como o dissacarídeo ou
fosfato dissacarídeo e clivado dentro da célula por
uma invertase intracelular ou uma hidrolase de
sacarose fosfato;
• usado extracelularmente por glicosiltransferases. As
glicosiltransferases (GTF) produzem glucanos solúveis e
insolúveis (com liberação de frutose), que
são importantes na maturação do biofilme
(verCapítulo 5) e na consolidação da fixação
bacteriana aos dentes. As frutosiltransferases
(FTF) produzem frutanos (e liberam glicose), que
podem ser metabolizados por outros
microrganismos.FIGO. 4.9).
Amidos, que contêm misturas de amilose e
amilopectina, podem ser quebrados em seus
constituintes
68 Microbiologia Oral de Marsh e Martin

Carboidratos dietéticos

Sacarose Lactose Amido

Invertase
Amilase
Maltose

GTF FTF
Glicose
Frutose

Glucan
Intracelular
Extracelular Várias placas
frutano armazenar
polissacarídeos bactérias compostos
Outras

Matriz de placa Esmalte Láctico De outros

aderência dissolução ácido ácidos

Veillonella
FIGURA 4.9Diagrama simplificado para mostrar o destino metabólico dos carboidratos da dieta. GTF, Glucosiltransferase; FTF,
frutosiltransferase.
• o sistema de transporte de fosfoenolpiruvato
fosfotransferase (PEP-PTS);
açúcares por amilases de origem salivar e bacteriana. • o sistema de metabolismo múltiplo de açúcares
Alguns estreptococos (S. gordonii, S. mitis) são (Msm); e
capazes de se ligar à amilase, o que lhes confere uma • uma glicose permease.
capacidade metabólica adicional. Streptococcus O PEP-PTS é um sistema de transporte de açúcar de alta
mutans possui um espectro de enzimas com potencial afinidade para mono e dissacarídeos em bactérias orais
para catabolizar amidos dietéticos, incluindo uma sacarolíticas (Streptococcus, Actinomyces, Lactobacillus).
pulula-nase extracelular, que degrada pululana e
desramifica ami-lopectina, bem como uma amilase;
há também uma endodextranase extracelular e uma
exo-dextranase intracelular. Aspectos do
metabolismo dos carboidratos serão considerados
com mais detalhes nas seções seguintes.

Transporte de açúcar e produção de ácido

Todos os substratos devem ser transportados através
da membrana citoplasmática e para dentro da célula
bacteriana se forem usados para a produção de
biomassa ou como fonte de energia. As bactérias
orais podem transportar carboidratos por:
O PEP-PTS é um sistema de translocação de grupo
mediado por carreador que envolve a transferência de
fosforil de PEP através de duas proteínas
citoplasmáticas gerais não específicas de açúcar,
proteína histidina (HPr) e enzima I (E1), para uma
membrana específica de açúcar. complexo enzimático II
ligado (EII), que catalisa o transporte e a fosforilação do
açúcar que chega. O grupo fosfato de E1~P, gerado a
partir de PEP, é transferido para HPr, formando HPr~P,
e depois para o complexo EII.
O PEP-PTS é constitutivo de alguns açúcares, como
glicose, manose e sacarose, mas deve ser induzido para
o transporte de lactose e álcoois de açúcares, como
manitol e sorbitol. A atividade do PEP-PTS em
estreptococos orais é modulada pelas condições
ambientais. É ideal em condições de limitação de
carboidratos, pH neutro e baixas taxas de crescimento
bacteriano. Em contraste, é reprimido em condições de
excesso de açúcar, baixo pH e altas taxas de
crescimento. Isso é significativo porque os
estreptococos orais na placa dental estão continuamente
expostos a condições transitórias de baixo pH e alta
concentração de açúcar.
Muitas cepas de S. mutans possuem um segundo
sistema para transportar açúcares para dentro da célula
(o sistema de transporte Msm). O sistema Msm é capaz
de transportar vários açúcares comuns, incluindo
sacarose, bem como melibiose, rafinose e maltose (um
derivado do amido). O papel exato deste sistema na
ecologia da placa
 4Distribuição, Desenvolvimento e Benefícios da Microbiota Oral

acetil também são induzidas. Estes incluem N-

acetilneuraminato piruvato liase, N-acetilglucosamina-
é desconhecido, mas pode estar envolvido no
6-fosfato desacetilase e glucosamina-6-fosfato
transporte dos produtos de degradação da degradação
desaminase. Apenas baixas concentrações de lactato são
extracelular do polissacarídeo durante os períodos
produzidas a partir do metabolismo do ácido siálico; os
entre as refeições, quando o fornecimento dos
principais produtos da fermentação são o formato e o
monossacarídeos e dissacarídeos dietéticos mais
etanol.
refinados é insignificante.
Em altas concentrações de açúcar, a atividade de
PEP-PTS é reprimida e o transporte de açúcar é
aumentado por uma permease de glicose dependente de
ATP; este sistema também funciona em altas taxas de
crescimento e baixo pH. O açúcar é transportado para
dentro da célula onde é fosforilado na superfície interna
da membrana. Algumas bactérias podem formar
glicogênio sob condições de excesso de carboidratos
para reduzir os níveis intracelulares tóxicos de
intermediários glicolíticos. Organismos com essa
capacidade, portanto, são capazes de lidar melhor do
que a maioria das outras bactérias orais com as
condições flutuantes de festa e fome na boca em termos
de captura de açúcares alimentares.
A microbiota oral residente também pode obter
carboidratos para biomassa e energia a partir do
catabolismo de glicoproteínas do hospedeiro presentes
na saliva (como mucinas) e no GCF (por exemplo,
transferrina). As bactérias produzem uma gama de
glicosidases que podem remover açúcares
sequencialmente das cadeias laterais de oligossacarídeos
dessas glicoproteínas, e estas podem ser transportadas
por sistemas como o PEP-PTS. Geralmente, as bactérias
interagem sinergicamente para degradar totalmente
essas moléculas.capítulo 5), uma vez que nenhum
organismo pode otimizar produzir todas as enzimas
necessárias. A produção de ácido a partir dessas
glicoproteínas é lenta em comparação com a dos
açúcares exógenos e, consequentemente, não causaria
desmineralização significativa do esmalte.
Streptococcus oralisé altamente prevalente, sendo
encontrado na maioria das superfícies orais; também
pode atuar como patógeno oportunista e é comumente
isolado de casos de endocardite infecciosa. As
atividades de sialidase (neuraminidase) e N-
acetilglucosaminidase são induzidas quando S. oralis
cresce na presença de glicoproteínas, e essas enzimas
clivam ácido siálico e N-acetilglucosamina,
respectivamente, das cadeias laterais de
oligossacarídeos. Esses açúcares são então transportados
para dentro da célula, e as principais enzimas
intracelulares associadas ao catabolismo de açúcares N-
 célula por vazamento ou em simportação com substratos
Glicose G-6-P F-1,6-DP
como aminoácidos. Assim, uma vez iniciado o processo,
não é necessária energia metabólica para o efluxo de
Piruvato PEP GLY-3-P lactato,

Piruvato liase
Acetil CoA
Lactato
desidrogenase

Formato
Lactato s Acetato Etanol
produtos de metabolism
FIGURA 4.10Formação de fim açúcar o
por estreptococos mutans. G-6-P, Glicose-6-fosfato; F-1,6-
DP, frutose-1,6-difosfato; GLY-3-P, gliceraldeído-3-fosfato;
PEP, fosfoenolpiruvato.

Uma vez que os açúcares tenham sido

transportados para a célula bacteriana, eles podem ser
usados em vias anabólicas para gerar biomassa ou
podem ser decompostos em ácidos orgânicos (que
são posteriormente excretados) para gerar energia. A
produção de ácido tem sido intensamente estudada
devido ao seu papel na desmineralização do esmalte.
As bactérias catabolizam açúcares por glicólise em
piruvato; o destino do piruvato dependerá do
organismo em particular e da disponibilidade de
oxigênio. A maioria das bactérias orais metabolizam
o piruvato anaerobicamente em ácidos orgânicos.
Estreptococos orais convertem piruvato em lactato
pela lactato desidrogenase quando os açúcares estão
em excesso, enquanto formato, acetato e etanol são
os produtos do metabolismo por estreptococos
mutans e S. sanguinis (mas não S. salivarius) sob
limitação de carboidratos.FIGO. 4.10). Outros
gêneros bacterianos produzem acetato, butirato,
propionato e formato como produtos primários do
metabolismo.
O mecanismo de excreção de ácido lático em S.
mutans envolve a translocação de lactato e prótons
através da membrana celular como ácido lático em um
processo eletroneutro mediado por carreador. Após a
adição de um substrato fermentável às células, o lactato
começa a se acumular e os prótons são bombeados para
fora da célula por uma ATP sintase (um F 1F0-ATPase).
Isso gera um gradiente de pH transmembrana, que então
atua como força motriz para transportar o lactato como
ácido lático para fora da célula. Uma vez que este
processo é energizado, a ATP sintase só é necessária
para manter o gradiente de pH se os prótons entrarem na
70 Microbiologia Oral de Marsh e Martin Organismos tolerantes a ácidos, como estreptococos
mutans e lactobacilos, têm níveis mais altos de atividade
de ATP sintase, e o pH ótimo para sua atividade é
maximizando assim o retorno de energia (ATP) do
menor do que para espécies menos tolerantes, como S.
catabolismo de carboidratos.
sanguinis ou A. naeslundii.
Espécies diferentes (e mesmo cepas dentro de uma
espécie) produzem ácido em taxas diferentes e
variam no pH terminal alcançado e em sua
capacidade de sobreviver sob tais condições.
Geralmente, os estreptococos mutantes produzem
ácido nas taxas mais rápidas, enquanto os
lactobacilos geram o pH ambiental mais baixo;
ambos os grupos também são acidúricos e podem
tolerar condições de acidez que a maioria das outras
bactérias orais considerariam inibitórias ou mesmo
letais; os mecanismos bioquímicos por trás dessa
tolerância são descritos mais adiante.
Variações são encontradas nos perfis de ácidos
encontrados na placa em diferentes momentos do dia.
Ácidos acético, succínico, propiônico, valérico, capróico
e butírico são encontrados na placa humana amostrada
após jejum noturno. Esses perfis refletem a
heterofermentação e o catabolismo de aminoácidos.
Após a exposição à sacarose, a concentração de ácidos
voláteis cai, enquanto o ácido lático torna-se o produto
de fermentação predominante. Tal mudança no
metabolismo estimulará a desmineralização.

Tolerância ácida e adaptação ao baixo pH

Embora muitas das bactérias sacarolíticas
encontradas na placa dentária possam gerar um pH
terminal baixo a partir do metabolismo do açúcar,
poucas espécies podem sobreviver a tais condições
por períodos prolongados. Uma das principais
características distintas de bactérias cariogênicas,
como estreptococos mutans e lactobacilos, é sua
capacidade de tolerar um estresse de baixo pH. Por
exemplo, as células de S. mutans não foram afetadas
pela exposição por uma hora em pH 4,0, enquanto
menos de 0,01% das células de algumas espécies de
estreptococos sobreviveram a este tratamento.
A sobrevivência microbiana em ambientes ácidos
depende da habilidade da célula em manter a
homeostase do pH intracelular. Os mecanismos pelos
quais S. mutans consegue isso incluem:
• extrusão de prótons via ATP sintase translocadora
de prótons associada à membrana (H+/ ATPase), e
• efluxo do produto final ácido (ver seção
anterior). Esses mecanismos garantem que o pH
intracelular
permanece mais alto (ou seja, mais alcalino) do que o
ambiente externo durante a produção de ácido.
 estratégias para armazenar esses carboidratos durante
sua breve exposição a essas fontes de energia. Esses

TABELA 4.7 Estratégias metabólicas

adotadas por Streptococcus mutans para
lidar com o estresse de baixo pH
Estratégia metabólica
• aumento da atividade glicolítica
• mudança para um pH mais baixo ideal para transporte
de glicose, glicólise e impermeabilidade de prótons
• diminuição da atividade de componentes específicos do
sistema de transporte de açúcar PEP-PTS
• aumento da atividade do H+/ ATP sintase
• maior capacidade de manter gradientes de pH
transmembrana em valores de pH mais baixos
• mudança para o metabolismo homofermentativo
• síntese de proteínas de resposta ao estresse

Streptococcus mutanssofre uma alteração específica

em sua fisiologia para sobreviver em um ambiente
ácido.Tabela 4.7), proporcionando às células uma
vantagem competitiva em pH baixo sobre organismos
que estão associados à saúde do esmalte e que não
possuem essa resposta, como S. sanguinis. Outras
espécies lidam com o estresse de um baixo pH
ambiental regulando positivamente os genes envolvidos
na produção de base. Por exemplo, a expressão de
urease (ureia é convertida em duas moléculas de
amônia) por S. salivarius é aumentada
significativamente em pH baixo, enquanto o sistema
arginina deiminase (que degrada arginina em ornitina,
CO2e amônia) de S. sanguinis é ativo em valores de pH
mais baixos (pH 4,0) do que pode crescer (pH 5,2) ou
realizar glicólise. Várias proteínas de estresse também
são reguladas positivamente quando os estreptococos
são expostos a pH baixo.
A exposição repetida de bactérias orais a períodos
de baixo pH permite que algumas células se adaptem
bioquimicamente a condições ácidas e se tornem
mais tolerantes a ácidos. Alguns estreptococos não
mutans sobreviveram melhor e tornaram-se mais
ácidos quando cultivados em pH intermediário (cerca
de pH 5,5) por até 90 minutos e depois expostos a pH
baixo (pH 4,0 por uma hora).

Produção de polissacarídeos
As bactérias orais estão sujeitas a ciclos contínuos de
festa e fome em relação aos carboidratos da dieta. Como
consequência, a microbiota residente desenvolveu
 4Distribuição, Desenvolvimento e Benefícios da Microbiota Oral

dentes em modelos animais. Em contraste, o gene gtfD

codifica uma enzima dependente de primer responsável
As estratégias ajudam a evitar os efeitos letais do
pela formação de glucano, predominantemente comα, 1-
acúmulo de intermediários glicolíticos intracelulares e
6 vinculado
fornecem uma fonte de carbono e energia para os
períodos subsequentes de fome. A estratégia mais
comum é armazenar esses carboidratos como
polissacarídeos intracelulares (IPS) (verFiguras
4.8e4.9), e muitas espécies de estreptococos orais
podem sintetizar polímeros que se assemelham ao
glicogênio (1,4-α-glucano), embora outros polímeros
também possam ser formados. O metabolismo de IPS
em ácido é um fator de virulência para S. mutans, e
mutantes defeituosos nesta propriedade causam menos
cárie em modelos animais.
Muitas espécies de bactérias orais também são
capazes de sintetizar polissacarídeos extracelulares
(EPS) a partir de carboidratos, especialmente da
sacarose.Tabela 4.8; marFigos 4.8, 4.9 e FIG. 4.11).
Os polissacarídeos podem ser solúvel ou insolúvel; as
primeiras são mais lábeis e podem ser metabolizadas
por outras bactérias, enquanto as últimas contribuem
muito para a integridade estrutural da placa dentária
(matriz da placa; vercapítulo 5) e pode consolidar a
fixação de bactérias na placa. A sacarose tem uma
propriedade única como substrato em que a ligação
entre as porções de glicose e frutose tem energia
suficiente na clivagem para suportar a síntese de
polissacarídeos. Os polissacarídeos formados são
glucanos ou frutanos, e são sintetizados por GTFs e
FTFs, respectivamente:

n -sacaroseglicosiltransferase→(glucano)uma +n-frutose f-
frutosiltransferase
sacarose →(frutano)uma +uma-glicose

Os GTFs são divididos em quatro grupos,

dependendo se eles produzem um dextrano solúvel (as
enzimas GTF-S sintetizam predominantementeα, 1-6
glucano ligado) ou um glucano insolúvel (enzimas GTF-
I sintetizam predominantementeα, 1-3 polímeros), e se
eles requerem ou não um primer dextrano para a
atividade. Strep-tococcus mutans possui três GTFs
(codificados pelos genes: gtfB, gtfC e gtfD) que
sintetizamα, 1-3-eα, polímeros de glucano ligados em 1-
6 (Tabela 4.8). Em S. mutans, os genes gtfB e gtfC
codificam enzimas que produzem glucanos insolúveis
em água, consistindo principalmente deα, 1-3 ligações.
Esses produtos gênicos contribuem para a adesão
celular, formação e estrutura da placa, e também são
essenciais para o início da cárie em superfícies lisas de
 aminoácidos)

TABELA 4.8 Bactérias produtoras de semelhante ao

polissacarídeos extracelulares encontradas Neisseriaspp. Sacarose glicogênio
na boca * Onde conhecido.
†
Não requer substrato específico.
Tipo de polímero ‡
Algumas cepas produzem um frutano.
(com §
Algumas cepas produzem um glucano.
Carboidrato predominante
Bactéria substrato ligações*)

unidades de glicose, que é muito mais solúvel em água.

Estreptococo Sacarose Insolúvel em água e
A estrutura básica de alguns glucanos é mostrada
mutans glucanos solúveis α,
emFigura 4.11.
1–3-; α, 1–3- +
1–6-; α, 1-6-.
Streptococcus mutanspossui um único FTF
(produzido pelo gene ftf), que catalisa a incorporação
Sacarose Frutano 2, 1 – β-
do componente frutose da molécula de sacarose em
Estreptococo Sacarose Água insolúvel
sangüíneo‡ glucano α, 1–3- + α,
1–6-
Glucano solúvel em
Sacarose água
(dextrano) α, 1-6-

Estreptococo Sacarose Frutano (levan) β,

salivarius§ 2–6-
Actinomyces Sacarose Frutano (levan) β,
naeslundii 2–6-
†

Heteropolissacarídeo
(60% N-acetil
glucosamina)

Lactobacillus Glucan
sp. Heteropolissacarídeo

Eubactéria Heteropolissacarídeo
spp. (predominantemente
acetato)
Homopolissacarídeo
(D-glicero-D-
galacto-heptose)

Rothia Glicose Heteropolissacarídeo

dentocariose Sacarose Levan

Rothia Heteropolissacarídeo
mucilaginosa (hexoses,
hexosaminas,
72 Microbiologia Oral de Marsh e Martin

6
CH2 CH2 CH2 CH2
5
O O O O
O O O O O
4 1

3 2

O
CH2 CH2 CH2
O O O
O O O

O
CH2
O
O
Porção mostrando ligação 1-6 e ramificação em C3

6
HOH2C O H2 C O H2C O H2 C O
O O O O
5 2

4 3 CH2OH CH2OH CH2OH

1
CH2

H2C O H2 C O H2C O
O O O

CH2OH
FIGURA 4.11Estrutura de parte de uma cadeia de glucano, mostrando ligações α, 1-6, - e α, 1-3, - (em cima) e um frutano,
mostrando uma ligação α, 2-6, - (em baixo).
um polímero de frutano com estrutura do tipo inulina,
composto principalmente porβ, 2-1 unidades de
frutose ligadas. Os frutanos não estão envolvidos na
adesão e atuam mais como compostos extracelulares
de armazenamento de carboidratos nos biofilmes da
placa, sendo decompostos em frutose (que pode ser
transportada pelo PEP-PTS para glicólise) por
hidrolases de frutanos produzidas por uma variedade
de bactérias orais.
Porção mostrando 2 - 6
CH2OH CH2OH ligação e ramificação em C1
Outros estreptococos possuem diferentes números de
genes GTF. Quatro atividades de GTF foram detectadas
em S. sobrinus, incluindo um GTF-I dependente de
primer, que sintetiza um glucano comα, 1-3 resíduos de
glicose ligados. Existem dois produtos gênicos que
produzem polímeros comα, 1-3 eα, 1-6 moléculas de
glicose ligadas e um GTF-S independente de primer
produzindo um glucano linear composto
predominantemente porα, 1-6 resíduos.
Streptococcus salivarius também produz quatro
GTFs, embora suas propriedades sejam diferentes das
descritas para S. sobrinus. Em contraste, S. gordonii
possui apenas um único GTF, embora este possa
formar glucano solúvel e insolúvel dependendo das
condições ambientais prevalecentes. Streptococcus
salivarius também produz um frutano, mas ao
contrário do S. mutans, é um levano com
característicaβ, 2-6 ligação (Tabela 4.8). O FTF de S.
salivarius é celular associados, enquanto os da
maioria dos outros organismos são secretados.
Outras espécies que produzem polissacarídeos
extracelulares estão listadas emTabela 4.8. Os
heteropolissacarídeos são geralmente de composição
complexa; para
 4Distribuição, Desenvolvimento e Benefícios da Microbiota Oral

Piruvato+NH3 Alanina+H2O
Por exemplo, o polímero produzido por uma cepa de
Actino-myces naeslundii contém N-acetil glucosamina
(62%), galactose (7%), glicose (4%), ácidos urônicos
(3%) e pequenas quantidades de glicerol, ramnose,
arabinose e xilose. Actinomyces naeslundii também
possui atividade FTF e sintetiza um frutano com
estrutura do tipo levana contendo principalmenteβ, 2-6
ligações. Alguns dos homopolissacarídeos e
heteropolissacarídeos podem ser metabolizados por
outras bactérias orais; esse aspecto será
discutidocapítulo 5.

METABOLISMO DO NITROGÊNIO
A caseína pode ser incorporada na placa dentária e
degradada. Streptococcus sanguinis demonstrou ter
atividade endopeptidase e exopeptidase (terminal amino
e terminal carboxi) que pode clivar proteínas como a
caseína em uma variedade de fragmentos peptídicos. A
atividade da exopeptidase é principalmente associada à
célula e regulada positivamente em pH alto, enquanto a
atividade da endopeptidase é extracelular e ideal em pH
neutro. O Streptococcus sanguinis pode liberar
rapidamente arginina dos peptídeos C-terminais,
convertendo a arginina liberada em energia (e carbamil
fosfato) através da via da arginina deiminase. A uréia
está presente em concentrações relativamente altas (200
mg/L) na saliva, e algumas espécies orais (por exemplo,
A. naeslundii e S. salivarius) possuem atividade de
urease, que pode converter a uréia em dióxido de
carbono e amônia. Em pH ácido, A descarboxilação de
aminoácidos produz dióxido de carbono e aminas,
enquanto em pH alto, a desaminação produz amônia e
cetoácidos, que podem ser convertidos em ácidos
acético, propiônico e possivelmente isobutírico e n-
butírico. Por exemplo, alguns patógenos periodontais
podem converter histidina, glutamina ou arginina em
acetato e butirato. Desta forma, o metabolismo de
aminoácidos pode ser um importante mecanismo pelo
qual os microrganismos orais contrariam os extremos de
pH causados pelo catabolismo de carboidratos e uréia.
Os aminoácidos essenciais podem ser obtidos do
ambiente ou sintetizados pela célula. A amônia pode ser
convertida em vários aminoácidos, por exemplo:
+ +
NADH+H NAD
 complexos extracelulares RgpA-Kgp proteinase-adesina
de se ligar e hidrólise da hemoglobina, liberando heme
Outras reações de transaminação podem fornecer
na superfície celular. De fato, Kgp mostrou ser essencial
outros aminoácidos essenciais. O transporte de
para a formação do pigmento preto associado às
aminoácidos como glutamato e aspartato em S. mutans é
colônias de P. gingivalis em ágar sangue (ver e isso é
por um sistema de transporte primário conduzido pela
adquirido através da capacidade dos complexos
hidrólise de ATP, enquanto aminoácidos de cadeia
extracelulares RgpA-Kgp proteinase-adesina de se ligar
ramificada (como a leucina) são captados por uma
e hidrólise da hemoglobina, liberando heme na
membrana energizada (força próton motora) conduzida
superfície celular. De fato, Kgp mostrou ser essencial
sistema transportador. Aminoácidos essenciais também
para a formação do pigmento preto associado às
podem ser derivados do metabolismo de peptídeos
colônias de P. gingivalis em ágar sangue (verFIGO.
dentro ou fora da célula. Este processo é
3.8); a pigmentação é por causa da deposição de heme,
energeticamente favorável para as células, pois todos os
como umµ-oxo dímero na superfície celular, que
aminoácidos presentes no peptídeo são obtidos com o
mesmo custo energético do transporte de um único
aminoácido.
Muitos dos microrganismos da bolsa periodontal são
assacarolíticos (isto é, não ganham energia com a
conversão de açúcares em produtos de fermentação
ácida) e proteolíticos, e seu crescimento depende de sua
capacidade de utilizar os nutrientes fornecidos
localmente pelo hospedeiro. Durante a inflamação, o
fluxo de GCF (verCapítulo 2) aumenta em resposta a
um aumento acúmulo de biofilme. O GCF fornece
vários componentes das defesas do hospedeiro para
combater o biofilme, mas várias das proteínas também
podem atuar como novos nutrientes potenciais para
essas bactérias proteolíticas. Por exemplo, hemoglobina,
transferrina, hemopexina e hap-toglobina estão
presentes no GCF e podem fornecer fatores de
crescimento essenciais, como o heme, que seleciona
patógenos periodontais altamente proteolíticos, como P.
gingivalis. Porphyromonas gingivalis pode transportar e
utilizar diretamente alguns aminoácidos; esta espécie
prefere pegar peptídeos curtos por razões
bioenergéticas; esses peptídeos são então quebrados
dentro da célula por peptidases intracelulares. As
principais proteases produzidas por P. gingivalis
pertencem à família cisteína proteinase, com
especificidade para resíduos de arginina e lisina, e são
denominados Arg-gingipain (RgpA e RgpB) e Lys-
gingipain (Kgp), respectivamente. RgpA e Kgp possuem
domínios de adesina C-terminal, e estes podem se ligar a
moléculas hospedeiras. Por exemplo, P. gingivalis
utiliza preferencialmente o heme derivado da
hemoglobina, e isso é adquirido através da capacidade
dos complexos extracelulares RgpA-Kgp proteinase-
adesina de se ligar e hidrolisar a hemoglobina, liberando
o heme na superfície da célula. De fato, Kgp mostrou
ser essencial para a formação do pigmento preto
associado às colônias de P. gingivalis em ágar sangue
(ver e isso é adquirido através da capacidade dos
74 Microbiologia Oral de Marsh e Martin A boca é um ambiente abertamente aeróbico e, no
entanto, a maioria das bactérias são facultativamente
fornece proteção contra os efeitos letais do oxigênio
(veja mais adiante neste capítulo).
Além de obter nutrientes essenciais do GCF, muitos
organismos subgengivais também são capazes de
degradar proteínas estruturais e glicoproteínas
associadas ao epitélio da bolsa periodontal. A produção
de enzimas como condroitina sulfatase, hialuroni-dase e
colagenase contribui para o dano tecidual e a formação
de bolsas periodontais. A Arg-gingipain também é
importante na virulência e pode desregular e subverter a
resposta inflamatória do hospedeiro ao degradar os
inibidores da protease do hospedeiro projetados para
controlar a inflamação, e isso leva a danos nos tecidos
periodontais.Capítulo 6). As gingipains degradam
citocinas, componentes do sistema complemento e
receptores em macrófagos e células T, perturbando
assim as defesas do hospedeiro; eles também degradam
os receptores do hospedeiro, aumentando assim a
permeabilidade vascular e aumentando o influxo de
neutrófilos. O pH ótimo de algumas dessas enzimas é o
pH neutro ou levemente alcalino, que corresponde ao da
bolsa periodontal inflamada.
Interações sinérgicas ocorrem na quebra de
moléculas hospedeiras e associações mutuamente
benéficas ocorrem entre organismos com padrões
complementares de atividade enzimática.capítulo 5). A
atividade endopeptídeo-dase de P. gingivalis pode
fornecer peptídeos apropriados do catabolismo de
moléculas hospedeiras para o crescimento de F.
nucleatum. Da mesma forma, F. nucleatum pode
suportar o crescimento de P. gingivalis em ambientes
oxigenados. Isso pode explicar por que essas duas
espécies são frequentemente encontradas juntas em
bolsas periodontais. O conceito de comportamento da
placa como uma comunidade microbiana em termos de
quebra de moléculas complexas do hospedeiro e
modificação do ambiente é desenvolvido emcapítulo 5.
Coletivamente, esses achados enfatizam a
importância do metabolismo do nitrogênio na ecologia
microbiana oral. As proteases do hospedeiro e
bacterianas estão associadas direta e indiretamente com
a destruição tecidual na doença periodontal, enquanto
alguns argumentam que a cárie resulta não tanto de uma
superprodução de ácido, mas mais de uma deficiência
na produção de base pelas bactérias da placa.

METABOLISMO DE OXIGÊNIO
 gingivalis crescendo em ágar sangue também pode
fornecer proteção contra danos oxidativos.
anaeróbica ou obrigatoriamente anaeróbica,
especialmente na placa dentária. Os primeiros
colonizadores tendem a ser mais tolerantes aos
efeitos tóxicos do metabolismo do oxigênio,
especialmente no que diz respeito ao peróxido de
hidrogênio e hipotiocianit, do que os colonizadores
posteriores, que podem depender de interações
metabólicas entre espécies dentro do biofilme para
lidar com oxigênio e radicais tóxicos.
Todas as bactérias da placa, incluindo os anaeróbios
obrigatórios, são capazes de metabolizar o oxigênio,
embora em taxas diferentes. Bactérias aeróbicas (como
Neisseria spp.) Podem usar cadeias de transporte de
elétrons contendo citocromo para redução de oxigênio e
síntese de ATP acoplado. Em contraste, as espécies
produtoras de ácido láctico facultativamente anaeróbicas
têm uma nicotinamida adenina dinucleotídeo (NADH)
oxidase e NADH peroxidase contendo flavina; da
mesma forma, mesmo T. denticola (que é altamente
anaeróbica), possui NADH oxidases e NADH
peroxidases, o que lhe permite capturar baixos níveis de
oxigênio no ambiente subgengival. Algumas dessas
reações são ilustradas abaixo:

O-2 + O-2 + 2H+ superóxido dismutase→ H2O2 + O2 2H2O2

+
→2H2O+O2 NADH+H +H2O2 NADH peroxidase
catalase

+
→NAD +2H2O
+
2NADH+2H +2O2 NADH oxidase +
→ 2NAD + 2H2O

Embora o oxigênio em si não seja tóxico, a produção

de metabólitos de oxigênio pode ser e, portanto, as
bactérias orais possuem mecanismos de defesa
molecular para prevenir ou reduzir o dano oxidativo.
Esses mecanismos envolvem a produção de catalase,
peroxidases e superóxido idemutase. Assim, organismos
orais tão metabolicamente diversos como estreptococos
mutantes e P. gingivalis produzem enzimas protetoras;
os estreptococos mutans produzem superóxido
dismutase, NADH peroxidase e íon glutationa redutase,
enquanto que P. gingivalis possui uma superóxido
dismutase, NADH oxidase e NADH peroxidase. As
atividades dessas enzimas aumentam quando as células
de P. gingivalis são expostas ao oxigênio. A
pigmentação preta característica de colônias de P.
 4Distribuição, Desenvolvimento e Benefícios da Microbiota Oral

As bactérias subgengivais dependem do metabolismo

de proteínas e glicoproteínas fornecidas pelo GCF, muitas
se acumulam na superfície celular de P. gingivalis. Esses vezes gerando base e elevando o pH local a níveis
dímeros agregados podem fornecer proteção antioxidante, alcalinos. Muitas dessas bactérias proteolíticas são
servindo como barreira física ao oxigênio ambiental, além obrigatoriamente anaeróbicas e possuem mecanismos
de atuar como sistema tampão ao peróxido de hidrogênio, específicos para lidar com o estresse oxidativo.
devido a uma atividade semelhante à catalase inerente à
camada.
Alguns anaeróbios obrigatórios formam
associações físicas estreitas com espécies
consumidoras de oxigênio (por exemplo, Neisse-ria
spp.) Para serem capazes de crescer em biofilmes e
sobreviver na boca.

MAL ORAL (HALITOSE)

O mau odor oral é uma condição relativamente comum
na população adulta e está associada ao metabolismo de
bactérias localizadas na língua. Indivíduos com alto
odor geralmente têm maior carga bacteriana total na
língua e maior número de anaeróbios Gram-negativos,
incluindo espécies de Leptotrichia, Porphyromonas,
Prevotella, Fusobacterium e Treponema.
A produção de mau odor está fortemente associada à
alta atividade proteolítica e à produção de compostos
voláteis de enxofre. Os compostos de enxofre
predominantes são sulfureto de hidrogénio [H 2S] e metil
mer-captano [CH3SH], com concentrações mais baixas
de sulfureto de dimetilo [(CH 3)2S] e dissulfureto de
dimetilo [(CH3S)2]. O sulfeto de hidrogênio é gerado
principalmente pela ação da L-cisteína desidro-sulfatase
sobre a L-cisteína, enquanto o metil mercaptano
(metanotiol) é produzido pela oxidação da L-metionina.
Fusobacterium spp. e Parvimonas micra produzem altas
concentrações de sulfeto de hidrogênio a partir da
glutationa (um tripeptídeo: L-δ-glutamil-L-
cisteinilglicina), que está presente na maioria dos

PONTOS CHAVE
A microbiota oral exibe considerável
flexibilidade bioquímica para lidar com as
condições oscilantes de fome na boca.
Açúcares dietéticos são rapidamente
transportados para dentro das células (por
exemplo, via PEP-PTS) por bactérias cariogênicas
e convertidos em produtos ácidos de fermentação
ou em polissacarídeos extracelulares e
intracelulares. Os estreptococos mutans têm
estratégias específicas para lidar com as
condições de estresse ácido resultantes.
células teciduais e estariam disponíveis na bolsa
periodontal. A raspagem da língua para reduzir a
carga microbiana neste local pode ser eficaz no
tratamento da halitose.

BENEFÍCIOS DA MICROBIOTA ORAL

Foi enfatizado que a presença de uma microbiota
diversificada na boca é natural. Os humanos co-
evoluíram com esses micróbios residentes, e está claro
que essa é uma relação genuinamente mutualista. O
hospedeiro fornece um ambiente quente e nutritivo para
o crescimento microbiano, enquanto evidências
surgiram para mostrar que os residentes microbianos
naturais são essenciais para o desenvolvimento normal
da fisiologia, nutrição e defesas do hospedeiro.FIGO.
4.12).

RESISTÊNCIA À COLONIZAÇÃO
Uma das principais funções benéficas da microbiota
oral é sua capacidade de prevenir a colonização por
microrganismos exógenos (e muitas vezes
patogênicos).Mesa 4.9). Esta propriedade,
denominada 'resistência à colonização', é porque os
microrganismos residentes são mais eficazes em:
• ligação aos receptores do hospedeiro;
• competição por nutrientes endógenos;
• criar condições desfavoráveis para desencorajar
a fixação e retardar a multiplicação de organismos
invasores; e
• produzindo substâncias antagônicas (peróxido
de hidrogênio, bacteriocinas, etc.), que são inibidoras
de micróbios exógenos.

TABELA 4.9 Funções da microbiota oral

residente que contribuem para a resistência
à colonização
Função
Competição por receptores para adesão
Competição por nutrientes endógenos essenciais e
cofatores
Criação de microambientes que desencorajam o
crescimento de espécies exógenas
Produção de substâncias inibitórias (bacteriocinas,
H2O2, bacteriófago, etc.)
76 Microbiologia Oral de Marsh e Martin

• Vasodilatação
Dietético
pressão arterial reduzida
nitrato

Nitrito

Colonização
resistência
Acidificado
nítrico
óxido

Patógeno hospedeiro
conversa cruzada
• Antimicrobiano
• Formação de muco
• Mucosa gástrica
fluxo sanguíneo
FIGURA 4.12Benefícios associados à microbiota oral residente. A microbiota oral residente pode (a) excluir microrganismos
exógenos (resistência à colonização); (b) estar envolvido em conversas cruzadas com o hospedeiro e regular negativamente a
potencial atividade pró-inflamatória em relação a organismos comensais, e (c) reduzir o nitrato da dieta a nitrito, que pode ser
posteriormente convertido em óxido nítrico acidificado e que fornece múltiplas fisiologias. benefícios lógicos para o
hospedeiro.
bifidobactérias e lactobacilos, que supostamente
proporcionam benefícios à saúde quando consumidos.
Podem ser consumidos em produtos lácteos, como iogurtes,
A resistência à colonização pode ser prejudicada
e a maioria das aplicações são novamente direcionadas à
por fatores que comprometem a integridade das
microbiota intestinal. Os benefícios comumente
defesas do hospedeiro ou perturbam a estabilidade da
reivindicados dos probióticos incluem a diminuição de
microbiota residente, como os efeitos colaterais da
doenças gastrointestinais potencialmente patogênicas.
terapia citotóxica ou o uso prolongado de antibióticos
de amplo espectro. Por exemplo, o último pode
suprimir a microbiota oral bacteriana residente,
permitindo o crescimento excessivo de populações de
micróbios anteriormente menores, como leveduras
orais.
Maneiras de aumentar a resistência à colonização estão
sendo exploradas usando prebióticos e probióticos. Os
prebióticos são moléculas que estimulam o crescimento
e/ou atividade daqueles membros da microbiota residente
que contribuem para o bem-estar de seu hospedeiro.
Prebióticos como compostos de fibras não digeríveis (por
exemplo, inulina, oligofrutose) foram entregues ao trato
gastrointestinal para estabilizar a composição e aumentar o
metabolismo da microbiota intestinal, especialmente de
bifidobactérias e lactobacilos benéficos. Estão sendo feitas
tentativas para usar prebióticos para aumentar o
crescimento de bactérias orais residentes selecionadas. Os
probióticos são micro-organismos vivos, tipicamente
microrganismos, a redução do desconforto
gastrointestinal, o fortalecimento do sistema
imunológico e a recuperação da microbiota intestinal
em indivíduos que receberam tratamento com
antibióticos ou que sofreram uma doença gástrica.
Agora, leite probiótico, queijo, iogurtes e assim por
diante estão sendo desenvolvidos para fornecer
benefícios semelhantes para a saúde bucal. Há poucas
evidências de que esses micróbios probióticos sejam
capazes de colonizar a boca, e a prova inequívoca de
que eles trazem benefícios ainda está sendo
ativamente procurada.
Outra abordagem para aumentar a resistência à
colonização da microbiota oral é a terapia de reposição.
Exemplos incluem o reimplante deliberado de
organismos residentes benéficos no ambiente
subgengival, por exemplo, após a terapia periodontal, ou
pela colonização preventiva de dentes com mutantes de
baixa virulência de S. mutans ou com organismos de
placa inofensivos que são mais competitivos do que o
tipo selvagem estirpes de S. mutans.

CROSS-TALK HOST-MICROBE
O hospedeiro não fica indiferente à presença das
diversas comunidades microbianas que residem nas suas
superfícies, muitas das quais produzem moléculas pró-
inflamatórias. O hospedeiro é capaz de detectar
microrganismos e desenvolveu sistemas para tolerar
 4Distribuição, Desenvolvimento e Benefícios da Microbiota Oral
micro-organismos sem iniciar uma resposta inflamatória
prejudicial, além de ser capaz de montar uma defesa
eficiente contra patógenos. A ligação de bactérias a
receptores específicos nas células hospedeiras pode
desencadear mudanças substanciais na expressão gênica
tanto nas células procarióticas quanto nas eucarióticas.
Receptores de reconhecimento de padrões de
células hospedeiras (p. células B ativadas (NFĸB). O
hospedeiro desenvolveu estratégias para distinguir
entre bactérias comensais e patogênicas. Certos
estreptococos orais demonstraram suprimir as
respostas inflamatórias das células epiteliais pela
modulação funcional da imunidade através da
expressão e sinalização do receptor Toll-like, e
também pela supressão das respostas inflamatórias
inibindo a ativação de NFĸB ou aumentando a
secreção de citocinas anti-inflamatórias, tal como
interleucina-10 (IL-10). Os estreptococos orais
benéficos também podem estimular ativamente vias
benéficas nas células epiteliais,
METABOLISMO DO NITRATO
As bactérias orais residentes desempenham um papel
importante na saúde geral, mantendo aspectos-chave dos
sistemas gastrointestinais e cardiovasculares, através do
metabolismo do nitrato dietético. O nitrato está presente
em muitos vegetais verdes folhosos e beterraba e é
absorvido pela corrente sanguínea durante a digestão. O
nitrato circulante é concentrado pelas glândulas
salivares e aproximadamente 25% do nitrato da dieta
reaparece na saliva, onde é reduzido a nitrito pela
microbiota oral. O hospedeiro é incapaz de realizar esta
etapa de redução bioquímica e é inteiramente
dependente da capacidade metabólica das bactérias orais
residentes. As bactérias com maior atividade de nitrato
redutase são encontradas no dorso da língua e pertencem
aos gêneros Neisseria, Veillonella, Actinomyces e
Rothia. O nitrito afeta vários processos fisiológicos
importantes, incluindo a regulação do fluxo sanguíneo,
pressão arterial, integridade gástrica e proteção do
tecido contra lesão isquêmica. O nitrito pode ser
convertido em óxido nítrico
no estômago acidificado, e este tem propriedades
antimicrobianas e contribui para a defesa contra
enteropatógenos e na regulação do fluxo sanguíneo
da mucosa gástrica e formação de muco. A supressão
deliberada da microbiota oral usando um
enxaguatório bucal antimicrobiano ou um antibiótico
de amplo espectro mostrou reduzir a conversão
microbiana de nitrato em nitrito com perda dos
benefícios biológicos do nitrito (incluindo redução da
espessura do muco gástrico), enquanto o sangue
pressão aumentou ligeiramente. Essas observações
enfatizam a necessidade de preservar uma microbiota
oral residente com uma composição e atividade
normais para manter a saúde (verFIGO. 4.12).
PONTOS CHAVE
A microbiota oral natural e residente proporciona
benefícios essenciais ao hospedeiro, incluindo:
• resistência à colonização;
• conversa cruzada com o hospedeiro (modula as
respostas imunes, regula positivamente as vias benéficas do
hospedeiro, aumenta a produção de mucina); e
• redução de nitrato a nitrito e óxido nítrico.
RESUMO DO CAPÍTULO
A aquisição da microbiota oral residente começa
durante o parto do bebê e continua por toda a vida.
As propriedades biológicas da boca a tornam
altamente seletiva em relação aos tipos de
microrganismos capazes de colonizar. Poucas das
espécies encontradas na boca dos adultos e ainda
menos dos organismos do ambiente geral são capazes
de se estabelecer com sucesso em bebês. A aquisição
da microbiota residente segue um padrão de sucessão
ecológica: relativamente poucos organismos
(espécies pioneiras) são capazes de colonizar, mas
sua presença permite que outras espécies se
estabeleçam; este processo eventualmente leva a uma
comunidade clímax com uma alta diversidade de
espécies. Muitas espécies são adquiridas da mãe por
transmissão via saliva.
A composição da microbiota residente varia em
diferentes locais ao redor da boca, com cada local
78 Microbiologia Oral de Marsh e Martin consumidoras de oxigênio e pela posse de vários
sistemas enzimáticos específicos para eliminar
oxigênio e radicais tóxicos.
com uma comunidade microbiana relativamente
característica. Estreptococos mutans e S. sanguinis
têm preferência por superfícies duras para
colonização, enquanto espécies como S. salivarius
são predominantemente recuperadas da mucosa oral.
A língua possui o maior número de microrganismos
por unidade de área de superfície da mucosa oral e
pode atuar como reservatório para alguns anaeróbios
Gram-negativos que estão implicados em doenças
periodontais e halitose.
A distribuição dos micro-organismos está
relacionada à sua capacidade de aderir a um local, ter
suas necessidades nutricionais e ambientais (pH e
potencial redox) satisfeitas e crescer para formar
biofilmes. Para lidar com as condições nutricionais
flutuantes na boca, a microbiota oral residente é
bioquimicamente flexível. A fonte primária de
nutrientes é o suprimento endógeno de proteínas do
hospedeiro e glicoproteínas da saliva e GCF.
Sobrepostos a estes estão os carboidratos (e algumas
proteínas) fornecidos pela dieta. Os carboidratos podem
ser transportados para a célula bacteriana, por exemplo,
por um sistema PEP-PTS de alta afinidade e convertidos
em ácidos orgânicos ou usados para sintetizar
polissacarídeos de armazenamento intracelular.
Bactérias potencialmente cariogênicas implementam
estratégias moleculares específicas que lhes permitem
tolerar as condições de baixo pH geradas após o
catabolismo do açúcar e que seriam inibitórias para
outras espécies. Alguns dissacarídeos podem ser
metabolizados extracelularmente em açúcares
constituintes (para transporte) ou em polissacarídeos
extracelulares; esses polissacarídeos podem funcionar
para consolidar a fixação, formar uma matriz de
biofilme (vercapítulo 5) ou usados como compostos de
armazenamento extracelular. Os glucanos e frutanos
extracelulares são sintetizados por glicosiltransferases e
frutosiltransferases, respectivamente.
O metabolismo de compostos nitrogenados
envolve uma ampla gama de exopeptidases e
endopeptidases; O metabolismo do nitrogênio pode
levar à produção de base que ajuda a regular o pH
ambiental. O catabolismo de moléculas hospedeiras
complexas requer que bactérias com padrões
complementares de atividade enzimática interajam
para garantir sua completa degradação. Os anaeróbios
obrigatórios são comumente encontrados em muitos
locais da boca. Essas bactérias sobrevivem à
exposição ao oxigênio interagindo com espécies
 A halitose ocorre através da produção de níveis
aumentados de compostos malcheirosos (como
sulfeto de hidrogênio e metil mercaptano) por
bactérias anaeróbicas proteolíticas, muitas das quais
estão localizadas na língua.
A microbiota oral residente é natural e fornece
vários benefícios criticamente importantes para o
hospedeiro. Estes incluem resistência à colonização,
modulação da resposta do hospedeiro (para reduzir a
inflamação), promoção da cicatrização de feridas,
redução de nitrato a nitrito (que regula a pressão
arterial e outras funções do hospedeiro) e óxido
nítrico (um importante agente antimicrobiano),
indução de peptídeos de defesa e aumento da
produção de mucina.

LEITURA ADICIONAL
Aas JA, Paster BJ, Stokes LN, et al. Definição da flora bacteriana
normal da cavidade oral. J Clin Microbiol. 2005; 43: 5721-5732.
Carlsson J. Crescimento e nutrição como fatores ecológicos. In:
Kuramitsu HK, Ellen RP, eds. Ecologia bacteriana oral. A base
molecular. Wymondham: Horizon Scientific Press; 2000: 67-130.
Chen H, Jiang W. Aplicação do sequenciamento de alto
rendimento na compreensão do microbioma oral humano
relacionado à saúde e à doença. Microbiol Frontal. 2014; 5: 508.
Delima SL, McBride RK, Preshaw PM, et al. Resposta de bactérias
subgengivais à cessação do tabagismo. J Clin Microbiol. 2010;
48: 2344-2349.
Devine DA, Marsh PD, Meade J. Modulação das respostas do
hospedeiro por bactérias comensais orais. J Oral Microbiol.
2015; 7: 26941.
Dominguez-Bello MG, Costello EK, Contreras M, et al. O modo
de parto molda a aquisição e a estrutura da microbiota inicial em
vários habitats corporais em recém-nascidos. PNAS. 2010; 107:
11971-11975.
Douglas CWI, Naylor K, Phansopa C, et al. Adaptações
fisiológicas das principais bactérias orais. Adv Microb Physiol.
2014; 65: 257-335.
Kapil V, Haydar SM, Pearl V, et ai. Papel fisiológico das bactérias
orais redutoras de nitrato no controle da pressão arterial. Free
Radic Biol Med. 2013; 55: 93-100.
Kumar PS. Sexo e o microbioma subgengival: Os esteróides
sexuais femininos afetam as bactérias periodontais? Periodontol
2000. 2013; 61: 103-124.
Kumar PS, Mason MR. Protetores bucais: a microbiota indígena
desempenha um papel na manutenção da saúde bucal? Front Cell
Infect Microbiol. 2015; 5: artigo 35. doi: 10.3389/fcimb.2015.00035.
Mark Welch JL, Utter DR, Rossetti BJ, et al. Dinâmica das
comunidades microbianas da língua com resolução de um único
nucleotídeo usando oligotipagem. Microbiol Frontal. 2014; 5:
artigo 568. doi: 10.3389/fmicrb.2014.00568.
Papaioannou W, Gizani S, Haffajee AD, et al. A microbiota em
diferentes superfícies orais em crianças saudáveis. Oral
Microbiol Immunol. 2009; 24: 183-189.
Paster BJ, Dewhirst FE. Diagnóstico microbiano molecular.
Periodontol 2000. 2009; 51: 38-44.
Percival RS. Alterações na microflora oral e nas defesas do hospedeiro
com a idade avançada. In: Percival S, Hart A, eds. Microbiologia e
envelhecimento: manifestações clínicas. Nova York: Springer; 2009:
131-152.
 4Distribuição, Desenvolvimento e Benefícios da Microbiota Oral

Pozhitkov AE, Beikler T, Flemmig T, et al. Métodos de alto
rendimento para análise do microbioma oral humano.
Periodontol 2000. 2009; 55: 70-86.
Quivey RG, Kuhnert WL, Hahn K. Adaptação de estreptococos
orais a baixo pH. Adv Microb Physiol. 2000; 42: 239-274.
Sachdeo A, Haffajee AD, Socransky SS. Biofilmes na cavidade
oral edêntula. J Prótese. 2008; 17: 348-356.
Scully C, Greenman J. Halitology (odor da respiração:
etiopatogenia e manejo). Dis. Oral 2012; 18: 333-345.
Takahashi N. Metabolismo do microbioma oral: De “Quem são eles?”
para “O que eles estão fazendo?”. J Dent Res. 2015; 94: 1628-1637.
Wade WG. O microbioma oral na saúde e na doença. Farmaco
Res. 2013; 69: 137-143.
Yang F, Huang S, He T, et ai. Bases microbianas do
desenvolvimento de mau odor oral em humanos. J Dent Res.
2013; 92: 1106-1112.

QUESTÕES DE MÚLTIPLA ESCOLHA

Respostas na pág. 249
1 Quem ou qual é a principal fonte de microrganismos no recém-nascido?
a. O ambiente da sala de parto (domicílio ou
hospital)
b. Parteira, ou pessoa que entrega o bebê
2 Quais das seguintes espécies são pioneiras que colonizam a boca do recém-nascido?
uma. Streptococcus
mutans b. Streptococcus
mitis

3 Espécies colonizadoras bacterianas pioneiras podem modificar o ambiente local para fornecer condições
adequadas para o crescimento de colonizadores posteriores. Qual dos seguintes énão é um mecanismo que
facilita a sucessão bacteriana para aumentar a diversidade do biofilme?
uma. Modificando ou expondo novos receptores para c. Gerando nutrientes potenciais, seja como
acessório produtos do metabolismo dos produtos de
degradação
b. Consumir oxigênio e diminuir o redox d. Abaixando o pH pela glicólise
potencial
4 Qual das seguintes bactérias anaeróbias é mais comumente isolada de bebês desdentados jovens?
uma. Prevotella melaninogenica c. Prevotella denticola
b. Porphyromonas gingivalis d. Prevotella loescheii

5 Qual dos seguintes énão é um método reconhecido para amostragem de biofilmes de placa?
uma. Pontos de papel c. Palito de dente
b. Impressão direta d. Tira abrasiva
6 Qual é um alvo genético adequado para identificação de bactérias orais?
uma. gene do ácido ribonucleico ribossômico (rRNA) 18S c. Ácido ribonucleico mensageiro (mRNA)
b. Ácido plasmídeo desoxirribonucleico (DNA) d. gene 16S rRNA
7 Quais dos seguintes grupos de bactérias que podem ser cultivadas a partir da língua estão presentes em
maior número?
uma. Actinomyces c. Prevotella
b. Estreptococo d. Fusobacterium

8 Qual dos seguintes énão é uma técnica molecular para detectar bactérias?
uma. PEIXE c. 454 pirosequenciamento
b. PCR d. TM7
80 Microbiologia Oral de Marsh e Martin

9 A sacarose pode ser metabolizada de várias maneiras. Qual dos seguintes énão é um produto do catabolismo da
sacarose?
uma. Glucan c. Amônia
b. Lactato d. Polissacarídeo intracelular
10 Quais são as principais proteasesPorphyromonas gingivalis denominado?
uma. Interpains c. Urease
b. Gengipains d. Superoxido dismutação
11 A ureia pode ser convertida em qual dos seguintes?
uma. Lactato c. amônia e dióxido de carbono
b. Acetato, formato e etanol d. Sulfato de hidrogênio
12 O mau odor oral está associado à alta atividade proteolítica; qual das seguintes moléculas énão está
associado à halitose?
uma. Sulfato de hidrogênio c. Fosfoenolpiruvato
b. Metil mercaptano d. Sulfeto de dimetilo
13 Qual dos seguintes énão é uma enzima envolvida na eliminação de oxigênio ou outras espécies reativas de
oxigênio por bactérias anaeróbicas?
uma. Enolase c. Superoxido dismutação
b. Catalase d. Nicotinamida adenina dinucleótido
fosfato oxidase (NADH)
14 Muitas das bactérias anaeróbicas isoladas da bolsa periodontal têm qual dos seguintes tipos de
metabolismo?
uma. Sacarolítico. c. capnofílico
b. Assacarolítico e proteolítico d. Fermentativo
15 Bactérias comoStreptococcus mutans sobrevive em um ambiente de baixo pH em biofilmes por qual das
seguintes estratégias?
uma. Aumento na atividade de seus H+/ ATPase c. Metabolismo da arginina em amônia
enzima d. Elevando o pH ótimo das enzimas glicolíticas
b. Mudança para um metabolismo heterofermentativo

Placa dentária
Biofilmes microbianos
Biofilmes na boca
Mecanismos de formação da placa
dentária
Formação de película adquirida
Transporte de microrganismos e
fixação reversível
Colonizadores microbianos pioneiros e
fixação mais permanente
(interações adesina-receptor)
Coagregação/coadesão e sucessão
microbiana
Maturação do biofilme e formação da
matriz Descolamento das superfícies
Consequências da formação de biofilme
Interações bioquímicas
Impacto na expressão gênica
Célula – sinalização celular
Transferência de genes
Tolerância antimicrobiana
Composição bacteriana da comunidade clímax
da placa dentária de diferentes locais
Placa de fissura
Placa aproximada
Placa de fenda gengival
Placa de dentadura
Placa dentária de animais
Cálculo
A placa dentária como uma comunidade
microbiana
Homeostase microbiana na placa dental
Resumo do capítulo
Leitura adicional
CAPÍTULO5
DA placa dental é a comunidade microbiana que
desenvolve-se como um biofilme na superfície do dente,
embutido em uma matriz de polímeros de origem
bacteriana e salivar. A placa que se torna calcificada é
chamada de cálculo ou tártaro. A presença de placa na boca
pode ser prontamente demonstrada pela lavagem com uma
solução reveladora, como a eritrosina.FIGO. 5.1). A
maioria da placa encontra-se associada às regiões
protegidas e estagnadas da superfície do dente, como
fissuras, regiões proximais entre os dentes e a fenda
gengival.Figura 2.2e5.1). A placa é encontrada
naturalmente no dente superfície e faz parte das defesas do
hospedeiro, excluindo espécies exógenas (e muitas vezes
patogênicas) (resistência à colonização) (verTabela 4.9).
Em algumas ocasiões, no entanto, a placa pode se acumular
além dos níveis compatíveis com a saúde bucal, e isso pode
levar a mudanças na composição da microbiota e predispor
os locais a doenças (verCapítulo 6). A placa dentária é um
exemplo de biofilme e uma comunidade microbiana, e o
significado disso será explicado nas seções seguintes.
BIOFILMES MICROBIANOS
A grande maioria dos microrganismos de uma
variedade de ecossistemas cresce em uma superfície
como um biofilme. Os biofilmes são organizados
espacial e funcionalmente e estão envoltos em uma
matriz de polímeros extracelulares. Se os micróbios
do biofilme fossem simplesmente células
planctônicas (de fase líquida) que aderiram a uma
superfície, e as propriedades das comunidades
microbianas fossem meramente a soma das
populações constitutivas, então o interesse científico
em tais questões seria limitado. No entanto, a
pesquisa revelou que as células que crescem como
biofilmes têm propriedades únicas, algumas das quais
são de significado clínico.Tabela 5.1); por exemplo,
biofilmes são muitas vezes mais tolerantes a agentes
antimicrobianos do que as mesmas células crescendo
em cultura líquida, tornando-os mais difíceis de
tratar, enquanto comunidades de espécies que
interagem podem ser mais patogênicas do que
culturas puras dos microrganismos constituintes.
81
82 Microbiologia Oral de Marsh e Martin

UMA

B
C

FIGURA 5.1Placa dentária em dentes humanos. (A) Visualização da placa dental após coloração com solução reveladora. O biofilme normalmente se
forma em áreas de retenção e estagnação ao longo da margem gengival e entre os dentes (áreas proximais). (B) Acúmulo intenso de biofilme na superfície
oclusal de um terceiro molar em erupção; a placa localiza-se preferencialmente nas fissuras. (Extraído de Marsh PD, Takahashi N & Nyvad B, Biofilms in
caries development, in Dental Caries. The disease and its clinical management, 3rd ed, Fejerskov O, Nyvad B and Kidd EAM, Blackwell, Oxford, 2015;
pp.107-131, publicado com permissão.) (C) Placa não manchada nos dentes da boca.

Originalmente, os biofilmes eram considerados sondas podem indicar a viabilidade e atividade

acúmulos densos e comprimidos de células, e
acreditava-se que essa estrutura compacta fosse
responsável por muitas de suas novas características. Os
avanços na microscopia permitiram que os biofilmes
fossem visualizados em seu estado natural (hidratado) in
situ sem qualquer processamento de amostras (por
exemplo, fixação química ou técnicas de incorporação)
que poderiam distorcer sua estrutura. A microscopia
confocal de varredura a laser (CLSM) permite que
seções ópticas finas sejam geradas em toda a
profundidade do biofilme, e estas podem ser
combinadas usando software de imagem para gerar
imagens tridimensionais. A localização de organismos
específicos pode ser visualizada com sondas
imunológicas ou oligonucleotídicas por hibridização in
situ fluorescente (FISH), enquanto outras
metabólica das células. Essas técnicas mostraram que
biofilmes que se desenvolvem em ambientes com baixo
teor de nutrientes, especialmente aqueles de habitats
aquáticos, têm uma estrutura mais aberta do que o
previsto em estudos anteriores usando microscopia
eletrônica. Canais foram observados em biofilmes de
bactérias ambientais, permitindo que fatores
potencialmente limitantes do crescimento, como
nutrientes e oxigênio, penetrem mais extensivamente do
que se pensava anteriormente. O uso de microeletrodos
e sondas químicas mostraram que gradientes em fatores
críticos (pH, oxigênio, etc.) que afetam o crescimento
microbiano podem ocorrer em distâncias relativamente
curtas (alguns mícrons, ou seja, alguns diâmetros
celulares) dentro de biofilmes. Isso produz
heterogeneidade espacial e temporal dentro do biofilme,
permitindo
 Em primeiro lugar, a fixação de células a uma superfície
pode exercer um efeito direto induzindo a expressão de
um subconjunto de genes. As bactérias são capazes de
TABELA 5.1 Propriedades gerais de detectar seu ambiente através de vias de transdução de
biofilmes e comunidades microbianas sinal de dois componentes ligados à membrana,
Propriedade consistindo em um sensor histidina quinase e um
geral Exemplo de placa dentária regulador de resposta. Pseudomonas aeruginosa é uma
Arquitetura aberta Presença de canais e vazios bactéria ambiental
Proteção contra Produção de extracelular
defesas do
hospedeiro, polímeros para formar um
dessecação, etc matriz; proteção física contra
fagocitose
Melhorada Sensibilidade reduzida à clorexidina
e antibióticos; transferência de
tolerância a genes de
antimicrobianos* genes de resistência
Neutralização de Produção de β-lactamase por
inibidores células vizinhas para proteger
organismos sensíveis
Novo gene Síntese de novas proteínas em
expressão* acessório; regulação de
glicosiltransferases em
biofilmes
Produção de sinalização célula-
Gene coordenado célula
moléculas (por exemplo, CSP, AI-
respostas 2)
Espacial e pH e O2gradientes; coesão
de Meio
Ambiente
heterogeneidade
anaeróbios obrigatórios de forma
Habitat mais amplo abertamente
variedade ambiente aeróbico
Mais eficiente Catabolismo completo do complexo
macromoléculas hospedeiras (por
metabolismo exemplo,
mucinas) por consórcios
microbianos
Melhorada Sinergismo patogênico em
virulência abscessos e periodontais
doenças

* Uma consequência da expressão gênica alterada também

pode ser o aumento da tolerância aos agentes
antimicrobianos.
CSP, Peptídeo estimulante da competência. AI-2
(Autoindutor-2).

bactérias fastidiosas para sobreviver em ambientes

aparentemente hostis ou incompatíveis (verTabela
5.1).
Um estilo de vida de biofilme pode afetar as
propriedades de um organismo de mais de uma maneira.
 5Placa dentária os biofilmes fornecem condições ideais para a
transferência de genes de resistência, por exemplo,
via plasmídeos, entre células vizinhas próximas umas
que também pode atuar como um patógeno oportunista, das outras (transferência horizontal de genes).
por exemplo, na fibrose cística, e pode colonizar linhas
de água de unidades dentárias. A fixação leva à
regulação positiva de genes envolvidos na síntese de
exopolissacarídeos (alginato) dentro de alguns minutos
do contato inicial de uma célula com uma superfície.
Em segundo lugar, o ambiente de crescimento dentro do
biofilme pode diferir significativamente em relação a
fatores-chave (pH, oxigênio e concentração de
nutrientes) em comparação com o ambiente circundante
(planctônico). Novamente, isso pode resultar em
expressão gênica alterada e, portanto, em um fenótipo
alterado, mas como um efeito indireto do crescimento
em um biofilme. Da mesma forma, os organismos em
um biofilme crescerão mais lentamente, devido a uma
limitação particular de nutrientes ou a um pH
desfavorável, e isso também afetará as propriedades de
uma célula. As bactérias do biofilme são
fenotipicamente distintas de seus equivalentes
planctônicos, e um aspecto particularmente importante
disso é uma maior tolerância das células do biofilme aos
agentes antimicrobianos. Convencionalmente, a
sensibilidade das bactérias aos agentes antimicrobianos
é determinada em células cultivadas em cultura líquida
pela medição da concentração inibitória mínima (MIC)
ou concentração bactericida mínima (MBC) contra
agentes antimicrobianos relevantes. Um exemplo
extremo foi a descoberta de que P. aeruginosa crescendo
em material de cateter urinário tinha uma CIM entre 500
a 1.000 vezes maior do que o antibiótico tobramicina,
em comparação com as mesmas células em cultura
líquida (planctônica). Dada a sensibilidade diminuída de
um organismo em uma superfície a agentes
antimicrobianos, tem-se argumentado que seria mais
apropriado determinar a concentração inibitória de
biofilme (BIC) e concentração de eliminação de
biofilme (BKC) ou concentração de erradicação de
biofilme (BEC). Até agora, essas propostas não foram
amplamente aceitas e não há métodos geralmente
aceitos pelos quais essas concentrações possam ser
determinadas.

Microrganismos em biofilmes são descritos como

tolerantes a agentes antimicrobianos. Isso ocorre
porque as células voltam a ser suscetíveis quando o
biofilme é disperso, indicando que a tolerância é
fenotípica e não genotípica. No entanto, os
microrganismos dentro de um biofilme podem se
tornar genotipicamente resistentes a antibióticos, pois
84 Microbiologia Oral de Marsh e Martin propriedades das células cultivadas na superfície quando
não conseguiu matar as bactérias da placa em seus dentes
por lavagem prolongada com vinagre de vinho,
Os mecanismos por trás dessa tolerância aumentada
incluem a penetração limitada de um agente
antimicrobiano nas profundezas do biofilme; por
exemplo, antibióticos carregados positivamente, como
aminoglicosídeos, se ligarão a polímeros carregados
negativamente que são componentes da matriz
extracelular (teoria da reação de difusão). Os agentes
também podem se ligar e inibir os organismos na
superfície do biofilme, deixando as células nas
profundezas do biofilme relativamente inalteradas, ou
seja, o agente está exausto ou extinto na superfície (veja
mais adiante,FIGO. 5,15). O alvo da droga pode ser
modificado ou não expresso durante o crescimento em
uma superfície, ou o organismo pode usar estratégias
bioquímicas alternativas, diminuindo assim o impacto
potencial do agente ativo. As células também crescem
muito mais lentamente em um biofilme maduro e, como
consequência, são muito menos suscetíveis aos
antimicrobianos do que as células de crescimento mais
rápido. O ambiente nas profundezas de um biofilme
também pode ser desfavorável para a ação ideal de
alguns agentes antimicrobianos. Em biofilmes
multiespécies, um microrganismo pode ser protegido se
as células vizinhas produzirem uma neutralização ou
enzima degradante de drogas.

PONTOS CHAVE
• A maioria dos microrganismos cresce como um
biofilme em uma superfície.
• Um biofilme descreve microrganismos ligados a
uma superfície, muitas vezes como parte de uma
comunidade multi-espécies, incorporados em uma matriz
polimérica.
• O fenótipo dos microrganismos em um biofilme é
diferente de quando eles crescem em cultura líquida.
• Microrganismos em biofilmes são mais tolerantes
a agentes antimicrobianos, estresses ambientais e as
defesas do hospedeiro.

BIOFILMES NA BOCA
A placa dentária foi provavelmente o primeiro biofilme a
ser estudado em termos de composição microbiana ou
sensibilidade a agentes antimicrobianos. No século XVII,
Antonie van Leeuwenhoek foi pioneiro na abordagem de
estudar biofilmes por observação microscópica direta ao
relatar a diversidade e o alto número de animálculos
presentes em raspados retirados de dentes humanos. Ele
também realizou estudos iniciais sobre as novas
 Os primeiros colonizadores raramente entram em
contato com a superfície de um dente 'nu'. Assim que
um dente é limpo, moléculas do ambiente,
embora os organismos fossem mortos se fossem especialmente salivares
removidos primeiro de seus molares e misturados
com vinagre in vitro.
A placa dentária apresenta todas as características de
um biofilme típico (verTabela 5.1). Em comparação
com outros habitats, a placa dentária é relativamente
acessível para amostragem e pode até ser cultivada em
superfícies removíveis relevantes para posterior
investigação e experimentação em laboratório (modelos
in situ; verCapítulo 4). Grande parte dos
microrganismos na placa dentária pode ser identificado,
enquanto o fenótipo desses micróbios (adesinas,
potencial metabólico, interações célula-célula) é bem
caracterizado. Extensos biofilmes também se
desenvolvem nas dentaduras e na língua. Em outras
superfícies mucosas, as bactérias se ligam às células
epiteliais e podem desenvolver um fenótipo associado à
superfície, mas a descamação garante que biofilmes
extensos não possam se desenvolver. Outro biofilme
odontológicamente relevante se desenvolve na
tubulação usada nos sistemas de abastecimento de água
das unidades odontológicas (DUWS); isso será discutido
emCapítulo 12(marFIGO. 12,5), mas os princípios que
regem a formação e as propriedades desses biofilmes
serão semelhantes aos descritos a seguir para a placa
dentária.

MECANISMOS DE
FORMAÇÃO DA PLACA
DENTÁRIA
O desenvolvimento de um biofilme como a placa
dentária pode ser subdividido arbitrariamente em várias
etapas. À medida que uma bactéria se aproxima de uma
superfície, várias interações específicas e não
específicas ocorrerão entre o substrato e a célula, e estas
determinarão se a adesão e a colonização bem-sucedidas
ocorrerão. Estágios distintos na formação da placa estão
resumidos abaixo e são mostrados esquematicamente
emFigura 5.2.
No entanto, deve-se lembrar que a formação de
biofilme é um processo dinâmico e as fases descritas
abaixo são apenas arbitrárias e são para benefício da
discussão. A fixação, o crescimento, a remoção e a
reinserção de bactérias são processos contínuos, e um
biofilme microbiano como a placa sofrerá
reorganização constante.

FORMAÇÃO DE PELÍCULA ADQUIRIDA

 do biofilme, facilitando as interações interbacterianas. 6.
Eventualmente, pode ocorrer descolamento, às vezes como
resultado da degradação por bactérias de suas adesinas.
2 (e). Transporte - passivo

2 (ii). Reversível
acessório

Forças de van der Waals fracas e de

1. Formação de longo alcance
película

Esmalte

UMA
3. Receptor de
adesina 4. Coadesão
Irreversível,
específico, 2º
curto alcance
Lectinas
1º 1º

Esmalte
B
Destacamento
• Interações metabólicas (protease)
• Meio Ambiente
modificações
• Gradientes
• Matriz

Esmalte
5. Maturação do biofilme 6. Destacamento
C
FIGURA 5.2Representação esquemática dos diferentes
estágios da formação da placa dentária: (A) 1. Forma-se
película sobre uma superfície limpa do dente. 2 (i) As bactérias
são transportadas passivamente para a superfície do dente
onde 2 (ii) podem ser mantidas reversivelmente por forças
eletrostáticas fracas de atração. (B) 3. A fixação torna-se
irreversível por interações moleculares estereoquímicas
específicas entre as adesinas na bactéria e os receptores na
película adquirida, e 4. os colonizadores secundários se ligam
aos colonizadores primários, muitas vezes por interações do tipo
lectina (coadesão). (C) 5. O crescimento resulta na maturação
 5 Placa dentária 85 Forças físico-químicas de longo alcance, mas
relativamente fracas, são geradas à medida que um
microrganismo se aproxima da superfície revestida de
proteínas e glicoproteínas, são adsorvidas formando película. Os microrganismos são carregados
um filme condicionador de superfície, que é negativamente por causa das moléculas em sua
denominado película adquirida do esmalte. Os superfície celular,
principais constituintes da película são glicoproteínas
salivares, fosfoproteínas e lipídios, e incluem
estaterina, peptídeos ricos em prolina (PRPs) e
componentes de defesa do hospedeiro.Capítulo 2).
Várias enzimas do hospedeiro e bactérias origem são
imobilizados de forma ativa na película. As enzimas
incluem amilase, lisozima, anidrases carbônicas,
frutosiltransferases (FTFs) e glicosiltransferases
(GTFs); glucanos também foram detectados na
película e desempenham um papel significativo na
fixação bacteriana. Dependendo do local, a película
também pode conter componentes do fluido
crevicular gengival (GCF).
A formação da película começa dentro de
segundos após uma superfície limpa ser exposta ao
ambiente oral. Um equilíbrio entre adsorção e
dessorção de moléculas salivares ocorre após 90 a
120 minutos. A espessura da película é influenciada
pelas forças de cisalhamento no local de formação.
Após 2 horas, a película nas superfícies linguais tem
20 a 80 nm de espessura, enquanto as películas
bucais podem ter 200 a 700 nm de profundidade.
Dependendo do local, aumentos adicionais na
profundidade da película podem ocorrer ao longo do
tempo. A película tem uma camada basal elétron-
densa coberta por uma superfície globular mais
frouxamente arranjada (verFIGO. 5.3). Quando as
moléculas salivares se ligam à superfície do dente,
elas podem sofrer alterações conformacionais. Isso
pode levar à exposição de novos receptores para
fixação bacteriana (criptítopos; ver adiante) ou, no
caso de glicosiltransferases, uma atividade alterada
resultando na síntese de um glucano com uma
estrutura modificada. A película tem várias funções;
ele pode atuar como uma barreira de difusão e como
um tampão e desempenha um papel crítico na
determinação do padrão de colonização microbiana.

TRANSPORTE DE
MICRORGANISMOS E FIXAÇÃO
REVERSÍVEL
Os microrganismos são geralmente transportados
passivamente para a superfície do dente pelo fluxo de
saliva; apenas algumas espécies bacterianas orais são
ativamente móveis (por exemplo, possuem flag-ella), e
estas estão localizadas principalmente
subgengivalmente.
86 Microbiologia Oral de Marsh e Martin
FIGURA 5.3Micrografia eletrônica de transmissão da película adquirida em uma superfície de esmalte. (Reproduzido com permissão do Prof M
Hannig.)
enquanto muitas proteínas presentes na película
adquirida também têm uma carga líquida negativa. A
teoria de Derjaguin e Landau e Verwey e Overbeek
(DLVO) tem sido usada para descrever a interação entre
uma partícula inerte (como um microrganismo pode ser
considerado em grandes distâncias de separação) e um
substrato. Esta teoria afirma que a energia interativa
total, VT, de duas partículas lisas é determinado apenas
pela soma da energia atrativa de van der Waals (V UMA)
e a energia eletrostática geralmente repulsiva (V R).
Partículas em suspensão aquosa e superfícies em contato
com soluções aquosas podem adquirir carga devido, por
exemplo, à adsorção preferencial de íons da solução ou
à ionização de certos grupos ligados à partícula ou
superfície. A carga em uma superfície em solução é
sempre exatamente equilibrada por um número
equivalente de contra-íons; o tamanho desta dupla
camada elétrica é inversamente proporcional à força
iônica do ambiente. À medida que uma partícula se
aproxima de uma superfície, portanto, ela experimenta
uma fraca atração de van der Waals induzida pelos
dipolos flutuantes dentro das moléculas das duas
superfícies que se aproximam. Essa atração aumenta à
medida que a partícula se aproxima do substrato. Uma
força repulsiva é encontrada se as superfícies
continuarem a se aproximar, devido à sobreposição das
duplas camadas elétricas. T, de uma partícula e uma
superfície com a distância de separação, h (VejaFIGO.
5.4). Uma atração líquida pode ocorrer em dois valores
de h; estes são referidos como
Repulsão
Máximo primário
VR
VT h
Secundário
mínimo
VUMA
Atração
Mínimo primário
FIGURA 5.4Diagrama ilustrando a teoria DLVO. A energia
interativa total, VT, entre uma partícula e uma superfície é
mostrado em relação à distância de separação, h. A curva
de interação total é obtida pela soma de uma curva de
atração, VUMA, e uma curva de repulsão, VR.
o mínimo primário (h muito pequeno) e o mínimo
secundário (h=10 a 20 nm) e são separados por um
máximo repulsivo. O mínimo primário geralmente
não é encontrado, enquanto a alta força iônica da
saliva aumenta a probabilidade de que as bactérias
orais possam ser retidas reversivelmente perto de
uma superfície por uma área mínima secundária de
atração (por exemplo, cerca de 10 a 20 nm da
superfície).
 5Placa dentária

UMA B C

D E F

FIGURA 5.5Desenvolvimento de placa dentária em uma superfície de esmalte limpa. Bactérias cocos aderem à película do esmalte
como espécies pioneiras (A) e se multiplicam para formar microcolônias (B), eventualmente resultando em crescimento confluente
(formação de biofilme) embutido em uma matriz de polímeros extracelulares de origem bacteriana e salivar (C). Com o tempo, a
diversidade da microbiota aumenta e as bactérias em forma de bastonetes e filamentos colonizam (D e E). Na comunidade clímax,
muitas associações incomuns entre diferentes populações bacterianas podem ser vistas, incluindo formações de espigas de milho (F).
(Ampliação aprox. × 1150) (Publicado com permissão do Dr. A. Saxton.)

superfícies se aproximem para que possam ocorrer

interações de curto alcance. A especificidade dessas
interações moleculares
COLONIZADORES MICROBIANOS
PIONEIROS E FIXAÇÃO MAIS
PERMANENTE (ADESINA – INTERAÇÕES
RECEPTOR)
Dentro de pouco tempo, essas interações físico-químicas
fracas podem se tornar mais fortes devido às moléculas
(adesinas) na superfície da célula microbiana que se
envolvem em interações específicas de curto alcance
com receptores complementares na película adquirida.
Essas interações são altamente específicas, ocorrem em
distâncias curtas e tornam o apego mais permanente.
Para que isso ocorra, os filmes de água devem ser
removidos entre as superfícies de interação. Um papel
importante dos componentes hidrofóbicos e
hidrofóbicos da superfície celular é o seu efeito
desidratante neste filme de água, permitindo que as
contribui para as associações frequentemente
observadas (tropismos) de certos micróbios com uma
determinada superfície ou habitat.
Independentemente do tipo de superfície do dente
(esmalte ou cemento), os colonizadores iniciais
constituem uma parte altamente selecionada da
microbiota oral. Em poucos minutos, as bactérias do
coco aparecem na superfície (vejaFIGO. 5.5, UMA), e
esses organismos pioneiros são principalmente
estreptococos, especialmente membros do grupo mitis
de estreptococos (por exemplo, S. sanguinis, S. oralis e
S. mitis biovar 1) (Mesa 5.2). Streptococcus sanguinis e
S. oralis produzir um imunoglobulina A1(IgA1) protease
que pode ajudá-los a sobreviver e superar um
componente importante das defesas do hospedeiro
durante os estágios iniciais da formação do biofilme.
Actinomyces spp. também são comumente isolados
após 2 horas, assim como hemophili e Neisseria
88 Microbiologia Oral de Marsh e Martin

filme; as adesinas podem estar presentes ao longo do

TABELA 5.2 Proporções de bactérias
comprimento dessas estruturas, mas, mais importante,
cultiváveis no desenvolvimento de
também estão localizadas na ponta. A adesão
placa supragengival
geralmente envolve interações proteína (bacteriana) -
TEMPO DE DESENVOLVIMENTO DA
carboidrato (hospedeiro), isto é, tipo lectina. Existem
Bactéria PLACA(h)
vários grupos de proteínas que podem funcionar como
2 24 48
adesinas, e estes incluem Antígeno I / II, proteínas de
Estreptococo 8 12 29 repetição ricas em serina, proteínas que ligam glucano,
sangüíneo
colágeno ou imunoglobulinas, etc. Entre os carboidratos
Estreptococo 20 21 12 que podem atuar como receptores estão glicose,
oral
galactose, ácido siálico, fucose, N-acetil glicosamina e
Mutantes 3 2 4 N-acetil galactos-amina. Exemplos específicos incluem:
estreptococos
adesinas em S. gor-donii que podem se ligar aα-amilase,
Estreptococo <1 <1 <1 enquanto A. naeslundii e F. nucleatum interagem com a
salivarius
estaterina. Streptococcus mutans, Porphyromonas
Actinomyces 6 7 5 gingivalis, Prevotella loescheii e Prevotella
naeslundii melaninogenica aderem preferencialmente a superfícies
Actinomyces 2 3 6 revestidas com peptídeos ricos em prolina (PRPs),
odontolyticus embora diferentes regiões da molécula se liguem a
Haemophilusspp. 11 18 21 organismos particulares. A colonização por S. sobrinus
Capnocytophaga <1 <1 <1 é mais dependente de mecanismos mediados por
spp. sacarose, incluindo a interação de glucanos com
Fusobacteriumspp. <1 <1 <1 receptores como proteínas de ligação a glucanos.
Pigmentado de preto 0 <0,01 <0,01 Streptococcus san-guinis pode se ligar a resíduos
anaeróbios terminais de ácido siálico em glicoproteínas salivares
adsorvidas, enquanto S. oralis expressa uma lectina de
ligação à galactose ou uma lectina que interage com
uma estrutura trissacarídica contendo ácido siálico,
espécies, enquanto espécies obrigatoriamente galactose e N-acetilgalactosamina. O grande tamanho de
anaeróbicas são detectadas apenas raramente nesta algumas proteínas da parede celular bacteriana significa
fase e geralmente são em baixo número. Alguns que elas podem estar envolvidas em mais de uma
agregados de misturas de células também podem função. Por exemplo, uma proteína de S. gordonii pode
aderir. interagir tanto com proteínas salivares quanto com A.
naeslundii (coagregação). Os estreptococos podem usar
várias adesinas para se ligar a superfícies revestidas de
Adesina saliva; como exemplo, S. san-guinis pode aderir por
meio de interações do tipo lectina, hidrofóbicas e/ou de
Receptor
Esmalte proteínas específicas (adesina).
Actinomycesspp. possuem dois tipos de fímbrias
antigenicamente e funcionalmente distintos; As
Muitos exemplos das interações do receptor de fímbrias do tipo 1 medeiam a adesão bacteriana aos
adesão foram caracterizados, e alguns estão listados PRPs e à estaterina (uma interação proteína-proteína),
emTabela 5.3. As bactérias são ricamente decoradas enquanto as fímbrias do tipo 2 estão associadas a um
com moléculas que podem interagir com receptores na mecanismo sensível à lactose (uma atividade
película ou na superfície de micróbios já ligados. semelhante à lectina) envolvendo a adesão de células
Algumas bactérias possuem apêndices superficiais (por a bactérias já aderidas. coadesão; veja mais adiante
exemplo, pelos e fímbrias) que podem penetrar nas nesta seção) ou às células epiteliais bucais. Estão
camadas de muco e no condicionamento. sendo feitas tentativas para interferir na fixação
bacteriana para prevenir ou reduzir a formação de
biofilme.
Um fator crítico na formação da placa diz respeito
ao local em que as interações específicas entre

TABELA 5.3 Alguns exemplos de interações hospedeiro-bactéria envolvidas na adesão
Bactéria Adesina
Estreptococospp. Antígeno I/II
Estreptococospp. Ácido lipoteicoico (LTA)
Proteína de ligação ao
Estreptococos mutantes glucano
Streptococcus parasanguinis lipoproteína de 35 kDa
Actinomyces naeslundii Fímbrias tipo 1
Porphyromonas gingivalis proteína de 150 kDa
Prevotella loescheii lectina de 70 kDa
Fusobacterium nucleatum proteína de 42 kDa
ocorrem adesinas bacterianas e receptores do
hospedeiro. Os receptores derivados do hospedeiro
residem em moléculas que não são apenas adsorvidas à
superfície do dente, mas que também são livremente
acessíveis em solução na saliva. Algumas dessas
moléculas são projetadas para agregar bactérias em
solução, facilitando assim sua remoção da boca pela
deglutição. Para que a formação da placa prossiga, no
entanto, está implícito que nem todas as bactérias são
agregadas na saliva antes de atingirem a superfície do
dente. Um novo mecanismo pode funcionar para superar
esse problema. Embora A. naeslundii pudesse se ligar a
PRPs ácidos quando estes estavam ligados a uma
superfície, as células não interagiram com essas
proteínas em solução. Foi proposto que segmentos
moleculares ocultos de PRPs ficam expostos apenas
quando as proteínas são adsorvidas à hidroxiapatita,
como resultado de mudanças conformacionais. Esses
receptores ocultos para adesinas bacterianas foram
denominados "criptótopos". Desta forma, evoluiu um
mecanismo seletivo para facilitar a formação de placa
natural pelo qual o hospedeiro pode promover a adesão
de bactérias específicas sem comprometer esse processo
na fase planctônica. As adesinas que reconhecem
criptítopos em moléculas associadas à superfície
forneceriam uma forte vantagem seletiva para qualquer
microrganismo que colonize uma mucosa ou superfície
do dente. Outro exemplo de um criptotipo envolvendo
mudança conformacional é a ligação de membros do
grupo mitis de estreptococos à fibronectina quando
complexados ao colágeno, mas não à fibronectina em
5Placa dentária 89
Receptor
Aglutinina salivar
Glicoproteínas reativas de grupo
sanguíneo
Glucan
Fibrina, película
Proteínas ricas em prolina
Fibrinogênio
Galactose
Coagregação com Porphyromonas gingivalis
solução. Isso também pode ser um mecanismo que
permite que certos estreptococos orais colonizem um
mecanismo seletivo para facilitar a formação de placa
natural evoluiu pelo qual o hospedeiro pode promover a
adesão de bactérias específicas sem comprometer esse
processo na fase planctônica. As adesinas que
reconhecem criptítopos em moléculas associadas à
superfície forneceriam uma forte vantagem seletiva para
qualquer microrganismo que colonize uma mucosa ou
superfície do dente. Outro exemplo de um criptotipo
envolvendo mudança conformacional é a ligação de
membros do grupo mitis de estreptococos à fibronectina
quando complexados ao colágeno, mas não à
fibronectina em solução. Isso também pode ser um
mecanismo que permite que certos estreptococos orais
colonizem um mecanismo seletivo para facilitar a
formação de placa natural evoluiu pelo qual o
hospedeiro pode promover a adesão de bactérias
específicas sem comprometer esse processo na fase
planctônica. As adesinas que reconhecem criptítopos em
moléculas associadas à superfície forneceriam uma forte
vantagem seletiva para qualquer microrganismo que
colonize uma mucosa ou superfície do dente. Outro
exemplo de um criptotipo envolvendo mudança
conformacional é a ligação de membros do grupo mitis
de estreptococos à fibronectina quando complexados ao
colágeno, mas não à fibronectina em solução. Isso
também pode ser um mecanismo que permite que certos
estreptococos orais colonizem As adesinas que
reconhecem criptítopos em moléculas associadas à
superfície forneceriam uma forte vantagem seletiva para
qualquer microrganismo que colonize uma mucosa ou
superfície do dente. Outro exemplo de um criptotipo
envolvendo mudança conformacional é a ligação de
membros do grupo mitis de estreptococos à fibronectina
quando complexados ao colágeno, mas não à
fibronectina em solução. Isso também pode ser um
mecanismo que permite que certos estreptococos orais
colonizem As adesinas que reconhecem criptítopos em
moléculas associadas à superfície forneceriam uma forte
vantagem seletiva para qualquer microrganismo que
colonize uma mucosa ou superfície do dente. Outro
exemplo de um criptotipo envolvendo mudança
conformacional é a ligação de membros do grupo mitis
de estreptococos à fibronectina quando complexados ao
colágeno, mas não à fibronectina em solução. Isso
também pode ser um mecanismo que permite que certos
estreptococos orais colonizem
válvulas cardíacas na endocardite infecciosa
(verCapítulo 11;FIGO. 11,5).
Um tipo diferente de criptítopo envolve o
reconhecimento de lectinas de ligação a galactosil por
bactérias orais. As células epiteliais e a película adquirida
do esmalte possuem mucinas com cadeias laterais de
oligossacarídeos com ácido siálico terminal. Bactérias
como A. naeslundii sintetizam neuraminidase que cliva o
ácido siálico expondo o penúltimo resíduo de açúcar
galactosil. Muitas bactérias orais possuem lectinas de
ligação a galactosil, incluindo A. naeslundii, Leptotrichia
buccalis, Fusobacterium nucleatum, Eikenella corrodens e
P. intermedia, e se beneficiariam da exposição desses
criptótipos. Da mesma forma, a ligação de P. gingivalis é
maior às células epiteliais que foram levemente tratadas
com tripsina. Alguns patógenos periodontais, incluindo P.
gingivalis,
Uma vez anexadas, essas populações pioneiras
começam a se dividir e formar microcolônias; esses
colonizadores iniciais sintetizam polissacarídeos
extracelulares, e proteínas e glicoproteínas salivares
continuam a ser adsorvidas.Figuras 5.5, B e C). Os
primeiros colonizadores estreptocócicos (grupo mitis de
estreptococos) possuem uma gama de atividades de
glicosidase que os permitem interagir e usar
glicoproteínas salivares como substratos (verFIGO.
5.11mais tarde). As taxas mais rápidas de multiplicação
ocorrem durante esses estágios iniciais de formação do
biofilme; os tempos médios de duplicação de culturas
puras de S. mutans e A. naeslundii foram calculados em
1,4 e 2,7 horas, respectivamente, em estudos com
roedores.
90 Microbiologia Oral de Marsh e Martin
COAGREGAÇÃO / COADESÃO E
SUCESSÃO MICROBIANA
Com o tempo, a microbiota da placa se torna mais
diversificada; há uma mudança da preponderância
inicial de estreptococos para um biofilme com
proporções crescentes de Actinomyces e outros
bacilos Gram-positivos. Alguns organismos que
foram incapazes de colonizar as superfícies dos
dentes revestidos por película são capazes de se ligar
a espécies pioneiras já aderentes por mais interações
adesina-receptor (coagregação/coadesão). Além
disso, o metabolismo da comunidade pioneira altera o
ambiente local e torna as condições mais adequadas
ao crescimento de algumas bactérias fastidiosas. Os
primeiros colonizadores são tolerantes a um alto
potencial redox; espécies como Neisseria spp. pode
consumir oxigênio e produzir dióxido de carbono e
mais produtos finais 'reduzidos' do metabolismo.
Gradualmente, as condições tornam-se mais
favoráveis para o crescimento de bactérias
obrigatoriamente anaeróbicas.Figos 5.12,5.13e5.14).
Assim, a composição do a microbiota da placa muda
ao longo do tempo devido a uma série de interações
complexas e se torna mais diversificada; o processo é
denominado sucessão microbiana (verFIGO. 4.1).
Coagregação ou coadesão (o termo coadesão é usado
por alguns para distinguir entre a interação adesiva de
células em uma superfície em vez daquelas em
suspensão) é o reconhecimento célula a célula de tipos
de células parceiras geneticamente distintas e é um
processo importante na microbiota sucessão e formação
de biofilme. A coagulação ocorre entre a maioria dos
gêneros bacterianos orais (verFIGO. 5.6). A acumulação
precoce da placa é facilitada pela coagregação
intragenérica entre espécies estreptocócicas e entre
Actinomyces spp., bem como pela coagregação
intergenérica entre estreptococos e Actinomyces. O
desenvolvimento subsequente da placa dentária
envolverá mais coagregação intergenérica entre outros
gêneros e os colonizadores primários.
A coagregação geralmente envolve lectinas; essas
proteínas se ligam ao receptor complementar contendo
carboidratos em outra célula. Assim, a interação
mediada por lectina entre estreptococos e Actinomyces
pode
ser bloqueado pela adição de galactose ou lactose, ou
pelo tratamento do receptor com uma protease. A
coagregação pode resultar em algumas formações
morfológicas incomuns, por exemplo, estruturas de
espiga de milho (verFIGO. 5.5, F). As 'espigas de
milho' podem ser formadas entre estreptococos e
Coryne-bacterium matruchotii, e entre espécies de
Eubacterium e Veillonella.
Fusobactérias foram encontradas para coagregar
com a mais ampla gama de gêneros bacterianos,
embora curiosamente, elas não coagregam entre si.
Os primeiros colonizadores da placa coagregam-se
extensivamente com F. nucleatum, enquanto os
colonizadores posteriores como as espécies Selenom-
onas, Prevotella ou Eubacterium não coagregam com
os primeiros colonizadores, mas coagregam-se com
F. nucleatum. Foi proposto que as fusobactérias
atuam como importantes 'pontes' entre as bactérias
colonizadoras precoces e tardias (verFIGO. 5.6).
A coagregação também pode ser um mecanismo
importante na organização funcional de comunidades
microbianas, como a placa dentária. A persistência e
sobrevivência de bactérias obrigatoriamente anaeróbicas
em um habitat essencialmente aeróbico, como a boca, é
aumentada se estiverem fisicamente próximas de
espécies consumidoras de oxigênio, como as espécies
Neis-seria; tais interações podem ser mediadas por
coagregação, com fusobactérias facilitando a interação
de outras espécies não coagregantes. O desenvolvimento
de cadeias alimentares, incluindo aquelas entre espécies
de estreptococos e Veillonella, também pode ser
facilitado pela coagregação. A coagregação pode ser um
mecanismo para aumentar a probabilidade de que
espécies que precisam interagir e colaborar (para
sobreviver) se combinem fisicamente, especialmente
durante os estágios iniciais do desenvolvimento do
biofilme.
MATURAÇÃO DO BIOFILME E
FORMAÇÃO DA MATRIZ
A diversidade microbiana dos biofilmes da placa
aumenta ao longo do tempo devido a sucessivas ondas
de sucessão microbiana e subsequente crescimento. A
taxa de crescimento de bactérias individuais dentro da
placa diminui à medida que o biofilme amadurece, e os
tempos médios de duplicação de 1 a 2 horas observados
durante os estágios iniciais da formação da placa
aumentam entre 12 a 15 horas após vários dias de
desenvolvimento do biofilme. Crescimento confluente
no
 5Placa dentária

actinomyc
etemcomit
ans

Adesina Receptor

P flueggei
.
Eubactériaspp.
intermediá S.
Atrasad
. . o
U rio
M spp colonizad
A ores
Treponema
P. gingivalis
sputigena

F. nucleatum

.
C C . . denticola
Cedo
. UMA colonizadores
UMA.
H P
naeslundii
.

gengival israelense parainfluenza

V. atípica
.
P. acnes
C
P. loescheii S. gordonii

S. oralis S. oralis
S. gordonii
S. mitis S. sanguinis

Proteín
na rica

prolina

bacteri
Fragm
Proteí

célula

a rica
ento

ana
em

em
de
Estaterina

Película adquirida

Superfície do dente

FIGURA 5.6Representação esquemática dos padrões de coagregação (coadesão) na placa dental humana. Os primeiros
colonizadores ligam-se a receptores na película adquirida; subsequentemente, outros colonizadores iniciais e posteriores se
ligam a receptores na superfície dessas células já aderidas (coadesão). Adesinas (símbolos com hastes) são componentes
celulares que são sensíveis ao calor ou à protease; o receptor (símbolo complementar) é insensível a qualquer um dos
tratamentos. Símbolos idênticos não implicam moléculas idênticas. Os símbolos com formas retangulares representam
coagregações inibidas por lactose. (Reproduzido de Kolenbrander e Londres, J Bacteriol 1993 175: 3247-3252; com
permissão da Sociedade Americana de Microbiologia.)
proteínas e ácido desoxirribonucleico extracelular
superfície do dente produz um biofilme com uma (eDNA). Glucanos (verFIGO. 4.11) são sintetizados
estrutura tridimensional (verFIGO. 5.5, D e E). por glicosiltransferases; esses enzimas podem ser
Uma característica chave da maturação de um secretadas e adsorvidas em outras bactérias ou na
biofilme é o desenvolvimento de uma matriz superfície do dente para formar parte do
extracelular de polímeros; na placa dentária, a matriz
inclui glucanos solúveis e insolúveis, frutanos,
película adquirida, onde podem permanecer
funcionais e contribuir ainda mais para a formação da
matriz. Em contraste, os frutanos produzidos pelas
frutosiltransferases (FTFs) têm vida curta na placa e
atuam como compostos extracelulares de
armazenamento de nutrientes para uso por outras
bactérias da placa.Capítulo 4). Recentemente, a
importação de eDNA para as propriedades do
biofilme tornou-se aparente. O DNA extracelular
pode ser liberado das células como resultado da lise,
mas em algumas situações também pode ser
secretado ativamente, por exemplo, como um
92 Microbiologia Oral de Marsh e Martin

Fissura;
Gram-positivo;
anaeróbios opcionais
• Estreptococo
• Actinomyces

Aproximado Fenda gengival

Gram-positivos e Gram-negativos; Gram-positivos e Gram-negativos;
anaeróbios opcionais e anaeróbios opcionais e
obrigatórios: obrigatórios:
• Neisseria • Estreptococo
• Estreptococo • Actinomyces
• Actinomyces • Eubactéria
• Prevotella • Fusobacterium
• Veillonella • Prevotella
• Treponema

FIGURA 5.7Grupos predominantes de bactérias encontrados em locais distintos na superfície do dente.

crescimento microbiano, de modo que locais próximos
podem ser muito diferentes na concentração de
consequência da sinalização célula-célula (quorum nutrientes essenciais e produtos tóxicos do metabolismo,
sensing; veja mais adiante), ou através de vesículas bem como em termos de
que borbulham para fora da superfície de bactérias
Gram-negativas (vejaFIGO. 3.7, B). A degradação
enzimática do eDNA pode enfraquecer a estrutura do
biofilme e, portanto, acredita-se que o eDNA
contribua para a integridade estrutural da matriz,
além de estar envolvido na transferência gênica
convencional. Algumas bactérias produzem DNases
que podem degradar o eDNA, gerando assim
nucleotídeos que podem ser usados por organismos
dentro da comunidade do biofilme.
Uma matriz é uma característica comum a todos
os biofilmes e é mais do que um andaime químico
para manter a estrutura do biofilme. Faz uma
contribuição significativa para a integridade
estrutural e tolerância geral de biofilmes a fatores
ambientais (por exemplo, dessecação) e agentes
antimicrobianos. A matriz pode ser biologicamente
ativa e reter água, nutrientes e enzimas dentro do
biofilme. A química da matriz também pode ajudar a
excluir ou restringir a penetração de outros tipos de
moléculas, incluindo alguns agentes antimicrobianos
carregados.
À medida que a placa amadurece, a microbiota se
torna mais diversificada. Uma pequena amostra de placa
pode conter até 100 espécies distintas, mas a
composição bacteriana varia em locais anatômicos
distintos devido às condições biológicas
predominantes.FIGO. 5.7). Os gradientes continuam a
se desenvolver em fatores que são críticos para o
pH e Eh, etc. Esses gradientes não são necessariamente
lineares; zonas de pH bastante diferente foram
detectadas adjacentes umas às outras em biofilmes de
placa gerados em laboratório. Essas estratificações
verticais e horizontais criarão heterogeneidade
ambiental local, resultando em um mosaico de
microhabitats ou microambientes. Tal heterogeneidade
pode explicar como organismos com requisitos de
crescimento aparentemente contraditórios em termos de
requisitos nutricionais, atmosféricos ou de pH são
capazes de coexistir na placa no mesmo local. Cada
microhabitat poderia potencialmente suportar o
crescimento de diferentes populações e, portanto, uma
comunidade microbiana distinta. Da mesma forma,
organismos que residem aparentemente no mesmo
ambiente geral podem estar crescendo sob condições
bastante diferentes e, portanto, exibir um fenótipo
diferente.Capítulo 4). A distribuição dos principais
grupos de microrganismos em locais distintos do dente
será descrita mais adiante (verFIGO. 5.7).
Biofilmes multiespécies criam oportunidades para
inúmeras interações entre as espécies constitutivas
que estão fisicamente próximas umas das outras. Isso
inclui exemplos de interações bioquímicas
antagônicas e sinérgicas convencionais, bem como
transferência de genes via plasmídeos e sinalização
célula-célula mediada por pequenas moléculas
difusíveis que permitem que bactérias semelhantes se
comuniquem e coordenem suas atividades; estes
serão descritos mais adiante neste capítulo.
 proteínas de sua própria superfície celular e assim se separa
de um biofilme monoespécie. Da mesma forma, uma
protease produzida por Prevotella loescheii pode
A microscopia eletrônica tem sido usada
extensivamente para visualizar a placa dentária, cuja
estrutura aparece tipicamente como camadas
comprimidas de vários tipos morfológicos de células
que são densamente agrupadas. No entanto, estudos
contemporâneos agora usam FISH e microscopia
confocal (verCapítulo 4), e demonstraram uma
arquitetura de biofilme mais aberta. Regiões em
paliçada podem ser vistas onde filamentos e cocos
parecem estar alinhados paralelamente em ângulos retos
à superfície do esmalte, enquanto microcolônias,
presumivelmente de populações de células únicas,
também foram observadas. Além disso, a estratificação
horizontal foi descrita; exemplos da ultraestrutura da
placa dentária são mostrados emFiguras 5.8, 5.9 e 5.10.
Na placa madura, organismos foram vistos em contato
direto com o esmalte devido ao ataque enzimático na
película. No sulco gengival, a placa possui uma camada
fina e densamente aderente na superfície radicular, com
a maior parte do biofilme apresentando uma estrutura
mais solta, principalmente onde entra em contato com o
revestimento epitelial do sulco gengival/bolsa
periodontal. Synergistetes spp. foram observados na
camada externa de biofilmes subgengivais, talvez
significativamente, em estreita proximidade com células
que se assemelham a neutrófilos, o que implica que
esses organismos podem desempenhar um papel direto
nas interações hospedeiro-biofilme. Muitas associações
bacterianas foram observadas subgengivalmente nessas
camadas externas, nas quais os cocos estão dispostos ao
longo do comprimento de organismos filamentosos, por
exemplo, espiga de milho, escova de tubo de ensaio ou
formações de rosetas (verFIGO. 5.5, F); a identidade
das bactérias envolvidas em algumas dessas associações
foi confirmada usando FISH. Formações de espiga de
milho entre estreptococos e Candida foram observadas
em biofilmes supragengivais, enquanto associações
espigas de milho e escova de tubo de ensaio entre
organismos Tannerella, Prevotella e Synergistetes e
entre estreptococos e bactérias fusiformes foram
detectadas em biofilmes subgengivais.

DESLIGAMENTO DAS SUPERFÍCIES

As forças de cisalhamento podem remover
microorganismos das superfícies orais, mas algumas
bactérias podem se destacar ativamente de dentro do
biofilme para poder colonizar em outros lugares.
Streptococcus mutans pode sintetizar uma enzima que cliva
 5Placa dentária moléculas do hospedeiro.Figuras 5.11e5.14). Por
exemplo, o crescimento de alguns organismos
dependerá de outros para remover o açúcar terminal
hidrólise de sua própria adesina associada às fímbrias,
responsável pela coagregação com S. oralis, bem como
pela ligação à fibrina. As bactérias podem ser capazes
de detectar mudanças adversas nas condições
ambientais, e estas podem atuar como pistas para
induzir os genes envolvidos no desprendimento ativo.

PONTOS CHAVE
A adesão de microrganismos à superfície condicionada do
dente é um processo complexo que envolve, inicialmente,
forças eletrostáticas atrativas fracas de longo alcance,
seguidas por uma variedade de interações moleculares
específicas, fortes e de curto alcance entre as adesinas
bacterianas e os receptores adsorvidos à superfície (película
adquirida ). Estes últimos processos, juntamente com a
síntese de polissacarídeos extracelulares a partir, por
exemplo, da sacarose, servem para aumentar a
probabilidade de fixação permanente. Polissacarídeos
extracelulares contribuem para a matriz da placa,
juntamente com proteínas, lipídios e eDNA. Espécies
pioneiras interagem diretamente com a película adquirida,
enquanto a formação subsequente de biofilme depende da
coesão intra e intergenérica entre as bactérias (envolvendo
a ligação mediada por lectina) e o crescimento subsequente
dos microrganismos aderidos. Fusobactérias atuam como
uma ponte entre as bactérias colonizadoras precoces e
tardias. Se as condições se tornarem desfavoráveis,
algumas células são capazes de se desprender ativamente,
o que cria uma oportunidade para elas colonizarem outros
locais.

CONSEQUÊNCIAS DA FORMAÇÃO DE
BIOFILME

INTERAÇÕES BIOQUÍMICAS
A proximidade de microrganismos em biofilmes
facilita uma série de interações bioquímicas que
podem ser benéficas para uma ou mais populações
que interagem, embora outras possam ser
antagônicas.Tabela 5.4).
Interações sinérgicas:Embora a competição por
nutrientes seja um dos principais determinantes
ecológicos em ditar a prevalência de uma determinada
espécie na placa dental, as bactérias também precisam
colaborar para quebrar as moléculas hospedeiras
complexas que atuam como seus substratos primários.
As proteínas e glicoproteínas salivares são as principais
fontes de nitrogênio e carbono em locais saudáveis.
Espécies individuais de bactérias orais possuem padrões
de atividade enzimática diferentes, mas sobrepostos, de
modo que a ação conjunta de várias espécies é
geralmente necessária para a degradação completa das
94 Microbiologia Oral de Marsh e Martin

CC

F
CC

C
C

UMA

UMA
P
UMA
UMA B C

FIGURA 5.8Ultraestrutura de placa dental com 2 semanas de idade de três indivíduos com diferentes padrões de colonização microbiana
(marcação A a C nas imagens). C, bactérias cocos Gram-positivas; F, bactérias filamentosas Gram-negativas; CC, formações de espigas de
milho; P, bactérias grandes e de formato irregular. Barra, 5 m. (Publicado com a permissão do Professor B Nyvad, Professor O Fejerskov e
Munksgaard.)

FIGURA 5.9Placa dentária em uma fissura na superfície
oclusal de um molar. (Ampliação aprox. × 60.) (Publicado
com permissão de KM Pang.)
TABELA 5.4 Fatores envolvidos em
interações microbianas benéficas e
antagônicas na placa dentária
Benéfico (sinérgico)
Complementação enzimática
Cadeias alimentares (teias
alimentares)
Coadesão
Sinalização célula-célula
Transferência de genes
De Meio Ambiente
modificação
5Placa dentária
da cadeia lateral do oligossacarídeo da glicoproteína
para expor um novo açúcar que eles são capazes de
utilizar.
A cooperação microbiana na quebra de
macromoléculas hospedeiras foi observada quando
bactérias subgengivais foram cultivadas em soro
humano (usado para imitar GCF). Mudanças na
composição microbiana dos consórcios foram evidentes
em diferentes estágios de degradação de glicoproteínas.
Inicialmente, as cadeias laterais de carboidratos foram
removidas por organismos com atividades
complementares de glicosidase, incluindo, por exemplo,
S. oralis, E. saburreum e Prevotella spp. Isto foi seguido
pela hidrólise do núcleo proteico por anaeróbios (por
exemplo, P. intermedia, P. oralis, F. nucleatum); alguma
fermentação de aminoácidos ocorreu e as cadeias
laterais de carboidratos restantes foram metabolizadas
levando ao surgimento de espécies de Veillonella. Uma
fase final foi caracterizada por degradação progressiva
de proteínas e extensa fermentação de aminoácidos; as
espécies predominantes incluíram Parvimonas micra e
E. brachy. Significativamente, as espécies individuais
cresceram apenas mal em cultura pura em soro. Uma
consequência dessas interações é que diferentes espécies
evitam a competição direta por nutrientes individuais e,
portanto, são capazes de coexistir.
Polímeros bacterianos também são alvos de
degradação. Polissacarídeos extracelulares sintetizados
por muitas bactérias da placa (verTabela 4.8) pode ser
metabolizado por outros organismos na ausência de
carboidratos exógenos (dietéticos). O frutano de S.
salivarius e outros estreptococos, e o polímero
semelhante ao glicogênio de Neis-seria, são
particularmente lábeis, e apenas baixos níveis de frutano
podem ser detectados na placa in vivo. Além disso,
antagônico
mutantes de estreptococos, membros dos grupos mitis
Bacteriocinas ou salivarius de estreptococos, A. israelii,
Capnocytophaga spp. e Fusobacterium spp. possuem
Peróxido de hidrogênio
atividade exohidrolítica e/ou endohidrolítica e
Ácidos orgânicos metabolizam glucanos estreptocócicos.
pH baixo Uma interação nutricional importante é quando os
Competição de produtos do metabolismo de um organismo (alimentador
nutrientes primário) se tornam a principal fonte de nutrientes para
Liberação de outro (alimentador secundário). Por exemplo, o lactato
bacteriófagos
produzido a partir do metabolismo de carboidratos da
dieta por uma variedade de outras espécies, pode ser
usado por Veillon-ella spp. e convertidos em ácidos
mais fracos. Desta forma, Veillonella spp. pode reduzir
o potencial cariogênico de outras bactérias da placa;
menos lesões de cárie foram obtidas em ratos inoculados
com S. mutans ou S. sanguinis e Veillonella do que em
animais monoinfectados
96 Microbiologia Oral de Marsh e Martin

FIGURA 5.10Micrografia eletrônica de varredura da placa subgengival, mostrando bastonetes, bastonetes curvos, filamentos
e células em forma de espiral. (Ampliação aprox. × 5000.) (Publicado com permissão de KM Pang.)

Organismo Láctic
UMA B C Estreptococo o
Cárie
mutans ácido
Cadeia lateral de oligossacarídeos Estrutura proteica

Láctic
Estreptococo o
Organismo mutans ácido

E D UMA

FIGURA 5.11Cooperação bacteriana na degradação de propiônico e Menos

glicoproteínas do hospedeiro (complementação enzimática). Veillonella ácidos
Por exemplo, o organismo A é capaz de clivar o açúcar acéticos cárie
terminal da cadeia lateral do oligossacarídeo, o que permite
ao organismo B ou D clivar o penúltimo resíduo, etc.
FIGURA 5.12Estabelecimento de uma cadeia alimentar
simples. Bactérias como Streptococcus mutans produzem
com qualquer um dos estreptococos (FIGO. 5.12). lactato a partir de açúcares fermentáveis que podem ser
Outras bactérias (por exemplo, Neisseria, metabolizados em ácidos mais fracos por espécies de
Corynebacterium e Eubacterium) também são capazes Veillonella; em animais gnotobióticos, essa cadeia alimentar
de metabolizar o lactato. Uma série de outras interações pode reduzir o potencial cariogênico desses estreptococos.
nutricionais entre bactérias orais foi descrita.FIGO.
5.13). Uma interação mutuamente benéfica ocorre entre C. retocom formato após a fermentação da glicose
S. sanguinis e Campylobacter rectus; o anaeróbio em condições limitantes de carboidratos.
elimina o oxigênio inibitório, ou possivelmente o Campylobacter rectus também é capaz de produzir
peróxido de hidrogênio produzido pelo estreptococo, proto-heme para o crescimento de anaeróbios
enquanto o S. sanguinis fornece pigmentados de preto.
 Numerosas interações nutricionais interbacterianas
ocorrem na placa, sendo o crescimento de algumas
espécies dependente do metabolismo de outros
organismos. De fato, nossas tentativas fracassadas de
cultivar algumas espécies em cultura pura se devem à
sua dependência do metabolismo de outras bactérias. A
diversidade da microbiota da placa é causada, em parte,
por:
• o desenvolvimento de tais cadeias e teias
alimentares (Figuras 5.12, 5.13 e 5.14), e para
 5Placa dentária

Estreptococo Aggregatib
CO2
Actinomyces Capnocytop

Eikenel

Succinato
Lactato Formatos H2O2
Fusobacte
Eubacté
H2
Veillonella Wolinella

Campylobacter
Isobutira
putresci

Acetato
Proto-heme Treponema
Vitamina K

Eubactéria
Pigmentado de preto
anaeróbios

FIGURA 5.13Algumas interações nutricionais potenciais (cadeias alimentares) entre as bactérias da placa.

bactérias Metanogênese
Desaminação
Glicoproteínas/proteínas hospedeiras
complexas Descarboxilação

Sulfatases Glicosidases Proteases CH4 CO2

H2S H2 NH3
Açúcare
Sulfato s Peptídeos grandes FIGURA 5.14Ilustração da quebra concertada e sequencial
de substratos complexos do hospedeiro por comunidades
de bactérias orais com atividades enzimáticas
complementares.
Glicolise Endo-peptidases

Peptídeos • a falta de um único nutriente limitando o

Ácido carboxílico pequenos
crescimento de todas as espécies bacterianas.
Interações antagônicas:A produção de
compostos antagonistas (como bacteriocinas ou
fermentação substâncias semelhantes a bacteriocinas) pode dar a
produtos Exo-peptidases um organismo uma vantagem competitiva durante a
colonização e quando
Sulfato
Aminoácidos
reduzindo
interagindo com outros micróbios (verTabela 5.4). As
bacteriocinas são proteínas de peso molecular
relativamente alto que podem inibir o crescimento de
bactérias relacionadas, enquanto as cepas produtoras são
resistentes à ação das bacteriocinas que produzem. As
bacteriocinas são produzidas pela maioria das espécies
de estreptococos orais, e os exemplos incluem mutacina
por S. mutans e sanguicina por S. sanguinis; em
contraste, as espécies de Actinomyces não são
geralmente bacteriocinogênicas. Embora as
bacteriocinas sejam geralmente limitadas em seu
espectro de atividade, muitas das bacteriocinas
estreptocócicas são de amplo espectro, inibindo espécies
pertencentes aos gêneros Gram-positivos (incluindo
Actinomyces) e Gram-negativos.
Outros fatores inibitórios produzidos pelas bactérias da
placa incluem ácidos orgânicos, peróxido de hidrogênio e
enzimas. A produção de peróxido de hidrogênio por
membros do grupo mitis de estreptococos tem sido
proposta como um mecanismo pelo qual o número de
patógenos periodontais é reduzido na placa a níveis em que
eles são incapazes de iniciar a doença. O corolário disso,
porém, é que alguns patógenos periodontais (p.Capítulo 6)
pode resultar de um desequilíbrio ecológico entre grupos de
bactérias que interagem dinamicamente. O baixo pH gerado
pelo metabolismo de carboidratos
98 Microbiologia Oral de Marsh e Martin de bactérias em um biofilme pode diferir
marcadamente daquele previsto por
também é inibitória para muitas espécies de placas,
particularmente organismos Gram-negativos e alguns
estreptococos benéficos associados ao esmalte sadio.
Estudos do metagenoma de biofilmes dentários
mostraram a presença de genes codificadores de
bacteriófagos. Os fagos são vírus bacterianos que podem
lisar células concorrentes. A produção de fatores
antagônicos não levará necessariamente à exclusão
completa de espécies sensíveis, pois a presença de
microhabitats distintos dentro de um biofilme, como a
placa, permite que as bactérias sobrevivam em
condições que seriam incompatíveis com elas em um
ambiente homogêneo. .
O antagonismo também será um mecanismo pelo qual
espécies exógenas (alóctones) são impedidas de colonizar a
cavidade oral (resistência à colonização; verCapítulo 4).
Por exemplo, alguns S. salivarius Deformação produzem
um inibidor (enocina ou salivaricina) ativo contra
estreptococos do Grupo A de Lancefield (como S.
pyogenes), que é um patógeno oportunista. Cepas
produtoras de bacteriocinas podem prevenir a colonização
da boca por esse patógeno de maneira semelhante à
proposta para estreptococos na faringe. Tem sido alegado
que o S. salivarius é mais frequentemente isolado da
garganta de crianças que não são colonizadas após a
exposição a estreptococos do grupo A do que daquelas que
são infectadas. Na Nova Zelândia, as crianças podem ser
deliberadamente implantadas com cepas produtoras de
bacteriocina de S. salivarius para reduzir infecções por
estreptococos do grupo A; este processo é denominado
terapia de substituição. Essas e outras bactérias inibitórias,
como lactobacilos e bifidobactérias da indústria de
laticínios,Capítulo 6). Os probióticos são bactérias vivas
que, quando administradas, proporcionam benefícios à
saúde do hospedeiro. A ingestão regular de probióticos
orais pode alterar a colonização por bactérias cariogênicas,
e há alegações de que seu uso pode reduzir a formação de
placa e inflamação gengival, mas são necessários mais
estudos. Assim, as interações microbianas desempenharão
um papel importante na determinação tanto da composição
final quanto do padrão de desenvolvimento da microbiota
da placa.

IMPACTO NA EXPRESSÃO GENÉTICA

A maturação da placa envolve o crescimento de
bactérias aderidas para produzir um biofilme
estrutural e funcionalmente organizado. O fenótipo
 durante os estágios iniciais da formação do biofilme. a
biossíntese de aminoácidos e ácidos graxos e a divisão
celular foram reguladas positivamente. Novas proteínas
estudos do mesmo organismo em cultura líquida
de função ainda desconhecida foram expressas por
(planctônica). A expressão gênica pode ser alterada
biofilme, mas não por células planctônicas. Os genes
quando os microrganismos inicialmente fazem contato
envolvidos com a síntese de glucanos e frutanos em S.
com uma superfície. Os genes envolvidos com a
mutans são regulados diferencialmente durante a
motilidade podem ser reprimidos, enquanto outros genes
formação do biofilme. Em modelos de laboratório,
necessários para fixação, síntese de polissacarídeos
houve pouca influência do crescimento da superfície na
extracelulares ou crescimento em novos substratos
expressão gênica associada à síntese de exopolímeros
podem ser induzidos ou regulados positivamente.Tabela
durante os estágios iniciais da formação do biofilme.<48
5.1). Por exemplo, a exposição de S. gordonii à saliva
horas), mas a expressão de gtf foi marcadamente
resulta na indução de genes que codificam adesinas que
aumentada em biofilmes mais antigos (7 dias), enquanto
podem se ligar a glicoproteínas salivares e se engajar em
a atividade de ftf foi reprimida. Isso foi interpretado
coagregação com espécies de Actinomyces. Mudanças
como um efeito indireto do crescimento do biofilme na
de mercado nos perfis de proteínas após a fixação foram
expressão gênica, provavelmente como uma resposta a
identificadas em S. mutans usando uma abordagem
mudanças nas condições ambientais locais, como
proteômica de células inteiras (análise de proteínas).
concentração de açúcar ou pH à medida que o biofilme
Durante os estágios iniciais da formação do biofilme por
amadureceu, e não por causa da ligação inicial.
S. mutans (as primeiras duas horas após a fixação), mais
de 30 proteínas foram expressas diferencialmente (a As bactérias subgengivais também realizam
maioria foi regulada positivamente, mas algumas foram mudanças substanciais na expressão gênica durante a
reguladas negativamente). Houve aumento da síntese formação do biofilme. Porphyromonas gingivalis
relativa de enzimas envolvidas no catabolismo de regulou diferencialmente cerca de 20% de seu
carboidratos; estas podem ser necessárias para a geração genoma durante a formação do biofilme, com genes
de energia, embora essas moléculas sejam envolvidos na adesão regulados positivamente
multifuncionais e também possam atuar como adesinas durante
quando localizadas na superfície celular. Em contraste,
algumas enzimas glicolíticas envolvidas na produção de
ácido foram reguladas negativamente em biofilmes mais
antigos (3 dias), enquanto as proteínas envolvidas em
uma série de funções bioquímicas, incluindo
dobramento e secreção de proteínas, biossíntese de
aminoácidos e ácidos graxos e divisão celular, foram
reguladas positivamente . Novas proteínas de função
ainda desconhecida foram expressas por biofilme, mas
não por células planctônicas. Os genes envolvidos com
a síntese de glucanos e frutanos em S. mutans são
regulados diferencialmente durante a formação do
biofilme. Em modelos de laboratório, houve pouca
influência do crescimento da superfície na expressão
gênica associada à síntese de exopolímeros durante os
estágios iniciais da formação do biofilme. a biossíntese
de aminoácidos e ácidos graxos e a divisão celular
foram reguladas positivamente. Novas proteínas de
função ainda desconhecida foram expressas por
biofilme, mas não por células planctônicas. Os genes
envolvidos com a síntese de glucanos e frutanos em S.
mutans são regulados diferencialmente durante a
formação do biofilme. Em modelos de laboratório,
houve pouca influência do crescimento da superfície na
expressão gênica associada à síntese de exopolímeros
 DNA, aumentando assim a oportunidade de
transferência horizontal de genes em biofilmes orais. A
CSP também está diretamente envolvida
acessório. Mais tarde, houve aumentos de proteínas
associadas ao transporte e metabolismo do heme, o que
seria importante para o crescimento dos organismos em
condições de nutrientes limitados. Tan-nerella forsythia
também sofre adaptação substancial durante a formação
do biofilme. As proteínas associadas à membrana
externa e aos sistemas de transporte foram reguladas
positivamente, enquanto a via do butirato foi regulada
negativamente. As proteínas envolvidas com a resposta
ao estresse oxidativo também foram reguladas
positivamente, e as células do biofilme foram 10 a 20
vezes mais tolerantes ao estresse oxidativo.
A situação pode se complicar em consórcios
multiespécies. Em biofilmes de cultura mista de bactérias
subgengivais, a inclusão de A. actinomycetemcomitans
resultou em um aumento nas proteínas expressas por P.
intermedia, mas subregulação substancial de proteínas
expressas por C. rectus, S. anginosus e P. gingivalis.
Assim, as interações entre os membros da comunidade e a
resposta às condições ambientais locais terão
consequências profundas para o hospedeiro.

CÉLULA - SINALIZAÇÃO CELULAR

A proximidade das células entre si em biofilmes fornece
condições ideais para interações célula-célula. Além das
interações bioquímicas mais convencionais, há
evidências de micróbios em vários habitats de
crescimento dependente da densidade celular (sensor de
quorum), em que células individuais são capazes de se
comunicar e responder a células vizinhas por meio de
pequenas células difusíveis. , moléculas efetoras. Estes
incluem lactonas de acil-homoserina produzidas por
bactérias Gram-negativas e pequenos peptídeos
secretados por células Gram-positivas. Os péptidos são
geralmente detectados através de sistemas de transdução
de sinal de dois componentes. Essas estratégias de
sinalização célula-célula permitem que as células
detectem e se adaptem a vários estresses ambientais e
regulem (e coordenem) a expressão de genes que
influenciam a capacidade dos patógenos de causar
doenças.
A detecção de quorum é mediada por um peptídeo
estimulador de competência (CSP) em S. mutans. Este
peptídeo também induz competência genética em S.
mutans (ou seja, a capacidade de absorver DNA) de
modo que a eficiência de transformação de S. mutans
cultivados em biofilme foi de 10 a 600 vezes maior do
que para células planctônicas. As células lisadas em
biofilmes, como a placa, podem atuar como doadoras de
 5Placa dentária
na formação de biofilme, uma vez que mutantes em
alguns dos genes envolvidos no sistema de sinalização
CSP produzem biofilmes defeituosos. Este sistema de
detecção de quorum também funciona para regular a
tolerância ao ácido em S. mutans em biofilmes. Quando
as células são expostas a um choque ácido, o CSP é
liberado, o que pode iniciar uma resposta bioquímica
protetora coordenada por células de S. mutans mais
distantes, permitindo que elas sobrevivam a um estresse
potencialmente letal.
CSPs são específicos para células da mesma espécie,
mas outros sistemas de comunicação podem funcionar
entre diferentes gêneros. Pesquisas de bactérias
periodontais Gram-negativas sugerem que esses
organismos não possuem as moléculas sinalizadoras de
acil-homoserina lactona detectadas em bactérias
ambientais. Os genes LuxS codificam para o
autoindutor-2 (AI-2), e estes foram detectados em vários
gêneros de bactérias orais Gram-positivas e Gram-
negativas, implicando que AI-2 pode ser uma linguagem
universal para comunicação interespécies em bactérias
de placa. Várias bactérias periodontais, incluindo F.
nucleatum, P. intermedia, P. gingivalis e A. actinomyc-
etemcomitans, secretam um sinal relacionado ao AI-2.
AI-2 está envolvido na produção de leucotoxina e
aquisição de ferro em A. actinomycetemcomitans e
atividades de protease (arg-gingipain e lys-gingipain) e
hemaglutinina em P. gengival. Streptococcus gordonii e
P. gingivalis podem responder a sinais LuxS um do
outro (ou seja, eles podem detectar sinais heterólogos),
mas o padrão de genes que são regulados por LuxS
difere em cada espécie. Em mutantes LuxS, genes
associados ao metabolismo de carboidratos, como
glicosiltransferase e frutosi-dase, foram regulados
negativamente no Streptococcus, enquanto genes
relacionados à aquisição de hemina e uma protease
específica de arginina foram regulados positivamente
em P. gingivalis. Essas descobertas levaram a uma
busca para entender e identificar mais dessas redes de
comunicação. Um possível resultado prático de tais
estudos pode ser o desenvolvimento de análogos
sintéticos de moléculas sinalizadoras específicas que
possam ser usadas como uma nova abordagem
terapêutica para manipular as propriedades dos
biofilmes orais. gingivalis podem responder a sinais
LuxS uns dos outros (ou seja, eles podem detectar sinais
heterólogos), mas o padrão de genes que são regulados
por LuxS difere em cada espécie. Em mutantes LuxS,
genes associados ao metabolismo de carboidratos, como
glicosiltransferase e frutosi-dase, foram regulados
negativamente no Streptococcus, enquanto genes
relacionados à aquisição de hemina e uma protease
específica de arginina foram regulados positivamente
em P. gingivalis. Essas descobertas levaram a uma
busca para entender e identificar mais dessas redes de
comunicação. Um possível resultado prático de tais
estudos pode ser o desenvolvimento de análogos
sintéticos de moléculas sinalizadoras específicas que
possam ser usadas como uma nova abordagem
terapêutica para manipular as propriedades dos
biofilmes orais. gingivalis podem responder a sinais
LuxS uns dos outros (ou seja, eles podem detectar sinais
heterólogos), mas o padrão de genes que são regulados
por LuxS difere em cada espécie. Em mutantes LuxS,
genes associados ao metabolismo de carboidratos, como
glicosiltransferase e frutosi-dase, foram regulados
negativamente no Streptococcus, enquanto genes
relacionados à aquisição de hemina e uma protease
específica de arginina foram regulados positivamente
em P. gingivalis. Essas descobertas levaram a uma
busca para entender e identificar mais dessas redes de
comunicação. Um possível resultado prático de tais
estudos pode ser o desenvolvimento de análogos
sintéticos de moléculas sinalizadoras específicas que
possam ser usadas como uma nova abordagem
terapêutica para manipular as propriedades dos
biofilmes orais. mas o padrão de genes que são
regulados por LuxS difere em cada espécie. Em
mutantes LuxS, genes associados ao metabolismo de
carboidratos, como glicosiltransferase e frutosi-dase,
foram regulados negativamente no Streptococcus,
enquanto genes relacionados à aquisição de hemina e
uma protease específica de arginina foram regulados
positivamente em P. gingivalis. Essas descobertas
levaram a uma busca para entender e identificar mais
dessas redes de comunicação. Um possível resultado
prático de tais estudos pode ser o desenvolvimento de
análogos sintéticos de moléculas sinalizadoras
específicas que possam ser usadas como uma nova
abordagem terapêutica para manipular as propriedades
dos biofilmes orais. mas o padrão de genes que são
regulados por LuxS difere em cada espécie. Em
mutantes LuxS, genes associados ao metabolismo de
carboidratos, como glicosiltransferase e frutosi-dase,
foram regulados negativamente no Streptococcus,
enquanto genes relacionados à aquisição de hemina e
uma protease específica de arginina foram regulados
positivamente em P. gingivalis. Essas descobertas
levaram a uma busca para entender e identificar mais
dessas redes de comunicação. Um possível resultado
prático de tais estudos pode ser o desenvolvimento de
análogos sintéticos de moléculas sinalizadoras
específicas que possam ser usadas como uma nova
abordagem terapêutica para manipular as propriedades
dos biofilmes orais. genes associados ao metabolismo de
carboidratos, como glicosiltransferase e frutosi-dase,
foram regulados negativamente no Streptococcus,
enquanto genes relacionados à aquisição de hemina e
uma protease específica de arginina foram regulados
positivamente em P. gingivalis. Essas descobertas
levaram a uma busca para entender e identificar mais
dessas redes de comunicação. Um possível resultado
prático de tais estudos pode ser o desenvolvimento de
análogos sintéticos de moléculas sinalizadoras
específicas que possam ser usadas como uma nova
abordagem terapêutica para manipular as propriedades
dos biofilmes orais. genes associados ao metabolismo de
carboidratos, como glicosiltransferase e frutosi-dase,
foram regulados negativamente no Streptococcus,
enquanto genes relacionados à aquisição de hemina e
uma protease específica de arginina foram regulados
positivamente em P. gingivalis. Essas descobertas
levaram a uma busca para entender e identificar mais
dessas redes de comunicação. Um possível resultado
prático de tais estudos pode ser o desenvolvimento de
análogos sintéticos de moléculas sinalizadoras
específicas que possam ser usadas como uma nova
abordagem terapêutica para manipular as propriedades
dos biofilmes orais.
Evidências emergentes também sugerem que os
membros da microbiota residente também podem se
envolver em 'cross-talk' com o hospedeiro, por exemplo,
regulando negativamente a potencial indução de
citocinas pró-inflamatórias e regulando positivamente as
vias benéficas, promovendo ativamente uma relação
harmoniosa entre a microbiota normal e o anfitrião
(verCapítulo 4).
100 Microbiologia Oral de Marsh e Martin cultivado como um biofilme em comparação com o
mínimo bactericida
TRANSFERÊNCIA GENÉTICA
A proximidade das células em biofilmes fornece
condições ideais para a transferência horizontal de
genes. Conforme descrito anteriormente, as moléculas
de sinalização, como o peptídeo estimulador de
competência (CSP), aumentam acentuadamente a
capacidade das células receptoras de absorver DNA. O
DNA extracelular (eDNA) está presente nos biofilmes, e
os CSPs aumentam a probabilidade de serem absorvidos
pelas células receptoras. O eDNA pode ser liberado
durante a lise celular, mas também está ligado à
produção de peróxido de hidrogênio por alguns
estreptococos orais. O eDNA também pode ser
encontrado em vesículas liberadas da superfície celular,
especialmente por bactérias Gram-negativas.
Bacteriófagos capazes de entregar e integrar DNA em
bactérias orais também estão presentes em biofilmes
dentários. Além disso,
A evidência de que a transferência horizontal de
genes ocorre na boca veio da descoberta de que
bactérias residentes (S. mitis, S. oralis) e patogênicas (S.
pneumo-niae) isoladas da área nasofaríngea possuem
genes que conferem resistência à penicilina que exibem
uma estrutura de mosaico comum. Evidências
semelhantes sugerem o compartilhamento de genes que
codificam proteínas de ligação à penicilina entre
espécies de Neisseria orais e patogênicas residentes.
Esses achados sugerem que a placa pode funcionar
como um reservatório genotípico por abrigar elementos
móveis e genes transferíveis. Essa troca genética pode
ter um amplo significado clínico, dado o número de
bactérias abertamente patogênicas que podem aparecer
transitoriamente na boca.

TOLERÂNCIA ANTIMICROBIANA
As bactérias orais que crescem como um biofilme,
como a placa dentária, apresentam uma sensibilidade
marcadamente reduzida a antibióticos e agentes
antimicrobianos.Tabela 5.5; marFIGO. 5,15),
incluindo aqueles usados em cremes dentais e
enxaguatórios bucais. Conforme discutido
anteriormente, isso não é resistência genética, pois as
células apresentam sensibilidade normal ao agente
antimicrobiano se o biofilme estiver disperso;
portanto, refere-se a uma tolerância fenotípica. Por
exemplo, a concentração inibitória do biofilme de
clorexidina e fluoreto de amina foi 300 e 75 vezes
maior, respectivamente, quando S. sobrinus foi
 Os mecanismos que causam o aumento da
tolerância das células do biofilme aos agentes
antimicrobianos incluem:
TABELA 5.5 Aumento da tolerância a (a) penetração limitada (teoria da reação de
agentes antimicrobianos quando as difusão) (FIGO. 5,15),
bactérias orais são cultivadas como um (b) inativação (por exemplo, por enzimas
biofilme neutralizantes),
Agente Efeito de (c) extinguindo,
Bactéria antimicrobiano biofilme*
Estreptococo Clorexidina 10–50 × MIC†
sangüíneo
Estreptococo Fluoreto de amina 75 × MBC‡
sobrinus Clorexidina 300 × MBC
Porphyromonas Metronidazol 2–8 × MBC
gengival Doxiciclina 4–64 × MBC
Amoxicilina 2–4 × MBC
* Efeito de biofilme, alteração na sensibilidade das
células que crescem como biofilme em comparação
com quando as células foram cultivadas em cultura
líquida (planctônica).
†
MIC, concentração inibitória mínima de células
planctônicas.
‡
MBC, concentração bactericida mínima de células
planctônicas.

concentração de células planctônicas. Da mesma forma,

antibióticos como amoxicilina e doxiciclina não tiveram
efeito sobre a viabilidade de biofilmes de S. sanguinis
quando usados em níveis de CIM, e biofilmes de
laboratório de P. gingivalis mostraram maior tolerância
à doxiciclina e metronidazol. A eliminação completa de
biofilmes às vezes era necessária a exposição a níveis
500 vezes maiores que a CIM de um antibiótico
específico, embora os biofilmes de S. san-guinis tenham
sido mortos após exposição a 10 a 50 vezes a CIM da
clorexidina.
A idade do biofilme pode afetar a sensibilidade das
células a um agente antimicrobiano. Biofilmes mais
antigos de S. sanguinis foram menos suscetíveis à
clorexidina do que biofilmes mais jovens; a
concentração de morte de biofilme para o primeiro
sendo 200µg/ml comparado com 50µg/ml para este
último. Da mesma forma, fazer parte de uma
comunidade microbiana pode influenciar a sensibilidade
das células a um antibiótico; Organismos suscetíveis
podem parecer 'resistentes' se as células vizinhas
secretam uma enzima neutralizante ou degradante de
drogas. As bactérias na placa subgengival podem
produzirβ-lactamase para inativar a penicilina
administrada nesse local durante a terapia.
 5Placa dentária

UMA B

FIGURA 5.15Penetração de clorexidina (CHX) em um biofilme de placa dental; um biofilme não tratado é mostrado em (A), e
o biofilme tratado é mostrado em (B). O biofilme foi visualizado com uma coloração viva/morta, na qual as bactérias viáveis
coram em verde e as células mortas em vermelho. A clorexidina tem efeito antimicrobiano nas camadas mais externas da
placa dental, mas não conseguiu matar as células mais profundas do biofilme. (Reproduzido com permissão do Dr. E. Zaura-
Arite.)

o desenvolvimento de biofilmes multiespécies organizados

espacial e funcionalmente.

(d) condições ambientais desfavoráveis para a

atividade,
(e) taxas de crescimento microbiano lentas, e
(d) expressão de um novo fenótipo microbiano
(verTabela 5.1).

PONTOS CHAVE
Um estilo de vida de biofilme tem um impacto direto e
indireto na expressão gênica por bactérias orais, com
muitos genes específicos de biofilme sendo expressos. As
células em biofilmes também exibem
diminuição da sensibilidade aos agentes antimicrobianos.
Microrganismos em biofilmes estão próximos uns dos
outros, o que facilita uma série de interações bioquímicas
(antagonistas e sinérgicas), bem como oportunidades para
transferência de genes. Além disso, as células anexadas
podem se comunicar umas com as outras e coordenar a
expressão gênica, através da produção de pequenas
moléculas de sinalização difusíveis, como o peptídeo
estimulador de competência por S. mutans e o autoindutor-
2 por uma variedade de espécies orais. O resultado final é
COMPOSIÇÃO BACTERIANA DA
COMUNIDADE CLIMAX DE PLACAS
DENTÁRIAS DE DIFERENTES
LOCALIZAÇÕES
As condições ambientais em um dente não são
uniformes. Existem diferenças nos nutrientes
prevalentes, grau de proteção contra as forças de
remoção oral e em outros fatores biológicos e
químicos que influenciam o crescimento da
microbiota residente. Essas diferenças são refletidas
na composição da comunidade microbiana,
particularmente em locais tão obviamente distintos
como a fenda gengival, regiões proximais, superfícies
lisas e sulcos e fissuras. Os gêneros bacterianos
predominantes nesses locais são mostrados emFigura
5.7, e uma descrição mais detalhada da microbiota
em cada local é fornecida abaixo. A aplicação de
técnicas moleculares independentes de cultura
aumentou nosso conhecimento sobre a diversidade da
microbiota de biofilmes dentários, e muitas novas
espécies estão sendo descritas (verCapítulos 3e4).
102 Microbiologia Oral de Marsh e Martin

TABELA 5.6 A microbiota cultivável predominante de 10 fissuras oclusais em adultos

Porcentagem mediana do
total
Variedade Frequência de isolamento
Bactéria microbiota cultivável (%) percentual
Estreptococo 45 8–86 100
Estafilococo 9 0–23 80
Actinomyces 18 0–46 80
Propionibacterium 1 0–8 50
Eubactéria 0 0–27 10
Lactobacillus 0 0–29 20
Veillonella 3 0–44 60
Espécies individuais:
Estreptococos mutantes 25 0–86 70
Streptococcus mitis-grupo 1 0–15 50
Streptococcus anginosus-grupo 0 0–3 10
Actinomyces naeslundii 3 0–44 70
Lactobacillus casei 0 0–10 10
Lactobacillus plantarum 0 0–29 10

severo. A distribuição de bactérias dentro de uma fissura

não
PLACA DE FISSURA
A microbiologia da placa de fissura foi determinada
usando fissuras artificiais implantadas em superfícies
oclusais de restaurações preexistentes, ou por
amostragem de fissuras naturais. A microbiota
cultivável é principalmente Gram-positiva e é dominada
por estreptococos, especialmente espécies produtoras de
polissacarídeos extracelulares. Em um estudo, não
foram encontrados bastonetes Gram-negativos
obrigatoriamente anaeróbios, embora outros tenham
recuperado anaeróbios em baixo número, como as
espécies de Veillonella e Propionibacterium.Tabela 5.6).
Espécies Gram-negativas aeróbicas e facultativamente
anaeróbicas, como Neisseria spp. e Haemophilus
parainfluenzae, também foram isolados em algumas
ocasiões. Uma característica marcante da microbiota é a
grande variedade de números e tipos de bactérias nas
diferentes fissuras. Em um estudo, a microbiota
anaeróbica total variou de 1×106para 33
× 106unidades formadoras de colônia (UFC) para
fissura. A saliva tem uma grande influência nas
propriedades biológicas das fissuras, e a dieta também
pode ser um fator significativo, pois os alimentos podem
ser afetados. A comunidade mais simples encontrada
nas fissuras em comparação com outras superfícies de
esmalte provavelmente reflete um ambiente mais
foi estudado em detalhes, embora tenha sido afirmado
que lactobacilos e estreptococos mutantes habitam
preferencialmente as profundidades mais baixas de uma
fissura. É claro a partirFigura 5.9que as condições
ambientais na base da a fissura será muito diferente em
termos de disponibilidade de nutrientes, pH e efeitos
tampão da saliva em relação às áreas mais próximas da
superfície da placa.

PLACA APROXIMAL
Os estreptococos estão presentes em grande número,
mas os locais proximais são frequentemente
dominados por bastonetes Gram-positivos,
particularmente espécies de Actinomyces, como A.
naes-lundii e A. israelii.Tabela 5.7). O local tem um
potencial redox menor do que as fissuras, resultando
em uma maior recuperação de organismos
obrigatoriamente anaeróbios, embora espiroquetas
não sejam normalmente encontradas.
A recuperação e as proporções de diferentes grupos de
bactérias variam em torno da área de contato. A frequência
de isolamento de S. mutans e S. sobrinus foi maior nos
subsítios abaixo da área de contato, sendo este também o
sítio mais propenso à cárie. Da mesma forma, A. naeslundii
e A. odontolyticus foram encontrados mais comumente
abaixo da área de contato, enquanto Neisseria, S. sanguinis
e S. mitis biovar 1 foram recuperados com mais frequência
nos subsítios
 5Placa dentária 103

TABELA 5.7 A microbiota cultivável predominante de placa aproximada

Porcentagem média do
total
Variedade Frequência de isolamento
Bactéria microbiota cultivável (%) percentual
Estreptococo 23 0,4–70 100
Bastões Gram-positivos 42 4–81 100
(predominantemente
Actinomyces)
Bastões Gram-negativos 8 0–66 93
(predominantemente Prevotella)
Neisseria 2 0–44 76
Veillonella 13 0–59 93
Fusobacterium 0,4 0–5 55
Lactobacillus 0,5 0–2 24
Rothia 0,4 0–6 36
Algumas espécies individuais:
Estreptococos mutantes 2 0–23 66
Streptococcus sanguinis 6 0–64 86
Streptococcus salivarius 1 0–7 54
Streptococcus anginosus-grupo 0,5 0–33 45
Actinomyces israelii 17 0–78 72
Actinomyces naeslundii 19 0–74 97

derivam sua energia da hidrólise de proteínas e

peptídeos do hospedeiro e do catabolismo de
longe e ao lado da área de contato. Tais variações
enfatizam novamente a necessidade de amostragem
precisa de locais discretos ao tentar correlacionar a
composição da placa com a doença.

PLACA DE FENDA GENGIVAL

Um clima ecológico obviamente distinto é encontrado
na fenda gengival. Isso se reflete na maior diversidade
de espécies da comunidade bacteriana neste local
(FIGO. 5.10), embora o número total de bactérias
cultiváveis possa ser baixo (103a 106UFC / fenda).
Bactérias anaeróbicas obrigatórias são cultivadas em
grande número neste local, muitas das quais são Gram-
negativas ou semelhantes a Eubacterium (verTabela
5.8eFIGO. 3.6), e espiroquetas e estreptococos
anaeróbios são isolados quase exclusivamente de
biofilmes subgengivais. A ecologia da fenda é
influenciada pela anatomia do local e pelo fluxo e
propriedades do fluido gengival crevicular
(GCF;Capítulo 2). A maioria dos organismos que
habitam este local são assacarolíticos e proteolíticos, e
aminoácidos. Na doença, a fenda gengival aumenta
para se tornar uma bolsa periodontal (verFIGO. 2.1),
e o fluxo de GCF aumenta. A diversidade da
microbiota ainda aumenta na doença e será descrita
com mais detalhes emCapítulo 6.
Entre os gêneros e espécies associados à fenda gengival
saudável estão membros dos grupos mitis e anginosus de
estreptococos; além disso, bastonetes Gram-positivos como
Actinomyces spp. (A. odontolyticus, A. naeslundii, A.
georgiae) e Rothia dentocariosa também são encontrados.
O anaeróbio pigmentado de preto mais comumente isolado
na fenda gengival saudável é Prevotella melaninogenica,
enquanto P. nigrescens também foi recuperado em algumas
ocasiões. Fusobactérias estão entre os anaeróbios
cultiváveis mais comuns encontrados na fenda gengival
saudável, e espécies capnofílicas como Capnocytophaga
ochracea podem ser isoladas.
Estudos moleculares usando abordagens
independentes de cultura (por exemplo, amplificação do
gene 16S rRNA, FISH;Capítulo 3) mostraram que a
microbiota subgengival é extremamente diversa, mesmo
na saúde. Cerca de 40% dos clones amplificados
representavam novos filotipos.
104 Microbiologia Oral de Marsh e Martin

TABELA 5.8 A microbiota cultivável predominante da fenda gengival saudável*

Porcentagem média do
total
Variedade Frequência de
Bactéria microbiota cultivável (%) isolamento (%)
Cocos gram-positivos anaeróbios facultativos 40 2–73 100
(predominantemente estreptococos)
Cocos Gram-positivos obrigatoriamente
anaeróbicos 1 0–6 14
Bastonetes Gram-positivos anaeróbios
facultativos 35 10–63 100
(predominantemente Actinomyces)
Bastonetes Gram-positivos obrigatoriamente
anaeróbicos 10 0–37 86
Gram negativo facultativamente anaeróbico 0,3 0–2 14
cocos (predominantemente Neisseria)
Cocos Gram-negativos obrigatoriamente
anaeróbicos 2 0–5 57
(predominantemente Veillonella)
Bastonetes Gram-negativos facultativamente
anaeróbios ND ND ND
Bastonetes Gram-negativos obrigatoriamente
anaeróbicos 13 8–20 100

* As amostras foram retiradas da fenda gengival de sete humanos adultos.

ND, Não detectado.

As bactérias TM7 orais humanas, das quais nenhum

exemplo oral foi cultivado em cultura pura, foram
detectadas com frequência em amostras e
constituíram cerca de 1% do total de bactérias em
locais subgengivais saudáveis (consulteFIGO. 5.16).
Um número de espiroquetas foram detectados,
incluindo Treponema vincentii, T. denticola, T. mal-
tophilum e T. lecitinolyticum, bem como membros
dos gêneros Selenomonas, Prevotella,
Capnocytophaga e Campylobacter.

PONTOS CHAVE
A composição microbiana dos biofilmes nos
dentes varia em superfícies distintas devido a
diferenças no ambiente local.
As fissuras são influenciadas pelas propriedades da
saliva e os biofilmes são dominados por estreptococos;
essas bactérias têm um estilo de metabolismo
sacarolítico.
A fenda gengival suporta o crescimento de FIGURA 5.16Bactérias não cultiváveis pertencentes ao grupo
bactérias fastidiosas, obrigatoriamente anaeróbicas, TM7 (azul) em placa dental subgengival. (Reproduzido de
muitas das quais são Gram-negativas e Ouverney et al, Appl Environ Microbiol 2003 69: 6294-6298; com
proteolíticas. O GCF tem uma grande influência na permissão da American Society for Microbiology.)
biologia deste sítio.
PLACA DE DENTÁRIA
A microbiota da placa de prótese de locais saudáveis (ou
seja, sem sinal de estomatite por prótese,Capítulo 8) é
altamente variável, como pode ser deduzido das amplas
faixas de contagens viáveis obtidas para bactérias
individuais, como
ilustrado emTabela 5.9. Também ocorrem diferenças
entre o encaixe e as superfícies expostas da prótese. Na
área relativamente estagnada na superfície de encaixe da
prótese, a placa tende a ser mais acidogênica,
favorecendo assim os estreptococos (especialmente os
estreptococos mutans)
 5Placa dentária

TABELA 5.9 A microbiota cultivável PLACA DENTÁRIA DE ANIMAIS

predominante da placa de prótese Há interesse na composição microbiana da placa
Percentage dental de animais por duas razões principais: (a)
m estudar a influência de dietas e estilos de vida
Percentagem isolamento amplamente diferentes na microbiota, e (b)
Microrganismo contagem viável frequência determinar a semelhança entre a microbiota de um
Median Varied animal com aquela. humanos para verificar sua
a ade relevância como um modelo de doença oral humana.
Estreptococo 41 0–81 88 A nível de gênero, a microbiota da placa é
  Mutantes <1 0–48 50 semelhante entre animais que representam grupos
estreptococos alimentares tão diversos como insetívoros, herbívoros
  S. mitisgrupo 2 0–30 75 e carnívoros. Isso é semelhante a dados recentes em
S. anginosusgrupo 2 0–51 63
humanos que indicaram que a dieta (onívora,
 
vegetariana ou vegana) não teve efeito substancial na
  S. salivariusgrupo 0 0–41 38
microbiota oral. Isso enfatiza a importância dos
Estafilococo 8 1–13 100 nutrientes endógenos na manutenção da estabilidade
  S. aureus 6 0–13 88 e diversidade da microbiota residente.
  S. epidermidis 0 0–7 13
Bastões Gram-
positivos 33 1–74 100 CÁLCULO
  Actinomyces 21 0–54 88
Cálculo ou tártaro são os termos usados para descrever a
  A. israelense 3 0–47 63
placa dental calcificada. O cálculo consiste em depósitos
A. naeslundii 3 0–48 63
 
intra e extracelulares de minerais, incluindo apatita,
  A. odontolyticus 1 0–17 63 brushite e whitlockite, bem como proteínas e hidratos de
Lactobacillus 0 0–48 25 carbono. O crescimento mineral pode ocorrer em torno
Propionibacterium <1 0–5 50 de qualquer bactéria; áreas de crescimento mineral
Veillonella 8 3–20 100 podem então coalescer para formar cálculos que podem
ficar cobertos por uma camada não mineralizada de
Bastões Gram-
negativos 0 0–6 38 bactérias. O cálculo ocorre tanto supragengivalmente
Leveduras 0,002 0–0,5 63
(especialmente próximo aos ductos salivares) quanto
subgengivalmente, onde pode atuar como uma área de
retenção adicional para o acúmulo de biofilme,
aumentando assim a probabilidade de gengivite e outras
e às vezes espécies de Candida. Em indivíduos
formas de doença periodontal. O cálculo pode ser
desdentados, as dentaduras tornam-se o habitat
poroso, levando à retenção de antígenos bacterianos e à
primário para mutantes estreptococos e membros do
estimulação da reabsorção óssea por toxinas de
grupo estreptococos mitis. A placa de prótese pode
patógenos periodontais. Mais de 80% dos adultos têm
abrigar anaeróbios obrigatórios, incluindo A. israelii
cálculo, e sua prevalência aumenta com a idade. Uma
e baixas proporções de bastonetes Gram-negativos.
concentração elevada de íons cálcio na saliva pode
Staphylococcus aureus pode ser isolado da placa de
predispor alguns indivíduos a serem grandes formadores
prótese, e esta espécie também é comumente
de cálculo. Uma vez formado, grandes forças de
encontrada na mucosa de pacientes com estomatite
remoção são necessárias para separar o cálculo; essa
por prótese (verCapítulo 8).
remoção ocupa uma quantidade desproporcional de
Técnicas moleculares independentes de cultura
tempo clínico durante as visitas de rotina dos pacientes
detectaram patógenos periodontais como P.
ao dentista. Consequentemente, vários produtos
gingivalis, T. forsythia e A. actinomycetemcomitans
odontológicos são agora formulados para restringir a
nos biofilmes que se desenvolvem em próteses em
formação de cálculos. Esses produtos contêm
pacientes edêntulos. Altos números de Actinomyces
pirofosfatos, sais de zinco ou polifosfonatos para inibir a
spp. e Capnocytophaga também foram detectados.
mineralização, retardando o crescimento dos cristais e
reduzindo a coalescência. essa remoção ocupa uma
quantidade desproporcional de tempo clínico durante as
visitas de rotina dos pacientes ao dentista.
Consequentemente, vários produtos odontológicos são
agora formulados para restringir a formação de cálculos.
Esses produtos contêm pirofosfatos, sais de zinco ou
polifosfonatos para inibir a mineralização, retardando o
crescimento dos cristais e reduzindo a coalescência. essa
remoção ocupa uma quantidade desproporcional de
tempo clínico durante as visitas de rotina dos pacientes
ao dentista. Consequentemente, vários produtos
odontológicos são agora formulados para restringir a
formação de cálculos. Esses produtos contêm
pirofosfatos, sais de zinco ou polifosfonatos para inibir a
mineralização, retardando o crescimento dos cristais e
reduzindo a coalescência.
106 Microbiologia Oral de Marsh e Martin hospedeiro, agentes antimicrobianos e outros fatores
hostis; por exemplo, um sensível

PLACA DENTÁRIA COMO

COMUNIDADE
MICROBIANA
As bactérias orais não se comportam aleatoriamente
durante a formação da placa dentária. A placa se
forma de maneira organizada por meio de interações
físico-químicas e intermoleculares específicas,
adesina-receptor, seguidas posteriormente por
coadesão interbacteriana, interações metabólicas e
comunicação célula-célula (consulte as seções
anteriores). Essas interações produzem um espectro
de nichos ecológicos (funções metabólicas;Capítulo
1), que oferecem uma série de benefícios distintos
para os microrganismos componentes, permitindo a
sobrevivência e o crescimento de espécies exigentes:
• ciclagem eficiente de nutrientes e energia via
alimentação cruzada e teias alimentares.
• o catabolismo sinérgico de macromoléculas
hospedeiras complexas para que possam ser
utilizados substratos que seriam recalcitrantes à
degradação por espécies individuais,
• modulação das condições ambientais locais
(pH, tensão de oxigênio, potencial redox). Por
exemplo, isso permite o crescimento de (a)
anaeróbios obrigatórios em um habitat abertamente
aeróbico e (b) bactérias sensíveis ao pH durante
períodos de pH baixo, e
• maior proteção contra as defesas do
hospedeiro, agentes antimicrobianos e estresses
ambientais.
Existe uma grande diversidade metabólica dentro da
microbiota da placa, variando de organismos que podem
catalisar a divisão inicial de polímeros complexos do
hospedeiro em unidades menores, a bactérias redutoras
de sulfato e metanógenos que ganham energia a partir
da utilização de produtos finais simples.FIGO. 5.14). A
presença desses organismos na placa confirma que esse
biofilme atua como uma verdadeira comunidade
microbiana, pois é capaz de explorar plenamente o
potencial energético total dos nutrientes disponíveis. Em
tal comunidade microbiana, a eficiência metabólica do
todo é maior do que a soma das espécies individuais,
uma vez que o uso de substrato envolve tanto o
catabolismo concertado quanto sequencial dessas
moléculas complexas. O crescimento de tal comunidade
como um biofilme confere benefícios adicionais, uma
vez que as células são protegidas das defesas do
 HOMEOSTASE
MICROBIANA NA PLACA
organismo pode ser protegido por células vizinhas que
DENTÁRIA
expressam enzimas comoβ-lactamase, IgA-protease ou
catalase que pode inativar ou neutralizar inibidores ou Apesar de sua diversidade microbiana, a composição da
agentes antimicrobianos. Além disso, as interações placa dental em qualquer local é caracterizada por uma
físicas e metabólicas estreitamente acopladas deixam notável
poucos nichos não preenchidos, reduzindo assim a
probabilidade de colonização por micróbios exógenos e
contribuindo para a estabilidade microbiana natural da
microbiota da placa (homeostase microbiana; veja a
próxima seção).
Para alguns grupos de consórcios de organismos em
interação, o estilo de vida da comunidade também aumenta
seu potencial patogênico (sinergismo patogênico; verFIGO.
6.18). Grupos de organismos fracamente patogênicos são
capaz de causar doença que seria incapaz de fazê-lo em
cultura pura; exemplos incluem a maioria das doenças
periodontais (Capítulo 6), bem como abscessos (Capítulo
7). Nessas infecções polimicrobianas, organismos que não
estão diretamente envolvidos na destruição tecidual podem
desempenhar papéis vitais no processo da doença. Alguns
organismos podem apoiar aqueles com um papel
patogênico mais óbvio, por exemplo, fornecendo proteção
contra as defesas do hospedeiro (por exemplo, pela
produção de proteases IgA), modificando o ambiente local
(por exemplo, consumindo oxigênio e diminuindo o
potencial redox), fornecendo nutrientes (por exemplo,
através de cadeias alimentares ou contribuindo para o
catabolismo de moléculas complexas do hospedeiro) e por
inibidoresβ-lactamase para neutralizar penicilina-lins), e
foram denominados patógenos acessórios.

Uma visão geral de algumas das interações

potenciais em uma comunidade microbiana, como a
placa dentária, é mostrada emFigura 5.17.
PONTOS CHAVE
Os benefícios gerais de um estilo de vida da
comunidade microbiana para as espécies
componentes são um aumento:
• Faixa de habitat,
• Capacidade de usar substratos hospedeiros
complexos,
• Eficiência metabólica,
• Proteção contra as defesas do hospedeiro e
estresses ambientais, e
• Potencial patogênico.