Revista Brasileira de Cincias Farmacuticas Brazilian Journal of Pharmaceutical Sciences vol. 42, n. 3, jul./set.

, 2006

Anlise farmacognstica e atividade antibacteriana de extratos vegetais empregados em formulao para a higiene bucal
Cynthia Helena Gontijo Cordeiro1, Luis Vitor Silva do Sacramento1*, Marcos Antnio Corra2, Antonio Carlos Pizzolitto3, Tas Maria Bauab4
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Departamento de Princpios Ativos Naturais e Toxicologia, Faculdade de Cincias Farmacuticas, UNESP, Departamento de Frmacos e Medicamentos, Faculdade de Cincias Farmacuticas, UNESP, 3Departamento de Anlises Clnicas, Faculdade de Cincias Farmacuticas, UNESP, 4Departamento de Cincias Biolgicas, Faculdade de Cincias Farmacuticas, UNESP
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*Correspondncia: L.V. Sacramento Faculdade de Cincias Farmacuticas PANT Laboratrio de Botnica Caixa Postal 502 14801-902 - Araraquara - SP, Brazil E-mail: LVSS@fcfar.unesp.br

A utilizao de extratos vegetais vem se tornando uma alternativa importante para a preveno de doenas periodontais. Este trabalho objetivou desenvolver uma formulao de enxagatrio bucal, contendo, em associao, extratos hidroalcolicos de Rosmarinus officinalis, Plantago major, Tabebuia impetiginosa, Achillea millefollium e Nasturtium officinale; avaliar sua composio farmacognstica e sua atividade antibacteriana, como tambm da frmula proposta. Foram realizados estudos de pr-formulao e anlises farmacognsticas para as espcies vegetais. A atividade antibacteriana in vitro foi observada por meio dos mtodos de difuso em disco de papel, por hole- plate e por template, frente a Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Escherichia coli, Enterococcus faecalis e Pseudomonas aeruginosa. A concentrao inibitria mnima (CIM) foi determinada por meio do mtodo de macrodiluies sucessivas em caldo. Os resultados obtidos apresentaram-se de acordo com o histrico farmacognstico das drogas estudadas. Todas as bactrias foram inibidas pelos extratos, observando-se que as espcies S. aureus e B. subtilis mostraram, aparentemente, maior sensibilidade. A CIM variou, em relao a sensibilidade de cada espcie bacteriana estudada, de 312,5 L/mL a 1250 L/mL para os extratos vegetais e de 625 L/mL a 2500 L/mL para o enxaguatrio bucal. So necessrios estudos complementares para a confirmao da eficcia deste produto e sua utilizao na preveno de doenas periodontais.

Unitermos Nasturtium Rosmarinus Tabebuia Plantago Achillea Enxaguatrio bucal Atividade antibacteriana

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C. H. G. Cordeiro, L. V. S. Sacramento, M. A. Corra, A. C. Pizzolitto, T. M. Bauab

INTRODUO
As plantas medicinais constituem importantes recursos teraputicos para o tratamento de doenas, principalmente das populaes das naes em desenvolvimento. Servem tanto conhecida medicina caseira, que faz parte da cultura popular destes pases, como de matria-prima para elaborao de medicamentos fitoterpicos ou extrao de compostos qumicos com atividade teraputica (Freitas, 1999). A fitoterapia existe principalmente no mercado informal, o que representa grande perigo sade da populao, pois neste caso, sua comercializao ocorre desconsiderando os aspectos relativos ao controle de identidade e/ou pureza. indiscutvel a necessidade de um maior e melhor controle nesse ramo cosmtico e farmacutico, pois os fitoterpicos representam uma alternativa economicamente vivel populao (Bendazzoli, 2000). A abrangncia da utilizao de fitoterpicos e de plantas medicinais vasta e engloba fins variados, tambm em relao sade bucal. Considerando as doenas periodontais, pode-se defini-las como, um processo infeccioso que resulta em uma potente resposta inflamatria (Monteiro et al., 2002). Alguns microorganismos, tidos como patgenos periodontais, possuem a capacidade de implantar-se no sulco gengival, produzindo substncias txicas que degeneram o tecido periodontal (Rubira, 1993). A susceptibilidade individual e as influncias ambientais esto diretamente envolvidas neste processo, onde a gengivite e a periodontite representam as formas mais comuns da doena (Figueiredo et al., 2002). Os dados sobre a prevalncia das doenas periodontais no Brasil, so alarmantes, estando prxima de cem por cento (Oppermann, Kuchnbecker, 2001), abrangendo, sobretudo crianas de diferentes regies. A mudana desta situao implicaria na adoo das prticas individuais de higiene bucal (Pereira et al., 1994), onde seria tambm necessrio o planejamento de programas preventivos e da terapia periodontal bsica (Marcantonio, Santos, 1998). O controle do biofilme bacteriano dentro das diversas especialidades odontolgicas de grande importncia, pois aponta tanto para a preveno, como para o tratamento, da crie e de doenas periodontais. Com a finalidade de auxiliar os mtodos convencionais de higiene bucal (escovao, fio ou fita dental) muitos agentes qumicos vm sendo estudados, entre eles antibiticos, compostos quaternrios de amnio, acetato e gluconato de clorexidina e outros (Oliveira et al., 1998). No entanto, o uso freqente e por longo prazo da clorexidina, apresenta alguns efeitos indesejveis (Rey, 1999). Outros ativos, como os antiinflamatrios e

anti-spticos, tambm vm sendo utilizados amplamente para afeces da mucosa bucal. A eficcia de plantas medicinais, como componentes tanto nos gis dentifrcios, como nos enxaguatrios bucais, tem sido investigada para o tratamento de gengivites. Os resultados sugerem que os ingredientes de origem vegetal podem ser empregados como apoio terapia das doenas periodontais e como profilaxia de rotina (Willershausen et al., 1994). Dados sobre a atividade antibacteriana de extratos vegetais e fitofrmacos, avaliada frente a microorganismos sensveis e resistentes a antibiticos, bem como o possvel efeito sinrgico da associao entre antibiticos e extratos vegetais, so relevantes, permitindo concluir que estudos mais detalhados sobre o uso teraputico das plantas devem ser intensificados (Nascimento et al., 2000). Trevizani (2002) observou reduo do ndice de sangramento gengival em indivduos que fizeram uso de gel dentifrcio contendo, em associao, extratos hidroalcolicos de Rosmarinus officinalis, Plantago major, Tabebuia impetiginosa, Achillea millefollium e Nasturtium officinale, sugerindo efeito antigengivite, atravs de possvel ao antiinflamatria de seus componentes ativos e/ou por alterao da qualidade do biofilme dento-bacteriano. Outros estudos tm demonstrado a eficcia destas plantas, cuja utilizao est difundida entre a populao, reforando a necessidade de se intensificarem as pesquisas em relao s atividades antiinflamatrias, anti-spticas, cicatrizantes e analgsicas, quando usadas isoladamente, ou em associaes, o que seria til para preveno e tratamento de doenas periodontais (Krivenko et al., 1989; Almeida, 1993; Teske, Trentini, 1995; Oliveira et al., 1998; Goda et al., 1999; Matos, 2000; Samuelsen, 2000; Lorenzi, Matos, 2002). A utilizao destes produtos fitoterpicos, economicamente mais viveis, mostra-se como uma alternativa interessante, contribuindo para melhorar o acesso da populao aos cuidados com a preveno e tratamento de doenas periodontais. Este estudo teve como objetivos desenvolver uma formulao de enxagatrio bucal contendo em associao, os extratos hidroalcolicos das espcies vegetais R. officinalis (Alecrim), P. major (Tanchagem), T. impetiginosa (Ip-roxo), A. millefollium (Mil-folhas) e N. officinale (Agrio); realizar a avaliao farmacognstica das referidas espcies, tanto para a droga vegetal pulverizada como para os extratos hidroalcolicos; e, ainda avaliar a atividade antibacteriana in vitro da mistura de extratos utilizada, bem como da formulao proposta.

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MATERIAL E MTODOS
Preparo do material vegetal As espcies vegetais utilizadas foram colhidas entre os meses de abril e junho de 2003, e identificadas no Laboratrio de Botnica da FCF/UNESP Campus de Araraquara. O material vegetal utilizado no preparo dos extratos hidroalcolicos, foi colhido no Horto de Plantas Medicinais e Txicas da mesma unidade, exceto T. impetiginosa (Ip-roxo) que foi colhida no Jardim do Campus da UNESP de Araraquara e o N. officinale (Agrio) que foi adquirido no comrcio. Foram utilizados rgos areos para as cinco espcies referidas (flores para a espcie de ip roxo e folhas para as demais). O material fresco de P. major (Tanchagem), depois de colhido, foi submetido lavagem, e posterior imerso em soluo de hipoclorito de sdio 0,01%, a fim de se promover sua desinfeco. Aps este procedimento, o material vegetal foi submetido a secagem prvia, por aproximadamente 24 horas, temperatura ambiente, sobre bancadas, previamente limpas, sanitizadas e revestidas com papel absorvente, seguindo-se secagem, em estufa de circulao de ar, a 45oC, por 72 horas. Aps este processo, a planta foi colocada em moinho de bolas, por aproximadamente 3 horas, para se obter uma granulometria adequada. Devido falta de padronizao granulomtrica para a extrao por turblise, optou-se pela classificao para p grosso preconizado na United States Pharmacopeia 23, que estabelece um tamanho mdio de partcula de 0,84mm. O material fresco de cada uma das outras espcies vegetais empregadas neste estudo (N. officinale (Agrio), R. officinalis (Alecrim), T. impetiginosa (Ip-roxo), A. millefollium (Mil-folhas)) foi submetido s mesmas etapas j descritas. Preparo dos extratos vegetais Os extratos vegetais foram preparados tomando-se 10% (p/p) da respectiva planta (N. officinale (Agrio), R.. officinalis (Alecrim), T. impetiginosa (Ip-roxo), A. millefollium (Mil-folhas)), separadamente e adicionandose 90% (p/p) de etanol 70o GL (v/v). Procedeu-se extrao por turblise, com tempo de agitao de 10 minutos, divididos em intervalos de 5 minutos, entre os quais, um perodo de descanso de 5 minutos. Durante o processo de preparo do extrato a temperatura foi controlada com o auxlio de um termmetro de maneira a garantir que no ultrapassasse 40oC. Em seguida, procederam-se duas filtraes a vcuo. Os extratos hidroalcolicos obtidos foram

acondicionados em frascos de vidro mbar, sob refrigerao a 4C, para serem empregados na realizao dos ensaios previstos. Inicialmente foram preparados cerca de 500mL de extrato de cada espcie vegetal para que pudessem ser realizados os estudos farmacognsticos de interesse e os estudos de pr-formulao. Ao longo do desenvolvimento do trabalho foram preparados mais extratos de acordo com o requerido para a realizao dos estudos. A mistura de extratos a ser empregada na formulao foi preparada tomando-se 4% (p/p) do extrato hidroalcolico de P. major e 2% (p/p) dos demais extratos previamente obtidos. Anlise farmacognstica As anlises farmacognsticas foram realizadas a fim de se detectar a presena de compostos de interesse nas diferentes espcies e os testes realizados foram para a identificao de alcalides, saponinas, antraquinonas e taninos, seguindo-se as metodologias validadas para cada grupo. Foram realizados testes para os vegetais pulverizados e para os extratos hidroalcolicos. Os testes para flavonides consistiram das reaes de Shinoda, de Taubock e com cloreto de alumnio. A presena de saponinas foi verificada atravs do testes de espuma persistente. Para a presena de taninos foram realizadas as reaes com gelatina, com sais de ferro e com acetato de chumbo. Para a pesquisa de alcalides foram realizados os testes com os reativos de Dragendorff, Valser-Mayer, Wagner e de Bertrand. E para antraquinonas foi realizada a Reao de Borntrger e da microsublimao (Mello et al., 1997; Falkenberg et al., 2003). Elaborao da formulao Para o desenvolvimento da frmula de enxagatrio bucal, foram empregados os seguintes materiais: gua destilada (como principal solvente), lcool etlico, flavorizantes, edulcorantes, solubilizantes e a mistura de extratos vegetais hidroalclicos (nas concentraes de 4% (p/p) de extrato de P. major e 2% (p/p) dos demais). Com o intuito de se definir a concentrao de cada componente, foram realizados estudos de pr-formulao, entre os quais citam-se os descritos a seguir: testes de solubilidade, empregando-se monoleato de polioxietileno sorbitano em concentraes variadas, como agente solubilizante; testes para se definir a quantidade adequada de edulcorante, dispondo-se de vrios, entre eles a sacarina sdica, podendo estar associada ou no, a outros; e testes para se definir a quantidade de flavorizante (aroma

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de pippermint) a ser utilizada. Alm disso, com o intuito de garantir a conservao do produto, foi utilizado como preservante o metilparabeno, na concentrao de 0,1%. Avaliao da atividade antibacteriana A avaliao da atividade antibacteriana in vitro foi realizada pelos mtodos de difuso em disco de papel, difuso a partir de orifcio no meio de cultura (hole plate) e difuso com o uso de template. Verificou-se a sensibilidade das bactrias Gram-positivas e Gram-negativas P. aeruginosa (ATCC n 27853), E. coli (ATCC n 25922), S. aureus (ATCC n 25923), B. subtilis (ATCC n 6633), E. faecalis (ATCC n 10541), frente mistura de extratos hidroalcolicos e a formulao de enxaguatrio bucal com e sem extratos vegetais. Para a realizao de todas as etapas do estudo, 30 mL da mistura de extratos, 30 mL do enxaguatrio bucal contendo extratos vegetais e 30 mL do enxaguatrio bucal com e sem extratos vegetais, foram concentrados por evaporao a 40 C e o resduo foi ressuspenso em 3 mL de etanol 70 GL. Para o mtodo de difuso usando disco de papel, os mesmos foram preparados a partir de papel Wathman no 1, com 15 mm de dimetro e capacidade de absoro de cerca de 50 L de amostra. Foram distribudos 20 mL do meio de cultura utilizado, Triptona Soja TSA (Difco), sobre cada placa (90 x 15 mm), sobre os quais foram dispostos os discos de papel embebidos com as amostras. As placas foram incubadas a 36 1 C por 48 horas. Para a realizao do mtodo de difuso por hole plate, foram utilizadas placas preparadas da mesma maneira, sobre as quais foram realizados orifcios com o auxlio de um furador de metal, estril, de 3mm de dimetro e 5mm de altura, onde foram colocadas as amostras, correspondentes a um volume de 100 L. As placas foram incubadas a 36 1 C por 48 horas. Para o mtodo de difuso usando template, foi utilizado como controle um disco de papel contendo Cloranfenicol (30 mcg), para comparao dos halos de inibio. As placas de Petri tambm foram preparadas com meio TSA. Aps inoculao da espcie de bactria, o template foi colocado sobre a placa e as amostras foram distribudas em seus orifcios, no volume de 50 L. As placas foram incubadas a 36 1 C por 48 horas. Tambm foi determinada a concentrao inibitria mnima (CIM) para as amostras em estudo, por meio do mtodo de diluies sucessivas em meio de cultura lquido. Foram preparadas sries com 8 tubos de cultura contendo caldo Mller Hinton, e nos 7 primeiros, foram concentraes decrescentes de cada amostra (2500 g/mL a

39,0 g/mL). O 8 tubo representava o controle do crescimento da espcie bacteriana. Em cada srie de 8 tubos foi inoculada uma das espcies de bactrias em estudo (S. aureus, B. subtilis, E. coli, P. aeruginosa e E. faecalis). A todos os tubos da srie foi inoculado o microrganismo (50L). Foram obtidas dessa maneira, 5 sries de tubos (cada uma correspondente a uma espcie bacteriana) para cada uma das amostras em anlise. As concentraes das amostras foram as seguintes: para a amostra da mistura de extratos: 2500,00 L/mL; 1250,00 L/mL; 625,00 L/mL; 312,50 L/mL; 156,25 L/mL; 78,12 L/mL; 39,06 L/mL. para a amostra de enxaguatrio bucal contendo extratos vegetais: 2500,00 L/mL; 1250,00 L/mL; 625,00 L/ mL; 312,50 L/mL; 156,25 L/mL; 78,12 L/mL; 39,06mL/mL. para a amostra de enxaguatrio bucal sem extratos vegetais: 2500,00 L/mL; 1250,00 L/mL; 625,00 L/mL; 312,50 L/mL; 156,25 L/mL; 78,12 L/mL; 39,06 L/ mL. A fim de se confirmar o crescimento real da espcie bacteriana em questo (excluindo-se uma possvel turvao mecnica), foram realizados repiques em meio TSA com incubao a 35C, durante 24 horas, para crescimento, eliminando dessa maneira possveis interferncias de componentes da frmula, que poderiam causar turvao por precipitao, oferecendo resultados errneos.

RESULTADOS E DISCUSSO
Em relao s anlises farmacognsticas, realizadas com os vegetais pulverizados e com os extratos vegetais, obtiveram-se os resultados mostrados na Tabela I. Entre os grupos qumicos pesquisados neste trabalho, cujos resultados esto apresentados na Tabela I, a espcie N. officinale (Agrio) apresentou-se positiva apenas para flavonides, o que confere com a descrio de Almeida (1993); Goda et al. (1999); Lorenzi e Matos (2002). A espcie R. officinalis (Alecrim) apresentou-se positiva para taninos e flavonides, confirmando sua caracterizao fitoqumica que registra para folhas a presena de taninos, flavonides e alguns cidos fenlicos (Matos, 2000; Lorenzi, Matos, 2002). Na determinao dos grupos qumicos encontrados no T. impetiginosa (Ip-roxo), obteve-se resultado positivo para flavonides o que tambm pode ser confirmado pela literatura segundo descrio de Teske e Trentini, (1995); Lorenzi e Matos (2002). A presena de alcalides e flavonides para a espcie P. major (Tanchagem) confirma o descrito por Samuelsem (2000), que se refere aos principais compos-

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TABELA I - Resultados dos testes farmacognsticos empregados para as drogas vegetais em p e extratos hidroalclicos Testes de Identificao Espcie vegetal N. officinale (Agrio) R. officinalis (Alecrim) T. impetiginosa (Ip roxo) P. major (Tanchagem) A. millefolium (Mil folhas) Mistura de extratos Saponinas P Extrato + + NA + Taninos P Extrato + + + + NA + Antraquinonas* P Extrato NA Alcalides P Extrato + + NA Flavonides PExtrato + + + + + + + + + + NA +

* Livres e glicosiladas; (+) positivo; (-) negativo; (NA) no se aplica tos qumicos, como polissacardeos, lipdios, derivados do cido cafeico, flavonides, glicosdeos iridides e terpenides, alcolides e cidos orgnicos. J a A. millefollium (Mil-folhas) apresentou resultados positivos para taninos e flavonides, como descrito por Lorenzi e Matos (2002). Com relao aos estudos de pr-formulao, a frmula proposta para o enxaguatrio bucal ficou definida como mostrado na Tabela II. Em se tratando de uma formulao de enxaguatrio bucal, a proposta de trabalho foi utilizar a gua destilada como principal solvente, minimizando-se a utilizao do lcool etlico, resultando, juntamente com outros fatores, na reduo do custo da preparao final. Considerando que os extratos vegetais hidroalcolicos precipitaram na presena de maior contedo aquoso, foi necessrio garantir sua solubilidade, dispondo-se de um agente solubilizante conhecidamente no txico ou, irritante. O agente escolhido foi o monoleato de polioxietileno sorbitano (Prista et al., 1995) o qual, alm das caractersticas mencionadas mostrou anlise sensorial positiva, constituindo um fator importante para se obter um proTABELA II - Formulao do enxaguatrio bucal Formulao INCI name Enxagatrio bucal(%p/p) Contendo extratos vegetais Etanol 70% Extratos vegetais Aroma de pippermint Sacarina sdica Monoleato de polixoetileno sorbitano Metilparabeno Soluo de corantes gua destilada q.s.p. Alcohol 70% Mentha Piperita oil Sodium Saccharin Polysorbate 80 Methylparaben Water NA 12 0,06 0,025 0,50 0,1 NA 100 No contendo extratos vegetais 12 NA 0,06 0,025 0,50 0,1 0,24 100 duto de sabor aceitvel e agradvel, contribuindo para a sua correta utilizao. Os testes de solubilidade envolveram o emprego de vrias concentraes do tensoativo e permitiram viabilizar a quantidade de extratos vegetais adequada para as possveis aes teraputicas (Trevizani, 2002); sua concentrao final ficou definida em 0,5%. A quantidade de sacarina utilizada na formulao ficou definida como sendo de 0,025%. O flavorizante escolhido foi o aroma de pippermint, que melhor se adaptou proposta, na concentrao de 0,06%. Essa formulao apresentou cor esverdeada, mostrando-se lmpida, sem a ocorrncia de turvao mesmo aps ser armazenada sob refrigerao a 4C por trs dias e temperatura ambiente (em torno de 27C) pelo mesmo perodo. Apresentou ainda, odor e sabor de menta, adocicado e pH de 6,5 a temperatura de 25C. A formulao de enxagatrio bucal no contendo extratos vegetais tambm apresentou caractersticas organolpticas semelhantes s da formulao anterior, de cor verde amarelada, lmpida, sem a ocorrncia de turvao mesmo aps ser armazenada sob refrigerao a 4 C por trs dias e temperatura ambiente (em torno de 27 C) tambm

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por trs dias. Apresentando tambm, odor e sabor de menta, adocicado e um pH de 6,2 a temperatura de 25 C. Em relao aos estudos de atividade antibacteriana, verificou-se que todas as bactrias foram inibidas pelos extratos utilizados, observando-se que as espcies S. aureus e B. subtilis apresentaram, aparentemente, maior sensibilidade. O dimetro dos halos de inibio so dados em milmetros, aps 48 horas de incubao, e so apresentados nas Tabelas III, IV e V.

No teste de difuso em disco de papel, os halos de inibio para E. faecalis, S. aureus e B. subtilis, mostraram-se maiores, frente mistura de extratos. Nesta etapa, P. aeruginosa apresentou-se resistente frente a todas as amostras. No teste de difuso por hole-plate observou-se que P. aeruginosa, que anteriormente havia apresentado resistncia, nesta etapa apresentou halos de inibio considerveis, principalmente frente mistura de extratos. Mais uma vez

TABELA III - Halos de inibio obtidos com o teste de difuso em disco Amostra Microrganismo Controle etanol 70 GL

Dimetro dos halos de inibio (mm) Mistura de extratos Enxagatrio Bucal Contendo extratos vegetais No contendo extratos vegetais R R R R R

S. aureus B. subtilis P. aeruginosa E. coli E. faecalis

R R R R R

19 19 R R 17

R R R R R

R = resistente (halo < 1mm) TABELA IV - Halos de inibio obtidos com teste de difuso por hole plate Amostra Microrganismo Controle etanol 70GL Dimetro dos halos de inibio (mm) Mistura de extratos Enxagatrio Bucal Contendo extratos vegetais B. subtilis P. aeruginosa E. coli E. faecalis R R R R 9 13 5 7 5 5 R R No contendo extratos vegetais 5 5 5 R

TABELA V - Halos de inibio obtidos pelo teste de difuso utilizando template Amostra Microrganismo Cloranfenicol Dimetro dos halos de inibio (mm) Mistura de extratos Enxagatrio Bucal Contendo extratos vegetais S. aureus B. subtilis P. aeruginosa E. coli E. faecalis 17 19 R 17 15 5 7 7 7 5 5 5 5 R R No contendo extratos vegetais 5 5 5 R 5

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os microorganismos S. aureus e B. subtilis, apresentaramse mais sensveis, mostrando um maior halo de inibio. No teste de difuso utilizando template, os resultados confirmaram os obtidos anteriormente que, em comparao com o cloranfenicol, as espcies S. aureus e B. subtilis foram as cepas mais sensveis. Os enxaguatrios bucais (contendo ou no extratos vegetais) tambm apresentaram certa atividade, porm no foi observada diferena entre os resultados apresentados pela formulao contendo ou no extratos vegetais. A espcie P. aeruginosa foi inibida de maneira muito semelhante por todas as amostras. As espcies E. coli e E. faecalis, sofreram certa inibio das amostras, porm de maneira semelhante entre elas, sendo que somente o cloranfenicol inibiu de maneira significativa todas as espcies em estudo, com exceo da espcie P. aeruginosa. Observa-se conforme a literatura, que as bactrias Gram-negativas (P. aeruginosa, E. coli) mostraram-se mais resistentes que as bactrias Gram-positivas (S. aureus, B. subtilis) que se apresentam mais sensveis, sendo que a cepa B. subtilis foi a mais sensvel delas. Os resultados obtidos neste estudo mostraram que o enxaguatrio bucal contendo extratos vegetais foi capaz de inibir o crescimento das bactrias estudadas, porm as espcies que se mostraram mais sensveis aparentemente foram S. aureus e B. subtilis, em meio de cultura TSA, aps 48 horas. Embora no exista um padro de concentrao para comparao dos resultados da atividade dos extratos e dos produtos, uma vez que seus princpios ativos ainda no so bem conhecidos, algumas bactrias ensaiadas (principalmente B. subtilis e S. aureus) apresentaram halos de inibio considerveis. Em relao determinao da CIM, para os tubos nos quais no foi verificada a ocorrncia de turvao, foram realizados repiques para meios slidos, objetivandose verificar a ao bacteriosttica. A resistncia ou sensibilidade da bactria em estudo foi registrada e os dados TABELA VI - Valores de CIM para os produtos analisados Amostra Microrganismo

so os que se seguem: observando-se os resultados obtidos, verificou-se que seu valor variou de 312,5 L/mL a 1250 L/mL para os extratos vegetais, e de 625 L/mL a 2500 L/mL para o enxaguatrio bucal contendo extratos vegetais e 625 L/mL a 2500 L/mL para enxaguatrio bucal sem extratos vegetais (Tabela VI). Alguns trabalhos j foram realizados utilizando as mesmas espcies vegetais, dentre eles Cowan (1999) que tambm mostrou a atividade antimicrobiana de R. officinalis (Alecrim) e A. millefolium (Mil-folhas). Atravs de um trabalho de reviso o autor mostra a atividade antimicrobiana de vrias espcies vegetais, relacionando as classes de substncias qumicas presentes em extratos obtidos com diferentes solventes (gua destilada, metanol e etanol). O autor faz meno ao leo essencial do Alecrim e sua atividade sobre bactrias Gram-positivas e negativas, vrus, fungos e protozorios, atribuindo a mesma principalmente aos terpenides. E ainda apresenta atividade sobre vrus e helmintos para a mil-folhas. Nascimento et al. (2000) propuseram a utilizao de associao de antibiticos e extratos vegetais, sobre bactrias resistentes, evidenciando a ocorrncia de sinergismo, possibilitando assim, que antibiticos individualmente inativos apresentassem ao sobre estas bactrias. Os autores avaliaram a atividade de extratos etanlicos de R. officinalis e A. millefolium associada antibiticos, sobre microorganismos resistentes. Foi observado que os extratos apresentaram atividade sobre os microorganismos quando utilizados isoladamente e quando associados em pequenas concentraes aos antibiticos inativos. Skmen et al. (2003) apresentaram resultados importantes da atividade de outra espcie do gnero Achillea sobre microorganismos, incluindo fungos (duas espcies diferentes) e bactrias (doze espcies diferentes), atravs da avaliao do extrato metanlico da planta. Koyama et al. (2000) mostraram que as cascas de T. impertiginosa (Ip-roxo) tm sido muito utilizadas popu-

Concentrao em (L/mL) Mistura de extratos Enxagatrio bucal Contendo extratos vegetais No contendo extratos vegetais 1250,0 1250,0 625,0 1250,0 2500,0

E. coli S. aureus B. subtilis E. faecalis P. aeruginosa

1250,0 312,5 312,5 625,0 1250,0

2500,0 2500,0 625,0 2500,0 1250,0

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larmente por sua ao antimicrobiana (antifngica e antibacteriana) e antiinflamatria. Foram isolados dois novos compostos do extrato metanlico da planta (dialdedos ciclopentenos), que apresentaram atividade em estudos iniciais. So ainda registrados dados sobre a atividade antimicrobiana de P. major (tanchagem) segundo Holetz et al. (2002) que realizaram a avaliao desta em treze espcies vegetais popularmente utilizadas no Brasil. Estes estudos avaliaram a sensibilidade de microorganismos (bactrias e fungos) atravs da determinao da CIM para os extratos hidroalcolicos de P. major. Concordando com os trabalhos citados, nossos resultados demonstraram atividade antibacteriana para as espcies vegetais consideradas. Cowan (1999) relatou o uso de misturas de extratos vegetais objetivando a potencializao de atividades, como mostrou alguns estudos realizados com produtos utilizados na ndia. Neste caso pode-se observar que no houve diferena significativa entre a ao do enxaguatrio bucal contendo extratos vegetais e o produto sem extratos vegetais. Porm, a mistura de extratos considerada apresentou atividade antimicrobiana significativa e, portanto, estudos complementares devem ser realizados para a correta otimizao dessa e, outras atividades, visando a obteno de produtos cosmticos eficazes para higiene bucal.

ABSTRACT
Herbal extracts in an experimental mouthwash: pharmacognostics analysis and antibacterial activity In this study, herbs and hidroalcoholic extracts of Nasturtium officinale, Rosmarinus officinalis, Tabebuia impetiginosa, Plantago major and Achillea millefollium, were investigated for pharmacognostics analysis (flavonoids, alkaloids, tanins, saponins and antraquinones) and antibacterial activity (against Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Escherichia coli, Enterococcus faecalis e Pseudomonas aeruginosa). In vitro antibacterial studies were carried by the disc diffusion method, hole plate and tamplate. The minimum inhibitory concentration (MIC) values were determinated by broth dilution method. The extracts were incorporated in mouthwash for periodontal diseases treatment. The pharmacognostics studies showed that herbs and extracts have substances groups described in literature. The antibacterial studies showed that extracts and mouthwash have some activity against all considered bacteria. S. aureus and B. subtilis showed, apparently, to be species more susceptible. Investigation of the MIC showed 312,5 L/mL-1250 L/mL for extracts and 625 L/mL2500 L/mL for mouthwash. The studies served as initial quality control of the obtained cosmetic, enhancing antiinflammatory (flavonoids) and/or antibacterial activities (tanins). However, new studies are necessary to confirm the cosmetic efficacy for treatment periodontal diseases. UNITERMS: Nasturtium. Rosmarinus. Tabebuia. Plantago. Achillea. Mouthwashes/antibacterial activity.

CONCLUSES
Os resultados farmacognsticos obtidos para a identificao de flavonides, taninos, saponinas e alcalides esto de acordo com o histrico das drogas vegetais estudadas. Conclui-se que os testes empregados foram suficientes para os estudos de pr-formulao, ressaltando as provveis aes antiinflamatrias e adstringentes (flavonides e taninos) e/ou anti-spticas (taninos). Pelos resultados obtidos para a formulao do enxaguatrio bucal, conclui-se que o mesmo apresenta sabor aceitvel e agradvel, com ausncia de precipitados, mantendo-se a concentrao desejada de extratos vegetais. No estudo da atividade antibacteriana, os microorganismos testados podem ser considerados sensveis nas concentraes estudadas. Conclui-se que os extratos hidroalcolicos das espcies vegetais apresentam atividade principalmente sobre bactrias Gram-positivas. So necessrios estudos complementares de atividade antimicrobiana para confirmar a eficcia deste produto e sua utilizao para a preveno e tratamento das doenas periodontais.

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