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Estudo comparativo da resposta histolgica ao implante submucoso em ratos de cimento agregado trixido mineral (MTA) de duas marcas Artigo

Original / OriginalR. et al Kowalski, Article

Estudo comparativo da resposta histolgica ao implante submucoso em ratos de cimento agregado trixido mineral (MTA) de duas marcas comerciais Comparative analysis of rats submucous tissue response to two brands of mineral trioxide agregate (MTA)
Rafael Kowalski*, Patrcia Maria Poli Kopper**, Eder Tartarotti**, Jos Antnio Poli de Figueiredo***, Carlos Alexandre Bier****

* Cirurgio-Dentista; Professor da UFSM / St Maria - RS ** Mestre em Endodontia; Professor da ULBRA Cachoeira do Sul/RS *** Doutor em Endodontia; Coordenador do Curso de Mestrado, rea de concentrao Endodontia, da ULBRA Canoas/RS. **** Mestre em Endodontia; Professor da UFSM Santa Maria/RS.

Descritores
Submucosa, ratos, histolgico.

Resumo
O objetivo do presente estudo foi avaliar, comparativamente, a resposta histolgica ao implante, em tubos de polietileno, do cimento Agregado Trixido Mineral (MTA) de duas marcas comerciais. Para a realizao do estudo foram utilizados doze ratos Wistar, do sexo masculino, com peso aproximado de 200g. Os tubos foram implantados na regio do filtro superior, do lado direito, contendo MTA (Dentsply, Indstria e Comrcio Ltda., Petrpolis, RJ) e, do lado esquerdo, MTA (ngelus, Ind. de Produtos Odont. Ltda., Londrina, PR) Seis ratos foram eutanasiados sete dias aps o implante e trs aps 60 dias. Os outros trs foram a bito antes do perodo proposto, sendo descartados da amostra. Realizou-se, ento, a disseco da regio correspondente ao local do implante, e a rea de contato com o material foi localizada para o processamento histolgico. As lminas histolgicas foram observadas em microscpio ptico e fez-se uma anlise descritiva dos resultados para cada material, nos dois perodos experimentais. Os resultados mostraram reao tecidual similar para ambos os materiais. Observou-se uma resposta inflamatria leve no perodo de sete dias que, praticamente, desapareceu aps 60 dias. Nesse sentido, possvel concluir que as duas marcas comerciais de MTA produziram reao tecidual satisfatria em ambos os tempos experimentais.

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Keywords
Submucous, rats, histologic.

Abstract
The aim of this study was to compare the tissue response to the implant, in polyethylene tubes, of two brands of Mineral Trioxide Aggregate (MTA). For this purpose, 12 Wistar male rats weighting approximately 200g were used. The tubes were implanted at the upper filter region, the right side containing Pro Root MTA (Dentsply, Indstria e Comrcio Ltda., Petrpolis, RJ) and the left MTA (ngelus, Ind. de Produtos Odont. Ltda., Londrina, PR). Six rats were sacrificed following 7 days after the implant, and three after 60 days; the other three died before the period proposed and were discarded. The area was removed and the area of contact was made evident to histological processing. The optical microscope was used for the analysis, which was descriptive for each material and experimental period. The results showed similar tissue reactions for both materials. There was a mild inflammatory reaction in the 7day period, which almost ceased after 60 days. It was then possible to conclude that both MTA brands produced satisfactory tissue reactions for both experimental periods

Correspondncia para / Correspondence to: Patrcia Maria Poli Kopper Rua Rinco, 240. CEP 91760 - 670. Porto Alegre - RS. e-mail: pkopper@terra.com.br

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Introduo
O Agregado Trixido Mineral (MTA) foi aprovado, em 1998, pela U.S Food and Drug Administration (FDA). um p branco ou cinza, composto de trixidos combinados com outras partculas minerais hidroflicas e que cristaliza na presena de umidade. A hidratao do p com gua destilada resulta em um gel coloidal que solidifica em aproximadamente trs horas. Aps a presa, o pH fica em torno de 12,5 e ocorre expanso, sendo esta responsvel por sua excelente capacidade de selamento. Alm disso, o MTA pouco solvel e apresenta maior radiopacidade que a dentina 11,17. Alm de boas propriedades fsico-qumicas, o MTA tem-se mostrado um material no citotxico e sem potencial mutagnico 7, 13 . Somando-se a essas informaes, estudos, in vivo, tm comprovado a biompatibilidade do Agregado Trioxido Mineral, sendo este, capaz de estimular a deposio de tecido mineralizado na regio adjacente a ele, quando em contato com tecido conjuntivo sadio8, 14, 16, 17, 18. Considerando estes aspectos positivos, o MTA tem sido utilizado em casos de capeamento pulpar direto, obturao retrograda, apicificao e reparo de perfuraes de furca e razes10. Quando utilizado em casos de tratamento conservador da polpa, as investigaoes, in vivo, demonstram que o MTA estimula a deposio de dentina sobre o remanescente pulpar2, 9, 12. No que tange a biocompatibilidade dos materiais de uso odontolgico, o emprego de rato como animal experimental bastante freqente. Com esse objetivo, a metodologia mais descrita na literatura utiliza tubos preenchidos com os materiais que sero testados, implantados no tecido subcutneo, na regio do dorso dos ratos. Seguindo esse modelo experimental, Holland et al.5 (1999) compararam a resposta histolgica produzida pelo MTA com a causada pelo hidrxido de clcio. Para isso, tubos de dentina com 7mm de comprimento foram preparados e preenchidos com MTA ou com pasta de hidrxido de clcio (veculo: gua destilada) e implantados, na regio dorsal, no subcutneo de quarenta ratos. Em cada rato, foi implantado um tubo com MTA e um com hidrxido de clcio. Metade dos animais foram eutanasiados aps sete dias, e a outra metade trinta dias depois. A anlise histolgica mostrou que ambos os materiais estimularam a deposio de tecido duro e causaram respostas inflamatrias leves no tecido conjuntivo, sendo biocompatveis. Tambm em ratos, Figueiredo et al.3 (2001) propem, para avaliar a resposta tecidual causada por diferentes cimentos endodnticos, o implante na submucosa. Os autores discutem que o implante na rea submucosa possui vantagens quando comparado com o realizado na regio do dorso dos animais. Em primeiro lugar, o dorso dos animais inconveniente devido necessidade de raspagem dos plos, previamente ao procedimento. Alm disso, um local de fcil acesso a

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outros animais que podero lesar e contaminar o stio cirrgico. Tais problemas no ocorrem na submucosa, pois no h plos, os materiais testados ficam protegidos e as estruturas da submucosa no interferem na visualizao histolgica dos tecidos. O elevado custo do cimento Agregado Trixido Mineral tem incentivado pesquisas que buscam comparar este cimento com o de Portland. Nesse sentido, Estrela et al.1 (2000) avaliaram a atividade antimicrobiana e os elementos qumicos destes dois cimentos. Com relao atividade antimicrobiana, os autores verificaram resultados semelhantes para ambos os materiais e observaram que os dois cimentos continham os mesmos elementos qumicos, com exceo do bismuto que o MTA apresenta e o cimento de Portland no. Com o objetivo de comparar biologicamente o MTA e o cimento de Portland, Holland et al.6 (2001) implantaram tubos de dentina, preenchidos com os cimentos, no tecido conjuntivo subcutneo de ratos. Os resultados mostraram que tanto o MTA quanto o cimento de Portland induzem a deposio de tecido mineralizado, apresentando comportamento similar. A microestrutura e a composio qumica do MTA e do cimento de Portland foram comparadas por Guarienti4 (2002), atravs da anlise em microscpio eletrnico de varredura. O autor concluiu que os cimentos estudados possuam estrutura microscpica e composio qumica muito semelhantes. Foi observado que esses materiais diferem somente pela presena de Bismuto e de Molibdnio, estando o primeiro presente apenas no MTA e o segundo, no cimento de Portland. Durante alguns anos, o MTA foi comercializado apenas por um fabricante (Dentsply, Indstria e Comrcio Ltda., Petrpolis, RJ), sendo o material amplamente estudado. Embasados em pesquisas que revelam a composio deste cimento, outros fabricantes tm produzido e comercializado MTA com preos mais acessveis. Porm, para que possam ser empregados com tranqilidade na clnica odontolgica, suas propriedades, incluindo a biocompatibilidade, devem ser estudadas. O objetivo do presente estudo foi avaliar comparativamente a resposta histolgica ao implante, em tubos de polietileno, dos cimentos Pro-Root MTA (Dentsply, Indstria e Comrcio Ltda., Petrpolis, RJ) e MTA (ngelus, Ind. de Produtos Odont. Ltda., Londrina, PR).

Metodologia
1. Aquisio dos Animais Para o estudo foram utilizados doze ratos Wistar, do sexo masculino, com peso aproximado de 200g, adquiridos no biotrio da Universidade Luterana da Brasil - Campus Canoas. Previamente ao estudo, os ratos foram examinados por um mdico-veterinrio para assegurar o bom estado de sade destes animais.

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2. Amostragem Foram empregados 24 tubos de polietileno (Scalp Vein 19G atxico), previamente autoclavados, com 5mm de comprimento e 1,9mm de dimetro, com as extremidades abertas. Doze tubos foram preenchidos com MTA (ngelus, Ind. de Produtos Odont. Ltda., Londrina, PR) e doze com Pro-Root MTA (Dentsply, Indstria e Comrcio Ltda., Petrpolis, RJ). Para o primeiro perodo experimental (sete dias), foram utilizados seis ratos, sendo implantado, na submucosa direita de cada um deles, um tubo contendo Pro-Root MTA (Dentsply, Indstria e Comrcio Ltda., Petrpolis, RJ) e, na submucosa esquerda, um tubo preenchido com MTA (ngelus, Ind. de Produtos Odont. Ltda., Londrina, PR). Para o segundo perodo experimental (60 dias), foi empregada a mesma amostra, seguindo-se idntica regra para a distribuio dos tubos implantados na submucosa. 3. Preparo dos Corpos de Prova Todo o instrumental utilizado foi previamente autoclavado. Ambos os cimentos (MTA - ngelus, Ind. de Produtos Odont. Ltda., Londrina, PR; Pro-Root MTA Dentsply, Indstria e Comrcio Ltda., Petrpolis, RJ) foram manipulados de acordo com as recomendaes do fabricante. A seguir, os cimentos foram inseridos nos tubos de polietileno, com o auxlio de um calcador espatulado (Duflex - SS White Artigos Dentrios Ltda., Rio de Janeiro, RJ). O preenchimento do tubo foi considerado completo, quando foi observado extravasamento de cimento pela extremidade oposta quela na qual o material estava sendo inserido. Ao final, havia doze tubos contendo MTA (ngelus, Ind. de Produtos Odont. Ltda., Londrina, PR) e doze contendo Pro-Root MTA (Dentsply, Indstria e Comrcio Ltda., Petrpolis, RJ). Esses procedimentos foram realizados minutos antes do incio da anestesia dos animais. 4. Procedimentos Clnicos a)Anestesia dos ratos Os ratos foram submetidos anestesia geral intramuscular com Zolazepan (Zoletil 50 - Virbac do Brasil Indstria e Comrcio Ltda., Roseira, SP), associado soluo de Rampun (Bayer S.A., So Paulo, SP), na proporo de 1:1. A dosagem da associao foi de 20ml/ kg corpreo, totalizando 4ml por espcime. Para facilitar a aplicao da soluo anestsica, os ratos foram sedados, previamente, com ter etlico P Com esse objetivo, os animais foram colocados em .A. uma cuba de vidro fechada, contendo um chumao de

algodo embebido em ter etlico P.A., onde permaneceram por aproximadamente um minuto. Previamente aplicao da soluo anestsica, os ratos foram deixados durante aproximadamente um minuto em contato com ter etlico P visando a uma .A., sedao para facilitar o procedimento de anestesia. b)Implante na submucosa Com cabo no. 4 (J.O.N. Comrcio de Produtos Odontolgicos Ltda., So Paulo, SP) e lmina de bisturi n 15 (Becton Dickinson Indstrias Cirrgicas Ltda., Juiz de Fora, MG), realizou-se, em cada espcime, uma inciso na regio do filtro superior do lado direito que corresponde, em humanos, ao fundo de sulco superior, onde foi inserido um tubo de polietileno, contendo ProRoot MTA (Dentsply, Indstria e Comrcio Ltda., Petrpolis, RJ). Na regio do filtro superior do lado esquerdo, fez-se outra inciso, onde foi inserido um tubo de polietileno, contendo MTA (ngelus, Ind. de Produtos Odont. Ltda., Londrina, PR). O corte foi realizado com aproximadamente 2mm de comprimento, e o tubo foi introduzido com uma pina clnica (Duflex - SS White Artigos Dentrios Ltda., Rio de Janeiro, RJ), fazendo-se leve presso de mesial para distal, divulsionando os tecidos at observar que o tubo estava completamente assentado nessa regio. Concludo este procedimento, a inciso foi suturada em um nico ponto com fio de momonylon 4-0 (Somerville Ltda., Jaboto dos Guarapes, PE). 5. Eutansia dos Animais Sete dias aps a realizao do procedimento clnico, seis ratos, escolhidos aleatoriamente entre os doze experimentais, foram eutanasiados atravs de deslocamento cervical. Durante o experimento, trs ratos foram a bito antes do perodo proposto (60 dias), sendo descartados da amostra. Os trs ratos restantes sofreram eutansia 60 dias aps o procedimento. Logo depois da eutansia, a cabea dos ratos foi colocada em formol 10%, ali permanecendo at que se fizesse a disseco da regio correspondente ao local do implante, tambm mantida em formol at o momento do processamento histolgico. 6. Processamento Histolgico Com cabo no.4 e lmina de bisturi n 15, realizou-se a remoo dos fragmentos na regio do filtro superior direito e esquerdo dos ratos experimentais. Foram realizados cortes a fim de eliminar toda a rea de mucosa, destacando-se at a regio do peristeo, delimitada pela regio de plo, que foi parcialmente removido para servir de guia para o processamento. Um corte longitudinal na regio de filtro foi

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realizado, ento, a fim de serem obtidos dois fragmentos, com o tubo no centro. A rea de contato com o material, na extremidade, foi posicionada para ser a primeira a sair, a partir dos cortes, aps incluso em parafina. Cortes semi-seriados de 6 micrmetros foram realizados e corados com Hematoxilina de Harris e Eosina Alcolica. A lmina com maior evidncia de eventos foi escolhida para a anlise descritiva. 7. Anlise dos Resultados As lminas histolgicas foram analisadas por um histologista, cego em relao ao estudo, em microscpio ptico (GSZ, Zeiss, Germany), com 100 e 200 vezes de aumento. Os resultados foram analisados sob forma descritiva, sendo apresentados com figuras ilustrativas dos eventos.

Resultados
Pro-Root MTA (Dentsply, Indstria e Comrcio Ltda., Petrpolis, RJ) 7 dias

Em todas as lminas, na rea de contato com o material, observou-se resposta inflamatria leve, traduzida pela formao de granuloma do tipo corpo estranho com predominncia de fibras colgenas, em um arranjo no modelado, alm de gigantcitos, englobando partculas de material extravasado. Infiltrado linfo-plasmocitrio foi visto em uma das lminas, sendo que, nas demais, linfcitos e plasmcitos estavam presentes de maneira dispersa. Em uma lmina, observou-se infiltrado de neutrfilos, principalmente ao redor de algumas fibras colgenas, que tentavam envolver o material; nesta, alguns eosinfilos faziam-se presentes. Nas demais lminas, havia neutrfilos em pequenas quantidades. Considerando o tempo experimental, a formao de condensao fibrosa era moderada. O infiltrado mononuclear presente nas lminas era dominado por macrfagos, constituindo-se o tipo celular mais freqente. A Figura 1 ilustra alguns eventos observados para o cimento Pro-Root MTA (Dentsply, Indstria e Comrcio Ltda., Petrpolis, RJ), no perodo experimental de sete dias.

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Figura 1: Pro-Root MTA (DENTSPLY)7 dias presena de gigantcitos e macrfagos envolvendo o material, bem como linfcitos, plasmcitos, neutrfilos e macrfagos na trama de fibras colgenas (HE 100X).

MTA (ngelus, Ind. de Produtos Odont. Ltda., Londrina, PR) 7 dias

Os aspectos de reao tecidual foram similares ao grupo do Pro-Root MTA (Dentsply, Indstria e Comrcio Ltda., Petrpolis, RJ), no mesmo perodo experimental. Chamou ateno o fato de a condensao fibrosa ser mais fina do que no grupo anterior, bem como uma

menor quantidade de clulas inflamatrias foi percebida. Em uma das lminas, observou-se aumento da vascularizao com um tecido de granulao bastante evidente. No foram encontrados eosinfilos. A Figura 2 ilustra alguns eventos observados, para o cimento MTA

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(ngelus, Ind. de Produtos Odont. Ltda., Londrina, PR), no perodo experimental de sete dias.

Figura 2: MTA (NGELUS)7 dias presena de macrfagos, linfcitos e plasmcitos, bem como esparsos neutrfilos na trama de fibras colgenas em contato com o material (HE 200X).

Pro-Root MTA (Dentsply, Indstria e Comrcio Ltda., Petrpolis, RJ) 60 dias Observou-se ausncia de clulas inflamatrias, como neutrfilos e eosinfilos. Linfcitos e plasmcitos estavam presentes em pouca quantidade e prximos ao material. Havia macrfagos e gigantcitos contendo o material no citoplasma. Foi observada condensao fibrosa mnima ao redor do material. Tecido de granulao e granuloma do tipo corpo estranho j no se faziam evidentes. A Figura 3 ilustra alguns eventos observados para o cimento Pro-Root MTA (Dentsply, Indstria e Comrcio Ltda., Petrpolis, RJ), no perodo experimental de sessenta dias.

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Figura 3: Pro-Root MTA (DENTSPLY)60 dias fina camada de condensao fibrosa envolvendo o material com poucas clulas inflamatrias e tecido muscular adjacente normal (HE 200X).

MTA (ngelus, Ind. de Produtos Odont. Ltda., Londrina, PR) 60 dias

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Novamente, os aspectos de reao tecidual apresentaram semelhana ao grupo Pro-Root MTA (Dentsply, Indstria e Comrcio Ltda., Petrpolis, RJ), no mesmo perodo experimental. Em uma das lminas, o tecido adjacente ao material apresentava-se sem nenhum tipo celular inflamatrio e com mnima cpsula

fibrosa; em outra, macrfagos e gigantcitos, em grande quantidade, com o material contido no citoplasma celular. A Figura 4 ilustra alguns eventos observados para o cimento MTA (ngelus, Ind. de Produtos Odont. Ltda., Londrina, PR), no perodo experimental de sessenta dias.

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Figura 4: MTA (NGELUS)60 dias fina camada de condensao fibrosa envolvendo o material com poucas clulas inflamatrias e tecido muscular adjacente normal (HE 100X).

Discusso
Dentre os materiais de uso endodntico recentemente lanados no mercado odontolgico, grande nfase tem sido dada para o agregado de trixido mineral (MTA). Suas qualidades, j descritas na literatura, como a capacidade de selamento de perfuraes de furca e razes, estimulao de deposio de tecido calcificado, em casos de capeamento pulpar direto, e favorecimento do reparo periapical, quando empregado em obturaes retrogradas, tornaram esse material de eleio para muitos profissionais na prtica clnica2, 8, 9, 12, 14, 17. Sua similaridade de ao com o hidrxido de clcio indica compatibilidade biolgica, capacidade de formao de tecido duro, com a vantagem de ser cimento, o que o torna menos solvel aos fluidos bucais. Por conter slica, absorve a umidade e produz resultados animadores como os relatados por Ford et al.8 (1995), Torabinejad et al.16 (1995), Torabinejad et al.17 (1997), Torabinejad et al.18 (1998) e Holland et al.5 (1999), Holland et al.6 (2001).

A escolha de uma marca determinada deveria advir de resultados comprovados por pesquisas longitudinais. Por essa razo, optou-se por testar o cimento MTA (ngelus, Ind. de Produtos Odont. Ltda., Londrina, PR), recente no mercado brasileiro, sem comprovao cientfica de suas qualidades e limitaes. O cimento Pro-Root MTA (Dentsply, Indstria e Comrcio Ltda., Petrpolis, RJ) serviu, neste estudo, como controle, pois amparado por farta literatura. A regio submucosa foi escolhida para o implante do material, uma vez que, segundo Figueiredo et al.3 (2001), este stio fica prximo s estruturas dentais e bucais, protegido de leses que, no dorso dos animais, poderiam ocorrer havendo mais de um animal no mesmo cativeiro. O uso de tubos de polietileno, contendo o material, seguiu as especificaes do documento n 42 da ADA/ANSI e da ISO 10.093. Dessa maneira, possvel repercutir esse estudo e estabelecer analogias com outros realizados em centros de pesquisa do mundo inteiro. Os resultados encontrados permitiram verificar o comportamento similar dos tecidos em contato com ambos os cimentos MTA. Independente da marca, os

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resultados assemelham-se aos j encontrados em estudos anteriores, realizados por Torabinejad et al.16,18(1995, 1998) e Holland et al.5 (1999). Chamou a ateno, em relao ao cimento MTA (ngelus, Ind. de Produtos Odont. Ltda., Londrina, PR), os eventos inflamatrios reduzidos j na primeira semana aps o contato com o material, o que leva a crer que esse material no apenas contm os mesmos componentes do Pro-Root MTA (Dentsply, Indstria e Comrcio Ltda., Petrpolis, RJ), como tambm realizaram-se os cuidados devidos em seu processamento. Do exposto, cabe salientar que o cimento testado (MTA ngelus, Ind. de Produtos Odont. Ltda., Londrina, PR) est disponvel no mercado por um preo significativamente menor do que o controle. Sendo assim, poder-se-ia fazer a seguinte ilao: se o cimento controle to caro, muito provavelmente seja devido ao monoplio antes existente, sendo necessria a discusso de seus valores. Somam-se a isso, as evidncias apresentadas por Estrela et al.1 (2000), Holland et al.6 (2001) e Guarienti4 (2002) de haver semelhana entre o cimento MTA e o de Portland, tanto na estrutura e composio qumica, quanto na resposta histolgica. Sendo assim, ambos os cimentos MTA, disponveis no mercado, podem tornar-se ainda mais baratos. Como o presente estudo no tem a inteno de normatizar valores de custo, mas avaliar a biocompatibilidade dos materiais, deve-se ressaltar que o comportamento descrito nas lminas permite asseverar que ambos os materiais estimulam excelente reao tecidual. A formao de um granuloma do tipo corpo estranho, na primeira semana, que desapareceu no segundo tempo experimental, mostra que o organismo foi capaz de conter e eliminar a maior parte do material, ficando, ainda, os macrfagos e gigantcitos com a responsabilidade da limpeza final. O trauma produzido pelo corte, insero do material e sutura seria o suficiente para justificar, na primeira semana, a presena de vascularizao aumentada e infiltrados celulares diversos, como neutrfilos, linfcitos e plasmcitos. Ainda assim, esses elementos celulares, na maioria das vezes, encontravamse dispersos, mostrando a tolerncia destas clulas ao material ali implantado. Outro aspecto que indica claramente a tolerncia das clulas ao material o fato de, aps sessenta dias, ter ocorrido diminuio e at desaparecimento da condensao fibrosa ao redor do material. Este um sinalizador de que o material incorpora-se aos tecidos como se fizesse parte dele, pois as clulas no o identificam como um corpo estranho, no havendo a necessidade de isol-lo dos tecidos atravs de uma condensao fibrosa. Algumas dvidas podem ser levantadas para futuros experimentos. Uma delas saber se o comportamento fsico dos materiais o mesmo, o que poderia repercutir em respostas teciduais diferenciadas em perodos experimentais mais longos ou at diminuio

da capacidade de vedamento. Outra dvida verificar se possvel elaborar um MTA caseiro, isto , incorporando bismuto ao cimento de Portland, e se isso afeta as propriedades fsicas e biolgicas do cimento proposto. Somente com pesquisas que se somem a esta, com o tempo, as interrogaes apresentadas podero ser respondidas, considerando as variveis intrnsecas ao material, ao limite do estudo e do conhecimento adquirido.

Concluses
Com base na metodologia e resultados do presente estudo lcito concluir que: 1. ambas as marcas comerciais de MTA testadas tiveram comportamento semelhante; 2. o cimento MTA, de ambas as marcas comerciais, produziu reao tecidual satisfatria nos dois tempos experimentais.

Referncias Bibliogrficas
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Recebido para publicao em 16/10/2003 Encaminhado para reformulao em 15/12/2003 Aceito para publicao em 16/02/2004

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