ATIVIDADE 2 - TEÓRICA para sábado

1 - O que caracteriza a condição de repouso e condição de operação? Fazer

menção a fonte.

R: Segundo a Instrução Normativa Nº 35/2019:

Capítulo II - Art. 7º: Para atender às condições em operação, as áreas limpas

devem ser projetadas para atingir certos níveis especificados de limpeza do ar no
estado em repouso.

§1º O estado em repouso é a condição em que a instalação está montada

e em funcionamento, com todos os equipamentos de produção, mas sem pessoal
presente.

§2º O estado em operação é a condição em que a instalação está

funcionando em um modo de operação definido com um número especificado de
funcionários trabalhando.

§3º Os estados em operação e em repouso devem estar definidos para

cada sala limpa ou conjunto de salas limpas.

MINISTÉRIO DA SAÚDE/AGÊNCIA NACIONAL DE VIGILÂNCIA

SANITÁRIA/DIRETORIA COLEGIADA (Brasil). William Dib (diretor-presidente).
INSTRUÇÃO NORMATIVA - IN Nº 35, DE 21 DE AGOSTO DE 2019: Dispõe sobre as
Boas Práticas de Fabricação complementares a Medicamentos Estéreis., [S. l.], n. 35,
edição 162, seção 1, p. 74, publicado em 22 ago. 2019. Disponível em:
https://www.in.gov.br/web/dou/-/instrucao-normativa-in-n-35-de-21-de-agosto-de-201
9-211914062?inheritRedirect=true&redirect=%2Fconsulta%3Fq%3DCIRCULAR%25
20N%25C2%25BA%25203.938%26start%3D103%26delta%3D6%26publish%3Dpa
st-month

2 - Quais requisitos devem ser considerados no planejamento da construção

de áreas limpas destinadas à produção de estéreis?

Para a construção de áreas limpas destinadas à produção de estéreis deve-se

planejar uma instalação que sejam facilmente limpas, descontaminadas e mantidas.
Os acabamentos devem ser duráveis e resistentes a soluções germicidas, além de
proporcionar superfícies monolíticas, ter os cantos arredondados para facilitar a
limpeza da sala, caso tenha juntas, deve ser usar materiais a base de silicone para
o preenchimento e não pode haver madeira ou materiais a base de madeira.
Os acabamentos usados nas áreas de processo e suporte devem ser duráveis.
Recomenda-se o uso de estruturas de aço inoxidável e não de alumínio, para as
áreas de suporte e processos, já que são resistentes a soluções químicas
germicidas e podem ser facilmente limpas e mantidas. Pode-se haver janelas
exteriores e interiores nas áreas de processos e suporte desde que sejam
hermeticamente seladas
As superfícies de acabamento tradicionalmente empregadas são:
● Para paredes e teto:
Epóxi, látex ou revestimento à base de plástico;Revestimento de policloreto de vinila
(PVC) fundido;Sistemas de painéis modulares.
● Para pisos:
Revestimento de epóxi; Camada de epóxi; Revestimento de PVC fundido.

3 - Propor um programa de monitoramento ambiental de áreas limpas

destinadas à produção de medicamentos estéreis em condições assépticas.
Mencionar o método, sua aplicação, frequência de execução, limites
esperados.

O objetivo do programa de monitoramento ambiental de áreas limpas destinadas à

produção de medicamentos estéreis é não admitir a contaminação microbiana.
Portanto deve-se focar em etapas que são capazes de reduzir de forma absoluta a
propagação desses microorganismos. A preparação deve ser feita em ambiente de
Grau A, ou seja, a frequência de monitoramento deve seguir os seguintes critérios:

● Amostras de ar

Tipo de partícula Método Frequência Limite esperado

partículas
Mm/m³

Totais Contador de Enquanto durar > 0,5(3,520)

partículas a operação > 5 (20)

Variáveis Amostra Uma vez por < 1UFC m³

volumétrica ativa turno

Placas Enquanto durar < 1UFC/ 4 horas

(d=90mm) a atividade
 ● Superfície:

Tipo de partícula Método Frequência Limite esperado

partículas
Mm/m³

Variáveis Placas Uma vez por < 1UFC/ placa

(d=55mm) de turno
contato 10s

Swab (24 a 30 Uma vez por NE

cm²) turno

● Pessoal:

Tipo de partícula Método Frequência Limite esperado

partículas
Mm/m³

Variáveis Placas contato Uma vez por < 1UFC/ Luva

(luvas 5 dedos) turno

4 - Em que se baseia a classificação das áreas limpas de acordo com a RDC

301 de 2019, Farmacopeia Brasileira 6a edição e a Norma ABNT NBR ISO
14644-1?
A classificação de áreas limpas de acordo com a RDC 301 de 2019 se baseia em
graus de cada área limpa, em que consta a descrição das mesmas e a
paramentação necessária aos indivíduos que vão estar trabalhando nessas áreas
de diferentes graus.
Áreas limpas de grau A são descritas como de alto risco operacional (fluxo ar 0,45
m/s com mais ou menos 20% de variação), e a paramentação necessária é: capuz
com borda inferior dentro da vestimenta, máscara de rosto, luvas esterilizadas,
botas desinfetadas/esterilizadas, barras da calça dentro das botas e mangas dentro
das luvas, não soltar qualquer fibra/partícula e reter partículas liberadas pelo corpo.
Áreas limpas de grau B circundam áreas grau A (visualização de operações) e a
paramentação necessária é a mesma que as de áreas limpas grau A.
Áreas limpas de grau C e D são descritas como áreas menos críticas e a
paramentação necessária é: calças, vestimentas amarradas no pulso e com gola
alta, que não soltem fibras/partículas, sapatos fechados próprios para a área ou
protetores de calçados. Cabelo, barba e bigodes cobertos. Além disso, nas áreas
limpas de grau D deve-se tomar medidas apropriadas para evitar qualquer
contaminação externa.
A Norma ABNT NBR ISO 14644-1 se baseia no sistema de classificação do ar de
áreas limpas, uma vez que quanto menor o número de partículas presentes em uma
sala é menos provável que os microrganismos carregados pelo ar vão estar
presentes. Essa norma traz a descrição da classificação das áreas limpas (de 1 a 9,
sendo que 1 é o nível de maior pureza e 9 de menor pureza) com base na qualidade
do ar considerando os limites máximos de concentração (partículas/ m³ de ar) para
partículas, variando de dimensões entre 0,1 a 0,5 µm. O documento se aplica a
partículas suspensas no ar em ambientes controlados, mas não tem o objetivo de
caracterizar a natureza viável ou não viável das partículas, nem fornece uma
relação entre o número de partículas não viáveis e a concentração de
microrganismos viáveis.

ATIVIDADE 2 PRÁTICA para domingo

Questão 1: Assistir este vídeo

https://www.youtube.com/watch?v=J1yEIbEU9ns para responder às questões
a seguir:

A) Qual a concentração e o microrganismo empregado no preparo da

suspensão microbiana?
A concentração é de 5x107 UFC/pellet, e o microrganismo empregado é Escherichia
coli de cepas Microbiologics Epower.

B) Quantas foram e como foram executadas as diluições?

Foram 6 diluições no total.
Preparação de diluições decimais de uma amostra até 10-6 :
1) Preparar uma diluição 1:10 da amostra em solução salina peptonada, ou seja,
misturar 1 mL da cultura em fase estacionária com 9 mL de solução salina
peptonada (10-1).
2) A partir da diluição 1:10 preparada conforme item ‘1’ , após homogeneização em
agitador de tubos, tomar 1 mL e misturar com 9 mL de solução salina peptonada,
obtém a diluição 1:100 da amostra (10-2).
3) A partir da diluição 1:100 preparada conforme item ‘2’, após homogeneização em
agitador de tubos, tomar 1 mL e misturar com 9 mL de solução salina peptonada,
obtém-se a diluição 1:1000 da amostra(10-3).
4) A partir da diluição 1:1000 preparada conforme item ‘2’, após homogeneização
em agitador de tubos, tomar 1 mL e misturar com 9 mL de solução salina
peptonada, obtém-se a diluição 1:10000 da amostra(10-4).
5) A partir da diluição 1:10000 preparada conforme item ‘2’, após homogeneização
em agitador de tubos, tomar 1 mL e misturar com 9 mL de solução salina
peptonada, obtém-se a diluição 1:100000 da amostra(10-5).
6) A partir da diluição 1:100000 preparada conforme item ‘2’, após homogeneização
em agitador de tubos, tomar 1 mL e misturar com 9 mL de solução salina
peptonada, obtém-se a diluição 1:1000000 da amostra(10-6).

C) Explicar a finalidade da diluição seriada da suspensão original.

A diluição seriada é realizada para diminuir a população bacteriana quando se
requer uma concentração mais baixa em testes quantitativos, possibilitando uma
leitura mais adequada. Dessa forma, são feitas diluições para diminuir o número de
colônias que irão crescer e, assim, consegue-se realizar a contagem de
microrganismos que existiam na suspensão original.

D) Qual a finalidade do plaqueamento das diluições?

O plaqueamento das diluições tem o objetivo de revelar o número de células de
leveduras e bactérias capazes de se multiplicarem e formarem colônias em meios
de cultivo apropriados e sob condições de incubação adequadas.

E) Que informação foi empregada na identificação das placas?

A informação empregada na identificação das placas é a diluição a ser utilizada, que
nos dirá a quantidade de microrganismo na suspensão original.
F) Fazer uma representação de todo o procedimento necessário à
padronização da suspensão microbiana e anexar o arquivo.

Questão 2: Após assistir o vídeo

https://www.youtube.com/watch?v=1rCuoEAMVT8, pede-se:

A) Apresentar uma síntese do vídeo (explicitando, objetivo, procedimento,

resultados).
O vídeo mostra um teste de Bioburden de BSC, sigla que em inglês significa
Câmara de Biossegurança. Esse procedimento tem como objetivo medir o número
total de bactérias, bolores e leveduras (microrganismos viáveis) em uma amostra
antes de sua esterilização final e é realizado nos BSC para garantir a proteção
adequada do equipamento de trabalho.
Para a realização do teste, o procedimento é:
1. Antes de iniciar o teste o operador deve estar com a paramentação
adequada: touca, máscara de rosto, jaleco e luvas esterilizadas (mangas
dentro das luvas).
2. O equipamento de trabalho deve ser aberto na posição designada e o
ventilador e/ou luz UV devem ser ligados.
3. O console do BSC deve ser limpa com álcool 70% com movimentos
unidirecionais para fora do equipamento.
 4. As placas de petri devem ser limpas com álcool 70% colocadas dentro do
BSC. Elas devem ser colocadas de maneira uniforme.
5. Cada placa deve ser identificada com o número do BSC, a data, o lugar e o
horário de início.
6. As placas devem ser abertas. O operador deve evitar passar a mão por cima
das placas já abertas.Cada placa deve ser aberta e exposta por pelo menos
30 minutos.
7. Depois da exposição, as placas devem ser tampadas novamente.
8. O horário de encerramento deve ser registrado e as placas devem ser
seladas com parafilme.
9. As placas devem ser incubadas de cabeça para baixo à temperatura de 20 a
25ºC por pelo menos 3 dias. Durante esse período, as placas devem ser
observadas e o aparecimento de qualquer colônia de bactéria no ágar deve
ser anotado.
10. Depois disso, as placas devem ser movidas para uma incubadora à
temperatura de 30 a 35ºC por pelo menos mais dois dias. Durante esse
período, as placas devem ser observadas e o aparecimento de qualquer
colônia de bactéria no ágar deve ser anotado.

Nenhuma colônia deve ser observada para atender aos critérios de elegibilidade.
Critérios de elegibilidade = 0 UFC/placa

B) Qual a classificação do ambiente em análise?

Área limpa Grau A.