BSA + GLICOSE + EXTRATOS FL BSA + GLICOSE + EXTRA

T (ºC) t (min) C (ug/mL) N T (ºC)

1A 25 10 50 3 1B 25
2A 25 10 100 3 2B 25
3A 25 10 200 3 3B 25
4A 25 10 400 3 4B 25
5A 25 15 50 3 5B 25
6A 25 15 100 3 6B 25
7A 25 15 200 3 7B 25
8A 25 15 400 3 8B 25
9A 45 10 50 3 9B 45
10A 45 10 100 3 10B 45
11A 45 10 200 3 11B 45
12A 45 10 400 3 12B 45
13A 45 15 50 3 13B 45
14A 45 15 100 3 14B 45
15A 45 15 200 3 15B 45
16A 45 15 400 3 16B 45
17A 65 10 50 3 17B 65
18A 65 10 100 3 18B 65
19A 65 10 200 3 19B 65
20A 65 10 400 3 20B 65
21A 65 15 50 3 21B 65
22A 65 15 100 3 22B 65
23A 65 15 200 3 23B 65
24A 65 15 400 3 24B 65
TOTAL 72 TO

MM GLICOSE m BSA AMOSTRAS C/ GLICOSE

180 g/mol 800 ug m GLICOSE

C GLICOSE C GLICOSE AMOSTRAS C/ BSA

0.4 mol/L 72 g/L m BSA

V REACIONAL V EXTRATO AMOSTRAS TOTAIS

1 mL 100 uL VOLUME TOTAL

V V PBS (50 mM; pH 7,

900 uL 198
AMOSTRAS A MAIS
6
SA + GLICOSE + EXTRATOS FR BSA + EXTRATOS FL
t (min) C (ug/mL) N T (ºC) t (min) C (ug/mL)
10 50 3 1C 25 10 50
10 100 3 2C 25 10 100
10 200 3 3C 25 10 200
10 400 3 4C 25 10 400
15 50 3 5C 25 15 50
15 100 3 6C 25 15 100
15 200 3 7C 25 15 200
15 400 3 8C 25 15 400
10 50 3 9C 45 10 50
10 100 3 10C 45 10 100
10 200 3 11C 45 10 200
10 400 3 12C 45 10 400
15 50 3 13C 45 15 50
15 100 3 14C 45 15 100
15 200 3 15C 45 15 200
15 400 3 16C 45 15 400
10 50 3 17C 65 10 50
10 100 3 18C 65 10 100
10 200 3 19C 65 10 200
10 400 3 20C 65 10 400
15 50 3 21C 65 15 50
15 100 3 22C 65 15 100
15 200 3 23C 65 15 200
15 400 3 24C 65 15 400
TOTAL 72 TOTAL

AMOSTRAS C/ GLICOSE 165 ROTEIRO

m GLICOSE 10.692 g 1. NOMEAR CADA EPPENDORF
2. ADICIONAR 100 uL DE EXTRATO OU PADRÃO CORRESPODEN
AMOSTRAS C/ BSA 220 3. PREPARAR 115,2 mL DE PBS COM 0,02% DE AZIDA
m BSA 0.176 g 4. PESAR 0,1024 g DE BSA
5. DISSOLVER 0,1024 g DE BSA NA SOLUÇÃO DE 115,2 mL DE P
AMOSTRAS TOTAIS 220 6. PIPETAR 900 uL DE SOLUÇÃO EM CADA EPPENDORF QUE NÃ
VOLUME TOTAL 198 mL 7. PESAR 6,2856 g DE GLICOSE
8. DISSOLVER 6,2856 g DE GLICOSE NO VOLUME RESTANTE DE
V PBS (50 mM; pH 7,4) 9. PIPETAR 900 uL DE SOLUÇÃO FORMADA A TODOS OS EPPEN
198 mL 10. LEVAR À ESTUFA - 60ºC DURANTE 40 HORAS
11. ADICIONAR 100 uL DE TCA (100%) A TODOS OS EPPENDOR
12. CENTRIFUGAR - 15000 RPM, 4ºC E 4 MINUTOS
13. REMOVER OS SOBRENADANTES DE TODOS
14. DISSOLVER OS PRECIPITADOS EM 3 mL DE PBS (pH 10)
15. LER FLUORESCÊNCIA EM EXCITAÇÃO 370 nm E EMISSÃO 44
L BSA + EXTRATOS FR
N T (ºC) t (min) C (ug/mL) N X
1 1D 25 10 50 1
1 2D 25 10 100 1
1 3D 25 10 200 1
1 4D 25 10 400 1
1 5D 25 15 50 1 Y
1 6D 25 15 100 1
1 7D 25 15 200 1
1 8D 25 15 400 1
1 9D 45 10 50 1
1 10D 45 10 100 1
1 11D 45 10 200 1 1E
1 12D 45 10 400 1 2E
1 13D 45 15 50 1 3E
1 14D 45 15 100 1 4E
1 15D 45 15 200 1
1 16D 45 15 400 1
1 17D 65 10 50 1
1 18D 65 10 100 1
1 19D 65 10 200 1
1 20D 65 10 400 1
1 21D 65 15 50 1 1F
1 22D 65 15 100 1 2F
1 23D 65 15 200 1 3F
1 24D 65 15 400 1 4F
24 TOTAL 24

RATO OU PADRÃO CORRESPODENTE A CADA EPPENDORF

S COM 0,02% DE AZIDA

A NA SOLUÇÃO DE 115,2 mL DE PBS (pH 7,4)

ÃO EM CADA EPPENDORF QUE NÃO CONTERÁ GLICOSE 55 UNIDADES

ICOSE NO VOLUME RESTANTE DE SOLUÇÃO (PBS + BSA)

ÃO FORMADA A TODOS OS EPPENDORFES QUE CONTERÃO GLICOSE 159 UNIDADES
URANTE 40 HORAS
A (100%) A TODOS OS EPPENDORFES 214 UNIDADES
M, 4ºC E 4 MINUTOS
ANTES DE TODOS
DOS EM 3 mL DE PBS (pH 10)
EXCITAÇÃO 370 nm E EMISSÃO 440 nm
BSA (BRANCO)
N3

BSA + GLICOSE
N3

BSA + GLICOSE + PADRÃO

C (ug/mL) N
50 3
100 3
200 3
400 3
TOTAL 12

BSA + PADRÃO
C (ug/mL) N
50 1
100 1
200 1
400 1
TOTAL 4
 Fs

BSA + GLICOSE + EXTRATOS FL

C (ug/mL) N1 N2 N3
1A 50 0 0 0
MINUTOS

2A 100 1 1 4
3A 200 2 2 0
10

4A 400 6 7 7
5A 50 6 6 4
MINUTOS

6A 100 7 7 6
7A 200 1 0 3
15

8A 400 0 2 1
9A 50 0 0 0
MINUTOS

10A 100 1 1 2
11A 200 0 2 0
10

12A 400 0 0 0
13A 50 5 6 8
MINUTOS

14A 100 8 4 3
15A 200 3 5 2
15

16A 400 4 2 2
17A 50 1 1 0
MINUTOS

18A 100 1 0 1
19A 200 0 0 1
10

20A 400 5 4 3
21A 50 1 1 6
MINUTOS

22A 100 7 7 5
23A 200 3 1 0
15

24A 400 1 2 1

INIBIÇÃO

FOLHAS FRUTOS
AMOSTRA N1 N2 N3 AMOSTRA N1
1A 100 100 100 1B -500
MINUTOS

2A 100 100 -200 2B -300

3A 0 0 200 3B -500
-500 -600 -600 -100
10

4A 4B
5A -400 -400 -200 5B 200
MINUTOS

6A -600 -600 -500 6B 0

15
MINUTOS
7A 0 100 -200 7B 0
15 8A 200 0 100 8B 100
9A 100 100 100 9B -200
MINUTOS
10A 0 0 -100 10B -300
11A 200 0 200 11B -300
200 200 200 100
10

12A 12B
13A -300 -400 -600 13B 0
MINUTOS

14A -700 -300 -200 14B 200

15A -200 -400 -100 15B 200
-300 -100 -100 -100
15

16A 16B
17A 0 0 100 17B 100
MINUTOS

18A 0 100 0 18B -800

19A 200 200 100 19B -500
-400 -300 -200 100
10

20A 20B
21A 0 0 -500 21B 100
MINUTOS

22A -600 -600 -400 22B 100

23A -200 0 100 23B 100
0 -100 0 100
15

24A 24B
 Fs

BSA + GLICOSE + EXTRATOS FR

C (ug/mL) N1 N2 N3
1B 50 6 5 6 1C
2B 100 4 2 10 2C
3B 200 7 6 6 3C
4B 400 3 2 3 4C
5B 50 5C
6B 100 1 1 1 6C
7B 200 1 2 1 7C
8B 400 0 0 0 8C
9B 50 3 10 7 9C
10B 100 4 4 8 10C
11B 200 4 4 5 11C
12B 400 12C
13B 50 1 0 3 13C
14B 100 0 0 0 14C
15B 200 0 0 0 15C
16B 400 2 0 0 16C
17B 50 0 0 4 17C
18B 100 9 7 7 18C
19B 200 6 6 3 19C
20B 400 20C
21B 50 21C
22B 100 0 2 1 22C
23B 200 0 0 0 23C
24B 400 0 0 1 24C

PADRÃO
N2 N3 AMOSTRA N1 N2 N3
-400 -500 1E -100 -100 100
-100 -900 2E 100 -200 -100
-400 -400 3E 0 -100 -100
0 -100 4E 100 100 100
200 200
0 0
-100 0
100 100
-900 -600
-300 -700
-300 -400
100 100
100 -200
200 200
200 200
100 100
100 -300
-600 -600
-500 -200
100 100
100 100
-100 0
100 100
100 0
Fsb Fsb

BSA + EXTRATOS FL BSA + EXTRATOS FR

C (ug/mL) N1 C (ug/mL) N1
50 0 1D 50 0
100 1 2D 100 0
200 1 3D 200 1
400 0 4D 400 1
50 1 5D 50 1
100 0 6D 100 0
200 0 7D 200 0
400 1 8D 400 0
50 0 9D 50 0
100 0 10D 100 0
200 1 11D 200 0
400 1 12D 400 0
50 1 13D 50 0
100 0 14D 100 1
200 0 15D 200 1
400 0 16D 400 0
50 0 17D 50 0
100 0 18D 100 0
200 1 19D 200 0
400 0 20D 400 0
50 0 21D 50 0
100 0 22D 100 0
200 0 23D 200 0
400 0 24D 400 0
 Fs

RATOS FR BSA + GLICOSE + PADRÃO

N1 C (ug/mL) N1 N2 N3
0 1E 50 2 2 0
0 2E 100 0 3 2
1 3E 200 1 2 2
1 4E 400 0 0 0
1
0 Fc
0
0
BSA + GLICOSE
0 N1 N2 N3
0 Y --- 1 1 1
0
0 Fb
0
1
BSA
1 N1 N2 N3
0 X --- 0 0 0
0
0 Fsb
0
0
BSA + EXTRATOS FL
0 C (ug/mL) N1
0 1F 50 0
0 2F 100 0
0 3F 200 0
4F 400 0