Análise Laboratorial GRAFENO Nas Vacinas Covid PORTUGUÊS

Assinado por
EU IA. EMPRESA
DETECÇÃO DE ÓXIDO DE GRAFENO NA

SUSPENSÃO AQUOSA (COMIRNATYTM (RD1)
afirmams.ual.es
ESTUDO OBSERVACIONAL SOBRE MICROSCOPIA ELETRÔNICA E ÓTICA

Você pode verificar a autenticidade, validade e integridade deste documento no endereço:
https://verificarfirma.ual.es/verificarfirma/code/wHN2x8tkKPsiSy/ilL6TwQ==
Relatório provisório (I)

Pablo Campra Madrid
wHN2x8tkKPsiSy / ilL6TwQ ==
28 de junho de 2021
Prof. Dr. Pablo Campra Madrid

Doutor em Ciências Químicas e Bacharel em Ciências Biológicas
HIGH SCHOOL DE ENGENHARIA

UNIVERSIDADE DE ALMERÍA, ESPANHA
PÁGINA
Data
1
28/06/2021
24/01
dois
espectroscópica específica para caracterizar a estrutura
um estudo microscópico
descritivo da amostra
A identificação definitiva do material dominante na

amostra requer mais fracionamento e análise
AVISO IMPORTANTE
e meramente
se apresenta
do material.
observacional
dificuldade.
Então
Assinado por Pablo Campra Madrid Data 28/06/2021
EU IA. EMPRESA afirmams.ual.es wHN2x8tkKPsiSy / ilL6TwQ == PÁGINA 24/02
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Fundo
• Sr. Ricardo Delgado Martín solicita a PRESTAÇÃO DE SERVIÇOS DE PESQUISA ao
afirmams.ual.es
UAL denominado:
"DETECÇÃO DE GRAFENOS EM AMOSTRA DE SUSPENSÃO AQUOSA"

Pablo Campra Madrid
- Em 06/10/2021 1 frasco foi recebido por correio, etiquetado com o seguinte texto:
- "COMIRNATYTM.Concentrado estéril. MRNA de COVID-19. 6 doses após a diluição.

- Data / hora de descarte: PAA165994.LOT / EXP: EY3014 08/2021 ”
- Origem e rastreabilidade: desconhecida

- Estado de conservação: refrigerado
- Manutenção durante o estudo: refrigerado
- Codificação da amostra do problema a ser analisada: RD1
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Data
3
28/06/2021
24/03
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Observações preliminares da amostra do problema

RD1
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Descrição:
Pablo Campra Madrid
- Frasco selado, com borracha e cápsula de alumínio intacta, de 2 ml de capacidade,

contendo uma suspensão aquosa turva de 0,45 ml.

- Extração e quantificação de RNA são realizadas
- A presença de microbiologia nanométrica não caracterizada é observada, visível a 600X

no microscópio óptico
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Data
4
28/06/2021
24/04
2. Fracionamento de polaridade: 1,2 ml de hexano + 120 ul de amostra RD1
1. Diluição em solução salina fisiológica estéril 0,9% (0,45 ml + 1,2 ml)
4. Extração e quantificação de RNA na amostra

5. Microscopia eletrônica e óptica da fase aquosa
Processamento de amostra
3. Extração da fase hidrofílica

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Análise preliminar: extração e quantificação do Rna na amostra

1. Extração de RNA: Kit https://www.fishersci.es/shop/products/ambion-purelink-rna-mini-kit-7/10307963
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2. Quantificação da absorbância UV total em eEspectrofotômetro NanoDrop ™ https://

www.thermofisher.com/order/catalog/product/ND-2000#/ND-2000
3. Quantificação específica de Rna por fluorescência QUBIT2.0: https://www.thermofisher.com/es/es/home/

Pablo Campra Madrid
references/newsletters-and-journals/bioprobes-journalof-cell-biology-applications/bioprobes-issues-2011/
bioprobes-64-april-2011/the- qubit-2-0-fluorômetro-abril
2011.html
PÁGINA
Data
28/06/2021
24/06
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Espectro de absorção de UV da fase aquosa da

amostra RD1
(Equipe Nano-drop)
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Absorção máxima de SAMPLE RD1 (260-270 nm)
- RNA. Apresenta máximas usuais em 260 nm. Concentração total estimada por fluorometriaQUBIT2.0: 6 ng / ul
- O espectro revela a presença de uma grande quantidade de substâncias ou outras substâncias além do Rna com absorção máxima na mesma
região, com um total estimado de 747 ng / ul (estimativa não calibrada)
- O óxido de grafeno reduzido (RGO) tem absorção máxima em 270 nm, compatível com o espectro obtido (Thema et
al, 2013. Journal of Chemistry ID 150536)
- A absorção máxima obtida NÃO PERMITE REJEITAR a presença de grafeno na amostra. A quantidade mínima de RNA detectada
PÁGINA
Data
pelo QUBIT2.0 explica apenas uma porcentagem residual da absorção total de UV da amostra.
28/06/2021
24/07
8
2. Comparação com imagens da literatura e padrão de óxido de grafeno
ALVO: Identificação microscópica de derivados de grafeno
1. Imagem em microscopia óptica e eletrônica

METODOLOGIA:
reduzido
9
MICROSCOPIA ELETRÔNICA DE TRANSMISSÃO
Microscópio Eletrônico JEM-2100Plus
Ampliação de até x1.200.000

Resolução 0,14 nm
Tensão: 200 kV
(TEM)
nanomateriais de grafeno. Ele se tornou um instrumento bastante padrão e fácil de
10
MICROSCOPIA ELETRÔNICA DE TRANSMISSÃO
usar, capaz de gerar imagens de folhas de grafeno em camadas individuais.

A microscopia eletrônica (TEM) é comumente usada para obter imagens de
(TEM)
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DESCRIÇÃO DA IMAGEM acima
(a partir de: Choucair et al, 2009. Produção em escala de Gram de grafeno com base na síntese solvotérmica e sonicação. Nature
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Nanotechnology 4 (1): 30-3

• Figura 2: "Imagens TEM de Folhas de grafeno aglomerado. A

mesma região de amostra é vista em diferentes ampliações e mostra

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claramente o grau de formação da folha e a tendência das lâminas

de se fundirem em regiões sobrepostas. Uma estrutura

semelhante a uma folha inerente é evidente mostrando uma matriz
intrincada de dobras de longo alcance. Uma vez que as imagens

são tiradas no modo de transmissão, a opacidade relativa das folhas
individuais é o resultado de regiões interfaciais com sobreposição
entre as folhas individuais. As folhas se estendem em dimensões
laterais em escalas de comprimento de micrômetro, variando de 100
nm a mais de 1.000 nm. "
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Data
onze
28/06/2021
24/11
Choucair et al 2009. Nature Nanotechnology 4 (1): 30-3 Fig 2
200 nm
RESULTADOS: Comparação da amostra do problema (RD1) com uma imagem TEM
12
da literatura
AMOSTRA RD1
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RESULTADOS: DESCRIÇÃO DAS IMAGENS TEM DO PROBLEMA DE AMOSTRA RD1
As imagens TEM da amostra RD1 em geral, ELES APRESENTAM ALTA SEMELHANÇA com
imagens de óxido de grafeno da literatura obtida pela mesma técnica TEM, com aumentos
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semelhantes. Um intrincadomatriz ou malha de folhas translúcidas flexíveis dobradas sobre si

mesmas, com uma mistura de aglomerações multicamadas mais escuras e monocamadas

desdobradas de cores mais claras. Áreas lineares mais escuras aparecem devido à sobreposição
local de folhas e arranjo local de folhas individuais em paralelo ao feixe de elétrons. Após a malha,
Pablo Campra Madrid
uma alta densidade delimpar formas arredondadas e elípticas não identificadas,

possivelmente correspondendo a orifícios gerados pelo forçamento mecânico da malha durante o

tratamento. Mostramos aqui 3 imagens com ampliação progressiva:
PÁGINA
Data
13
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13/24
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• Nota importante: Para uma IDENTIFICAÇÃO definitiva do

GRAFENO por TEM, é necessário complementar a observação
com a caracterização estrutural obtendo por EDS um PADRÃO DE
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DIFRAÇÃO ELÉTRICA característico (conforme figura b abaixo). O

padrão correspondente ao grafite ou grafeno tem uma simetria

hexagonal e geralmente tem vários hexágonos concêntricos.Não

foi possível, no momento, obter esse padrão devido à
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escassez de amostras disponíveis para processamento, e ao

arranjo caótico e à densidade das dobras.
PÁGINA
Data
Matéria (Rio J.) 23 (1) • 2018 • Caracterização de nanofolhas de grafeno obtidas pelo método de
14
Hummer modificado. Renata Hack et al.
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14/24
quinze
posição intermediária com efeito
3D (entre o campo claro (BF) e o
• Condensador colocado em
campo escuro (DF)

Microscópio Biológico
Objetivas PLAN Fluor 10x, 20x (DIC) e 40x (DIC)

Microscópio óptico
Ocular: 10x
CX43
PLAN
PADRÃO DE ÓXIDO DE GRAFENO REDUZIDO
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INDENTIFICAÇÃO DE ÓXIDO DE GRAFENO E SUAS CARACTERÍSTICAS ESTRUTURAIS POR

PORMICROSCOPIA ÓPTICA
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Os materiais de grafeno consistem essencialmente em uma única camada atômica. Isso torna difícil a observação do microscópio de
luz com base na absorbância, embora seja possível adquirir imagens ópticas de folhas de grafeno suspensas sob luz transmitida em
campo claro (Fig. A). O grafeno oxidado (GO) tem uma cor muito mais clara do que o grafeno reduzido (rGO).
No entanto, sob iluminação reflexiva, a obtenção imagem óptica de alto contraste de grafeno e até mesmo slides GO
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foram relatados na literatura. Modificando o ângulo de incidência da iluminação, por meio de ajuste adequado do
condensador (campo claro e campo escuro), esta tem sido a técnica utilizada para aumentar o contraste na amostra RD1
deste relatório e obter imagens da rugosidade na superfície das folhas com efeito 3D.
PÁGINA
a) Campo claro. bd) Microscopia de extinção de fluorescência (FQM)

Data
Kim et al, 2010. Vendo folhas à base de grafeno, Materials Today, Volume 13, 2010, Pages 28-38,
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17/24
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Imagem da literatura
Baixa ampliação TEM
afirmams.ual.es
"A figura mostra uma imagem TEM de grafeno de duas camadas com bordas que
tendem a se curvar e dobrar levemente "

Pablo Campra Madrid
Qian, W., Hao, R., Hou, Y. et al. Processo de esfoliação com auxílio de solvotérmico para
produção de grafeno com alto rendimento e alta qualidade. Nano Res. 2, 706-712
(2009).
PÁGINA
Data
28/06/2021
18/24
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IMAGENS DA LITERATURA. MICROSCOPIA ELETRÔNICA DE BAIXA MAGNIFICAÇÃO

MICROSCOPIA DE VARREDURA ELETRÔNICA (SEM) (a) e (b) e TRANSMISSÃO (TEM) (c) e (d)
Efeitos das nanofolhas de grafeno com diferentes tamanhos laterais como aditivos condutores no desempenho eletroquímico de materiais catódicos
LiNi0.5Co0.2Mn0.3O2 para baterias de íons de lítio. Figura 2. SEMimagens de diferentes tamanhos de folha de grafeno: (para) GN-13 e (b) GN-28 e microscopia
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eletrônica de transmissão (TEM) imagens de diferentes tamanhos de folha de grafeno: (c) GN-13 e (d) GN-28.
Husu et al. Polymers 2020, 12 (5), 1162

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PÁGINA
Data
19
28/06/2021
19/24
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caneta AccessLetter
Robusta plataforma magnetizada de óxido de
grafeno para síntese de peptídeos in situ e
detecção de protease baseada em FRET
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Kim et al, Sensores 2020, vinte(18), 5275

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Figura 1. Preparação e caracterização de óxido

de grafeno (GO) e óxido de grafeno magnético
(MGO). (A) Esquema do procedimento de síntese
de MGO. (B)Imagem de microscopia óptica de
MGO. (C) Loop de histerese magnética de MGO.
(D) Espectros de absorção de UV / Vis de GO e
MGO. (E) Espectros FTIR de GO e MGO.
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Data
vinte
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20/24
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Comparação da amostra RD1 ao microscópio óptico com imagens do padrão

REDUCED GRAPHENE OXIDE (rGO)
As imagens ópticas das folhas presentes na amostra RD1 revelam grande semelhança com as folhas esfoliadas por
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sonicação do padrão rGO. Ambas as amostras apresentam folhas internamente ásperas translúcidas, com perfis irregulares,
dobradas sobre si mesmas e com tendência a enrolar nas bordas. As formas e dimensões das folhas são muito
variáveis, apresentando em ambas as folhas de amostras em fitas ou faixas dobradas sobre si mesmas (fitas).
Pablo Campra Madrid
O ANEXO em anexo mostra imagens alternativas de AMOSTRA DE PADRÃO DE rGO e

AMOSTRA DE PROBLEMA RD1

PÁGINA
Data
https://cen.acs.org/articles/86/i4/Graphene-Ribbons.html vinte e um
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21/24
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CONCLUSÕES E RECOMENDAÇÕES
afirmams.ual.es
1. O estudo microscópico da amostra fornece forte evidência para a provável

presença de derivados de grafeno, embora a microscopia não forneça

evidências conclusivas. A identificação definitiva de grafeno, grafeno

oxidado (GO) ou grafeno oxidado reduzido (rGO) na amostra RD1 requer o
Pablo Campra Madrid
CARACTERIZAÇÃO ESTRUTURAL através da análise de padrões espectrais

específicos comparáveis aos publicados na literatura e aos obtidos a partir de

uma amostra padrão, obtida com técnicas espectroscópicas como XPS, EDS,
NMR, FTIR ou Raman, entre outros.
2. As análises neste relatório correspondem a UM ÚNICO SAMPLE, limitado em

volume total disponível para processamento. É, portanto, necessário realizar um
uma amostragem significativa de frascos semelhantes para tirar conclusões
generalizar para amostras comparáveis, registrando origem, rastreabilidade e
controle de qualidade durante o armazenamento e transporte antes da análise.
PÁGINA
Data
22
28/06/2021
22/24
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Isenção de responsabilidade
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• Os resultados e conclusões deste relatório não implicam qualquer posição

institucional da Universidade de Almería
• Nem o Pesquisador Principal nem a Universidade de Almería assumem

qualquer responsabilidade pelo conteúdo e opiniões de terceiros em relação a
este relatório de sua possível divulgação nas redes sociais ou nos meios de
comunicação, nem pelas conclusões que dele possam ser extraídas que não
tenham sido explicitadas No texto.
PÁGINA
Data
2,3
28/06/2021
23/24
24
VER ANEXO FOTOGRAFIAS DA AMOSTRA
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ANEXO FOTOGRAFIAS
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jPnCXqeqfqPbwofrC3oSXA ==
28 de junho de 2021
Prof. Dr. Pablo Campra Madrid

Doutor em Ciências Químicas e Bacharel em Ciências Biológicas
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Data
1
UNIVERSIDADE DE ALMERÍA, ESPANHA
28/06/2021
1/30
dois
MICROSCOPIA ELETRÔNICA
EU IA. EMPRESA afirmams.ual.es jPnCXqeqfqPbwofrC3oSXA == PÁGINA 30/02
3
MOSTRAR
RD1
4
MOSTRAR
RD1
5
MOSTRAR
RD1
6
MOSTRAR
RD1
7
MOSTRAR
RD1
8
MICROSCOPIA ÓPTICA
PADRÃO DE ÓXIDO DE GRAFENO REDUZIDO 10X
Antes do tratamento
Tratamento: esfoliação de escalas rGO por sonicação suave de 30s com pulsos de 5s por sonda
PADRÃO DE ÓXIDO DE GRAFENO REDUZIDO 10X
onze
MOSTRAR
RD1
12
MOSTRAR
(campo
Escuro)
RD1
60x ÓXIDO DE GRAFENO REDUZIDO PADRÃO
14
MOSTRAR
RD1 60x
16
MOSTRAR
RD1
17
MOSTRAR
(campo
Escuro)
RD1
19
MOSTRAR
RD1
22
MOSTRAR
RD1
27
MOSTRAR
RD1
29
MOSTRAR
RD1
30
MOSTRAR
RD1

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ESTUDO OBSERVACIONAL SOBRE MICROSCOPIA ELETRÔNICA E ÓTICA

Relatório provisório (I)

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HIGH SCHOOL DE ENGENHARIA

A identificação definitiva do material dominante na

"DETECÇÃO DE GRAFENOS EM AMOSTRA DE SUSPENSÃO AQUOSA"

- "COMIRNATYTM.Concentrado estéril. MRNA de COVID-19. 6 doses após a diluição.

- Origem e rastreabilidade: desconhecida

Observações preliminares da amostra do problema

Você pode verificar a autenticidade, validade e integridade deste documento no endereço:

- Frasco selado, com borracha e cápsula de alumínio intacta, de 2 ml de capacidade,

contendo uma suspensão aquosa turva de 0,45 ml.

- A presença de microbiologia nanométrica não caracterizada é observada, visível a 600X

4. Extração e quantificação de RNA na amostra

3. Extração da fase hidrofílica

Análise preliminar: extração e quantificação do Rna na amostra

Você pode verificar a autenticidade, validade e integridade deste documento no endereço:

2. Quantificação da absorbância UV total em eEspectrofotômetro NanoDrop ™ https://

3. Quantificação específica de Rna por fluorescência QUBIT2.0: https://www.thermofisher.com/es/es/home/

Espectro de absorção de UV da fase aquosa da

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Absorção máxima de SAMPLE RD1 (260-270 nm)

1. Imagem em microscopia óptica e eletrônica

Microscópio Eletrônico JEM-2100Plus

Ampliação de até x1.200.000

usar, capaz de gerar imagens de folhas de grafeno em camadas individuais.

DESCRIÇÃO DA IMAGEM acima

Nanotechnology 4 (1): 30-3

• Figura 2: "Imagens TEM de Folhas de grafeno aglomerado. A

mesma região de amostra é vista em diferentes ampliações e mostra

claramente o grau de formação da folha e a tendência das lâminas

de se fundirem em regiões sobrepostas. Uma estrutura

intrincada de dobras de longo alcance. Uma vez que as imagens

RESULTADOS: DESCRIÇÃO DAS IMAGENS TEM DO PROBLEMA DE AMOSTRA RD1

semelhantes. Um intrincadomatriz ou malha de folhas translúcidas flexíveis dobradas sobre si

mesmas, com uma mistura de aglomerações multicamadas mais escuras e monocamadas

uma alta densidade delimpar formas arredondadas e elípticas não identificadas,

possivelmente correspondendo a orifícios gerados pelo forçamento mecânico da malha durante o

• Nota importante: Para uma IDENTIFICAÇÃO definitiva do

DIFRAÇÃO ELÉTRICA característico (conforme figura b abaixo). O

padrão correspondente ao grafite ou grafeno tem uma simetria

hexagonal e geralmente tem vários hexágonos concêntricos.Não

escassez de amostras disponíveis para processamento, e ao

campo escuro (DF)

Objetivas PLAN Fluor 10x, 20x (DIC) e 40x (DIC)

INDENTIFICAÇÃO DE ÓXIDO DE GRAFENO E SUAS CARACTERÍSTICAS ESTRUTURAIS POR

a) Campo claro. bd) Microscopia de extinção de fluorescência (FQM)

tendem a se curvar e dobrar levemente "

IMAGENS DA LITERATURA. MICROSCOPIA ELETRÔNICA DE BAIXA MAGNIFICAÇÃO

Husu et al. Polymers 2020, 12 (5), 1162

Kim et al, Sensores 2020, vinte(18), 5275

Figura 1. Preparação e caracterização de óxido

Comparação da amostra RD1 ao microscópio óptico com imagens do padrão

O ANEXO em anexo mostra imagens alternativas de AMOSTRA DE PADRÃO DE rGO e

AMOSTRA DE PROBLEMA RD1

1. O estudo microscópico da amostra fornece forte evidência para a provável

presença de derivados de grafeno, embora a microscopia não forneça

evidências conclusivas. A identificação definitiva de grafeno, grafeno

CARACTERIZAÇÃO ESTRUTURAL através da análise de padrões espectrais

específicos comparáveis aos publicados na literatura e aos obtidos a partir de