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UNIVERSIDADE FEDERAL DE SANTA CATARINA - UFSC CENTRO TECNOLGICO - CTC DEPARTAMENTO DE ENGENHARIA QUMICA E DE ALIMENTOS - EQA Disciplina: Engenharia

Bioqumica

APLICAES DE ENZIMAS EM PRODUTOS DE LIMPEZA

Alunos:

Cassius Fbio Mrio Segato

Oliveira Muller

O QU SO ENZIMAS? As enzimas so substncias naturais envolvidas em todos os processos bioqumicos que ocorrem nas clulas vivas. So protenas e, portanto, consistem em cadeias de aminocidos unidas por ligaes peptdicas. Servem para catalisar reaes bioqumicas, o que significa que aumentam a velocidade da reao bioqumica sem se deixar afetar pela reao propriamente dita. As enzimas so capazes de decompor molculas complexas em unidades menores (carboidratos em acares, por exemplo), de catalisar alteraes estruturais dentro de uma molcula (caso da isomerizao da glicose em frutose), assim como podem ajudar a construir molculas especficas (de material celular, por exemplo). Algumas das enzimas mais conhecidas se encontram em nosso trato digestivo, onde auxiliam a digesto e a assimilao de alimentos. Uma das caractersticas principais das enzimas que elas tm uma e apenas uma funo cada (especificidade). Cada funo ou substrato dentro

de um organismo possui apenas sua nica enzima respectiva. O substrato que ser transformado preenche a enzima como chave-fechadura. Apenas quando a enzima ideal encontrar o substrato ideal, as reaes bioqumicas podem ocorrer.

Aplicaes Gerais das Enzimas:

Como Agem as Enzimas?

As enzimas se conectam s substncias reagentes e enfraquecem certas ligaes qumicas, de modo que menos energia (de ativao) necessria para que as reaes ocorram. Se as enzimas estivessem ausentes, as reaes qumicas seriam lentas demais para dar suporte vida.

As enzimas so bastante especficas, decompondo ou compondo apenas certas substncias em certas condies de temperatura, pH e concentrao do substrato (substncia na qual a enzima atua). Algumas transformaes envolvem vrias enzimas como a da glicose em gua e gs carbnico que leva 25 passos, cada passo com a participao de vrias enzimas. Quando as enzimas so aquecidas, elas aceleram ainda mais as reaes, mas apenas at certo ponto a partir do qual elas se modificam e perdem suas propriedades catalisadoras. Quando a temperatura cai, as enzimas voltam ao seu estado anterior. As enzimas tm a capacidade de agir sobre o sangue, gordura, muco, saliva, protenas em geral, produzindo um substrato mais fcil de ser removido pelos agentes de limpeza, tornando mais efetiva a ao dos mesmos.

ENZIMAS EM PRODUTOS DE LIMPEZA Histrico: No incio do sculo XX, Rhm(1913), desenvolveu o primeiro mtodo de lavagem de tecidos com detergentes que continham enzimas, fabricando a primeira formulao desses detergentes. A empresa de Rhm patenteou o produto em 1913 e a preparao foi comercializada at os anos sessenta. A

formulao do produto baseava-se na tripsina, uma enzima digestiva produzida no pncreas de mamferos. O produto no obteve grande sucesso, pois a tripsina no era suficientemente ativa em lquidos fortemente alcalinos (pH maior que 9,0), obtidos pela diluio do detergente (Bon, 1995). Em 1959, ocorreu um desenvolvimento marcante na indstria de detergentes. O qumico suo Jaag, que trabalhou para a companhia de detergentes Gebrder Schnyder, em Biel, na Sua, desenvolveu um produto novo denominado Bio 40, que continha uma protease bacteriana em substituio tripsina. Embora a protease bacteriana fosse mais adequada ao propsito industrial, esse ainda no era o produto ideal. Em 1962, a empresa Novo Nordisk lanou no mercado um produto denominado Alcalase. A ao dessa protease alcalina obtida de microrganismos no era afetada por outros componentes do detergente e era eficaz nas temperaturas desejadas (Novozyme, 2000). O primeiro grande sucesso de marketing de um detergente formulado com enzimas foi o Biotex, que continha Alcalase e foi produzido pela KORTMAN&SCHULTE(atualmente Kortman Intradal) em colaborao com Gebrder Schnyder. O sucesso desse produto marcou uma real inovao na utilizao de enzimas em detergentes a partir de ento(Novozyme, 2000). O uso de enzimas para propsitos industriais progrediu rapidamente aps 1965, devido, principalmente, ao uso crescente de diferentes enzimas em detergentes. Entretanto, houve um retrocesso temporrio no incio da dcada de setenta, quando se averiguou que as enzimas poderiam causar reaes alrgicas (Novozyme, 2000). Por iniciativa do .Food and Drug Administration. (FDA), a National Academy of Science. (NAS), efetuou uma ampla investigao sobre esse assunto. A NAS, em seu relatrio de 1971, concluiu que as enzimas presentes nas formulaes de detergentes no s so inofensivas aos consumidores, como tambm proporcionam vantagens tecnolgicas definidas indstria. Os produtores de detergentes so hoje os maiores consumidores de enzimas industriais. Por isso, constantemente, esto sendo desenvolvidos novos produtos contendo

novas enzimas e novas formulaes com tal finalidade. A principal e mais recente inovao nesse campo foi a introduo, em 1988, de uma formulao com lipase (Novozyme, 2000).

PORQU UTILIZAR ENZIMAS E NO PRODUTOS QUMICOS?

Vantagens da Utilizao de Enzimas: Os maiores problemas do detergente comum so:

Atuao prioritria sobre gorduras e leos; as protenas e

acares so fracamente afetados pela atividade dos ons livres;

Ao lenta sobre a matria orgnica, tornando necessria a

escovao, o que resulta em risco para o funcionrio que manuseia os materiais contaminados durante a limpeza mecnica;

Os ons livres, que propiciam a eliminao das sujidades (restos

orgnicos), tambm atacam o material de fabricao dos instrumentos e equipamentos. Os detergentes comuns no possuem atividade

especfica sobre as impurezas orgnicas. Seu uso constante provoca desgaste, abraso e corroso nos materiais clnicos, que podero finalmente quebrar-se. Os detergentes modernos apresentam um espectro de ao e de utilizao bastante amplo, havendo, conseqentemente, necessidade de especializao das formulaes. A principal vantagem da formulao de detergentes que contenha enzimas a substituio de produtos custicos, cidos e solventes txicos, que agridem o meio ambiente e que provocam o desgaste de materiais e de instrumentos. O uso diversificado das enzimas deve-se sua caracterstica de atuar como biocatalisadores especializados. As enzimas adicionadas s formulaes de detergentes de uso hospitalar, domstico e industrial agem digerindo e dissolvendo resduos orgnicos (sangue, fezes, urina, vmitos, manchas diversas), higienizando as partes externas e internas de instrumentos cirrgicos, desobstruindo canais com

resduos e coagulados, eliminando resduos fecais dos canais e superfcies dos fibroscpios e removendo contaminantes da rouparia hospitalar (Godfrey, 1996). Os principais tipos de enzimas utilizadas nessa indstria incluem: a) amilases - degradam amido e outros glicdios de carboidratos; b) proteases degradam ligaes peptdicas; c) lpases - degradam lipdeos; d) celulases degradam celulose (Bon, 1995). A preocupao crescente com o ambiente outro fator que tem levado os fabricantes a reavaliar as formulaes j existentes. Nas formulaes mais recentemente empregados, utilizadas, foram muitos ingredientes por enzimas, imprprios, mantendo at o ento mesmo

substitudos

desempenho dos antigos produtos. As enzimas como princpios ativos dos detergentes apresentam a grande vantagem de ser 100% biodegradveis. Uma nova gerao de detergentes sem fosfato e sem cloro alvejante, contendo apenas uma mistura de enzimas, com formulao mais segura e menos custica, foi introduzida na Europa h vrios anos. O uso de enzimas, em particular as amilases, em processos industriais, satisfaz as exigncias das normas de ISO 14000 de baixo impacto ambiental, alm da reduo de gastos energticos associados ao aumento da qualidade do produto (Bon, 1995). As projees indicam que combinaes variadas de misturas de enzimas venham a substituir, cada vez mais, os ingredientes menos aceitveis do ponto de vista ambiental, nas formulaes de detergentes. Um exemplo est na fabricao de detergentes de mquinas de lavar louas automticas, no mercado europeu. A substituio de muitos dos ingredientes que agrediam o meio ambiente por enzimas tornou possvel manuteno do mesmo desempenho(Novozyme, 2000).

Reduzindo o Consumo de gua

Um denominador comum para a maioria dos processos onde enzimas

substituem qumicos a reduo do consumo de gua. Processos de enxge, em particular, so feitos muito mais em harmonia com o meio ambiente. Enzimas usadas para substituir qumicos danosos tanto na indstria txtil e de couro no apenas removem fontes importantes de poluio como salva gua. Se os qumicos forem usados, txteis e couros tm que enxagar muitas vezes at se assegurar um produto sem resduos, requerendo assim muita quantidade de gua. E, contrastando isso, a maioria dos processos enzimticos requer apenas uma nica lavagem, e s vezes, nem isso.

Reduzindo o Consumo de Energia

Muitas aplicaes industriais de enzimas fazem mais do que apenas preservar o meio ambiente do alto consumo de gua e efluentes poluentes. Partindo que as enzimas so ativas a temperaturas muito menores do que nos processos qumicos tradicionais, a quantia de energia consumida nos processos com enzima so muito menores. Esta a grande novidade para o meio ambiente porque a produo de energia uma das principais causas da poluio atmosfrica global: estaes de energia soltam enormes quantidades de dixido de carbono na atmosfera. Se todas as pessoas da Dinamarca lavassem suas roupas a 40C, o meio ambiente seria privado do recebimento de 70mil toneladas de CO 2, o equivalente ao dixido de carbono emitido por 10 mil carros andando ao mesmo tempo. Em paralelo, a lavagem baixa temperatura economiza dinheiro. Um quilo de enzima o bastante para 2.200 lavagens a 40C. O custo de 2.200 lavagens a 95C 3 vezes mais caro que a 40. Principais Tipos de Enzimas Componentes de Produtos de Limpeza:

Proteases: As proteases podem atuar sobre manchas que contm protena, hidrolizando-as parcialmente e aumentando assim sua solubilidade em gua. - A grande maioria das proteases de uso comercial atualmente produzida por variadas espcies de Bacillus sp. (bactria) em sistemas de fermentao submersa. - As proteases de uso comercial em detergentes possuem pH timo de ao alcalino e usualmente resistem a elevadas temperaturas o que permite o uso dos detergentes em sistemas de lavagem a quente. Em geral, so proteases com massa molar entre 20 e 30 Kda e ao baseada em stios ativos contendo serina. No mercado, so comercializadas por nomes de fantasia como: SAVINASE, ALCALASE, SUBSTILISIN NOVO, dentre outras.

Dependncia de pH e temperatura de reao de uma protease usada em detergentes para lavagem de roupas (Alcalase). Reproduzido com modificaes de Geofrey & West, 1996.

Dependncia de pH e temperatura de reao de uma protease usada em detergentes para lavagem de roupas (Esperase). Reproduzido com modificaes de Geofrey & West, 1996.

Lipases: As lipases podem atuar sobre manchas que contm gorduras (lipdeos e/ou triglicerdeos) e os transformar em substncias mais solveis em gua. - A primeira lipase introduzida em detergentes comerciais (em 1988) tinha origem em fermentao submersa e era produzida por Humicula lanuginosa (fungo). Posteriormente o DNA responsvel pela codificao da enzima foi introduzido em Aspergillus orizae (fungo) e desde ento produzida por esse organismo. - Os materiais graxos que formam manchas em roupas em sua maioria so triglicerdeos, que pela ao das lipases so convertidos em cidos graxos

livres e di-, mono-glicerdeos e glicerol. Esses triglicerdeos possuem cidos graxos de cadeia longa (usualmente C16 ou C18) que so pouco solveis em gua e de difcil remoo. A ao das lipases libera os cidos que em pH alcalino formam os carboxilatos que so solveis em gua atravs da formao de micelas. - As lipases usadas em detergentes tambm so estveis em pH alcalino e possuem um efeito interessante de efeito ps-lavagem. Foi detectado que uma segunda lavagem (aps um perodo de secagem ao ar) de roupas manchadas com gorduras proporciona resultados aditivos no efeito de remoo da mancha. Esse fato tem sido explicado com base na ao continuada da lipase durante a secagem, o que proporciona um benefcio adicional numa segunda etapa de lavagem.

Dependncia de pH e temperatura de reao de uma lipase usada em detergentes para lavagem de roupas (lipolase). Reproduzido com modificaes de Geofrey & West, 1996.

Ao de lipase em um processo de secagem de roupa lavada com detergente que contm a enzima. Reproduzido com modificaes de Geofrey & West, 1996. Foi determinado que aos 90 min de secagem nessas condies a umidade do tecido era de 20-30%, onde h a mxima ao da lipase.

Amilases: As amilases atuam sobre manchas que contm amido, como molhos, frutas, chocolate e outras. O amido contido nesses materiais usualmente atua como uma cola que retm, inclusive, manchas de origens proticas e lipdicas. - As amilases comercializadas atualmente so produzidas por Bacilus licheniformis e B. amyloliquefaciens por fermentao submersa. Essas enzimas hidrolisam amido transformando-o em oligmeros de cadeia curta

(gelatinizao) que so solveis em gua. Como outras enzimas usadas em detergentes, possuem resistncia moderada a pH alcalino e atuam em temperaturas elevadas.

Dependncia de pH e temperatura de reao de uma amilase usada em detergentes para lavagem de roupas (Termamyl). Reproduzido com

modificaes de Geofrey & West, 1996.

Dependncia de pH e temperatura de reao de uma lipase usada em detergentes para lavagem de roupas (BAN). Reproduzido com modificaes de Geofrey & West, 1996.

Celulases: As celulases so hidrolases que degradam as ligaes glicosdicas da celulose e so divididas em endo-celulases que degradam o polmero ao acaso gerando oligmeros menores e as exo-celulases que degradam esses oligmeros (pelas pontas) gerando celobiose. Ao contrrio das enzimas citadas anteriormente, as celulases degradam o tecido das roupas que contm algodo. O efeito nesse caso a remoo de fibrilas de celulose que com o tempo passam a aparecer como penugem no exterior da fibra principal. O efeito das celulases sobre os tecidos ento o de melhorar a aparncia quanto ao brilho, a maciez e facilitar a remoo de partculas slidas do tecido (muitas vezes partculas do prprio algodo que forma o tecido). - As celulases usadas em detergentes so produzidas ou por espcies de Bacillus (bactria) ou por um fungo do gnero Humicola. Essas celulases possuem pH timo de ao prximo a 7,0, apesar de apresentar certa tolerncia a valores de pH mais elevados.

Aplicao das Enzimas nos Detergentes Usados para Lavar Roupas e Quantificao dos Resultados em Termos de Eficincia:

- Quantificar o efeito das enzimas nas formulaes dos detergentes em termos prticos (resultado na roupa lavada) extremamente difcil, pois muitas vezes envolve determinaes subjetivas de quanto limpo est um tecido. - Um dos mtodos desenvolvidos para isso a determinao da reflectncia da superfcie de um tecido em comprimentos de onda na regio do visvel. Usualmente a medida realizada em 460 nm para tecidos brancos. O mtodo consiste em manchar um tecido limpo com quantidade conhecida de um agente especfico (sangue para ao de proteases, leo para ao de lipases e molhos vermelhos base de amido para amilases) e submet-los a lavagem com detergente com e sem a adio de uma enzima especfica. A reflectncia de cada tecido aps a lavagem e secagem determinada e o resultado expresso como uma diferena de reflectncia (com enzima sem enzima). Um exemplo dessa metodologia ilustrado para a ao de uma protease sobre tecidos tratados com doses variveis da enzima no detergente. O efeito da ao de lipases tambm tem sido avaliado pela mesma metodologia.

Ao de uma protease (Savinase) sobre a lavagem de um tecido em condies padronizadas. O mtodo consiste de medir a reflectncia do tecido aps a lavagem e comparar o efeito com um detergente similar, porm sem a adio da enzima. Reproduzido com modificaes de Geofrey & West, 1996.

Ao de uma lipase (Lipolase) sobre a lavagem de um tecido manchado com gordura que contm um corante (vermelho) em condies padronizadas. O mtodo consiste de medir a reflectncia do tecido aps a lavagem. Reproduzido com modificaes de Geofrey & West, 1996.