Instituto Federal de Educao, Cincia e Tecnologia da Bahia Data: 17 de Abril de 2012 Alunas: Mrcia Cunha Nayara Argolo Railane

Freitas Ruth Oliveira Turma: 8843 Identificao dos pigmentos do pimento a partir da CCD Para realizao da cromatografia nos pimentes necessrio obteno dos seus extratos. Para isso, fazem-se necessrias extraes usando um par de solventes Hexano: Acetona usando cada um dos pimentes, o verde, o amarelo e o vermelho. A amostra do extrato obtido de cada um dos pimentes respectivamente aplicada atravs de um pequeno capilar na borda inferior da placa cromatogrfica com a slica, j que se trata de uma placa ascendente. A cuba cromatogrfica nada mais do que um recipiente de vidro, com tampa, devidamente vedado, onde l estar contido papis de filtro embebidos do efluente (apenas 2 cm de altura so necessrios), que no caso, fizemos duas eluies, cada um com um solvente diferente, a primeira com Hexano e a segunda foi a mistura de solventes Hexano:Acetona 20% formando assim a nova fase mvel. Adicionou-se Hexano com acetona devido ao aumento da polaridade da fase mvel, aumentando assim a afinidade da amostra com esta. Por ser utilizada uma mistura de um componente polar (acetona) e um componente apolar (hexano), os extratos dos pimentes nessa prtica puderam ser dissolvidos, em conseqncia de haver na amostra grupos de carotenos (apolar) e outros grupos de carter polar. A cuba cromatogrfica deve estar devidamente vedada. De modo a deixar a sua atmosfera interna saturada com os vapores da fase mvel, pois assim se facilitaro desenvolvimento do cromatograma. O papel j devidamente contendo as amostras, posicionado na cubra cromatogrfica, de modo que o nvel da referida fase mvel, no ultrapasse o ponto onde a mostra fora

aplicada, ou seja, o nvel da fase mvel deve estar abaixo do ponto da amostra. O desenvolvimento da cromatografia ocorre com a fase mvel, migrando por entre a fase estacionria (slica) por ao da capilaridade. Como a amostra ir reagir com a fase mvel e a estacionria, a medida que o solvente ascende, as amostras devero ser arrastadas a uma velocidade que ser determinada a partir da interao existente, seja ela com a fase mvel, ou com a fase estacionria. Aps o desenvolvimento da corrida, houve a revelao, mas nesse caso no foi-se necessrio nenhum mtodo, j que so pigmentos coloridos. Observa-se, ento, a formao de trs distintas regies no cromatograma com os extratos dos trs pimentes, o amarelo, o verde e o vermelho, respectivamente. Observa-se que as xantofilas polioxigenadas (contm duas hidroxilas), que so a Capsantina e Capsorubina, presente nos pimentes vermelhos, ficaram retidas na fase estacionria, logo pouco se distanciando do ponto de aplicao da amostra. O que significa que essas substncias so muito polares, e tem grande afinidade com a fase estacionria, podendo assim formar interao com a slica da placa. Outra regio formada a que contm as xantofilas monooxigenadas, (j que elas possuem somente uma hidroxila), e por isso possuem afinidade moderada com a fase estacionria. Assim as xantofilas monooxigenadas, (a exemplo da criptoxantina), ficam relativamente retidas, e deslocam-se moderadamente do ponto inicial de aplicao da amostra. importante salientar que as xantofilas polioxigenadas se deslocam mais, pois a presena de duas hidroxilas lhes confere uma maior afinidade com a fase estacionria, se compararmos com a xantonila que apresenta somente uma hidroxila. A regio que mais se deslocou durante a corrida cromatogrfica formada pelos carotenos hidrogenados (licopenos e carotenos) que so compostos apenas de ligaes C-H, o que lhes confere uma falta de polaridade, na qual as interaes prevalecentes so do tipo Foras de London, (que aquela feita atravs de dipolos temporrios). Esses carotenos, portanto, possuem pouca afinidade com a fase estacionria (slica), e apresenta uma maior afinidade com a fase mvel, mistura Hexano:Acetona e apenas Hexano, que tambm apolar, logo esses compostos sero eludos pela fase mvel,

explicando assim o porqu do seu maior distanciamento do ponto de aplicao da amostra.

Figura 1: Cromatoplaca que usou a mistura Hexano:Acetona 20% como fase mvel

Figura 2: Cromatoplaca que usou Hexano como fase mvel

Observa-se ento, que na cromatoplaca que usou o par de solventes Hexano:Acetona 20%, as manchas se curvaram devido fissura na fase estacionria, o que comprime a placa tornando as manchas tortas. Clculo de Rf da placa com o Hexano como fase mvel: Amarelo: 4,0/6,5= 0,6154

Vermelho: 4,1/ 6,5= 0,6308 Verde: 3,9/6,5= 0,6 Clculo de Rf da placa com a mistura Hexano:Acetona 20% como fase mvel Amarelo: 3,2/5,5= 0,581818 Vermelho: 3,4/5,5= 0,618181 Verde: 3,5/5,5= 0,636363