ARTIGO

ORIGINAL

Oocistos de Cryptosporidium e cistos de Giardia: circulao no ambiente e riscos sade humana*

Cryptosporidium Oocysts and Giardia Cysts: Environmental Circulation and Health Risks
Lo Heller Departamento de Engenharia Sanitria e Ambiental/ Universidade Federal de Minas Gerais, Belo Horizonte-MG Rafael Kopschitz Xavier Bastos Departamento de Engenharia Civil/Universidade Federal de Viosa, Viosa-MG Maria Berenice Cardoso Martins Vieira Fundao Ezequiel Dias/Laboratrio Central de Sade Pblica, Lacen-MG Paula Dias Bevilacqua Departamento de Medicina Veterinria/Universidade Federal de Viosa, Viosa-MG Ludmila Ladeira Alves de Brito Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos Naturais Renovveis-Ibama, Belo Horizonte-MG Santana Maria Marinho Mota Fundao Nacional de Sade-Funasa Servio de Vigilncia Epidemiolgica da Prefeitura Municipal de Viosa-MG Adriana Aguiar Oliveira Departamento de Medicina Veterinria/Universidade Federal de Viosa, Viosa-MG Patrcia Maria Machado Programa de Ps-Graduao em Saneamento, Meio Ambiente e Recursos Hdricos/Universidade Federal de Minas Gerais, Belo Horizonte-MG Daniella Pedrosa Salvador Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientfico e Tecnolgico-CNPq Bolsista de Apoio Tcnico Allisson Badar Cardoso Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientfico e Tecnolgico-CNPq Bolsista de Iniciao Cientfica

Resumo Embora a presena de protozorios em guas para consumo humano revele-se como um importante problema de Sade Pblica em diversos pases, o conhecimento sobre esses riscos, no Brasil, ainda escasso. Em vista dessa lacuna, apresentamse, neste trabalho, informaes que ajudam a compor e explicar a circulao no ambiente e a importncia epidemiolgica de oocistos de Cryptosporidium e de cistos de Giardia. A metodologia do trabalho incluiu: uma varredura da presena dos (oo)cistos em diferentes mananciais de abastecimento, em amostras de esgotos sanitrios, em fezes de animais e humanas; a pesquisa da sua presena em hortalias; a avaliao da eficincia de instalaes de tratamento de gua em escala-piloto e em escala real na remoo desses microrganismos; e a sua presena em guas de consumo aps filtrao. Foram identificadas: elevadas concentraes dos protozorios em mananciais abastecedores; a sua presena na gua filtrada de estaes de tratamento existentes e em efluentes de filtros lentos (ensaios em escala-piloto), em que pese a boa eficincia do processo na remoo; uma elevada densidade nos esgotos sanitrios e em fezes de animais contaminados; alm de uma considervel prevalncia nas fezes de um contingente populacional urbano estudado. O estudo traz evidncias do expressivo risco sade humana representado pelos protozorios no ambiente e rene inditas informaes para subsidiar avaliaes de riscos sade, sobretudo na perspectiva de validao das premissas adotadas pela Portaria No 518/2004, sobre potabilidade da gua. Palavras-chave: Cryptosporidium; Giardia; gua; filtrao; fezes. Summary The presence of protozoa in drinking water is recognised as an important public health hazard in many countries; nevertheless the knowledge about this issue in Brazil is still sparse. In this regard, this paper gathers information that help to explain the environmental circulation and epidemiological importance of Giardia and Cryptosporidium (oo)cysts, including: their occurrence in surface water (source water), sewage, human and animal faeces; their occurrence in commercial crops; the evaluation of protozoa removal by water treatment; and presence in filtered effluents. High protozoa concentration in source waters were found, as well as its presence in filtered effluent of existing water treatment plants and pilot slow sand filters, regardless of a general high removal efficiency. Protozoa cysts and oocysts were also found, in high densities, in wastewater and in faeces of contaminated animals. In addition, a relatively high prevalence in faeces of an urban population studied. The study shows evidence of the expressive human health risk represented by the occurrence of this protozoa in several environments and brings unpublished information to strengthen health risk evaluation, and the discussion about the validation of premises adopted in the Brazilian drinking water guidelines (Decree No 518/2004). Key words: Cryptosporidium; Giardia; water; filtration; faeces.
* Pesquisa demandada por meio de edital e apoiada com recursos do projeto Vigisus, Secretaria de Vigilncia em Sade/Ministrio da Sade. Endereo para correspondncia: Av. Contorno, 842, 7 andar, Belo Horizonte-MG. CEP: 30110-060 E-mail: heller@desa.ufmg.br

[Epidemiologia e Servios de Sade 2004; 13(2) : 79 - 92]

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Cryptosporidium e Giardia: circulao no ambiente e riscos sade

Introduo Giardase uma doena reconhecidamente associada com guas de abastecimento para consumo humano. Recentemente, principalmente nos Estados Unidos da Amrica (EUA), surtos de criptosporidiose tambm vm sendo relacionados com essa via de transmisso.1,2 Em que pesem as incertezas quanto aos riscos reais de sade impostos pela presena de reduzidas densidades de protozorios em guas tratadas, as evidncias disponveis tm concentrado novas atenes no caso, de Cryptosporidium e reacendido outras no caso, de Giardia quanto necessidade de se aprofundarem os conhecimentos sobre as fontes de contaminao, a distribuio de protozorios em mananciais de abastecimento e a eficincia de remoo desses organismos pelos processos de tratamento. 2 Considervel ateno e recursos tm sido direcionados para esclarecer a epidemiologia dessas doenas e limitar a propagao desses organismos.3-5 O registro de surtos de doenas transmitidas pela gua devido a protozorios e outros agentes etiolgicos tm aumentado nos EUA, nos ltimos 20 anos, mesmo com regulamentos e medidas cada vez mais restritivos. Durante o perodo de 1971 a 1985, 502 surtos, provocando 111.228 casos de doenas, foram reportados pelo Centers for Disease Control and Prevention (CDC) e pela United States Environmental Protection Agency (USEPA). Desses surtos, 92 (18,3%), envolvendo 24.365 indivduos, foram atribudos ao protozorio parasita Giardia lamblia, transformando-o na causa identificvel predominante das doenas transmitidas pela gua. Vale ressaltar que em apenas 50% dos casos foram identificados os agentes responsveis.3 O primeiro relato sobre surto de criptosporidiose em humanos devido ao abastecimento de gua ocorreu em San Antonio, no Texas, em 1984, concomitantemente a um surto de vrus Norwalk. O segundo maior surto norte-americano ocorreu em Carrolton, Georgia, em 1987, onde aproximadamente 13.000 pessoas foram afetadas. Em 1988, em Ayrshire, no Reino Unido, um acidente envolvendo uma ps-contaminao no reservatrio de gua de abastecimento infiltrao de dejetos de bovinos utilizados como fertilizantes , provocou um surto de grande importncia, devido ao nmero de internaes (44,4%), sugerindo, talvez, a presena de uma cepa mais virulenta.3,4,6 Em abril de 1993, ocorreu o maior surto at

ento registrado nos EUA, em Milwaukee, Wisconsin, afetando 400.000 pessoas. Um aumento dramtico na incidncia de criptosporidiose evidenciou que oocistos de Cryptosporidium podem sobreviver aos processos convencionais de tratamento da gua e atraiu muita ateno do meio tcnico-cientfico norte-americano.6-8 Diversos trabalhos tm registrado a presena de cistos de Giardia e oocistos de Cryptosporidium em guas tratadas,9-11 embora, em muitos desses estudos, a maioria dos protozorios no se encontrasse em formas viveis, ou seja, apresentado em formas no infectantes. Exemplo bastante ilustrativo o do trabalho de Smith e colaboradores,5 em que se demonstra a ocorrncia dos protozorios em diversas amostras de guas de abastecimento, submetidas a tratamentos distintos, em diferentes reas do mundo. O estudo releva a importncia do problema, mesmo que no tenha indicado evidncias epidemiolgicas de transmisso, o que pode ser creditado ao no-reconhecimento da doena e/ou infeco, em razo dos procedimentos de vigilncia em prtica.5-12

Os potenciais riscos sade humana decorrentes da presena dos protozorios na gua de abastecimento tiveram sua expresso na Portaria No 518/ 2004, que estabelece os padres de potabilidade da gua.
Cistos de Giardia e oocistos de Cryptosporidium apresentam, respectivamente, dimenses de aproximadamente 8-15 mm e 4-6 mm. So, portanto, potencial e significativamente removveis por filtrao. Apesar de ambos possurem caractersticas similares de sedimentao e filtrao, pelas prprias dimenses, a remoo de oocistos de Cryptosporidium por filtrao algo inferior de cistos de Giardia. Entretanto, Giardia e Cryptosporidium so principalmente o segundo organismos reconhecidamente resistentes clorao e a eficincia da remoo de oocistos por desinfeco ainda pouco conhecida.10 Diversas publicaes9,11,13,14 ilustram, satisfatoriamente, o estado do conhecimento quanto eficincia do tratamento, conforme os itens resumidos a seguir:

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Sistemas de tratamento com filtrao rpida (ciclo completo ou filtrao direta), bem operados e produzindo um efluente com valor < 0,5 UNT (unidade nefelomtrica de turbidez), e sua complementao por desinfeco, podem alcanar um resultado conjunto de remoo e inativao de 3,0 log10 (99,9%) de cistos de Giardia. - Sistemas de tratamento com filtrao lenta, bem operados e produzindo um efluente com <1,0 UNT, e sua complementao por desinfeco, podem alcanar um resultado conjunto de remoo e inativao de 3,0 log10 (99,9%) de cistos de Giardia. - Sistemas de filtrao rpida (ciclo completo ou filtrao direta), bem operados e produzindo um efluente com valor <0,3 UNT, podem alcanar um resultado de remoo de 2,0 log 10 (99%) de oocistos de Cryptosporidium. - Sistemas de tratamento com filtrao lenta, bem operados e produzindo um efluente com valor < 1,0 UNT, podem alcanar um resultado de remoo de 2,0 log10 (99 %) de oocistos de Cryptosporidium. Para a satisfao do grau de risco aceitvel nos EUA (uma infeco anual por 10.000 habitantes),15,16 as concentraes mximas de Giardia e Cryptosporidium deveriam ser, respectivamente, de 7x10-6 cistos/L e 3x10-5 oocistos/L, o que , obviamente, de difcil deteco. Considerando as eficincias usuais esperadas de sistemas de filtrao, de se supor que, mesmo em sistemas otimizados, o incremento da concentrao de protozorios na gua bruta delegue desinfeco, ainda, uma boa parte da responsabilidade pela preveno dos riscos de sade, em que pese a reconhecida limitao da clorao na inativao de cistos e oocistos principalmente de oocistos. De fato, concentraes mais elevadas de protozorios na gua bruta tm sido associadas a concentraes igualmente mais elevadas, ou maior freqncia de deteco, no efluente final. De maneira anloga, variaes sazonais ou elevaes bruscas na densidade de protozorios na gua bruta podem provocar igual resultado na gua tratada10; por isso, o monitoramento da gua bruta visto, em si, como um importante instrumento de controle e vigilncia da qualidade da gua tratada. Nos EUA, intensos programas de monitoramento de guas superficiais vm sendo implementados, sen-

do freqente a ocorrncia de Giardia e Cryptosporidium em faixas de densidades to amplas quanto 0,02-43,0 cistos/L e 0,065-65 oocistos/L, respectivamente.1,10,17,18 Cabe registrar que giardase e criptosporidiose so, reconhecidamente, zoonoses, e que, entre as principais fontes de contaminao de mananciais, encontramse os esgotos sanitrios e dejetos/efluentes de atividades agropecurias. de se esperar que a ocorrncia e concentrao desses organismos nas guas superficiais sejam, provavelmente, maiores nos pases em desenvolvimento e em reas rurais, onde a contaminao da gua por resduos humanos e animais mais acentuada. No Brasil, embora as informaes sejam ainda escassas, j foi verificada a ocorrncia desses microrganismos em gua para consumo humano, embora sem evidncia epidemiolgica da doena na comunidade servida.19 Em outro estudo,20 foram detectados oocistos de Cryptosporidium em 2,8% de amostras de fezes diarricas em Alfenas, Minas Gerais, principalmente entre indivduos de 0-6 anos e residentes na rea urbana. Os potenciais riscos sade humana decorrentes da presena dos protozorios na gua de abastecimento tiveram sua expresso na Portaria No 518/ 2004,21 que estabelece os padres de potabilidade da gua. Nesse instrumento, a turbidez assumida como parmetro de natureza sanitria, assumindo-se que baixa turbidez, por um lado, propicia maior eficincia da desinfeco na eliminao de bactrias e vrus e, por outro, indicativa da remoo de (oo)cistos de protozorios pela filtrao. So recomendados reduzidos valores (0,5 UNT) para gua filtrada, com vistas a assegurar a adequada eficincia de remoo de enterovrus, cistos de Giardia spp e oocistos de Cryptosporidium sp em instalaes compostas por filtros rpidos. Os evidentes riscos sade provocados por esses protozorios nas guas de consumo, associados s inmeras lacunas de conhecimento sobre a circulao dos microrganismos no ambiente e o desempenho dos processos de tratamento de gua quanto sua remoo, especialmente no Brasil, motivaram o presente trabalho. Ele sintetiza ampla pesquisa desenvolvida sobre o tema, com financiamento principal oriundo do projeto Vigisus, da Secretaria de Vigilncia em Sade (SVS). Para tanto, empreendeu-se uma varredura da presena dos protozorios em diversos compartimentos ambientais relacionados ao risco de

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transmisso das referidas protozooses: gua bruta de mananciais, gua de consumo tratada por diversos processos, hortalias, fezes humanas, fezes animais e esgotos sanitrios. Metodologia Os protozorios nos diferentes ambientes A pesquisa compreendeu diversos subprojetos, cada qual destinado a avaliar o comportamento dos protozorios em diferentes ambientes, conforme descrito a seguir: - Presena dos protozorios em mananciais Foram monitorados, por um perodo de 12 meses (entre setembro de 2000 e dezembro de 2001), dois mananciais de abastecimento de gua na cidade de Viosa-MG: o manancial 1 (M1), com coleta no reservatrio de acumulao onde a gua captada; e o manancial 2 (M2), junto ao ponto de captao a fio dgua (Tabela 1). Alm da identificao de cistos de Giardia e de oocistos de Cryptosporidium, foram analisados Escherichia coli, coliformes totais, esporos de bactrias aerbias, Clostridium perfringens, demanda bioqumica de oxignio (DBO), demanda qumica de oxignio (DQO), oxignio dissolvido (OD) e turbidez. - Presena dos protozorios em efluentes de instalaes de tratamento de gua em escala real Foi monitorado, pelo mesmo perodo de 12 meses (entre setembro de 2000 e dezembro de 2001), o efluente filtrado de trs estaes de tratamento de gua (ETA) na cidade de Viosa, Minas Gerais. Alm da pesquisa de protozorios, as amostras foram analisadas para os seguintes parmetros: Escherichia coli, coliformes totais, esporos de bactrias aerbias, Clostridium perfringens e

turbidez. As ETA apresentam as caractersticas indicadas na Tabela 1. - Remoo de protozorios em instalaes de tratamento em escala-piloto Ensaios em escala-piloto foram desenvolvidos para avaliar o desempenho da filtrao lenta na remoo dos cistos e oocistos. Para tanto, foram testados em duplicata, empregando gua sinttica, filtros lentos de fluxo descendente e ascendente, com duas taxas de filtrao. Foram analisados os mesmos parmetros auxiliares de controle (indicadores) dos experimentos em escala real. Detalhes da metodologia empregada esto devidamente descritos em trabalho de ps-graduao.22 Neste mesmo projeto, foi investigado o comportamento dos filtros ao longo da profundidade do leito filtrante.23 - Presena de protozorios nos esgotos sanitrios Duas campanhas foram realizadas em amostras coletadas no interceptor de esgotos sanitrios da Bacia do Ribeiro Arrudas, Belo Horizonte, Minas Gerais. Foram coletadas amostras durante duas semanas distintas, uma em perodo no chuvoso e outra em perodo chuvoso. Em cada semana, foram coletadas 15 amostras, compreendendo cinco dias e trs horrios dirios (8h, 14h e 18h30). - Prevalncia de protozorios em fezes humanas Foi realizado estudo de demanda laboratorial por exames parasitolgicos de fezes no Municpio de Viosa-MG, com nfase para o perfil dos indivduos com exames positivos para Giardia. Foram coletadas, durante o perodo de um ano, em cinco laboratrios clnicos da cidade totalizando 50% dos estabelecimentos existentes , informaes sobre todos os exames de fezes realizados. A tcnica utilizada pelos laboratrios para pesquisa de enteroparasitas foi o mtodo de Hoffmann, Pons e

Caractersticas tratament tamento (ETA) monitoradas Gerais. Tabela 1 - Carac tersticas das estaes de tratamento de gua (ETA) monitoradas em Viosa, Minas Gerais. Brasil, set 2000-dez 2001
ETA ETA1 ETA2 ETA3 Manancial/captao M1 - reservatrio de acumulao M1 - reservatrio de acumulao M2 - captao direta Processo de tratamento Ciclo completo filtrao rpida descendente Ciclo completo Filtrao rpida ascendente Ciclo completo filtrao rpida descendente Vazo (L/s) 50 100 100

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Jene (HPJ).24 As variveis recuperadas a partir dos laboratrios compreenderam: endereo, sexo e idade dos pacientes e, quando positivo, os diagnsticos das parasitoses intestinais. A partir dos endereos, foi aplicado questionrio sociossanitrio para levantamento de informaes sobre renda familiar, abastecimento, consumo e acondicionamento de gua e esgotamento sanitrio da residncia, entre outras. O delineamento desse trabalho foi aprovado pelo Comit de tica da Universidade Federal de Viosa (UFV), em que todas as pessoas entrevistadas para preenchimento do questionrio sociossanitrio receberam os esclarecimentos necessrios, inclusive com assinatura de Termo de Consentimento Livre e Esclarecido. Para evitar a identificao dos pacientes, no houve acesso aos seus nomes, apenas a seus endereos, uma vez que a pesquisa se apoiou nas caractersticas dos domiclios e no em questes pessoais que necessitassem ser indagadas aos pacientes. Presena de protozorios nas fezes de animais infectados Visando produzir oocistos para a pesquisa em escala-piloto sobre a filtrao lenta, um bezerro neonato da raa holandesa, que no recebeu colostro da me, foi infectado com Cryptosporidium parvum, inoculando-se uma dose de 5,0x106 oocistos. A liberao dos oocistos pelas fezes foi monitorada, permitindo acompanhar a evoluo dessa produo e os potenciais impactos sobre a sade humana decorrentes da sua liberao no ambiente. Presena de protozorios em hortalias Amostras de alface comercializada em feira livre de Viosa foram coletadas, totalizando 13 amostras. Exames microbiolgicos, inclusive de protozorios, foram realizados, para avaliar o possvel efeito de uso de gua de irrigao contaminada na qualidade das hortalias. Tcnicas analticas

Escherichia coli e coliformes totais tcnica cromognica do substrato definido;25 esporos de bactrias aerbias e Bacillus subtilis, esporos de bactrias anaerbias e Clostridium perfringens tcnica da membrana filtrante, empregando gar nutriente acrescido de azul de tripano para esporos aerbios26 e meios apropriados incubados sob condies de anaerobiose para anaerbios;27 parmetros fsico-qumicos (DBO, DQO, OD, turbidez) essencialmente, as anlises seguiram o disposto no Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater.25 A determinao do OD e da DBO foi realizada com o emprego do mtodo de Winkler (mtodo titulomtrico); a DBO computada a partir da determinao do OD no dia da coleta da amostra e aps a incubao desta por cinco dias, a 20oC; a DQO determinada com a adio de um oxidante qumico (dicromato de potssio), sendo o consumo de oxignio mensurado por espectrofotometria de luz visvel; a turbidez foi determinada pelo princpio da nefelometria, em turbidmetro digital, onde uma clula fotoeltrica mede a quantidade de luz que emerge perpendicularmente a um feixe luminoso que atravessa a amostra. anlises microbiolgicas de hortalias foram realizadas de acordo com a metodologia preconizada pelo Bacteriological Analytical Manual, do Food and Drug Administration (BAM/FDA28) para E. coli e protozorios. Tratamento estatstico dos dados

As tcnicas analticas laboratoriais empregadas para a mensurao dos diversos parmetros de qualidade da gua foram: - cistos de Giardia e oocistos de Cryptosporidium tcnica da concentrao por floculao com carbonato de clcio e enumerao com imunofluorescncia;22,23

A ocorrncia de protozorios nos diversos meios foi analisada com base em estatstica descritiva do resultado do monitoramento: mdia geomtrica e aritmtica, valores mximos e mnimos, mediana, primeiro quartil, terceiro quartil. Quando os dados incluam zeros, a mdia geomtrica era calculada utilizando log10 (y+1), subtraindo, posteriormente, uma unidade da mdia calculada. Para a identificao de diferenas entre as densidades de cistos e oocistos nos mananciais, foi empregado, sempre que cabvel, o teste t para amostras pareadas (dados transformados para log10) e/ou o teste no paramtrico de Mann-Whithney. Estudos de correlao foram realizados para a verificao da associao entre a concentrao de

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parasitas e indicadores fsico-qumicos e bacteriolgicos. Para tanto, a distribuio normal dos dados e sempre que cabvel, de suas variveis transformadas foi verificada de modo a orientar a aplicao mais adequada dos testes estatsticos. Uma vez que a maioria das variveis estudadas, transformadas ou no, no apresentou distribuio normal, a referida associao foi avaliada com o emprego do teste noparamtrico de Correlao de Spearman. Para a avaliao das diferenas de eficincias entre os diversos tipos de filtros lentos testados, empregou-se a anlise no paramtrica de Kruskal-Wallis, por meio do pacote Kruskal, com adaptaes realizadas pelo Prof. Ivan Sampaio [Escola de Veterinria/ Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)] e com verso do Laboratrio de Computao Cientfica da UFMG. Em todas as anlises estatsticas realizadas, consideraram-se como estatisticamente significativos valores que apresentassem p<0,05. Resultados A Figura 1 sumariza os resultados obtidos para a circulao no ambiente dos oocistos de Cryptosporidium; e a Figura 2, os mesmos resultados para os cistos de Giardia. Ressalve-se que so figuras construdas com o mero intuito ilustrativo e facilitador da visualizao das ocorrncias dos protozorios, no refletindo um balano de massas. Duas tendncias gerais chamaram a ateno dos autores: a presena dos protozorios em vrios meios e em fezes humanas e animais, muitas vezes em densidades considerveis; e um certo carter errtico e imprevisvel na sua freqncia e distribuio. Nos mananciais, foram observadas concentraes mdias de Giardia e Cryptosporidium da ordem de, respectivamente, 4-7 cistos/L e 6-20 oocistos/L; nos eventos de pico, foram encontradas concentraes to altas quanto 510 oocistos e 140 cistos por litro. A freqncia de deteco de Giardia e Cryptosporidium foi bem superior no manancial 2 (M2) 92% das amostras positivas para (oo)cistos , comparada s do manancial 1 (M1) 58% e 67%, respectivamente, para cistos de Giardia e oocistos de Cryptosporidium. Alm disso, os resultados indicaram que oocistos de Cryptosporidium apresentaramse em maiores densidades no M2 mais poludo

que no M1 menos poludo e com reservatrio de acumulao (diferena estatisticamente significativa pelo teste t para amostras pareadas; e no significativa pelo teste de Mann-Whitney) o mesmo no se verificando para a Giardia. A concentrao de Cryptosporidium foi superior de Giardia no M2 (novamente, diferena estatisticamente significativa pelo teste t; e no significativa pelo teste de Mann-Whitney), no havendo diferena no M1. H indcios de que, no M2, as concentraes de Giardia possam estar associadas com as de endosporos e com a turbidez; e as de Cryptosporidium, com a turbidez. As ocorrncias de ambos os protozorios associam-se fortemente, entre si. No M1, Giardia associa-se com coliformes e com turbidez; e Cryptosporidium, com turbidez e, de novo, fortemente, com a prpria Giardia. Na Figura 3, so apresentados os resultados da ocorrncia de cistos e oocistos na gua bruta da ETA1 e da ETA2 ambas abastecidas pelo manancial M1 e no efluente filtrado dessas estaes, em que se pode observar a eficincia de remoo de Giardia e Crypstoporidium. Os resultados da ETA3 no so apresentados, pois os protozorios foram totalmente removidos nessa estao. Nas estaes ETA1 e ETA2, a remoo situou-se entre 1 e 4 log (90-99,99%). A maioria dos dados dos efluentes mostrou ampla variao e distribuio no normal e, na ETA1, em geral, a eficincia de remoo foi inferior verificada na ETA2. Associaes entre a remoo de protozorios e os indicadores testados, na grande maioria dos casos, foram pouco ntidas e estatisticamente no significativas. O resultado da concentrao de oocistos no efluente da ETA1, em setembro de 2000 (13,2 oocistos/L), deve ser analisado com cautela, quando observado em conjunto com os demais resultados de gua bruta e filtrada. Na Tabela 2 e na Figura 4, so apresentados alguns dos resultados da pesquisa sobre a eficincia de instalaes de tratamento por filtrao lenta, em escala-piloto. Segundo o teste estatstico de KruskalWallis, tanto para Cryptosporidium quanto para Giardia, taxa de filtrao mais alta implica maior concentrao de (oo)cistos nos efluentes dos filtros de fluxo ascendente, no se verificando diferenas estatisticamente significativas nas comparaes entre os demais arranjos testados. A Figura 4 ilustra a reteno dos oocistos ao longo da profundidade dos filtros descendentes.

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Med. 7.300/100L (0-70.000)

FLA ETA convencional

Med. = Mediana (mnimo-mximo) Prev. = prevalncia de amostra de populao infantil em favelas de Belo Horizonte-MG ETA = estao de tratamento de gua FLA = filtro lento ascendente FLD = filtro lento descendente Nota: os valores correspondem aos oocistos de Cryptosporidium

FLD

Med. 21,5/L (0-330) Med. 7300/100L (0-100.000) Filtrao Direta Ascendente Med. 0/L (0-13,2)

Prev.: 20,1% Med. 0/100L (0-1.000) Med. 0/100L (0-2.300)

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Med. 0/L (0-1,32) Med. 10,0/L (0-510)

Med. 1.700/L

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1,5x1010 oocistos/perodo infeccioso 5,7x109 oocistos/dia (mximo dirio)

Lo Heller e colaboradores

Figura 1 - Dinmica ambiental do Cryptosporidium em Viosa, Minas Gerais. Brasil, set 2000-dez 2001

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Med. 900/100L (0-25.000) FLA FLD ETA convencional Med. 7,0/L (0-130) Med. 900/100L (0-25.000) Filtrao Direta Ascendente Med. 0/L (0-2,7) Med. 0/100L (0-2.000) Med. 0/100L (0-500) Med. 0/L (0-5,5)

Cryptosporidium e Giardia: circulao no ambiente e riscos sade

Med. = Mediana (mnimo-mximo) Prev.1 = prevalncia estimada populao geral Viosa-MG Prev.2 = prevalncia de amostra de populao infantil em favelas de Belo Horizonte-MG ETA = estao de tratamento de gua FLA = filtro lento ascendente FLD = filtro lento descendente Nota: os valores correspondem aos cistos de Giardia

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Prev.1: 2,8% Prev.2: 24,5%

ETA1 ETA1
Med. 5,8/L (0-140) Med. 32.000/L (1.400-220.000)

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Figura 2 - Dinmica ambiental do Giardia em Viosa, Minas Gerais. Brasil, set 2000-dez 2001

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tratament tamento (ETA1) Estao de tratamento de gua 1 (ETA1)

Cryptosporidium - oocistos/L

1000 100 10 1 0,1 0,01 1 2 3 4 Amostra 5 6 7 8 gua bruta gua filtrada

1000 100
Giardia - cistos/L

gua bruta gua filtrada

10 1 0,1

0,01 1 2 3 4 Amostra 5 6 7

tratament tamento (ETA Estao de tratamento de gua 2 (ETA 2)

1000
Cryptosporidium - oocistos/L

1000 gua bruta gua filtrada

Giardia - cistos/L

100 10 1 0,1 0,01 1 2 3 4 5 6 7

100 10 1 0,1 0,01 1 2 3 4 Amostra 5

gua bruta gua filtrada

10

Amostra

Figura 3 - Densidade de oocistos de Cryptosporidium e de cistos de Giardia na gua bruta e filtrada nas estaes ETA1 ETA2 Gerais. 2000-dez tratament tamento de tratamento de gua ETA1 e ETA2 em Viosa, Minas Gerais. Brasil, set 2000-dez 2001

Tabela 2 - Estatstica descritiva de Cryptosporidium sp dos efluentes segundo os tratamentos de filtrao lenta em Viosa, Minas Gerais. Brasil, set 2000-dez 2001
Filtro lentro descendente a ETA Nmero de anlises Mdia (oocistos/100L) Mediana (oocistos/100L) Mnimo (oocistos/100L) Mximo (oocistos/100L) Desvio padro (oocistos/100L) Taxa 6 10 128,000 0,000 0,000 670,000 217,348 Taxa 3 16 195,938 0,000 0,000 2335,000 581,834 Filtro lentro ascendente b Taxa 6 25 166,080 0,000 0,000 1000,000 297,210 Taxa 3 23 13,478 0,000 0,000 200,000 44,041

a) densidade mediana na gua bruta (filtro lento descendente): 7.300/100L b) densidade mediana na gua bruta (filtro lento ascendente): 4.650/100L Nota: Taxa 6 e Taxa 3 taxas de filtrao de 6 m3/m2.dia e 3 m3/m2.dia, respectivamente

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Cryptosporidium (taxa 6m3 / m2.d)

4 dias 2 dias
4 21 1 3321 321 2 321 3 321 321 321 321 321 21 321 3 321 321 321 321 321 321 321

Cryptosporidium (taxa 3m3 / m2.d)

8 dias 2 dias

1 2 3 4 5

1,00E+01

1,00E+02

1,00E+03

1,00E+04 Oocistos

Figura 4 - Variao dos oocistos de Cryptosporidium ao longo da profundidade de filtros lentos em Viosa, Minas Gerais. Brasil, set 200-dez 2001 Nesse estudo remoo dos protozorios em filtros lentos observaram-se associaes estatisticamente significativas entre a concentrao de oocistos no efluente e a presena de Giardia, E. coli, coliformes totais e esporos anaerbios, enquanto o mesmo no se verificou para Bacillus subtilis, Clostritium perfringens, esporos aerbios e turbidez. As mesmas associaes foram observadas para a densidade de Giardia, com a diferena de que, para esporos aerbios, foi demonstrada associao significativa. O microrganismo que apresentou taxas de remoes mais semelhantes s dos protozorios foi o Clostridium perfringens. Taxas de remoo similares, mas em menor magnitude, foram observadas para turbidez, esporos anaerbios e coliformes totais. Na investigao sobre a presena de protozorios nos esgotos sanitrios do Ribeiro Arrudas em Belo Horizonte, identificaram-se densidades de 102 a 104 oocistos/L e de 103 a 105 cistos/L. No se observou um padro de variao diria e semanal dos (oo)cistos nos esgotos sanitrios, mas apenas ligeiro acrscimo nos poucos dias de chuva. No estudo da demanda laboratorial em Viosa, avaliando 3.463 exames parasitolgicos de fezes, encontraram-se 10,6% de exames positivos para G. lamblia, o que, extrapolando-se para a base populacional desse municpio, resultaria em uma prevalncia estimada de 2,8%. A prevalncia de enteroparasitas concentra-se na faixa etria de 1 a 14 anos e em bairros com precria qualidade de vida e infra-estrutura de saneamento logo, na populao de mais baixa renda. Comparando a prevalncia de exames positivos para protozorios intestinais segundo diferentes condies de saneamento, demonstram maior proteo: os indivduos que residem em casas com reservatrio domiciliar de gua para consumo tampado, em relao queles cujas residncias possuem ligao direta da rede; e os indivduos que residem em casas que dispem seus esgotos em rede ou crrego, em relao queles que utilizam fossas. Resultado complementar importante foi obtido em estudo desenvolvido em favelas de Belo Horizonte,29 que comparou trs reas com diferentes condies de saneamento e segundo diversos indicadores de sade de crianas entre um e cinco anos. A presena de protozorios nas fezes e respectiva distribuio apresentada na Tabela 3, revelando elevadas prevalncias nessa populao, quando submetida a condies precrias de saneamento, inclusive sinalizando para um gradiente de risco em funo dessas mesmas condies. Na avaliao da presena de protozorios nas fezes de animal infectado, foi inoculada dose de 5,0 x 106 oocistos de C. parvum no bezerro neonato. Aps 12 dias, houve uma produo global de 1,5 x 1010 oocistos (Figura 5). Finalmente, quanto investigao da presena de protozorios em hortalias, embora, nas 13 amostras de alfaces coletadas em feiras livres de Viosa, tenhamse identificado, em trs delas, organismos patognicos Salmonella sp e Enterobius vermiculares , no foram detectados Cryptosporidium e Giardia.

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4321 4321 4321 4321 4321 4321

21 4211 32 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21
4321 4321 4321 4321 4321 4321

1 2 3 4 5

1,00E+01

1,00E+02

1,00E+03

1,00E+04 Oocistos

Lo Heller e colaboradores

Tabela 3 - Parasitas nas fezes em populao infantil de favelas de Belo Horizonte, Minas Gerais. Brasil, 2003
rea - n(%) ETA Cryptosporidium Positivo Negativo Giardia Positivo Negativo 36 (23,4) 119 (76,6) 38 (24,7) 116 (75,3) 39 (25,7) 113 (74,3) 32 (20,7) 123 (79,3) 45 (29,2) 109 (70,8) 39 (25,7) 113 (74,3) CACE
a

CASE b

SASE c

a) CACE: rea com abastecimento de gua e com esgotamento sanitrio b) CASE: rea com abastecimento de gua e sem esgotamento sanitrio c) SASE: rea sem abastecimento de gua e sem esgotamento sanitrio

25
No de oocistos excretados (106 / ml)

20 15 10 5 0
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

Dias ps-infeco Figura 5 - Evoluo da liberao de oocistos por bezerro infectado

Discusso Os valores mdios de cistos de Giardia e oocistos de Cryptosporidium encontrados nos mananciais de abastecimento apresentam-se, em ordem de grandeza, compatveis com os resultados observados por diversos autores em mananciais poludos, em estudos que tiveram por objeto diferentes pases, como compilado em Bastos et al.30 Entretanto, os valores mximos so bem superiores aos registrados na literatura, prximos aos usualmente detectados em esgotos sanitrios, no presente estudo e noutros realizados em

diversos pases, ainda conforme compilao de Bastos et al.30 As caractersticas de ocupao das bacias de captao ajudam a explicar os resultados de ocorrncia de (oo)cistos de protozorios nos mananciais de abastecimento (bacias desprotegidas, com fortes presses de ocupao urbana e a presena de relativamente intensas atividades agropecurias), que podem ser interpretados como indicativos de que cistos de Giardia e oocistos de Cryptosporidium apresentam padres de ocorrncia similares e fontes comuns de contaminao dos mananciais. Os resultados obtidos permitem, ainda, inferir sobre uma certa

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influncia das chuvas na ocorrncia de protozorios nos mananciais, embora no demonstrvel estatisticamente. No monitoramento de estaes que empregam processos convencionais de tratamento (ciclo completo, filtrao rpida), a pior eficincia de remoo de protozorios verificada na ETA1 pode ser, eventualmente, debitada a reconhecidas deficincias operacionais, mais especificamente deteriorao acentuada dos leitos dos filtros, alm da inadequao da granulometria da areia e da obsolescncia de alguns equipamentos.31 Por outro lado, a melhor eficincia observada na ETA3 (remoo total e sistemtica de protozorios) pode estar associada ao fato dessa estao ser mais recente e, portanto, melhor equipada e controlada. Na maioria dos eventos de amostragem positivos, cistos de Giardia e oocistos de Cryptosporidium foram detectados no efluente filtrado em densidades bastante acima da metas supostamente correspondentes a riscos anuais de infeco de 10-4 32 e do padro de potabilidade europeu de 10 oocistos/ 100L, este ltimo correspondente a um risco de infeco anual da ordem de 10-1. 33 A julgar pelas densidades de cistos e oocistos encontradas no manancial 1 (4,62-140 cistos/L e 2,0-510 oocistos/L), para se manter um nvel de risco de infeco de 10-4, seriam necessrias remoes de Giardia e Cryptosporidium da ordem de 4 a 5 log10.34,35 Contudo, quando cistos e oocistos foram detectados no efluente filtrado, a remoo verificada oscilou entre 1 e 3 log10. Em sntese, na etapa de avaliao da presena dos protozorios no efluente filtrado das ETA, pode-se inferir que os resultados so indicativos da eficincia potencial dos processos de filtrao rpida na remoo de protozorios. Entretanto, esses mesmos resultados revelam a necessidade de otimizao e rigoroso controle dos processos unitrios de tratamento. Nos estudos em escala-piloto, observa-se que a filtrao lenta um processo altamente efetivo na remoo de oocistos de Cryptosporidium, bem como de cistos de Giardia, sendo a taxa de filtrao, aparentemente, uma varivel de controle importante. Os filtros ascendentes de baixa taxa de filtrao destacaram-se pela sua estabilidade, apresentando as menores concentraes no efluente. Mesmo quando submetidos a condies operacionais extremas alta taxa

de filtrao, gua bruta com alta turbidez e alta densidade de oocistos , o processo manteve-se eficiente e estvel quanto qualidade da gua tratada. Em linhas gerais, o estudo de demanda laboratorial em Viosa e o realizado em populao infantil de favelas de Belo Horizonte evidenciam a circulao de protozorios entre populaes de baixa renda, por vezes com elevada prevalncia. Os resultados da inoculao de oocistos de Crytosporidium em bezerro neonato confirmam o potencial de risco oferecido por animais infectados, como transmissores da doena, para a contaminao ambiental. A hiptese de transmisso de protozooses via consumo de hortalias no pode ser confirmada com base nos resultados deste estudo. Porm, o pequeno nmero de amostras e a presena de outros organismos patognicos, associados a limitaes analticas, no permitem assegurar a completa ausncia de risco. Em que pesem as limitaes analticas das tcnicas empregadas para a deteco de Cryptosporidium e de Giardia nos diversos meios podendo conduzir a resultados falso-positivos, que no determinam a viabilidade dos microrganismos , a presente pesquisa aponta para elevados riscos potenciais sade humana, decorrentes da presena desses protozorios, coerentemente com o entendimento alcanado em outros pases. Os seguintes resultados corroboram a afirmativa: - elevadas concentraes dos protozorios encontradas nos mananciais; - sua presena na gua filtrada de estaes de tratamento existentes, mesmo quando se emprega o processo convencional completo de tratamento; - presena dos protozorios no efluente de filtros lentos, apesar do elevado grau de eficincia desse processo; - elevada densidade nos esgotos sanitrios, indicando o risco ambiental de utilizao de mananciais que tenham sido contaminados por resduos humanos; - consideravelmente elevada prevalncia de protozorios em fezes humanas; e - explosiva reproduo e eliminao dos oocistos em animais contaminados, atestando o risco ambiental representado pela presena de animais nas bacias dos mananciais.

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Em vista desses resultados, recomendvel: o prosseguimento do monitoramento, no Brasil, da presena dos protozorios nos diversos meios, visando identificar fatores que conduzam sua ocorrncia; o prosseguimento de pesquisas sobre a remoo dos protozorios nos diversos processos de tratamento de guas de abastecimento; o desenvolvimento de pesquisas sobre a remoo dos protozorios nos diversos processos de tratamento de esgotos sanitrios;

a realizao de pesquisas aprofundadas sobre os mais adequados parmetros marcadores da presena dos protozorios em guas naturais e para consumo humano; e a realizao de pesquisas mais aprofundadas sobre a premissa nacional, adotada pela Portaria No 518/2004, e internacional, de emprego do parmetro turbidez como indicao de risco da presena de cistos e oocistos em guas tratadas.

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