Eletroforeses em acetato de celulose Aplicao patologia Hematolgica

BIOQUMICA II
Ctia Matias Dina Matos Joana Alves Miguel Sousa 5 Junho 2012

So compostos anfotricos:
possuem carga negativa, positiva ou nula

consoante o pH do meio envolvente.

Ponto isoelectrico:
Quando as protenas possuem carga nula

em funo do valor de pH do meio

Em meio cido estas comportam-se como bases fracas captando ies H+. Em meio bsico as protenas comportam-se como cidos fracos libertando ies H+.

As protenas estas podem diferir entre elas: - dimenso, - carga eltrica, - pontos isoeltricos. Utiliza-se uma soluo tampo com um pH bsico o suficiente para superar os pontos isoeltricos de todas as protenas, de modo a todas elas ficarem com carga negativa e serem todas atradas pelo nodo. O meio de suporte de acetato de celulose utilizado pelo facto de conter poros suficientemente largos, a fim de permitir a separao das protenas essencialmente pelas suas cargas eltricas.

Protenas totais:
Albumina: sintetizada no fgado Globulinas: sintetizada no fgado e por linfocitos

Funes: - transporte - manuteno da presso coloidosmtica - tamponamento de pH - imunidade humoral - atividade enzimtica - coagulao - resposta da fase aguda

Electroforese de zona ou de suporte : neste caso realizada em Acetato de celulose Mtodo muito antigo mas muito utilizado em patologia clnica

Simples e fcil de usar

Pode ser lido por densitometria densitmetro

pH > pI protena com carga negativa migra para o plo positivo

pH <pI protena carga positiva migra para o plo negativo

Velocidade de Migrao inversamente proporcional ao peso molecular e directamente proporcional carga elctrica Tampo utilizado pH = 8,9 superior aos pI de todas as protenas do soro, logo: estas migram para o plo positivo.

A visualizao dos resultados de uma electroforese feita atravs da utilizao de uma colorao especfica.
No nosso trabalho prtico foi utilizada a soluo de colorao Ponceau S.

Os resultados de electroforese podem tambm ser visualizados mediante a utilizao de aparelhos especficos como o densitmetro, e podem ser tambm ser exibidos atravs de grficos como o cas.o dos protenogramas.

yy

Alb.

--------------------------------------------------- sentido da corrida de separao

Separao baseada na carga das molculas. Protenas so compostos anfotricos Dependendo do pH do meio vo apresentar carga elctrica, e, funo dessa carga, conseguimos a separao por migrao electrofortica. S a Albumina corresponde a um s tipo de protena, dentro das outras poderemos ter diferentes tipos de proteinas.

yy

Alb.

--------------------------------------------------- sentido da corrida de separao

Separao baseada na carga das molculas. Protenas so compostos anfotricos Dependendo do pH do meio vo apresentar carga elctrica, e, funo dessa carga, conseguimos a separao por migrao electrofortica. S a Albumina corresponde a um s tipo de protena, dentro das outras poderemos ter diferentes tipos de proteinas.

Existem dois tipos bsicos de suportes: os suportes de gel e os suportes de papel.

A electroforese de hemoglobina provavelmente o mtodo laboratorial mais til para a separao e medio de hemoglobinas. Atravs da electroforese, d-se a separao de diferentes tipos de hemoglobinas, formando-se uma srie de bandas coradas.

Nos testes e anlises s hemoglobinas pretende-se em muitos casos medir a quantidade de Hb A, detectar hemoglobinas anormais, auxiliar o diagnstico de talassemia , anemia falciforme, entre outras.

As protenas plasmticas podem ser separadas por electroforese em duas fraces principais, sendo uma delas a fraco correspondente albumina e a outra constituda por globulinas, as quais se diferenciam da albumina por apresentarem maior tamanho e maior peso molecular.

A fraco globulnica uma mistura muito complexa sendo dividida em 5 fraces: -alfa 1 -alfa 2 -beta 1 -beta 2 -gama globulinas

Fracionamento normal

2 1

Albumina

Aumento de 1 e 2 globulinas Ocorrncia: Processo inflamatrio agudo

Infeces bacterianas
Leses de tecidos Insuficincia cardaca Coma

Fracionamento normal

2 1

Albumina

Aumento de 2 e globulinas Ocorrncia: Processo inflamatrio crnico

Infeces crnicas
Malignidades Doenas auto-imunes

Fracionamento normal

2 1

Albumina

Fuso das fraes beta e gama

Fuso -

Ocorrncia: Cirrose heptica