1 Pg = 1,000,000,000,000 kg 1

CO2 na atmosfera/ano (bilhes de toneladas)

200

Respiracao

10

Fosseis Microbios

0.1 1

Vulcoes
Outros CaCO3
2

Fixao/liberao de C
Produo 1: converso de C inorgnico a C orgnico (fungos e bactrias que decompem MO) Respirao/decomposio/combusto retorna C a atmosfera Fixao > que consumo (respirao) = acmulo de C orgnico Fixao < que consumo (respirao) = declnio das populaes Fixadores: fotossintetizantes, oxidantes/redutores de S, Fe, etc. Relaes trficas: C e Energia transferidos (10%) Decomposio de MO vegetal depende da: T, pH, natureza qumica, condies ambientais, [O2], etc.

(ppm)

Microrganismos e o aquecimento
Aumentos das temperaturas: decomposio mais rpida (> emisso de CO2 que incorporao fotossntese) O degelo das capas polares pode estar trazendo de volta vida formas virulentas de microrganismos que estavam dormentes no gelo O aumento da agropecuria - CH4 (archaea, protozorios, leveduras, etc.) que vivem no estmago de ruminantes como ovelhas, gado, bfalos, camelos, etc. CH4 absorve 20% a mais de calor que CO2 Produo de vacina para reduzir a emisso de CH4 Aumentos das temperaturas aumentam as reas biogeogrficas de micrbios infecciosos: malria, dengue, febre amarela, viroses, etc. Alterao temperatura da gua dos oceanos: dinmica microbiana reas de tundra e do rtico esto com T mais elevadas, aumentando a produo de CH4 (Archaea metanognicas)

Formas de atenuar o problema

Fertilizar os oceanos com Fe e P para aumentar as populaes de algas (fitoplncton) e outros microrganismos como Prochlorococcus e Synechococcus que absorvem quantidades enormes de CO2 Utilizar algas para a extrao de biocombustveis Utilizao de microrganismos geneticamente modificados para aumentar a produtividade de plantas para extrao de leo (biocombustveis) Utilizao de celulose (hemicelulose) para produzir etanol via aplicao microbiana Sulfolobus solfatarius - archaea Trichonympha sp. - protozorio Trichoderma reesei fungo

O ciclo do Nitrognio

Fixao/liberao de N
5 processos principais ciclam N Fixao Absoro (crescimento dos organismos) Mineralizao (decomposio) Nitrificao Denitrificao

Fixao do N
N2 NH4+ ou NO3Simbiontes como Rhizobium + legumes, Frankia + Alder, etc.: N em troca por carboidratos e ambiente favorvel Fixadores de vida livre (ambientes aquticos principalmente): Cyanobacteria, Azotobacter, Clostridium Fogo, lava, queima de combustveis fsseis Processo Haber-Bosch

10

Absoro do N
NH4+ N orgnico NH4+ rapidamente incorporado em protenas e outros compostos nitrogenados orgnicos pelas plantas ou organismos do solo

11

Mineralizao do N
N orgnico NH4+ Decomposio: N orgnico transformado em N inorgnico (NH4+) por fungos e bactrias - actinomicetos, fungos e bactrias modificam o N da MO de NH3+ a NH4+ Esse NH4+ usado por plantas ou transformado a NO2- e NO3- via nitrificao

12

Nitrificao
NH4+ Nitrossomonas NO2- Nitrobacter NO3Bactrias transformam amnio a nitrato ganhando energia Ocorre apenas em ambientes aerbicos NH4+ se adsorve as partculas de solo com carga negativa NO3- lixiviado com reduo da fertilidade do solo e contaminao do lenol fretico

13

Denitrificao
NO3NO2NO N2O N2 Processo anaerbico feito por bactrias denitrificadoras N2O um gs de efeito estufa Esta a nica transformao que remove N dos ecossistemas (irreversvel) e faz o balano do ciclo do N

NO3- = nitrato NO2- = nitrito NO = nitrxido, xido ntrico, monxido de N N2O = xido de dinitrognio (gs do riso)

14

Atividades humanas

Queima de florestas e de combustveis fsseis colocando N na atmosfera Fertilizao qumica e lixiviao (NO3- e cnceres metahemoglobinemia: sndrome do beb azul) Criao de animais com produo de NH3+ que pode entrar nos corpos dgua e no solo Derrame de excrementos em corpos dgua Mudana da composio vegetal dos ecossistemas (reduo da diversidade) Formao de cido ntrico (HNO3) responsvel, junto com dixido de enxofre (SO2), pelas chuvas cidas Altas concentraes de xidos de N so precursores do oznio da troposfera, o qual causa dano aos tecidos vivos (NO e N2O) Altas concentraes de N nos rios causando eutrofizao, reduzindo a diversidade dos ecossistemas aquticos

15

Fsforo
O fsforo essencial para plantas e animais na forma dos ons: PO43- (fosfato) HPO42- (ortofosfato)

Faz parte de molculas: cidos nuclicos (DNA) energticas (ATP e ADP) clulas lipdicas da estrutura do corpo de animais como fosfato de clcio (ossos, dentes, etc.) na fotossntese transporte de nutrientes
16

Fsforo
Trs formas principais de fsforo: Fsforo orgnico: na matria viva, plantas, microrganismos, etc. Fsforo solvel: disponvel (orgnico bem como HPO42-). Menor proporo de P do solo Fsforo adsorvido: indisponvel (anionicamente ligado a ctions de Al, Fe e Ca)

O ciclo do fsforo tem 2 componentes principais que ocorrem em diferentes escalas de tempo:
No componente local ele cicla nos ecossistemas em tempo ecolgico Nos sedimentos ele faz parte da poro classificada em tempo geolgico. Somente ser mobilizado milhes de anos mais tarde

17

O ciclo do Fsforo

18

Microbiologia da gua

19

20

+ morna - densa

+ fria + densa

Fonte: Microbiologia de Brock; Madigan et al., 2004

21

Estimativas do nmero total nos oceanos: 1,3 x 1028 Archaea 3,1 x 1028 Bacteria

Fonte: Microbiologia de Brock; Madigan et al.,22 2004

Microbiologia da gua potvel

Poluio Febre tifide (Salmonella typhi) Hepatite A (rotavirus) Shigelose (Shigella spp.) Gastroenterites (Salmonella) Clera (Vibrio cholerae) Disenteria (Entamoeba histolytica) Disenteria (Giardia lamblia) Potabilidade: livre de microrganismos patognicos e de substncias qumicas nocivas

23

Poluentes

Possvel fonte

Efeitos adversos

Fsicos
Asbestos Argila suspensa Resduos industriais Precipitao Cncer Interfere com tratamentos sanitrios Vrias doenas Diarrias Metemoglobinemia Reteno de fluidos Doenas do corao Vrias doenas Cncer

Qumicos
Metais pesados Sulfatos Nitratos Sdio Pesticidas Clorofrmio Indstrias Algicidas e minas Fertilizantes Amaciantes de gua Agricultura Indstria

Biolgicos
Bactrias Fezes e urina Febre tifide Shigeloses Salmoneloses Gastroenterites Tularemia Leptospirose Hepatite Poliomielite Gastroenterites Disinteria ambica Giardase Balantidase

Vrus

Fezes

Protozorios

Fezes

24

Ac. hipoclrico Ac. hidroclrico

25

Mtodos de deteco da qualidade microbiolgica da gua

Microrganismos indicadores da qualidade da gua Qual o indicador ideal?
til para todos os tipos de gua sempre presente nos lugares onde esto os patgenos entricos sobreviver na gua mais tempo (ou igual) que os patgenos entricos no se reproduzir na gua contaminada (algumas vezes se reproduz) o teste de deteco deve ser especfico e sensvel o teste de deteco deve ser de fcil execuo o indicador deve ser no patognico (nem sempre) o nvel do indicador na gua contaminada deve ser proporcional ao grau de poluio fecal
26

Escherichia coli e outros coliformes

Bactrias bastonetes Gram -, que fermentam a lactose (lac+) com produo de cido e gs dentro de 24/48 h a 35/37C
Escherichia coli: coliforme fecal Klebsiella pneumoniae: coliforme fecal Clostridum perfrigens: coliforme fecal

27

Metodologia de execuo
Anlise bacteriolgica da gua
Metodologia: teste presuntivo (caldo lauril triptose) detectar a presena de coliformes na gua teste confirmativo (caldo lactosado com bile e verde brilhante) bile inibe crescimento de no entricas enquanto o verde brilhante inibe crescimento de Gram + confirmar presena de coliformes na gua teste completo (EC e placas Mac Conkey) 44o C para E. coli confirmar a presena de coliformes na gua Metodologia de filtragem e plaqueamento Metodologia de incubao com kits especficos

28

Microbiologia dos alimentos

29

Composio microbiana dos alimentos

Microbiota prpria ou adquirida com o manuseio

Frutos:
Leveduras na casca das uvas - fermentao para fabricao do vinho pH 2,3-5,0 - baixa incidncia de bactrias

Carnes:

Corte e manuseio - bactrias proteolticas, lipolticas, fungos Ocasionalmente patgenos: Clostridium perfringens, Staphylococcus aureus

Leite:

Microbiota caracterstica do ambiente Bactrias como pseudomonas, bactrias do cido ltico, leveduras, coliformes, esporulantes Infeces: Mastite Outros patgenos: Mycobacterium, Brucella, Salmonella, Coxiella

30

Composio microbiana dos alimentos

Principais processos de deteriorao de alimentos por microrganismos
Rano:

Alimentos ricos em gordura Microrganismos lipolticos, principalmente bactrias Quebra das gorduras cidos graxos

glicerol

Putrefao:

Alimentos ricos em protenas (p. ex. carnes) Bactrias proteolticas Protenas putrescina, cadaverina, H2S, NH3

Azedamento e coagulao:

Leite Bactrias do cido ltico Lactose cido ltico + outros cidos

31

Microorganismos e a deteriorao
Fatores envolvidos na deteriorao Fsicos: luz, temperatura, presso osmtica, presso hidrosttica Qumicos: pH, O2 Biolgicos: insetos, microorganismos, roedores O que causa a deteriorao
Microorganismos A ao das enzimas contidas nos alimentos A infestao por insetos, parasitas e roedores Temperaturas inapropriadas para a conservao Ganho ou perda de umidade Reao com o O2 Luz Estresse fsico ou abuso Tempo
32

4. Controle dos microrganismos em alimentos

1. Frio (refrigerao e congelamento)
Refrigerao (4 a 10 C): paralisao crescimento Congelamento (- 20 C): ausncia de gua, formao de cristais

2. Secagem: sol, cmaras, liofilizao

alimentos perdem gua, provocando a inibio do crescimento (metabolismo inibido)

3. Concentrao: aumento da concentrao de solutos

aumento da presso osmtica

4. Acidificao
pH do alimento

33

4. Controle dos microrganismos em alimentos

5. Conservas
Alta temperatura

6. Radiaes
Radiao ionizante: raios gama (remoo de e- ou tomos da molcula)

7. Aditivos
Microbicidas x microbiostticos

* inorgnicos: - H2S, NO3-, NO2* orgnicos: - cido ascrbico: laticnios, sucos - benzoato de sdio: refrigerantes - propionato de clcio: pes

34

4. Controle dos microrganismos em alimentos

8. Pasteurizao
63C por 30 min (LTLT: low temperature long time) 72 C por 15 s (HTST: high temperature short time)

9. Esterilizao
UHT (ultra-high temperature): 150 C por 1-2 s

35

Alimentos preparados com o uso de microrganismos

Alimento
Picles

Matria prima
Pepinos

Principal Microrganismo
Lactobacillus spp. Pediococcus spp.

Grupo
Bacilos, Gram + Cocos, Gram +

Leite fermentado
Po Ricota Koumiss Kefir

Leite
Farinha Leite pasteurizado Leite de gua Leite fresco,

L. acidophilus
Saccharomyces cerevisiae L. bulgaricus L. bulgaricus Torula, Mycoderma Streptococcus spp. Lactobacillus spp. Leuconostoc Acetobacter L. bulgaricus S. thermophilus

Bacilos, Gram +
Levedura Bacilos, Gram + Bacilos, Gram + Leveduras Cocos, Gram + Bacilos, Gram + Cocos, Gram + Bacilos, Gram Bacilos, Gram + Cocos, Gram +

Ioogurte

Leite pasteurizado

Shoyu

Arroz, Soja

L. delbrueckii Aspergillus oryzae Sacharomyces rouxii

S. lactis S. cremoris L. citrovorum L. dextranicum Outros microrganismos Saccharomyces spp. Saccharomyces cerevisiae Sacch. champagnii Pediococcus cerevisiae

Bacilos, Gram + Fungo filamentoso Levedura

Cocos, Gram + Cocos, Gram + Bacilos, Gram + Bacilos, Gram + Fungos Leveduras Leveduras Cocos, Gram +

Queijos

Leite

Cerveja Vinho Presunto e salsichas curados

Gros de cereais Suco de uva Porco/Gado

Presunto curado

Porco

Aspergillus, Penicillium

Fungos

36

Microorganismos na produo de alimentos

Fermentao de produtos lcteos Iogurte Fermentao da lactose a cido ltico Lactobacillus delbrueckii subsp. delbrueckii Streptococcus salivarius subsp. thermophilus Lactococcus thermophilus Lactobacillus bulgaricus Leite fermentado Lactobacillus casei, Bifidobacterium breve Activia: Bifidobacterium animalis subsp. animalis Manteiga Streptococcus cremoris, Leuconostoc cremoris e Lactobacillus lactis Queijo Lactococcus. Lactobacillus, Streptococcus Propionibacterium queijo Suo Penicillium queijo camembert, roquefort, brie
37

Microorganismos na produo de alimentos

Fermentao de carnes Embutidos produzidos por bactrias do cido ltico, em particular Pediococcus cerevisae Produo de pes Pes Saccharomyces cerevisae, Clostridium spp. e bactrias coliformes podem ser empregados Bebidas alcolicas Cervejas: produo de 50 bilhes de litros por ano usando Saccharomyces cerevisae, S. carlsbergensis Vinho: fermentao usando S. ellipsoideus Vinagre: fermentao a lcool (S. cerevisae) e em seguida a cido actico (Acetobacter e Gluconobacter) ou converso direta a acetato (Clostridium spp.)
38

Microorganismos na produo de alimentos

Vegetais fermentados Azeitonas Leuconostoc Molho de soja Aspergillus oryzae Pediococcus soyae Saccharomyces spp. Torulopsis spp. Lactobacillus spp. Miso Aspergillus oryzae Tempeh Rhizopus spp. Tofu Mucor spp.
39

Doenas de origem microbiana veiculadas por alimentos

Categorias de doenas

* intoxicaes
- microrganismo ausente nos tecidos - ingesto da toxina ativa

* infeces - ingesto do alimento contaminado pelo patgeno - microrganismo presente nos tecidos

40

Intoxicaes

a. Intoxicao estafiloccica Staphylococcus aureus tem vrias toxinas (febres, doenas do trato respiratrio, etc.) b. Clostridium perfringens enterotoxina produzida no intestino - disenterias c. Botulismo Clostridium botulinum: bactria anaerbia, produtora de endsporos (exotoxina) metaloprotease do sistema neurotransmissor

41

Infeces

a. Salmoneloses, Febre tifide e Febres paratficas Salmonella sp.: S. thyphimurium: espcie mais comum S. typhi: febre tifide
b. Escherichia coli Escherichia coli enterotxica Linhagem mais comum: E. coli O157:H7 c. Infeco por Campilobacter Campylobacter jejuni e C. fetus diarrias, disenterias, abortos

42

Microbiologia do ar: diversidade, disseminao e controle

43

Tipos de microrganismos no ar

Algas Protozorios Fungos em geral Bactrias

44

Fatores que afetam a microbiota do ar

umidade temperatura radiao densidade populacional

45

Tipos de microrganismos no ar
principais tipos:
esporos de fungos
p. ex. Cladosporium, Aspergillus, Penicillium

bactrias esporulantes vrus

46

 Doenas do homem e dos animais

inalao de poeira ou gotculas contendo propgulos, provenientes de:
pessoas infectadas (diretamente)
outras fontes: roupas, cama, solo

aerossis infeces respiratrias: secrees nasais, garganta

47

Mtodos de avaliao da microbiota do ar

Sedimentao teste da placa aberta Impacto:
crivo furo

Filtrao
48

Impacto - Furo

Amostrador de Andersen - 1 estgio

49

Controle das populaes microbianas do ar

filtrao: filtros HEPA (high efficiency particulate air) radiao

desinfetantes/esterilizantes
50

Controle das populaes microbianas do ar

filtrao: filtros HEPA

radiao
desinfetantes/esterilizantes

51

Controle das populaes microbianas do ar

filtrao: filtros HEPA

radiao
desinfetantes/esterilizantes:
Oxido de etileno Anthium dioxide
52

Interaes ParasitaHospedeiro
53

PARASITA

mecanismos de infeco

mecanismos de defesa

HOSPEDEIRO

Resistncia

Susceptibilidade

54

Mecanismos de infeco (fatores de virulncia) Definies

* patogenicidade: habilidade de produzir uma infeco * infeco: colonizao de um organismo por alguma espcie externa * doena: detrimento do organismo infectado * virulncia: capacidade relativa do patgeno de causar doena

* fatores de virulncia: toxinas, enzimas, etc.

55

Requisitos para doena

56

Toxinas

* exotoxinas: liberadas extracelularmente

natureza qumica: - protenas - afinidade por tecidos especficos - sensveis ao calor

Enzimas citolticas = lise Enzimas A-B = duas subunidades Toxinas que atuam como superantgenos = estimulam clulas de resposta imune (inflamaes) - Corynebacterium diphtheriae - Clostridium tetani (neurotoxina) - Vibrio cholerae (enterotoxina)

57

Ao da toxina diftrica de Corynebacterium diphtheriae

(a) O fator de elongao 2 (EF-2) normalmente se liga ao ribossomo, conduzindo um tRNA carregado com um aminocido ao ribossomo, promovendo a elongao protica. (b) A toxina diftrica liga-se membrana celular, onde clivada e o peptdeo A internalizado. O peptdeo A modifica o fator de elongao 2 (EF-2*) que deixa de auxiliar na transferncia de aminocidos para a cadeia polipeptdica em crescimento, resultando na interrupo da sntese protica e morte celular.
Fonte: Microbiologia de Brock; Madigan et al.2004 58

Ao da toxina tetnica de Clostridium tetani

Fonte: Microbiologia de Brock; Madigan et al.2004 59

Glicolipdio complexo = gangliosdio

Ao da toxina colrica Enterotoxina

Fonte: Microbiologia de Brock; Madigan et al.2004 60

Toxinas

* endotoxina: liberada aps a lise da clula do patgeno (membrana lipopolissacardica) - toxinas de Salmonella, Escherichia coli menos txicas que as exotoxinas diminuem leuccitos, linfcitos, plaquetas protenas pirognicas: liberao de pirogenios diarria

inflamao generalizada
mortes: choques hemorrgicos e necrose dos tecidos
61

Mecanismos externos de defesa

Barreiras fsicas:
pele mucosas cutcula e ceras das plantas parede celular pelos clios das clulas epiteliais

Barreiras qumicas
ANIMAIS
cido ltico (pele) cidos graxos (suor) Enzimas (ex. lisozima da lgrima) Sebo (glndulas sebceas) Suco gstrico (HCl + enzimas + muco) Lactoferrina no leite e nas mucosas (quelante de Fe) Transferrina no soro sanguneo (idem)

62

Mecanismos externos de defesa

Barreiras qumicas
PLANTAS
Fitoalexinas (compostos fenlicos) pH da seiva Saponinas, glicosdeos e cianognicos cido saliclico

Barreiras biolgicas: microbiota da pele superfcie das folhas rizosfera

63

Mecanismos internos de defesa

Inflamao: reao vascular e celular para inibir a invaso causada por histaminas liberadas pelas clulas danificadas limitao da disseminao do patgeno: formao de cogulos ao redor do local afetado ps (clulas fagocitrias mortas pelas leucocidinas da bactria) Febre: - resposta sistmica geralmente devida a bactrias e vrus - aumento da produo de calor metablico provocado por alteraes no hipotlamo *causadores: endotoxinas, pirogenio

- funo da febre: aumentar a atividade de fagcitos e a velocidade das respostas inflamatria e imune.
64

Mecanismos internos de defesa

Clulas fagocitrias (leuccitos) glbulos brancos

Fagocitrios neutrfilos

moncitos e macrfagos

Fagcitos tem elementos bactericidas como proteases, fosfatases, nucleases, lipases

No fagocitrios

linfcitos (sistema imune clulas T e B)

65

Mecanismos internos de defesa

Defesa celular

Ingesto e morte

Produtoras de anticorpos

66

Mecanismos internos de defesa

* mecanismo de fagocitose - adeso - pseudpodos (projees) - ingesto - fagossoma (fuso das membranas - vacolo) - ao dos lisossomas - grnulos com enzimas digestivas que se fundem ao fagossoma - digesto do microrganismo (fagolisossoma) pH 3,5 - 4,0 lisozima outras enzimas hidrolticas aumento da respirao - diminui O2: produo de radicais - superxido - perxido morte do microrganismo 10-30 min depois
67

Lisossomo + macrfago = fagolisossoma

Radicais hidroxil

Anions superxidos cido hipocloroso

S. aureus + carotenides

xido ntrico Perxido de hidrognio

Fonte: Microbiologia de Brock; Madigan et al.2004 68

Mecanismos internos de defesa

Clulas natural killers (linfcitos no especficas) e clulas Tc (citotxicas)

69

Mecanismos internos de defesa

4.2.5. Respostas imunolgicas

* antgenos: protenas, nucleoprotenas, lipoprotenas, polissacardeos e qualquer outra substncia que propicie a formao de: * anticorpos: protenas produzidas pelos linfcitos em reposta presena de um antgeno

Clulas T

Clulas B
70

SISTEMA COMPLEMENTO

Srie de protenas ativadas por interaes

com complexos antgeno-anticorpo,

causando danos e lise s clulas estranhas

Certos antgenos recrutam essas protenas

71

C
protena do complemento

Anafilatoxinas
Fonte: Microbiologia de Brock; Madigan et al.2004

72

Controle do Crescimento Microbiano

73

1. Introduo
1.1. Quais os principais fatores limitantes para o crescimento microbiano? Temperatura pH Disponibilidade de H2O Disponibilidade de O2

Alguns Conceitos Importantes - Esterilizao morte ou eliminao de todos os organismos viveis presentes em um meio de cultura

- Descontaminao tratamento de um objeto ou superfcie de modo a torn-los seguros manipulao

- Desinfeco direcionada contra os patgenos, embora possa no eliminar todos 74 os microrganismos

Condies que Afetam a Atividade de um Agente de Controle Microbiano

* tamanho da populao

* intensidade ou concentrao do agente

* tempo de exposio * temperatura do ambiente * natureza do meio: umidade, pH... * tipo de microrganismo
75

Influncia do Tamanho Inicial da Populao sobre a Efetividade de um Agente de Controle

76

3. Tipos de Agentes de Controle e Mecanismos de ao 3.1. Controle Antimicrobiano por Agentes Fsicos
- Esterilizao pelo calor

- Esterilizao por radiao

- Esterilizao por filtrao

3.2. Controle Antimicrobiano por Agentes Qumicos

- Agentes qumicos de uso externo

3.3. Agentes Antimicrobianos Utilizados in vivo

3.3.1. Frmacos antimicrobianos sintticos

3.3.2. Antibiticos
3.3.3. Frmacos antifngicos: imidazole, triazole 3.3.4. Frmacos antivirais: acicloguanosina, glucanas 77

3.1. Controle Antimicrobiano por Agentes Fsicos

3.1.1. Calor mido

* desnaturao de protenas e enzimas

a) gua fervente (100 C)

b) Sob presso (autoclavagem) 121 C a 1,1 kg cm-2

c) Pasteurizao (63 C LTLT ou 72 C HTST)

78

Medida da Esterilizao pelo Calor

Efeito da temperatura na viabilidade de uma bactria mesoflica

Fonte: Madigan et al., 2004. Microbiologia de Brock

79

Relao Entre Temperatura e Tempo de Morte em Mesfilos e Termfilos

Termfilos

Mesfilos

80 Fonte: Madigan et al., 2004. Microbiologia de Brock

3.1. Controle Antimicrobiano por Agentes Fsicos

3.1.2. Calor Seco

* Oxidao dos constituintes orgnicos * Menor eficincia que o calor mido
a) incinerao: eliminao de contaminantes e cadveres, esterilizao da ala de platina b) forno de Pasteur * 160 C durante 2 h

3.1.3. Baixas Temperaturas

* preservao de alimentos, drogas * inibio das reaes metablicas * formao de cristais de gelo (congelamento) * reduo da gua disponvel
81

3.1. Controle Antimicrobiano por Agentes Fsicos

3.1.4. Radiaes
Energia eletromagntica:

a) ionizante: raios gama, raios-X, feixes de eltrons (remove e- e tomos): * alto poder de penetrao b) no ionizante: * luz ultravioleta: 136 a 400 nm (** 260 nm) * excita os eltrons produzindo vrios tipos de reao: DNA (mais afetado): dmeros de pirimidina * baixo poder de penetrao

82

83

3.1. Controle Antimicrobiano por Agentes Fsicos

3.1.5. Filtrao **

* Membranas de steres de celulose - 150 m de espessura - poros uniformes - dimetro varivel - descartveis
* ex. filtros HEPA (high efficiency particulate air): acetato de celulose dobrado ao redor de folhas de alumnio: retm 99% da matria particulada

84

3.2. Controle Antimicrobiano por Agentes Qumicos

3.2.1. Esterilizantes

a) xido de etileno * ativo contra clulas vegetativas e endsporos * alta penetrao, mas necessita longa exposio * lquido abaixo de 10,8C, acima disso um gs

b) Alquilantes (alquilao de protenas: adio grupo alquil) * -propionolactona * Glutaraldedo * Formaldedo (formol)

85

3.2. Controle Antimicrobiano por Agentes Qumicos

3.2.2. Desinfetantes a) Fenis (cido carblico): * Joseph Lister (1865): efetivo agente antissptico em hospitais * soluo a 5% mata clulas vegetativas, mas no os endsporos

86

3.2. Controle Antimicrobiano por Agentes Qumicos

3.2.2. Desinfetantes b) lcoois * Etlico a 60-85%: mata clulas vegetativas * Desnaturao de protenas * Dissolvem os lipdeos da membrana

87

3.2. Controle Antimicrobiano por Agentes Qumicos

c) Halognios: iodo, cloro, bromo * iodo e compostos relacionados: agente oxidante, combina-se com a tirosina, inativando protenas * cloro: formao de cido hipocloroso liberando radicais de oxignio

d) Metais pesados: chumbo, zinco, prata, cobre, mercrio * combinam-se com protenas, provocando sua inativao
e) Detergentes * desnaturao das membranas

88

Agentes Antimicrobianos Utilizados in vivo

89

3.3. Agentes Antimicrobianos Utilizados In vivo

3.3.1. Frmacos antimicrobianos sintticos
Salvarsan uso do arsnico (interrompe a produo de ATP) Sulfonamidas sintticos com o grupo sulfonamida (cido sulfnico)

3.3.2. Antibiticos - Definio: Agentes antimicrobianos produzidos por microrganismos

(bactrias e fungos) exibindo funo de inibir ou matar outros

microrganismos
90

3.3. Agentes Antimicrobianos Utilizados In vivo

3.3.2. Antibiticos
- Espectro de ao: * Largo espectro (ex: Tetraciclina) * Baixo espectro (ex: Vancomicina)

91

Principais Agentes Antimicrobianos de Procariotos

Antibiticos -lactmicos: * Principais representantes: penicilinas e cefalosporinas * 50% dos antibiticos produzidos mundialmente * Produtores: Penicillium chrysogenum: penicilina Cephalosporium spp.: cefalosporina * Inibem a sntese de peptidoglicano (transpeptidao) * Provocam a liberao de autolisinas: digesto da parede j existente * Espectro: ativos contra bactrias Gram positivas Antibiticos Aminoglicosdeos: * Aminoacares unidos por ligaes glicosdicas * Principal representante: Estreptomicina (produzida por Streptomyces griseus) * Ao: inibio da sntese de protenas (ligao com a subunidade 30S)
* Espectro: ativos contra G- e G+, usados clinicamente contra Gram negativos
92

Principais Agentes Antimicrobianos de Procariotos

Antibiticos Macroldeos:
* Grande anel lactona conectado com acares * Principal representante: Eritromicina (produzida por Streptomyces erythreus) * Ao: inibio da sntese de protenas: combina-se com a subunidade 50S ribossomal * Ativos contra bactrias Gram + e Gram * Usado em substituio penicilina para pacientes alrgicos

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3.3. Agentes Antimicrobianos Utilizados in vivo

3.3.3. Frmacos Antifngicos
* Muitos s podem ser utilizados para aplicaes tpicas (superfcie) * Alguns apresentam toxicidade seletiva: afetam estruturas ou processos metablicos especficos dos fungos * Principais representantes: Polienos (Streptomyces nodosus; S. nursei) Azis (frmacos sintticos)

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3.3. Agentes Antimicrobianos Utilizados In vivo

3.3.3. Frmacos Antivirais Controle de vrus
* a condio de parasita intracelular obrigatrio - ntima ligao com as funes da clula hospedeira - dificuldade de controle

a) Anlogos de Nucleosdeos
* AZT (Zidovudine): bloqueia a sntese de DNA dos retrovrus (transcriptase reversa) * Aciclovir: inibe o alongamento do cido nuclico viral * glucanas: inibe a ligao a superfcie

b) Neviparina: liga-se transcriptase reversa, inibindo sua ao c) Rifampicina: inibe a RNA polimerase
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Teste de Difuso em Discos - Antibiograma

Padres definidos pelo Instituto de Padres Clnicos e Laboratoriais (CLSI)

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Fonte: Madigan et al., 2010

Microrganismos e Biotecnologia

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2. Microbiologia Industrial
2.1. Principais organismos Fungos = leveduras e bolores Actinomycetes = Streptomyces

2.2. Caractersticas dos microrganismos empregados em processos biotecnolgicos: * Crescer in vitro * Crescer em larga escala * No ser fastidioso * Crescer mesmo em condies subtimas * Ser de fcil manuteno * No ser patognico * Ser facilmente manipulvel e geneticamente estvel

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2. Microbiologia Industrial
2.3. Produtos As prprias clulas microbianas: alimentos ou agentes imunizantes (leveduras) Molculas de alto PM: enzimas (glicose isomerase xaropes) Produtos metablitos primrios (produzidos durante a fase exponencial de crescimento): p. ex. vitaminas Produtos metablitos secundrios (produzidos durante a fase final de crescimento): ex. antibiticos, esterides, alcalides, etc.

Produo de qumicos especiais: aspartame, fenilalanina, etc.

Compostos qumicos de convenincia: etanol, cido ctrico, etc.
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2. Microbiologia Industrial
2.4. Processos Produo de frmacos: antibiticos, esterides, insulina Produo de qumicos valiosos: solventes, enzimas Produo de suplementos alimentares: probiticos, etc. Produo de bebidas alcolicas: cerveja, vinho, destilados, etc. Produo de vacinas (principalmente antivirais) Controle biolgico de pragas e doenas: B. thuringiensis, Beauveria, etc.

Uso de microrganismos na minerao e na indstria do petrleo

Biorremediao/fertilidade dos solos: micorrizas, FBN, etc.

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3. Produtos para a indstria alimentcia

3.1. Leveduras como alimento e suplemento alimentar A grande maioria Saccharomyces cerevisae
Produzidas em tanques de fermentao (40 a 200 mil litros) Levedura ativa desidratada: fermentos Levedura nutricional (morta e seca)

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3. Produtos para a indstria alimentcia

3.2. Microrganismos na produo de vinhos Leveduras selvagens e leveduras cultivadas (S. ellipsoideus) Fermentao maloltica (cido mlico) com produo de cido ltico e diacetil (sabor amanteigado): Lactobacillus Pediococcus Oenococcus

3.3. Microrganismos na produo de cervejas

A partir de gros maltados: gros de cevada germinados (enzimas que que digerem o amido convertendo-o em acar) Fermentao:

alta fermentao: leveduras em todo o mosto (ales) S. cerevisae

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baixa fermentao: no fundo do tanque (cervejas claras) S. carlsbergensis

3. Produtos para a indstria alimentcia

3.4. Microrganismos na produo de bebidas alcolicas destiladas
Qualquer produto fermentado pode ser destilado, gerando produtos distintos: Usque: destilado de bebidas maltadas Conhaque: destilado de vinho Rum: destilado de melao Vodca: destilado de gros ou batata Gim: destilado de gros de junpero

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3. Produtos para a indstria alimentcia

3.5. Microrganismos na produo de vinagre lcool etlico cido actico Acetobacter e Gluconobacter Tonel aberto: vinho exposto ao ar (camada limosa de bactrias na superfcie do substrato), pouco eficiente Gotejamento: gotejamento do lquido alcolico em substratos como madeira Borbulhamento: fermentao submersa com aerao 3.6. Cogumelos comestveis Definio da espcie a ser cultivada Mais cultivados: Agaricus bisporus (champignon de Paris) Lentinus edulus (shiitake)
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4. Produtos para a indstria

4.1. Microrganismos na produo de etanol 50 bilhes de litros produzidos anualmente Milho, cana-de-acar, trigo, beterraba, cavacos de madeira, etc.

Celulose a glicose = fermentada a etanol

Saccharomyces, Kluyveromyces, Candida, etc. Solvente industrial e suplemento de gasolina Reduz a emisso de monxido de carbono e xidos de nitrognio Composto energeticamente caro: necessita-se de 25% a mais de E para produzir um litro de etanol do que a energia contida no prprio etanol

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5. Fermentadores industriais
5.1. Fermentaes em larga escala Divididos em: Aerbios: mais complexos, com equipamentos que garantam a homogeneizao e aerao adequadas Anaerbios: mais simples, somente com necessidade de equipamento para dissipao do calor produzido

Fermentadores aerbios: Necessidade de difuso do oxignio no lquido Necessidade de controle de pH, concentrao de O2, temperatura, massa celular, nveis de nutrientes e concentrao do produto Automatizao do processo

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Isolamento e seleo de microrganismos produtores de antibiticos

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108

7. Produtos ligados a sade

7.2. Enzimas

Catalisadores: aceleram atividades bioqumicas

Utilizadas como suplementos nutricionais Produzidas por fungos e bactrias Exemplos: amilases, pectinases, proteases, etc. 7.3. Vitaminas e aminocidos Como suplementos nutricionais: fenilalanina, glutamato sdico, aspartame B12: Sintetizada exclusivamente por microrganismos Essencial a todos os animais Essencial no sangue (hemcias) No produzida por plantas (vegetarianos) Propionibacterium e Pseudomonas Riboflavina: bactrias e fungos (Ashbya gossypii)
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7. Produtos ligados a sade

7.4. Esterides e outras biotransformaes Hormnios animais Utilizados como frmacos Corticosterides: reduzem inflamaes, artrites, etc. Estrgenos e andrognicos: usados na fertilidade humana e ganho de massa muscular

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8. Transformao gentica
7.4. Vacinas Vacinas de DNA: pores especificas do genoma do patgeno ou genes que codificam protenas imunognicas Estes so clonadas em vetor plasmidial ou viral Injeo destes no animal A traduo leva produo de protenas de imunoresistncia Resposta imune pela protena codificada Exemplos: Vacina de HIV Vacina de hepatite B Vacina contra cnceres

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8. Transformao gentica
8.1. Insulina humana - 1 biofrmaco produzido pela engenharia gentica
Microrganismo produtor: Escherichia coli com o gene humano para produo de insulina

8.2. Vacina contra hepatite B (HBV) - 1982 Vrus no cultivvel em laboratrio Microrganismo: Saccharomyces cerevisiae com o gene para a protena
8.3. Hormnio do crescimento humano - somatotropina E. coli recombinante com o gene

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9. Biocontrole
Bacillus thuringiensis

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10. Biominerao
Thiobacillus thioxidans e Thiobacillus ferroxidans cidos oxidao do minrio precipitao

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Identificao de bactrias
1. 2. 3. 4. 5. 6.
7. 8. 9. 10. 11. 12. 13.
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Morfologia Hidrolise do amido (iodo) Motilidade Catalase H2O2 (bolhas) VM: glicose a cidos (VM pH baixo) vermelho tijolo VP: fermentao enolgliclica glicose fermentada a acetona, butilenolglicol e cidos. KOH e naftol formam diacetil (anel vermelho) Citrato: citrato de sdio quebrado pela citrase aumentando o pH Malonato: impede a catalise do cido succnico e o ciclo de Krebs. Sem ciclo de Krebs no h produo de cidos e o pH sobe Fenilalanina: amina da fenilalanina removida produzindo cido fenolpirvico + cloreto frrico (verde) Lisina: descarboxilao dos aminocidos e o pH sobe (prpuro) Indol: triptofanase produzindo cido pirvico e NH3+ baixando o pH H2S: se h produo de H2S esse reage com o Fe do meio e com acidez forma FeSO42- (preto) Uria: urease degrada uria liberando NH3+, CO2 e H2O. NH3+ reage e forma CONH3+ e aumenta o pH (magenta com indicador V fenol)

Identificao de bactrias
14. 15. 16. 17. 18. Reduo de NO3-: nitrato a nitrito (vermelho quando presente) Glicose Lactose Sacarose Maltose

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