Terapia gnica

Amanda Valle Pinhatti

Porto Alegre, outubro de 2012.

Farmacoterapia

Fase Biofarmacutica:
-Formulao farmacutica: Princpio ativo Adjuvantes: diluentes, agentes estabilizantes, conservantes, flavorizantes

-Formas farmacuticas: comprimidos, cpsulas, drgea, injetveis, pomadas, loes,cremes.

Farmacologia
Farmacocintica e Farmacodinmica Relao dose administrada X efeitos no organismo

Novo frmaco
Propriedades fsico -qumicas Propriedades farmacolgicas: -Mecanismo de ao -Atividades metablitos -Velocidade de absoro -Padro de distribuio -Velocidade de eliminao/excreo -Local de ao -Durao ao -Degradao metablica -Concentrao mnima para o efeito -Concentrao mnima de toxicidade

janela teraputica

Viso biomolecular
Sc. XIX- incio gentica- Mendel 1953- estrutura do DNA Watson e Crick 1979 -DNA recombinante 2003- sequenciamento do genoma-Collins. E Craig Venter

Viso biomolecular

Viso biomolecular
Trilhes de clulas individuais no corpo humano

Cada clula produz protenas especficas para uma determinada parte do corpo: hepatcitos, hemcias, neurnios, etc A informao de qual protena produzir passada atravs
dos genes ~ 35.000 genes no Homo sapiens sapiens

Como o DNA transmite informaes?

Os genes influenciam praticamente todas as doenas humanas, seja pela codificao de protenas anormais diretamente responsveis pela doena, seja por determinar suscetibilidade a agentes ambientais que a induzem.

Farmacogentica
rea especial da gentica-bioqumica que avalia a variabilidade na resposta a drogas, decorrente da variabilidade de um gene

Farmacogentica

Curvas dos nveis plasmticos de nortriptilina para indivduos com diferentes nmeros de cpias funcionais do gene CYP2D6

Terapia gnica
A terapia gnica se baseia na introduo ou modificao de genes com o uso das tecnologias de DNA recombinante a fim de conferir uma nova funo ou melhorar os efeitos de um gene anormal

TERAPIA GNICA

Terapia gnica X Farmacoterapia

Terapia Gnica Gene de interesse Protena expressa Farmacoterapia Pr-droga Droga

Excipientes Elementos presentes nos plasmdeos (promotores e stios de poliadenilao) Vetor de transferncia Formulao farmacutica Sequncia promotora do gene que regula a taxa da transcrio Biodiponibilidade

Funes do Gene Introduzido

Corrigir uma mutao de perda de funo;

Substituir ou inativar um alelo dominante

cujo produto anormal causa a doena; Degradao um mRNA mutante (e.i. usando RNAi); Introduo de genes cujo produto tenha ao farmacolgica

Como se isolam genes de interesse?

TERAPIA GNICA

Bibliotecas de DNA
Representam, teoricamente, todo o material gentico de um organismo clonado em um vetor Genmica = clonada diretamente do genoma cDNA = feita a partir de mRNA

Biblioteca Genmica
Extrao do DNA genmico; Clivagem com enzimas de restrio; Ligao dos fragmentos nos vetores;

Transformao celular;
Replicao do vetor

Bibliotecas de cDNA

Seleo do gene

um fragmento de DNA de tamanho variado que usado em amostras de DNA para detectar a presena de sequncias de nucleotdeos que so complementares a sequencia da sonda, emitindo fluorescncia

TERAPIA GNICA

Vetores
A base da terapia gnica consiste na introduo de genes em clulas. Porm, a entrada de DNA puro atravs da membrana plasmtica de clulas eucariticas extremamente rara. Por conseguinte, h necessidade de um carreador que facilite a entrada do DNA nas clulas vivas. Esse veculo denominado vetor.

Vetores
3 classes principais:
vetor plasmidial

vetor viral

vetor nanoestruturado

Vetores virais

Vetores no virais
Plasmdeos

Vetores no virais
Vetores nanoestruturados: polmeros e vesculas de lipdeos

Vetores
Avanos: incorporao de polmeros, anticorpos, substratos enzimticos e cidos nuclicos aprimoramento direcionamento e eficincia

TERAPIA GNICA

O vetor deve chegar at a clula-alvo!

Porm, ele pode ficar comprometido pela presena de ...
Interferentes da estabilidade do sistema teraputicos Interferentes na difuso a um tecido, Protenas circulantes e de protenas da matriz extracelular

Uma vez dentro da clula-alvo: liberao do sistema no citoplasma, transporte at o ncleo, passagem por poros da carioteca , dissociao do DNA.

Demais eventos necessrios para culminar na expresso da protena de interesse.

Transferncia gnica
mtodos fsicos: o transgene introduzido de maneira mecnica na clulas ;

mtodos qumicos: o vetor alguma substncia de origem qumica;

mtodos biolgicos: emprego de organismos que naturalmente possuem a capacidade de transferir material gentico, como os vrus ou algumas bactrias.

Tipos de Terapia Gnica

Em clulas germinativas
Terapia de preveno
Introduo de um gene em gameta ou zigoto visando impedir a transmisso de um gene anormal para a gerao seguinte
Proibida em seres humanos

Tipos de Terapia Gnica

Em clulas somticas
-Para fins teraputicos
Ex- vivo: requer a retirada de clulas de um organismo para cultivo e manipulao in vitro, seguidos por subsequente reimplantao destas clulas no organismo. Seus principais atrativos so a ausncia de resposta imunolgica ao vetor e a maior eficincia de entrega deste. In- vivo: In situ: administrao do vetor diretamente no tecido alvo. De maior interesse clnico embora no seja apropriada para alguns tipos de tecidos Sistmica: maior potencial de uso, embora o direcionamento de genes insuficiente e alguns vetores so prontamente removidos pelo fgado

Aplicaes da terapia gnica

Guidelines
Pesquisa deve estar limitada a clulas somticas O benefcio teraputico deve ser maior do que o risco

A doena deve estar limitada a um nico cromossomo e o gene normal j deve estar clonado e disponvel
Preferencialmente, a terapia deve envolver clulas que podem ser isoladas, modificadas em cultura, e re-introduzidas no paciente

SCID ADA deficiency

1989

Ashanti Desilva

2011-12 YNPN Chicago Executive Board Ashanthi Desilva MPA Student

Cncer

Cncer

Hemofilia
uma doena monognica. O procedimento o de introduzir o respectivo gene sadio (fator VIII ou fator IX, dependendo do tipo de hemofilia) em clulas do paciente, para que essas passem a produzir a protena necessria

Amaurose congnita de Leber

Doenas cardiovasculares

Hepatite C

Doena de Parkinson

Os modelos experimentais pr-clnicos consistem em leses qumicas da substncia negra em ratos ou em primatas. Foram testados vrios tipos de vetores virais

No mercado...

No mercado...

Problemas com a Terapia Gnica:

Segurana:
toxicidade resposta imune integrao transformao maligna integrao s clulas germinativas replicao viral por meio de recombinao

Eficcia:
Captao pela clula-alvo Controle da expresso gnica

*A avaliao do sucesso do procedimento envolve a anlise da manuteno de expresso do gene nas clulas transformadas e a correo da doena.

tica
Ensaios clnicos aprovao Embora no exista legislao especfica no Brasil Comits de tica locais e nacionais, como a Comisso Nacional de tica em Pesquisa (Conep) Comisso Tcnica Nacional de Biossegurana (CtnBio)

Aceita somente a terapia gnica em clulas somticas/diplides

Rede de Terapia Gnica

O Instituto do Milnio Rede de Terapia Gnica (IMRTG)

Pesquisadores dos Estados do RJ, SP e RS compem 10 grupos de terapia gnica experimental strictu sensu. Os aspectos abordados incluem o desenvolvimento de vetores e suas aplicaes em 5 classes principais de patologias: cncer, doenas hematolgicas, doenas monognicas, doenas degenerativas e doenas infecciosas.

Rede de Terapia Gnica

UFRJ - Instituto de Biofsica Carlos Chagas Filho - RJ UNIFESP - Universidade Federal de So Paulo - SP USP - Departamento de Microbiologia - SP USP/INCOR - Instituto do Corao - SP INCA - Instituto Nacional do Cncer - RJ UFRGS - Departamento de Gentica - RS HCPA - Hospital de Clnicas de Porto Alegre - RS IBU - Instituto Butantan - SP FFFCMPA - Fundao Faculdade Federal de Cincias Mdicas de Porto Alegre - RS IC-FUC - Instituto de Cardiologia do RS - Fundao Universitria de Cardiologia - RS DBCD - Departamento de Biologia Celular e do Desenvolvimento - SP FIOCRUZ/IOC - Instituto Oswaldo Cruz - RJ UFRGS - Departamento de Biofsica - RS

No futuro...

No futuro...

amandapinhatti@gmail.com