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3 Proteínas
Envolvendo Oxigênio
Objetivos
• Identificar as estruturas e as
propriedades físico-químicas das
metaloproteínas transportadoras de
oxigênio
• Reconhecer a importância dessas
metaloproteínas para os sistemas vivos
. Propriedades vibracionais e geométricas
das espécies dioxigênio.
Reação Eo’ (V
vs. NHE)
4H+ + O2 + 4e- → 2H2O
+0,82
2H+ + O2 + 2e- → H2O2 +0,27
H+ + O2 + e- → HO2 -0,45
Hb.(Fe3+) + e- → Hb.(Fe2+) +0,17
Principais proteínas envolvendo O2:
Hemoglobina, hemeretrina, Galactose
Oxidase, Hemocianina, Tirosinase, Catecol
oxidase
Hemoglobina (Hb) e
Mioglobina (Mb)
pH 4.5 (acetato)
+e- +e-
2+ • 2+
Cu -Tir -e- Cu -Tir -e- Cu+-Tir ( 3)
(GAOox) (GAO semi) (GAO red)
Cis-228
S RCH2OH H2O
O O S
N O Tir-272
N O
His-581
Cu II (i) Cu II
H
N O H N O CHR
His-496
H H
H2O2 (ii)
(v)
O2
OH S
OH S
N HO
CuI N O
N O CuII
H
C R N O CHR
H
(iv)
(iii)
OH S
N HO
II
Cu
N O R
C
H
Hemocianina (Hc)
OH O
O2
2 2 + H 2O
OH O
tirosinase não disponível.
+ H2O
HO OH
O O
O
N 2+ 2+ N N 2+ O 2+ N
Cu Cu N Cu Cu
N N 2+ O 2+ N
OH N Cu Cu O N
N N
met O + oxi
H
OH
HO OH
+ O2
2H
+ H 2O
O O H+ O O
N + N
N 2+ 2+ N +
Cu Cu
Cu Cu
N N N
OH N
deoxi
- H+
H2O
OH
CuA(I) CuB(I) CuA(II) CuB(II)
+ O2 - H2O
- H+ + 2 H+ -
O O
OH
HO OH -
O
O
- - H2O
CuA(II) CuB(II)
O-
Oxi-hemocianina [{Cu2[HB(3,5-
Pri2C3HN2)3}2(O2)]
Diamagnético Diamagnético
580 nm(1000 M- 551 nm(790 M-1cm-
1
cm-1), 1
), 349nm(21000 M-
340nm(20000 M-1 1ν(O-O)
ν(O-O) = 744-752 cm-1) = 741 cm-1
cm-1) cm-1
Cu...Cu = 3,5 – Cu...Cu = 3,56 Å
C(35)
C(36)
C(27)
C(26)
C(2) C(34)
C(21) C(4) C(31)
C(25) N(1) C(37)
C(17) C(3)
C(22) C(33)
N(5)
C(23) O(1) C(47)
C(24) N(32)
O(20)
C(16)
C(11) Cu(2) C(41)
Cu(1)
C(46)
C(15)
N(12)
N(42)
O(7)
C(13) O(6)
C(14) C(8)
C(43) C(45)
C(44)
C(9)
LIGANTES
OH OH OH
N N N
N N N N N N
OH OH OH
N N N N N N
N N
Npy O N py
Cu Cu
H3BBPPNOL: N,N’-bis(2-hidroxibenzil)-N,N’-bis(2-piridilmetil)-2-ol-1,3-propanodiamina
OH OH
CHO MeOH
H2N NH2
+ 2
OH OH N N
OH
2-OH-SALPN
OH OH OH OH
NaBH4
N MeOH
N HN NH
OH OH
H3BBPNOL
OH OH
(Et)3N
N N N
H3BBPNOL + 2 Cl.HCl H2O
OH
N N
H3BBPPNOL
H2BTPPNOL: N-(2-hidroxibenzil)-N,N’,N’-tris(2-piridilmetil)-2-ol-1,3-propanodiamina
O
O
Cl N
NK + O T=130ºC
O
O
O (A)
MeOH N
refluxo HN
N
EtOH/H2O
HAYASHI, Y. et al. 1 ) NH2NH2.H2SO4 O
N
J. Am. Chem. Soc. N NH2
Et3N
N
N
N N
1995, 117, 11220. OH 2) HCl OH
N
(C) O
(B)
1) MeOH
OH
CHO
2) NaBH4
HO
1)
Cl.HCl
N
N base N
N N
N NH 2) MeOH/∆ N N
N OH
OH
OH
(D) H2btppnol
CAPÍTULO 3: Síntese dos ligantes
HTPPNOL: N,N,N’,N’-tetraquis(2-piridilmetil)-2-ol-1,3-propanodiamina
NaOH N N
H2 N NH2 N N N
+ 4 Cl.HCl H2 O
OH OH
N N
HTPPNOL
[Cu2(H2bbppnol)(µ-CH3COO)(H2O)2]Cl2.2H2O (1)
2+
N N
Cu(CH3COO)2.H2O OH OH
H3BBPPNOL O (Cl-)2
(C2H5)4NCl.H2O Cu Cu
MeOH N N
O O
H2O H2O
Bandas no IV / cm-1: ν(O-H) 3358; νa(COO-) 1564; νs(COO-) 1458; ν(C=N, C=C) 1610,
1502, 1444; δ(O-H) 1384; ν(C-O) 1268; δ(C-H Arom.) 756.
CAPÍTULO 3: Síntese dos complexos
Cl
O O
Bandas no IV / cm-1: ν(O-H) 3386; νa(COO-) 1562; νs(COO-) 1458; ν(C=N, C=C)
1612, 1446; δ(O-H) 1384; ν(C-O) 1264; ν(ClO4-) 1112, 1080; δ(C-H Arom.) 762.
CAPÍTULO 3 Síntese dos complexos
[Cu2(Hbtppnol)(µ-CH3COO)](ClO4)2 (4)
2+
N N
OH N
Cu(CH3COO)2.H2O O
H2BTPPNOL Cu Cu (ClO4-)2
NaClO4 N O O N
MeOH
Bandas no IV / cm-1: ν(O-H) 3240; νa(COO-) 1554; νs(COO-) 1442; ν(C=N, C=C) 1610,
1506, 1482; δ(O-H) 1368; ν(C-O) 1264; ν(ClO4-) 1092; δ(C-H Arom.) 764.
CAPÍTULO 3: Síntese dos complexos
[Cu2(tppnol)(µ-CH3COO)](ClO4)2 (5)
2+
N N
N N
Cu(CH3COO)2.H2O O
HTPPNOL Cu Cu (ClO4-)2
NaClO4 N O O N
MeOH
Bandas no IV / cm-1: ν(O-H) 3426; νa(COO-) 1556; νs(COO-) 1448; ν(C=N, C=C)
1606, 1476; ν(C-O) 1264; ν(ClO4-) 1088; δ(C-H Arom.) 768.
MURTHY, N. N., KARLIN, K. D., BERTINI, I. et al.J. Am. Chem. Soc. 1997, 119, 2156
CAPÍTULO 3 - Estrutura Cristalina do Complexo (1)
C12
O3 O4
Cu(1)-N(31) 1,993(11) Å
C13 C22 C23
C8
C35
C36 C1
C2 C46 C45
Cu(1)-N(1) 2,024(11) Å
O5
N1 C6
C44 Cu(1)-O(1W) 2,695(17) Å
C32 N2 C42
C33 C43
C3
C5 C7
C4
Cu(1)-Cu(2) 3,40 Å
O1W
O2W Cu(1)-O(5)-Cu(2) 127,9º
Espectro Eletrônico
N N
OH OH
O
Cu Cu
sólido 663nm N
H2O
O O
H2O
N
Espectro de RPE
3000
2000
1000
g|| = 2,235
0
g|| > g⊥ > 2,04
Intensidade
-1000 g⊥ = 2,062
A|| = 185 x 10-4 cm-1
-2000
-3000
-4000
Campo [G]
geometria octaédrica alongad
ou piramidal de base quadrad
Espectros de RPE ( espectro experimental e ⋅⋅
⋅⋅⋅⋅ espectro simulado) do complexo (1) em
CAPÍTULO 3: Caracterização do Complexo (1)
Propriedades Magnéticas N
Cu Cu
N
O O
H2O H2O
10000 2.5
8000 2.0
χ [ 10 cm / mol ]
Acoplamento antiferromagnético
-6
4000 1.0
2000 0.5
xp = 5,7 %
CAPÍTULO 3: Estrutura Cristalina do Complexo (4)
[Cu2(Hbtppnol)(µ-CH3COO)](ClO4)2 (4)
C(17) C(3)
C(22) C(33)
N(5)
C(23) O(1) C(47)
C(24) N(32)
O(20)
C(16)
C(11) Cu(2) C(41)
Cu(1)
C(46)
C(15)
N(12)
N(42)
O(7)
C(13) O(6)
C(14) C(8)
C(43) C(45)
C(44)
C(9)
CAPÍTULO 3: Caracterização do Complexo (4)
[Cu2(Hbtppnol)(µ-CH3COO)](ClO4)2 (4) OH
N N
N
O
Cu Cu
Espectro Eletrônico N O O N
1000
0 g|| = 2,135
g|| > g⊥ > 2,04
Intensidade
-1000 g⊥ = 2,040
-2000
A|| = 130 x 10-4 cm-1
-3000
-4000
500 1000 1500 2000 2500 3000 3500 geometria octaédrica alongad
Campo [G]
ou piramidal de base quadrad
Espectros de RPE ( espectro experimental e ⋅⋅
⋅⋅⋅⋅ espectro simulado) do complexo (4) em
acetonitrila a 77 K.
CAPÍTULO 3: Caracterização do Complexo (4)
[Cu2(Hbtppnol)(µ-CH3COO)](ClO4)2 (4)
Propriedades Magnéticas
180000 2.9
160000
2.8
140000
120000 2.7
χ[10 cm / mol]
100000
2.6 Acoplamento ferromagnético
µeff [µB]
3
80000
J = + 18,4 cm-1
2.5
-6
60000
40000
2.4
dz2 dxy
O O
dxy,dx
2-y2
dxy dz2
dx2-y2 dz2
dxz, dyz dxz, dyz dxz, dyz
Sobreposição dos orbitais magnéticos para
Oh D4h C4V D3h
o complexo (4) mostrando a natureza não-
OctaédricoOctaédrico Piramidal Bipirâmide trigonal
complementar das interações.
distorcido base quadrada
(alongado)
CAPÍTULO 3: Complexo (5)
[Cu2(tppnol)(µ-CH3COO)](ClO4)2 (5)
MURTHY, N. N., KARLIN, K. D., BERTINI, I. et al.J. Am. Chem. Soc. 1997, 119, 2156
O
N N Cu(1)-O(1)(alcooxido) 1,898 Å
Cu Cu
N N Cu(1)-O(2)(acetato) 1,935 Å
O O Cu(1)-N(1) 2,029 Å
N N
Cu(1)-N(2) 2,007 Å
Cu(1)-N(3) 2,157 Å
Cu(1)-Cu(2) 3,417 Å
Cu(1)-O(1)-Cu(2) 128,8º
[Cu2(H2bbppnol)(µ -ClO4)]ClO4⋅
- CH3COO)(µ H2O⋅
EtOAc (2) -0,458 -0,742 0,284
[Cu2(Hbbppnol)(H2O)4](ClO4)2⋅
2CH3OH (3) -0,559 -0,677 0,118
[Cu2(Hbtppnol)(µ
-CH3COO)](ClO4)2 (4) –0,89 V –1,11 0,220
[Cu2(tppnol)(µ
-CH3COO)](ClO4)2 (5) –0,615 V –0,917 0,302
a
refere-se ao processo Cu(II)-Cu(II) → Cu(II)-Cu(I);
b
refere-se ao processo Cu(II)-Cu(I) → Cu(I)-Cu(I);
c
(∆E)1,2 = (Ered2 – Ered1)
CAPÍTULO 3: Estudos de Equilíbrio Químico
Hn-1C + H+ H nC
Ka1 = [H2C]/[HC][H+]
Ka2 = [HC]/[C][H+]
%
Curva de distribuição das espécies para
o complexo (1) em função de –log[H+]
para uma solução aquosa contendo 1 x
10-3 M de complexo.
Complexo (1)
N N
OH
O
OH pKa1 = 5,70 8.4
N
Cu Cu
N
pKa2 = 7,42 8.0
(5)
O O
H2O H2O 7.6 (4)
7.2 (1
pKa
Complexo (4) 6.8
)
6.4
N N
OH
O
N pKa1 = 6,32 6.0
pKa2 = 7,96
Cu Cu
5.6
N O O N 2.15 2.20 2.25 2.30 2.35 2.40 2.45
Complexo (5)
Correlação entre os valores de
pKa e as distâncias médias Cu
N N
N
N
pKa1 = 6,82 ligante axial para os complexo
O
Cu Cu (1), (4) e (5).
N O O N
pKa2 = 8,15
H2O H2O
CAPÍTULO 3 - Conclusões
COOMe
N N N N
CuI CuI
Py N CuI N N CuI N
O2 (O2) N O N O
N Cu
I N N N N N N
Py II
Py
Py Cu Cu CuII Cu
N Py Py Py Py OH
Py Py
CuI COOMe
Py Py
O2
2+
Py +
-
- OH
N
Py N N N N
O2
N OH CuII CuII N
CuI CuI N
N N
O
Py Py N O O N N N
COOMe
COOMe
Karlin, K. et al J. Am. Chem. Soc. 1984, 106, 2121 Casella, L. et al Inorg. Chem. 1996, 35, 7516
CAPÍTULO 3 - Modelos funcionais para hemocianina, tirosinase e
catecol oxidase
HO
O O
2+ 2+
Cu Cu + +
Cu .....Cu
O HO met O
oxi
2+ 2+ HO O
+ +
Cu .....Cu + Cu .....Cu +
met O
HO deoxi
OH O
+ O2
Reação modelo
OH O
CAPÍTULO
CH3CN CH3CN
O2 / -80ºC ou TA
2+ +
N N N N
OH N OH N
O TA O
(ClO4-)2 ClO4-
Cu Cu Cu Cu
N N N N
OH H2O (O2)
Complexo (6)
verde marrom
CAPÍTULO 3 - Síntese do complexo de Cu(I) e interação com oxigênio
+ +
N N N N
OH N O2 OH N
O O ClO4-
Cu Cu
ClO4- Cu Cu
N N N
N
-80ºC ou TA (O2)
CH3CN CH3CN
800 (marrom)
600
marrom (amarelo)
giso = 2,1071
400
200
TA
Intensidade
-200 2+
-400 N N
OH N
-600 O
Cu Cu (ClO4-)2
-800
giso = 2,1071 N N
-1000 OH H2O
2400 2600 2800 3000 3200 3400
Campo [G]
Complexo (6)
(verde)
400 1.5
2-
200 O2 Cu(II)
0
g|| = 2,192;
Intensidade
1.0
marrom
Absorbância
-200
g⊥ = 2,085;
verde
-400
A|| = 124 x 10-4 cm-1) 0.5
verde
-600
-800
2400 2600 2800 3000 3200 3400
0.0
Campo [G] 400 500 600 700 800 900
λ / nm
Abs
1,0
0,0
300 400 500 600 700 800
λ , nm
OH O
+ O2
OH O
400 nm
(ε=1900 M-1cm-1)
EFEITO DO pH NA REAÇÃO DE OXIDAÇÃO
-7
4.0x10
-7
2.0x10
-7
1.0x10
[Cu2(Hbtppnol)(µ
- CH3COO)(H2O)2 ](ClO4)2 (4) 6,32 7,96 8,1 ±
0,1
0.0
[Cu2(tppnol)(µ
- CH3COO)(H2O)2](ClO4)2 (5) 6,82 8,15 8,2 ±
0,1
4 5 6 7 8 9 3,5-DtBC1 10,35 14,7
pH
1
TYSON, C. A., MARTELL, A. E. J. Am. Chem. Soc. 1968, 90, 3379 - 3386
Dependência da taxa de reação com o pH para a
oxidação do 3,5-DtBC catalisada pelo complexo (1).
CAPÍTULO 3 - Oxidação do substrato 3,5-di-terc-butilcatecol por complexos
binucleares de cobre(II)
-7
2.6x10
-7
2.4x10
-7
2.2x10
-7
2.0x10
Eq. Michaelis-Menten 1.8x10
-7
-7
1.6x10
vo (M s )
-7
-1
1.4x10
[S])
-8
8.0x10
-8
6.0x10
-8
4.0x10
-8
2.0x10
1/v = Km/Vm[S] + 1/Vmax 0.0
0.000 0.002 0.004 0.006 0.008 0.010
[3,5-DtBC] (M)
Complexo Vmáx (Ms-1) Km (M) Kass (=1/Km)(M-1) kcat (s-1) kcat/KM (M-1s-1)
13
10 2.35
(1)
9 2.30
kcat/KM (M s )
-1 8
cinético: k2 (=kcat/KM): eficiência catalítica
-1
2.25
(4)
7
2.20
6
eletroquímico: (∆E)1,2 (= E(red)1 – E(red)2) 5
2.15
2.10
4
estrutural: distância média Cu-ligante axial 3 (5) 2.05
para os complexos (1), (4) e (5). 0.18 0.20 0.22 0.24 0.26 0.28 0.30 0.32
(∆ E)1,2 (V vs. NHE)
CAPÍTULO 3 - Oxidação do substrato 3,5-di-terc-butilcatecol por complexos
binucleares de cobre(II)
N N N N
OH OH OH
O OH
II O
Cu Cu II
pH 8 Cu Cu
N O O N N O O N
H2O H2O OH OH
Complexo (1)
HO OH
OAc- O2
N N
N N
OH
OH OH OH
II
O II
O
I Cu Cu
Cu CuI
N N
N N
OH2 OH2 O O O