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estruturais do Ag.
A sequncia de Aa do stio combinatrio tem a
configurao espacial mais adequada para complementar
a configurao espacial do eptopo
Especificidade
A capacidade
Ligaes no covalentes
- Pontes de
Hidrognio
- Interaes
eletrostticas
- Foras de Van der
Waal
A capacidade de uma populao de molculas de Acs de reagir
- Interaes
somente com um Ag
hidrofbicas
Afinidade
Fora de reao entre um nico eptopo e um
Baixa afinidade
Ab
Ab
Ag
Ag
Afinidade
> ou < afinidade depende da
complementariedade entre Ag e Ac
Reao Cruzada
A capacidade de um nico stio combinatrio do Ac de
reagir com mais de um eptopo.
Ocorre entre Ags que compartilham os mesmos eptopos
ou possuem eptopos similares
Reaes cruzadas
Ac
Anti-A
Ac
Anti-A
Anti-A
Ac
Ag A
Ag B
Ag C
Eptopo igual
Eptopo similar
Avidez
A fora de ligao total entre um Ag com muitos eptopos e Acs
multivalentes
Keq =
104
106
1010
Afinidade
Avidez
Avidez
- Avidez alta
idnticos)
DIVERSIDAD
E
Combinao do Ag com o Ac
Excesso de Ac
Equivalncia
entre Ag e Ac
Formao de Rede
Excesso de Ag
Reaes Ag x Ac
Pesquisa
no Soro
nos
Tecidos
Ags ou Acs
Ags
Sorologia
Diagnstico de infeces
Deteco de Ags / Acs
Monitoramento do tratamento
Imunohistoqumi
ca
AG
Extrato
Purificado
AC
Peptdeo
Recombinante
Precipitao
Aglutinao
SISTEMA
REVELADOR
Fixao
do C`
Fluorocromo Radioistopo
Enzima
FONTES ANTIGNICAS
Antgenos totais
Antgenos de superfcie
Fraes purificadas
Protenas recombinantes
Peptdeos sintticos
SOROLOGIA
Qualitativa
Quantitativa = Titulao
a dosagem semi-quantitativa do Ag /Ac usando Ac/Ag conhecido
TTULO
Titulao do
Ag
Titulao
de Ac
Homogeneidade
Especificidade
Reprodutibilidade
SOROLOG
IA
PESQUISA DA CLASSE DE AC
Deteco de IgM Infeco primria
- Diagnstico de infeco em
recm-nascido
Deteco de IgM e IgG Infeco em curso
Deteo de IgG Convalescncia
- Vacinao
- Cicatriz sorolgica
- Teste de avidez para IgG
SOROLOGIA PAREADA
Coleta e anlise de duas amostras do
paciente
Segunda coleta 2-4 semanas aps a
primeira coleta
Converso sorolgica
SOROLOGIA
A escolha do teste sorolgico a ser utilizado no diagnstico de
infeces agudas deve levar em considerao a sensibilidade e
a durao do perodo necessrio para o aparecimento de
ttulos de anticorpos detectveis
Testes de Formao de
Rede
Aglutinao
Antgeno = Partcula
Aglutinao/Hemaglutinao Direta
Direta
Ag
particulado
Agregado
Ac
solvel
Execuo da tcnica:
- tubo, lmina ou microplacas
- qualitativa ou quantitativa
Aglutinao/Hemaglutinao Direta
Direta Qualitativa
Tipagem
sangunea
Ac anti-Ag A
Hemcias A
A
O
AB
Aglutinao/Hemaglutinao Direta
Direta Qualitativa
Infeces Bacterianas
+
Sorotipagem de bactrias
Pesquisa de Acs para infeces (salmonelose,
leptospirose,toxoplasmose...)
Aglutinao/Hemaglutinao D
Direta quantitativa
0,5 mL
50 L do
soro
0,5 mL
0,950 mL
PBS
0,5 mL
PBS
1:20
1:40
0,5 mL
0,5 mL
PBS
1:80
0,5 mL
0,5 mL
0,5 mL
0,5 mL
PBS
0,5 mL
PBS
0,5 mL
PBS
1:160
1:320
1:640
Acrescentar 0,5 mL de
Ag em cada tubo
Ex: REAO DE WIDAL - Febre tifide
Aglutinao/Hemaglutinao
Direta
Aglutinao Quantitativa
Ttulo
Prozona
Controle
Ag + tampo
salina
fosfato(PBS)
Aglutinao/Hemaglutina
o Direta
Prozon
a Falso
Negativos
Aglutinao/Hemaglutinao Direta
Aglutinao Quantitativa
Rede = Teste
positivo
Boto = Teste
negativo
Ttulo
1:256
1:512
Aglutinao/Hemaglutinao Direta
1/512
1/256
1/64
1/128
1/32
1/16
1/8
1/4
Consideraes Prticas
Fcilidade de execuo
Baixo custo
Elevada sensibilidade
Leitura visual
Semi-quantitativo
1/2
Aplicaes
Sorodiagnstico de sfilis
(VDRL latex)
(VDRL- floculao)
Resultado negativo
(microscpio ptico x 100)
Resultado positivo
(microscpio ptico x 100)
+
Eritrcitos do Paciente
Reagente de Coombs
(Anti-imunoglobulina)
+
Soro do paciente
Eritrcito teste
Etapa 2
Reagente de Coombs
(Antiglobulina)
Inibio da Aglutinao/Hemaglutinao
Definio - Teste baseado na inibio da aglutinao
devido a competio com um Ag solvel
Controle Positivo (Sem amostra do
paciente)
Inibio da Aglutinao/Hemaglutinao
Definio - teste baseado na inibio da aglutinao devido
a presena de Ac no soro de paciente
Controle positivo (Sem amostra do paciente)
Hemaglutini
na viral
YY
Y
(Ac ?)
Deteco / medida de Ac
Teste positivo = ausncia de aglutinao
Y
Ex: diagntico de vrus
hemaglutinantes
(Influenza)
Inibio da Aglutinao/Hemaglutinao
Inibio da Aglutinao/Hemaglutinao
Aplicaes
- Medio de Ags solveis
- Diagnstico de viroses por vrus
hemaglutinantes ( Influenza)
- Teste de Gravidez
Consideraes prticas
Mesmas dos testes de aglutinao
Rede = Teste
negativo
Boto = Teste
positivo
Testes de
Precipitao
Ag Solvel
Precipita
o
Definio - Testes que tm como resultado final a precipitao
de um Ag solvel
AG solvel + AC solvel
Complexo Insolvel
(rede tridimensional)
Precipitao em
meio Lquido
Em tubos
Mtodo
Ac incorporado ao gel
Ag no poo
Interpretao
Dimetro do anel
proporcional a concentrao
Quantitativo
Nveis de Igs
Mtodo
Ag e Ac colocados em poos equidistantes no gel
Permite comparao simultnea de vrios sistemas antignicos
Interpretao
Nmero de linhas de precipitao = quantidade de eptopo
Imunodifuso
Radial Dupla
(Ouchterlony)
Comparao entre
fraes antignicas
A- Identidade
B- No identidade
C- Identidade parcial
Contra-imuno - Eletroforese
Mtodo
-+
+
Ag
Ac
Contra-imuno - Eletroforese
Qualitativo
Semiquantitativo
Mais sensvel que a imunodifuso dupla
Rpido
Uso: deteco rpida de Ags bacterianos
(pneumonia, meningite, septicemia)
Imunoeletroforese
Mtodo
Ags so separados por eletroforese
Ac colocado em um recorte no agar
Ag
Ag
Ab
Ag
Ab
Interpretao
Arcos de precipitao representam o nmero de antigenos
Imunoelectroforese
Qualitativo
Concentrao relativa
Aplicao:
Caracterizao de protenas anormalidades
estruturais ou alteraes nas concentraes
Mtodos Automatizados
Nefelometria
Mtodos Automatizados
Turbidimetria
Mtodo