ENGENHARIA

GENTICA
PATRIMNIO GENTICO
 Os genes so o `ouro verdedo sculo da
Biotecnologia (XXI)
Jeremy Rifkin

provvel que as Cincias da Vida e da Biologia

venham a constituir armas importantes para o
combate fome e subnutrio, e que venham a
alimentar uma populao humana crescente,
mantendo a superfcie agrcola actual e com um
impacte ambiental reduzido.
Comisso das Comunidades Europeias (Janeiro de 2002)
Engenharia gentica
A engenharia gentica baseia-se num
conjunto de tcnicas e ferramentas que
permite a interveno no genoma de um
organismo construindo novos genomas
por recombinao de segmentos
genmicos de um mesmo ou de
diferentes cromossomas.
Aplicaes da Engenharia
Gentica
Estudo de mecanismos de replicao e expresso
gnica;
Determinao da sequncia de um gene e protena
codificada;
Desenvolvimento de organismos geneticamente
modificados, capazes de produzir substncias teis
(ex.: enzimas);
Aperfeioamento e rentabilizao dos processos de
produo de vinho, po, queijo e iogurte;
Aumento do rendimento de plantas com interesse
agronmico, podendo em alguns casos permitir reduzir
o impacto ambiental da produo agrcola intensiva;
Aumento da qualidade nutritiva de alguns dos
alimentos;
Realizao de testes de paternidade e diagnsticos de
doenas genticas e infecciosas.
Engenharia gentica: bom
ou mau?
Os alimentos e compostos produzidos a
partir de organismos geneticamente
modificados so seguros para o
ambiente e para os Humanos?
Quais as implicaes ticas da
Engenharia Gentica?
Quais as principais vantagens e
desvantagens destas tcnicas?

 cidos Nuclicos
Em 1953, Watson
e Crick
apresentaram o
modelo de dupla
hlice para a
molcula de DNA
duas cadeias
polinucleotdicas
antiparalelas.
cidos Nuclicos
cidos Nuclicos
cidos Nuclicos

Cada nucletido
formado por uma base
azotada, uma pentose
e um grupo fosfato.
A ligao entre as
duas cadeias de DNA
feita por
complementaridade
entre as bases
azotadas a adenina
emparelha com a
timina, a citosina com
a guanina.
cidos Nuclicos

A molcula de
RNA formada
por uma nica
cadeia de
nucletidos e,
em vez de
timina,
apresenta
uracilo.
cidos Nuclicos
Para que a informao contida no DNA
seja expressa ter de ser passada ao
RNA, que se forma por
complementaridade com o DNA, e
traduzida sob a forma de protenas.
Transcrio
Traduo
Engenharia gentica
A partir da dcada de 70 do sculo XX
foi desenvolvido um vasto conjunto de
tcnicas de anlise e manipulao do
DNA, com implicaes ticas e sociais.
Engenharia gentica
Vrus bacterifago T4
Engenharia gentica
Vrus bacterifago atacando bactria
Atividade 19 - pgina
116!
Enzimas de restrio
Enzimas de restrio
Enzimas de restrio
Endonucleases ou enzimas de
restrio e ligases do DNA
As enzimas de restrio fragmentam
o DNA por hidrlise em locais
especficos. A especificidade dada
pela sequncia de nucletidos que a
enzima reconhece, fragmentando o
DNA sempre que encontra essa
sequncia.
Formam-se fragmentos de DNA, em
hlice dupla, mas com uma pequena
extenso em cadeia simples em
cada extremidade.
As extremidades (coesivas) podem
ligar-se, por complementaridade a
outro DNA, com interveno de
outras enzimas ligases do DNA.
Endonucleases ou enzimas
de restrio e ligases do
DNA
A descoberta da enzimas de restrio e
das ligases do DNA forneceu aos
investigadores a oportunidade de
manipular e transferir genes de uma
molcula de DNA para outra, isto , de um
organismo para outro.

Como transportar o material do genoma

onde foi retirado para o genoma que o vai
receber?
Vetores
As enzimas de restrio e as ligases do DNA so ferramentas da
engenharia gentica que permitem manipular e transferir genes de
uma molcula de DNA para outra, isto , de um organismo para
outro.
Na transferncia de genes necessria a existncia de um
transportador, isto , um vetor que leva o material gentico de um
genoma para outro.
H diversos tipos de vetores sendo os plasmdeos das bactrias dos
mais utilizados.
Plasmdeos
Plasmdeos
Muitas bactrias possuem, para alm da
molcula de DNA principal, pequenas
molculas de DNA em cadeia dupla os
plasmdeos.
Geralmente, os genes dos plasmdeos no
so essenciais sobrevivncia da
bactria, podendo ser retirados. Podem
replicar-se independentemente da
molcula de DNA principal, podendo
fundir-se com ela.
DNA recombinante
DNA recombinante

Atividade 20 pgina
119
Tcnica do DNA
recombinante
1. Abertura da molcula de DNA do plasmdeo,
num ponto especfico, pela enzima de restrio;
2. Isolamento de genes de interesse noutras
molculas de DNA dadoras recorrendo a
enzimas de restrio do mesmo tipo.
3. Juno do gene a inserir, do plasmdeo e de
ligases do DNA;
4. Ligao do gene ao plasmdeo formando-se o
DNA recombinante;
5. Introduo do plasmdeo recombinante em
bactrias, que funcionam como clulas
hospedeiras do novo gene;
6. Produo da protena desejada a partir do DNA
recombinante.
DNA recombinante (rDNA)
A tecnologia do DNA
recombinante permite produzir
molculas de DNA a partir da
combinao de genes com
provenincias diferentes.
possvel introduzir um gene
humano em bactrias para que
estas produzam, em larga escala,
uma determinada protenas
humana.
Alm disso, o gene com interesse
clonado permitindo a sua
conservao em diversas cpias
para posteriores utilizaes
biblioteca de genes.
DNA recombinante
DNA complementar
DNA complementar
DNA complementar ou
cDNA

Este DNA obtido a partir do mRNA por

complementaridade de bases, um mRNA que j
sofreu processamento (no contm intres).
A produo de cDNA possvel por aco da
enzima transcriptase reversa. O mRNA
funciona como molde para a sntese de uma
cadeia de DNA, um processo inverso do que se
passa habitualmente na transcrio.
Aps a formao da primeira cadeia de cDNA, a
DNA polimerase forma a cadeia complementar,
constituindo-se uma molcula estvel.
DNA complementar (cDNA)
A comparao entre o cDNA (sem intres) e o
DNA original permite localizar as regies
codificantes (exes) e as no codificantes
(intres) de um determinado gene.
O cDNA facilita a produo de protenas de
seres eucariontes em bactrias uma vez que
estas no possuem mecanismos de
processamento do mRNA, isto , em presena
de um DNA original transcreveriam todo o
gene, incluindo os intres, obtendo-se
protenas diferentes das pretendidas.
Ao ser inserido um clone de cDNA garante-se
a produo de protena normal.
Reaco de polimerizao
em cadeia (PCR)
uma das tcnicas para clonar DNA de
modo a obter grandes quantidades a
partir de uma pequena amostra.
Reaco de polimerizao em
cadeia (PCR)
Fases do processo de amplificao de uma
determinada poro de DNA:
Aquecimento do DNA para separar as duas
cadeias;
Adio de primers, nucletidos e da enzima
DNA polimerase para que a dupla hlice seja
reconstruda a partir de cada uma das cadeias
simples;
Repetio do procedimento de modo a
produzir cpias suficientes do DNA em estudo.
Electroforese - DNA
fingerprint
DNA fingerprint
Impresses digitais genticas
Cada indivduo possui o seu prprio
DNA, que nico.
No seio do DNA encontram-se zonas
de restrio sequncias repetitivas
ao longo da molcula cujo nmero,
tamanho e localizao so variveis
de indivduo para indivduo.
DNA fingerprint
Impresses digitais genticas
Submetido aco de enzimas de restrio o
DNA fragmenta-se em pores de diferentes
tamanhos e pesos moleculares.
Estes pedaos de DNA, sujeitos a eletroforese,
revelam um padro de fragmentos de restrio
que nico para cada indivduo, funcionando
como um cdigo de barras gentico.
DNA fingerprint
Anlise de DNA fingerprint
DNA fingerprint
Aplicao forense do DNA fingerprint
DNA fingerprint
Testes de paternidade
 Aplicaes da Engenharia
Gentica

Agroalimentar
Biomdica
Agroalimentar
Produo e transformao de produtos
agrcolas (ficam mais resistentes a
pragas, com mais qualidades nutritivas e
economicamente mais viveis);

Biomdica
Produo industrial de molculas biolgicas (produtos
sanguneos decisivos no tratamento de certas afees do
foro hematolgico, como, por exemplo, a produo do fator
anticoagulante, hormonas e vacinas);
Obteno de animais transgnicos;
Novos mtodos de diagnstico;
Produo de antibiticos hbridos para ultrapassar o
problema da resistncia de certas bactrias a determinados
antibiticos;
Produo de produtos farmacuticos atravs de gado
transgnico;
Terapia gnica

Alguns problemas bioticos da
Eng. Gentica
Aspetos ambientais
Disseminao incontrolada de genes;
Alteraes definitivas de genomas de certas
espcies;
Reduo da biodiversidade.
Aspetos humanos
Perigos de alterao do genoma humano;
Hipottica manipulao do indivduo e famlia;
Quebra de privacidade;
Discriminao com base em dados genticos
OGM
Organismos geneticamente modificados
A manipulao gentica, iniciada em
microrganismos, alargou-se a outros seres
vivos, vulgarmente animais e plantas.
Designam-se organismos geneticamente
modificados (OGM) ou transgnicos aqueles
cujo genoma foi manipulado, apresentando
diferenas relativamente sua constituio
original.
OGM
A manipulao gentica permite obter,
de forma rpida, organismos com
caratersticas vantajosas (ex.: plantas
mais resistentes a doenas, ao calor,
seca, geada, com menos necessidade
de adubos, com frutos maiores, com
paladares novos, produzindo frmacos,
entre outros).
OGM
Os OGM levantam reservas no s em
termos de sade humana mas,
sobretudo, em termos de perturbao
ambiental.
No seguro que os OGM, atravs da
reproduo, no disseminem genes
manipulados alterando o equilbrio das
populaes naturais.