Universidade Federal de Ouro Preto

Instituto de Ciências Exatas e Biológicas

Departamento de Química
Técnicas de Cromatografia Aplicada ao Meio Ambiente
Professor Robson José de Cássia Franco Afonso

Seminário Cromatografia

Luciana Faria
Ouro Preto - MG
Julho, 2019.
 Sumário

Princípios de funcionamento de analisadores sequenciais (Tandem),

Modos de operação por varredura,

Monitoramento de íons específicos,

Referências Bibliográficas.

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 Analisadores sequenciais - Tandem

É uma técnica em química instrumental onde dois ou mais espectrômetros de

massa são acoplados usando uma etapa de reação adicional para aumentar sua

capacidade de analisar amostras químicas.

Também conhecida como MS / MS ou MS2.

Possibilitam a separação no espaço e no tempo.

Uso comum para análise de biomoléculas, como proteínas e peptídeos.

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 Princípios de funcionamento

Figura 1. Representação esquemática de um analisador

Tandem.

Fonte: https://en.wikipedia.org/wiki/Tandem_mass_spectrometry
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 SCAN - Modo de operação por varredura

Faz a varredura de todos os íons em uma determinada faixa de tempo.

O analisador de massa varre, analisa sequencialmente, passando cada m / z na

faixa de massa selecionada para o detector.

É um modo útil de operação porque mostra todos os íons que estão sendo

formados na fonte de íons. Isso é útil para o desenvolvimento de aquisições de SIM.

Menos sensível que o modo SIM pois outros compostos podem coeluir com

compostos de interesse.

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 SCAN - Modos de operação por varredura
MS1 é selecionado para detectar, fazer a
Dissociação Induzida por Colisão (CID), permi
a número de íons precursores que se fragmenta
urado para transmitir apenas um fragmento
de reação e também o número de vias de frag

Figura 2. Representação esquemática de experimentos de EM em Tandem por SCAN em análise de proteínas.

Na varredura dos íons produzidos, o primeiro analisador (MS 1) é ajustado para um

valor que seleciona um íon precursor específico de cada vez.

O íon selecionado sofre CID na célula de colisão e os fragmentos resultantes são

analisados pelo segundo analisador (MS2).

Fonte: https://science.sciencemag.org/content/312/5771/212/tab-figures- 6
 SCAN - Modos de operação por varredura

Figura 3. Representação esquemática de experimentos de EM em Tandem por SCAN em análise de proteínas.

A varredura de perda de fragmentos neutros permite observar íons que se

fragmentam perdendo uma massa de estrutura química específica e neutra.

Os dois analisadores, de maneira sincronizada, fazem a varredura dos íons de modo

que a diferença de massa deles ao passar pelo MS1 e pelo MS2 permanece constante.
A diferença de massa corresponde a um fragmento neutro que é perdido de um íon na
célula de colisão.
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Fonte: https://science.sciencemag.org/content/312/5771/212/tab-figures-
 SIM - Monitoramento de íons específicos

O Monitoramento de Íons Específicos (SIM) é usado como uma varredura

quantitativa, em que o íon molecular do analito é monitorado em uma janela estreita.

Ou seja, o instrumento é configurado para reunir dados em massas de interesse, em

vez de percorrer o filtro de massa em uma ampla faixa de massas.

O modo SIM permite que o espectrômetro de massas detecte compostos

específicos, ou seja, irá coletar dados apenas nas m/z de interesse.

Sensibilidade muito alta pois o instrumento está analisando apenas um pequeno

número de fragmentos durante cada varredura. Consequentemente, mais varreduras

podem ocorrer a cada segundo.

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 SIM - SCAN

Figura 4. Representação esquemática do modo (A) SCAN e do modo (B) SIM. 9

 TANDEM no espaço

 Um Espectrômetro de Massa Tandem no espaço é caracterizado pelo

acoplamento de dois instrumentos fisicamente distintos.

 Instrumentos espaciais comuns têm dois analisadores de massa, permitindo que

os experimentos MS / MS sejam realizados.

Triplo Quadrupolo (QqQ)

TANDEM
no espaço
Quadrupolo com TOF
(QTOF)

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 TANDEM no espaço - Triplo Quadrupolo

Figura 5. Representação esquemática de um Triplo Quadrupolo.

Figura 6. Triplo Quadrupolo da Waters. 11

 Quadrupolo linear

Figura 7. Representação esquemática de um Quadrupolo linear.

 Possui quatro cilindros metálicos paralelos nos quais se aplicam uma corrente
elétrica (ddp) e um potencial de radiofrequência alternante;
 Os íons produzidos na fonte de ionização são focalizados ao centro da região
entre os quatro cilindros e atravessam axialmente o quadrupolo;
 A trajetória dos íons é dependente do campo elétrico produzido;
 A RF é variada de modo que os íons de diferentes m/z obtenham uma trajetória
estável ao longo do quadrupolo.
 Apresenta baixa resolução espectral, pois íons de m/z próximas não são
separados. 12
Quadrupolo linear

Figura 8. Quadrupolo linear.

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 TANDEM no tempo

 Um Espectrômetro de Massa Tandem no tempo é caracterizado por realizar uma

sequência apropriada de eventos em um dispositivo de armazenamento de íons.

 Ou seja, a separação é realizada com íons presos no mesmo lugar, com várias

etapas de separação ocorrendo ao longo do tempo.

Ion Trap

TANDEM
no espaço
Quadrupolo - ATV
(Q-ATV))

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 TANDEM no tempo – Ion Trap

Figura 9. Representação esquemática do Ion Trap.

 Os íons são atraídos pela ddp, e usa-se RF para inverter a polaridade.

 Quando os íons entram, a polaridade é invertida em alta frequência. Para separá-los é
aplicada ddp no 3° eletrodo de modo que os íons começam a orbitar de forma circular.
 Alternando a RF, os íons de m/z menores irão apresentar uma orbita circular maior, serão
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ejetados e detectados.
TANDEM no tempo – Ion Trap

Figura 10. Ion Trap da Waters.

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 TANDEM no tempo – Quadrupolo - ATV (Q-ATV)
 É um instrumento em que o último estágio do triplo quadrupolo é substituído
por um ATV disposto ortogonalmente ao segundo quadrupolo.
 Este instrumento, ao invés de varrer sequencialmente um intervalo de razões
m/z selecionadas e gerar o espectro de massas selecionadas, detecta todos os
íons que entram no tubo de vôo em um tempo específico, o que só é possível
devido à sua alta velocidade de varredura.

Figura 11. Representação esquemática

de um Quadrupolo-ATV. 17
 Referências Bibliográficas
Carol H. Collins; Mariza C. Chiaradia; Isabel C. S. F. Jardim; O estado da arte da
cromatografia associada à espectrometria de massas acoplada à espectrometria de massas na
análise de compostos tóxicos em alimentos; Quím. Nova vol.31 no.3 São Paulo, 2008.
https://www.synchrotron-soleil.fr/en/news/breaking-molecules-uv-radiation-new-activation
method-tandem-mass-spectrometry Acesso:09/07/2019
https://www.researchgate.net/figure/Mass-spectrometry-technologies-A-Two-dimensional-
gel-electrophoresis-mass-spectrometry_fig2_301686512 Acesso:09/07/2019
https://science.sciencemag.org/content/312/5771/212/tab-figures-data Acesso:10/07/2019
https://www.agilent.com/cs/library/support/documents/a05042.pdf Acesso:10/07/2019
https://www.waters.com/waters/en_US/What-Types-of-Instruments Acesso: 10/07/2019

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