TÉCNICAS RELACIONADAS A

EXPESSÃO GÊNICA
 Identificação
Universidade Estadual de Feira de Santana
Docente: Édson Freitas de Araújo
Discentes: Gabriella Botelho
Gabriela Florentino
Mariza Mascarenhas
Pedro Piropo
Rebeca Cunha
Yan Sampaio

Odontologia, I Semestre, 2019.1

TÉCNICAS
RELACIONADAS
A EXPESSÃO
GÊNICA
 ENTENDENDO A
EXPRESSÃO GÊNICA
A partir do zigoto têm- se a formação de vários tipos
celulares.
 Mas como uma única célula pode dar origem a tipos
celulares tão distintos?

HIPÓTESE 1: durante a diferenciação, apenas os genes que codificam as proteínas que

serão expressas naquele tipo celular são mantidos.

HIPÓTESE 2: todos os genes são mantidos, mas somente as proteínas específicas ao tipo
celular são expressas.
 É importante lembrar que:

S
TOTIPOTENTES PLURIPOTENTE
 O que essas observações sugerem em relação às duas
hipóteses que nós levantamos inicialmente?

HIPÓTESE 1: durante a diferenciação, apenas os genes que codificam as proteínas que

serão expressas naquele tipo celular são mantidos.

HIPÓTESE 2: todos os genes são mantidos, mas somente as proteínas específicas ao tipo
celular são expressas.
O QUE É, REGULAÇÃO DA
EXPRESSÃO GÊNICA
POR QUE REGULAR
QUAL O CUSTO (EM TERMOS DE ENERGIA E RECURSOS) PARA FAZER UMA
PROTEÍNA ?

MOTIVO 01:

Para uma proteína de tamanha médio (300 aa.) ?

- 1350 moléculas de ATP

- 1650 átomos de Carbono
- 540 átomos de Nitrogênio

A E.Coli tem aproximadamente 4000 genes que codificam cerca de

2000 proteínas

Imaginem o custo se todas essas proteínas fossem produzidas ao mesmo

tempo e o tempo todo!

MOTIVO 02:

Células submetidas a condições diferentes

TÉCNICAS RELACIONADAS A
EXPESSÃO GÊNICA
 Reação em cadeia de polimerase
Fundamentada
Ciclos
Técnica de
In vitro
nos princípios da
hibridização
sucessivos
replicação

A
u
m
en
to
d
e
D
N
A
e
m
pr
og
re
ss
ão
ge
o
m
ét
ric
a
Montagem da técnica:
Amostra de DNA

Primers pré-fabricados
Exógenos
Tubo Eppendorf Definem a origem
da replicação

dNTPs:
Solução-tampão
nucleotídeos

Cloreto de Taq DNA-

Magnésio polimerase
Termociclado
De 35 a 40
ciclos
r
Funcionamento:
 PCR alterativas

PCR com
polimorfismos de PCR alelo
PCR em tempo tamanhos de oligonucleotíd
real fragmentos de
restrição eos-específica
Extração e purificação de ácidos nucleicos

Obter o material genético Lise das células

 Sistema Gene Repórter
• Método amplamente utilizado;

• Permite avaliar o efeito que uma sequência regulatória de determinado

gene exerce sobre o nível transcricional de um gene específico;

• Pode revelar onde ou em que circunstâncias os elementos necessários à

transcrição estão presentes;
 O que é um Gene Repórter?
• O gene repórter é usado para definir um gene cuja expressão gera um
fenótipo prontamente mensurável que pode ser distinguido facilmente
frente a um conjunto basal de proteínas endógenas.

• Gene uidA β- Glucuronidase

 Metodologia

Produto
Plasmídeo Tempo de 24- 72
Inserção na célula; quantificado ou
quimérico; horas;
avaliado;
Precauções no uso deste método

Proteína não deve alterar a fisiologia da célula tranfectada;

Não deve ser sintetizada endogenamente pelo hospedeiro;

Repórter seja facilmente detectável e que reflita a expressão;

Genes mais utilizados em mamíferos

Clorafenicol Acetil
Tranferase (CAT);

Luciferase de Vaga- lume

(luc);

β – galactosidade de
bactérias (B-gal);

Proteína Fluorescente Verde

(GEP);
Luciferase de Vaga- lume
Gene luc clonado
do vaga- lume
(Photinus pyralis);

Oxidação da
luciferina= flash;

Luciferina+ ATP+
Mg+ O =
Bioluminescência;
 Taxa de
transcriçã
Ativida o do gene
Emissã repórter
de da
o de sob ação
lucifera do
luz
se promotor
em
estudo;
 MICROARRAYS DE DNA NO ESTUDO DA
EXPRESSÃO GÊNICA DE UM GENOMA:
 CONCEITO DE É uma metodologia usada para
MICROARRAY: comparar a expressão de um
grande número de genes
simultaneamente.

FONTE:
https://www.sciencelearn.org.nz/resources/2027-
microarrays-dna-chips
 METODOLOGIA DO MICROARRAY:

Duas sondas
Hibridização de marcadas com
cDNAs fluorescências
diferentes

Diferentes
intensidades de
fluorescência

Imagens dos
Processadas por
pontos
computadores
fluorescentes
METODOLOGIA DO MICROARRAY:

FONTE:
https://ib.bioninja.com.au/options/untitled/b4-
medicine/dna-microarrays.html
APLICAÇÕES DO MICROARRAY:

●
Plataforma comum entre vários
pesquisadores: Banco de dados centralizado.

●
Experimentos de genômica funcional com
diversas espécies animais e vegetais.

●
Facilitar a identificação de marcadores moleculares para o
diagnóstico, prognóstico e para o tratamento farmacológico
atual.
APLICAÇÕES DO MICROARRAY:

●
Pesquisa zootécnica (crescimento e
metabolismo, reprodução e resposta a
fatores de estresse não-infecciosos.

●
Melhoramento genético.
DESVANTAGENS DO MÉTODO DE
MICROARRAYS:

●
Grande quantidade de RNA necessária na
etapa de hibridização. A quantidade de
RNA total é de 50 a 200ug.

●
Procedimento de alta complexidade e alto
custo devido a robótica e programas de
computadores específicos para realizar o
processo.
 CURIOSIDADE:

Um robô de microarray é capaz de

colocar 16 amostras em 48 placas de
vidro, lavar e secar a sonda para o
próximo grupo de cDNA em 70
segundos. Ou seja, 10.000 amostras
podem ser produzidas em 12 horas
aproximadamente.
 Aplicação das técnicas relacionadas à
expressão génica na odontologia

Pode ser usada para identificar novas espécies bacterianas, auxiliando a definir seu papel na patogênese da cárie
dentária.
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS:

• CARNEIRO, Newton P. CARNEIRO, Andréa A. GUIMARÃES, Cláudia T. PAIVA, Edson.

Desvendando o Código Genético – Um quebra cabeça que começa a ser montado;
• REVISTA BRASILEIRA DE ZOOTECNIA - Estudos de expressão gênica utilizando-se
microarrays: delineamento, análise, e aplicações na pesquisa zootécnica. Disponível em:
<www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1516-35982007001000018> Acesso em
11/09/2019;
• BARBOSA, Angela Silva, Chin Jia Lin. Técnicas de Análise da Regulação da Transcrição
Gênica e suas aplicações na Endocrinologia Molecular;