MONITORIA

:
BIOLOGIA
MOLECULAR
Monitor: Tiago Oliveira
Universidade Ceuma
 02 03 04
01
Bibliotecas de cDNA Teste de paternidade
Enzimas de restrição
Microarranjo de DNA e clonagem e DNA fingerprint
e western blot

05
Organismos
geneticamente
modificados
Microarranjo de DNA
Chip de DNA
Microarranjo de DNA

Chip de DNA
Microarranjo de DNA

HIBRIDIZAÇÃO
Microarranjo de DNA
Transcriptase reversa

RNA

cDNA
Microarranjo de DNA

Hibridização

Controle Tratado
Microarranjo de DNA
Microarranjo de DNA
Western Blot

• Proteínas: Proteínas Desnaturadas (β-Mercaptoetanol)

• Separadas por Eletroforese: Poliacrilamida (SDS-PAGE)

• Transferidas: Membrana de nitrocelulose ou Fluoreto de

polivinilideno (PVDF) -> Carga Elétrica
Western Blot
Western Blot
Western Blot
Western Blot
LUZ
H2O

H202 + Luminol HRP

Anticorpo secundário

Anticorpo primário
 Enzimas de
restrição e
02
clonagem
Dogma central da biologia molecular
Enzimas de restrição

• Nucleases de restrição: enzimas que cortam o DNA em pontos

específicos

Sítio de restrição

OU
Enzimas de restrição

• Enzimas que cortam o DNA em pontos específicos

Regiões palindrômicas
Clonagem

• Clonagem: ato de produzir diversas copias idênticas do DNA ou de

uma parte dele (gene).

• Plasmídeo: pequenas moléculas de DNA circular de fita dupla

Construção de
plasmídeo DNA humano
Clonagem
Usos:
• Insulina
• Agricultura
• Terapia genética
 Bibliotecas de
03
cDNA
Conceito
Construção de
plasmídeo DNA humano
Construção de plasmídeo
Vantagens e desvantagens

Bibliotecas genômicas e bibliotecas de cDNA

Genoma inteiro Regiões codificantes

04 DNA fingerprint
DNA fingerprint

• Quase todas as nossas células contém DNA

• Cerca de 99,9% do DNA entre dois humanos é o mesmo

A impressão digital de DNA é uma técnica que

detecta simultaneamente muitos minissatélites no
genoma para produzir um padrão único para um
indivíduo.

Minissatélites: 10-60 pares de base

DNA fingerprint

Principio:
antigamente
DNA fingerprint

Principio:
Hoje em dia

Microssatélites ou
STRs (2-5 pb)
DNA fingerprint
Perícia
Aplicações Paternidade
 Organismos
05 geneticamente
modificados
OGMs

OGM é um organismo que teve seu material genético

modificado com a engenharia genética
(não necessariamente com material de outra espécie)

Aplicações:
• Agricultura
• Terapia genética
OGMs
OGMs CRISPR