Componentes: Alexandre Xavier Ana Carolina Leite Caroline Maria da Penha Xavier Miriam Palomino Vanessa Melandri

Vrus Chikungunya
Alphavirus Transmitido por mosquitos do gnero Aedes

Febre alta

Dores nas articulaes Dor muscular Dor de cabea

Manchas vermelhas

Histrico de Chikungunya 1952- Surto de Chikungunya no Planalto Maconde- Tanznia

1955- O vrus foi identificado e descrito por Marion Robinson e W.H.R. Lumsden 1963/64- Vrus detectado em cidades Indianas, principalmente Calcut, Maarastra e Vellor. 100.000 infectados e mais de 200 mortes. 1969- Sri Lanka 1975- Vietn e Mianmar 1982- Indonsia 2004- Qunia 2005/2006- 266.000 casos foram reportados nas Ilhas de Reunio onde 200 pessoas morreram. Tambm ocorreram casos no em Estados do Sul da ndia: Kerala, Karanataka, Tamil Nadu e Andhra Pradesh. 2007/2008- Encontrado em vrias partes da ndia e se disseminou por outros pases Sul Asiticos, incluindo Maldivas e Paquisto. Em 2008 as infeces ocorreram na Itlia (254 casos), Singapura e Austrlia. 2010- Casos importados no Brasil, Martinica, Guadalupe, Guiana Francesa e Estados Unidos

Aedes aegypti

Aedes albopictus

Introduo
Alphavirus
Envelopados; Grupo IV e famlia Togaviridae; Fita nica RNA positiva (+ssRNA); RNA genmico > 12000 nt; 4 PTNs no-estruturais; 3 PTNs estruturais principais (Capsdio, E1 e E2)

Introduo
Em pH neutro:
E2 e E1 existe como heterodmero; E2 forma espinhos na superfcie do vrion que interagem com receptores celulares; E1 deita sobre a E2 e medeia a fuso do vrus com a membrana celular durante a entrada na clula

Introduo
2005-2006: Epidemia no oceano ndico: Hiptese:
Anlise no genoma do CHIKV; Mutao de alanina para valina (E1-A226V). A mutao E1-A226V poderia influenciar a infectividade de CHIKV em mosquitos vetores.

Estudos anteriores:

Mutao na mesma posio de E1 = Modulao de requerimentos de SFV para colesterol na membrana alvo; Crescimento mais eficiente de SFV no vetor Ae. albopictus.

Introduo
Para testar a hiptese de que a mutao poderia influenciar na aptido de CHIKV:
Compararam o efeito da mutao na infectividade de CHIKV no mosquito; A habilidade de se difundir para cabea e para as glndulas salivares; Relativa aptido em ensaios de competio para a transmisso por Ae. albopictus e Ae. aegypti para camundongos lactantes.

Introduo
Efeito da mutao E1-A226V na dependncia de colesterol de CHIKV para o crescimento nas clulas C6/36 (Ae. albopictus).
Uma nica mudana no nucleotdeo, surgida durante o surto, aumentou significativamente a aptido do vrus para Ae. albopictus; Dependncia de colesterol do CHIKV na membrana celular dos mosquitos; Essa mudana garantiu a transmisso do vrus por um vetor atpico e contribuiu para a sustentao da epidemia.

METODOLOGIA E RESULTADOS

Hiptese: A mutao no gene da protena do envelope viral E1-A226V ( mutao na posio 266 alamina/Valina) do vrus Chikungunya poderia influenciar na infectividade do vrus ( cepa LR- 2006 OPI 1) no Ae. Albopictus (implicado na epidemia).

METODOLOGIA E RESULTADOS
Comparar o efeito da mutao na efetividade viral no mosquito;
Compararam

o efeito da mutao na infectividade no

mosquito; Avaliaram o potencial epidemico do virus E1-A226V in Ae albopictus e Aegypti em experimento de competio viral; A habilidade de disseminao no mosquito (cabea e glandulas salivares);

Analisaram o efeito da E1-A226V na dependncia do colesterol para adeso do virus Chikungunya na membrana celular;

METODOLOGIA E RESULTADOS
Para testar a hiptese de que a E1-A226V altera a infectividade no Ae. albopictus 1 - Foram construdos clones de RNA viral:

Clone LR-GFP-226A sem mutao Clone LR-GFP-226V - com a mutao Clone 37997-GFP-226A - sem mutao Clone 37997-GFP- 226V com mutaao

Clones epidemia oceano indico

Clone West African strain of CHIKV 37997

METODOLOGIA E RESULTADOS
Effect of E1-A226V Mutation on CHIKV-GFP Viruses Ae. albopictus and Ae. aegypti Midgut Infectivity

METODOLOGIA E RESULTADOS
Avaliaram o potencial epidmico do E1-A226V in Ae albopictus e Ae Aegity em experimento de competio viral;

METODOLOGIA E RESULTADOS
A habilidade de disseminao no mosquito (cabea e glandulas salivares); Figure 3. Effect of E1-A226V Mutation on CHIKV Dissemination into Salivary Glands and Heads of Ae. albopictus and Ae. aegypti Mosquitoes

METODOLOGIA E RESULTADOS
Analisaram o efeito da E1-A226V na dependncia do colesterol para replicao do virus Chikungunya;

DISCUSSO
O surto de CHIKV em Reunion (Frana), o primeiro relatrio documentado de um surto de Alphavirus transmitida pelo Ae. albopictus e esta foi a primeira epidemia de CHIKVcom infeces fatais. Os resultados indicam que a mutao E1-A226V no resultado CHIKV em um aumento na adaptao de CHIKV em Ae. albopictus sobre a infectividade do intestino mdio, a divulgao nas glndulas salivares e transmisso para os vertebrados. Os resultados demonstram que uma nica mutao E1-226V suficiente para aumentar dramaticamente a capacidade de diferentes linhagens de CHIKV para infectar mosquitos Ae. Albopictus. Experimentos complementares demonstraram que uma nica mutao suficiente para modificar a infectividade viral vector de espcies especficas e, portanto, poderia provocar uma epidemia em uma regio que carece o vetor tpico. Isso explicaria a rpida mutao do gentipo CHIKV.

DISCUSSO
Tambm menciona que CHIKV antes de adquirir a mutao E1-A226V, era capaz de producir alta viremia em humanos e ser transmitida por Ae. albopictus. Uma explicao deste processo evolutivo que o vrus CHIKV se adapta a Ae. albopictus com um aumento na infectividade (menos OID50) e os limites da viremia humano necessrios para a infeco de Ae. albopictus pode ocorrer mais cedo e permanecem por mais tempo.
OID50: infecciosas dose oral50

DISCUSSO
Durante a viremia em humanos (6 dias), a carga da CHIKV pode ser 3.3x109ARN/ml sangue que corresponde 6-7 Log10TCID50 /ml. Portanto, a carga do vrus em humanos 1-2 Log10TCID50/ml acima Log10OID50/ml para E1-226A pero 3-4 Log10TCID50/ml maior do que Log10OID50/ml para E1-226V. Conseqentemente, durante viremia CHIKV carga de sangue deve ser alta o suficiente para que E1-226V pode infectar Ae. albopictus, abaixo do limite de infeco com E1-226A. Este aumento da infeco em Ae. albopictus, poderia perpetuar a seleo e transmisso do vrus mutante.
TCID : Dose de cultura de tecidos Infecciosas

DISCUSSO
Durante os ensaios de competio de transmisso, apenas E1-226V foi transmitida ao camundongos lactentes por Ae. albopictus, embora nesses experimentos, os ttulos de E1-226V e E1-226A foram elevados para permitir que ambos os vrus podem infectar essas espcies de mosquitos de forma eficiente. possvel que Ae. albopictus mecanismos esto associados a uma divulgao mais eficiente do E1226V vrus em comparao com o vrus E1-226A. Isso poderia encurtar o EIP e pode ter contribudo para um evento evolucionrio da CHIKV durante o surto de Reunio, porque o mosquito infectado com o vrus LR226V pode ser transmitido mais rapidamente do que os mosquitos infectados com o vrus LR-226A.

% de Infeco cl intestinais X Ttulo viral na alimentao

viremia no hospedeiro vertebrado

COMPETNCIA PARA COLONIZAR CLULAS DO INTESTINO

DISSEMINAO PARA GLNDULAS SALIVARES E CABEA

EFEITO DA TRANSMISSO POR Ae. albopictus e Ae. aegypti

INFECO

DISSEMINAO

TRANSMISSO

INFECO

DISSEMINAO

TRANSMISSO

Competncia da mutao 226V Em regies onde o Ae. aegypti o vetor primrio, a na associao com 226V no seria suficiente para um efeito de evoluo do CHIKV Deferentemente ocorre com Ae. albopictus, fortalecendo a hiptese de que o 226V foi especialmente selecionado como um resultado de adaptao do CHIKV p/ albopictus.

O Surto de CHIKV E1-A226V (2005-2006) na Ilha Reunion Ae. albopictus Menor perodo extrinseco; Infeco do vetor com menor viremia dos hospedeiros; Vantagem na competio com aegypti; Maior versatilidade de criadouros; Ponte na transmisso devido hbito silvestre, peri e urbano; Maior ecletismo no hbito alimentar.

DISCUSSO
A virose E1-226A pode ter efeito benfico desconhecido sobre a aptido de CHIKV em hospedeiros vertebrados maior do que na virose E1-226V, e menor efeito negativo de E1-226A observado em experimentos de transmisso por Ae. aegypti pode ser compensada por replicao viral mais eficiente no hospedeiro vertebrado, levando para uma adaptao globalmente mais eficiente para o ciclo de transmisso. A comparao dos diferentes efeitos dos resduos A ou V na posio E1-226 na infectividade do CHIKV para e transmisso por Ae. aegypti e Ae. albopictus claramente sugere que polimorfismos nesta posio podem determinar a gama de hospedeiros dos alfavrus e podem desempenhar um papel importante na adaptao do vrus para o mosquito vetor particular.

DISCUSSO
A adaptao do CHIKV para Ae. albopictus coincidiu com a aquisio da dependncia de colesterol na membrana alvo por CHIKV. Sabe-se que diferentes mutaes numa mesma regio da protena E1 do SFV (Vrus da Floresta Semliki) e vrus Sindbis podem modular a dependncia de colesterol desses vrus e que a independncia de colesterol do SFV coincide com um crescimento mais rpido do vrus em Ae. albopictus. Atualmente no se sabe se a dependncia por colesterol dos alfavrus diretamente responsvel pela modulao da aptido dos alfavrus por mosquitos vetores. Uma possvel explicao para os efeitos opostos do fentipo pela dependncia de colesterol do SFV e CHIKV na aptido em Ae. albopictus pode refletir o uso de tcnicas diferentes para a infeco do mosquito. No estudo, os mosquitos foram infectados por via oral atravs de refeies sanguneas ricas em colesterol, ao passo que no estudo anterior SFV, o mosquito foi inoculado intratoracicamente.

DISCUSSO
Tambm possvel que os vrus colesterol-dependentes e colesterol independentes repliquem de formas diferentes em diferentes rgos do mosquito. Os dados indicam que a colonizao mais eficiente das clulas do intestino mdio de Ae. albopictus por LR-ApaI-226V colesterol-dependente seguido por um crescimento relativamente mais rpido do vrus colesterol independente LR 226A no corpo dos mosquito entre 3 e 5 dpi coincidindo com o escape do vrus para o intestino mdio do mosquito.

DISCUSSO
Alinhamento das seqncias de aminocidos que constituem o circuito ij da protena E1 de diferentes membros do gnero revelou que posio E1-226 dos alfavrus no conservada e pode variar at mesmo entre as diferentes estirpes do mesmo vrus. Neste sentido, seria razovel determinar a exigncia de colesterol de outros alfavrus clinicamente importantes, especialmente vrus da encefalite equina venezuelana (VEEV) e vrus da encefalite eqina do leste (EEEV), que mostra uma variao intra-deformao significativa na posio E1-226 entre os isolamentos naturais desses vrus e determinar as mutaes que so capazes de modular a sua dependncia por colesterol. Tambm seria de interesse para determinar as possveis relaes entre as mutaes que modulam a dependncia de colesterol de alfavrus que no CHIKV e sobre a sua infecciosidade para Ae. aegypti e Ae. albopictus e talvez outros mosquitos vetores epidemiologicamente importantes.

DISCUSSO
Os mecanismos moleculares responsveis pela associao entre a gama de hospedeiros e a dependncia de colesterol do CHIKV so desconhecidas. Tem sido proposto que aps a exposio ao pH baixo, a protena E1 colesterol-dependente de composio lipdica da membrana alvo do vrus, passa por uma reao de reconhecimento colesterol dependente que no necessria para vrus colesterol independente. possvel que CHIKV infecte as clulas do intestino mdio de Ae. aegypti e Ae.albopictus usando diferentes vias endocticas, tendo o vrus como alvo compartimentos celulares com contedos lipdicos diferentes onde ocorre a fuso. Lipdios especficos, tais como o colesterol podem afetar diferencialmente a fuso de cepas CHIKV colesterol-dependente e colesterol-independente nestes compartimentos e, portanto, definir o resultado de infeco.

DISCUSSO
Embora estudos laboratoriais anteriores demonstrem susceptibilidade do Ae. albopictus infeco CHIKV, os dados do presente estudo, demonstram que a mutao E1-A226V promove infeco e disseminao acelerada do CHIKV em Ae. albopictus conferindo uma vantagem seletiva sobre a infeco do Ae. aegypti. Embora a mutao no aumente o ttulo viral mximo atingvel nos mosquitos, os efeitos sinrgicos de maior infectividade e disseminao mais rpida do vrus E1-A226V em Ae. albopictus pode acelerar a transmisso do vrus para populao humana susceptvel, o que teria contribudo para iniciar e manter a epidemia de 2005-2006 CHIKV na Ilha Reunio. A mudana de um nico aminocido pode atuar em mltiplos efeitos fenotpicos para criar uma situao de epidemia, tendo implicaes para outros artrpodes transmissores de vrus e a evoluo de doenas humanas infecciosas.

FIM