3.

4 Estudo cintico do processo Tendo em vista as condies pr-estabelecidas (meio composto por 33,25% de resduo de maracuj em farelo de trigo, umidificado a 62,5% com soluo nutriente 0,43% de uria e 0,3% de KH2PO4 em HCl 0,1M, sob aerao de 0,5 vvm), foi realizado o estudo cintico do processo. O mximo de atividade poligalacturonase (12 U/mL), foi alcanado em 64 horas de fermentao, conforme mostrado na figura.No mesmo ponto, a atividade protease tambm atingiu seu valor mximo de 5,7 U/mL. Considerando os dados apresentados na figura, verificouse que foram obtidas atividades poligalacturonase e protease superiores a alguns dados da literatura e em perodos de fermentao menores ou similares. Em alguns estudos similares, utilizando resduos do processamento do maracuj, casca de manga farelo de trigo e bagao de laranja, em tempo de fermentao prximo ou muito superior, obtiveram-se nveis de atividade mximas abaixo dos obtidos nesse estudo. O estudo que obteve dados mais similares ao desse estudo foi o que utilizou farelo de soja no meio, que em 72 horas de fermentao permitiu obter atividade 5,5 U/mL. A atividade pectinesterase desse trabalho, no ultrapassou 1,0 U/mL. Em estudos acerca da degradao da pectina, relata-se que a pectinesterase s pode ser determinada na ausncia de poliga-lacturonase, pois altamente influenciada pela concentrao da mesma. Ressalta-se que, a comparao de dados de estudos diferentes deve ser feita levando-se em considerao que nos cultivos em meio slido, a obteno de diferentes nveis de eficincia, em relao formao do produto desejado, e

depende no todo de fatores que influenciam os cultivos em estado slido, do substrato e da espcie microbiana utilizados, alm da metodologia utilizada para quantificao, dentre outros (umidade, aerao, temperatura). A abaixo expressa os resultados obtidos na cintica de produo das enzimas em U/g de substrato seco.

Tabela Atividades das enzimas poligalacturonase, protease e pectinesterase ao longo da fermentao

Observou-se que a umidade do meio aumentou de 46,10 % para 57,27%,no ponto de maior atividade da poligalacturonase, durante o processo fermentativo. Esse aumento deve-se, muito provavelmente, ao ar de entrada que se apresentava com umidade ligeiramente superior a do meio. Outro fator que pode ter acrescentado umidade ao meio foi a diferena de temperatura do meio de cultivo e o ambiente externo,o que favoreceu a condensao do liquido no topo das colunas que no estavam submersas no banho termosttico.

O pico de biomassa quantificada atravs do contedo de glicosamina, que um componente estrutural presente na parede celular dos fungos, foi de 21,54 mg/g em 64 horas de fermentao. A curva de crescimento tem um perfil clssico uma vez que pode-se observar as fases inicial e exponencial bem definidas. Aps esse perodo, verificou-se o declnio da biomassa, principalmente devido escassez de nutrientes no meio, uma vez que estes foram consumidos pelos microrganismos e no foram repostos ao longo do processo. Provavelmente houve lise celular e com isso, os componentes da parede celular, que teve sua estrutura comprometida, provavelmente foram utilizados como fonte de carbono, pelo microrganismo que continua em atividade.

CONCLUSES

Os resultados indicam elevado potencial de emprego do resduo de maracuj, como indutor e substrato, abundante e de baixo custo, na sntese da enzima poligalacturonase, atravs do processo de fermentao semi-slida em biorreatores de coluna, utilizando a linhagem A.niger mutante 3T58B8. Nos intervalos analisados, as condies mais adequadas sntese da enzima poligalacturonase foram:

Farelo de trigo enriquecido, com 33,25% de resduo de maracuj a 62,5%;

umidificado

Soluo 0,43% de CH4N2O; Soluo 0,30% de KH2PO4 em HCl 0,1 M, sob aerao de 0,5

vvm a 32C.

Com estas condies, atingiu-se o pico de atividade poligalacturonase (12,01 U/mL). Os valores das atividades enzimticas obtidos durante a cintica, sugerem um tempo mximo de fermentao de 64 horas para a recuperao do extrato enzimtico, uma vez que aps esse perodo ocorreu um declnio na produo da poligalacturonase e das demais enzimas analisadas.