UPC II - M PROTOCOLOS

UPC II - MICROBIOLOGIA
Aula Prtica 2

Meios de Cultura

Os meios de cultura (preparaes lquidas, slida ou semi-slidas) contm os nutrientes necessrios ao crescimento de microrganismos e so utilizados para o cultivo e manipulao de microrganismos e manter culturas puras em laboratrio. Os meios lquidos so frequentemente denominados caldos e so utilizadas quando se pretende obter um grande nmero de microrganismos.

Os meios slidos so muitas vezes constitudos pelos mesmos componentes dos meios lquidos mas aos quais se adicionou agar ou outro agente solidificante. Um bom agente gelificante no pode ser txico ou inibir o crescimento nem, deve ser metabolizado pelos microrganismos. Os meios slidos utilizam-se quando se pretende isolar colnias de microrganismos. Os meios semi-slidos possuem um estado fsico intermdio que permite, por exemplo, a sua utilizao para ensaios relacionados com a mobilidade de microrganismos.

Os meios de cultura devem ter os nutrientes indispensveis ao crescimento dos microrganismos. Quando os requisitos nutricionais de um microrganismo so totalmente conhecidos podem utilizar-se meios definidos, ou seja, meios em que cada componente adicionado separadamente e perfeitamente quantificado. No entanto, na maior parte das vezes so utilizados meios complexos que so aqueles que tm compostos como extracto de levedura, extracto de carne, extracto de solo, etc., cuja composio qumica extremamente complexa e desconhecida, mas que contm os factores necessrios ao crescimento do microrganismo pretendido. Os meios podem ainda ser selectivos quando se pretende cultivar um tipo particular de microrganismos em detrimento de outros. Assim, os meios selectivos ou no tm nutrientes essenciais a um determinado tipo de microrganismos ou tm substncias

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que inibem o crescimento de outros microrganismos. Deste modo conseguem seleccionar-se os microrganismos de interesse. H ainda meios diferenciais que permitem a distino entre diferentes grupos de microrganismos com base na capacidade de metabolizar componentes especficos do meio de cultura ou na morfologia das colnias. Como exemplo, o meio agar de sangue (gelose da sangue) permite distinguir entre bactrias hemolticas (-, - ou -hemolticas) e no hemolticas.

Fig. 1: Atividade hemoltica em gelose de sangue

A. Preparao de meios de cultura slidos Na maior parte dos casos os meios de cultura so vendidos desidratados e com o agar j adicionado na proporo adequada. Assim, para preparar estes meios de cultura basta hidrat-los. Para prepara 200 ml de meio de cultura:

Calcular a quantidade de meio desidratado a pesar. Colocar o meio previamente pesado numa proveta de 250 ml. Adicionar gua destilada (cerca de 180ml). Homogeneizar, utilizando uma barra e um agitador magnticos. Retirar o magnete e perfazer o volume pretendido. Distribuir o meio em frascos de 500ml.

Nota: os frascos com meio de cultura para autoclavar no devem exceder a metade da sua capacidade. As rolhas/ tampas devem estar pouco apertadas durante o processo de esterilizao, para garantir a sua eficcia.

Colocar fita de autoclave e identificar o frasco. Esterilize o meio de cultura durante 15 minutos, a 121 C presso de 1 atm. Aps a esterilizao, deixe arrefecer o meio de cultura (at cerca de 50C) e distribua-o por placas de Petri estreis, em condies de assepsia.

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B. Preparao de soro fisiolgico. Soro fisiolgico uma soluo isotnica que contm 0,9%, em massa, de cloreto de sdio em gua destilada. Para preparar 50ml:

Calcular a quantidade de sal desidratado a pesar. Pesar a quantidade previamente calculada e coloc-la num tubo de 50ml. Adicionar 50ml de gua destilada. Homogeneizar a soluo salina e distribuir por tubos pequenos (capacidade 10ml) Tape os tubos de ensaio sem apertar completamente a tampa. Colocar fita de autoclave e identificar o tubo. Autoclavar durante 15 minutos, a 121 C e a 1atm. Aps a esterilizao aperte totalmente as tampas dos tubos.

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