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Utilização de Invertebrados Bentónicos em Ecotoxicologia Sedimentar
Utilização de Invertebrados Bentónicos em Ecotoxicologia Sedimentar
Departamento de Biologia
Dedico este trabalho minha mulher e ao meu filho, pelo tempo que de mim renunciaram.
O jri
Presidente
Vogal- Orientador
Agradecimentos
Quero deixar por escrito, o reconhecimento e o agradecimento sincero aos meus Orientadores, Professor Doutor Victor Quintino e Doutora Rosa Freitas.
palavras-chave
resumo
Os ensaios de ecotoxicologia sedimentar so uma ferramenta importante para a avaliao dos ecossistemas marinhos e estuarinos. A fauna bentnica ser das que primeiro se recente com os excessos de poluio, devido ao seu habitat natural se localizar no meio sedimentar, local ecologicamente bastante frgil e que ao ser afectado, trar implicaes importantes a todos os diferentes estratos que constituem o ecossistema. Neste trabalho, realizada uma reviso bibliogrfica sobre ensaios de ecotoxicologia sedimentar procurando dar nfase a um dos seus principais intervenientes: os anfpodes, em particular do gnero Corophium. Por outro lado, tentamos traar uma panormica geral sobre a forma como esta questo est a ser lidada por diferentes pases, com apresentao de alguns casos de estudo de Portugal.
keywords
abstract
Sediment ecotoxicological tests are an important bioassessment tool for marine and estuarine ecosystems. The benthic fauna is often the first to be affected by excesses pollution, the sedimentary habitat is ecologically fragile and when affected, will bring important implications for all other ecosystem strata. This work presents a literature review on the subject of sediment ecotoxicological tests, with emphasis in one of its key players, the amphipods, namely of the genus Corophium. The work gives an overview on how this issue is being handled in different countries, and presents case studies group relative to Portugal.
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ndice Pag.
1.Introduo____________________________________________________________9
2. Avaliao ecotoxicolgica dos sedimentos__________________________________11 2.1 A importncia da avaliao da qualidade dos sedimentos______________________11 2.2 Ensaios de toxicidade: organismos-teste___________________________________13 2.3 Ensaio agudo vs ensaio crnico _________________________________________17 2.4 Conceitos a ter na utilizao de ensaios de toxicidade________________________18 2.5 Uso simultneo de multiplos descritores da Qualidade Sedimentar)_____________21 3. Utilizao de anfpodes em ensaios de toxicidade nas ltimas duas dcadas________25
4. Concluso____________________________________________________________51
Bibliografia_____________________________________________________________53
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1. Introduo
Nos ltimos anos, a qualidade dos ambientes marinhos, estuarinos e de guas doces, tornou-se foco de ateno, havendo hoje em todo o mundo interesse na sua conservao e na recuperao dos locais sujeitos a presses antropognicas. Esta recente preocupao coincidiu com o facto de os sedimentos marinhos serem reconhecidos como um dos maiores reservatrios de substncias txicas (entre outros, Chapman, 1995; Chapman, 2004; Adams, 2005), o que levou ao desenvolvimento de diversos mtodos de avaliao da sua qualidade. Pela bibliografia consultada podemos perceber que estes mtodos tm-se revelado extremamente teis na avaliao dos nveis de contaminao e do seu significado ecolgico nos diferentes ambientes aquticos, funcionando como instrumentos importantes para a proteco e conservao dos ecossistemas e tambm da sade pblica (Chapman, 1995; Silva et al., 2004; Castro et al., 2006; R et al., 2007). A deteco de efeitos txicos a um nvel de organizao biolgica abaixo do organismo pode servir como um sinal de alerta precoce para os potenciais efeitos nos nveis superiores. A bioacumulao num elo inferior da cadeia alimentar, pode levar sua captao e a possveis efeitos txicos que se podem manifestar em qualquer elo da cadeia at ao consumidor final. Se se poder estabelecer uma relao entre um efeito ao nvel da populao e a bioamplificao de contaminantes, ento ser de implementar uma aco preventiva (Hellou et al., 2008). Nos ecossistemas aquticos a macrofauna bentnica desempenha um importante papel. Como principais consumidores secundrios, estes organismos representam um importante elo de ligao entre os produtores primrios e os nveis trficos mais elevados (Allaby, 1999). Constituem tambm uma importante fonte de alimento para peixes e crustceos (Allaby, 1999) e podem melhorar a qualidade da gua uma vez que grande parte dos organismos pertencentes macrofauna bentnica se alimenta por filtrao das partculas em suspenso (Holand, 1990). As populaes bentnicas esto representadas em diversos grupos taxonmicos que, de uma forma geral, se relacionam com todos os aspectos do habitat aqutico, nomeadamente ao nvel das diferentes estratgias de alimentao, dos modos reprodutivos, das suas caractersticas especficas de vida e da tolerncia fisiolgica s condies ambientais. A maioria dos organismos bentnicos tm mobilidade limitada no podendo desta forma evitar a presso ambiental a que podero
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estar sujeitos. Como resultado, as respostas de algumas espcies servem como indicadores, privilegiados, de mudanas na qualidade dos ambientes aquticos e, mais concretamente, das alteraes introduzidas nos sedimentos onde residem (EPA, 1992). Pelos motivos atrs referidos, vrios investigadores (Chapman et al., 1987; Defew et al., 2002; Borja et al., 2003; Belan, 2003; Silva et al., 2004; Reiss e Krncks, 2005; Bigot et al., 2006; Castro et al., 2006; Scarlett et al., 2007; Picone et al., 2008, entre outros) tm utilizado invertebrados bentnicos em estudos cujo objectivo se centra na avaliao da qualidade dos sedimentos nomeadamente no que diz respeito aos efeitos biolgicos e ecolgicos associados ao seu grau de contaminao. Pela bibliografia consultada, fcil perceber que os testes de toxidade sedimentar efectuados em laboratrio constituem uma ferramenta importante que juntamente com outras, como por exemplo a anlise qumica dos sedimentos ou a avaliao da estrutura da comunidade bentnica autctone, contribuem para uma avaliao mais abrangente dos problemas relacionados com o meio ambiente. Deste modo possvel atravs das amostra sedimentares recolhidas, averiguar se houve alteraes e se essas alteraes se devem ou no, presena de txicos nos sedimentos (Chapman, 2007). objectivo do presente trabalho, fazer uma anlise sumria sobre a situao do emprego da fauna bentnica, nomeadamente o uso de anfpodes, nos testes de avaliao do estado do ambiente sedimentar.
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iniciais do sedimento e estes, por sua vez, tambm podem ser usados como um sedimento de referncia (Chapman et al., 2002). Em avaliaes tpicas de sedimentos, nos testes de toxicidade feita a comparao com o sedimento de referncia, ou com uma condio tida por referncia. Do ponto de vista tcnico, um sedimento de referncia seria aquele no qual estariam ausentes todos os produtos qumicos que poderiam causar problemas (ou seja, um sedimento no contaminado, mas por outro lado, idntico ao que se quer testar). Isto permitiria uma avaliao em relao ao ou aos produtos qumicos presente(s) no sedimento que representavam um perigo efectivo. No entanto, tal situao ideal raramente existe em condies naturais (Chapman et al., 2002). Avaliaes efectuadas com recurso ao sedimento de referncia so, por definio, apenas estimativas do perigo, calculadas tomando como base comparaes de dados estatsticos. Quando essas comparaes so feitas, elas devero ser adequadas avaliao que se pretende realizar. Por exemplo, um porto no deve ser comparado com uma rea protegida, a menos que se tenha tomado a deciso de eliminar esse porto e tornar a rea protegida (Chapman et al., 2002). Contudo, a extrapolao dos resultados dos testes para o ambiente e ao mesmo tempo, a medio do sucesso ou o fracasso de decises de gesto, pode exigir a utilizao de diferentes parmetros de avaliao, uma vez que o que est para ser protegido e o que avaliado, muitas vezes diferente, devido essencialmente, a consideraes de carcter prtico. Esses parmetros de avaliao so seleccionados numa fase inicial do problema relativo a uma avaliao do risco ecolgico (EPA, 1992) e reflectem uma componente ecolgica (por exemplo, espcies) ou uma funo a ser protegida e, quando adequado, so expressos ao nvel da populao (Chapman et al., 2002). Seria desejvel a existncia de um mecanismo que permitisse testar hipteses de risco que relacionassem, de forma clara, a ligao existente entre o agente agressor e o impacto negativo. Isto na maioria dos casos no fcil de fazer, mas uma das formas de se obter sucesso neste tipo de abordagem, considerar como componente fundamental formulao das hipteses, a identificao dos agentes agressores que representem risco potencial (Chapman et al., 2002). ainda importante referir que, se por um lado os dados fornecidos pela comunidade bentnica residente juntamente com os dados sobre toxicidade de sedimentos so essenciais para analisar dois critrios de causalidade fundamentais: (1) consistncia da
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associao entre factor de impacto e efeito(s), e (2) gradiente (no tempo ou no espao) da relao entre a dose e a concentrao (Chapman, 2007), por outro lado, a avaliao do risco ecolgico (ERA), necessita de dar resposta a duas questes igualmente importantes, em relao aos sedimentos: - Quais so os agentes agressores presentes nos sedimentos que motivam preocupao, e se eles representam situao de perigo para os receptores ecolgicos avaliados? - Qual a probabilidade de estes agentes agressores afectarem negativamente esses receptores ecolgicos? Refira-se ainda que a bioacumulao de contaminantes nos tecidos dos organismos em contacto com o sedimento tambm motivo de preocupao, tanto sob o ponto de vista da sade humana como da componente ecolgica (Power e Chapman, 1992). Posto isto, podemos afirmar que os parmetros do ensaio de toxicidade devem ser ligados s hipteses de risco especfico que relacionam os factores de impacto a possveis perigos, e os resultados desses testes devero ser interpretados no contexto da populao ou da comunidade que estamos a tentar analisar e proteger. Embora a significncia estatstica possa ter um papel de algum relevo, na avaliao do risco de contaminantes existentes nos sedimentos, ela no deve servir de suporte directo quantificao do risco ecolgico. Da que em matria de avaliao dos sedimentos, as decises devam ser tomadas com base na magnitude e extenso dos impactos adversos estabelecidos, previamente, nos parmetros de avaliao, e no apenas, na simples observao dos resultados obtidos em testes de toxicidade (Chapman et al., 2002).
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esto expostos aos contaminantes (associados ao sedimento) durante longos perodos de tempo. Devido ao facto de as comunidades bentnicas poderem ser afectadas estrutural e funcionalmente pela qualidade do sedimento, geralmente de forma previsvel, a avaliao da estrutura da comunidade bentnica, constitui um instrumento valioso para aferir da qualidade dos sedimentos e dos seus efeitos sobre uma grande quantidade de componentes biolgicos do ambiente marinho, estuarino e dos ecossistemas de gua doce. A utilizao da fauna bentnica de forma sistemtica e coerente, com objectivo de controlo, monitorizao e avaliao da qualidade dos sedimentos, tem j mais de 30 anos. De facto diversos estudos tm demonstrado que os macroinvertebrados bentnicos, como grupo, so muitas vezes o melhor instrumento de avaliao da qualidade dos sedimentos. Historicamente, as comunidades bentnicas tm sido utilizadas como indicadores sensveis e eficazes dos impactos da poluio sobre os ecossistemas marinhos e estuarinos. Alm disso, estas comunidades tm-se revelado extremamente teis em estudos relativos eficcia da gesto de ambientes aquticos. Adicionalmente, informaes sobre as alteraes na populao bentnica e nos parmetros da comunidade devidas s caractersticas dos sedimentos, podem ser usadas para distinguir variaes naturais de mudanas devidas actividade humana (Holand, 1990). Existe uma base de dados substancial sobre o tipo de respostas destes animais em relao a xenobiticos, nutrientes e outras perturbaes fsico-qumicas (Burton, 1992). No entanto, e apesar do que atrs se disse, h investigadores, tal como Moiseenko (Moiseenko et al., 2008), que entendem, sobretudo quando se trata de poluio existente na gua, que os peixes em comparao com os invertebrados so mais sensveis a um maior nmero de txicos e constituem um bom teste prtico na avaliao do estado dos ecossistemas. Nestes estudos de toxicidade sedimentar, dada preferncia a determinado tipo de animais como por exemplo, os bivalves, os poliquetas e os anfpodes: Os bivalves so um grupo extremamente bem sucedido e diversificado. So animais exclusivamente aquticos que, tal como os anfpodes, podem ocorrer em ambientes de salinidade diversa como gua salgada, doce ou salobra. A maioria das espcies bentnica sendo que existem bivalves ssseis que se fixam ao substrato atravs do bisso, uma segregao fibrosa, enquanto que outras espcies vivem enterradas nos fundos arenosos. As espcies que vivem soltas, podem deslocar-se atravs de propulso
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conseguida por expulso de gua sob presso (Allaby, 1999). Alguns investigadores utilizam-nos em ecotoxicologia sedimentar, entre outros, Ruiz et al. (1994) e Quintino et al. (2008). Os poliquetas incluem cerca de 8.000 espcies aquticas. A grande maioria das espcies tpica de ambiente marinho, mas algumas formas ocupam ambientes de gua salobra. Os poliquetas distribuem-se desde a zona intertidal at profundidades que ultrapassam os 5000 metros. A classe Polychaeta geralmente dividida em dois grupos: Errantia e Sedentaria. Como o prprio nome indica, os poliquetas errantes tm vida livre seja nadando na coluna de gua ou como organismos bentnicos mveis. A maioria das espcies deste grupo predadora de pequenos invertebrados ou detritvora. Os poliquetas sedentrios esto adaptados para viver permanentemente em tubos escavados no substrato ou fixos a rochas. So na maioria dos casos organismos detritvoros ou filtradores (Allaby, 1999). So tambm usados pelos investigadores de ecotoxicologia sedimentar como o caso, entre outros, de Belan (2003) e Quintino et al. (2008). Os anfpodes possuem uma relevncia ecolgica bastante grande uma vez que se trata de um dos principais componentes da biomassa e da diversidade, em ambientes caracterizados por um leque de salinidades muito variadas (R, 1996). Eles so uma fonte primria de alimento para peixes e outros animais que se alimentam tambm de vegetais e de detritos (Allaby, 1999). Por outro lado, existe uma base de dados substancial sobre o tipo de respostas destes animais em relao a diversas perturbaes fsico-qumicas (ASTM, 2003). De uma forma geral, as melhores espcies para avaliar a toxicidade dos sedimentos devem fornecer uma indicao adequada dos perigos ligados aos agressores qumicos existentes no sedimento. Os anfpodes so reconhecidos como a escolha mais acertada para a avaliao de toxicidade de muitos sedimentos, e os resultados obtidos nos testes podem ser correlacionados positivamente com alteraes nas comunidades bentnicas (Swartz et al., 1994; Long et al., 2001; R et al., in press). Poucos grupos taxonmicos cumprem todos os critrios necessrios para a realizao de bioensaios com sedimentos (ver seco 2.4), no entanto, os anfpodes revelaram-se extremamente teis no alcanar dos objectivos propostos para os diferentes ensaios, sendo por isso, comummente utilizados em testes de toxicidade nos sedimentos (Costa et al., 1996; R, 1996; Peters e Ahlf, 2005; King et al., 2006; Heuvel-Greve et al.,
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2007; Melo e Nipper, 2007; Prato et al., 2008). So organismos abundantes, componentes importantes das comunidades bentnicas estuarinas e marinhas, esto amplamente distribudos, vivem em contacto directo com os sedimentos, so tolerantes a uma vasta gama de diferentes variveis ambientais e so adequados para o manuseamento e cultura em laboratrio (Casado-Martinez et al., 2007). No entanto, deve referir-se que a sensibilidade de cada espcie aos sedimentos contaminados, depender do tipo de comportamento que possui (escavador, tipo de alimentao e taxas de filtrao), do tipo de exposio ao txico (dissolvido na gua vs no sedimento vs no alimento), fisiologia orgnica (assimilao e efeitos txicos) e a fase da vida (juvenis vs adultos) (King et al., 2006). Os trabalhos de Prato e seus colaboradores (2008) realizados com anfipodes, alertam para o facto de uma boa espcie a ser utilizada em ensaios de toxicidade, alm de satisfazer os critrios necessrios investigao experimental, como ter um curto ciclo de vida e ser sensvel aos contaminantes existentes nos sedimentos, deve tambm ser tolerante em relao s variveis ambientais abiticas, como por exemplo a temperatura. Dentro dos anfpodes, o gnero Corophium dos mais utilizados em ensaios de toxicidade sedimentar. um animal relativamente pequeno, podendo alcanar comprimentos mximos na ordem dos 12 mm (com excluso das antenas), atingindo a maturidade sexual com comprimentos da ordem dos 5 mm (Percy, 1999). Por outro lado, sabe-se atravs de estudos experimentais com Corophium, que a temperatura, a salinidade e o tipo de sedimento afectam a sobrevivncia, a maturao sexual e o nmero de recmnascidos (R, 1996; Prato et al., 2008). Os estudos efectuados com este organismo mostram que no s extremamente abundante e prolfico em numerosos tipos de meio aquticos, como parece ser tambm uma das estruturas fundamentais para o funcionamento sustentado de todo o ecossistema em que se insere (Percy, 1999). Corophium volutator pertence a este gnero e um exemplo duma espcie utilizada em ensaios de toxicidade para avaliao do sedimento, estando o seu uso generalizado e regulamentado, caso dos EUA e Canada, mas tambm na Europa (SETAC Europe, 1993 e ISO 16712, 2005). Em relao utilizao de anfipodes em testes de toxicidade sedimentar, ainda importante referir que alguns autores salientam que o facto de se utilizarem animais selvagens, colhidos directamente do leito sedimentar, pode estar ligado a vrios inconvenientes importantes: os animais esto sujeitos flutuao e variabilidade sazonal
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da populao (entre outros, R, 1996); devido contaminao existente no local de amostragem pode ocorrer que o organismo-teste seja tolerante a determinado tipo de contaminantes (Traunspurger e Drews, 1996). Da Peters e Ahlf (2005), entenderem que para a execuo deste tipo de bioensaio se torna importante o cultivo destes organismos sob condies padronizadas de laboratrio, mostrando ser possvel a cultura em laboratrio de C. volutator. Note-se, no entanto, que j em 1996, R, no seu estudo sobre a cultura laboratorial de C. multisetosum, defendia o mesmo.
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sedimentos marinhos e estuarinos so mais susceptveis de conter contaminantes txicos em quantidades moderadas, que podem no causar uma mortalidade aguda significativa, mas influenciarem de forma muito substancial, por exemplo, o crescimento e a reproduo. De facto, embora os ensaios agudos sejam uma ferramenta vlida e normalizada (ISO, 2005), os ensaios crnicos so considerados mais sensveis s perturbaes induzidas no sedimento e podem, assim, proporcionar um maior grau de proteco ambiental. Efeitos subletais, como a reproduo ocorrida com baixas concentraes do contaminante, podem tambm ser utilizados para prever efeitos mais subtis ao nvel da populao. Este facto torna os ensaios crnicos ecologicamente mais relevantes sendo, ao mesmo tempo, uma ferramenta til para a avaliao do risco em cenrios realistas de exposio ambiental (Heuvel-Greve et al., 2007). Heuvel-Greve et al. (2007) por exemplo, demonstram que com os parmetros crescimento e reproduo, o ensaio crnico que levaram a cabo, incrementou 7 a 18 vezes a sensibilidade amnia e aos nitritos quando comparado com o ensaio agudo padronizado (10-dias, mortalidade). Actualmente, comeam a surgir testes onde a fronteira entre teste agudo e teste crnico se encontra mais esbatida, podendo um teste agudo possuir caractersticas tpicas de um teste crnico e vice-versa.
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ou retardando os processos qumicos e/ou actividade biolgica e evitando a sua contaminao. Deve ser recolhido suficiente volume de amostra para se poder fazer as anlises necessrias, criando o respectivo stock de amostras para eventual anlise posterior (por exemplo, para a repetio de ensaios). As amostras devero preencher completamente o recipiente de armazenamento, no permitindo a entrada de ar. Se a amostra for congelada, deve ser tida em considerao a respectiva expanso. O sistema de marcao dos recipientes onde so colocadas as amostras, deve ser testado antes de ser utilizado no campo, cuidando para que possa resistir imerso, secagem e congelao sem se soltar ou tornar ilegvel (USEPA / USACE, 1991). A escolha dos recipientes de amostra deve considerar o tipo de sedimento, tempo de armazenamento, degradao qumica e de composio da amostra. Dado que as primeiras horas so as mais crticas quanto a possveis alteraes na amostra, as etapas de preservao devem ser iniciadas rapidamente, aps a colheita dos sedimentos. A preservao, seja por meio de refrigerao, de congelao, ou adio de produtos qumicos, deve ser realizada no campo, assim que possvel. Se as tcnicas de preservao no poderem ser executadas no campo, as amostras devem ser conservadas de forma a manterem a sua integridade (ASTM, 1990). Verificou-se que os sedimentos podem ser armazenados a 4 C, sem alteraes significativas na toxicidade. A concluso dos testes dever ocorrer idealmente dentro de um perodo de armazenamento correspondente a duas semanas, mas o tempo de armazenamento vai depender das caractersticas tanto dos sedimentos como dos contaminantes (ASTM, 1990). O sedimento para as amostras de testes biolgicos deve ser crivado numa malha de 1mm, para remover todos os organismos vivos do sedimento antes do ensaio. Outros elementos retidos, no crivo, juntamente com os organismos, tais como fragmentos de conchas, cascalho, e detritos, devero ser registados e descartados evitando a presena de organismos indgenas no sedimento teste. A abundncia de organismos teste ou taxonomicamente semelhantes no sedimento a testar tornam a avaliao dos efeitos difcil de interpretar. Alm disso a presena de organismos pode afectar negativamente a sobrevivncia dos organismos teste (ASTM, 1990). As amostras de sedimentos para uso em ensaios devem ser bem homogeneizadas antes de as utilizar. A heterogeneidade dos sedimentos pode tornar por vezes difcil a
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interpretao dos resultados laboratoriais, por grande variabilidade de respostas intra sedimentos, ( R, 1996). R (1996), refere ainda que de primordial interesse o conhecimento da sensibilidade de adultos e jovens a variveis naturais como a temperatura, salinidade e teor em finos do sedimento para que possam ser determinados os limites de tolerncia da espcie para estes factores. Desta forma poder-se-o determinar as condies mais apropriadas para a preparao e realizao dos ensaios de toxicidade. Relativamente aos ensaios crnicos, R (1996) chama ateno para o facto de ser importante salientar que, em ensaios de rotina de ciclo de vida completo, a experincia do operador, quer na manuteno de culturas quer na manuteno e finalizao do ensaio, de primordial importncia, pois pode reflectir-se nos resultados obtidos. Assim, enquanto que a experincia do operador pouco determinar os resultados de toxicidade sedimentar aguda, considera-se que os ensaios de ciclo de vida completo requerem experincia prvia, antes de se obterem resultados reprodutveis e coerentes. Esta autora refere ainda preocupaes relativas ao ensaio crnico, nomeadamente: - os anfipodes recm-nascidos devem ser manipulados com muita ateno de maneira a que sejam afectados o menos possvel; - s devem ser inoculados os anfipodes que nadam com vigor e no apresentam qualquer sinal de perturbao; - antes de serem inoculados devem ser recontados para evitar erros de contagem; - ao renovar a gua esta deve estar mesma temperatura que a do ensaio para evitar choques trmicos; - o alimento seco no deve acumular-se sobre o sedimento nem a camada de gua deve estar com cor verde ou turva; - a renovao de gua no deve fazer perturbaes no sedimento. Tal como foi brevemente mencionado (seco 2.2), ao desenvolver um protocolo para o bioensaio de sedimentos marinhos e estuarinos, bastante importante a escolha da espcie-teste a utilizar. Para tal desejvel que a espcie que se vai utilizar possua uma srie de propriedades, nomeadamente (ASTM, 2003; King et al., 2006): (a) ampla tolerncia a diferentes graus de salinidade; (b) alta sensibilidade ao comum dos contaminantes existentes nos sedimentos; (c) alta taxa de sobrevivncia sob as condies de controlo;
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(d) ocupao dos micro habitats no ou preferencialmente, abaixo do interface sedimentosgua, para assegurar a mxima exposio aos contaminantes existentes nos sedimentos; (e) baixa sensibilidade para os sedimentos naturais variveis, tais como a dimenso das partculas orgnicas e contedos, para permitir testar uma ampla variedade de tipos de sedimento; (f) ampla distribuio geogrfica para aumentar a amplitude de sua aplicao como um teste que utiliza espcies animais; (g) facilidade de recolha, tratamento e manuteno em laboratrio; (h) importncia ecolgica nos sistemas estuarinos; (i) capacidade de ser cultivada ou em alternativa que esteja disponvel no campo durante todo o ano. No obstante as limitaes e cuidados a ter na utilizao da macrofauna bentnica em estudos de toxicologia sedimentar, as vantagens da utilizao de comunidades bentnicas para determinar a qualidade sedimentar, esto directamente relacionadas com a sua capacidade de fornecer uma base ecolgica para a avaliao da qualidade dos sedimentos trata-se efectivamente, de uma avaliao fundamentada na experimentao (Quintino et al., 1989; Costa et al., 1996; Castro et al., 2006).
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a ltima componente foi modificada para "alterao das comunidades residentes" e, em alguns casos, foi mesmo substituda ou excluda. Noutros casos, componentes suplementares foram adicionadas Trada da Qualidade Sedimentar (Chapman e Hollert, 2006). Combinando informaes sobre a caracterizao fsica e qumica dos sedimentos, da estrutura da comunidade bentnica e dos testes de toxicidade nos sedimentos, a TQS fornece uma abordagem abrangente e holstica para avaliar a magnitude de uma resposta biolgica. Em particular, a introduo de testes de toxicidade nos sedimentos, fornece mais evidncias directas e conclusivas sobre os efeitos biolgicos dos contaminantes presentes nos sedimentos e isto complementa e refora as informaes provenientes das comunidades residentes e da contaminao existente nos sedimentos (Chapman, 1990; 1996). Normalmente, a aplicao da TQS para avaliao dos efeitos associados presena de contaminantes no sedimento, procura fazer a integrao das 3 componentes j citadas e do melhor juzo profissional dado por especialistas. Actualmente, no existe nenhum mtodo universalmente aceite para o tratamento e interpretao dos dados referentes trada, nem existe uma classificao que tenha por base uma abordagem com o o uso simultneo de mltiplos descritores de qualidade sedimentar (Chapman et al., 2002; Long e Sloane, 2005; Wenning et al., 2005). Cada estudo ou monitorizao usa uma abordagem desenvolvida atravs da prpria experincia de cada investigador. A mais valia da TQS reside na abordagem peso-das-evidncias que utiliza, e na sua capacidade de discernir os efeitos toxicolgicos directos, das variaes naturais das caractersticas do habitat (Chapman, 1996). Atravs desta abordagem, possvel deduzir uma relao causal entre a contaminao qumica e as perturbaes ocorridas nas comunidades locais. Assim, a TQS fornece um bom exemplo de um instrumento de avaliao integrada que inclui os dados obtidos no campo. No entanto, para melhorar o mtodo, as medidas de bioacumulao tm de ser levadas em considerao (Chapman e Wang, 2000). Quer isto dizer, que a avaliao toxicolgica dos sedimentos dever ser encarada numa perspectiva muito mais abrangente do que a inicialmente prevista por Chapman aquando da criao da TQS. Idealmente, as abordagens ao problema e a avaliao dos resultados, tero de ser efectuadas tendo por base que o estudo do ambiente
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sedimentar, dar um contributo que ter de ser integrado num estudo mais alargado do ecossistema. A ttulo de exemplo sobre a forma como actua uma avaliao do tipo TQS, refirase o trabalho Silva et al. (2004) onde mostram, acerca de um dado local sada do Esturio do Tejo, que o local foi consistentemente contaminado pelo elevado teor de HPA (Hidrocarbonetos policiclicos aromticos), que pode ser a causa do empobrecimento da sua comunidade bentnica e dos efeitos na sobrevivncia e desenvolvimento das larvas do ourio-do-mar, bem como sobre a sobrevivncia e reproduo do teste com anfpodes. So aqui evidenciados os principais agentes de perturbao que afectam este local: a existncia de altas quantidades de HPA que provocam alteraes fsico-qumicas no ambiente (1 alterao da TQS); maus resultados nos testes de toxidade sedimentar traduzidos em maus resultados nos parmetros sobrevivncia e desenvolvimento e reproduo dos animais utilizados nos testes (2 alterao da TQS); empobrecimento na quantidade e qualidade da fauna bentnica existente na zona (3 alterao da TQS) (Silva et al., 2004). Embora existam normas gerais para interpretao e integrao dos dados da trada, muitas vezes os especialistas divergem sobre a importncia dessas normas. A maior fonte de incerteza est relacionada com o potencial de alterao da composio da comunidade da endofauna poder ser afectado por factores fsicos e de habitat e a incapacidade de distinguir essas alteraes dos efeitos provocados por contaminantes (Bay et al., 2007). Vrios passos so recomendados para reduzir o grau de incerteza associado integrao e interpretao dos dados da TQS. Em primeiro lugar, elementos-chave da estratgia de avaliao, tais como o peso relativo de cada componente, a forma como mltiplas componentes so combinadas (por exemplo atravs de classificaes ou de enquadramentos lgicos), e os critrios para determinar a avaliao final, devero ser estabelecidos durante a concepo do estudo. Em segundo lugar, a comparabilidade entre os estudos pode ser melhorada fornecendo orientao sobre os mtodos especficos de medio da qumica dos sedimentos (por exemplo, lista de analitos, limites de deteco, como so usadas as directrizes de qualidade dos sedimentos), da toxicidade dos sedimentos (por exemplo, mtodos de ensaio, limites de classificao da toxicidade), e estado da comunidade bentnica (por exemplo, quais as mtricas ou ndices a utilizar, os critrios para determinar os efeitos). Por fim, a incerteza na avaliao da qualidade dos sedimentos
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pode ser reduzida atravs da melhoria da formao dos indivduos na interpretao dos dados (Bay et al., 2007). Recentemente, a bioamplificao (aumento da concentrao de alguns contaminantes orgnicos atravs da cadeia alimentar), foi formalmente inserida como uma componente primria adicional TQS, resultando efectivamente, numa Ttrada da Qualidade dos Sedimentos (Grapentine et al., 2002; Chapman e Anderson, 2005). No entanto, embora outros autores tenham sugerido que a TQS deva ser expandida para incluir outros componentes, no houve qualquer anlise formal de como e por que razo, tal expanso dever ocorrer (Chapman e Hollert, 2006). Estes autores questionam-se sobre a possibilidade de esta se tornar numa Ttrada, numa Pentada ou mesmo numa Hxada: No conceito da TQS, nunca houve a inteno de a limitar a apenas trs componentes especficos. Pouco tempo aps o seu desenvolvimento, Chapman (1986) realizou um estudo TQS no qual substituiu a anlise histopatolgica executada em peixes do fundo, pela avaliao da composio da comunidade da endofauna bentnica. Para Chapman (1989), a TQS, na sua essncia, uma ferramenta que correlaciona componentes, no sendo, por si s, um instrumento de sentena definitiva (Chapman e Hollert, 2006). Uma componente adicional que no foi, tanto quanto sabemos, aplicada ou proposta para a TQS, a determinao da diversidade gentica e de quaisquer alteraes que possam ser relacionadas com os contaminantes existentes nos sedimentos. Chapman e Hollert (2006), defendem que a diversidade gentica pode ser uma importante componente relativa futura viabilidade das populaes. Os dados referentes comunidade bentnica tm muitas limitaes, mas, devidamente analisados, mantm-se como a componente de avaliao ecologicamente mais relevante sobre possveis impactos na fauna. De facto, a mais convincente prova relativa degradao induzida pela poluio, continua a ser fornecida pela incluso da anlise da fauna bentnica na TQS (McPherson et al., 2008).
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recomendarem a sua incluso nos diferentes protocolos elaborados para bioensaios com sedimentos marinhos e estuarinos (Bat, 2005; ISO, 2005; ASTM, 2008). Neste captulo e com o objectivo de destacar o emprego de anfpodes na toxicologia sedimentar, utilizamos uma amostra constituda por 33 trabalhos cientficos que em comum tm o facto de utilizarem anfpodes durante a realizao das suas experincias. Por outro lado, parece-nos igualmente importante e no esquecendo a limitada dimenso da nossa amostra, estabelecer uma perspectiva de carcter globalizante (nomeadamente, referenciando o contributo dado por investigadores de diferentes pases), sobre o que se tem feito em matria de toxicidade sedimentar durante as duas ultimas dcadas. A Tabela 1 surge com o objectivo de, relacionando vrios aspectos ligados toxicologia sedimentar, se constituir como um elemento comparativo de acesso rpido a dados relevantes presentes nestes estudos. Daquilo que se tem feito ao longo das duas ltimas dcadas podemos comear por destacar a situao na Amrica do Norte (nomeadamente Canad e EUA), onde notria a importncia dos trabalhos realizados pelo canadiano P. Chapman que foi um dos principais responsveis pelo desenvolvimento dos mtodos e anlises envolvidos nos estudos de toxicidade sedimentar. Dele temos estudos que mostram, por exemplo, o uso da SQT na avaliao dos impactos provocados pela poluio (Chapman, 1990); critrios para a qualidade ambiental (Chapman, 1991), onde o autor aponta para a implementao de medidas e de possveis solues tendentes a aumentarem a qualidade ambiental; o papel da ecotoxicologia na avaliao do impacto ambiental (Chapman, 1993), a importncia dos estudos de qualidade ambiental no dia-a-dia das sociedades (Chapman, 2006); estudos especficos sobre a abordagem Peso das Evidncias para sedimentos e efluentes (Chapman, 2006), onde o autor alerta para a necessidade do emprego de testes que avaliem os impactos ao nvel das comunidades animais residentes, como forma de mais eficazmente avaliar qual o real efeito provocado nos locais atingidos; introduo a novas perspectivas no campo da ecotoxicologia do comportamento das espcies aquticas (Chapman, 2007), onde nos fornecida uma viso dos caminhos futuros que a ecotoxicologia poder traar. Para a Amrica do Norte, esto ainda referenciados na Tabela 1, os estudos de Hellou et al. (2008), no Canad, que utilizando C. volutator, estudaram a utilizao de um mtodo qumico no letal na avaliao de sedimentos (baseado no estudo do
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Legenda: Sed- Sedimento; HD- Horas dia; HN- Horas noite; A- ensaio agudo; C- ensaio crnico; (Descritores: I- Imobilizao; M- Mortalidade;
C- crescimento; R- reproduo; E- emergir do sedimento; Ce- capacidade de se enterrar; B- bioacumulao; Cto- comportamento)
Espcie Tipo teste Temp. C 4 semanas 171 sed 15 16HD 8HN Durao teste Sed./ gua Salinidade Foto periodo pH
Autor(es)
C. volutator
8.1 10 cm
2 cm
20
M;C;R
2007
HeuvelGreve et al.
C. orientale
96h-LC 50 16 2 gua 10-dias LC50 150.1 96h-LC 50 10-dias MFB-48h mtodo automtico
36 1
24HD
500ml
20
2008
C. volutator
sed
33
1.5L
8 cm
30
2008
C. orientale
162
24HD
3-4
20 - 25
2008
Picone et al.
C. volutator
151
12HD 12HN
Kirkpatrick
Cto
2006
et al.
C. volutator
A C
10-dias 28-dias
152
sed
7.5 a 8.5
200ml
M;C
2007
Allen et al.
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C. volutator
10-dias 28-dias
253 psu
12HD 12HN
7.0 9.0
160ml
30
M;C;R
2007
Scarlett et al.
C.volutator
10-dias
15
sed
35
24HD
800ml 150ml
20
2001
Grant e Briggs
Gammarus aequicauda Microdeutopus gryllotalpa A 48h 20 sed 96h-LC 50 10-dias 151 10-dias 21-dias
16HD 8HN
400ml
10
2004
Cesar et al.
Gammarus locusta
gua sed
33
12HD 12HN
1cm
3-5
20
1996
Costa et al.
C. multisetosum
A C
22
18 s/u
1-5
20
M;C;R
2006
Castro et al.
C. volutator
15
12HD 12HN
800ml 1-2cm
100
2008
Hellou et al.
C. volutator
10-dias
111
sed
32
16HD 8HN
2cm
20
M;E;Ce
1998
Bat e Raffaelli
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Ampelisca brevicornis A 10-dias 181 sed 35 s/u 1.0L 10-dias 96h-LC 10; 15; 20; 25 36 12HD 12HN gua sed 7.8 800ml 0.3
luz natural
3cm
20
2007
CasadoMartinez et al.
C. insidiosum
2cm
4-5
20 - 25
2008
Prato et al.
10-dias
15
sed
30
24HD
800ml 200ml
20
2007
Guerra et al.
C. multisetosum
96h 10-dias
14HD 10HN
800ml 200ml
5 - 25
2007
R et al.
Tiburonella viscana
48hLC50 10-dias
342 ppt
24HD
2cm
15 - 20
M;E
2007
Melo e Nipper
C. multisetosum
A C
10-dias 21-dias
15 22
sed
20
M;C;R
2004
Silva et al.
Tiburonella viscana
48h-LC 50
252
gua
24HD
350ml
3-5
10
2003
Abessa e Sousa,
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Tiburonella viscana
10-dias
252
sed
24HD
750ml
2cm
10
2006
Cesar et al.
Hyalella azteca
10-dias
250ml 100ml
10
1996
Poretti et al.
Rhepoxynius abronius C. volutator Bathyporeia sarsi A 10-dias 151 141 101 Grandidierella japonica A 96h-LC50 20 Mandibulophoxus mai Haustorioides indivisus Haustorioides koreanus Monocorophium acherusicum A 10-dias 20 Hyalella azteca A 10-dias
2cm
10 - 20
M;E;I
1992
30psu
30
2005
Lee et al.
30psu
20
M;E
2005
Lee et al.
202
sed
16HD 8HN
160ml
70gr
10
2000
Riddick e Dunn
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12HD 12HN
800ml 200gr
20
2008
MoralesCaselles et al.
Gammarus aequicauda
A C
8.30 800ml
2cm
3 4 5
10 20 40
M;C
2005
Prato e Biandolino
Monocorophium insidiosum
A C
8.3 800ml
2cm
3 -5
10 20 40
2006
Prato e Biandolino
16 2
gua sed
36
500ml + 750ml
2cm
20
2006
Prato et al.
C. multisetosum
96h
15 1
sed
36 72 108s/u
14HD 10HN
190ml
10ml
2008
Quintino et al.
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Monoporeia afnis
24h
4.50.2
sed
6s/u
luz natural
70ml
10
70
2008
Wiklund et al.
600ml 200ml
10
2009
Sanz-Lzaro e Marn
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comportamento evidenciado pelos animais quando sujeitos a ambientes controlados, constitudos por sedimentos de referncia aos quais se juntam, de forma calculada, sedimentos da amostra a testar, proporcionando assim, a existncia de ambientes com graus diferenciados de concentrao aos quais os animais reagem tambm de forma diversa) e de Riddick e Dunn (2000), nos USA, que utilizaram a Hyalella azteca, na avaliao de sedimentos de zonas hmidas ribeirinhas. Relativamente Europa e para Portugal a tabela 1 destaca alguns trabalhos desenvolvidos no incio da dcada de 90 na Universidade de Aveiro com C. multisetosum, para fazer a avaliao ecotoxicolgica de sedimentos marinhos e estuarinos (R, 1996). Estes trabalhos so mais tarde desenvolvidos com novos estudos da mesma equipa, onde se mostra o elevado potencial do C. multisetosum para a utilizao em testes de toxicidade aguda e crnica em meio estuarino (Quintino et al.; 2001; Silva et al., 2004; Castro et al. 2006; R et al., 2007; in press). Ainda para Portugal, referncia na Tabela 1 a Costa et al. (1996) que usando Gammarus locusta avaliou o potencial de um novo teste para uso em toxicologia. No mbito dos trabalhos efectuados em Espanha, na tabela 1 destacam-se os trabalhos desenvolvidos por Csar et al. (2004) com a utilizao dos anfpodes Gammarus aequicauda e Microdeutopus gryllotalpa, na avaliao da toxicidade dos sedimentos na zona costeira mediterrnea; por Casado-Martinez et al. (2007) na avaliao da sensibilidade de anfpodes a dragados usando Ampelisca brevicornis; Morales-Caselles et al. (2008), que usando a mesma espcie, fizeram a avaliao de sedimentos marinhos aps um importante derrame de petrleo; por fim referenciado o trabalho de Sanz-Lzaro e Marn (2009), onde so testadas, utilizando C. multisetosum e Microdeutopus gryllotalpa, duas reas estuarinas europeias em relao contaminao com crude. Os estudos realizados em Itlia indicam preponderncia para duas espcies de anfpodes, C. orientale e C. insidiosum. O primeiro foi utilizado por Lera et al. (2008), para verificar as variaes de sensibilidade ao txico de referncia CdCl2 e SDS, e por Picone et al. (2008) que o utilizou para avaliar a sua sensibilidade a substncias puras. A segunda espcie aparece nos estudos de Guerra et al. (2007) com o objectivo de verificar o impacto das dragagens em zonas costeiras lagunares, e tambm nos de Prato et al. (2008), que avaliam o efeito da temperatura nos testes agudos de toxicidade. Desta investigadora e da sua colaborao com outros investigadores, encontramos ainda referenciados os
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trabalhos com Gammarus aequicauda (Prato e Biandolino, 2005), com o objectivo de avaliar o potencial da espcie para utilizao em testes de biotoxicidade; com Monocorophium insidiosum (Prato e Biandolino , 2006), cujo objectivo foi o mesmo do trabalho anterior; com Gammarus aequicauda e Corophium insidiosum (Prato et al., 2006) cujo objectivo foi o de avaliar o potencial das duas espcies para testes de avaliao de sedimentos. Este conjunto de trabalhos mostra que nos pases do sul da Europa, as opes em relao a espcies-teste tm sido diversificadas, enquanto que nos pases do norte da Europa, a escolha foi mais uniforme. Esta informao resumida na Tabela 2 (pag. 35), a qual fornece a relao entre as espcies de anfpode com os pases descritos ao longo da nossa amostra. Esta situao poder ser explicada pelas indicaes fornecidas na norma ISO 16712 (2005), que no seu anexo B, sugere critrios de escolha quanto ao tipo de anfpode a utilizar em estudos de toxicidade aguda. Pases como a Holanda, a Alemanha, a Inglaterra ou a Esccia, fazem uma escolha clara no tipo de anfpode a utilizar: C. volutator (consta da lista do anexo B da norma ISO 16712, 2005). Neste panorama, a excepo acontece mais a norte com a Sucia, onde Wiklund et al. (2008), utiliza o Monoporeia afnis com objectivo de fazer avaliao comportamental em relao a uma espcie invasiva. Na Alemanha, Kirkpatrick, et al. (2006), testavam a capacidade de C. volutator como biomonitor; na Holanda, HeuvelGreve et al. (2007), avaliam a eficcia da espcie num teste crnico; no Reino Unido, Hurk et al. (1992), fazem uma comparao entre trs espcies de anfpodes em testes de toxicidade, utilizando para alm de C. volutator, Rhepoxynius abronius e Bathyporeia sarsi; Grant e Briggs (2001), procuraram avaliar as respostas da espcie a metais e hidrocarbonetos; Scarlett et al. (2007), estudaram um mtodo para avaliar com a espcie a toxicidade crnica de sedimentos marinhos e estuarinos; Allen et al. (2007), propem-se testar a toxicidade de um composto qumico, o Ivermectin; Mayor et al. (2008), fazem uma avaliao toxicolgica aos tratamentos no aquacultura e Bat e Raffaelli (1998), fazem uma avaliao da toxicidade de sedimentos atravs de bioensaio com a mesma espcie. Para outras zonas do globo terrestre, referenciado na tabela 1, a Amrica do Sul, atravs do Brasil e a sia, atravs da Coreia Sul.
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Pas ---------------Espcie
C.volutator C.orientale C.multisetosum C. insidiosum Gammarus aequicauda Gammarus locusta Microdeutopus gryllotalpa Ampelisca brevicornis Tiburonella viscana Hyalella azteca Rhepoxynius abronius Bathyporeia sarsi Grandidierella japonica Mandibulophoxus mai Haustorioides indivisus Haustorioides koreanus Monocorophium acherusicum Monocorophium insidiosum Monoporeia afnis Echinogammarus meridionalis
Espanha
Holanda
Portugal
Esccia
Canada