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Bioetanol 2a Geracao de Biomassa Residual
Bioetanol 2a Geracao de Biomassa Residual
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Dissertao apresentada ao Curso de Ps-Graduao em Tecnologia de Processos Qumicos e Bioqumicos para a obteno do Grau de Mestre em Cincias (M.Sc.)
FICHA CATALOGRFICA
S586p Silva, Neumara Luci Conceio Produo de bioetanol de segunda gerao a partir de biomassa residual da indstria de celulose/ Neumara Luci Conceio Silva. 2010. xiii, 109 f.: il. Dissertao (Mestrado em Tecnologia de Porcessos Qumicos e Bioqumicos) Universidade Federal do Rio de Janeiro, Escola de Qumica, Rio de Janeiro, 2010. Orientador: Nei Pereira J.r, Ph.D.
1. Bioetanol. 2. Biomassa residual. 3. Indstria de celulose. Teses. I. Pereira Jr., Nei (Orient.). II. Universidade Federal do Rio de Janeiro, Ps-graduao em Tecnologia de Processos Qumicos e Bioqumicos, Escola de Qumica. IV. Ttulo. CDD: 665.776
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Aos meus pais, fontes de minhas foras, minha irm, exemplo que sempre procurei seguir, e ao meu amor, Petteri, dedico-lhes este trabalho.
AGRADECIMENTOS
A Deus, por me permitir realizar mais um sonho; Ao professor Nei Pereira Jr. pela compreenso, confiana, oportunidade de trabalhar em seus laboratrios e ser orientada por um admirvel e excepcional pesquisadorprofessor, que compartilhou seu conhecimento e experincia; Aos meus amigos e colegas de trabalho Roberto Nobuyuki Maeda e Gabriel Jaime Vargas Betancur pela colaborao, ateno, conhecimento, pacincia e valiosa amizade; Helosa Barros Bastos, pela dedicao, carinho, principalmente, colaborao nos experimentos realizados. companherismo e,
Aos estudantes e funcionrios dos Laboratrios de Desenvolvimento de Bioprocessos, em especial a Carolina Barcelos, Mariana Mello, Felipe Oliveira, Luiz Claudio e Jorge, pela ajuda na soluo de problemas e pelo companherismo que tornaram o ambiente de trabalho muito agradvel; Aos funcionrios da secretaria de ps-graduao da Escola de Qumica pela ateno e ajuda na soluo de problemas burocrticos; Ao Petteri, pela compreenso, confiana, companherismo, carinho, apoio e por toda colaborao direta ou indireta durante esta minha importante jornada; Aos funcionrios da empresa Aracruz Celulose, Rudine Antes, Braz Jos Demuner e Pablo Cadaval Santos por fornecerem to prontamente informaes sobre o trabalho; Aos professores Maulori Currie Cabral e Maria Isabel Liberto pelos valiosos ensinamentos recebidos durante minha vida acadmica; minha famlia, por acreditar e apoiar desde os meus pequenos desejos at os grandes e difceis sonhos; PETROBRS e ao CNPq pelo auxlio financeiro.
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Resumo da Dissertao de M.Sc. apresentada ao programa de psgraduao em Tecnologia de Processos Qumicos e Bioqumicos da Escola de Qumica da Universidade Federal do Rio de Janeiro Brasil. Neumara Luci Conceio Silva Orientador: Nei Pereira Jr.
A grande dependncia de fontes de energia no renovveis e altamente poluentes, como o petrleo e seus derivados, tem levado a sociedade a buscar alternativas para a utilizao de combustveis renovveis. As pesquisas atuais sinalizam como tecnologia emergente a produo de etanol combustvel a partir de biomassas residuais de composio lignocelulsica. Neste contexto, o presente trabalho objetivou produzir bioetanol carburante empregando uma concepo de processo denominado SSF (Simultaneous Saccharification and Fermentation) a partir da celulose contida no resduo oriundo do sistema de decantao da indstria de celulose, utilizando linhagens da levedura
Saccharomyces cerevisiae e visando estabelecer condies que aumentassem a produtividade e eficincia do processo. Como resultados desta dissertao, foram obtidas as melhores condies da pr-hidrlise enzimtica (relao slido:lquido 1:4 e 17,5 FPU/g de carga enzimtica) e determinadas as condies que conferiram o maior valor para a produtividade volumtrica (16 h de pr-hidrlise enzimtica, 8 g/L para concentrao celular e 36 h de fermentao). A mxima concentrao de etanol obtida quando o processo SSF foi conduzido em frascos agitados, foi de 77,6 g/L em 64 h, empregando Saccharomyces cerevisiae de panificao. O melhor resultado obtido quando a fermentao foi conduzida em biorreator, foi de 74,6 g/L em 64 h, utilizando celulases comerciais (Multifect) e suplementando o hidrolisado enzimtico com fontes de fosfato e nitrognio e solues de sais minerais e cido ctrico, que foi fermentado por uma cepa industrial de S. cerevisiae codificada como JP1. Os resultados mostraram-se bastante promissores e apontam para maiores desdobramentos.
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Abstract of the M.Sc. dissertation presented to the post graduation program on Technology of Chemical and Biochemical Process of the Chemistry School of Federal University of Rio de Janeiro Brazil. Neumara Luci Conceio Silva Supervisor: Nei Pereira Jr.
The large reliance on non-renewable sources and highly polluting fuels such as petroleum and its derivatives, has led the society to seek alternatives to the use of renewables. Current research indicates as emerging technology the production of fuel ethanol from residual biomass of lignocellulosic composition. This study aimed at producing fuel ethanol using a design process called SSF (Simultaneous Saccharification and Fermentation) from the cellulose containing residue arisen from the separating system of the cellulose manufactory, using strains of the yeast Saccharomyces cerevisiae. The work also aimed at establishing process conditions that increase the productivity and efficiency. As results of this study, the best preenzymatic hydrolysis conditions (solid:liquid ratio 1:4 and 17.5 FPU/g of enzyme loading) was obtained and the conditions that allowed the highest volumetric ethanol productivity was determined (16 h pre-hydrolysis, 8.0 g/L for cell concentration and 36 h of fermentation). The maximum ethanol concentration, obtained when the SSF process was performed in flasks, was 77.6 g/L in 64 hours, using the bakery yeast Saccharomyces cerevisiae. On the other hand, when the fermentation was carried out in bioreactor, the highest ethanol concentration was 74.6 g/L at 64 h of SSF process, using a commercial enzyme preparation (Multifect) and supplementing the enzymatic hydrolysate with sources of phosphate and nitrogen and mineral salts and citric acid solution, which was fermented by an industrial strain of S. cerevisiae coded as JP1. The results were very promising and point to major developments.
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NDICE CAPTULO 1 1. APRESENTAO DO TEMA DE DISSERTAO DE MESTRADO CAPTULO 2 2. REVISO BIBLIOGRFICA 2.1. BIOMASSA: FONTE DE BIOENERGIA 2.1.1. Celulose 2.1.2. Hemicelulose 2.1.3. Lignina 2.1.4. Pr-tratamentos 2.1.5. A celulose no contexto de biorrefinaria 2.1.6. Hidrlise enzimtica da celulose 2.2. A INDSTRIA DE CELULOSE 2.2.1. Produo de celulose 2.2.2. Resduos gerados na produo de celulose 2.2.3. Aspectos econmicos da indstria de celulose 2.3. O BIOETANOL NO CONTEXTO DE 2 GERAO DE BIOCOMBUSTVEIS 2.3.1. Dimenses tcnicas e ambientais do uso de bioetanol como combustvel veicular 2.3.2. Evoluo do bioetanol combustvel no mercado 2.3.3. Progresso das aes ambientalistas 2.3.4. Produo de bioetanol de segunda gerao 2.3.5. Estratgias para a produo de bioetanol de segunda gerao 2.3.6. Principais resultados reportados na literatura 5 5 8 10 11 12 13 14 16 19 22 24 26 26 28 33 34 37 42 1
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CAPTULO 3 3. JUSTIFICATIVA E OBJETIVOS 3.1. JUSTIFICATIVA 3.2. OBJETIVOS CAPTULO 4 4. MATERIAIS E MTODOS 4.1. MATRIA-PRIMA 4.2. CARACTERIZAO DAS BIOMASSAS PM1, PM2 E PM3 4.3. MICROORGANISMO 4.3.1. Manuteno, ativao e propagao celular de S. cerevisiae JP1 4.4. AVALIAO DA FERMENTABILIDADE DE PM1, PM2 E PM3 PARA PRODUO DE BIOETANOL 4.5. ESTUDO COMPARATIVO DA HIDRLISE ENZIMTICA DE PM1, PM2 E PM3 4.6. OTIMIZAO DO PROCESSO SSF DE PM3 4.6.1. Delineamento Central Composto Rotacional (DCCR) 4.6.2. Planejamento univarivel 4.6.3. Validao das melhores condies do processo SSF 4.7. DESEMPENHO DAS PROCESSO SSF DE PM3 CELULASES LADEBIO NO 48 48 50 50 50 52 53 54 54 55 55 55 56 57 57 58 45 45 46
4.8. SUPLEMENTAO DO HIDROLISADO 4.9. MTODOS ANALTICOS 4.9.1. Determinao de acares e etanol 4.9.2. Quantificao celular CAPTULO 5 5. RESULTADOS E DISCUSSO 5.1. CARACTERIZAO DAS BIOMASSAS PM1, PM2 E PM3
60 60
5.2. AVALIAO DA FERMENTABILIDADE DE PM1, PM2 E PM3 PARA PRODUO DE BIOETANOL 5.3. ESTUDO COMPARATIVO DA HIDRLISE ENZIMTICA DE PM1, PM2 E PM3 5.4. PLANEJAMENTO SEQUENCIAL PARA OTIMIZAO DO PROCESSO SSF 5.4.1. DCCR 5.4.2. Planejamento univarivel 5.4.3. Validao das melhores condies do processo SSF em frascos agitados 5.5. PROCESSOS SSF CONDUZIDOS EM BIORRETAOR 5.5.1. Processo SSF empregando a linhagem industrial S. cerevisiae JP1 e celulases comerciais Multifect 5.5.2. Processo SSF empregando S. cerevisiae JP1 como inculo e consrcio celulsico LADEBIO 5.5.3. Processo SSF empregando S. cerevisiae JP1, celulases comerciais Multifect e hidrolisado suplementado com fontes de nitrognio, fosfato e sais minerais 5.6. CONSIDERAES FINAIS CAPTULO 6 6. CONCLUSES E SUGESTES 6.1. CONCLUSES 6.2. SUGESTES CAPTULO 7 7. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
61 64 73 73 79 84 85 85 89 92
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NDICE DE FIGURAS
Figura 2.1. Esquema estrutural simplificado das fibras do material lignocelulsico Figura 2.2. Estrutura qumica da celulose Figura 2.3. Componentes da frao hemicelulose Figura 2.4. Precursores primrios da lignina Figura 2.5. Biorrefinaria de matrias-primas lignocelulsicas: produtos da celulose Figura 2.6. Fluxograma de blocos da produo da pasta de celulose Figura 2.7. Evoluo da produo brasileira de celulose Figura 2.8. Destinos das exportaes brasileiras de celulose Figura 2.9. Evoluo das emisses de gases dos veculos brasileiros Figura 2.10. Evoluo da produo de cana-de-acar, etanol e acar no Brasil Figura 2.11. Teor mdio de etanol anidro na gasolina brasileira Figura 2.12. Evoluo da produo de veculos a etanol hidratado e de sua participao nas vendas de veculos novos Figura 2.13. Evoluo dos preos mdios para o consumidor do bioetanol hidratado e da gasolina comum no Brasil Figura 2.14. Vendas de lcool etlico e de gasolina automotiva no Brasil Figura 2.15. Evoluo da produo de bioetanol do Brasil e dos EUA Figura 2.16. Produo mundial de bioetanol combustvel em 2008 Figura 2.17. Perspectivas da produo de biocombustveis Figura 2.18. Fermentao alcolica Figura 2.19. Diagrama da Sacarificao e Fermentao em Separado (SHF) Figura 2.20. Diagrama da Sacarificao e Fermentao Simultnea (SSF) Figura 2.21. Diagrama do processo de Sacarificao e Co-Fermentao Simultnea Figura 2.22. Diagrama do Bioprocesso Consolidado (CBP) Figura 4.1. Fluxograma da produo de celulose Figura 4.2. Polpas PM1 e PM2 e resduo PM3 da indstria de celulose Figura 4.3. Biorreator instrumentado Figura 4.4. Fermentmetro Figura 4.5. Regresso linear e coeficiente de correlao para a quantificao de biomassa de S. cerevisiae JP1 Figura 5.1. Concentrao de acares aps 12 h de pr-hidrlise enzimtica, utilizando relao S:L 1:4 e 32 FPU/g de carga enzimtica Figura 5.2. Perfis cinticos do processo SSF das biomassas PM1, PM2 e PM3, empregando 2 g/L de S.verevisiae de panificao
7 9 10 12 14 20 24 25 28 29 29 30 31 31 32 32 33 36 38 39 40 41 49 49 52 58 59 62 63
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Figura 5.3. Concentrao de acares e etanol aps 96 h de SSF Figura 5.4. Hidrlise enzimtica da biomassa PM1 Figura 5.5. Hidrlise enzimtica da biomassa PM2 Figura 5.6. Hidrlise enzimtica da biomassa PM3 Figura 5.7. Grfico de Pareto para a concentrao de glicose (g/L) como varivel de resposta da hidrlise enzimtica de PM1 Figura 5.8. Grfico de Pareto para a concentrao de glicose (g/L) como varivel de resposta da hidrlise enzimtica de PM2 Figura 5.9. Grfico de Pareto para a concentrao de glicose (g/L) como varivel de resposta da hidrlise enzimtica de PM3 Figura 5.10. Superfcie de resposta para a concentrao de glicose (g/L) como varivel de resposta da hidrlise enzimtica de PM1 Figura 5.11. Superfcie de resposta para a concentrao de glicose (g/L) como varivel de resposta da hidrlise enzimtica de PM2 Figura 5.12. Superfcie de resposta para a concentrao de glicose (g/L) como varivel de resposta da hidrlise enzimtica de PM3 Figura 5.13. Concentrao de glicose aps hidrlise enzimtica de PM1, PM2 e PM3 Figura 5.14. Perfis cinticos dos processos SSF do DCCR para PM3 Figura 5.15. Grfico de Pareto para a concentrao de etanol (g/L) como varivel de resposta do SSF de PM3 Figura 5.16. Superfcie de resposta para concentrao de etanol (g/L) como varivel de resposta do SSF de PM3 Figura 5.17. Experimento 8 do DCCR para SSF de PM3 Figura 5.18. Perfis cinticos de SSF do planejamento univarivel Figura 5.19. Concentraes de etanol equivalente e etanol (CLAE) do planejamento univarivel Figura 5.20. Perfil cintico do SSF na validao das melhores condies do processo SSF com PM3 em frascos agitados Figura 5.21. Cintica do pr-inculo de S. cerevisiae JP1 Figura 5.22. Cintica do crescimento de S. cerevisiae JP1 em biorreator Figura 5.23. Perfil cintico do processo SSF de PM3 em biorreator empregando S. cerevisiae JP1 e celulases Multifect Figura 5.24. Perfil cintico do processo SSF de PM3 em biorreator empregando celulases LADEBIO e S. cerevisiae JP1 Figura 5.25. Perfil cintico do processo SSF de PM3 em biorreator com hidrolisado suplementado com fontes de nitrognio, fosfato de potssio, soluo de sais minerais e cido ctrico
63 66 66 66 69 69 70 70 71 71 72 74 78 78 79 81 81 84 86 87 88 90
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NDICE DE TABELAS
Tabela 2.1. Composio qumica parcial de alguns materiais lignocelulsicos Tabela 2.2. Diferenas entre hemicelulose e celulose Tabela 2.3. Comparao de rotao e rendimento de rvores Tabela 2.4. Caracterizao de espcies de eucalipto Tabela 2.5. Maiores produtos mundiais de celulose em 2008 Tabela 2.6. Propriedades da gasolina e do bioetanol Tabela 2.7. Condies empregadas para produo de bioetanol de segunda gerao por SSF na literatura Tabela 4.1. Meio de cultura para manuteno da S. cerevisiae JP1 Tabela 4.2. Meio de cultura para crescimento do pr-inculo Tabela 4.3. Composio da soluo de sais minerais e cido ctrico Tabela 4.4. Intervalo utilizado para construir o DCCR para a hidrlise enzimtica de PM1, PM2 e PM3 Tabela 4.5. Intervalo utilizado para construir o DCCR para o processo SSF de PM3 Tabela 5.1. Caracterizao das biomassas PM1, PM2 e PM3 Tabela 5.2. Concentraes de acares e etanol no incio e final do SSF Tabela 5.3. Concentrao de acares liberados na hidrlise enzimtica (HE) de PM1 Tabela 5.4. Concentrao de acares liberados na hidrlise enzimtica (HE) de PM2 Tabela 5.5. Concentrao de acares liberados na hidrlise enzimtica (HE) de PM3 Tabela 5.6. Concentrao de acares no incio do SSF e de etanol equivalente, acares e etanol no final do processo (48h) Tabela 5.7. Anlise de varincia (ANOVA) para concentrao final de etanol do DCCR Tabela 5.8. Concentrao de acares no incio do SSF e de etanol equivalente (equival.), acares e etanol no final dos processos SSF (36h) do planejamento univarivel Tabela 5.9. Concentrao de acares no incio do SSF e de etanol equivalente (equiv.), acares e etanol no final do SSF (36h) na validao das melhores condies Tabela 5.10. Concentrao de acares e etanol no incio e final do processo (64h) em biorreator empregando S. cerevisiae JP1 e celulases Multifect Tabela 5.11. Concentrao de acares e etanol no incio e final do processo (64h) em biorreator empregando S. cerevisiae JP1 e celulases LADEBIO Tabela 5.12. Concentrao de acares e etanol no incio e final do SSF (64h) em biorreator empregando S. cerevisiae JP1, celulases Multifect e hidrolisado suplementado Tabela 5.13. Condies utilizadas e resultados obtidos em cada etapa da pesquisa 8 11 17 19 25 26 43 50 51 51 53 54 61 63 67 67 67 75 77 82
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CAPTULO 1
O suprimento de energia est na base da estruturao e da dinmica operacional da sociedade humana nos seus mais diversos aspectos, desde o bemestar individual at o desempenho industrial e de prestao de servios. Neste contexto, o petrleo tem tido uma importncia mpar, sendo responsvel pelo fornecimento de um tero da energia primria consumida no planeta. Assim, alteraes no suprimento ou no uso do petrleo teriam desdobramentos econmicos, polticos e sociais importantes para a maior parte das naes do mundo. A sociedade humana depara-se, agora, com a escassez e com o aumento do preo desta fonte no renovvel de energia. Avaliaes mais pessimistas afirmam que em torno de 41 anos chegar-se-ia sua total depleo (ODAC, 2007). Paralelamente, a combusto crescente de combustveis fsseis, iniciada h 60 anos, tem gerado, juntamente com o desmatamento, o acmulo na atmosfera de gases poluentes, particularmente de CO2, responsveis pelo efeito estufa e conseqentes alteraes climticas. Esse atual quadro exige mudanas nos padres de industrializao e de consumo da sociedade humana, de forma a reduzir a emisso de gases de efeito estufa (PEREIRA Jr. et al., 2008).
Embora as crises de petrleo anteriores, como a dos anos 1970, responsveis pelo aumento do preo do petrleo, tenham sido episdicas, a conjuno e sinergia dos fatores acima mencionados, indicam uma tendncia crescente e irreversvel no aumento do preo do petrleo e, em um prazo mais longo, a diminuio do seu uso. Neste contexto, a busca por fontes renovveis de energia e de alternativas ao uso do petrleo est mobilizando internacionalmente e de forma mpar setores acadmicos, industriais, sociais e governamentais com nfase no desenvolvimento de processos biotecnolgicos de menor impacto ambiental (PEREIRA Jr. et al., 2008). O Brasil j vem, por muitas dcadas, utilizando apenas lcool como combustvel ou sob a forma de uma mistura contendo de 22% a 25% de lcool na gasolina, colocando o pas em uma posio extremamente favorvel
internacionalmente, em termos de emisso de CO2. Atualmente, o Brasil produz 25 bilhes de etanol por ano a partir da cana-de-acar. O plantio dessa matria-prima, realizado em terras arveis de boa qualidade, dever ser expandido devido crescente demanda nacional e internacional de lcool (MAPA, 2010). No entanto, para evitar a expanso desmedida das reas de cultivo, tm se desenvolvido processos biotecnolgicos que permitam a utilizao de biomassas residuais de composio lignocelulsica, abundantemente geradas nos setores agrcolas e florestais. Dentre estas biomassas, os resduos celulsicos provenientes da produo de pasta de celulose e separados na etapa de decantao constituem uma das fontes mais promissoras de carboidratos para a produo de bioetanol de segunda gerao. Os resduos lignocelulsicos agroindustriais so matrias-primas de grande interesse industrial uma vez que podem ser utilizadas para a produo de uma gama de produtos, no somente o etanol. Os materiais lignocelulsicos so constitudos majoritariamente por celulose, hemicelulose e lignina. Dentro do conceito de biorrefinaria, as fraes devem ser separadas seletivamente de acordo com suas caractersticas e as do produto desejado, sendo necessrio desenvolver processos eficientes para disponibilizar os monmeros (acares) e para a transformao destes atravs de processos de fermentao com altas taxas de produo (PEREIRA Jr. et al., 2008).
No caso da utilizao da celulose contida no resduo fibroso do sistema de decantao da indstria de celulose, faz-se necessrio a sua hidrlise, utilizando enzimas especficas, que pode ser conduzida em sinergia com o processo de fermentao da glicose, o qual se denomina Sacarificao e Fermentao Simultnea (Simultaneous Saccharification and Fermentation SSF). No presente estudo tencionou-se desenvolver um processo SSF para o aproveitamento da celulose, contida no resduo slido proveniente do sistema de decantao da indstria de celulose, para a produo de bioetanol combustvel. Composta de sete captulos, a presente dissertao procurou cobrir de forma abrangente esta complexa temtica. No primeiro captulo, apresentado de forma sumarizada, o paradigma defectivo que a populao mundial vive com os combustveis de origem fssil, apontando suas principais problemticas e destacando o bioetanol como excelente alternativa de combustvel veicular. O segundo captulo apresenta uma reviso bibliogrfica sobre os temas que tangem a temtica do presente trabalho: a biomassa lignocelulsica como fonte de bioenergia; a produo de celulose e seus resduos; e o bioetanol, relatando a importncia do seu uso, a sua produo e as estratgias para a obteno desta substncia qumica. As justificativas e os objetivos que nortearam a construo deste presente trabalho so relatados no terceiro captulo. Os materiais utilizados e as metodologias empregadas so descritas no quarto captulo, enquanto os resultados obtidos, assim como a anlise estatstica e fenomenolgica dos mesmos so apresentados no quinto captulo. No sexto captulo, encontram-se as concluses obtidas a partir dos experimentos realizados e as sugestes para a continuidade deste trabalho. As referncias utilizadas para dar embasamento textual ao trabalho so listadas no stimo captulo. A seguir, esto listados os artigos publicados, em revistas indexadas e anais de congressos nacionais, decorrentes do desenvolvimento do trabalho de pesquisa desta dissertao de mestrado.
SILVA, N.L.C; BETANCUR, G.J.V.; VASQUEZ , M.P.; BARROS, E.; PEREIRA Jr., N. (2010). Ethanol production from residual wood chips of cellulose industry: Acid pretreatment investigation, hemicellulosic hydrolysate fermentation and remaining solid fraction fermentation by SSF process. Applied Biochemistry and Biotechnology (no prelo).
SILVA, N.L.C; BASTOS, H.B.; PEREIRA Jr., N. (2009). Second generation ethanol production from residual biomass of cellulose industry. Artigo submetido ao Brazilian Journal of Chemical Engineering.
SILVA, N.L.C; BETANCUR, G.J.V.; PEREIRA Jr., N. (2009). Produo de bioetanol a partir de cavaco residual da indstria de celulose: Otimizao do pr-tratamento cido e fermentao do hidrolisado hemicelulsico. Trabalho completo publicado nos anais do XVII Simpsio Nacional de Bioprocessos (SINAFERM), CD-ROM, 6 pginas.
SILVA, N.L.C; BASTOS, H.B.; BETANCUR, G.J.V.; MAEDA, R.N.; PEREIRA Jr., N. (2009). Produo de etanol de segunda gerao a partir de biomassas residuais da indstria de celulose. Trabalho completo publicado nos anais do XVII Simpsio Nacional de Bioprocessos (SINAFERM), CD-ROM, 6 pginas.
SILVA, N.L.C; BETANCUR, G.J.V.; PEREIRA Jr., N. (2009). Avaliao do potencial da biomassa residual da indstria de celulose para a produo de bioetanol. Trabalho completo publicado nos anais do IX Simpsio de Hidrlise Enzimtica de Biomassas (SHEB), CD-ROM, 7 pginas.
SILVA, N.L.C; MAEDA, R.N.; PEREIRA Jr., N. (2009). Otimizao da hidrlise enzimtica da biomassa residual da indstria de celulose. Trabalho completo publicado nos anais do IX Simpsio de Hidrlise Enzimtica de Biomassas (SHEB), CD-ROM, 12 pginas.
CAPTULO 2
2.
REVISO BIBLIOGRFICA
Neste captulo so apresentados os diferentes aspectos tericos que tangem a temtica abordada: a biomassa, como material lignocelulsico, e os meios de sua converso em bioetanol; a indstria de celulose e sua produo, relatando as matrias-primas utilizadas e os resduos gerados neste processo; e o bioetanol, abordando suas dimenses tcnicas e ambientais, evoluo do seu uso como combustvel veicular, sua produo e as estratgias concebidas para este fim.
2.1. BIOMASSA: FONTE DE BIOENERGIA Em geral, denomina-se biomassa qualquer matria de origem vegetal que dispe de bioenergia e que pode ser processada para fornecer formas bioenergticas mais elaboradas e adequadas para o uso final. Portanto, seriam exemplos de matrias a lenha, os resduos de serrarias, o carvo vegetal, o biogs resultante da decomposio de lixo orgnico e de outros resduos agropecurios, bem como os biocombustveis lquidos, como o bioetanol e o biodiesel. No amplo contexto da bioenergia, a produo de biocombustveis lquidos a partir de biomassa
tem sido considerada para atender particularmente s necessidades de transporte veicular. Para esses fins, ainda no existem outras alternativas renovveis, alm dos biocombustveis, com maturidade tecnolgica e viabilidade econmica suficientes (ZHANG & SMITH, 2007). Com exceo da cana-de-acar, as tecnologias comercialmente disponveis na atualidade para a produo de bioetanol de primeira gerao a partir de biomassas sacarneas e amilceas envolvem ganhos energticos e ambientais bastante estreitos. Alm disso, essas matrias-primas apresentam uma limitada vantagem econmica e encontram, em geral, mercados alternativos mais remuneradores, como alimentos ou insumos para outros fins. Entretanto, apesar de suas destacadas vantagens, a cana-de-acar no uma opo vivel para todas as regies do planeta. E por esse motivo, os pases do hemisfrio norte vm procurando incessantemente rotas tecnolgicas que permitam a produo de um biocombustvel eficiente, tanto do ponto de vista ambiental quanto do ponto de vista econmico (BNDES, 2008). A tendncia de estudos, como j havia sido reportado por VSQUEZ et al. (2007), desenvolver processos biotecnolgicos que permitam a utilizao de biomassas residuais de composio lignocelulsica, como palha de milho e arroz, bagao de cana-de-acar e resduos da indstria de celulose, abundantemente geradas nos setores agrcolas e florestais, para a produo de bioetanol de segunda gerao. O bioetanol de segunda gerao vem sendo produzido pela hidrlise e fermentao de materiais lignocelulsicos desde o fim do sculo XIX, mas somente nos ltimos 20 anos essa tecnologia tem sido proposta para atender o mercado de combustveis. Os principais programas de pesquisa e desenvolvimento so conduzidos nos Estados Unidos e na Europa, basicamente em escalas experimentais de produo, mas seu sucesso poderia transformar o bioetanol em um biocombustvel passvel de ser produzido em quase todas as regies do mundo, aproveitando a alta disponibilidade de resduos orgnicos de diversas fontes. Praticamente todos os resduos de biomassa, produzidos nas atividades agrcolas e industriais, e mesmo o lixo urbano, apresentam elevados teores de materiais lignocelulsicos (MACEDO et al., 2008).
A populao humana produz milhes de toneladas de resduos agroflorestais anualmente. O Brasil, por exemplo, produziu em 2007 aproximadamente 400 milhes de toneladas de subprodutos agroflorestais, incluindo os resduos gerados na indstria de celulose (PEREIRA Jr. et al., 2008). Os materiais lignocelulsicos so formados por estruturas duras e fibrosas, compostas majoritariamente pelos polissacardeos celulose e hemicelulose (cerca de 70% da massa seca), entremeados por outra macromolcula formada por lcoois aromticos, a lignina, aos quais se encontram unidos por ligaes covalentes e de hidrognio (Figura 2.1) (LEE, 1997). Em menores propores, e dependendo da origem do vegetal, tambm podem ser encontrados resinas, cidos graxos, fenis, taninos, compostos nitrogenados e sais minerais, principalmente, de clcio, potssio e magnsio (NEUREITER et al., 2002). As tecnologias para a obteno de bioetanol de segunda gerao, produzido a partir de materiais lignocelulsicos, envolvem a hidrlise dos polissacardeos da biomassa em acares fermentveis e sua posterior fermentao. Para executar essa tarefa, o processo de hidrlise utiliza tecnologias complexas e multifsicas, com base no uso de rotas cidas e/ou enzimticas para a separao dos acares e remoo da lignina (PEREIRA Jr. et al., 2008).
Figura 2.1. Esquema estrutural simplificado das fibras do material lignocelulsico (LEE, 1997)
A composio e a estrutura da biomassa tm forte influncia na natureza e nos rendimentos dos processos de hidrlise e fermentao. Sendo que a composio bsica da biomassa lignocelulsica depende do vegetal de origem e, no
caso de biomassas agroflorestais residuais, da regio, idade e perodo de coleta do material. Na Tabela 2.1 pode ser visualizada a variao da composio qumica bsica de algumas biomassas de composio lignocelulsica.
Tabela 2.1. Composio qumica parcial de alguns materiais lignocelulsicos Material lignocelulsico Farelo de cevada Sabugo de milho Folhas de milho Bagao de cana Palha de arroz Palha de trigo Palha de sorgo Casca de aveia Eucalyptus grandis Eucalyptus globulus Celulose (%) 23,0 31,7 37,6 40,2 43,5 33,8 34,0 30,5 40,2 46,3 Hemicelulose (%) 32,7 34,7 34,5 26,4 22,0 31,8 44,0 28,6 15,7 17,1 Lignina (%) 24,4 20,3 12,6 25,2 17,2 20,1 20,0 23,1 26,9 22,9
Fonte: TAMANINI & HAULY (2004); CANETTIERI et al. (2001); MUSSATO & ROBERTO (2002)
Desta maneira, faz-se necessrio conhecer a estrutura e as principais caractersticas dos principais componentes da biomassa lignocelulsica: celulose, hemicelulose e lignina.
2.1.1. Celulose A celulose (23% - 50% da matria seca da biomassa lignocelulsica) um polmero linear que contm at 15.000 unidades de -D-glicoses unidas por ligaes glicosdicas -1,4 carbono-carbono e por ligaes de hidrognio intramoleculares (ligaes entre unidades de glicose da mesma molcula) e intermoleculares (entre unidades de glicose de molculas adjacentes) (Figura 2.2) (ARANTES & SADDLER, 2010). As ligaes intermoleculares so responsveis pela rigidez; e as ligaes intramoleculares so responsveis pela formao de fibrilas, estruturas altamente ordenadas que se associam formando as fibras de celulose. As fibrilas apresentam
desde regies com elevado grau de cristalinidade, nas quais as cadeias de glicana esto firmemente ligadas em paralelo, at regies com menor grau de ordenao, chamadas de regies amorfas. Na regio cristalina, as fibras tm maior resistncia trao, ao alongamento e solvatao (absoro de solvente) que na regio amorfa, onde a fibra possui sua maior flexibilidade (VSQUEZ et al., 2007). O ndice de cristalinidade e o grau de polimerizao so propriedades importantes para a classificao dos polmeros celulsicos. O grau de polimerizao informa a freqncia relativa de ligaes glicosdicas internas e terminais, disponveis para atuao de celulases. Pode ser definido com base no nmero mdio de monmeros e no peso mdio do polmero, assim como inferido a partir de sua viscosidade. J o ndice de cristalinidade est associado reatividade do substrato e pode ser quantificado pelo mtodo de difrao de raios X (D`ALMEIDA, 1988). Estas caractersticas, juntamente com o envoltrio de lignina, conferem macromolcula celulose grande resistncia hidrlise, o que representa um grande desafio para a utilizao dos materiais lignocelulsicos em aplicaes biotecnolgicas, como a produo de etanol de segunda gerao (ARANTES & SADDLER, 2010).
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2.1.2. Hemicelulose Por sua vez, a frao hemicelulsica (15% - 45% do material lignocelulsico seco) consiste em cadeias ramificadas de acares, cujas unidades incluem principalmente aldopentoses, como xilose e arabinose, e aldohexoses, como glicose, manose e galactose. Esta macromolcula contm ainda, cidos hexurnicos, como os cidos -D-glucurnico, D-4-O-metilglucurnico e -D-galacturnico, e deoxiexoses (Figura 2.3). A variedade de ligaes e de ramificaes, assim como a presena de diferentes unidades monomricas, contribui para a complexidade da estrutura hemicelulsica e suas diferentes conformaes (KOOTSTRA et al., 2009). Diferentemente da celulose, a hemicelulose apresenta baixa massa molecular (100-200 unidades glicosdicas) e no contm regies cristalinas, sendo, portanto, mais suscetvel hidrlise qumica sob condies mais brandas. Porm, a fermentao dos acares de cinco carbonos (pentoses) ainda no to desenvolvida quanto os processos envolvendo a glicose (SUN & CHENG, 2005).
A Tabela 2.2 resume as principais caractersticas da celulose e hemicelulose. O entendimento destas caractersticas de fundamental importncia para a
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definio das estratgias de aproveitamento das biomassas como matrias-primas para a produo de bioetanol e de outras substncias qumicas.
Tabela 2.2. Diferenas entre hemicelulose e celulose CELULOSE Unidades de glicose unidas entre si Alto grau de polimerizao (1000 a 15000 unidades de glicose) Forma arranjo fibroso Apresenta regies amorfas e cristalinas atacada lentamente por cido inorgnico diludo a quente insolvel em lcalis Fonte: PEREIRA Jr. et al. (2008) HEMICELULOSE Unidades de diferentes pentoses e hexoses ligadas entre si Baixo grau de polimerizao (60 a 300 unidades de acares) No forma arranjo fibroso Apresenta somente regies amorfas atacada rapidamente por cido inorgnico diludo a quente solvel em lcalis
2.1.3. Lignina J a estrutura bioqumica da frao lignina (10% - 30%) no est relacionada a molculas simples de acar, no sendo pretendida por isso, para a produo de bioetanol por rotas fermentativas. Essa frao, no entanto, desempenha um papel fundamental para o sucesso da tecnologia de hidrlise, uma vez que dificulta o acesso celulose. A estrutura da lignina apresenta forma tridimensional e formada por unidades de p-propilfenol, com substituintes metoxila no anel aromtico, unidas por ligaes do tipo ter e que estabelecem ligaes cruzadas entre si. Esta macromolcula formada pela polimerizao de trs diferentes monmeros: lcool cumrico, lcool coniferlico e lcool sinaplico (Figura 2.4) (LEMOS, 2001). A lignina representa um dos maiores estoques de carbono/energia da natureza e o maior depsito de estruturas qumicas aromticas, constituindo-se em uma fonte potencial de valiosos insumos para a indstria qumica. Apesar de ser possvel produzir diversos produtos com base na lignina, atualmente o foco dos estudos tem se voltado para o uso desse material como fonte de energia para os processos, o que garantiria a auto-suficincia e, eventualmente, at a possibilidade de exportar alguma energia eltrica excedente. Naturalmente, essa situao
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positiva tanto para a viabilidade econmica da tecnologia quanto para os quesitos ambientais, j que reduziria a dependncia por recursos energticos fsseis externos (PEREIRA Jr. et al., 2008).
lcool trans-coniferlico
lcool trans-sinaplico
2.1.4. Pr-tratamentos A converso da maioria dos materiais lignocelulsicos a lcool a partir da celulose requer pr-tratamento antes da hidrlise deste polissacardeo ser realizada. O objetivo do pr-tratamento remover a hemicelulose e a lignina, reduzir a cristalinidade da celulose e aumentar a porosidade dos materiais; alm disso, deve evitar a degradao ou perda de carboidratos e a formao de bioprodutos que possam inibir os microorganismos fermentadores. Existem diversos tipos de prtratamentos, com diferentes rendimentos e efeitos distintos sobre a biomassa e conseqente impacto nas etapas subseqentes. Dentre os vrios mtodos de prtratamento, os mais comumente utilizados so pirlise, Steam explosion, Amomnia fiber explosion, CO2 explosion, ozonlise, hidrlise cida, hidrlise alcalina, deslignificao oxidativa e processo Organosolv (SUN & CHENG, 2005). Apesar do resduo proveniente do sistema de decantao da indstria de celulose, matria-prima utilizada neste trabalho, ser composto por celulose, hemicelulose e lignina, no necessria a submisso desta biomassa a etapas de pr-tratamentos antes da realizao da hidrlise da celulose, uma vez que no seu
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processo de origem, realizada a deslignificao das polpas, permitindo a remoo da maior parte da lignina e da hemicelulose. Esta importante caracterstica coloca este resduo numa posio altamente promissora e competitiva com os outros resduos agroflorestais lignocelulsicos para a produo de bioetanol de segunda gerao, em virtude das etapas de pr-tratamentos representarem custos adicionais na produo deste biocombustvel.
2.1.5. A celulose no contexto de biorrefinaria O termo biorrefinaria relativamente novo, referindo-se ao uso das biomassas e seus resduos, portanto matrias-primas de fontes renovveis, de forma integrada e diversificada para a produo de combustveis, produtos qumicos, energia e outros materiais de interesse no mercado industrial, com a gerao mnima de resduos e emisses de gases nocivos. O conceito de biorrefinaria anlogo ao das atuais refinarias de petrleo, as quais produzem uma variedade de combustveis e produtos qumicos a partir do petrleo in natura (PEREIRA Jr. et al., 2008). A utilizao de biomassas lignocelulsicas dentro do contexto de biorrefinaria baseada em duas diferentes plataformas: a plataforma bioqumica, que emprega processos biolgicos na converso dos acares extrados das biomassas por processos de hidrlise; e a plataforma termoqumica, cujo conceito j est inferido no nome, que emprega processos termoqumicos para a converso de biomassas na presena ou ausncia de O2 (PERVAIZ & CORREA, 2009). Dentro do contexto da plataforma bioqumica, tanto os monmeros da celulose quanto os da hemicelulose, podem ser utilizados como blocos de construo de diferentes e diversos produtos. A partir da hidrlise total da celulose, obtm-se somente glicose, que devido a existncia de uma via metablica comum e exclusiva na maioria dos seres vivos, pode ser biologicamente convertida em bioetanol, cidos orgnicos, glicerol, sorbitol, manitol, frutose, enzimas, polmeros, entre outras substncias. A glicose pode ser ainda convertida quimicamente ou enzimaticamente em hidroximetilfurfural, que um importante intermedirio para a produo de dimetilfurfural (DMF). O bioetanol por sua vez, foco deste presente trabalho, pode ter inmeras aplicaes, dentre elas: como combustvel veicular ou
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aditivo de combustvel; empregado na produo de molculas como butadieno, steres e etileno; aplicado na indstria farmacutica, alimentcia e cosmtica (PEREIRA Jr. et al., 2008). A Figura 2.5 mostra esquematicamente as substncias que podem ser produzidas a partir da glicose proveniente da celulose.
POLISTERES
POLMEROS FURNICOS
CIDO LEVULNICO
ETILENO
ETANOL
BUTANOL ACETONA GLICEROL CIDO CTRICO CIDO BUTRICO CIDO GLUTMICO CIDO LTICO CIDO GLUCNICO CIDO SUCCNICO
Figura 2.5. Biorrefinaria de matrias-primas lignocelulsicas: produtos da celulose (PEREIRA Jr. et al., 2008)
Entretanto, para que tais substncias possam ser produzidas a partir da glicose da celulose, faz-se necessrio hidrolisar este polissacardeo a fim de disponibilizar seus monmeros para os processos ulteriores.
2.1.6. Hidrlise enzimtica da celulose A hidrlise enzimtica da celulose catalisada por enzimas altamente especficas que so chamadas de celulases; na realidade, trata-se de um complexo enzimtico composto por pelo menos trs grandes grupos de celulases: endoglucanases, que clivam randomicamente as ligaes internas da regio amorfa, liberando oligossacardeos com terminaes redutoras e no redutoras livres; exoglucanases, subdivididas em celobiohidrolases, que so responsveis pela hidrlise dos terminais redutores (CBHs do tipo I) e no redutores (CBHs do tipo II),
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e glucanohidrolases (GHs), que so capazes de liberar molculas de glicose diretamente dos terminais do polmero; e -glucosidases, que hidrolisam a celobiose e oligossacardeos solveis de baixo grau de polimerizao (menor que 7) a glicose. As enzimas do complexo celulsico sofrem inibio pelo seu produto de hidrlise (ARANTES & SADDLER, 2010). Individualmente, as enzimas do complexo celulsico no hidrolisam a celulose de maneira eficiente, sendo necessria uma ao complementar e sinrgica, ou seja, uma ao em conjunto para que o rendimento das celulases quando atuam simultaneamente seja melhor do que a soma dos rendimentos individuais. So conhecidas pelo menos trs formas de sinergia (LYND et al., 2002): Sinergia endo-exo: as endoglucanases atuam nas regies amorfas, liberando terminais redutores e no redutores, nos quais atuaro as CBHs do tipo I e do tipo II, respectivamente. Sinergia exo-exo: as CBHs I e CBHs II atuam simultaneamente nos terminais redutores e no redutores liberados pelas endoglucanases. Sinergia exo-BG e endo-BG: as exoglucanases e endoglucanases liberam celobiose e oligossacardeos, respectivamente, que so substratos da -glucosidase. Durante a hidrlise de substratos solveis, ocorrem basicamente os seguintes fenmenos: a adsoro das celulases aos stios disponveis no substrato celulsico; formao de um complexo ativo celulases-substrato; hidrlise das ligaes glicosdicas do polmero celulsico; e dessoro do complexo celulsico do substrato hidrolisado (ZHANG & LYND, 2004). Muitos fatores podem afetar a hidrlise enzimtica da celulose, como por exemplo, a concentrao de substrato, a atividade da celulase e as condies da reao (temperatura, pH, bem como outros parmetros). Para melhorar o rendimento e a taxa de hidrlise, necessrio otimizar o processo e reforar a atividade das celulases (SUN & CHENG, 2002). Quando comparada com a hidrlise cida, a hidrlise enzimtica da celulose geralmente conduzida em condies mais brandas (pH 4,8 e temperatura entre 45 e 50C), no causa problemas de corroso e permite maiores rendimentos
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(75%- 85%), alm de possibilitar a fermentao simultnea sacarificao (processo SSF - Simultaneous Saccharification and Fermentation) que ser discutido posteriormente. Devido seu grande potencial de evoluo, muitos especialistas vem a hidrlise enzimtica como a chave para a produo de bioetanol de segunda gerao a um custo competitivo em longo prazo (PHILIPPIDIS & SMITH, 1995; LYND et al., 2002). Tanto as bactrias como os fungos (aerbios ou anaerbios, mesfilos ou termfilos) podem produzir celulases que hidrolisam materiais lignocelulsicos. Dentre as bactrias, as espcies Cellulomonas fimi e Thermomonospora fusca so as mais estudadas para a produo de celulases. Dentre os fungos que produzem celulases, esto Sclerotium rolfsii, Phanerochaete chrysosporium e os dos gneros Trichoderma, Aspergillus, Penicillium e Schizophyllum. De todos estes gneros, Trichoderma tem sido o mais amplamente estudado para a produo de celulases (DUFF & MURRAY, 1996).
As primeiras matrias-primas usadas na fabricao de celulose em escala industrial foram as madeiras do pinheiro e do abeto das florestas das zonas frias do norte da Europa e Amrica do Norte. Outras espcies - o vidoeiro, a faia e o choupo preto nos Estados Unidos e Europa, o pinheiro no Chile e Nova Zelndia e o eucalipto no Brasil, Espanha, Portugal, Chile e frica do Sul - so utilizadas na indstria de celulose. Praticamente qualquer rvore pode ser utilizada para produzir celulose. Cada espcie produz fibras de celulose com caractersticas especficas, o que confere ao papel propriedades especiais (CAMPOS, 1997). Atualmente, a produo de celulose baseia-se principalmente em florestas plantadas, embora alguns pases asiticos, europeus e a Amrica do Norte ainda utilizem florestas nativas. O Brasil utiliza essencialmente espcies de eucalipto de florestas plantadas, localizadas principalmente nos estados de Minas Gerais, So Paulo, Esprito Santo, Santa Catarina, Rio Grande do Sul, Bahia, Par e Maranho (BRACELPA, 2010).
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Eucalipto (do grego, eu + = "verdadeira cobertura") a designao vulgar das vrias espcies vegetais do gnero Eucalyptus, ainda que o nome se aplique a outros gneros de mirtceas. O gnero inclui mais de 700 espcies, quase todas originrias da Austrlia, e se adapta a praticamente todas as condies climticas (BINKLEY et al., 2003). O eucalipto oferece diversas vantagens em comparao a outras espcies florestais utilizadas no mundo para a produo de celulose, inclusive as nativas. Graas ao clima favorvel do Brasil e ao avano alcanado em pesquisa e tecnologia florestal, o eucalipto apresenta o menor ciclo de crescimento quando comparado com outras rvores, podendo ser colhido em apenas 7 anos para a produo de celulose, quando atinge at 35 metros de altura (Tabela 2.3). Tambm utilizado para extrao de leos essenciais com os quais so fabricados produtos de limpeza, alimentcios, perfumes e remdios. E com a madeira, tradicionalmente, so produzidas tbuas, sarrafos, lambris, ripas, vigas e postes, entre outros (BRACELPA, 2010).
Tabela 2.3. Comparao de rotao e rendimento de rvores rvore Eucalipto Eucalipto Eucalipto Eucalipto Eucalipto Btula Pinus spp Pinus radiata Pinus radiata Pinus elliottii Pinus de Oregon Picea abies Picea glauca Piece mariana Pas Brasil frica do Sul Chile Portugal Espanha Sucia, Finlndia Brasil Chile Nova Zelndia EUA Canad (costa) Sucia, Finlndia Canad Canad (leste) Rotao (anos) 7 8-10 10-12 12-15 12-15 35-40 15 25 25 25 45 70-80 55 90 Rendimento (m3/ha ano) 41 20 30 12 10 4 35 22 22 10 7 4 3 2
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No comeo, a celulose de eucalipto era vista como fibra secundria, de menor valor. Mas, gradativamente, passou a ser muito requisitada pela indstria papeleira, em funo das caractersticas nicas da fibra (FORRESTER et al., 2006). A fibra de eucalipto trata-se de uma fibra rgida e curta. Na verdade, a fibra mais curta entre as espcies de madeira dura no mundo e seu comprimento mdio pode chegar a apenas 0,65 mm. As fibras da btula, do choupo, da faia e do carvalho so 15% a 40% maiores. E as fibras das conferas medem muito mais que o mnimo de 2 mm. Alm disso, a fibra de menor granulao dentre aquelas mais comumente encontradas no mercado de celulose. A granulao igual ao peso da fibra dividido por seu comprimento (STAPE et al., 2010). Como sua fibra curta e de baixa granulao, o eucalipto apresenta um nmero alto de fibras por grama, sendo comumente encontrados valores na faixa de 20 milhes. A ttulo de exemplo, o pinheiro do sul dos Estados Unidos est no extremo oposto, com 1 milho de fibras por grama. As propriedades especialssimas de suas fibras tornam a pasta celulsica do eucalipto a melhor matria-prima para a maioria dos tipos de papel. Quando devidamente processada, a pasta de celulose de eucalipto alcana todas as exigncias de alta qualidade, agregando mais valor ao produto final (ARACRUZ, 2009). As florestas plantadas de eucalipto visam garantia do suprimento de matria-prima para as indstrias de papel e celulose, siderurgia a carvo vegetal, lenha, serrados, compensados e lminas e painis reconstitudos (aglomerados, chapas de fibras e MDF) (LOPES, 1998). No Brasil, para o cultivo do eucalipto existem duas regies em termos climticos: tropical e subtropical. A regio sudeste, predominantemente tropical, concentra a maior rea de plantio. A localizao do plantio e o comportamento da espcie so os principais parmetros que delimitam o uso de eucalipto. Na Tabela 2.4 algumas espcies de eucalipto so caracterizadas, indicando o uso de sua madeira, bem como o seu comportamento no tipo de rea agrcola em que plantada (EMBRAPA, 2007). O Setor Florestal Brasileiro conta com, aproximadamente, 530 milhes de hectares de florestas nativas, 43,5 milhes de hectares em Unidades de Conservao Federal e 4,8 milhes de hectares de florestas plantadas com
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eucalipto, pinus e accia-negra. As atividades florestais no Brasil geram mais de 2 milhes de empregos, contribuindo com mais de 20 bilhes de dlares para o PIB (Produto Interno Bruto), exportando mais de US$ 4 bilhes (8% do agronegcio) e contribuindo com 3 bilhes de dlares em impostos por ano, arrecadados de 60.000 empresas (BRACELPA, 2010).
Tabela 2.4. Caracterizao de espcies de eucalipto Espcie de eucalipto E. dunnii Localizao da propriedade agrcola Em regies sujeitas a geadas severas e freqentes Em regies sujeitas a geadas severas e freqentes Uso da madeira Fins energticos (fonte de energia ou carvo vegetal) e serraria Fins energticos (fonte de energia ou carvo vegetal) Fins energticos (fonte de energia ou carvo vegetal), celulose de fibra curta, construes civis e serraria Uso geral Fins energticos, mveis, estruturas, caixotaria, postes, escoras, moures, celulose Fins energticos, serraria, postes, dormentes, moures, construes Fins energticos (fonte de energia ou carvo vegetal), construes civis e uso rural Comportamento da espcie Apresenta rpido crescimento e dificuldade na produo de sementes Boa forma do fuste, intensa rebrota, fcil produo de sementes e requer volume alto de precipitao pluviomtrica anual Maior crescimento e rendimento volumtrico das espcies e aumenta a qualidade da madeira com a durao do ciclo Crescimento menor que E. grandis e boa regenerao por brotao das cepas Madeira mais densa que E. grandis e menos suscetvel deficincia de Boro rvores recomendadas para regies de dficit hdrico anual elevado Excelente forma do fuste, durabilidade natural e alta resistncia a insetos e fungos
E. benthamii
E. grandis
Em regies livres de geadas severas Em regies livres de geadas severas Em regies livres de geadas severas Em regies livres de geadas severas Em regies livres de geadas severas
E. urophylla
E. saligna
E. camaldulensis
E. cloeziana
2.2.1. Produo de celulose Para produo de papel utiliza-se como matria-prima a pasta de celulose, que por sua vez produzida a partir da madeira. As etapas da produo de madeira constituem-se basicamente na produo de mudas e no plantio destas, que pode ser mecanizado, manual ou semi mecanizado. Em seguida, as rvores so colhidas
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para que a madeira seja disponibilizada para a produo de celulose. A produo de celulose constitui-se de quatro etapas: picagem, polpao, branqueamento e secagem, as quais sero descritas a seguir (Figura 2.6) (ARACRUZ, 2009).
Figura 2.6. Fluxograma de blocos da produo da pasta de celulose Elaborado com base em ROSA (2003)
Picagem Na etapa de picagem, a madeira chega como toras, com 5,5 m de comprimento e dimetro variando entre 7 cm e 40 cm. Estas toras so armazenadas em ptios e depois enviadas a um descascador, sendo a casca posteriormente queimada para gerao de energia. As toras descascadas seguem atravs de esteiras at o picador, onde so cortadas em pedaos pequenos chamados cavacos. Os cavacos so peneirados de forma que fiquem dentro de uma faixa de dimetro estabelecida, retirando lascas e finos, e transportados por correias at os digestores, onde se inicia o processo de polpao (ARACRUZ, 2009).
Polpao Para produzir a polpa, os cavacos so submetidos s seguintes etapas: cozimento; depurao e lavagem; deslignificao e lavagem; e estocagem (LOPES, 1998).
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Cozimento: o objetivo do cozimento dos cavacos separar a lignina, extrativos e outros materiais no celulsicos, responsveis pela unio das fibras de celulose. Durante este processo os cavacos so colocados em autoclaves, chamados de cozinhadores ou digestores, onde so tratados com produtos qumicos (licor de cozimento, NaOH, Na2S) e submetidos temperatura, presso e tempos variveis dependendo do produto final desejado at que se consiga a dissoluo do maior grau possvel do material no celulsico.
Depurao e lavagem: o objetivo da depurao separar os materiais no cozidos, como impurezas, areia, ns e palitos. Em seguida, realiza-se a lavagem para separar as fibras (liberadas durante o processo de cozimento) das substncias extradas da madeira (dissolvidos durante o cozimento) e dos materiais qumicos (licor de cozimento).
Deslignificao e lavagem: o objetivo da deslignificao a dissoluo da lignina residual atravs de um tratamento com oxignio. A seguir a lignina retirada da massa celulsica atravs de uma segunda lavagem, resultando numa polpa pr-branqueada.
Estocagem: a celulose pr-branqueada armazenada na torre de estocagem e encaminhada ao processo de branqueamento ou diretamente para as unidades de secagem e/ou mquinas de papel.
Branqueamento O objetivo do branqueamento melhorar as propriedades ticas da pasta celulsica (brancura, alvura, opacidade e estabilidade da pasta). um processo fsico-qumico no qual so removidos os derivados da lignina (remanescentes na pasta celulsica aps o processo de polpao) e adicionados produtos que modificam quimicamente as substncias existentes na pasta, descolorando-a. Aps este processo a pasta est pronta para ser enviada para as mquinas de papel e/ou unidades de secagem. Neste processo, a polpa tratada com qumicos, como perxido de hidrognio, dixido de cloro, oxignio e soda custica contendo cloro, que propiciam o clareamento da polpa at o grau requerido pela indstria, o que depende da finalidade que a pasta de celulose ter (ROSA, 2003).
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Secagem Aps o branqueamento, a celulose enviada para a secagem. Nesta operao a gua retirada da celulose, at que esta atinja o ponto de equilbrio com a umidade relativa do ambiente (90% de fibras e 10% de gua), obtendo-se assim a pasta de celulose pronta para venda e uso na produo de papel (LOPES, 1998).
2.2.2. Resduos gerados na produo de celulose Dentre os resduos da indstria de celulose, esto os resduos da madeira, provenientes do descascamento e picagem das toras e do peneiramento dos cavacos; resduos do digestor, como alcali ativo, licor negro e inmeros insumos qumicos; resduos celulsicos do sistema de decantao, oriundos da etapa de polpao e branqueamento; e resduos de outras etapas, como resduos florestais, lama de cal, ClO2, lodo biolgico e cinza. Estima-se que para cada 100 toneladas de celulose produzida, 48 toneladas de resduos sejam geradas (PEDRAZI, 2005). As alternativas possveis para a destinao dos resduos de madeira so a compostagem, produo de energia, uso como lenha e carvo vegetal, produo de painis etc. Atualmente, a empresa Aracruz Celulose gera, aproximadamente, 165 mil ton/ano de casca (55% umidade) e 90 mil ton./ano de cavacos residuais (45% umidade). Com esses resduos, gera-se em mdia, 2,6 toneladas de vapor/ tonelada de biomassa seca e a mdia de gerao de energia eltrica de 8 toneladas vapor/ MW. O excedente de energia vendido, bem como o excedente de biomassa. Esses valores variam de acordo com o suprimento de biomassa (ARACRUZ, 2009). Como a madeira do eucalipto constituda de elementos anatmicos dos quais os mais importantes so as fibras, quando so gerados resduos fibrosos, perde-se um material valioso rico em celulose. Essa perda implica no aumento dos custos, no s pela perda de matria-prima, mas tambm por ter mais um resduo a ser manuseado, transportado e disposto. Por essa razo, gerar resduos slidos fibrosos em fbricas de celulose um grande problema (PEDRAZI, 2005). Em relao ao licor negro que sai do digestor, grande parte das fbricas produzem energia a partir de sua queima e/ou o reutilizam no processo aps um tratamento que o converte novamente em licor branco, que utilizado no cozimento.
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Desta maneira, as fbricas reduzem a quantidade de licor negro liberado nos efluentes lquidos. Os rejeitos do digestor so resduos problemticos, pois possuem alcalinidade ativa, pH alto, lixiviam lquido escuro, e com isso, possuem impacto ambiental substancial (ARACRUZ, 2009). Em relao aos resduos celulsicos do sistema de decantao, so gerados nas diferentes etapas do processo, como depurao, deslignificao e branqueamento. Estes resduos so ricos em fibras celulsicas e quando vo para os efluentes, causam problemas de slidos suspensos e de DQO (Demanda Qumica de Oxignio) elevados. Essas fibras ou exigiro grandes decantadores para a sua remoo como lodo, ou iro para os cursos dgua causando inmeros problemas de poluio. Se forem despejadas nos rios, podem se acomodar nas guelras dos peixes, causando sua mortandade, e/ou acumular-se na forma de sedimentos nos fundos dos rios, podendo sofrer fermentaes que geram odor desagradvel (LOPES, 1998). Este resduo celulsico gerado juntamente com outros resduos, como o licor negro e insumos qumicos residuais do digestor, que so coletados e encaminhados para tubulaes nicas que os levam para os decantadores, equipamentos situados no final do processo, onde o efluente lquido separado dos slidos. Atualmente, a empresa Aracruz Celulose produz, aproximadamente, 30 mil toneladas/ano destes resduos celulsicos, que so clarificados e aproveitados como subprodutos, por exemplo, na produo de embalagens, caixas (por exemplo, caixa de ovos), suportes, papis higinicos, capa de caderno, etc. (ARACRUZ, 2009). Por ser esse resduo fibroso uma biomassa, portanto composto
majoritariamente por celulose, hemicelulose e lignina, o mesmo pode ser aproveitado na produo de inmeros produtos de interesse industrial que podem conferir um valor agregado muito maior. Dentre esses produtos, encontram-se polmeros, cidos (actico, succnico, urnico, etc.), monossacardeos, fenol, xilitol, sorbitol, combustvel lquido, como o etanol, e produtos qumicos em geral. Assim, pode-se translocar essa biomassa de sua posio de resduo para a posio de matria-prima, excluindo assim, um componente do cenrio de resduos gerados pelas indstrias (PEREIRA Jr. et al., 2008). Desta maneira, esse resduo celulsico produzido na indstria de celulose constitui a matria-prima de interesse deste trabalho para a produo de bioetanol
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como combustvel veicular. Baseado neste propsito faz-se necessrio submeter o citado resduo hidrlise enzimtica, a fim de disponibilizar seus monmeros de glicose para serem utilizados pelos microorganismos fermentadores.
2.2.3. Aspectos econmicos da indstria de celulose A indstria brasileira de celulose encerrou 2009 com a produo de 13,5 milhes de toneladas de celulose, aumentando 6% em relao a 2008 (Figura 2.7), quando o Brasil ocupou a quarta posio no ranking dos maiores produtores mundiais de celulose (Tabela 2.5). Em relao exportao brasileira de celulose em 2009, 8,2 milhes de toneladas foram destinadas ao mercado externo, principalmente para os pases europeus (46%) (Figura 2.8) (BRACELPA, 2010). O setor de celulose, juntamente com o setor de papel, formado por 220 empresas instaladas em 450 municpios de 17 estados brasileiros, mantendo 110 mil empregos diretos (65 mil nas atividades industriais e 45 mil pessoas dedicadas rea florestal). O faturamento do setor de celulose e papel em 2009 foi de 28,4 bilhes de reais e foi responsvel pela arrecadao de 2,1 bilhes de reais de impostos (BRACELPA, 2010).
16 Produo (milhes de ton) 14 12 10 8 6 4 2 0 1970 1980 1990 2006 Ano 2007 2008 2009
Figura 2.7. Evoluo da produo brasileira de celulose Elaborado com base em BRACELPA (2010)
25
Tabela 2.5. Maiores produtos mundiais de celulose em 2008 Pas 1. EUA 2. China 3. Canad 4. Brasil 5. Sucia 6. Finlndia 7. Japo 8. Rssia 9. Indonsia 10. Chile 11. ndia 12. Alemanha Demais Total Produo (mil tonelada) 51.479 21.477 20.299 12.697 12.071 11.720 10.670 7.430 6.435 4.985 3.662 2.902 26.591 192.418
Amrica do Norte 18 %
sia / Oceania 12 %
China 24 %
Europa 46 %
26
2.3.1. Dimenses tcnicas e ambientais do uso de bioetanol como combustvel veicular Qualquer que seja sua origem biomassa ou processos petroqumicos e carboqumicos , o etanol um combustvel, ou seja, libera significativas quantidades de calor ao se queimar. Contudo, o etanol apresenta algumas diferenas importantes em relao aos combustveis convencionais derivados de petrleo. A principal delas o elevado teor de oxignio, que constitui 35% em massa do etanol. As caractersticas do etanol possibilitam a combusto mais limpa e o melhor desempenho dos motores, contribuindo para a reduo das emisses poluidoras. Alm disso, comporta-se como um verdadeiro aditivo para a gasolina (GOLDEMBERG et al., 2008). Na Tabela 2.6 esto sintetizadas as principais caractersticas do etanol e de uma gasolina tpica.
Tabela 2.6. Propriedades da gasolina e do bioetanol Parmetro Poder calorfico Densidade Octanagem RON (Research Octane Number) Octanagem MON (Motor Octane Number) Calor latente de vaporizao Relao ar/combustvel estequiomtrica Presso de vapor Temperatura de ignio Solubilidade em gua Fonte: GOLDEMBERG & MACEDO (1994) Unidade kJ/kg kJ/litro kg/litro __ __ kJ/kg __ KPa C % volume Gasolina 43.500 32.180 0,72 0,78 90 100 80 92 330 400 14,5 40 65 220 ~0 Etanol 28.225 22.350 0,792 102 130 89 96 842 930 9,0 15 17 420 100
O etanol, ou lcool etlico, uma substncia com frmula molecular C2H6O, que pode ser utilizada como combustvel em motores de combusto interna com ignio por centelha (ciclo Otto) de duas maneiras: 1) em misturas de gasolina e
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etanol anidro; ou 2) como etanol puro, geralmente hidratado (GOLDEMBERG et al., 2008). Segundo a legislao brasileira, considerando teores em massa, o etanol anidro deve conter menos de 0,6% de gua, enquanto para o etanol hidratado, esse teor deve estar entre 6,2 e 7,4%. O etanol hidratado puro deve ser usado em motores fabricados ou adaptados especificamente para esse fim, em particular com a adoo de taxas de compresso mais elevadas, visando utilizar adequadamente a octanagem mais alta do etanol frente gasolina e obter ganhos de eficincia de 10%. Aps dcadas de aperfeioamento de motores especialmente fabricados para etanol, a tecnologia automotiva est suficientemente desenvolvida para permitir que veculos a etanol puro hidratado tenham desempenho, dirigibilidade, condies de partida a frio e durabilidade absolutamente similares aos motores a gasolina, especialmente em pases com invernos moderados (BNDES, 2008). A partir de 2003 foram lanados comercialmente no Brasil, veculos com os motores flexveis (flex-fuel), capazes de utilizar, sem qualquer interferncia do motorista, desde 100% de etanol hidratado at uma gasolina com 20% a 25% de etanol anidro (JOSEPH, 2005). Como conseqncia de sua composio, comparativamente s gasolinas tpicas, a combusto da gasolina com etanol e do etanol puro em motores produz menores emisses de monxido de carbono (CO), xidos de enxofre (SOx), hidrocarbonetos e outros compostos poluentes (GOLDEMBERG et al., 2008). Segundo MACEDO et al. (2008), s no ano de 2003, emisses equivalente a 27,5 milhes toneladas de CO2 foram evitadas devido substituio da gasolina por etanol. E com o consumo de etanol em carros flex brasileiros, entre maro de 2003 e janeiro de 2010, evitou-se a emisso de 83,5 milhes de toneladas de gs carbnico na atmosfera (SZWARC, 2010). Por outro lado, elevam-se as concentraes dos aldedos (compostos do tipo R-CHO) e dos xidos de nitrognio (NOx). Entretanto, sinaliza-se uma preocupao especial com as emisses de aldedos associadas ao uso de etanol, pois essas substncias apresentam potencial cancergeno e podem se apresentar em teores mais elevados no escapamento dos motores que utilizam etanol do que naqueles a gasolina pura. Todavia, os catalisadores reduzem esses poluentes a nveis
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tolerveis, sem agravantes (ABRANTES et al., 2005). A emisso mdia de aldedos nos veculos novos brasileiros de 0,014 g/km para os veculos a etanol e 0,002 g/km para os veculos a gasolina (contendo 22% de etanol anidro), ndices inferiores ao atual limite de 0,020 g/km estabelecido pela legislao ambiental brasileira (CONAMA, 2009). Na Figura 2.9 apresentada a reduo da emisso de gases dos veculos produzidos no Brasil ao longo das dcadas de 80 e 90, devido ao desenvolvimento tecnolgico dos motores e da introduo do etanol (BNDES, 2008). Segundo estudos realizados na Austrlia, a adoo de 10% de etanol na gasolina permitiu decrescer em 32%, 12% e em mais de 27% as emisses de CO, hidrocarbonetos e aromticos, respectivamente, reduzindo o risco carcinognico em 24% (BNDES, 2008). No caso da utilizao de etanol anidro, foram possveis atingir redues de 57% de CO, 64% de hidrocarbonetos e 13% de NOx (SANTOS et al., 2000).
Figura 2.9. Evoluo das emisses de gases dos veculos brasileiros (BNDES, 2008)
2.3.2. Evoluo do bioetanol combustvel no mercado O desenvolvimento histrico do uso do bioetanol como combustvel veicular permitiu que essa alternativa energtica se tornasse um componente regular da
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matriz energtica brasileira. As Figuras 2.10, 2.11 e 2.12 sintetizam bem o processo de expanso da produo de bioetanol durante as ltimas dcadas. Na Figura 2.10, nota-se como a produo de bioetanol de primeira gerao (anidro e hidratado), produzido a partir da cana-de-acar, respondeu bem expanso da demanda desse biocombustvel (UNICA, 2009), sinalizada, por sua vez, na Figura 2.11, pela evoluo do teor de bioetanol anidro na gasolina desde o incio de seu uso (BNDES, 2008), e na Figura 2.12, pelo crescimento da produo de veculos a bioetanol hidratado (ANFAVEA, 2008).
Figura 2.10. Evoluo da produo de cana-de-acar, etanol e acar no Brasil (UNICA, 2009)
Ano
Figura 2.11. Teor mdio de etanol anidro na gasolina brasileira (BNDES, 2008)
30
Ano
Figura 2.12. Evoluo da produo de veculos a etanol hidratado e de sua participao nas vendas de veculos novos (ANFAVEA, 2008)
O aumento da demanda desse biocombustvel se manteve mais ou menos constante, apesar do grande estancamento das vendas de veculos a bioetanol hidratado na dcada de 90. Assim, desde os anos 1970, o bioetanol de primeira gerao vem sendo usado regularmente em volumes importantes no Brasil. Outra forma de avaliar a atratividade do bioetanol frente aos combustveis convencionais comparando o preo mdio de venda ao consumidor do bioetanol hidratado com o preo praticado para a gasolina comum (Figura 2.13). No caso dos veculos flexible fuel, movidos a lcool e/ou a gasolina, o bioetanol adotado, em geral, at um limite de 70% do preo da gasolina. Nesse contexto, observa-se que, durante a maior parte dos ltimos anos, utilizar o bioetanol em vez da gasolina foi mais interessante, exceto durante poucos e curtos perodos quando seu preo elevou-se ao final da safra, porm reduzindo com seu incio, como indicado na Figura 2.13 (ANP, 2009). Baseado em todas as vantagens proporcionadas pelo uso do etanol comparado a gasolina, registrou um grande aumento das vendas desse biocombustvel. A Figura 2.14 apresenta as vendas de lcool etlico, incluindo o lcool hidratado e o lcool anidro misturado na gasolina classe C, e de gasolina automotiva, incluindo apenas a da classe A, no Brasil (1999-2008) (ANP, 2009).
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Figura 2.13. Evoluo dos preos mdios para o consumidor do bioetanol hidratado e da gasolina comum no Brasil (ANP, 2009)
Figura 2.14. Vendas de lcool etlico e de gasolina automotiva no Brasil (ANP, 2009)
Na Figura 2.15 apresentada a evoluo da produo de etanol de primeira gerao dos Estados Unidos (EUA), que utiliza o milho como matria-prima, e do Brasil, a qual foi ultrapassada pela produo estadunidense em 2005. Em 2008, a produo brasileira encerrou em 22,5 bilhes de litros de etanol, contra 34 bilhes de litros produzidos pelos EUA, que ocupou a primeira posio no ranking de produo mundial de etanol, seguido ento do Brasil, Unio Europia (UE) (2,8
32
bilhes) e China (1,89 bilhes), como pode ser visualizado na Figura 2.16 (MAPA, 2010; RFA, 2010). Segundo o MAPA (2010), a produo de etanol brasileira em 2009 foi 27,7 bilhes de litros e na safra de 2009/2010, posio em 01 de fevereiro deste ano, j de 25,1 bilhes de litros.
40 35
Brasil EUA
Ano
Figura 2.15. Evoluo da produo de bioetanol do Brasil e dos EUA Elaborado com base em MAPA (2010) e RFA (2010)
Figura 2.16. Produo mundial de bioetanol combustvel em 2008 Elaborado com base em RFA (2010)
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Com a crescente produo de bioetanol de primeira gerao no Brasil, a rea de cultivo de cana-de-acar dever ser expandida para atender crescente demanda nacional e internacional. Entretanto, para evitar a expanso desmedida das reas de cultivo, tm-se desenvolvido processos biotecnolgicos que permitam a utilizao de biomassas residuais de composio lignocelulsica, abundantemente geradas nos setores agrcolas e florestais, para a produo de bioetanol de segunda gerao. Perspectivas norte-americanas mais otimistas afirmam que em 2022 sero produzidos aproximadamente 60 bilhes de litros de biocombustveis celulsicos ou de segunda gerao, como pode ser visualizado na Figura 2.17. De acordo com esta Figura, a produo de biocombustveis de segunda gerao apresentar o maior crescimento quando comparada com o bioetanol de milho, de primeira gerao.
40
30 Bilhes de gales
20
10
0
2008 2009 2010 2011 2012 2013 2014 2015 2016 2017 2018 2019 2020 2021 2022
Ano
2.3.3. Progresso das aes ambientalistas Em 1975, o Programa Brasileiro de lcool (Prolcool) foi criado com o propsito de reduzir as importaes de petrleo atravs da produo de etanol a partir da cana-de-acar. A produo de etanol subiu de 0,6 milhes m3, em 1975,
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para 18 milhes m3 no perodo de 2006-2007, com o aumento da produtividade agrcola e industrial (LIMA et al., 2001; BNDES, 2008). Em 1997, um importante acordo foi realizado na cidade de Kyoto (Japo), que ficou conhecido como Protocolo de Kyoto, no qual foram estabelecidos os mecanismos e limites para a reduo das emisses de gases do efeito estufa (GEE) (perfluorcarbono, hexafluoreto de enxofre, metano, xido nitroso, hidrofluorcarbono e dixido de carbono) de 5,2% entre 2008 e 2012, em relao aos nveis verificados em 1990 (PEREIRA, 2006). Se o Protocolo de Kyoto for implementado com sucesso, estima-se que a temperatura global reduza entre 1,4C e 5,8C at 2100, entretanto, isto depender muito das negociaes aps o perodo 2008/2012, pois h comunidades cientficas que afirmam categoricamente que a meta de reduo de 5% seria insuficiente para a mitigao do aquecimento global (LOUETTE, 2007). Em 2009, no perodo de 7 a 18 de dezembro, realizou-se em Copenhague (Dinamarca) a 15 Conferncia das Naes Unidas sobre Mudana do Clima, conhecida como COP 15, reunindo lderes de todo o mundo que pretendiam definir o comportamento dos pases para a diminuio do aquecimento global, atravs de um tratado que ampliasse e prolongasse o Protocolo de Kyoto. Dentre as intenes aprovadas em COP 15, encontram-se a de cada pas se empenhar para que o aumento da temperatura do planeta no ultrapasse 2C e a criao de um fundo de 10 bilhes de dlares por ano at 2012, que ajudar os pases pobres a enfrentar problemas de mudanas climticas (FOLHA ONLINE, 2009).
2.3.4. Produo de bioetanol de segunda gerao Tanto para a produo de etanol de primeira gerao, a partir de cana-deacar, quanto de segunda gerao, a partir de biomassas de composio lignocelulsica, a via fermentativa a via mais importante para a obteno do lcool etlico no Brasil. Um dos fatores que torna a produo de bioetanol por fermentao a forma mais econmica de sua obteno, o grande nmero de matrias-primas naturais e residuais existentes em todo pas (PEREIRA Jr. et al., 2008).
35
O microorganismo que mais se emprega na fermentao alcolica a levedura Saccharomyces cerevisiae, devido sua capacidade de assimilar facilmente a glicose da cana ou da celulose de biomassas residuais (SNCHEZ & CARDONA, 2008). Dentre as bactrias, a mais promissora a Zymomonas mobilis, que tem alta eficincia energtica resultando num alto rendimento de etanol (maior que 90%). Uma das desvantagens do uso desta bactria na fermentao do caldo de cana e de outros meios com sacarose a formao de polissacardeos, que aumenta a viscosidade do meio de fermentao, e de sorbitol, um produto da reduo da frutose que diminui a eficincia da converso de sacarose a etanol (LEE & HUANG, 2000). A fermentao alcolica inicia-se com a gliclise, tambm chamada de via Embden-Meyerhof, na qual ocorre a oxidao da glicose em dois cidos pirvicos em duas etapas, podendo ocorrer na presena de oxignio ou no. Na primeira etapa, duas molculas de ATP so utilizadas enquanto uma molcula de glicose fosforilada, reestruturada e quebrada em dois compostos de trs carbonos: gliceraldedo 3-fosfato (GP) e diidroxiacetona fosfato (DHAP), que imediatamente convertida em GP. Na segunda etapa, as duas molculas de GP so oxidadas, em muitos passos, em duas molculas de cido pirvico. Nessas reaes, duas molculas de NAD+ so reduzidas a NADH e quatro molculas de ATP (adenosina trifosfato) so formadas pela fosforilao em nvel de substrato, com saldo final positivo de duas molculas de ATP para cada molcula de glicose que oxidada. Aps a gliclise, as duas molculas de cido pirvico so convertidas em duas molculas de acetaldedo e duas molculas de CO2. As molculas de acetaldedo so ento reduzidas por duas molculas de NADH para formar duas molculas de etanol, o produto final da fermentao (Figura 2.18) (TORTORA et al., 2005). Juntamente com o etanol e o CO2, o metabolismo anaerbico leva tambm a formao e excreo de glicerol, cidos orgnicos (succnico, actico, pirvico e outros), lcoois superiores, acetaldedo, acetona, butilenoglicol e outros componentes de menor significado quantitativo. Alm disso, ocorre simultaneamente o crescimento das leveduras. Estima-se que 5% do acar metabolizado pela levedura sejam desviados para gerar tais produtos secundrios da fermentao, resultando num rendimento de 95% em etanol; entretanto, em condies industriais,
36
nas quais fatores qumicos (pH, oxigenao, nutrientes minerais e orgnicos, inibidores), fsicos (temperatura, presso osmtica) e microbiolgicos (espcie, linhagem e concentrao do microorganismo, contaminao bacteriana) afetam a levedura, rendimentos de 90% normalmente so obtidos (GUTIERREZ et al., 1991; ALVEZ, 1994).
Glicose
2 Etanol
Hexoquinase
Glicose 6-fosfato
Fosfoglicoisomerase
2 Acetaldedo
Frutose 6-fosfato
Fosfofrutoquinase
2 cidos pirvicos
Frutose 1,6-difosfato
Aldolase
Piruvato quinase
2 cido 2-fosfoglicrico
Fosfogliceromutase
2 cido 1,3difosfoglicrico
Fosfoglicero-quinase
2 cido 3fosfoglicrico
Figura 2.18. Fermentao alcolica Elaborado com base em TORTORA et al. (2005)
37
2.3.5. Estratgias para a produo de bioetanol de segunda gerao Com o intuito de aproveitar ambas fraes polissacardicas (celulose e hemicelulose) das biomassas residuais de composio lignocelulsica para a produo de bioetanol de segunda gerao, quatro estratgias so concebidas, cada uma com diferente estgio de desenvolvimento, que sero descritas a seguir. Hidrlise e Fermentao em Separado (Separated Hydrolysis and Fermentation SHF) a concepo mais antiga, na qual a hidrlise da celulose, aps o prtratamento da biomassa para a hidrlise e solubilizao da hemicelulose, ocorre num estgio separado da fermentao, bem como a produo de celulases que so utilizadas na hidrlise da celulose. Neste tipo de estratgia os acares provenientes da hemicelulose aps o pr-tratamento podem ser convertidos a etanol em um fermentador separado, sendo o slido remanescente, denominado celulignina, encaminhado para a hidrlise da celulose (PEREIRA Jr. et al., 2008). O fluxograma apresentado na Figura 2.19 descreve o processo SHF. A principal vantagem dessa estratgia permitir que a hidrlise e a fermentao possam ser conduzidas nas condies timas. Geralmente, a temperatura tima para as celulases est entre 45oC e 50oC, dependendo do microrganismo produtor. E a temperatura tima para a maior parte dos microrganismos produtores de etanol est entre 30oC e 37oC (OLSSON et al., 2006). Por outro lado, a principal desvantagem a inibio do complexo celulsico pelos acares liberados na hidrlise, principalmente celobiose e glicose que se acumulam no meio, conferindo uma hidrlise incompleta da celulose e rendimentos no muito altos (WINGREN et al., 2005). Segundo TAHERZADEH & KARIMI (2007), outra desvantagem do SHF a possibilidade de contaminao. Como o tempo envolvido na etapa de hidrlise muito longo, a soluo de glicdios torna-se uma fonte disponvel para os microrganismos indesejados. Alm disso, as prprias enzimas podem constituir uma fonte potencial de contaminao. Em escala industrial, seria muito difcil esterilizar
38
as celulases, j que isso deveria ser feito por filtrao, pois a autoclavao inativaria as enzimas.
Figura 2.19. Diagrama da Sacarificao e Fermentao em Separado (SHF) Elaborado com base em TAHERZADEH & KARIMI (2007)
Sacarificao e Fermentao Simultnea (Simultaneous Saccharification and Fermentation SSF) Como o nome indica, neste processo, a hidrlise enzimtica e a fermentao das hexoses (acares C6) ocorrem na mesma etapa, enquanto a hidrlise da hemicelulose ocorre em etapa diferente, bem como a produo das celulases, como pode ser visualizado na Figura 2.20 (TAHERZADEH & KARIMI, 2007). Essa estratgia de processo apresenta inmeras vantagens, dentre elas: a reduo da inibio das celulases pelos seus produtos de hidrlise, uma vez que os glicdios no se acumulam no meio; menor complexidade e custo do processo, comparado ao SHF, pois reduz o nmero de reatores; minimizao dos riscos de contaminao, devido s baixas concentraes de acar livre no meio; e maiores
39
rendimentos de hidrlise, j que o equilbrio das reaes enzimticas so deslocados no sentido de formao de mais produto, visto que a glicose concomitantemente consumida (VSQUEZ et al., 2007). Entretanto, o desfavorecimento da cintica enzimtica devido necessidade de conduzir o processo dentro da faixa tima do microorganismo fermentador constitui uma desvantagem. Em relao a este aspecto, estudos tm sido realizados no sentido de produzir celulases que atuem em valores de pH e temperatura prximos daqueles timos para o processo fermentativo (TAHERZADEH & KARIMI, 2007).
Figura 2.20. Diagrama da Sacarificao e Fermentao Simultnea (SSF) Elaborado com base em TAHERZADEH & KARIMI (2007)
Sacarificao e Co-fermentao Simultnea (Simultaneous Saccharification and Cofermentation SSCF) Outro modo de operao o SSCF, no qual a co-fermentao se refere fermentao de ambos acares, pentoses e hexoses, que ocorre no mesmo reator,
40
juntamente com a sacarificao da celulose (Figura 2.21). A hidrlise da hemicelulose e a produo de celulases ocorrem separadamente (TEIXEIRA et al., 2000).
Figura 2.21. Diagrama do processo de Sacarificao e Co-Fermentao Simultnea Elaborado com base em TAHERZADEH & KARIMI (2007)
Como vimos anteriormente, no reator do SSF, somente as hexoses so convertidas a etanol e as pentoses so fermentadas em outro reator, por um organismo diferente. J no processo de SSCF, tanto as hexoses quanto as pentoses so fermentadas por um nico microrganismo em um mesmo reator (HAMELINCK et al., 2005). Para isso, necessria a aplicao da engenharia gentica para desenvolver um microrganismo que fermente ambos os acares. Existem vrios exemplos na literatura de microorganismos modificados geneticamente para essa finalidade (LAWFORD & ROUSSEAU, 1998; Mcmillan et al., 1999; TEIXEIRA et al., 2000).
41
Bioprocesso consolidado (Consolidated Bioprocess CBP) Em todos os processos descritos anteriormente se faz necessria uma unidade separada dedicada produo de enzimas, ou as enzimas devem ser adquiridas de um produtor externo. No CBP, tanto a produo de enzimas quanto a de etanol, produzido a partir dos acares da hemicelulose e celulose, so conduzidas em um nico reator e realizado pelo mesmo microorganismo (Figura 2.22) (TAHERZADEH & KARIMI, 2007).
Figura 2.22. Diagrama do Bioprocesso Consolidado (CBP) Elaborado com base em TAHERZADEH & KARIMI (2007)
Duas estratgias podem ser seguidas para a obteno de organismos para o Bioprocesso Consolidado. A primeira estratgia envolve a modificao de microrganismos naturalmente produtores de etanol, a fim de torn-los produtores eficientes tambm de celulases e/ou xilanases, se a hidrlise da hemicelulose tambm for enzimtica. A segunda estratgia segue o caminho oposto, ou seja, modificar excelentes produtores de celulases com a finalidade de transform-los tambm em eficientes produtores de etanol (LYND et al., 2005).
42
Segundo LYND et al. (2002), todavia no existem organismos ou consrcios de microrganismos capazes de produzir celulases nos nveis desejados e tambm produzir etanol com alta produtividade e altas concentraes, embora vrios organismos j combinem ambas as funes. FUJITA et al. (2004) desenvolveram uma cepa de S. cerevisiae em cuja superfcie celular foram expressos trs tipos de enzimas celulolticas, obtendo um rendimento de 0,45 g/g (gramas de etanol por grama de carboidrato consumido), o que corresponde a 88,5% do rendimento terico. Outro trabalho similar a este foi publicado por DEN HAAN et al. (2007), demonstrando a possibilidade de se desenvolver cepas de leveduras capazes de crescer e de converter celulose em etanol e uma nica etapa. O CBP parece ser uma abordagem alternativa com visvel potencial e o ponto final na evoluo da produo de bioetanol de segunda gerao, a partir de materiais lignocelulsicos. A aplicao do CBP no vincula custos de operao ou investimento de capital para a compra de enzimas ou sua produo, apresentando assim vantagens em relao ao custo de produo (LYND et al., 2005). Independentemente da rota tecnolgica, importante notar o enorme peso que o custo da biomassa tem sobre o custo final do bioetanol. Em geral, nas estimativas realizadas para os pases do hemisfrio norte, o custo da biomassa representa cerca de 40% do custo do bioetanol, e grande parte das redues do custo do biocombustvel para o futuro se baseia na reduo do valor da biomassa. Evidentemente, isso cria grandes expectativas quando se considera algumas regies do planeta, para as quais existem opes de biomassa com custos bem mais baixos, como por exemplo, a cana-de-acar no Brasil, ou de resduos agroflorestais, como os da indstria de celulose, que tem custo de produo irrelevante (BNDES, 2008).
2.3.6. Principais resultados reportados na literatura Na Tabela 2.7 esto resumidas algumas condies utilizadas na produo de bioetanol de segunda gerao por SSF, estratgia de processo mais empregada, a partir de biomassas de composio lignocelulsica.
Tabela 2.7. Condies empregadas no SSF para produo de bioetanol de segunda gerao na literatura (HE: Hidrlise Enzimtica; MO: Microorganismo) Carga enzimtica Material Prtratamento PrHE Celulases (FPU/g) -glucosidase (UI/g) Teor de slido (%) Conc. celular (g/L) Conc. de etanol (g/L) Tempo (h) Qp (g/L.h)
MO
Referncia
No
No
15,0
30,0
S. cerevisiae
0,05
45,0
150
0,30
H2SO4 e NaHSO4 No Exploso com vapor (SO2) e deslignific. perxido alcalino Exploso com vapor (SO2) e deslignific. perxido alcalino Exploso com vapor (SO2) Exploso com vapor (SO2) Exploso com vapor (SO2)
12 h 48 h
15,0 6,0
22,5 _
8 30
2,0 7,0
41,8 70,0
_ 216
_ 0,32
Madeira de oliva
No
15,0
12,6
10
S. cerevisiae
29,4
72
0,41
Caule de girassol
No
15,0
12,6
10
S. cerevisiae
20,9
72
0,29
16 h
15,0
23,0
5,0
26,0
71
0,37
16 h
7,5
23,0
5,0
24,0
71
0,34
No
32,0
28,0
7,0
96
0,07
Carga enzimtica Material Prtratamento Exploso com vapor (SO2) Exploso com vapor (SO2) cido e deslignific. com NaOH cido e deslignific. com NaOH Exploso com vapor (H2SO4) cido (H2SO4) Hidrotmico Exploso com vapor (SO2) Exploso com vapor (H2SO4) Exploso com vapor (H2SO4) PrHE Celulases (FPU/g) 32,0 -glucosidase (UI/g) 28,0
MO
Tempo (h)
Qp (g/L.h)
Referncia
Picea abies Picea abies Bagao de cana Bagao de cana Bagao de cana Sabugo de milho Selagem de milho Palha de milho Palha de trigo Palha de cevada
No
96
0,20
STENBERG et al., 1999 STENBERG et al., 1999 VSQUEZ et al., 2007 SANTOS et al., 2010 MARTIN et al., 2002 ZHANG et al., 2009 XU et al., 2009 HGREN et al., 2007 BALLESTEROS et al., 2006 LINDE et al., 2006
No
32,0
28,0
7,5
25,0
96
0,26
12 h
25,9
10
4,0
30,0
22
1,36
12 h
25,0
23
4,0
60,0
36
1,66
No
8,3
7,8
0,2
12
48
0,25
48 h 24 h
8,0 30,0
_ _
12,5 13
10,0 0,2
5,68 20,0
48 194
0,12 0,10
16 h
10,0
16,7
10
1,0
26,7
96
0,28
No
15,0
12,6
10
0,2
0,6
72
0,01
No
20,0
25,0
10
Levedura
5,0
25,0
120
0,21
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CAPTULO 3
3. JUSTIFICATIVA E OBJETIVOS
Neste captulo apresentada a justificativa para o desenvolvimento da presente pesquisa, assim como o objetivo geral do trabalho e os objetivos especficos idealizados para que esse fosse alcanado.
3.1. JUSTIFICATIVA
Petrleo, gs natural e seus derivados representam 55% do consumo mundial de energia. So esses combustveis que permitem a existncia dos meios de transporte rpidos e eficientes que temos hoje, bem como boa parte das atividades industriais. Lamentavelmente, a previso de durabilidade para as fontes de petrleo no ultrapassa mais do que algumas dcadas: como combustveis fsseis, as suas reservas so finitas; a segurana de abastecimento problemtica para muitos pases que os importam; e o seu uso a principal fonte dos gases que esto provocando mudanas climticas e o aquecimento global. preciso, pois, encontrar substitutos para esses combustveis. Nada mais racional do que produzi-los com base em matria orgnica renovvel (biomassa), da
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qual, no passado distante, os combustveis fsseis foram produzidos pela natureza. Uma das opes o bioetanol, um excelente substituto para a gasolina que o principal combustvel renovvel usado em automveis no mundo. No Brasil, o etanol, produzido da cana-de-acar, j substitui hoje metade da gasolina que seria consumida e seu custo competitivo sem os subsdios que viabilizaram o programa no seu incio, o Procool. Com a crescente demanda do mercado nacional e internacional de lcool, faz-se necessrio expandir as reas de cultivo para que a mesma seja atendida. No entanto, para evitar a expanso desmedida das reas de cultivo, tm se desenvolvidos processos biotecnolgicos que permitam a utilizao dos resduos industriais lignocelulsicos j existentes para a produo de etanol de segunda gerao. Dentre estes resduos, os resduos celulsicos do processo de decantao da indstria de celulose constituem uma das fontes mais promissoras de carboidratos para a produo de etanol de segunda gerao. Dentro desta panormica, torna-se evidente a importncia do
desenvolvimento de processos de produo de etanol a partir do resduo oriundo do processo de decantao da indstria de celulose. neste contexto que esta pesquisa de dissertao se prope a desenvolver a sacarificao e fermentao simultnea (processo SSF) para a produo de bioetanol a partir da frao celulsica do resduo da indstria de celulose. Com isto, pretende-se ampliar a temtica dos trabalhos desenvolvidos nos Laboratrios de Desenvolvimento de Bioprocessos (LADEBIO) do Departamento de Engenharia Bioqumica da Escola de Qumica da UFRJ.
3.2. OBJETIVOS
Este trabalho teve como objetivo geral a produo de bioetanol carburante empregando uma concepo de processo denominado SSF (Simultaneous Saccharification and Fermentation) a partir da celulose contida na celulignina do resduo celulsico do sistema de decantao da indstria de celulose, utilizando linhagens da levedura Saccharomyces cerevisiae e visando estabelecer condies de processo que aumentem a produtividade e eficincia.
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