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O que ?
Grande diversidade
Bactrias Arqueobactrias
Vrus
http://en.wikipedia.org/wiki/File:EscherichiaColi_NIAID.jpg
http://commons.wikimedia.org/wiki/File:Halobacteria.jpg
http://outrasverdadesinconvenientes.blogspot.com. br/2012_08_01_archive.html
Algas
Fungos
Protozorios
http://www.febico.com/pt/page/O-que-Microalgas/FL-1Microalgae.html#
http://pt.wikipedia.org/wiki/Flagelado
Microscpio ptico
Visualizar clulas intactas com aumentos relativamente pequenos
Microscpio eletrnico
Visualizar estruturas celulares internas e detalhes da superfcie celular com grandes aumentos
Tipos de microscopia
Campo claro
Campo escuro
Contraste de fase
546nm: clorofila
Fluorescncia
Tipos de microscopia
Transmisso Varredura
AFM de perfringolisina : Clostridium perfringens
Fora Atmica
Citologia Bacteriana:
Citologia Microbiana
Procaritica Eucaritica
http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/5/5a/Average_prokaryote_cell-_en.svg
http://www.vestibulandoweb.com.br/biologia/teoria/celula-eucarionte.asp
Citologia Microbiana
Citologia Microbiana
http://commons.wikimedia.org/wiki/File:Bacterial_morphology_diagram_pt.svg
Clula Procaritica
Estruturas principais:
http://fig.cox.miami.edu/~cmallery/150/proceuc/c7x4prokaryote.jpg
Membrana Citoplasmtica
Estrutura fina e fluida Barreira de permeabilidade Garante integridade celular Altamente seletiva Capacidade de concentrar metablitos Excretar dejetos
membrana plasmtica
citoplasma
meio extracelular
Lipdeos Protenas
Funes
Permeabilidade seletiva e transporte de solutos Transporte de eltrons e fosforilao oxidativa Excreo de exoenzimas hidrolticas Sustentao de enzimas e molculas transportadoras Sustentao dos receptores e outras protenas do sistema de transduo quimiottica e sensorial
Molculas anfipticas pores hidrofbicas ficam voltadas para o interior da bicamada e pores hidroflicas ficam expostas para o citoplasma e para o exterior da clula.
Poro hidroflica (Cabea polar)
meio aquoso
bicamada lipdica
Poro hidrofbica
lipossoma
fosfato
glicerol
cidos graxos
No possuem fosfato
Possuem mono, oligo ou polissacardeos ligados ao glicerol (cabea polar), expostos no meio polissacardeos Possuem dois c. Graxos ligados ao glicerol
oligo mono glicerol
(poro hidrofbica)
cidos graxos
Cabea polar
poro hidroflica
hopanide
Lipdeo de archaeas
Polmeros de hidrocarbonetos (isopreno)
Ligao ter
Ligao STER
glicerol
C. GRAXOS
CADEIA DE HIDROCARBONETOS
glicerol
Ligao TER
Protenas de membrana
Embebidas na camada fosfolipdica Geralmente possuem uma superfcie externa (hidrofbica) na regio em associao com ac graxos
Integrais
Transmembrana
Perifricas
Fluidez da Membrana
Molculas fosfolipdicas e protenas: liberdade de movimentao Estrutura de mosaico fluido
Fluidez da Membrana
Lipdeos:
Movimento lateral Movimento vertical ou flip-flop Protenas: Movimento lateral
Alta temperatura
A integridade da membrana pode ser afetada devido grande movimentao das molculas.
Baixa temperatura A atividade da membrana podem ser prejudicada pela baixa movimentao das molculas
Fluidez da Membrana
Domnio Archea (termfilos, termoacidfilos e halfilos) Glicerolipdios e Glicolipdios
Comparao de membranas
Membrana Contedo proteico Bactria Alto Archaea Alto
Composio lipdica
Estrutura dos lipdios Ligao dos lipdos
fosfolipdeos
Protenas de transporte
Processos de transporte: natureza altamente especfica Muitas ptns reagem com somente uma molcula Outras tem afinidade por uma classe qumica Sntese das ptns: regulada pelos nutrientes presentes e suas concentraes
-Ptns transportadora fosforilada no citoplasma e se liga ao acar livre na face externa da membrana -Sistemas: fosfotransferases
-Quimiotaxia e outras vias metablicas
Membranas Internas
Invaginaes ou continuidade * Bactrias nitrificantes - Enzima-chave oxidao amnia * Bactrias fotossintticas - Bacterioclorofila e pigmentos de Bactrias fotossintticas captao de luz
GERAO DE ATP
Parede Celular
Estrutura externa rgida da membrana citoplasmtica Promove apoio e proteo Diviso em 2 grupos:
Bactrias Gram positivas: um nico tipo de molcula e mais fina Bactrias Gram negativas: multicamadas, complexa
Diversidade da petidoglicana
Nem sempre o DAP est presente Em todas as Gram negativas; em algumas Gram positivas (lisina) Os acares esto sempre conectados por ligao -1,4 As variaes ocorrem entre as pontes Esqueleto: glucosamina e cido murmico
Peptidioglicana ou murena:
N-acetilglucosamina e acido N-acetilmurmico (-1,4)
Somente encontradas nas paredes celulares de bactrias c. N-acetil murmico Presentes em bactrias N-acetil glicosamina Gram positivas e negativas 1-4 Mais de 100 variaes
Bactrias Gram positivas: 90% da parede e em muitas camadas Bactrias Gram negativas: 10% da parede
Ac. Teicico, Lipoteicico e Teicurnico Macromolculas com carga negativa: passagem de ons
c. teicico: polmero de glicerol-fosfato ou ribitol-fosfato c. lipoteicico: polmero de glicerol-fosfato ligado lipdeos de membrana c. teicurnico: polmero de c. glucurnico alternado com glicose
c. lipoteicico
c. teicurnic
c. teicico
Ligao fosfodister
c. teicico
c. teicurnico
peptideoglicana
Considerada como endotoxina Salmonella, Shigella. Escherichia Toxicidade: polissacardeos e lipdio A Ligadas a clula e liberadas na lise celular Nem todas as cel possuem LPS composto por unidades repetidas Estruturas semelhantes a glicoesfingolipdios (LOS) LOS: diversidade antignica e estrutural
2 pores: core polissacardico e O-polissacardeo Polissacardeo O: 4 a 5 molculas de acares repetidos Poro lipdica: lipdio A (cidos graxos: ac. Caprico, ac laurnico, ac muristico, ac esterico) Dissacardeo ligado ao core por cido cetodesoxioctanico (KDO)
Entre a camada externa e as camadas do peptidioglicana Contm 57 aminocidos Peptidio ligado a resduos do DAP na cadeia lateral Protena mais abundante Funo: estabilizar a membrana externa e ancor-la na camada do peptidioglicana
Entre a membrana externa e a membrana interna Contem a camada de peptidioglicana e uma soluo de protenas (gel) Cerca de 20 a 40 % do volume celular Protenas periplasmticas: protenas de ligao, enzimas hidrolticas Oligossacardeos derivados de mamebrana: osmorregulao
Peptidioglicana, arabinogalactana e cido miclico Baixa permeabilidade susceptibilidade Peptidioglicana: N-acetilglicosamina e Nglicolilmurmico q forma suporte para arabinogalactana com cido miclico Arabinogalactana: D-galactose e D-arabinose, na configurao furanose Esterol anel esteride
Galactana: -D-galactofuranose
cido Miclico
Lipdeos somente encontrados na parede de bactrias do gnero Mycobacterium Tambm possui outros lipdeos (lipoarabinomananas e lipomanas)
lcool-cido resistncia
Pseudopeptidoglicanas
Peptdeoglicanas: polmeros de GlcNAc (b 1-4) MurNAc Pseudopeptdeoglicanas: polmeros de GlcNAc (b 1-3) NAcTalNA
Pentapeptdeo
Ausncia de D-aa
Pseudopeptidoglicanas
Destruio do peptideoglicano Lisozima: clica ligaes -1,4 Protoplasto: sem parede celular Esferoplasto: pores de parede associada Alguns procariotos podem sobreviver sem parede.
Camada S
Estrutura proteica ou glicoprotica ligada parede Em todas as bactrias e sobretudo em arqueobacterias (parede) Aparncia cristalina Vrias simetrias:
Funo:
Substncias viscosas presentes na superfcie celular Polissacardeos ancorados e protenas Glicoclix: material contendo polissacardeos localizado no lado externo da clula = termo + abrangente
Em alguns casos: sntese de polmero extracelular por enzimas na superfcie celular homopolmero ou heteropolmero
Camada limosa: rede frouxa de fibrilas que extende para fora da clula
Funes:
Reservatrio de gua e nutrientes: proteo contra dessecao e servem como nutrientes Aumento da capacidade de invaso Aderncias Aumento da resistncia microbiana a biocidas Produo industrial de polissacardeos extracelulares
Flagelos
Presentes em archaeas e bactrias Gram positivas e negativas Longos e finos, com uma extremidade livre e a outra presa na clula Funo: locomoo
Polar Lofotrqueo
Estrutura flagelar
Morfologia helicoidal Filamento composto por flagelina Estrutura bsica varia pouco em Bacteria Flagelina conservada: razes evolutivas Archaea: diferentes tipos de flagelina
Estrutura flagelar
So subdivididos em 3 regies: Motor (Anis) Gancho - coneco Filamento
Movimento flagelar
Comprimento de onda caracterstico para cada organismo Fazem rotao e no flexo
Energia
Atraente Repelente Bactrias aquticas Partculas eletrondensas Fe - magnetos Bactrias fotossintticas Vacolos de gs H - flutuao Bactrias que requerem O2 Pili do tipo IV: mobilidade independente de flagelo twitching: movimento contrao Pseudomonas aeruginosa gliding: deslizamento Myxococcus xanthus
Magnetotaxia
Fototaxia
Aerotaxia
Pili e Fmbrias
Polimerizao de protenas Medeiam adeso Quase em todas Gram Possuem base ligada na membrana plasmtica em Grampositivas e na membrana externa em Gram-negativas As fmbrias so menores, mais numerosas do que os pili
Fmbrias
Em Gram + e Gram Curtos e menos numerosos Caracterstica hereditria Funes: adeso e biofilmes
Pili
Similares s fmbrias Maiores e apenas um ou poucos Mais estudados em Gram Funes: transferncia gentica (conjugao) e adeso Variao antignica
Pilus de adeso Adesina Receptor
Pilus sexual
(Pili F)
Clula hospedeira
Pili
Motilidade: suas extremidades aderem as superfcies da clula, e em seguida os pili se despolimerizam da sua extremidade terminal retraindo-se para o interior da clula movimento em direo a ponta aderente Virulncia de algumas bactrias
Cepas enteropatognicas de E.coli Estreptococos: protena M aderncia ao epitlio (c. Lipoteicico) Variao antignica pili de diferentes tipos antignicos
Endsporos
Estruturas formadas por algumas bactrias Gram +: gneros Clostridium e Bacillus Formadas pela privao de nutrientes Clulas latentes
Endsporos
DNA Crtex:camada mais espessa; peptidoglicana incomum (menor n de ligaes cruzadas), sensvel a lisozima; papel na germinao Parede do cerne: camada mais interna; peptidoglicana normal Capa: resistncia a agentes qumicos Exsporo: composto por protenas, lipdios e carboidratos
Endsporos
Processo de esporulao
Endsporos
Processo de Germinao:
3 estgios:
Ativao: meio nutricional rico ou outro agente que atue na capa condies ambientais favorveis Iniciao: depende da espcie; receptores reconhecem efetores distintos como sinalizao. O efetor autolisina degrada o peptidoglicana do cortex Captao de gua liberao de dipicolinato de clcio degradao de vrios componentes por enzimas hidroliticas. Crescimento: aparecimento de clula vegetativa aps degradao do cortex e das camadas mais externas
Material gentico
Nucleide:
Ausncia de membrana nuclear e de aparelho mittico Regio nuclear: DNA dupla hlice
Plasmdeos:
Tcnicas de colorao:
BACTRIAS
Colorao Simples
ou negativa Colorao Simples Positiva
Soluo
aquosa ou alcolica de um nico corante bsico ligao superfcie celular e material gentico Finalidade: realar o micro-organismo por inteiro visualizao da forma celular, tamanho e grupamento de clula.
Colorao simples negativa Utiliza um corante acdico repelido pelas cargas negativas da superfcie celular
fica corada micro-organismo mais claro Demonstrao de cpsula mucide em algumas espcies Exs de corantes: tinta nanquim ou nigrosina
Lmina
Acinetobacter calcoaceticus
http://escola.britannica.com.br/assembly/708/The-capsular-material-surroundingthese-bacteria-is-revealed-in-a
Colorao Diferencial
de dois corantes contratantes coloraes diferentes em grupos distintos de bactrias Finalidades:
Uso
Colorao de Gram
Mtodo de escolha para identificao de bactrias 2 grupos principais: Gram positivas e Gram negativas Princpio da tcnica: diferena de composio da parede celular capacidade destas paredes em reter os corantes
http://www.infoescola.com/microbiologia/bacterias-gram-positivas-e-gram-negativas/
Mtodos para identificao de micobactrias Princpios das tcnicas: Existncia de uma espessa camada de lipdios (cido miclico) Membrana pouco permevel a corantes
http://phil.cdc.gov/PHIL_Images/20040615/d094324845a24eb3a7bfe0d1f8e4a637/5789_lores.jpg
Colorao de endsporos
(Tcnica de Schaeffer-Fulton)
Endsporos: formas de resistncia (altas temperaturas, congelamento, radiao, dessecao e agentes qumicos Tcnica:
O verde malaquita, a colorao primria, aplicado a um e sfregao fixado com calor e aquecido em vapor por cerca de cinco minutos O calor auxilia a colorao a penetrar na parede do endosporo. a preparao lavada por cerca de 30 segundos com gua, para remover o verde malaquita de todas as partes da clula, exceto dos endosporos.
os endosporos aparecem em verde dentro de clulas vermelhas ou rosadas. os endosporos so altamente refrativos, podem ser detectados no microscpio ptico quando no corados, mas no podem ser diferenciados de incluses de material armazenado sem uma colorao especial
Colorao de flagelos
(Tcnica de Leifson) Flagelos: estruturas de locomoo Princpios das tcnicas: deposio do corante na estrutura do flagelo Mordente: cido tnico Corante: carbolfucsina O esfregao no deve ser fixado