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br/eq Volume 34, nmero 3, 2009

Artigo/Article

Anlise do teor de cocana em amostras apreendidas pela polcia utilizando-se a tcnica de cromatografia liquida de alta eficincia com detector UV-Vis
Marcelo Firmino de Oliveira*1, Jacqueline Querino Alves1, Jos Fernando de Andrade1, Adelir Aparecida Saczk2, Leonardo Luiz Okumura3
1 - Departamento de Qumica, Faculdade de Filosofia, Cincias e Letras de Ribeiro Preto, Universidade de So Paulo. Av. Bandeirantes 3900, CEP 14040-901, Ribeiro Preto - SP, Brasil. 2 - Departamento de Qumica, Universidade Federal de Lavras. Campus Universitrio, Caixa Postal 3037, CEP 37200-000, Lavras MG, Brasil. 3 - Departamento de Qumica, Centro de Cincias Exatas, Universidade Federal de Viosa. Av. Peter Henry Rolfs, s/n, CEP 36570-000, Viosa MG, Brasil. * email: marcelex@ffclrp.usp.br

Resumo: A tcnica de CLAE com deteco UV-Vis foi empregada na anlise do teor de cocana em amostras apreendidas de cocana e crack. Uma fase mvel de acetonitrila/gua (95:5v/v) possibilitou um sinal de pico para a cocana em 3,5 minutos. O sinal espectrofotomtrico otimizado foi obtido em um comprimento de onda de 224 nm. A curva analtica de 1,0 a 40,0 ppm para cocana foi obtida, exibindo um coeficiente de correlao linear de 0,9989, com limites de deteco e quantificao de 0,75 e 3,78 ppm, respectivamente. Esta metodologia foi aplicada na dosagem de amostras confiscadas de cocana e crack no Laboratrio de Polcia Cientfica de Ribeiro Preto-SP. Palavras-chave: cocana, CLAE, qumica forense 1 INTRODUO droga, quanto por necessidade de angariar fundos para a mantena do vcio. Faz jus ao destaque uma das atuais medidas legislativas tomadas com relao ao assunto supra, a lei 11.343 de 23 de agosto de 2006 [4], a qual instituiu o SISNAD Sistema Nacional de Polticas Pblicas sobre Drogas e dispe no somente sobre os crimes relacionados s drogas, mas tambm aponta medidas relativas preveno e reinsero social de usurios e dependentes de substncias desta classe [2]. E, no obstante opinies contrrias, a posse de pequena quantidade j configura o delito previsto no artigo 28 da Lei 11.343/06, o que comprova serem tais substncias realmente nocivas sade humana, bem como sociedade em si mesma considerada. Vrias so as medidas que podem ser tomadas visando o combate ao uso e trfico
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A problemtica das drogas de abuso

Um dos problemas que mais afetam o contexto social atual o consumo de drogas ilcitas. Isso porque este consumo reflete no s na sade, no convvio familiar e social, como tambm movimenta milhes por ano, consistindo em um mercado financeiro ilcito no s no Brasil, mas em muitos outros pases tambm [1-3]. Tambm h que se considerar que indivduos usurios de drogas certamente so mais suscetveis prtica de crimes, tanto devido ao fato de geralmente ficarem racionalmente afetados quando do uso da
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de drogas e, nestas, certamente, tem papel de merecido destaque, o incentivo pesquisa em qumica forense e subseqente aplicao destes conhecimentos nos laboratrios de polcia cientfica. Com relao ao Estado de So Paulo, os dados referentes s apreenses no ano de 2008 (total de 24.930), em comparao a 2007 (total de 23.127), apresentam aumento de 6,9%. Considerando-se desde 1999 (total de 10.525), houve um acrscimo de 105,6% nas apreenses [3].

Cocana e crack
A cocana constitui o mais importante alcalide natural extrado das folhas do arbusto Erythroxylon coca [5] sendo sua estrutura reportada na Figura 1. Em sua forma purificada, esta espcie constitui um slido branco, cristalino, de odor aromtico, sob a forma de um sal, o cloridrato de cocana, o qual solvel em gua e, portanto, pode ser aspirado ou dissolvido em gua para uso endovenoso. Adicionalmente, uma nova forma de consumo da cocana, constitui na mistura da base livre da cocana com bicarbonato de sdio, tornando a mistura alcalinizada, originando uma massa petrificada, geralmente de aspecto marromamarelado, popularmente conhecida como crack, o qual pouco solvel em gua, mas que se volatiliza facilmente quando aquecido (95 oC), comumente fumado em cachimbos improvisados, conhecidos por maricas. A palavra crack derivada do rudo caracterstico que produzido pelas pedras quando esto sendo decompostas pelo fumo. Os efeitos iniciais da cocana no organismo constituem em euforia, excitao, insnia e supresso do apetite, devido ao no sistema nervoso central [4].

A anlise de cocana pelas tcnicas de cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE) [69] e cromatografia gasosa (CG) [10-16] tem sido amplamente reportada na literatura, indicando o potencial das mesmas para as anlises forenses. A boa acuracidade e robustez, aliadas possibilidade de obteno de limites de deteco na ordem de ng mL-1 para a cocana utilizando-se tais metodologias, possibilitou a aplicao destas tcnicas cromatogrficas na anlise do referido entorpecente em diversas matrizes, tais como fluidos biolgicos [7,15,16], cabelo [6,8,14] e peas de interesse forense, como papel moeda [16], indicando a versatilidade de tais mtodos. Neste sentido, este trabalho visa investigar a aplicabilidade da tcnica de CLAE com detector UV-Vis na anlise de rotina de cocana em amostras de cocana e crack apreendidas pela polcia.

2 PARTE EXPERIMENTAL

Materiais e reagentes
As amostras de cocana e crack, bem como os padres purificados de cocana foram fornecidos pelo Ncleo de Exames Toxicolgicos - Ncleo de Percias Criminalsticas de Ribeiro Preto-SP. Todas as amostras analisadas apresentaram resultado positivo para testes prvios colorimtricos para cocana. Adicionalmente, foram utilizadas amostras de processos judiciais concludos. O padro cromatogrfico de cocana utilizado foi uma soluo de cocana (base livre) em acetonitrila na dosagem de 1000ppm, da Cerrilliant. O solvente orgnico utilizado na fase mvel cromatogrfica foi acetonitrila da Merck, padro HPLC. Para a composio aquosa desta fase mvel, utilizou-se gua deionizada.

Preparo das solues-padro de cocana

O preparo das solues-padro foi efetuado por diluio de soluo padro 1000 ppm, em diferentes volumes finais de acetonitrila, sendo obtidos os padres de 1,0 , 5,0 , 10,0 20,0 e 40,0 ppm.
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Figura 1: Estrutura molecular da cocana.

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Preparo das amostras

Visando-se obter uma metodologia rpida e prtica de anlise, cada alquota de 2,5 mg de amostra foi dissolvida diretamente em 100g de acetonitrila, estando portanto em 25 ppm de amostra.

3 RESULTADOS E DISCUSSO

Seleo da fase mvel

Para as medies cromatogrficas efetuadas neste trabalho, foi escolhida a mistura de acetonitrila e gua, na proporo 95:5 v/v como fase mvel, em decorrncia das facilidades encontradas quando do uso desse sistema, em testes prvios realizados neste projeto. Valores otimizados de tempo de reteno abaixo de 5 minutos, bem como picos bem definidos so obtidos quando acetonitrila empregada.

Dispositivo cromatogrfico
Foi utilizado um equipamento de CLAE da marca Shimadzu, com controle de equipamento e aquisio de dados por intermdio de um microcomputador acoplado. O fluxo de soluo de fase mvel foi mantido em condies isocrticas, a 1,0 mL por minuto, com fase mvel de acetonitrila e gua, na proporo de 95:5 v/v. A vlvula de injeo foi composta por ala de amostragem de 20 L. Fez-se uso de uma coluna C18 de 15 cm da Labtron acompanhada da coluna de guarda tambm C18, de mesma marca. O comprimento de onda foi selecionado com base no mximo de absorbncia obtida para a cocana. As solues de amostras de cocana foram injetadas diretamente no cromatgrafo, sendo realizada to somente uma filtrao prvia por seringa dotada de filtro descartvel.

Seleo do comprimento de onda

Os valores de absorbncia foram medidos em comprimento de onda igual a 224 nm, dado ser este o comprimento de onda com mximo de absoro encontrado para a molcula de cocana neste experimento.

Anlise de cocana em amostras por CLAE

Os cromatogramas obtidos para a cocana em diferentes concentraes no sistema cromatogrfico proposto indicaram um tempo de reteno ao redor de 3,5 minutos, conforme reportado na Figura 2. A curva analtica obtida para a cocana no intervalo de 1,0 a 40,0 ppm (Figura 2) apresentou um coeficiente de correlao linear de 0,9989 e uma sensibilidade espectrofotomtrica de 87,5 ppm-1. Considerando-se o desvio padro obtido para a referida curva em 21,9 , foi possvel calcular os limites de deteco e quantificao para a cocana em 0,75 ppm e 3,78 ppm, respectivamente, utilizando-se as relaes 3 SD/m e 10 SD/m (SD = desvio padro da curva; m = sensibilidade da curva analtica).

Anlise quantitativa
A curva analtica para dosagem de cocana foi obtida por regresso linear, plotando-se as reas dos picos obtidos para cada soluo-padro de cocana em funo das concentraes. O teor de cocana nas amostras desconhecidas de cocana e crack foi obtido pela integrao das reas dos picos pertinentes cocana nos cromatogramas das amostras e subseqente extrapolao da rea obtida na curva analtica. A anlise das solues de padres, bem como das solues de amostras foi feita em triplicata.

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Figura 2: cromatogramas obtidos para diferentes concentraes de cocana: 1,0 , 5,0 , 10,0 , 20,0 , 30,0 e 40,0ppm. Fase mvel: acetonitrila:gua (95:5); vazo: 1,0mL/min; deteco em 224nm. Os estudos de recuperao para a tcnica proposta situaram-se em um intervalo entre 95% e 101%, com coeficientes de variao (CV) entre 0,4% e 3,9%, indicando uma elavada preciso na analise de cocana, tanto na forma cloridrato quanto na forma de base livre (crack). A presena de substncias contaminantes e adulterantes nas amostras estudadas no constituiu em interferncia para tais anlises, uma vez que as mesmas apresentam diferentes tempos de reteno na eluio da fase mvel, conforme evidenciado em um tpico cromatograma de soluo de amostra apreendida de crack, na Figura 3. Considerando-se um perodo de 6 minutos para uma anlise completa da soluo de amostra de cocana sem efeitos de carryover, possvel estimar uma freqncia analtica de 10 anlises por hora, ou 80 anlises por dia, considerando-se somente perodo comercial de 8 horas dirias. Neste contexto, tal metodologia atende perfeitamente a demanda local para estas anlises, conforme informaes coletadas no laboratrio de polcia cientfica local.

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Figura 3: Cromatograma tpico obtido para soluo de amostra apreendida de cocana, atentando-se para a presena de substncias contaminantes/adulterantes na composio da mesma. Fase mvel: acetonitrila:gua (95:5); vazo: 1,0mL/min; deteco em 224 nm. Utilizando-se a curva analtica obtida, bem como os cromatogramas obtidos para cada soluo de amostra, foi possvel calcular os teores de cocana nas amostras de cocana e crack estudadas neste trabalho, sendo estes resultados reportados na Tabela 1, em ordem decrescente de teor de cocana.

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Tabela 1: Resultados obtidos para a dosagem de cocana em amostras apreendidas pela polcia utilizando-se a tcnica CLAE com detector UV-Vis (SD = desvio padro para 3 medidas; CV = coeficiente de variao). Amostra 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 [cocana] esperada (ppm) 25,0 25,0 25,0 25,0 25,0 25,0 25,0 25,0 25,0 25,0 [cocana] obtida (ppm) 23,9 21,5 19,4 16,4 16,2 9,4 5,4 4,7 4,4 3,4 SD 0,9 0,5 0,2 0,3 0,1 0,1 0,2 0,1 0,2 0,1 CV(%) 3,7 2,4 1,2 1,9 0,7 1,3 3,2 2,9 3,9 2,7 Dosagem (%) 95,6 86,0 77,6 65,6 64,9 37,4 21,6 18,9 17,5 13,6

Os resultados obtidos indicaram a presena de cocana em todas as amostras analisadas, com teores compreendidos entre 37,4% e 95,6% para amostras de cocana e entre 13,6% e 21,6% para amostras de crack. Estes resultados esto coerentes com o perfil qumico observado para estas espcies, ou seja, um menor teor de cocana nas amostras de crack esperado, uma vez que a produo desta forma de entorpecente decorre do reaproveitamento das sobras das etapas de sntese da cocana cloridrato. 4 - CONCLUSES A tcnica cromatogrfica proposta neste trabalho para a anlise do teor de cocana em amostras apreendidas apresentou boa repetibilidade e acuracidade. A freqncia analtica de 80 anlises/dia viabiliza a referida tcnica para ser aplicada em anlises de rotina em laboratrios forenses, tanto na anlise de amostras de cocana quanto de crack. Esta tcnica instrumental apresenta inmeras vantagens em relao aos testes clssicos convencionais colorimtricos empregados em anlises de rotina, tais como a possibilidade de quantificao das amostras, bem como a eliminao de possibilidades de resultados do tipo falso positivo, inerentes aos exames colorimtricos, oferecendo desta forma, informaes cruciais na etapa de investigao policial. Como exemplo, pode-se obter um perfil qumico das drogas apreendidas, com base na deteco tanto da droga quanto dos interferentes que a constituem, podendo-se correlacionar as amostras apreendidas a determinados traficantes ou determinadas regies do planeta. De acordo com a literatura, esta a primeira vez que um estudo sobre dosagem de cocana em amostras apreendidas de entorpecentes pela tcnica de CLAE reportado no Brasil. Analysis of cocaine content in samples apprehended by Police using the high-performance liquid chromatography technique with UV-Vis detector.

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Abstract: The HPLC technique with UV-Vis detection was employed in the analysis of cocaine content in apprehended samples of cocaine and crack. A peak signal for cocaine was obtained in 3.5 minutes run by using acetonitrile/water (95:5v/v) as a mobile phase. Optimized spec trophotometric signal was obtained at a wavelength of 224 nm. The analytical curve from 1.0 to 40.0 ppm of cocaine was obtained, showing a linear correlation coefficient of 0.9989, with detection and quantification limits of 0.75 ppm and 3.78 ppm, respectively. This methodology was employed at the dosage of confiscated samples of cocaine and crack in the Scientific Police Laboratory of Ribeiro Preto-SP city. Keywords: cocaine, HPLC, forensic chemistry 5 AGRADECIMENTOS Os autores agradecem o suporte financeiro da Fundao de Amparo Pesquisa do Estado de So Paulo (FAPESP) e do Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientfico e Tecnolgico (CNPq).
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