ANTGENO PARA DIAGNSTICO DE BRUCELOSE - PROVA LENTA

USO VETERINRIO
Composio: O antgeno consiste de suspenso inativada de Brucella abortus amostra 1119-3 diluda a 4,5% em soluo salina a 0,85% contendo 0,5% de fenol. Conservao: Manter sob refrigerao de +2C a +8C ao abrigo da luz. Aps aberto utilizar o contedo do frasco num nico dia. No congelar. Validade: 1 (um) ano a partir da data de fabricao. Apresentao: Frasco de vidro com 5 mL (60 doses). Indicao: Para diagnstico sorolgico de brucelose em bovinos, bubalinos, sunos e outros mamferos conforme recomendaes do MAPA. Modo de Usar: 1. Soroaglutinao Lenta em Tubos (SAL) e 2-Mercaptoetanol (2ME): 1.1. Precaues na execuo do teste: a. A diluio do antgeno para a srie de tubos com 2-ME deve ser realizada em soluo salina a 0,85%, sem adio de fenol; b. Recomenda-se fazer as diluies do antgeno 12 (doze) horas antes do uso; c. Os antgenos diludos devem ser conservados sob refrigerao (+4C a +8C), podendo ser utilizados por um perodo de at uma semana; d. O 2-ME deve ser mantido em frascos de cor mbar, hermeticamente fechados e sob refrigerao; e. O 2-ME txico para o ser humano e deve ser manuseado em capela de exausto; f. Em cada jornada de trabalho, deve ser includo pelo menos um soro selecionado, especialmente, com alto contedo de anticorpos IgM anti-Brucella e que no contenha IgG detectvel pelo teste do 2-ME, bem como outro soro reagente na SAL e 2-ME; :

g. Em cada teste sero includos tambm tubos de controle de antgeno, usando-se soros testados positivos de ttulo conhecido e soro negativo; e h. O Teste do 2-ME incubado e lido junto com o SAL. Ocasionalmente, o tubo da diluio 1:25 pode estar um pouco opaco na prova do 2-ME, ainda que os tubos subseqentes estejam claros. Isto no deve ser considerado como resultado negativo do teste. 1.2 Tcnica: a. Diluir o antgeno para SAL em tubos 100 (cem) vezes em soluo salina a 0,85% contendo 0,5% de fenol. Concentrao final 0,045%; b. Diluir o antgeno para a prova de 2-ME em tubos 50 (cinqenta) vezes em soluo salina 0,85% sem adio de fenol. Concentrao final 0,090%; c. Preparar soluo de 2-ME a 0,1M misturando-se 7,8 mL de 2-ME a 992,20 mL de soluo salina a 0,85% sem fenol, ou volumes menores, proporcionalmente; d. Para cada amostra de soro a testar, colocar em uma estante, duas fileiras de quatro tubos; e. Identificar o primeiro tubo de cada fileira com o nmero correspondente ao soro a testar; f. A primeira fileira corresponde s quatro diluies do soro do SAL e deve ser marcada com a letra T. A outra fileira, em que se far o teste do 2ME, deve ser marcada com a letra M; g. Com uma pipeta de Bang, dotada de pra de borracha, ou outro dispositivo de pipetagem que evite o uso da boca, carrega-se o soro at passar um pouco da graduao superior. Com um papel absorvente, limpa-se o extremo da pipeta; mantendo-se esta em posio vertical sobre a parede do tubo que contm a amostra, deixa-se escorrer o soro at que o fundo do menisco no interior da pipeta esteja nivelado com a sua graduao superior; h. Com a pipeta no fundo do primeiro tubo da primeira fileira, deixa-se fluir 0,08 mL de soro. No segundo tubo, deposita-se 0,04 mL, no terceiro, 0,02 mL, no quarto 0,01 mL; i. Repete-se o procedimento descrito para depositar as mesmas quantidades de soro na segunda fileira de tubos (srie do 2-ME); j. Para todas as amostras de soro, repete-se o procedimento de forma similar, pipetando os soros para cada duas fileiras de tubos adequadamente identificados; k. Incluir os soros controle positivos com atividade aglutinante conhecida; l. Incluir o soro controle negativo na prova do 2-ME; m. Com o dispensador automtico de 2 mL ou pipeta de 10mL, agrega-se a cada um dos quatro tubos das fileiras T, 2 mL do antgeno diludo 1:100 (0,045% de clulas) em soluo salina fenicada; n. Com o dispensador automtico de 2 mL (regulado para 1 mL), ou pipeta de 10 mL, agrega-se 1 mL de soluo de 2-ME 0,1M (diludo em soluo salina sem fenol) a cada um dos tubos das fileiras M; o. Mistura-se bem, agitando a estante; p. Deixar as estantes com as amostras em repouso durante 30 (trinta) minutos temperatura ambiente; q. Aps os 30 (trinta) min, empregando-se outro dispensador automtico, ou outra pipeta de 10mL, agrega-se a cada tubo da fileira M, 1 mL do antgeno diludo 1:50 (0,09 % de clulas) em soluo salina (sem fenol); r. Mistura-se bem, agitando-se a estante; s. Incubar a 37C (trinta e sete graus Celsius) por 48h + 3 h;

t. A leitura da prova feita por meio de uma fonte de luz indireta contra um fundo escuro e opaco, com uma forte luz que atravesse os tubos. As fontes de luz estranhas devem ser reduzidas. As interpretaes baseiamse no grau de turvao dos tubos e na firmeza dos grumos, aps agitao suave dos tubos (aglutinao do antgeno); u. Anotar os resultados. Se houver interesse na determinao do ttulo final de um soro, poder ser empregado o mtodo de diluies seriadas. 2. Interpretao dos Resultados: O grau de aglutinao em cada uma das distintas diluies deve ser classificado como: completo (+), incompleto (I) ou negativo (-): Reao completa - aquela em que o lquido da mistura soroantgeno aparecetranslcido, e a agitao suave no rompe os grumos; Reao incompleta - aquela em que a mistura soroantgeno aparece parcialmente translcida, e uma suave agitao no rompe os grumos; Reao negativa - aquela em que a mistura soroantgeno aparece opaca ou turva, e uma agitao suave no revela grumos; e A interpretao dos resultados da prova realizada segundo os quadros 1 (um) e 2 (dois): QUADRO 1: interpretao da prova do 2-ME para fmeas com idade igual ou superior a 24 (vinte e quatro) meses e vacinadas entre 3 (trs) e 8 (oito) meses de idade

QUADRO 2: interpretao da prova do 2-ME para fmeas no vacinadas e machos com idade superior a 8 (oito) meses

2-ME SAL NR 25 I 25 50 I 50 100 I 100 200 I 200

NR Inc Inc Inc Inc Inc

25 I Inc Inc Inc Inc Inc

25

50 I

50

100 I

100

200 I

200

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+ : positivo - : negativo SAL= Teste de soroaglutinao lenta 2-ME = Teste do 2-mercaptoetanol NR - no-reagente I - reao incompleta Inc - reao inconclusiva - combinao que no pode ocorrer

AQUISIO E USO EXCLUSIVO POR MDICO VETERINRIO

Licenciado no MAPA sob no 8.337 em 20/09/2002 Responsvel Tcnico: Dr. RICARDO SPACAGNA JORDO - CRMV SP 14.743
Para o diagnstico da Brucelose deve-se consultar as determinaes dos programas sanitrios do Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento (MAPA).

2-ME SAL NR 25 I 25 50 I 50 100 I 100 200 I 200

NR Inc Inc Inc

25 I Inc Inc Inc

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+ : positivo - : negativo SAL= Teste de soroaglutinao lenta 2-ME = Teste do 2-mercaptoetanol NR - no-reagente I - reao incompleta Inc - reao inconclusiva - combinao que no pode ocorrer

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