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DO DNA AO PRODUTO GNICO

DNA FORENSE E CLINICO
FORS 241 Forensic DNA Profiling (3) Anderson
The course introduces the student to the procedures involved in DNA profiling of evidence. This will include DNA
extraction, quantitation, amplification and detection of mitochondrial DNA and short tandem repeat polymorphisms. This
course is required for all forensic molecular biology students.
FORS 242 Forensic Molecular Biology (3) Dawson
Advanced methods of forensic molecular biology. Laboratory examinations and classifications of dried blood and other
biological materials through a variety of nuclear and mitochondrial markers. Independent laboratory projects.
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Um exame de DNA, feito sem o consentimento de
Roberta Jamilly Martins Borges, 23, provou, segundo a
polcia, que ela no filha natural de Vilma Martins Costa,
47, mulher acusada de levar o hoje adolescente Pedrinho
-registrado como Osvaldo Martins Borges Jnior- de uma
maternidade, em 1986.
Por meio de uma bituca de cigarro deixada por Roberta
no lixo da delegacia, em janeiro deste ano, os peritos
conseguiram isolar a saliva da jovem e fazer o exame. Os
policiais tiveram ajuda de especialistas em gentica e do
Instituto de Pesquisa de DNA Forense, da Polcia Civil de
Braslia.
BIOLOGIA MOLECULAR FORENSE
-IDENTIFICAO DE ESPCIMES ANIMAIS/VEGETAIS
-IDENTIFICAO DE INDIVDUOS
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IDENTIFICAO DE ESPCIMES ANIMAIS
DETERMINAO DO INTERVALO POST MORTEM
Diferentes espcies de moscas procuram os corpos em
diferentes intervalos post mortem
ENTOMOLOGIA FORENSE
IDENTIFICAO DE ESPCIMES ANIMAIS
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PCR-RFLP
Factor V Leiden humano
Relao com propenso a
trombose profunda
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O CRIMINOSO NORMALMENTE DEIXA ALGO NA
CENA DO CRIME OU LEVA CONSIGO ALGUMA
COISA
BOTNICA FORENSE
Plantas podem ser identificadas utilizando-se apenas 1 mm
de tecido seco, 5 gros de plen fresco ou 10 pgramas de
DNA
IDENTIFICAO DE ESPCIMES VEGETAIS
IDENTIFICAO DE ESPCIMES VEGETAIS
-Caso Maricopa (Arizona - Maio de 1992)
Mulher foi morta e encontrada em um depsito
abandonado.
Suspeito nega ter estado perto do depsito.
Encontradas sementes de Maricopa no furgo
do suspeito.
Atravs de um teste de genotipagem de DNA
(RAPD) as sementes foram diagnosticadas
como das rvores ao redor do depsito (teste
cego com vrias outras amostras).
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RAPD
Random Amplified Polymorphic DNA
Primers pequenos (x)
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Temperatura de anelamento baixa
A B
-Produtos do mesmo tamanho
apresentam mesmo locus gnico
-Presena de produtos um
caracter dominante (AA ou Aa)
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IDENTIFICAO DE INDIVDUOS
- necessrio a utilizao de regies polimrficas de DNA.
-Quanto mais locus so testados, maior a probabilidade de
acerto.
Para testes de paternidade e forense, at 18 locus
diferentes so testados.
-Normalmente so utilizados STR (short tandem repeats)
STR ou microssatlites
Locus especfico no genoma
Presena de milhares no homem
Kits com microssatlites pr-
estabelecidos
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STR ou microssatlites
-Regies repetitivas de DNA (de 1 a 6 nucleotdeos)
-Altamente polimrficos (polimorfismo de tamanho)
-Facilmente tipados
EXEMPLO:
actaatctagcgggctagcttagcttaggctaatgctagctgcatgcatgcatgca
tgcatgcatgcatgatctgcatgcagattttcgctccctaaccgctatagctagcgc
at
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STR ou microssatlites
O FBI registrou 13 diferentes STR para o uso na
identificao de criminosos. (CODIS Combined DNA Index
System)
13% 4.3% 2.3% 9.9% 1.7% 4.4% 8.2% Frequency
11, 13 12, 13 29, 31 12, 13 19, 24 16, 16 15, 18 Genotype
D5S818 D18S51 D21S11 D8S1179 FGA vWA D3S1358 Locus
(Male) 7.2% 3.52% 9.6% 9.5% 6.3% 1.2% Frequency
X Y 11, 11 8, 8 9, 9.3 11, 11 10, 10 11, 11 Genotype
AMEL CSF1PO TPOX THO1 D16S539 D7S820 D13S317 Locus
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STR ou microssatlites
STR ou microssatlites
Passos para a anlise:
1. Extrao do DNA
Normalmente em testes de paternidade o DNA extrado de
clulas da mucosa da boca. Para estudos forense,
amostras de sangue, cabelo, fragmento de pele, etc...)
Quantificao
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2. Amplificao do DNA
O DNA referente a cada locus amplificado com
oligonucleotdeos especficos daquele locus.
EX:
actaatctagcgggctagcttagcttaggctaatgctagctgcatgcatgcatgc
atgcatgcatgcatgatctgcatgcagattttcgctccctaaccgctatagctagc
gcat
STR ou microssatlites
STR ou microssatlites
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STR ou microssatlites
3. Deteco do DNA amplificado
Utiliza-se oligonucleotdeos fluorescentes com diferentes
espectros. Normalmente so possveis 3 marcaes
diferentes dos oligos mais a marcao do padro de peso.
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EXEMPLOS DE TESTES
EXEMPLOS DE TESTES
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EXEMPLOS DE TESTES
EXEMPLOS DE TESTES
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13% 4.3% 2.3% 9.9% 1.7% 4.4% 8.2% Frequency
11, 13 12, 13 29, 31 12, 13 19, 24 16, 16 15, 18 Genotype
D5S818 D18S51 D21S11 D8S1179 FGA vWA D3S1358 Locus
(Male) 7.2% 3.52% 9.6% 9.5% 6.3% 1.2% Frequency
X Y 11, 11 8, 8 9, 9.3 11, 11 10, 10 11, 11 Genotype
AMEL CSF1PO TPOX THO1 D16S539 D7S820 D13S317 Locus
PROBABILIDADES
-Neste caso as freqncias dos alelos 15 e 18 do locus D3S1358 so respectivamente
0.2825 e 0.1450. A frequencia em que se encontra um indivduo 15,18 :
P=2pq que igual a 2x 0.2825 x 0.1450 = .0819 (8,2%).
-A probabilidade de se encontrar um mesmo indivduo com os mesmos alelos : P=p1 x p2
x p3..= 1.3 x 10
-16.
Ou seja a chance de se encontrar este indivduo 1/ 1.3 x 10
-16
que igual a 7,7 milhes
de bilhes ou mais de 1 milho a populao da terra.
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PCR e o diagnstico clnico
Preveno precoce do cncer de mama
genes BRCA1 e BRCA2
BRCA1 e 2
Mulheres judias com ascendncia ashkenazim tem
chance de 1/40 de desenvolver algum tipo de
mutao. Outras mulheres tem chance de 1/500
Existem 3 entre as 150 mutaes encontradas mais
ligadas ao desenvolvimento do cncer
Mulher com algumas destas 3 mutaes tem 56%
de chance de desenvolver tumores antes dos 70
anos
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PCR e o diagnstico clnico
Preveno de trombose profunda
Entre 40% e 60% dos casos de trombose venosa hereditria
devem-se a presena do fator V resistente a ao
proteoltica da Protena C ativada.
Um estudo realizado em 1994 mostrou que uma mutao no
gene do fator V causa 95% dos casos de resistncia a PCA.
A mutao do Fator V Leiden encontrada em 30% a 60%
dos pacientes com trombofilia hereditria e entre 3% a 7%
das pessoas sadias em populaes caucasianas.
FATOR V LEIDEN
Fig. 1 Amplificao por PCR na regio do exon 10 do gene do fator V, seguida de digesto pela enzima
MnlI (Biolab), para a deteco da mutao Fator V Leiden, Visualizao aps eletroforese em gel de
poliacrilamida 7% e colorao por brometo de etdeo. Raia 1: marcador de peso molecular fX 174 RF/Hae III
digest Pharmacia); raias 2 e 3: pacientes que no apresentaram a mutao analisada; raias 4 e 6: pacientes
com a mutao Fator V Leiden em heterozigose; raia 5: paciente com a mutao Fator V Leiden em
homozigose.
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PCR e o diagnstico clnico
Outros diagnsticos:
-PREVENAO A DEFEITOS DO TUBO NEURAL
-PROPENSO A DOENA DE ALZHEIMER
-IDENTIFICAO PRECOCE DA DOENA DO RIM POLICSTICO
-PREVENAO A DOENAS CARDACAS
PCR e o diagnstico clnico
Deteco viral
HIV, hepatite B, hepatite C, etc...
PCR para deteco de Leishmania chagasi
PCR para deteco e genotipagem de Plasmodium falciparum
Deteco de parasitas em casos assintomticos