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UNIVERSIDADE FEDERAL DE SANTA CATARINA

CENTRO DE CINCIAS AGRRIAS
DEPARTAMENTO DE FITOTECNIA





FIT 5806 - BIOTECNOLOGIA


APOSTILA (v.6)



Rubens Onofre Nodari
Doutor em Gentica (UCDavis-CA), Prof. Titular do Dep. de Fitotecnia, Centro de
Cincias Agrrias, Universidade Federal de Santa Catarina, C. Postal 476,
Florianpolis, SC, 88040-900, e-mail: nodari@mbox1.ufsc.br

Miguel Pedro Guerra
Doutor em Cincias (USP), Prof. Titular do Dep. de Fitotecnia, Centro de Cincias
Agrrias, Universidade Federal de Santa Catarina, C. Postal 476, Florianpolis, SC,
88040-900, e-mail:guerra@cca.ufsc.br

Valdir Marcos Stefenon
Doutor em Cincias Florestais/Gentica (Uni-Gttingen-Alemanha), Pesquisador
CNPq-PDJ no Dep. de Fitotecnia, Centro de Cincias Agrrias, Universidade Federal
de Santa Catarina, e-mail: gene_mol@yahoo.com.br

Florianpolis, Setembro de 2008


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CONTEDO

PARTE 1 Princpios de Gentica Molecular
1-Introduo s macromolculas: protenas e cidos nucleicos 5
1.1-Protenas 5
1.2-cidos nucleicos 7
2-Replicao 15
3-Transcrio 17
4-Traduo 18
5-Mutao e reparo 19
6-Metilao 21
7-Regulao gnica 21
PARTE 2 Marcadores genticos
1- Introduo 23
2-Marcadores morfolgicos 23
3-Marcadores protenas de sementes 24
4-Isoenzimas 26
5-RFLPs 27
6-Minissatlites 29
7-RAPDs 31
8-Microssatlites 32
9-AFLPs 33
10-SCARs 35
11-SNPs 36
12-Anlise comparativa 37
13-Aplicaes dos marcadores moleculares 37
PARTE 3 Organismos Geneticamente Modificados
1-Introduo 42
2-Transformao de plantas 42
3-Diferenas entre os mtodos de melhoramento convencionais e biotecnolgicos 46
4-Oportunidades 48
5-Evoluo do cultivo de plantas transgnicas 50
6-Limitaes 54
7-Biossegurana Regulamentao 54
8-Determinao de risco 60
9-Anlise de Risco 61
10-Princpio da Precauo 73
11-Rotulagem 74
12-O caso da soja transgnica resistente ao herbicida gliofosate 75
10-Implicaes Scio-econmicas 76
11-Percepo pblica 77
PARTE 4 Legislao Pertinente
1-Direitos de proteo e patentes 81
2-Lei de proteo das cultivares 82
3-Biodiversidade, Biotecnologia e Agricultura 84
PARTE 5 Biotica
1-Introduo 88
2-Histrico 88
3-Situao na Europa e EUA 88
4-Situao no Brasil 89
5-Implicaes da clonagem de animais 89
6-Relevncia da biotica 90
7-A biotica leiga 92
8-As novas tecnologias espcie humana 92
BIBLIOGRAFIA


3
APRESENTAO

Esta apostila rene contedos bsicos de biologia celular e molecular e suas
decorrentes aplicaes biotecnolgicas e outras tcnicas de uso freqente, visando
conhecer, conservar e melhorar a diversidade gentica existente. O objetivo desta apostila
proporcionar ao estudante um conjunto de informaes bsicas e as principais aplicaes
das biotecnologias. Este conjunto de informaes se constitui no ponto de partida para
estudos mais aprofundados.
A biotecnologia em seu sentido mais amplo compreende a manipulao de
microorganismos, plantas e animais, objetivando a obteno de processos e produtos de
interesse. Desta maneira, toda atividade que envolva a aplicao dos conhecimentos de
fisiologia, bioqumica e gentica, considerada como tcnica biotecnolgica. Em seu senso
mais restrito a biotecnologia compreende a associao de tcnicas mais sofisticadas de
biologia molecular e celular, engenharia gentica e manipulaes celulares in vitro. Para o
CNPq, biotecnologia pode ser conceituada como a utilizao de sistemas celulares para a
obteno de produtos e desenvolvimento de processos. A FAO (1989) conceitua
biotecnologia como a aplicao dos princpios cientficos e de engenharia para o
processamento de materiais por agentes biolgicos proporcionando produtos ou servios.
Fernandes (1987) conceitua como o uso das tcnicas de regenerao in vitro e do DNA
recombinante.
As primeiras atitudes do governo brasileiro em relao s biotecnologias tiveram
inicio em meados da dcada de 1980, quando tanto o CNPq quanto o MCT iniciaram o
apoio formao de recursos humanos. Atualmente, o volume de recursos, o nmero de
bolsas e o nmero de pesquisadores que trabalham com as biotecnologias na rea agrcola
e florestal atingem valores inferiores a 10% em relao s demais reas de C&T no pais.
Contudo, cada vez maior o nmero de pessoas envolvidas com as biotecnologias, as
quais passam a ser utilizadas nas diversas disciplinas da rea biolgica. No estado de So
Paulo, a FAPESP, a agncia de fomento a pesquisa do estado de So Paulo, financiou um
projeto para o sequenciamento da bactria Xyllela fastidiosa, o agente causador da doena
denominada de amarelinho em citrus. Outros programas de pesquisa em biotecnologia de
plantas esto em progresso em caf, cacau, soja, milho, trigo e outras espcies de
importncia econmica.
A clonagem de mamferos, obtidas em 1997, desencadeou uma discusso no s no
seio da comunidade cientfica, mas tambm em toda a sociedade sobre as implicaes do
poder das biotecnologias. Toma corpo ento a Biotica, que discute o modo de ser (tica)
da vida. A biotica pergunta-se sobre a legitimidade dos projetos de efeitos biotecnolgicos.
Vrios agrnomos esto desenvolvendo atividades na gerao de processos e
produtos, utilizando estas tcnicas biotecnologias. O mercado tende a uma expanso nos
prximos anos. Alm dos conhecimentos tcnicos necessrios ao desempenho profissional,
o Engenheiro Agrnomo tem um importante papel na discusso das questes relacionadas
com as biotecnologias com a sociedade. A liberao da soja transgnica em setembro de
1998, resistente ao herbicida glifosate, constitui-se num marco da agricultura e exige que os
profissionais formados tenham o conhecimento tcnico e cientfico no s para o correto
manuseio destes organismos como tambm para participar das decises a respeito das
mesmas.
Agradecemos aos estudantes de ps-graduaao, em particular as Dras. Adriana
Cibele de Mesquita Dantas e a Karine Louise dos Santos e ao MSc. Douglas Steinmacher
pelas contribuies a esta apostila.

Os Autores


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PARTE 1 PRINCPIOS DE GENTICA MOLECULAR

1-INTRODUO S MACROMOLCULAS: PROTENAS E CIDOS NUCLEICOS

1.1-Protenas
Protenas so cadeias de aminocidos (aa). A estrutura bsica composta de um
esqueleto e de grupos laterais variveis (Figura 1). Uma srie repetida de ligaes
peptdicas entre o carbono de um aa e o nitrognio de outro aa formam molculas grandes,
as protenas (Figura 2). Devido a natureza da ligao peptdica, uma das extremidades da
protena H
2
N (H
3
N
+
), denominada de N-terminal, e na outra extremidade encontra-se
COOH (COO
-
), que chamada de carboxi-terminal. Existem cerca de 20 aa, cada um com
sua forma e constituio qumica caracterstica. Dependendo da composio, as protenas
podem ter carga positiva, neutra ou negativa. Os aa lisina, arginina e histidina contribuem
com carga positiva (denominados de bsicos) enquanto que o cido asprtico e o cido
glutmico so carregados negativamente (denominados de cidos). Os demais 15 aa so
neutros com relao a carga eltrica. Destes, os polares so: serina, treonina, tirosina,
triptofano, asparigina, glutamina e cistena. Os demais apresentam propriedades
hidrofbicas (no polar): alanina, fenilalanina, glicina, isoleucina, leucina, metionina, prolina
e valina. Tais propriedades (polaridade e a hidrofobia) tambm so incorporadas s
protenas.







Os tipos de aa includos e principalmente a sua sequncia determinam a
conformao tridimensional e portanto, as propriedades de todas as protenas. O tamanho
de uma protena pode variar de alguns poucos at 30.000 aa. Trinta ou 40 aa so
suficientes para proporcionar uma conformao terciria.











Figura 1: Estrutura geral de um aminocido mostrando
suas estruturas fixas e o radical varivel, poro que
diferencia os diferentes aminocidos
Figura 2: oligopeptdeo formado por quatro aminocidos unidos por ligaes peptdicas (em
vermelho). O primeiro aminocido (glicina, com o radical H) apresenta a extremida N-
terminal, enquanto o ltimo aminocido (alanina, com o radical CH
3
) apresenta a extremidade
carboxi-termina.


5
A estabilidade das protenas representa um equilbrio entre a sua sntese e a sua
degradao. Existe um processo contnuo de reposio (turnover) que pode ser
caracterizado quando se conhece a meia-vida das protenas, ou seja o tempo necessrio
para a renovao da metade da sua concentrao. A meia-vida das protenas pode variar de
minutos a mais de 20 horas e sua degradao catalisada por enzimas proteolticas.
Exemplos: protenas com N-terminal arginina - 2 min; lisina, leucina e fenilalanina - 3 min;
prolina - 7 min; tirosina e glutamina - 10 min.
Na maioria das vezes as protenas para exercerem suas funes devem sofrer
modificaes, como fosforilao, glicosilao ou metilao. No processo de fosforilao
adicionado protena um grupo fosfato pelas kinases, tonando-se fosfoprotenas. A
metilao ou acetilao consiste na incorporao de um metil ou acetil protena pelas
metilases ou acetilases, respectivamente. A incorporao de carboidratos numa cadeia
protica denomina-se glicosilao, origina as molculas denominadas de glicoprotenas.
Enzima a denominao de uma protena quanto esta apresenta a habilidade de
acelerar uma reao fazendo ou quebrando uma ligao (covalente) especfica. Para o
exerccio desta funo, as protenas devem apresentar a conformao terciria ou
quaternria. A conformao quaternria na realidade a agregao de duas ou mais sub-
unidades, que nesta condio proporcionam a funo catalisadora uma protena enzima.
Exemplo: Rubisco ou ribulose-1,5-bifosfato carboxilase/oxigenase se torna uma enzima
quando oito sub-unidades se agrupam, quatro delas codificadas por genes nucleares e as
outras quatro por genes do cloroplasto. A Rubisco responsvel pela incluso de CO
2
numa
cadeia de carbono (1 etapa no ciclo de Calvin). Tratando-se de enzimas, nem todos os aa
participam da reao cataltica. Existe um stio ativo responsvel pela catlise. Este stio
ativo ento um conjunto de aa denominado de motivo ou domain. A domain pode ser
entendida como a unidade funcional de uma protena, uma regio relativamente
independente da protena. Nas interaes com outras protenas ou cidos nucleicos apenas
uma parte da protena, o motivo (ou domain), responsvel pela funo.
Quando diferentes protenas desempenham funes semelhantes, constituem uma
famlia de protenas. A mesma seqncia formadora de uma determinada domain pode se
encontrada em vrias protenas de espcies diferentes. Aparentemente, durante a evoluo
a domain se moveu dentro da sequncia linear de aminocidos sem perder sua funo e
especificidade de ligao. Estas domains variam quanto ao nmero de aa: 18 no Colgeno,
mais de 250 aa Fibrinognio. Freqentemente, as domains podem se repetir (at mais de
30) numa mesma protena, neste caso denominadas de motivo (motif) sendo que nem todas
as repeties so exatamente idnticas. Estas duplicaes provavelmente so devido a
existncia de elementos mveis ou transformao. As duplicaes tm provocado a
elongao de muitas protenas. Estimativas admitem a existncia de mais de 50 mil tipos de
protenas numa espcie eucariota.
As primeiras tcnicas de separao de macromolculas, foram desenvolvidas na
dcada de 40. Nesta poca foi desenvolvido os sistemas de cromatografia que permitem a
separao das fraes polares das no polares com base na solubilidade das diferentes
molculas. De acordo com este princpio, um solvente no polar move-se carregando
solutos com ele. As substncias migram a diferentes distncias de acordo com a sua
solubilidade no solvente. Atualmente existem uma dezena de diferentes tcnicas de
cromatografia, que possibilitam inclusive a identificao de molculas presentes numa
mistura.
Nos anos 80 foi descoberto que algumas doenas (desordens degenerativas)
poderiam ser causadas por agentes infecciosos formados apenas por protenas. Estas
protenas foram denominadas de prons ('proteinaceous infections particles'). O pron uma
forma alterada da protena PrP que normalmente est presente no crebro de vertebrados.
Estas desordens degenerativas ocorrem com freqncia em animais e muito raro na espcie
humana.


6
O sequenciamento de protenas uma tcnica, desenvolvida por (Sanger, 1950),
com a finalidade de conhecer a seqncia dos aa numa protena. As implicaes desta
descoberta so inmeras. A mais importante se relaciona com a sade humana, pois a
tcnica permitiu a identificao de inmeras doenas. Mutaes ao nvel de DNA podem
provocar a substituio de um aa por outro numa determinada posio da seqncia de uma
protena e dependendo da posio a protena perde sua funo, causando ento uma
doena. Outra conseqncia foi a possibilidade de inferncia da seqncia de bases ao
nvel de DNA que codifica para as protenas sequenciadas. Isto permitiu o isolamento e a
clonagem dos primeiros genes. Mais tarde, o prprio Sanger desenvolveu um mtodo de
sequenciamento de DNA. Por esta contribuio cincia, Sanger foi agraciado com um
segundo prmio Nobel.

1.2-CIDOS NUCLEICOS
1.2.1-cido desoxirribonucleico - DNA
As molculas de DNA tm estrutura em forma de dupla hlice, semelhante a de uma
escada retorcida. Cada fita formada por uma seqncia de nucleotdeos (dNTP). Cada
dNTP composto de uma base nitrogenada ligadas a uma molcula de acar
(desoxirribose) e um grupo fosfato. As bases nitrogenadas ligadas a desoxirribose so
quatro: adenina (A), citosina (C), guanina (G) e timina (T). Uma ligao fosfodister
unindo o grupo fosfato de um dNTP e o acar desoxirribose de outro dNTP forma o
esqueleto da fita (strand), como se fosse uma das laterais da escada. A outra fita (ou a outra
lateral da escada) formada da mesma maneira, mas com orientao da ligao
fosfodister contrria, o que impe a caracterstica de antiparalelismo as duas fitas. Cada
fita tem uma orientao (5'-3') em funo da natureza da ligao fosfodister entre o
carbono 3' e o 5' da desoxirribose, sendo que um nucleotdeo s pode ser includo na cadeia
atravs da ligao do fosfato com o carbono 3'OH da desorribose. Por isto, a orientao da
cadeia 5'-3', pois haver sempre o carbono 3' numa das extremidade da fita.
Mais do que isto, estas duas fitas so complementares j que quando existir adenina
de um lado, somente timina encontrada na mesma posio na outra fita. O mesmo
acontece com citosina e guanina. So estes os dois nicos tipos complementao de bases
nitrogenadas possveis no DNA. Como conseqncia o nmero de adeninas ser igual ao
nmero de timinas num organismo. O mesmo vale para C e G. Entretanto a quantidade de
purinas (A e G) caracterstica de cada espcie. Assim a proporo entre A e G de 0,7
em Bacillus, 1,56 no homem e 1,7 em Saccharomyces cereviseae. Isto conhecido como
regra de Chargaff.
Entre as bases nitrogenadas existem pontes de hidrognio, duas entre A e T e trs
entre C e G. Tais pontes juntamente com outras foras, mantm as duas fitas unidas. Cada
par de bases anlogo a um degrau desta escada. O DNA funciona como um modelo para
a sntese de novas fitas de DNA. O DNA a molcula responsvel pelo armazenamento e
perpetuao do cdigo gentico. Apesar da ocorrncia de 3 tipos de DNAs ('A', 'Z', 'B'),
aparentemente desempenham a mesma funo.
A prova definitiva de que o DNA a molcula repositrio do cdigo gentico foi
obtida em 1952 por Hershey e Chase. Experimentalmente adicionou-se
32
P numa colnia de
bactrias infectadas por vrus, neste caso o fsforo radioativo foi incorporado no DNA, j que
pouco ou quase nenhum fsforo encontrado nas protenas. Num experimento paralelo, foi
feita a adio do istopo
35
S, que pode marcar radioativamente as protenas, j que estas
tm enxofre, mas no marca o DNA, pois este no contm enxofre. Como s o
32
P foi
detectado nas prognies dos vrus, conclui-se que o DNA passava de gerao a gerao.
Na realidade, oito anos antes, outros trs cientistas (Avery, MacLead e McCarty) haviam
postulado que o agente transformador (possivelmente o DNA) era destrudo pela
desorribonuclease pancretica que por sua vez no afetava as protenas.


7
A quantidade de DNA pode variar de 10
3
a 10
13
nucleotdeos. Esta quantidade de
DNA por clula haplide denominada de valor C. So aproximadamente 3 bilhes de
pares de bases no ncleo de cada clula humana. Entretanto podem ser apenas 5387 no
vrus x174. A maioria das plantas tem uma quantidade de DNA que varia entre 10
9
a 10
11
.
Nos mamferos existem de 10
9
a 10
10
pares de bases; j alguns peixes ou anfbios podem
ter at 10
13
pares de bases. muito DNA para pouca funo (paradoxo do valor C).
Enquanto nos procariotos praticamente quase todo o DNA carrega informaes necessrias
para a sntese de protenas e RNAs, a maior parte da seqncia de bases dos eucariotos
no codifica para produto algum. Assim apenas 3% (aproximadamente) do genoma humano
formado por genes (estimados em mais de 50 mil) sendo que a funo do restante ainda
no est suficientemente compreendida. A maior parte deste DNA sem funo conhecida
composto por seqncias repetidas, de onde se originou o nome de DNA repetitivo (selfish,
nos anos 80).
Quando esticada, uma molcula de DNA de qualquer clula humana mediria 1,80 m
e teria a espessura de um trilionsimo de um centmetro (1 micrmetro = 1 milsimo de
milmetro). Uma clula humana no comportaria tal estrutura. Dentro de uma clula as
molculas de DNA esto ligadas a protenas e so retorcidas ou enroladas (supercoil).
Quando completamente compactadas so possveis de serem visualizadas no microscpio
tico e recebem a denominao de cromossomos. A compactao pode alcanar um fator
de 7000 vezes. Vrus e bactrias contm apenas um cromossomo. J os eucariotos (fungos,
plantas, animais) tm dois ou mais cromossomos que em geral, variam de tamanhos.



Figura 3: Nucleotdeos formados
com as pentoses ribose (formam
RNAs) ou desoxiribose (forma
DNA). A diferena entre as
pentoses est realada em
vermelho.
Figura 4: ligao entre dois
desoxirribonucleotdeos (dNTPs),
atravs de uma ligao fosfodister
(em vermelho) entre o grupo fosfato de
um dNTP e a pentose de outro dNTP.
Os carbonos 5 e 3 esto realados em
azul.


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Genoma e gene
A seqncia de pares de bases que formam o DNA pode ser chamada de genoma. A
forma do genoma pode ser circular como nos vrus, bactrias, mitocndria, cloroplasto e
plasmdeos ou linear como nos cromossomos dos organismos eucariotos e alguns
procariotos. O genoma da maioria absoluta dos organismos de DNA. Poucos vrus so de
RNA, como Influenza, HIV, TMV, poliomielite. A grande maioria tambm apresenta fita
dupla. Exceo a alguns vrus como (x174, M13 e f1, cujos genomas so constitudos de
apenas uma fita de DNA. As caractersticas de um indivduo como a cor dos olhos ou da
pele so determinadas por um conjunto limitado de pares de bases contidas no DNA (ou no
RNA, como j mencionado, trecho este, denominado de gene.
O conceito de gene evoluiu tanto quanto a biologia. Uma das primeiras observaes
sobre o tema foi feita por Leonardo da Vinci. Observando a cor dos filhos de mulheres
brancas com homens pretos, ele sugeriu que a semente da me tinha o mesmo vigor que a
do pai (Wallace, 1992). Mas foi Mendel em 1865 quem utilizou pela primeira vez a
expresso fator para os componentes hereditrios parentais responsveis pelas
caractersticas nas prognies. S mais tarde (1908), Johannsen sugeriu o termo gene para
designar os fatores hereditrios.
Por gene entende-se a unidade de herana. Contudo, os diferentes textos de
gentica apresentam diferentes conceitos para gene. Segundo a maioria dos autores, o
principal atributo do gene sua relao com a protena que codifica. Neste caso, define-se
gene como sendo um segmento de DNA, que atravs da intermediao de uma molcula
mensageira de RNA, responsvel pela especificao de uma cadeia peptdica (Wallace,
1992). Entretanto, outros geneticistas incluem, alm das protenas, os RNAs como produtos
gnicos transcritos, mas no traduzidos. Neste caso, a definio de gene um segmento
de DNA responsvel pela produo de um produto difusvel (Lewin, 1994). Como um
significativo grupo de RNAs exerce funes outras que a de mensageiro, como por exemplo,
a regulao gnica, o segundo conceito de gene mais realista.
Por se tratar de uma seqncia de DNA, um gene pode ocorrer sob mais que uma
alternativa ou alelo. Desta forma, basta uma alterao na seqncia de bases que cause
uma mudana no produto, para que se configure uma alternativa (alelo) diferente. Para
simplicidade, normalmente utiliza-se um modelo bsico de um gene com dois possveis
alelos, j que a maioria dos seres vivos diplide, portanto, carregam dois alelos (um em
cada cromossomo homlogo) para o mesmo gene. Mas na realidade, um gene pode ter
muitas alternativas. Evidentemente que num indivduo diplide s ocorrem uma ou duas
formas no mximo. Mas diferentes indivduos podem apresentar formas allicas diferentes
uns dos outros. Um dos exemplos mais conhecido trata-se do tipo sanguneo, sendo que
numa populao de indivduos podem ser encontrados quatro diferentes alelos.

Sequenciamento de cidos nucleicos
O sequenciamento consiste na identificao ordenada dos nucleotdeos que
compem um fragmento de DNA ou RNA. Existem duas tcnicas que so utilizadas
normalmente em laboratrios. Por outro lado, nos ltimos anos foram desenvolvidos
equipamentos sequenciadores de alta velocidade e que esto sendo utilizados no
sequenciamento de espcies procariotas (bactcias) e eucariotas (fungos, vegetais e
animais, incluindo Homo sapiens).
Conhecer a sequncia de bases dos genomas das espcies tem sido um dos
objetivos dos bilogos. A sequncia completa de vrios vrus j conhecida h bastante
tempo, devido ao fato do pequeno nmero de nucleotdeos participantes de seus genomas.
Em 1995 foi finalizado o sequenciamento do genoma das duas primeiras bactrias pelo 'The
Institute for Genomic Research' (TIGR http://www.tigr.org/tdb/): Haemophilus influenzae e
Mycoplasma genitalium. A primeira delas, que causa a inflamao no ouvido, tem


9
aproximadamente 1,8 milho de pares de bases e aproximadamente 1700 genes. A
segunda que tem apenas 570 genes est associada s infees reprodutivas. O
sequenciamento do organismo deve contribuir para o desenvolvimento de vacinas ou outras
estratgias de combate a doena causada por aquela bactria. Alm disso, o
seqenciamento do Saccharomyces cerevisae, iniciado em 1989, foi concludo em junho de
1996, resultante de um projeto feito em parceria por um grupo de pesquisadores de vrios
pases europeus. Esta levedura, alm de ser utilizada como modelo gentico para estudos
em espcies eucariotas, utilizada na produo de bebidas fermentadas. O
seqenciamento desta levedura um marco histrico, pois foi o primeiro organismo
eucarioto a ter seus genes totalmente inventariados. Brevemente, sero conhecidas a
maioria das seqncias de nucleotdeos de vrias espcies vegetais e animais de
importncia econmica e cientfica.

Tabela 1: Nmero de genes e tamanho do genoma de espcies parcial ou totalmente
sequenciadas
Espcie Em milhes de pares de
bases
Nmero de genes
Mycoplasma genitalium 0,58 482*
Helicobacter pylori 1,67 1.590*
Haemophilus influenzae e 1,83 1.740*
Bacillus subtilis 4,20 4.000*
Escherichia coli 4,639 4.307*
Saccharomyces cerevisae 12,50 6.034*

Caenorhabditis elegans 100 13.100
Arabidopsis thaliana 150 20.000
Oryza sativa 430 30.000
Sorghum bicolor 760 30.000
Zea mays 2.000 30.000
Homo sapiens 3.000 100.000
Triticum aestivum 16.000 30.000
*J sequenciados (Adaptado de Science 276:1960, 1997; Science 277:1432, 1997)

O primeiro projeto no Brasil nesta rea foi o sequenciamento da bactria Xyllela
fastidiosa que causa uma doena no citrus chamada de amarelinho. O referido projeto foi
iniciado em 1997 e tem um oramento de 14 milhes de dlares, financiado pela FAPESP,
que a Fundao de Amparo a Pesquisa do Estado de So Paulo. O nmero de espcies j
totalmente sequenciadas cresce ano a ano e vrias espcies vegetais e animais esto
sendo sequenciadas, entre elas, arroz, milho, soja, boi e porco. Enquanto nos procariotos, a
densidade mdia de genes de 1 gene a cada 1000 pb aproximadamente, nos eucariotos
de 1 gene a cada 2000 pb nas leveduras, 1 gene em 5000 pb nos nematides e 1 gene a
cada 4800 pb em Arabidopsis. A maior quantidade de DNA pode ser parcialmente explicada
pelo fato de que, nos eucariotos a parte regulatria dos genes muito maior que nos
procariotos. Alm disso, nos eucariotos existem sequncias repetidas, que so ausentes
nos procariotos. Embora se saiba o nmero de genes dos organismos sequenciados, ainda
no se conhece as funes de 40 a 60% dos genes, dependendo da espcie. O


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conhecimento da sequncia de bases de um genoma permite aos bilogos o entendimento
do funcionamento dos organismos, as funes dos genes, que tipo, tamanho, quantidade e
caractersticas das protenas formadas. A maior parte das espcies de bactrias j
sequenciadas causam doenas espcie humana. A razo principal para se conhecer sua
sequncia relaciona-se com a possibilidade do seu controle, via desenvolvimento de vacinas
ou outros medicamentos. As plantas so a base da vida na terra. Contudo, pouco se
conhece de seu genoma. O genoma das angiospermas altamente varivel, mas ainda
praticamente desconhecido. Desconhecemos tambm o nmero de espcies e o nmero de
genes em cada espcie. Na verdade, ainda no conhecido o nmero de cromossomos de
mais de 70% das espcies vegetais. O valor C de DNA s conhecido em 1% das
espcies. Desta forma, o projeto genoma de fundamental importncia para o
aprofundamento do conhecimento das plantas, domesticadas ou no.
Muitos cientistas tm afirmado que o seqenciamento completo do genoma humano
(estimado em trs bilhes de pares de bases) dever revolucionar a medicina e poder
auxiliar na cura para as mais de 3000 doenas hereditrias que atingem a raa humana.
Iniciado em 1985, o seqenciamento do genoma humano que rene cientistas e laboratrios
dos Estados Unidos, Canad, Japo, Inglaterra, Frana, Rssia, Itlia, Austrlia e Brasil
entre outros, foi completado antes da data prevista (2005). Quando pronto, o arquivo
necessrio ao armazenamento das informaes se torna equivalente a 200 listas telefnicas
com mil pginas cada uma. O GenBank (USA) e o DNA Database (Japo) j dispem de
informaes de mapeamento e sequenciamento de mais de 2500 diferentes organismos.
Mapas fsico e de ligao foram divulgados (com resoluo elevada) nos anos de 1993 e
1994 por cientistas franceses e americanos. Tais mapas facilitaro a clonagem de genes
humanos, como aqueles envolvidos com as doenas, a obesidade, entre outras.

Introns e exons
Foi descoberto nos anos 70 a presena de seqncias presentes no DNA mas no
no RNA mensageiro, produto da transcrio do DNA. Tais seqncias foram denominadas
de introns (intervening sequences) e esto intercaladas com os exons (expressed
sequences), que so as regies codificadoras dos genes. A remoo dos introns feita por
enzimas e faz parte do processamento que sofre o pr-mRNA antes de sair do ncleo
(Figura 5). A presena de introns ou sequncias intervenientes sugere uma maior
oportunidade para recombinaes e maior acmulo de mutaes. Introns so comuns nos
eucariotos e raramente encontrados nos procariotos. Quando o intron que faz o
processamento, ele se regenera no final do processo. Neste caso, o intron seria uma
enzima, proporcionando ao RNA a funo de catlise. Nas bactrias ainda no foram
detectados introns. Uma das hipteses de que as bactrias perderam os introns durante a
evoluo. Neste caso os introns teriam se originado no incio da vida. Outra hiptese admite
que os introns surgiram com os eucariotos. Na realidade, ainda no se sabe exatamente
como os introns surgiram, nem tampouco se apareceram logo no incio da vida ou surgiram
mais recentemente.
Embora tenham caractersticas similares, os introns so muito diversos quanto ao
tamanho, processamento e funes. Certos introns, em especial os do chamado grupo I,
comuns em genomas de organelas celulares (como a mitocndria) e em alguns genes do
ncleo (como o rRNA), apresentam caractersticas especiais. Eles prprios realizam sua
remoo do pr-mRNA (autocatlise) e ligam os exons, fenmeno denominado self-
splicing.
Alguns introns desse grupo so elementos mveis (transposons), capazes de se
transferir em cruzamentos genticos para alelos que no os continham, pelo processo
denominado homing, iniciado com o corte do DNA por uma endonuclease, enzima
codificada pelo prprio intron. Outros introns do grupo I codificam cofatores proticos, como
as maturases. So poucos os casos conhecidos em que um mesmo produto desse tipo de
intron realiza ambas as funes -- de endonuclease e de maturase.


11


























J so conhecidos casos de transferncia de introns do grupo I entre indivduos da
mesma espcie (transferncia vertical). Nesse caso, um intron passa de um alelo para outro
que no o continha. Tambm j foi constatado que introns desse grupo presentes no
genoma das mitocndrias podem passar de uma espcie para outra (transferncia
horizontal, ou lateral), mas dentro do mesmo filo.
A transferncia lateral, entre organismos que no se acasalam sexualmente, foi objeto
de profundo estudo de Yangrae Cho e colaboradores, publicado em novembro de 1998. O
estudo envolveu um intron do grupo I do genoma mitocondrial de plantas vasculares,
bastante conhecido e localizado no gene cox1 da erva Peperomia polybotrya, que teria sido
adquirido de um fungo, por transferncia lateral. Analisando o DNA de 335 plantas de
diferentes gneros, os autores verificaram que esse intron est amplamente disseminado
nos genes cox1 das angiospermas.
O intron estudado est presente em 48 gneros diferentes, a partir de 32 eventos
independentes de transferncia lateral. A concluso sobre as transferncias baseia-se em
trs pontos principais: a presena constante do gene cox1 e espordica do intron, a
incongruncia entre as filogenias (histrias evolucionrias) das espcies e dos introns e a
co-converso (Co-converso quando parte das extremidades de um segmento de DNA
3 a 18 pb -, aps o processo de recombinao/reparo, convertida sequncia do DNA
doador ou invasor. Assim, o DNA da espcie recipiente parcialmente degradado e uma
nova sequncia sintetizada com base no molde do DNA da espcie doadora. Desta forma,
a converso deixa um rastro, pois a sequncia original alterada.) das seqncias prximas
do local de insero do intron. O primeiro ponto indica que o gene cox1 se disseminou com
alta freqncia e manteve-se nas espcies que o receberam, enquanto o intron foi perdido
na maioria dos casos. O segundo demonstra que a transferncia independe do grau de
parentesco entre as diferentes plantas. E o ltimo -- a divergncia gentica das regies que
flanqueiam a insero do intron -- revela que a transferncia se d via recombinao/reparo
e catalisada por uma endonuclease. Esse processo, conhecido como homing,
exatamente o que esse tipo de intron promove.
Figura 5: Representao esquemtica da estrutura de um gene eucarioto, contendo
exons e introns. No rocesso de splicing do RNA, os introns so retirados, ao mesmo
tempo que um cap e uma cauda de adeninas so adicionados ao mRNA.


12
Os resultados geram vrias preocupaes. Entre as dvidas principais esto a
causa da extraordinria invaso desse intron, os passos do processo de
transferncia em nvel celular e o caminho evolutivo da disperso do intron do grupo
I do gene cox1 entre as angiospermas. Entre as implicaes, a mais importante est
ligada freqncia com que o DNA transferido de uma espcie a outra. A
transmisso planta a planta requer acasalamento sexual ou a ajuda de vetores
(vrus, bactrias, insetos e outros). A questo bastante atual, j que muitas plantas
transgnicas esto sendo liberadas para cultivo.
O trabalho de Cho e colegas demonstra claramente que a transferncia
horizontal ocorre e mais freqente do que se imagina. Isso torna imperativo
estudar o fluxo gnico entre plantas transgnicas e espcies afins, antes de sua
liberao para cultivo, para testar a possibilidade de uma irradiao de genes, que
podem ser desejveis em uma espcie mas completamente indesejveis em outras.
A probabilidade desta irradiao aumenta com o aumento do cultivo destas plantas,
principalmente no sistema de monocultura. Num dado momento, um mesmo gene
poder estar presente em milhes de plantas, aumentando o risco da transferncia
horizontal.

1.2.2-cido ribonucleico - RNA
Apesar de ser tambm um cido nucleco, o RNA tm muitas diferenas em relao
ao DNA. Em primeiro lugar, todos os RNAs so formados por apenas uma fita. Entretanto,
pode apresentar uma configurao denominada de secundria, quando ocorre o
pareamento entre bases complementares. Ao invs de desoxirribose como no DNA, o
acar do RNA uma ribose (uma oxidrila a mais em relao a desoxirribose do DNA). A
terceira principal diferena a presena de uracil (U) ao invs de timina (T). Podem ocorrer
pelo menos quatro tipos de RNA: mRNA (1-3%), rRNA (>90%), tRNA (1-2%) e sRNA (?%),
denominados de mensageiro, ribossomal, transportador e small RNAs, respectivamente.
Cada um deles desempenha funes especficas. Dentro do ltimo grupo, so includos um
grande grupo de RNAs, muitos dos quais ainda sem funo conhecida. Outros esto
envolvidos na regulao gnica.
Alm das funes de mensageiro entre o DNA e os ribossomos, formador dos
ribossomos, e transportador de aminocidos, os RNAs podem ainda desempenhar a funo
de catlise e de regulao gnica. A funo de catlise (at ento exclusividade das
protenas) foi descoberta na dcada passada e os RNAs que tm esta habilidade, as
ribozimas, realizam a separao do RNA transcrito em vrias partes, fenmeno que se
chama de splicing. O autoprocessamento do RNA no idntico catlise enzimtica
executada pelas protenas. Numa reao enzimtica, a protena se envolve mas liberada
intacta ao final do processo. No caso do autoprocessamento, o pr-RNA se processa a si
prprio, sem a presena de enzimas, mas no se regenera no fim do processo. Portanto, o
pr-RNA no uma enzima, mas tem a propriedade de catlise. Alm disso, foi verificado
experimentalmente que o RNA tem a capacidade de retirar bases de um segmento de RNA
e adicion-las em outro, demonstrando a capacidade de sintetizar algo semelhante a si
prprio.

mRNA
Resultam da transcrio de um gene. So os RNA mensageiros (mRNA), aqueles
que sero decodificados pelos ribossomos e contm informaes para a produo de uma
protena. O tamanho dos mRNAs varivel, dependendo do nmero de bases contidas no
gene transcrito. Como contm uma mensagem, diz-se que existe uma colinearidade entre
as bases do mRNA e a sequncia de aminocidos da protena resultante de sua


13
decodificao. O tempo de vida de um mRNA muito pequeno. Na maioria dos procariotos
a meia vida de um mRNA no ultrapassa 2 minutos. J nos eucariotos, alguns mRNAs
duram algumas horas.

rRNA
O RNA ribossomal (rRNA) tambm resultante da transcrio de genes de uma
regio do DNA, neste caso denominada de rDNA. O produto da transcrio no
decodificada, pois os prprios RNAs produzidos juntamente com protenas vo formar os
ribossomos e executar a funo especfica, que a produo de protenas. Participam da
formao do ribossomo de um procarioto trs rRNAs: o 5S rRNA com 120 nucleotdeos, o
16S rRNA com 1542 nucleotdeos e o 23S rRNA com 2904 nucleotdeos. Nos eucariotos,
estes rRNAs so um pouco maiores e designados de o 5S rRNA, o 18S rRNA e o 28S
rRNA. Entretanto, nem todos os eucariotos tm os rRNAs do mesmo tamanho.

tRNA
Denominada de adaptadores por Francis Crick, o tRNA (RNA transportador) um
RNA que tem a funo especfica de transportar os aminocidos at o ribossomo durante a
sntese de uma protena. So molculas relativamente pequenas, contendo de 73 a 93
nucleotdeos. Dos cidos nucleicos conhecidos, o tRNA o nico que apresenta algumas
bases que no A, C, G e T. Numa clula existem pelo menos tantos tRNAs quanto so os
aminocidos, e estes esto ligados ao tRNA na extremidade 3'OH. A estrutura tridimensional
de um tRNA assemelha-se a uma folha de trevo, contendo numa das alas (loop ou hairpin)
o anticodon, que uma seqncia de trs bases.

Outros RNAs
Existem outros RNAs, muitos deles transcritos e que permanecem no ncleo da
clula sem funo aparente (hnRNA). Outros RNAs, de cadeia curta, chamados de snRNA,
esto envolvidos na regulao gnica. Mais recentemente, descobriu-se que alguns RNAs
podem se deslocar de suas clulas e desempenhar uma atividade em outra clula,
provavelmente regulatria. Particularmente os RNAi ou RNA interferncia uma classe de
RNAs que ao regulatria.
Temos que escrever mais sobre os RNAs....


1.2.3-cido peptdeo nuclico (PNA)
Esta nova molcula, criada em 1991 em laboratrio, tm as quatro bases
nitrogenadas do DNA ou RNA ligadas ao esqueleto de uma protena. Este novo composto
sinttico alm de ser mais estvel nas clulas que o DNA e o RNA, se liga naturalmente a
estes com uma intensidade 50 a 100 vezes mais forte que os prprios cidos nucleicos
naturais o fazem entre si. Quando se liga ao DNA, forma uma estrutura de trs fitas. Isto
permite o uso destas molculas na terapia gnica, pois pode provocar a indisponibilidade
daquela regio genmica ser acessada por enzimas e protenas. Neste caso, poderia ser
utilizado um PNA para se ligar a um gene defeituoso que, ento, deixaria de expressar uma
protena defeituosa. Os PNAs podem procurar e se ligar a outra fita com seqncia
complementar de bases, estratgia similar ao antisenso.
O PNA construdo ligando-se cada base nitrogenada a um peptdeo ao invs de um
acar e um grupo fosfato. Como a cadeia de peptdeos tem carga eltrica neutra, os PNAs
apresentam uma grande capacidade de ligao, eliminando a repulso criada pela carga


14
eltrica negativa devido a presena dos grupos fosfatos presentes no DNA e RNA. Alm
disso, os PNAs podem atacar genes invadindo a dupla hlice, algo que DNA e RNA no
conseguem. Mais ainda, a qumica de peptdeos simples e mais barata que sintetizar
cidos nucleicos.
Este produto da biotecnologia poder ser aplicado na sade humana. O principal
argumento da utilizao dos PNAs em diagnstico decorre do fato da grande afinidade com
o alvo; quanto maior a afinidade, maior a possibilidade de ligao com seqncias
especficas e consequentemente, a sua marcao. Mas como a molcula artificial, ainda
no se conhece ainda a sua toxicidade.

1.2.4-cidos nucleicos e a origem da vida
Como capaz de armazenar o cdigo gentico em alguns vrus, tem a funo
cataltica e de regulao gnica, o RNA passou a ser admitido (hiptese) como a provvel
molcula que poderia ter originado a vida a partir do 'caldo primitivo'. Esta teoria tem
recebido contribuies cientficas por uma grande quantidade de cientistas do mundo inteiro.
Duplicando RNAs semelhantes como os RNAs ribossomais e participando da produo das
protenas, o RNA um forte candidato a ser a estrutura do primeiro ser vivo na face da
Terra. A funo cataltica, entendida aqui como sendo a capacidade de quebrar e ligar
outros RNAs, j foi comprovada. H tambm resultados de pesquisa que atribuem ao RNA a
capacidade de editorao, um sistema simplificado do sistema de reparo do DNA. Os vrus
que possuem RNA como material gentico necessitam da enzima transcriptase reversa para
produzir DNA e ento se replicarem. Quando se provar que o RNA tem ou teve capacidade
de autoduplicao, ser dado um passo importante favorvel a hiptese do 'Mundo do RNA'.
Nenhuma outra molcula teria a capacidade e a versatilidade de desempenhar tantas
funes como o RNA no 'caldo primitivo'. Outra hiptese considera uma molcula mais
simples, precursora do RNA, composta de um cido nuclico ligado a peptdeos
(denominada de PNA).
Alguns cientistas no concordam com estas hipteses por considerarem que as
molculas de RNA so muito complexas para ter tido origem no ambiente primitivo terrestre,
onde s havia gua, gs carbnico, nitrognio e radiao ultravioleta. Alm disso, no 'caldo
primitivo' deveriam existir substncias muitos txicas. Em contrapartida, admitem que sob as
condies primitivas, a estrutura cristalogrfica dos minerais seria capaz de reduzir dixido
de carbono para formar aldedos e a partir destes se formariam acares e molculas
orgnicas essenciais. A transferncia de eltrons de uma molcula outra poderia ter
contribudo para as transformaes metablicas. Recentemente, cientistas obtiveram
molculas de RNA mais complexas quando utilizaram uma mistura de pequenas molculas
de RNA sob condies de altas temperaturas, situao que deve ter ocorrido na poca do
surgimento da vida.
Outra possibilidade da origem da vida seria via metablitos secundrios. Tais
metablitos, considerados secundrios no atual estgio evolutivo, teriam sido relevantes no
perodo pr-bitico como integrantes do metabolismo primrio responsvel pela sntese dos
cidos ncleicos e traduo e replicao.
De qualquer forma, a hiptese de maior consenso a de que o RNA teria sido o
primeiro material gentico sobre o qual a evoluo agiu, resultando numa quantidade
enorme de formas de vida que se conhecem atualmente.

2-REPLICAO (Replication)
O DNA funciona como um modelo para a sntese de novas fitas de DNA de maneira
semiconservativa, ou seja, cada uma das duas molculas filhas tem uma fita da molcula
me e outra recm sintetizada. A replicao ocorre bidirecionalmente a partir de uma


15
(procariotos) ou vrias (eucariotos) origens. A replicao precisa (alta fidelidade), ou seja,
a maioria dos erros so corrigidos. Cabe a replicao o desafio maior de perpetuar, com alta
fidelidade, um genoma e ao mesmo tempo permitir erros que originam a variabilidade
necessria para a evoluo.
A origem de replicao uma regio do DNA que contm uma seqncia de bases
especfica. Nas bactrias s existe uma destas seqncias. A rigor, a replicao completa
do cromossomo de uma bactria depende da iniciao nesta seqncia. Neste caso, dito
que as bactrias tm apenas um replicon. Replicon a unidade de DNA no qual a
replicao ocorre a partir de uma origem. J os eucariotos, por terem genomas bem maiores
que as bactrias e mais de um cromossomo, tm vrias origens de replicao. Nas
leveduras (ex: Saccharomyces cerevisiae) existem pelo menos umas 500 origens de
replicao, denominadas de ARS (Autonomously Replicating Sequences); ou seja, 500
replicons. Na Drosophila melanogaster existem cerca de 3.500 replicons. J na Vicia faba
estima-se a presena de pelo menos 35.000 replicons. As origens de replicao dos
eucariotos so ativados em diferentes tempos durante o perodo de replicao do ciclo
celular (fase S da mitose). Estas origens de replicao esto espaadas em mdia de 50 a
100 kb. A velocidade de replicao em Escherichia coli, a bactria residente no intestino de
todas as pessoas, chega alcanar 50.000 bases por minuto. Nos eucariotos, o movimento
do garfo de replicao pelo menos 10 vezes mais lento.
Os vrus apresentam um modo de replicao especfico denominado de crculo
rolando (rolling circle). Uma vez iniciada a replicao, o genoma circular vai sendo replicado
indefinidamente. Posteriormente uma enzima produzida pelo prprio genoma viral, corta a
longa cadeia produzida em partes iguais, cada uma contendo uma cpia do genoma do
vrus, a ser subseqentemente encapsulada.
Mais de 20 enzimas atuam diretamente no processo de replicao das bactrias. As
principais protenas envolvidas e sua funo na replicao so apresentadas abaixo:
toposisomerases - desenovelam o DNA
helicases - separam as duas fitas
Single strand binding proteins (SSB) - protegem o DNA na forma de fita simples
Primase - adiciona os primers ou iniciadores
DNA polimerase III - polimeriza, i.., adiciona os dNTP no sentido 5'-3'
DNA polimerase I - substitui os iniciadores de RNA por bases do DNA; tambm tem
a funo de reparo
ligase - une os dNTP de dois fragmentos.

Nos procariotos, alm destas duas polimerases, existe uma terceira, a DNA
polimerase II, cuja funo ainda desconhecida. Das trs, somente a DNA Pol I apresenta
a funo de edio ou seja, de correo dos possveis erros de replicao. A DNA Pol I
formada por vrias sub-unidades. O agrupamento de algumas delas forma o que se
conhece por fragmento Klenow, utilizado para replicao do DNA in vitro. Este fragmento
no tem a habilidade de edio como a enzima completa, pode ser comprado de vrios
fornecedores e usado em laboratrios. A DNA Pol III formada por sete sub-unidades ou
polipetdeos.
Nos eucariotos tambm existem trs polimerases. Duas delas atuam no ncleo,
sendo que a DNA Pol teria a mesma funo que a DNA pol III dos procariotos. A DNA
Pol teria a funo de reparo. A terceira polimerase (DNA Pol ) especfica para a
replicao do genoma das mitocndrias.


16
A replicao dos genomas dos retrovrus, que so codificados por RNA, feita pela
transcritpase reversa (RT), o que pode produzir inmeros variantes. O conhecimento da
natureza molecular destes vrus permite a criao de estratgias para combat-los.
Molculas ribozimas de RNA foram engenheiradas e podem ser introduzidas nos
hospedeiros para procurar e destruir o genoma do HIV, cortando-os em dois.
O avano no conhecimento cientfico sobre a replicao foi de fundamental
importncia no desenvolvimento da reao da polimerizao em cadeia (PCR), uma das
tcnicas moleculares mais utilizadas no momento.

3-TRANSCRIO (Transcription)
Transcrio o processo pelo qual uma regio do DNA transcrita resultando num
RNA. Existem dois grandes grupos de RNAs: (i) os RNA mensageiros (mRNA), aqueles que
sero decodificados pelos ribossomos e contm informaes para a produo de uma
protena e (ii) o outro grupo de RNAs, formado pela transcrio de determinadas regies
genmicas e que permanecem como RNA para executar uma funo especfica. Entre eles
esto o transportador (tRNA), o ribossomal (rRNA) que juntamente com protenas forma os
ribossomos e outros RNAs (snRNA, hnRNA, etc.) com funo na regulao gnica ou
desconhecida. A regio (segmento) do DNA transcrita a parte estrutural do gene.
A transcrio nos procariotos feita pela RNA polimerase. Numa E. coli podem
existir at 3.000 cpias dela. Esta enzima usa o DNA como molde e sintetiza uma cadeia de
nucleotdeos de RNA complementar ao molde. Aparentemente no h conferncia do
produto transcrito. Se no DNA esto A, C, G e T, vai aparecer no mRNA U, G, C e A,
respectivamente. A exemplo da replicao, a transcrio ocorre na direo 5'-3'.
Seis peptdeos ou sub-unidades fazem parte da RNA pol ('
2
). A rigor o fator
tem a habilidade de reconhecer o promotor, que a regio 5', situada imediatamente
anterior ao incio da parte codificadora (ou estrutural) do gene. Posteriormente, juntam-se ao
fator s os demais peptdeos quando ento a RNA Pol inicia o processo de transcrio.
Vrios fatores de transcrio (pequenos polipeptdeos), os TFs, atuam no incio, durante a
elongao e no trmino da transcrio.
O fator ( de fundamental importncia. Quando um vrus entra numa clula
hospedeira, um fator ( do vrus transcrito e agora os outros cinco peptdeos da RNA Pol
ficam a disposio do fator ( do vrus, que reconhece to somente os genes do vrus. Desta
forma, em pouco tempo os vrus conseguem expressar seus genes no hospedeiro e se
replicando a uma velocidade impressionante, atingem milhes de cpias. Afetam
drasticamente o organismo hospedeiro porque tambm reprimem a produo de protenas
deste.
O promotor das bactrias formado por duas seqncias localizadas nas posies -
10 e -35 (regio 5') da base codificante +1 do gene. Nestas regies, normalmente so
encontradas as seqncias (consenso) TATAAT (denominada de TATA box ou Pribnow
box) e TTGACA (CAAT box), respectivamente. Nos eucariotos, a regio regulatria dos
genes bem mais complexa. Em alguns casos, podem ser encontrados vrios elementos
que controlam ou afetam a transcrio. Entre eles esto o promotor, o enhancer e
elementos como o GLE, o MRE, etc. Os enhancers so seqncias de DNA que esto muito
distantes dos genes e so compostas de seqncias muitas vezes repetidas. Os elementos
so sequncias de DNA, que so alvos de ligao para protenas especificas, que
constituem o que se chama de fatores de transcrio (TF). Os fatores de transcrio podem
aumentar dramaticamente a taxa de transcrio de um gene nos organismos eucariotos.
Alm do promotor, outras regies podem acelerar a taxa de transcrio como os enhancers
e os terminadores. Os terminadores so seqncias que a RNA Pol identifica como o fim
da regio de DNA codificadora ou de um gene.


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Existem algumas diferenas entre eucariotos e procariotos com relao a
transcrio. Em primeiro lugar existem trs RNA polimerases ao invs de uma. A RNA Pol I
s transcreve o rDNA (sequncia de DNA que codifica o rRNA). A RNA pol II transcreve os
genes que codificam para protenas, produzindo ento mRNAs. Os demais RNAs (tRNA,
snRNA e a 5 S rRNA) so transcritos pelo RNA pol III. Nos procariotos, os ribossomos
identificam os mRNAs porque estes apresentam uma seqncia denominada de Shine-
Dalgarno que includa antes das bases codificadoras, complementar a uma regio do
componente 16 S rRNA. Por sua vez os mRNAs dos eucariotos apresentam uma estrutura
denominada de quepe (Cap) resultante de uma ligao 5'-5' entre duas guaninas ou entre G
e A. Aps a transcrio, ao mRNA adicionado uma longa cauda de adeninas, o que se
convencionou denominar de poli-A. Esta caracterstica dos eucariotos permite a separao
dos mRNAs dos demais RNAs, o que normalmente pode ser feito em laboratrio. Nos
procariotos, a cauda de adenina bem reduzida. Uma quarta diferena entre procariotos e
eucariotos relaciona-se com o processamento do pr-mRNA nas clulas eucariotas. Nestas,
aps a transcrio, so removidos os introns do pr-mRNA. S ento, este RNA se desloca
para o citoplasma e recebe a denominao de mRNA.

4-TRADUO (Translation)
Traduo o processo de decodificao do mRNA nos ribossomos resultando na
formao de um peptdeo. Na maioria dos casos as protenas so formadas por apenas um
peptdeo. Para a produo de um peptdeo in vitro so necessrios o mRNA, os ribossomos,
os tRNAs, os amino cidos, fatores da traduo e energia.
Os ribossomos dos procariotos so formados por duas sub-unidades: a grande,
chamada de 50 S, constituda por dois rRNAs, o 23 S rRNA e o 5 S rRNA, e por 34
protenas; a pequena, chamada de 30 S, constituda pela unidade 16 S rRNA e por 21
protenas. Dependendo da fase, uma bactria pode ter aproximadamente 5.000 ribossomos,
o que representa 25% da massa celular.
Os tRNAs so os RNAs transportadores, tambm chamados de adaptadores, que
transportam os amino cidos do meio at os ribossomos para serem incorporados cadeia
peptdica. Uma enzima, encarregada de carregar o amino cido especfico na extremidade
3'OH do tRNA, com base no seu anticodon. Existem mais de 20 tRNAs, pois na maioria dos
casos, mais de um codon codifica para um mesmo amino cido.
O processo de traduo (5'-3') inicia quando a sub-unidade pequena do ribossomo
reconhece a seqncia lder do mRNA. Em seguida o primeiro codon (um conjunto de 3
bases) lido e geralmente codifica para metionina. Um tRNA traz o amino cido
correspondente ao codon lido. Sucessivamente os codons vo sendo lidos e os amino
cidos correspondentes incorporados ao peptdeo nascente pela enzima peptidil
transferase. A velocidade da traduo chega a 40 amino cidos por segundo. Qualquer um
dos codons de terminao UAG, UAA ou UGA, significa o fim do peptdeo, cuja
interpretao feita pelos ribossomos. Nos procariotos, algumas mensagens so
policistrnicas.
Nos procariotos a traduo simultnea transcrio. Mais ainda, um mesmo
mRNA pode ser traduzido por dezenas de ribossomos enfileirados, o que resulta num
nmero elevado de cpias repetidas de uma protena a partir de uma nica molcula
mensageira.
O cdigo gentico est estruturado em codons (trincas), cada um com trs bases. A
probabilidade de associar trs bases independentemente da ordem e natureza de 64. Trs
codons so de terminao. Os outros 61 codificam os 20 amino cidos. Consequentemente,
um mesmo amino cido pode ser codificado por mais de um codon. As principais
caractersticas do cdigo gentico so:


18
- estruturado em trinca de bases
- no h sobreposio (uma base pertence a um e somente um codon)
- universal (refora a teoria da origem nica da vida); somente poucas diferenas com o
cdigo gentico das mitocndrias
- degenerativo (mais de um codon codificam para um mesmo amino cido)
- o primeiro codon (das protenas) AUG ou GUG
- h diferena ou preferncia de uso de diferentes codons de um mesmo amino cido
- a hiptese de Wobble permite a no ocorrncia dos 61 tRNAs.

O conhecimento do funcionamento desta fbrica permitiu a compreenso da ao dos
antibiticos e o desenvolvimento de remdios para vrias doenas. Geralmente os
antibiticos se ligam ao rRNA ou s protenas dos ribossomos, impedindo ou a leitura do
mRNA, ou o emparelhamento do tRNA com o ribossomo ou impedindo outra atividade nos
ribossomos. Como os ribossomos dos procariotos so diferentes dos eucariotos, um
antibitico pode afetar o funcionamento da sub-unidade pequena (30 S) de uma bactria,
sem contudo interferir no ribossomo da clula eucariota hospedeira, cujas sub-unidades tem
rRNAs de diferentes tamanhos e seqncia.

Tabela 2. Cdigo gentico do RNA mensageiro.
Primeira
base
Segunda
base
Terceira
base
U C A G
UUU - Phe UCU - Ser UAU - Tyr UGU Cys U
U UUC - Phe UCC - Ser UAC - Tyr UGC Cys C
UUA - Leu UCA - Ser UAA Stop UGA Stop A
UUG - Leu UCG - Ser UAG - Stop UGG Trp G
CUU - Leu CCU - Pro CAU - His CGU - Arg U
C CUC - Leu CCC - Pro CAC - His CGC - Arg C
CUA - Leu CCA - Pro CAA Gln CGA - Arg A
CUG - Leu CCG - Pro CAG Gln CGG - Arg G
AUU - Ile ACU - Thr AAU Asn AGU - Ser U
A AUC - Ile ACC - Thr AAC Asn AGC - Ser C
AUA - Ile ACA - Thr AAA Lys AGA - Arg A
AUG - Met ACG - Thr AAG Lys AGG - Arg G
GUU - Val GCU - Ala GAU Asp GGU - Gly U
G GUC - Val GCC - Ala GAC - Asp GGC - Gly C
GUA - Val GCA - Ala GAA Glu GGA - Gly A
GUG - Val GCG - Ala GAG Glu GGG - Gly G



19

5-MUTAO E REPARO
Mutao uma modificao no DNA. Mutante o fentipo resultante da mutao.
As mutaes so causadas por erros de replicao do DNA e alteraes do DNA por
deleo, duplicao ou rearranjamentos causados por vrus, transposons, ao enzimtica
ou processos fsicos e qumicos. A taxa mdia de mutao que ocorre naturalmente atinge
1x10
-7
. Agentes qumicos e fsicos (radiaes) so utilizados em laboratrio para aumentar
esta taxa.
Uma mutao dita silenciosa quando o codon alterado, mas no muda o amino
cido codificado e consequentemente, a cadeia peptdica. Ela neutra quando, mesmo
alterando o amino cido, a protena permanece com a mesma funo. Aqui surge o conceito
de polimorfismo a nvel molecular: diferentes gentipos com o mesmo ou diferentes
fentipos. A mutao com o efeito mais crtico aquela que provoca a insero ou remoo
de uma base (frameship). Como conseqncia, todos os codons localizados aps a
mutao ficam alterados, ou seja, a cadeia se torna diferente do padro anterior. Mutaes
ocorrem naturalmente. As mutaes mais comuns so aquelas de ponto, onde apenas uma
base alterada. Outras mutaes com profundas implicaes no fentipo so aquelas
decorrentes de delees, adies, inverses e transposies.
preciso salientar que o prprio DNA tem mecanismos de produzir mutaes em si
mesmo, independentemente do ambiente. Um deles atravs dos elementos mveis
existentes no genoma: os transposons. Transposons so seqncias de DNA que se
movem (pulam) de um lugar para outro no genoma. A transposio deixa duplicadas as
bases imediatamente prximas desta seqncia (entre 5 e 9), alm de causar interrupes
de outros genes quando neles se inserirem. Outras vezes, o transposon se duplica e a nova
cpia se insere num outro ponto do genoma. Apesar de no serem ainda bem conhecidos,
sabe-se que em alguns casos os transposons carregam genes de resistncia a antibiticos.
Como eles afetam a evoluo, devem ter outras funes celulares ainda no descobertas.
Uma deles poderia ser o controle do estresse celular. No entanto, eles tm sido tratados
como 'genes egostas' porque eles s conseguem se replicar quando dentro do
cromossomo, garantindo a sua prpria permanncia no genoma. Nos procariotos, os vrus
podem se integrar ao genoma do hospedeiro, podendo causar duplicaes ou delees. Ou
seja, existem causas naturais de produo de mutaes, responsveis pela propulso da
evoluo.
O nmero de mutaes que ocorre num organismo relativamente muito grande.
Entretanto, os seres vivos dispem de vrios sistemas de reparo, que corrigem a maioria
dos erros ocorridos. Outros erros, quando no corrigidos, podem causar enormes problemas
tanto na sobrevivncia como na reproduo do organismo. Neste caso atua a seleo
natural, ou eliminado este indivduo ou fazendo com que ele deixe um menor nmero de
descendentes. O acmulo de mutaes em diferentes populaes pode provocar, a longo
prazo (prazo em termos de evoluo), a diminuio da freqncia de cruzamentos com o
conseqente incio da especiao, processo que pode culminar com a origem de uma nova
espcie.
Ao nvel de laboratrio, os agentes qumicos mais utilizados para induzir mutaes
so: etil metil sulfanato (EMS), cido nitroso, etil metano e alguns agrotxicos ou defensivos.
A ao dos agentes qumicos normalmente produz alterao de uma base qualquer.
Exemplo: substituio de A por T. Muitos vegetais contm substncias que causam
mutaes na espcie humana. Ex: nas frutas e legumes so encontradas as psoralenas (o
limo contm quantidades elevadas), que tambm dimerizam duas timinas, se ocorrem lado
a lado. Entre os agentes fsicos, os mais usados so as radiaes (UV, gama, etc.). Os
agentes fsicos geralmente causam quebras e rearranjos de cromossomos. Especificamente
a radiao UV causa a dimerizao de duas timinas se estiverem lado a lado. Durante a
replicao, a DNA Pol no consegue ler este dmero, o que provoca a insero de duas


20
bases quaisquer no lugar das timinas, se no houver reparo. Muitos problemas de pele so
causados pela radiao UV. por isto que existe tanta preocupao com a diminuio da
camada de oznio, pois este atua como uma barreira aos raios UV.
A mutagnese direcionada permite a alterao de uma ou mais bases de uma
seqncia de DNA qualquer. Inicialmente a seqncia de interesse inserida num vetor,
como o vrus M13 que de fita simples. Posteriormente feito um primer (iniciador) num
sintetizador de oligonucleotdeos. Este primer complementar a um certo segmento da
seqncia de interesse, mas contendo uma base diferente. Posteriormente, o restante da
molcula duplicado. Resultado: a nova seqncia difere da original por uma base apenas.
Esta seqncia pode ser avaliada in vitro ou in vivo. Pela tcnica da recombinao
homloga, esta seqncia mutante pode substituir a seqncia normal de um organismo.
Desta forma, avaliado o efeito de uma mutao in vivo.
Foi desenvolvido por Ames, um teste para avaliar a capacidade mutagnica dos
produtos qumicos utilizados, com base no tipo de mutao que os produtos provocam. Tais
produtos qumicos so classificados quanto ao potencial de causar danos nas pessoas,
dependendo do tipo de mutao e a freqncia que so causadas. Este teste associa a
capacidade de ao mutagnica com a capacidade de causar cncer, pois estas duas esto
estreitamente relacionadas. Outros tipos de testes tambm so utilizados para confirmar a
periculosidade do produto. Com base nestes testes, a fabricao e a comercializao de
muitos produtos qumicos j foram proibidas.

6-METILAO
Uma frao das citosinas no DNA de muitos organismos torna-se metilada (5
m
C)
aps a replicao. Esta metilao no tem distribuio ao acaso. Algumas seqncias
como as denominadas ilhas de CpG em animais, so raramente ou no metiladas.
Enquanto algumas seqncias so metiladas em certas condies, como aquelas herdadas
da me e no do pai, outras so sempre metiladas em todos os tecidos.
Nas plantas e fungos as ilhas CpG so freqentemente metiladas pelas metilases,
embora h evidncia de uma substancial quantidade delas no metiladas. Em fungos, a
metilao atinge 1,5% das Citosinas e no ocorre somente de forma simtrica.
Tanto o controle da metilao quanto sua funo nos eucariotos, ainda no so
suficientemente compreendidos. A metilao tem sido correlacionada com reduo na
atividade gnica, havendo evidncias de inibio da expresso de vrios genes. Em ratos, a
reduo da metilao do DNA em 70%, resultante da mutao no gene metiltransferase do
DNA, leva a morte os indivduos na embriognese. A hiptese levantada admite que as
regies com bases metiladas dificilmente so transcritas. Neste caso, a morte dos ratos
poderia ter sido provocada pela falta de protenas e/ou RNAs. A metilao tambm
requerida para o comportamento normal dos cromossomos em Neurospora crassa. Sua
necessidade foi comprovada, mas sua funo ainda no est totalmente esclarecida.

7-REGULAO GNICA
Na definio de Jacob e Monod (1961), gene uma seqncia de DNA que codifica
para um produto difusvel. A regio regulatria do gene uma seqncia de DNA que no
convertida em outra forma (como a regio codificadora) e que s funciona in situ. Alm
disso, existem genes estruturais e genes reguladores de outros genes.
O princpio bsico da regulao gnica a interao entre protenas regulatrias e
certas regies (seqncias) do DNA. Assim, nos procariotos a regulao gnica chamada
de negativa se um gene no se expressa caso o repressor, que uma protena, liga-se ao
DNA na regio do promotor do gene (Figura 6). Para que o gene possa ser transcrito, h a


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necessidade de remover a protena repressora. Isto possvel, pela presena do indutor,
para o qual a protena repressora tem muito mais afinidade que pela regio do DNA
responsvel pela regulao do gene. O indutor ento tem um efeito inativador sobre o
repressor. Este tipo de regulao gnica o mais comum nos genes de organismos
procariotos. No controle dito positivo, o mais frequente nos eucariotos, o gene ativado
pela presena de um ativador. Em outras palavras, no controle negativo, a interao
protena-DNA desliga o gene, enquanto no controle positivo, a interao liga o gene.
O controle negativo bastante comum nas bactrias, onde a maioria dos genes
estaria ligada (on) at que os repressores os desligariam (off). J o sistema positivo mais
comum nos eucariotos, onde os genes estariam desligados at que os ativadores os
ligariam.











A rigor, existem cinco pontos de controle na regulao de um gene eucarioto: 1) na
ativao de gene estrutural, 2) no incio da transcrio, 3) no processamento da transcrio,
4) no transporte para o citoplasma e 5) na traduo do mRNA. Na ativao de um gene
estrutural, um gene regulado por uma seqncia no promotor e/ou no enhancer, as quais
so reconhecidas por protenas especficas. Esta protena funciona como um fator de
transcrio necessrio para o incio da transcrio atravs da RNA Pol. Protena ativa s
disponvel sob condies quando o gene para ser expresso. In vitro possvel modular a
regulao nos diversos pontos de controle. In vivo, a adio de determinados genes
permitem o controle de um ou mais pontos de controle.
Nos eucariotos ainda no se conhece profundamente a regulao gnica. Entretanto,
vrios mecanismos j foram amplamente estudados. Em primeiro lugar, um grande nmero
de genes so ativados em determinados tecidos e rgos e no em outros. Os genes
denominados de Homeobox so os responsveis por este controle. J nas primeiras
divises celulares do zigoto formado, os genes Homeobox se encarregam de marcar quais
os genes que podero e quais os genes que no podero ser expressos num determinado
tecido ou rgo. Outros genes dependem de um complexo sistema de eventos: sinal
ambiental (temperatura, umidade, etc.) faz com que uma substncia seja produzida e/ou
movida para as clulas. Este sinal qumico seria recebido por um receptor na clula, cujo
complexo tem habilidade para penetrar no ncleo da clula e ativar um conjunto de genes
de forma coordenada.


Figura 6: Modelo de funcionamento do operon lac em bactrias. O repressor impede a
transcrio dos genes Z, Y e A, que ativada na presena de -galactosdio.


22
PARTE 2 - MARCADORES GENTICOS
1-INTRODUO
Marcador gentico uma caracterstica que capaz de detectar diferenas entre
dois ou mais indivduos ou organismos. Entre suas propriedades um marcador gentico
deve:
(i) ser capaz de diferenciar os progenitores e
(ii) ser reproduzido com preciso na prognie.

Do ponto de vista molecular, um marcador gentico (ou loco marcador) serve para identificar
um local ou uma regio de um cromossomo. Um marcador gentico ideal deve apresentar
uma srie de atributos:
(i) alto nvel de polimorfismo
(ii) estabilidade em diferentes ambientes
(iii) detectar grande nmero de locos no ligados
(iv) herana simples

Entretanto, a simplicidade e os baixos custos do mtodo so fatores determinantes no uso
de forma rotineira de um marcador molecular. Aqui ser apresentada uma descrio
resumida dos principais tipos de marcadores genticos bem como suas principais
aplicaes no melhoramento de plantas.
Todo e qualquer fentipo molecular proveniente de um gene expresso, como no caso de
isoenzimas , ou de um segmento especfico de DNA (correspondendo a regies expressas
ou no do genoma) chamado de marcador molecular.

2-MARCADORES MORFOLGICOS
At os meados da dcada de 60, os marcadores utilizados em estudos de gentica e
melhoramento eram controlados por genes associados a caracteres morfolgicos, Em geral,
caractersticas fenotpicas de variao discreta so utilizadas como marcadores
morfolgicos desde os tempos de Mendel, como fentipos de fcil identificao visual
(Ex.: nanismo, deficincia cloroftica, cor de ptala ou morfologia foliar). Um nmero varivel
de marcadores morfolgicos existe para as diferentes espcies de plantas, contudo
insuficientes para mapeamento gentico ou outras aplicaes. Alm disso, esses
marcadores freqentemente so afetados pela ao gnica de dominncia, efeito
ambiental, pleiotropia e epistasia. O reduzido nmero e a natureza dos marcadores
morfolgicos restringiram os estudos dos caracteres quantitativos (QTs) s espcies onde
havia sido alcanada uma caracterizao gentica substancial. Sax (1923) verificou em
feijo que as diferenas nas mdias do peso de gros estavam associadas a cor das
sementes. Foi a primeira tentativa de caracterizao individual dos locos (QTL) envolvidos
na expresso de um carter quantitativo (QT) com auxlio de marcadores morfolgicos.
Marcadores morfolgicos apresentam a desvantagem de serem somente identificados em
sua maioria, na planta inteira ou adulta.





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3-MARCADOR DE PROTENAS DE SEMENTES
As protenas das sementes podem ser classificadas de acordo com a sua solubilidade em
quatro diferentes grupos. Numerosos mtodos tm sido utilizados in vitro para caracterizar
as protenas de sementes. Polipeptdeos variantes que apresentam distintos pesos
moleculares podem ser separados em gel de poliacrilamida atravs do processo de
eletroforese (ver Quadro 1). A eletroforese de duas dimenses (SDS-PAGE) tem habilidade
de separar protenas pelo ponto isoeltrico (carga) e pelo peso molecular (tamanho).
Diferentes variantes aparecem como distintas bandas num gel. Embora o nmero de
variantes de uma protena (polimorfismo) seja relativamente alto, o nmero de protenas de
sementes que podem ser analisados baixo. Apesar da base gentica complexa
(normalmente so famlias de genes) a interpretao relativamente simples (Observar foto
abaixo, Guimares et al. 2002).


QUADRO 1: ELETROFORESE
O termo eletroforese foi criado por Michaelis em 1909, para descrever migrao de
colides sob a influncia de um campo eltrico. Seu princpio simples: molculas de
carga negativa migram para o plo positivo, e molculas com carga positiva migram para
o plo negativo.
A eletroforese visa a separao de molculas em funo de suas cargas eltricas,
de seus pesos moleculares e de suas conformaes, em suportes porosos (gis) e
solues - tampes (estabilizam o pH do meio e permitem o fluxo de corrente eltrica).
Ou seja, na prtica a eletroforese consiste da extrao de amostras, seja de protenas,
RNA ou DNA obtido de um tecido e da migrao destas num gel (amido, agarose,
acrilamida) submetido a uma corrente eltrica contnua. O sentido e a velocidade de
migrao so determinados pelo tamanho e carga das protenas. Por exemplo,
quanto maior a carga eltrica de uma protena, mais rpido a sua migrao no gel em
direo ao eletrodo de carga contrria, como observado na figura 1.
A passagem de corrente eltrica atravs de uma soluo-tampo segue a Lei de Ohm:

V = R. I onde, V = voltagem
R= resistncia
I = amperagem

A eletroforese pode ser conduzida ora sob voltagem, ora sob amperagem (corrente) ou,
ento, wattagem (potncia) constantes reguladas pela fonte eltrica. bom observar
que para cada tipo de marcador a ser utilizado diferencia grandemente na corrente
eltrica a ser utilizada.
A eletroforese pode ser desenvolvida em suportes como papel-filtro, slica gel,
membranas de acetato de celulose e gis de agarose, de amido ou de poliacrilamida.
Para enzimas, gis de amido e poliacrilamida oferecem melhor separao do que outros
suportes. Para marcadores DNA os mais utilizados so gis de agarose e poliacrilamida.

Figura 2: Perfil eletrofortico
de protenas extradas pelo
calor em sementes de
cafeeiros nos estgios de
desenvolvimento verde (A),
verde-cana (B) e cereja (C),
com diferentes tratamentos de
secagem.


24

Quadro 1: Continuao
A B
Figura 2: Exemplos de aparatos de eletroforese. A) Cuba de eletroforese
horizontal submersa para gel de agarose. B) Cuba de eletroforese vertical
para gel de acrilamida.
Figura 1: Princpios gerais do sistema de eletroforese.


25
4-ISOENZIMAS
Na dcada de 1960, um novo tipo de marcador gentico foi desenvolvido: as isoenzimas,
ento denominados de marcadores bioqumicos. Isoenzimas foram definidas como
diferentes formas moleculares (variantes) de uma mesma enzima, apresentando
funo idntica ou similar, presente num mesmo indivduo (Markert & Moller, 1959). o
resultado da presena de mais de um gene codificando cada uma das enzimas.
As vantagens sobre os marcadores morfolgicos so a insensibilidade pleiotropria e
epistasia, alm de sua natureza co-dominante (possibilita a identificao de indivduos
homozigotos e heterozigotos). Desde a sua resoluo pelos mtodos histoqumicos, a
principal aplicao das isoenzimas nos estudos de diversidade gentica e evoluo,o que
tm sido extremamente importantes para as investigaes sobre variao intraespecfica,
gentica de populaes, tambm na evoluo e mapeamento gentico, j realizadas
em centenas de espcies. Apesar de estar sendo utilizada em vrios programas de
melhoramento, o reduzido nmero de sistemas enzimticos polimrficos impe limitaes
variveis dependendo do objetivo do estudo ou atividade.
Comumente muitas enzimas existem em mltiplas formas moleculares, mas
apresentando a mesma especificidade. O princpio bsico da tcnica reside no uso de
eletroforese em gel de amido ou poliacrilamida e na visualizao do produto enzimtico por
mtodos histoqumicos (Hunter e Market, 1957). As distintas bandas observadas no gel,
representam diferentes formas moleculares que apresentam diferentes propriedades de
mobilidade eletrofortica. Subsequentemente, a posio de uma enzima no gel de amido
pode ser verificada pela sua atividade que detectada por um sistema de revelao
colorimtrica. Este sistema inclui reagentes especficos para revelar uma determinada
enzima. A conseqncia o aparecimento de uma ou mais bandas no gel. Portanto, as
distintas formas de uma mesma enzima, as isoenzimas, codificadas por diferentes
alelos, podem ser detectadas em diferentes regies do gel, caso apresentem
diferentes mobilidades eletroforticas. Com esta tcnica o estudo da variabilidade
gentica de populaes de uma dada espcie ser baseada na variao observada nas
isoenzimas. Cada banda revelada no gel se constitui num marcador gentico, j que
por marcador gentico entende-se a constituio genotpica de um loco num determinado
indivduo. As isoenzimas comearam a ser utilizadas como marcadores genticos somente
a partir de 1966 (Lewontin & Hubby, 1966).

4.1-Vantagens das isoenzimas em relao aos marcadores morfolgicos:
a) determinao genotpica dos locos em qualquer parte da planta,
b) ocorrncia de um nmero razovel de alelos,
c) ausncia de efeitos deletrios associados com alelos isoenzmicos,
d) herana Mendeliana simples com codominncia entre alelos na maioria dos locos,
e) ausncia de efeitos epistticos, pleiotrpicos e ambientais.

4.2-Aplicabilidade das isoenzimas:
A propriedade mais expressiva a base gentica simples envolvida na expresso destas
enzimas (Soltis & Soltis, 1989), o que torna a identificao de polimorfismos rpida e
simples (Brewer, 1970).
A maioria das enzimas j reveladas em gel de amido tem mais de uma isoenzima. Como
conseqncia, uma grande quantidade de sistemas isoenzimticos so potencialmente
informativos.


26
A eletroforese de enzimas tem proporcionado dados teis na abordagem de questes
importantes em sistemtica e evoluo de plantas (Crawford, 1989; Doebley, 1989). Do
ponto de vista da variao intraespecfica, as isoenzimas tm contribudo para o estudo da
organizao da variabilidade gentica e a identificao de raas (Singh et al., 1991a;
1991b).
Alm da caracterizao da diversidade gentica de populaes naturais e gentipos
cultivados, as isoenzimas tm sido utilizadas com bastante freqncia em outros estudos.
Ligao gentica entre sistemas enzimticos ou destes com outros locos tem aumentado a
resoluo de mapas genticos em vrias espcies como Capsicum annuum, Cicer
arientinum, Lens culinaris, Phaseolus acutifolius e Pisum sativum (Tanksley, 1984; Gauer &
Slinkard, 1990; Havey & Muehlbauer, 1989; Garvin et al., 1989; Weeden, 1985). As
isoenzimas tambm tm sido utilizadas na identificao de genes que controlam
caracteres quantitativos em feijo, milho, soja e tomate (Koenig & Gepts, 1989; Graef,
1989; Kahler & Wehrhahn, 1986; Tanksley et al., 1982; Weller et al., 1988).

4.3-Base gentica dos marcadores isoenzimticos
A premissa bsica de se utilizar dados enzimticos que diferenas na mobilidade de
isoenzimas em um campo eltrico so resultantes de diferenas nas seqncias de DNA
que codificam tais enzimas. Assim, se os padres de bandas de dois indivduos diferem,
assume-se que estas diferenas possuem base gentica e sejam herdveis. O controle
gentico de isoenzimas ocorre atravs de vrios genes, que podem ser alelos de um mesmo
loco, ou estar situados em diferentes locos.
Isoenzimas codificadas por genes allicos so tambm chamados de aloenzimas. A
expresso das isoenzimas co-dominante, isto , em um indivduo diplide ambos os alelos
de um loco so expresso e visualizados, ou seja, discrimina o heterozigoto do homozigoto.

5-RFLPs (Restriction Fragment Length Polymorphism)
As variaes nos nucleotdeos do DNA devido mutao, deleo, insero e
inverso, podem ser detectadas se ocorrerem num stio de corte das enzimas de restrio.
Se o DNA de plantas diferindo num ou vrios desses nucleotdeos forem expostos a essas
enzimas, fragmentos de diferentes tamanhos, portanto polimrficos, so gerados e podem
ser identificados e clonados. Tais fragmentos so denominados de RFLPs ('Restriction
Fragment Length Polymorphims'; polimrfismo no comprimento de fragmentos restrio) e
foram desenvolvidos por Botstein et al. (1980). Os polimorfismos de comprimento de
fragmentos de restrio ou polimorfismo de tamanho de fragmento so locos no DNA que
podem ser identificados e mapeados. Os RFLPs tm sido suficientemente numerosos na
maioria dos cruzamentos e tm permitido uma cobertura adequada do genoma,
proporcionando a construo de densos mapas genticos de ligao, que possibilitam a
realizao de anlises genticas e moleculares e vrias aplicaes no melhoramento de
plantas, como clonagem de genes e mapeamento de QTLs (Nodari et al., 1993). O elevado
custo e o tempo necessrio na gerao destes marcadores restringem drasticamente seu
uso de forma freqente, principalmente em pases como o Brasil.
A obteno de RFLPs envolve vrias etapas. Em primeiro lugar preciso extrair e
purificar o DNA de um indivduo. Aps, este DNA deve ser digerido (cortado) por enzimas
de restrio (ER) que so capazes de reconhecer um pequena seqncia de pares de
bases (pb) e ento cortar o DNA neste stio de reconhecimento ou clivagem. Entretanto, a
maioria das plantas contm mais de um bilho de pb. Como conseqncia, a digesto do
DNA de uma planta com apenas uma ER produz milhares de fragmentos que variam em
comprimento de acordo com a distribuio dos stios de clivagem. Tal quantidade
impossibilita a anlise de todos de uma s vez.


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A terceira etapa do processo consiste em separar esta mistura de fragmentos de diferentes
comprimentos pela eletroforese em gel de agarose. A migrao dos fragmentos de DNA
num gel dependente do seu tamanho, migrando mais rapidamente, os menores.
Subseqentemente, os fragmentos de DNA na condio de fita simples (aps tratamento
com hidrxido de sdio), so transferidos para uma membrana de nylon ou celulose
(carregada positivamente), tcnica que denominada de Southern blot, e que proporciona
um suporte slido para o DNA que passa a ser imobilizado neste suporte. Agora possvel
analisar individualmente cada um destes fragmentos.
A prxima etapa do RFLP a hibridizao do DNA destas plantas j imobilizados
em membranas com uma sonda radioativa de DNA (que pode ser um fragmento de DNA da
prpria planta, um clone) complementar ao fragmento de interesse. Para que haja
hibridizao, h a necessidade que pelo menos parte da sonda seja complementar ao
fragmento de interesse. Existem outras alternativas de marcao de sondas que no a
radioativa.
A ltima etapa, a autoradiografia, consiste da exposio da membrana hibridizada
com a sonda radioativa a um filme de Raio X, que queimado somente onde houve as
hibridizaes. A sonda sendo radioativa, emite radiao que pode ser detectada por filmes
de Raio X. J que a sonda s hibridiza com fragmentos complementares, a preciso
elevadssima. Portanto, as cpias nicas (genes) normalmente aparecem uma vez s no
genoma, e, portanto apenas uma banda pode ser detectada nos indivduos homozigotos.
Assim, a associao enzima de restrio e sonda identificam um loco RFLP, que tem
herana mendeliana.
Admitindo-se que duas plantas diferem em um stio de reconhecimento,
apresentaro fragmentos de diferentes comprimentos, com relao a uma sonda
complementar. Tais fragmentos localizam-se em diferentes posies na membrana.
Consequentemente apresentaro bandas ocupando diferentes posies no filme, indicando
a existncia do polimorfismo ao nvel de DNA, portanto genotpico. Os fragmentos de
diferentes tamanhos so denominados de alelos, e apresentam herana mendeliana. A
principal caracterstica da tcnica do RFLP a sua habilidade em detectar tais diferenas.
As seqncias genmicas de duas plantas de uma mesma espcie so muito
parecidas. Entretanto, as plantas sofrem freqentes alteraes ao nvel de DNA: mutaes
simples, rearranjamentos e recombinao; as quais podem ocasionalmente alterar a
seqncia ou substituir bases nitrogenadas em um ou mais stios de reconhecimento de
uma determinada ER. Numa populao, estas variaes podem ocorrer numa planta e no
em outra. Tais diferenas (que normalmente so denominadas de variao gentica)
produzem fragmentos de DNA de diferentes tamanhos (polimorfismo de comprimento de
fragmento) quando o DNA exposto a estas enzimas.
Para o desenvolvimento das sondas, o DNA de uma planta precisa ser digerido por
uma ER ou quebrado mecanicamente e os fragmentos inseridos em um vetor (geralmente
plasmdeo), uma espcie de carregador. Este plasmdeo recombinante pode ser amplificado
ilimitadamente, aps sua incluso numa bactria ou mesmo in vitro. A denominao de
sonda ocorre quando uma certa quantidade amplificada deste DNA marcada com
radioistopos, ou ligada a reagentes que posteriormente podem ser coloridos, portanto
identificveis. As sondas desta forma so utilizadas para detectar seqncias
complementares a elas.
Os RFLPs mais informativos so aqueles cuja seqncia ocorre somente uma vez no
genoma, denominados de cpia nica. Desta forma, os RFLPs so especficos. Como as
isoenzimas, os RFLPs nucleares exibem codominncia. Pleiotropia e epistasia que afetam a
resoluo dos marcadores morfolgicos, no tm o menor efeito sobre os RFLPs. Alm
disso, os RFLPs apresentam alta estabilidade. O DNA a ser analisado pode ser extrado de
qualquer parte da planta. Outra caracterstica fundamental a de que a herdabilidade deste
tipo de marcadores virtualmente 1. Isto possibilita a realizao da seleo indireta, cuja


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teoria foi desenvolvida h bastante tempo, mas sua implementao no existiu por falta de
marcadores com as caractersticas dos RFLPs. Por sua segura informao genotpica e
ocorrncia em grande nmero, estes marcadores possibilitam o desenvolvimento de mapas
genticos de ligao altamente saturados. Estes so a ferramenta bsica para estudos de
gentica, evoluo e melhoramento de plantas.

6-MINISSATLITES
Os minissatlites ou locos VNTR ('Variable Number of Tandem Repeats') so regies
dispersas no genoma que contm um nmero varivel de seqncias repetidas e
enfileiradas (tandem) de DNA que tm um ncleo comum de 10 a 15 pares de bases
(Jeffreys et al., 1985). Podem ser analisados tanto atravs de RFLPs ou PCR (reao em
cadeia da polimerase, Quadro 2). Muitos dos minissatlites so altamente polimrficos,
produzindo um grande nmero de bandas. Por estarem espalhadas por todo o genoma e
apresentarem um nmero varivel de repeties em diferentes indivduos em relao a uma
mesma regio cromossmica (loco), os minissatlites simultaneamente proporcionam um
conjunto de marcadores genticos que se constitui no que tem sido denominado de
impresses digitais de DNA, conseqentemente, indivduo-especficos.



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QUADRO 2: A REAO EM CADEIA DA POLIMERASE (PCR)
Esta reao foi concebida em 1983 por Kary Mullis (Prmio Nobel em 1993), publicada em
1985, mas utilizada de forma rotineira a partir de 1988 (Saiki et al., 1988). Esse mtodo
tem a habilidade de amplificar um fragmento de DNA, normalmente de at 4000pb, mas
em condies especiais de at 30 kb). Para amplificar, o primer (ou iniciador) utilizado,
que um oligonucleotdeo de aproximadamente 10 nucleotdeos, precisa anelar com
seqncias complementares e invertidas com relao s duas fitas que foram previamente
separadas pelo aumento da temperatura (92-94C). O anelamento entre os primers e as
seqncias complementares efetuado a uma temperatura de 35 a 50C. Uma Taq DNA
polimerase estende (ou sintetiza) as cadeias originadas pelos primers, cuja temperatura
tima de catlise de 72C.
Existem mquinas programveis de PCR, os termocicladores, capazes de
modificar a temperatura rapidamente. Na realidade cada ciclo da PCR composto de trs
etapas: a separao das fitas (92-94C), o anelamento do primers com o DNA (35 a
50C) e a extenso ou polimerizao da cadeia (72C). Os tempos utilizados em cada
fase so aproximadamente de 1 min, 1 min e 2 min, respectivamente. A rigor, uma vez
atingida as temperaturas de cada fase, so necessrios poucos segundos para que a
reao ocorra. E as mquinas de PCR tm a capacidade de alterar a temperatura de
forma rpida e repetir o ciclo tantas vezes quantas ordenadas. O nmero de fragmentos
amplificados duplica a cada ciclo. Sucessivos ciclos de separao, anelamento e de
sntese produzem milhes de fragmentos virtualmente idnticos, em apenas algumas
horas. Os produtos da PCR podem ser facilmente visualizados num gel de agarose. Esta
visualizao possvel com auxlio do brometo de etila, que quando presente no gel se
interpe entre as duas fitas do DNA e se torna avermelhado com absoro da luz
ultravioleta.
A tcnica da PCR tem dezenas de aplicaes. A amplificao de fragmento(s) a
partir de primers arbitrrios (sequncia de bases completamente casualizadas) foi
denominada de RAPD. Em plantas, os RAPDs tm facilitado a realizao de estudos em
gentica e melhoramento, at ento, considerados inexequveis com as tcnicas
tradicionais. Uma diferena entre duas plantas ao nvel de DNA que ocorra na regio de
anelamento do primer identificada pela ausncia da referida banda em uma delas e
presena da banda na outra. No caso de indivduos heterozigotos, estes produzem as
mesmas bandas que os homozigotos. De fato, os marcadores RAPDs so dominantes.
Combinando DNA de plantas segregantes com uma grande quantidade de sondas,
possvel a identificao de dezenas, centenas e mesmo milhares de RFLPs e/ou
RAPDs. Quanto mais prximas as diferenas no DNA, maior ser o grau de co-
segregao entre elas. A anlise da segregao destes alelos permite o estabelecimento
da relao da ordem e da distncia entre eles nos cromossomos, o que pode ser
visualizado num mapa gentico de ligao.



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7-RAPDs (Randomly Amplified Polymorphic DNA)
Na dcada de 80, surgiu um novo tipo de marcador molecular denominado de RAPDs
('Randomly Amplified Polymorphic DNA'; DNA polimrfico amplificado ao acaso; Welsh &
McClelland, 1990; Williams et al., 1990). O uso da reao da polimerizao em cadeia
(PCR) proporciona a amplificao de um segmento de DNA, delimitado por dois iniciadores
(ou primers), comumente com 10 pares de bases, que so complementares a dois stios de
nucleotdeos: um em cada fita do DNA, posicionados inversamente a uma distncia
geralmente no superior a 4kb. Os produtos resultantes da amplificao podem ser
visualizados como bandas em gis de agarose ou poliacrilamida. Diferenas ao nvel do
DNA so inferidas pela presena ou ausncia de um determinado fragmento amplificado
(banda no gel). Em relao aos RFLPs, os RAPDs so mais baratos, requerem pouco
tempo e no necessitam de radioistopos. Nos ltimos anos, alguns mapas desenvolvidos
com RFLPs e isoenzimas, se tornaram altamente saturados com RAPDs, como em soja,
tomate, milho, feijo, ervilha, amendoim, Arabidopsis e em muitas outras espcies
domesticadas ou no. Outros mapas foram desenvolvidos somente com marcadores
RAPDs.



Quadro 2: continuao
Na rea da sade, a tcnica da PCR est sendo utilizada intensamente
(Vosberg, 1989). Uma das aplicaes na diagnose de doenas causada por vrus
como Hepatite, AIDS, etc. Nestes casos, utilizam-se os primers que anelam a
regies especficas do DNA do vrus causador da doena. Portanto, primers com
sequncia conhecida e pr-estabelecida. Se houver amplificao de uma banda a
partir do DNA de uma pessoa, porque existe DNA do vrus nas clulas humanas.
Este diagnstico, rpido e confivel, j est sendo feito em vrias cidades brasileiras.
Existe um esforo integrado entre a Secretaria da Sade e a UFSC no
desenvolvimento deste sistema aqui em Florianpolis.
O mais fascinante, entretanto, a amplificao de DNA de espcies extintas
fossilizadas ou conservadas na forma de mmia, o que denominado de DNA
ancestral (ancient DNA). Atualmente possvel amplificar segmentos de DNA
extrado de ossos e outros tecidos macios, o que tem permitido conhecer seqncias
de DNA de vrios mamferos fsseis. Outra maneira de conhecer o DNA dos fsseis
ou espcies extintas seria a de decodificar o DNA extrado de insetos sugadores,
embebidos em amber a milhes de anos atrs. Amber a designao dada resina
solidificada de rvores antigas e tem a capacidade de proteo contra gua e o ar.
Tais insetos podem carregar nas estruturas que usam para sugar ou no aparelho
digestivo, o sangue de animais. Estas descobertas auxiliaram a realizao do filme
Jurassic Park.
Em maio de 1995, do interior de uma abelha envolta de amber e que teria
vivido h 20-25 milhes de anos atrs, foi isolada uma bactria que est se
reproduzindo normalmente e de cujo DNA, foram amplificados vrios fragmentos via
PCR. A sequncia destes fragmentos mostrou grande similaridade com o DNA da
bactria Bacillus.


31












O princpio dos RAPDs est igualmente baseado na identificao de diferenas ao
nvel do DNA. Entretanto a metodologia totalmente diferente daquela dos RFLPs e
minissatlites e se baseia na PCR. Uma desvantagem dos RAPDs sua natureza
dominante (incapacidade de discriminar entre homozigotos e heterozigotos). As bandas
observadas no gel aps a eletroforese so codificadas como presentes ou ausentes em
cada indivduo.

8-MICROSSATLITES
Entre as diversas seqncias repetidas em tandem, algumas so simples, formadas por um
ou poucos nucleotdeos. Tais repeties curtas em tandem so denominadas de
microssatlites. Microssatlites, tambm chamados STR ('Short Tandem Repeat'), SSRP
('Simple Sequence Repeat Polymorphisms') ou STMS ('Sequence Tagged Microsatellite
Sites') so sequncias repetidas de um, dois, trs ou quatro nucleotdeos e que esto
espalhadas pelo genoma de um indivduo. So altamente polimrficos em plantas, animais e
microorganismos. Em plantas seria mais fcil utilizar microssatlites GA (ou CT) e GT (ou
CA), pois os AT, embora freqentes, causam problemas. Assim, cada regio genmica que
contenha um determinado nmero de repeties de uma destas sequncias constitui-se
num loco gentico, altamente varivel entre indivduos e multiallico, portanto, altamente
informativo (Ferreira e Grattapaglia, 1995).
Comparativamente aos RFLPs, os microssatlites proporcionam 3 a 4 vezes mais
polimorfismo ou informao. Entretanto, para o uso rotineiro dos microssatlites, h a
necessidade de primeiro amplificar uma regio, posteriormente sequenci-la e em terceiro
lugar, sintetizar os iniciadores especficos para cada loco. Uma vez feito isto, o loco
marcador pode ser utilizado indefinidamente naquela espcie. Desta forma, existe um custo
elevado e trabalho no incio, mas o custo subsequente baixo e a simplicidade a posteriori,
muito grande. O mapeamento gentico e a caracterizao varietal para fins de proteo e
de germoplasma para fins de conservao de vrias espcies est sendo feito com o uso
dos marcadores microssatlites. Seu uso est associado principalmente caracterizao
varietal para fins de proteo e de conservao germoplasma. O alto polimosfismo e a
natureza co-dominante dos marcadores microssatlites permitem sua utilizao em estudos
de gentica populacional e evoluo de espcies selvagens, como na caracterizao de
estrutura gentica intra-populacional (Stefenon et al., 2008a) e reconstruo da histria
demogrfica (Stefenon et al., 2008b) do pinheiro brasileiro.

Figura 3: Padro de bandas polimrficas (indicadas por setas) e
monomrficas de marcador RAPD em Araucaria angustifolia. As
bandas so separadas em gel de agarose e visualizadas sob luz
ultra-violeta aps colorao com brometo de etdeo. (Fonte: Stefenon
et al., 2004).


32
















9-AFLPs (Amplified Fragment Length Polymorphism)
Os polimorfismos de comprimento de fragmentos amplificados (AFLPs; Zabeau,
1993) resultante do uso combinado de enzimas de restrio e da reao da polimerizao
em cadeia. Suas principais caractersticas so a alta especificidade e resoluo e poder de
amostragem. Nos protocolos dos AFLPs constam pelo menos sete etapas importantes: 1)
digesto do DNA, 2) ligao dos adaptadores, 3) primeira amplificao, 4) segunda
amplificao, 5) preparo do gel, 6) a corrida do gel e 7) o processamento do gel.
O DNA e digerido por duas enzimas de restrio, uma que corta stios de seis pares
de base (geralmente a EcoRI) e a outra que corta seqncias de 4 pares de bases
(geralmente a MseI). Este processo de clivagem gera milhes de fragmentos de distintos
tamanhos. O DNA utilizado deve ser de alta qualidade. De preferncia utilizar um protocolo
ou etapa que inclua fenol. A qualidade do DNA a base de todo o processo.
O processo de ligao dos adaptadores envolve o uso de ligases que permite que
os fragmentos de DNA que foram cortados se liguem a pequenos oligonucleotdeos de DNA
de seqncia conhecida.
Subseqentemente feita a primeira amplificao, que consiste na amplificao
dos fragmentos agora ligados aos adaptadores atravs da reao da polimerizao em
cadeia com o uso de iniciadores, complementares aos adaptadores com uma extra base a
mais na extremidade 3. Isto importante, pois somente 25% dos fragmentos sero
amplificados (aqueles com a base complementar ao nucleotdeo final da extremidade 3 do
iniciador), caso contrrio todos os fragmentos cortados seriam amplificados e a resoluo no
gel seria virtualmente impossvel. Neste ponto do protocolo importante verificar se a
reao foi bem feita. Para tanto deve-se rodar um gel com parte da reao de amplificao.
Dependendo do resultado se continua ou no o processo.
A segunda amplificao feita com uma pequena amostra da primeira
amplificao. Neste caso so utilizados iniciadores que so compostos de todas as bases
dos primers da primeira amplificao, mais duas a trs bases na extremidade 3,
dependendo do nvel de polimorfismo da espcie ou da populao. Caso isto no seja
conhecido, h a necessidade de experimentar diferentes combinaes de iniciadores. Para
Figura 4: Esquema geral da amplificao e visualizao de marcadores microssatlites.


33
os laboratrios que usam radioistopos, neste quarto passo tambm feita
simultaneamente a marcao radioativa dos produtos da PCR, para posterior deteco em
filme de raio X. Na realidade se marca s um dos iniciadores porque o sinal suficiente para
deteco.
O preparo do gel (geralmente de poli-acrilamida) uma etapa delicada. A completa
limpeza do material, o tipo de molduras, a maneira de colocar as solues nos moldes, etc.,
afetam a qualidade do gel. Qualquer defeito no gel pode causar a perda de reao
completa. Existem diferentes aparatos para corrida. Nos diferentes laboratrios, h
diferentes equipamentos. Todos com suas vantagens e desvantagens.
A corrida do gel envolve o carregamento e a corrida propriamente dita. O
carregamento das amostras um passo crucial. Os cuidados vo desde a limpeza das
cavidades no gel, o uso adequado das pipetas, a preciso na liberao das amostras e o
acompanhamento na fase inicial da corrida. Como o gel submetido a alta voltagem, h a
necessidade de acompanhar a temperatura que no pode ultrapassar a 55C, sob pena de
desnaturar o sistema.
A fase final consiste no processamento do gel. Existem basicamente trs formas de
visualizao das bandas. A primeira delas com nitrato de prata. A segunda envolve a
utilizao de radioistopos e a terceira utiliza terminaes coloridas. De maneira geral, a
maioria dos laboratrios usa o fsforo
y-33
P radioativo, por vrios motivos. Em primeiro lugar,
a nitidez dos gis bastante alta com radioatividade. Em segundo lugar, o filme um
documento importante. O uso dos radioistopos gamas como o
33
P possibilita o seu
manuseio sem grandes riscos para as pessoas, uma vez que este tipo de radiao no vai
alm de alguns centmetros. Outra vantagem deste radioistopo que a sua meia vida
maior que a do
32
P. A principal desvantagem que o aparecimento de sinal no filme requer
um tempo maior que os outros istopos. Entretanto, j existem cmaras intensificadoras de
sinal, mas cujo preo muito alto. A outra maneira consiste na utilizao de kits comerciais
com terminadores coloridos (dyes) e utilizar sequenciadores automticos. Desta forma,
evita-se a radioatividade. A ltima forma de visualizar as bandas atravs da colorao do
gel de poli-acrilamida com nitrato de prata. Entre as principais vantagens esto a ausncia
de radioatividade e o baixo custo. Entretanto, a resoluo no to boa quanto os outros
dois mtodos. Empresas qumicas j esto anunciando o desenvolvimento de dyes para a
utilizao direta em gis. Desta forma, por colorimetria ser possvel visualizar bandas, no
futuro, diretamente no gel sem qualquer outro tratamento. Contudo, no sabe-se ainda o
preo que custaro tais kits.
A reao de digesto do DNA permite a obteno de fragmentos grandes, pequenos
e uma combinao de grandes de pequenos, respectivamente. Com isto, um grande nmero
de fragmentos podem ser amplificados e resolvidos num s gel. Desta forma, esta estratgia
permite que sejam analisadas num nico gel o maior nmero de marcadores
comparativamente s outras metodologias. Embora robusto e de alta reproducibilidade, os
marcadores AFLPs so dominantes no se distinguindo heterozigotos de um dos
homozigotos. As principais restries deste grupo de marcadores referem-se a necessidade
do uso de radioistopos, da alta qualidade do DNA e da proteo por patente desta
tecnologia.
Marcadores AFLP tm sido utilizados na construo de mapas genticos, estudos de
filogenia (Stefenon et al., 2006), gentica populacional (Stefenon et al., 2007) e identificao
de variao somaclonal em clones de plantas micropropagadas (Steinmacher et al., 2007).






34






















10-SCARs (Sequence characterized amplified RAPD)
As etapas principais no desenvolvimento de um SCAR so: 1) identificao de um
iniciador que confere polimorfismo a dois bulks de DNA com fentipos contrastantes, 2) o
isolamento e a clonagem do fragmento amplificado em um vetor (plasmideo), 3)
sequenciamento do fragmento isolado, 4) desenho dos iniciadores de tamanho maior que os
decmeros e 5) o teste final (Paran e Michelmore, 1993).
Para a identificao de um iniciador que confere polimorfismo a dois bulks
contrastantes, necessrio a extrao de DNA de plantas da gerao F
2
. Posteriormente,
estas plantas F
2
ou a sua prognie (F
2:3
) so testadas com relao a uma caracterstica,
resistncia a uma raa de uma doena por exemplo. Desta forma, as plantas F
2
so
agrupadas em duas classes fenotpicas ou alternativamente se for utilizado as plantas F
2:3

em trs classes fenotpicas. Misturando-se quantidades equimolares de DNA de seis plantas
de mesmo fentipo (ex: resistncia), pode-se dizer que os seis gentipos tm uma
seqncia de DNA em comum, que em relao ao gene que confere o referido fentipo e
talvez um conjunto adicional de pares de bases. Da mesma forma se constri o outro bulk,
com base no fentipo contrastante (susceptibilidade). Desta forma, os dois bulks s so
diferentes, genotipicamente com relao a caracterstica analisada. Testando iniciadores
que amplificam seqncias arbitrrias de DNA, por pura chance, possvel encontrar
iniciadores de 10 pares de bases (decmeros) capazes de amplificar o DNA de um bulk e
no o do outro. Quando se testa este iniciador em todos os DNAs das demais plantas F
2
e a
seqncia realmente est ligada, ou seja quando todas (ou a maioria) das plantas
Figura 5: Etapas da gerao de marcadores AFLP.


35
resistentes apresentam a banda e todas ou uma minoria das plantas susceptveis no
apresentam a banda, conclui-se que o segmento amplificado est ligado ao gene de
interesse. Pela quantidade de recombinao entre o local do anelamento do iniciador e o
fentipo das plantas pode-se estimar a distncia entre o marcador e o gene de interesse. O
Ideal que o marcador deve estar o mais prximo possvel do gene, para que possa ser
utilizado como critrio de seleo.
O segundo passo o isolamento e a clonagem do fragmento amplificado em um
vetor, geralmente um plasmdeo. Posteriormente, os plasmdeos contendo os fragmentos de
DNA desejados so utilizados para transformar bactrias. Das colnias transformadas
preciso separar as que contm o fragmento daquelas que no contm o fragmento de DNA
desejado. Posteriormente deve se crescer as colnias selecionadas e extrair o DNA do
plasmdeo. Como o DNA vai para sequenciamento, h a necessidade de alta pureza.
Existem vrios mtodos e kits comerciais disponveis para clonar este fragmento. O melhor
seria a purificao com cloreto de csio, mas o mtodo trabalhoso. Aps a obteno do
DNA plasmidial, deve verificar se os plamdios contm o fragmento desejado. Ento digere-
se com uma enzima de restrio capaz de cortar o plamdio em stios que flanqueiam o
inserto. Corre-se um gel e verificam-se quais os plamdios com insertos.
O terceiro passo o sequenciamento do fragmento isolado. O sequenciamento
necessrio para se conhecer a seqncia do fragmento, ou seja, as bases que esto entre
os iniciadores. De posse da seqncia, se desenham os iniciadores (quarto passo) com
comprimento varivel entre 16 e 24 pares de bases. A idia de um iniciador mais comprido
surgiu de clculos feitos sobre o comprimento mnimo de um iniciador capaz de amplificar
uma seqncia nica num genoma da maioria das plantas. Desta forma, espera-se a
presena de uma nica banda com o uso dos referidos iniciadores. Existem critrios que so
levados em considerao no desenho de iniciadores: a incluso do decmero que originou a
banda, uma percentagem mnima de 50% de C e G, tamanho mnimo que proporciona uma
temperatura de anelamento maior que 56 C, a terminao em C ou G e a possibilidade de
formao de estrutura secundria (hairpin ou loopback). Existem programas de computador
que auxiliam a tomada de deciso, j que proporcionam valiosas informaes comparativas
a respeito de diferentes iniciadores que so gerados quando fornecido ao programa uma
determinada seqncia de bases.
Finalmente, de posse nos iniciadores, se fazem os testes incluindo-se tanto os bulks
como tambm um certo nmero de amostras da populao F
2
e de outras plantas da mesma
espcie.

11-SNPs (Single Nucleotide Polymorphism)
Diferenas em um nico nucleotdeo em um ponto particular do genoma so
chamadas polimorfismo de simples nucleotdeo (single nucleotide polymorphism ou SNP).
Esse tipo de polimorfismo ocorre aproximadamente uma vez a cada 1000 bases no genoma
humano. SNPs so detectados principalmente atravs do sequenciamento de fragmentos de
DNA. Nas quatro seqncias hipotticas abaixo existem dois SNPs, um na seqncia 3 e
outro na seqncia 4.

SEQNCIA CONCENSO: A C T T T G A C C A A A T T G

SEQNCIA 2: A C T T T G A C C A A A T T G
SEQNCIA 3: A C T T T G A C C C A A T T G
SEQNCIA 4: A C T T T G A G C A A A T T G




36
12-ANLISE COMPARATIVA
A escolha do marcador a ser utilizado depende de diversos fatores, como o tipo de
estudo, as facilidades laboratoriais e os custos envolvidos. As caractersticas mais
importantes a serem considerandas quando se comparam marcadores para um determinado
estudo so a capacidade multiplex (nmero de locos aplificados em uma nica reao), o
nmero de alelos por locos) e a proporo de locos polimrficos (Figura 6). A natureza
dominante ou co-dominante do marcador tambm crucial para alguns estudos (Tabela 3).





















13-APLICAES DOS MARCADORES MOLECULARES
Especificamente no melhoramento de plantas os marcadores moleculares tm
muitas aplicaes. Em primeiro lugar, o desenvolvimento de mapas de ligao, altamente
saturados com marcadores. Estes mapas servem de base para o mapeamento de outras
caractersticas de importncia agronmica, principalmente as de natureza quantitativa e
governadas por muitos genes. Desta forma possvel verificar as associaes (ligaes
genticas) entre os marcadores moleculares e os genes que afetam um carter quantitativo.
Quando isto est estabelecido, o critrio de seleo agora pode ser um ou vrios
marcadores (bandas) e no mais o fentipo, j que selecionando-se um marcador,
teoricamente seleciona-se os genes prximos a este. Assim possvel se fazer uma seleo
genotpica ao invs de seleo fenotpica, que muito menos eficiente. A seleo indireta
faz sentido mesmo para um carter qualitativo, quando este muito caro ou difcil para ser
avaliado, como o caso de resistncia a nematides ou produo de uma determinada
protena ou substncia de interesse industrial ou farmacolgico.
Figura 6: Comparao de tcnicas de marcadores moleculares quanto ao contedo informativo.
Foram considerados trs componentes que influenciam o contedo informativo mdio de cada
tcnica: o nmero de locos amostrados por ensaio (capacidade multiplex): o nmero de alelos
identificados por loco e a proporo de locos polimrficos observados em cada ensaio (SAT =
minissatlite)


37
Os marcadores moleculares ainda tm outras utilidades como a identificao de
germoplasma, a identificao de variedades, o controle de qualidade na produo de
sementes hbridas, a caracterizao gentica de populaes, o monitoramento nos
retrocruzamentos e auxlio na identificao e clonagem de genes, entre outras.

* Construo de mapas genticos - Em primeiro lugar o grande volume de
marcadores disponveis possibilita o desenvolvimento de densos mapas de ligao, uma
ferramenta tanto para pesquisa bsica quanto aplicada. Os marcadores de DNA segregam
em propores mendelianas e no interferem na segregao de outros genes. Quando em
grande quantidade segregando num cruzamento, possvel a construo de um mapa
gentico de ligao, cuja densidade depende da quantidade de marcadores. Mapas
genticos de alta densidade eram praticamente utopia numa fase anterior ao
desenvolvimento desses marcadores. Nos ltimos anos foram construdos mapas genticos
de ligao das principais espcies vegetais cultivadas, de animais domesticados e de
espcies utilizadas como modelo em laboratrio.
Alm de mapas, os marcadores facilitam o mapeamento de genes especficos. cDNA
uma molcula de DNA sintetizada a partir do mRNA. Portanto, o cDNA seria um gene
(DNA) sem os introns. Quando o cDNA obtido de um mRNA de um gene conhecido, sabe-
se a funo deste cDNA. O gene patatin foi mapeado numa extremidade do cromossomo 8
tanto em batata quanto em tomate (Ganal et al., 1991). Alm disso, uma outra regio
contendo apenas a parte regulatria desse mesmo gene, foi localizada no cromossomo 3.
Em tomate, as duas formas da enzima SOD, citoslica e cloroplstica, foram mapeadas nos
cromossomos 1 e 11 respectivamente (Perl-Treves et al., 1990).
* Caracterizao da variabilidade gentica - Entre 1966 e 1984 (18 anos) a
eletroforese foi utilizada em mais de 1000 espcies, para estudos de gentica e evoluo.
De maneira geral, foram avaliados em mdia de 23 locos em mais de 200 indivduos. Uma
vez caracterizado o germoplasma disponvel, o melhorista pode escolher genotipicamente
os progenitores para um cruzamento tanto com o objetivo de maximizar a segregao de
genes de importncia agronmica como restringir esta segregao a poucos genes. Alm da
escolha dos progenitores, ser possvel identificar os recombinantes desejados.
* Monitoramento - Monitorar a recuperao do genoma do pai doador nos
retrocruzamentos (intra e interespecficos) atravs de marcadores especficos pode diminuir
o tempo e a quantidade de trabalho necessrios para a introgresso de um ou poucos
genes. A avaliao genotpica atravs de marcadores moleculares de 120 linhagens BCF6
de tomate, provenientes do cruzamento entre L. pennellii e L. esculentum e retrocruzadas
para o L. esculentum, foi verificado que 21 delas cobrem 95% do genoma da espcie L.
pennellii.
* "Fingerprinting" - Fingerprinting ou a caracterizao gentica de um gentipo
outra aplicao dos marcadores moleculares. Isoladamente os mini ou microssatlites ou
em conjunto com outros marcadores moleculares, podem ser utilizados para caracterizar e
distinguir uma variedade de outra. Para a diferenciao varietal trs requisitos bsicos so
essenciais: 1) distino - diferentes gentipos devem apresentar distintos padres de
bandas; 2) uniformidade - o mesmo padro de bandas deve ser obtido se o procedimento
for repetido e 3) estabilidade - o padro de bandas no se altera mesmo que o gentipo for
cultivado em diferentes ambientes. Dependendo da legislao brasileira de proteo s
cultivares e regras de patenteamento a ser definida, as impresses digitais de DNA
('fingerprinting') podero ter grande utilidade.
* Mapeamento de QTLs - A maioria das caractersticas relacionadas com os
processos de crescimento em plantas dependem da expresso de muitos genes.
Historicamente, a biometria possibilitava a anlise em massa desses genes, sem a
caracterizao da contribuio individual de cada um dos componentes do sistema. Com o
advento dos mapas genticos de ligao, altamente saturados, foram criadas as condies


38
para o estudo individualizado dos QTL (Quantitative Trait Loci), pois tais mapas
proporcionam marcadores moleculares em todas as regies do genomas, em alguns casos
espaados apenas de menos de 2 cM.
Neste caso, a prognie oriunda do cruzamento entre plantas que diferem para um
QT (Quantitative trait), so agrupadas com base num marcador molecular e ento estimada
a mdia e varincia da caracterstica fenotpica das plantas de cada classe. Uma diferena
significativa entre as mdias das classes, indica a relao entre o marcador e a
caracterstica, mais especificamente, uma ligao entre o marcador de DNA e um dos alelos
que afeta este carter.
Vrios QTL relacionados com as caractersticas do fruto em tomate (Paterson et a.,
1988, 1991) e com as interaes entre bactria e feijo comum (Nodari et al., 1993). No
primeiro caso, foram identificados seis QTL afetando o tamanho do fruto e explicando 58%
da variao fenotpica do carter. Alguns desses QTLs demonstraram efeito sobre o carter
em dois ou mais ambientes e outros em apenas um s ambiente.
Cinco QTLs associados com a tolerncia a baixo teor de fsforo foram identificados
em milho com auxlio de um mapa de RFLP (Reiter et al., 1991). Todos os cinco QTLs
apresentaram efeitos apenas aditivos. Entretanto, uma interao entre dois QTLs foi
significativa. Alelos que contribuem para a tolerncia foram detectados em ambos os
progenitores.
O mapeamento de QTLs proporciona a identificao no s de alelos envolvidos na
expresso do carter, mas o que mais importante, as possveis interaes entre os QTLs,
proporcionado ao melhorista informaes que podem ser teis na escolha dos progenitores
para a realizao dos cruzamentos. Proporciona ainda condies para o desenvolvimento
de estoques genticos com diferentes composies genticas. Tais combinaes permitiro
a comprovao dos efeitos individuais dos QTLs, anteriormente estimados.
Existem programas que permitem determinar as distncias genticas entre
marcadores como o caso do Linkage-1 (Suiter et al., 1983) e outros que facilitam a
construo de mapas como o MAPMAKER (Lander et al., 1987).
* Seleo assistida por marcadores (MAS) - A prtica da seleo indireta para
caracteres de baixa herdabilidade poder ser intensamente explorada desde que os genes
de interesse estejam fortemente ligados a marcadores moleculares. A seleo indireta e
genotpica (marcador molecular como critrio de seleo), possibilita ainda a seleo de
alelos com efeitos positivos provenientes dos dois ou mais progenitores envolvidos na
gerao da populao segregante (Lande e Thompson, 1990). A ligao entre o alelo Aps1
da fosfatase cida e o gene Mi (distncia de 1cM) que codifica a resistncia ao nematide,
tem possibilitado a seleo de plantas de tomate resistentes em populaes segregantes
atravs da eletroforese desde 1974, quando foi iniciado por Charles Rick. O alelo Aps1 que
est ligado do gene Mi que causa resistncia ao nematide em L. esculentum foi transferido
do L. peruvianum atravs do sistema por retrocruzamento (mais de 30 retrocruzamentos
para o L. esculentum). Um segundo exemplo relaciona-se com a incorporao de trs genes
de resistncia ferrugem em feijo realizada por James Kelly, da Universidade de Michigan,
utilizando marcadores RAPDs, altamente ligados aos 3 principais genes de resistncia (Kelly
e Miklas, 1996).
O procedimento 'Bulked Segregant Analysis' (Michelmore et al., 1991) em
conjugao com a PCR uma alternativa eficiente de mapear genes especficos e
selecionar indiretamente gentipos desejados.
* Clonagem de genes - Em stimo lugar, os marcadores auxiliam na clonagem e
transferncia de genes de interesse agronmico. Entre os mais freqentemente citados
encontram-se os genes de resistncia a pragas e doenas. Entretanto, outros genes podem
causar profundo impacto nos produtos finais das plantas. Trata-se dos genes que podem


39
proporcionar s plantas o uso de rotas metablicas alternativas, resultando em produtos
novos ou modificados, em muitos casos de alto valor econmico.
Os genes j caracterizados pela gentica clssica, tm seu fentipo conhecido, mas
normalmente seu produto desconhecido. Um marcador de DNA que est prximo de um
desses genes, pode ser o ponto de partida para o sua identificao e clonagem. Uma das
alternativas pela tcnica denominada de 'caminhar no cromossomo (chromosome
walking). Esta tcnica compreende o isolamento de vrios clones com sobreposio parcial.
O marcador de DNA utilizado inicialmente como sonda para identificar um desses clones.
Pela sub-diviso desse clone identificado, possvel a identificao de um segundo clone,
adjacente ao primeiro, e similar a este na regio de sobreposio. Este segundo clone
ento utilizado como sonda para identificar um terceiro clone e assim por diante. Esta
'caminhada' pode eventualmente atingir o gene de interesse, que estaria contido num dos
clones.
Recentemente, vrios genes foram isolados com auxlio deste 'caminhar no
cromossomo'. Entretanto esta tcnica difcil, cara e demorada. Ainda apresenta alguns
problemas como seqncias repetidas de DNA que podem estar em um grande nmero de
clones, impossibilitando a 'caminhada' na direo exata do gene de interesse. O outro
problema, refere-se a grande distncia entre um marcador e o gene de interesse.
Recentes avanos como a possibilidade de clonar fragmentos de grande tamanho
(YAC; Yeast Artificial Chromosome) e de separar grandes molculas de DNA (PFGE; Pulse
Field Gel Electrophoresis) facilitaro a clonagem de um gene a partir de um marcador
molecular
* Estudos de crescimento e desenvolvimento das plantas - O crescimento e o
desenvolvimento das plantas esto sob o controle de muitos genes. Vrios desses genes j
foram identificados, inicialmente atravs da gentica clssica e mais recentemente com
auxlio da gentica molecular (Young, 1993). Exemplos: fitocromo e genes que afetam o
padro de cor das plantas. O gene Phs responsvel pela produo da faseolina como a
principal protena de reserva das sementes de feijo foi mapeado com auxlio de
marcadores moleculares (Nodari et al., 1993). O gene nts (nodulao tolerante ao nitrato) foi
mapeado com auxlio de marcadores moleculares numa populao F
2
(10cM).
* Modificaes na organizao do genoma - Existem amplas evidncias do
surgimento de variantes durante a regenerao a partir de cultura de tecidos. Variao
somaclonal que ocorre ao nvel do DNA, tanto nos stios de reconhecimento de uma
enzima de restrio ou na regio de anelamento de um primer podem ser detectadas via
RFLP, AFLP ou RAPD, respectivamente. Variao no nmero de cpias tambm pode ser
detectadas pela intensidade de hibridizao, via RFLP. Os RFLPs tambm tm potencial
para detectar variao fenotpica decorrente de alteraes no padro de metilao, j
verificado em milho (Phillips et al., 1991). Variao somaclonal em milho foi atribuda a
variao ocorrida ao nvel do DNA (Brown et al., 1991).
Alm disso, os marcadores moleculares so extremamente teis na diagnose de
doenas, sexo, oncogenes, etc. Neste caso, os marcadores com base na PCR so os mais
adequados, considerando-se rapidez, distino, custos e praticidade.
Tabela 3 - Anlise comparativa entre os marcadores moleculares

Atributos

Isoenzimas
Protenas
de sementes

RFLPs

RAPDs

Microssatlites

AFLPs
Nvel de Polimorfismo baixo alto baixo-alto baixo-alto muito alto muito alto
Estabilidade
ambiental
moderada alta alta alta alta alta
Nmero de locos moderado (<50) baixo (<10) alto alto alto alto
Expresso gentica co-dominate co-dominante co-dominante dominante co-dominante dominante
Nmero de alelos por
loco
2-5 multiallico multiallico 2 multiallico 2
Distribuio no
genoma
regies de cpia
nica
regies de cpia
nica
vrias ao acaso ao acaso ao acaso
Acessibilidade
tecnolgica
muito alta muito alta mdia muito alta muito baixa mdia
Aplicabilidade no
melhoramento
rpido,
baixo custo
rpido,
baixo custo
lento,
custo mdio
rpido, baixo
custo
lento, custo alto rpido, custo
baixo

Identificao de
gentipos
baixa baixa alta muito alta muito alta muito alta
Avaliao de
germoplasma
mdia baixa alta alta alta muito alta
Mapeamento
gentico
baixa muito baixa alta alta muito alta alta
Mapeamento de
regies especficas
baixa inadequado mdia muito alta mdia muito alta
Mapeamento
comparativo
baixa inadequado muito alta baixa alta baixa
Gentica de
Autgamas
baixa baixa mdia alta muito alta muito alta
Gentica de
Algamas
mdia baixa mdia alta muito alta muito alta
Anlise Filogentica mdia baixa muito alta mdia alta mdia
Adaptado de Gepts (1993) e Ferreira & Grattapaglia (1995).

41
PARTE 3 - ORGANISMOS GENETICAMENTE MODIFICADOS

1. INTRODUO
Organismos transgnicos (ou Organismos Geneticamente Modificados - OGM) so
organismos (plantas, animais ou microrganismos) que tm inserido em seu genoma, uma
sequncia de DNA manipulado em laboratrio por tcnicas moleculares ou biotecnolgicas. O
DNA inserido pode ser da mesma ou de outra espcie. Tais tcnicas, desenvolvidas nos
ltimos 20 anos, possibilitam o corte e a ligao de fragmentos de DNA de uma forma
altamente precisa. Particularmente, seqncias de DNA (genes) podem ser removidas de um
organismo, ligadas a seqncias regulatrias e inseridas em outros organismos. A fonte
destes genes pode ser qualquer organismo vivo (microorganismo, planta, animal) e o
organismo recipiente, nesse caso especfico, uma variedade de uma espcie de planta
cultivada.
As plantas, animais e microrganismos transgnicos possibilitam tanto (i) estudar
questes biolgicas fundamentais a nvel molecular como tambm (ii) materializar aplicaes
da biologia celular e molecular, como por exemplo o controle biolgico atravs de endotoxinas
modificadas ou a produo de vacinas comestveis.
A expresso engenharia gentica surgiu em 1973 quando molculas DNA de diferentes
espcies foram recombinadas in vitro. Basicamente, trata-se do uso de dois grupos de
enzimas: as de restrio (do tipo II) que so capazes de reconhecer uma pequena seqncia
de pares de bases e ento cortar o DNA neste stio de reconhecimento ou de corte e as
ligases, que so enzimas capazes de ligar dois fragmentos de DNA. O primeiro plasmdeo in
vitro (Cohen et al, 1973) foi construdo a partir do corte de DNA com enzimas de restrio e a
cola de fragmentos especficos com as ligases. Surge ento o que convencionou denominar
de tecnologia do DNA recombinante ou engenharia gentica. uma tentativa de se fazer in
vitro o que ocorre na natureza: a recombinao de fragmentos de DNA. Contudo, na natureza
dificilmente DNA de uma espcie pode ser cortado e ligado ao DNA de outra espcie.
A introduo de uma molcula de DNA recombinante numa planta se constitui na
transformao de plantas. Para tal, utiliza-se de um vetor para que a construo gentica feita
em laboratrio seja inserida no genoma da planta. As tcnicas de engenharia gentica
possibilitam a transferncia de genes por via no sexual.

2. TRANSFORMAO DE PLANTAS
A transformao de plantas consiste na introduo de um fragmento de cido nuclico
em um genoma. Existem duas estratgias para transformar plantas: direta e indireta. A
estratgia indireta aquela que utiliza um vetor como a Agrobacterium tumefaciens (o mtodo
mais usado para a obteno de plantas transgnicas) ou A. rhizogenes como veculo de
entrega do DNA planta. Mtodos qumicos e fsicos possibilitam a transformao direta de
genomas. Dentre eles destacam-se: biobalstica (ou acelerao de partculas), eletroporao,
microinjeo e mtodos qumicos (como polietilenoglicol) e fsicos.
Agrobacterium tumefaciens - Pertencente ao grupo das bactrias gram-negativas, tipo
bacilo aerbico, A. tumefaciens causa em algumas plantas uma doena chamada de galha-
da-coroa, uma espcie de tumor. Este tumor causado por genes bacterianos, que
naturalmente so transferidos pela bactria e inseridos no genoma nuclear da planta
hospedeira. O segmento de DNA transferido planta denominado de T-DNA, que faz parte
do plasmideo bacteriano, chamado de plamdeo Ti (tamanho varivel de 120 a 250 kb). O
processo de transferncia ocorre aps a infeco, que tem inicio aps a liberao de
determinados compostos pela planta. Imediatamente vrios genes da regio vir do plasmideo
so expressos, os causadores da virulncia, O T-DNA transferido est contido entre duas

42
sequncias terminais de 25 pares de bases, denominadas de extremidades esquerda e direita.
A extremidade direita imprescindvel para a transferncia. As demais sequncias que
naturalmente so transferidas s plantas no so necessrias ao processo em si de
transferncia. Desta forma, um plasmideo pode ser engenheirado, com a substituio de todas
as bases, exceo quelas que compem as extremidades, por genes de interesse. Assim, a
A. tumefaciens se encarrega de transferir e inserir no genoma nuclear das plantas uma
construo quimrica contendo genes de interesse. O mtodo bastante eficiente, entretanto,
esta bactria no consegue infectar um grande nmero de espcies vegetais, o que limita
bastante seu uso, como no caso das monocotiledoneas em geral. A primeira planta
transformada com Agrobacterium tumafasciens foi em 1983 e s 11 anos mais tarde, a
primeira variedade transgnica foi liberada para cultivo, o tomate longa vida (Flavr Savr).
A similaridade entre os mtodos diretos de transformao de plantas consiste na
capacidade de romper a parece celular e do envelope nuclear. Estes mtodos so mais
adequados do que os indiretos para transformao de plen, embrio e meristemas (Brasileiro
e Dusi, 1999). Sero descritos, agora, brevemente alguns mtodos.
Biobalistica ou acelerao de partculas - um mtodo que utiliza microprojteis em
alta velocidade envoltos por DNA, com objetivo de superar a parede celular pela fora, na
esperana que algumas molculas de DNA atinjam o ncleo e se integrem ao genoma
nuclear. Os microprojteis so constitudos principalmente de partculas esfricas de ouro ou
tungstnio, de 1 mm de dimetro. O DNA adere facilmente e fortemente a estas partculas,
pois tais metais so carregados positivamente. Geralmente os equipamentos utilizam o gs
hlio, eletricidade ou propulso a ar e alta presso na acelerao das partculas. Esta
estratgia empregada em plantas que normalmente no conseguem ser infectadas por A.
tumefaciens. Por utilizar a fora bruta para penetrar no ncleo da clula, esta estratgia pode
a rigor ser utilizada em qualquer tecido e planta. A obteno de uma planta transformada
depende da regenerao de uma clula transformada.
Eletroporao - Mtodo que consiste em submeter protoplastos misturaddos com DNA
a uma descarga eltrica controlada opor um curto espao de tempo. Esta descarga cria poros
na membrana nuclear, facilitando a entrada de DNA no ncleo. Nesta soluo de protoplastos,
que clulas sem a parece celular (ncleos com citoplasma) tambm esto presentes
plasmdeos contendo genes de interesse. Com a criao de poros pela descarga eltrica, um
ou mais plasmdeos podem penetrar no ncleo e se integrarem no genoma da clula. A
obteno de uma planta transformada tambm depende da regenerao de uma clula
transformada.
Qumicos Existem vrias substncias qumicas que facilitam a entrada no ncleo de
construes quimricas bem como a sua integrao no genoma de clulas de plantas. O
polietilenoglicol (PEG), um poliction, um dos mais utilizados, mas de baixa eficcia. O
PEG tambm utilizado conjuntamente com outras estratgias. Polivinil lcool (PVA) tambm
utilizado.
Lipossomas Neste mtodo o DNA envolto pelos lipossomas, que so vesculas
fosfolipdicas, que so misturadas com protoplastos previamente tratados com PEG. De
eficncia muito baixo, pouco utilizado.
Microinjeo - Tubos microcapilares (microsseringas) so utilizados para injetar o DNA
no ncleo das clulas, sem causar danos severos. Este mtodo mais comum em animais. O
uso de agulhas permite ultrapassar a parede celular e tambm o envelope nuclear. Outros
mtodos incluem o uso de fibras (de Silicon Carbide) ou laser, para perfurar a parece celular.
Neste processo, so misturados os plasmideos contendo os genes de interesse com fibras de
silicon carbide e as clulas a serem transformadas. Sob agitao, as fibras de silicon carbide
conseguem abrir poros nas clulas vegetais, o que permite a entrada de DNA.
Alternativamente, microrraios laser podem perfurar a parede celular.
Tambm a embebio de uma soluo de DNA com sementes e tubo polnico podem
levar a transformao de clulas.

43

2.1-CONCEITO DE OGM OU TRANSGNICO
A transformao gentica de plantas consiste na insero no seu genoma de uma ou
mais seqncias, geralmente isoladas de mais de uma espcie, especialmente arranjadas, de
forma a garantir a expresso gnica de um ou mais genes de interesse. Neste contexto, o
prefixo trans era plenamente justificado, pois exprimia a idia de alm de, neste caso,
significando o rompimento da barreira da espcie. Com o estabelecimento de normas gerais
de biossegurana que se comeou a utilizar a expresso Organismo Geneticamente
Modificado - OGM. Em tese, a expresso Organismo Geneticamente Modificado causa certa
confuso, porque alguns cientistas dizem que todos os organismos so geneticamente
modificados. Entretanto a Lei de Biossegruana no Brasil,define claramente o que so OGMs.
Quando se utiliza a transgenia, uma nova sequncia gnica introduzida, geralmente
geralmente no nativa daquela espcie. Em muitos casos, a sequncia inserida formada por
partes de diferentes genes de diferentes espcies ou sequncias semi-sintticas. O conjunto
destas seqncias chamada de quimera. Assim, a Soja RR transgnica resistente ao
Round-up, herbicida base de glifosato, contm material gentico de pelo menos quatro
diferentesorganismos: promotor do vrus-do-mosaico-da-couve-flor (CaMV), peptdeo sinal da
petnia, gene EPSPS da Agrobacterium CP4 e a sequncia 3 (NOS) da Agrobacterium
tumefasciens.
Do ponto de vista legal, no Brasil, OGM o organismo cujo material gentico
(ADN/ARN) tenha sido modificado por qualquer tcnica de engenharia gentica. A Lei 8.974,
de 5/01/95, definiu ainda engenharia gentica como a atividade de manipulao de molculas
ADN/ARN recombinantes. Pela legislao brasileira, ento, qualquer planta que tenha
seqncia(s) de DNA ou RNA engenheiradas (neste texto ADN e DNA sero utilizados como
sinnimos, assim como ARN e RNA), deve ser considerada OGM, e est, portanto, submetida
aos efeitos da referida lei, mesmo porque ela regulamenta os produtos obtidos pelo processo
do DNA recombinante. No presente trabalho, OGM ser utilizado como sinnimo de
transgnico, embora no haja concordncia absoluta a respeito desta sinonmia.
Desta forma, pode-se definir plantas transgnicas (ou OGM) como plantas que tm
inserido em seu genoma, uma ou mais seqncias de DNA manipulado em laboratrio por
tcnicas de DNA recombinante ou engenharia gentica. Alternativamente, plantas
transgnicas poderiam ser definidas como organismos que tiveram seu material gentico
alterado por mtodos que no aqueles naturais, considerando-se como mtodos naturais em
plantas o acasalamento sexual e a recombinao gentica.
A induo mutagnese era at ento outra maneira utilizada pelo homem para alterar
geneticamente uma planta. Neste caso, o gentipo do indivduo alterado tambm
diretamente in vivo. Um exemplo disto a exposio de sementes a agentes qumicos, como
o metil sulfonato, ou fsicos, como raios de cobalto ou X, na esperana que alguma
modificao ocorra no gentipo previamente escolhido. No sentido conceitual de modificao
in vivo, a transgenia equivaleria mutagnese, pois tambm provoca uma alterao gentica
num gentipo previamente escolhido. Tambm h similaridade entre ambas quanto
aleatoriedade no loco onde ocorrer a modificao, o que impossibilita, com o que se conhece
hoje, antecipar o que vai acontecer.
Contudo, existem vrias diferenas entre ambas. O processo, e em muitos casos, a
natureza da alterao deste dois mtodos so diferentes. Enquanto na mutagnese as
modificaes podem ser de substituio de uma base por outra, deleo ou duplicao de
uma ou mais bases e rearranjos diversos, na transgenia as seqncias introduzidas so, em
tese, previamente conhecidas e sero adicionadas, no todo ou em parte, ao genoma
previamente escolhido.
Esta diferena crucial, pois na tecnologia est embutida a possibilidade da aplicao
de leis de propriedade industrial que permite o patenteamento das seqncias engenheiradas,

44
bem como do processo de transgenia. Esta possibilidade baseia-se naquilo que adicionado,
uma vez que conhecido, engenheirado e patenteado. O mesmo no ocorreu com a tcnica
da mutagnese de plantas, embora uma cultivar desenvolvida com esta estratgia possa ser
protegida por leis de proteo intelectual. Mutaes proporcionaram, alm de um prmio
Nobel, concedido a Henry Muller, um defensor do determinismo gentico, avanos no
conhecimento gentico das espcies e algumas variedades para cultivo.
A mutagnese stio-dirigida, embora permitindo alterar uma seqncia, feita in vitro e
no in vivo, como a transgenia. Alm disso, a mutagnese stio-dirigida limitada em termos
de nmero de bases alteradas, comparativamente transgenia. Recentemente, uma outra
tcnica desenvolvida para terapia gentica na espcie humana, a quimeroplastia, foi adaptada
para plantas (Beetham et al., 1999; Zhu et al., 1999). Ela possibilita a substituio ou a adio
de uma base, em uma seqncia conhecida. Neste caso a diferena em relao transgenia
clssica a utilizao de oligonucleotdeos quimricos. Seu alcance, contudo, menor,
restringindo-se a alterar ou adicionar uma ou poucas bases.
Com o objetivo de confundir a opinio pblica, freqentemente dito por cientistas que
o homem vem produzindo transgnicos h milnios com a seleo artificial de plantas. Como
possvel perceber pela definio de OGM, ou transgnico, os agricultores que domesticaram
as plantas cultivadas ou os melhoristas no conseguiram alterar um gentipo in vivo.
Selecionavam sim, as novas combinaes (prognies), oriundas da recombinao gentica da
gerao anterior. preciso no esquecer que o processo evolutivo composto de foras que
criam ou amplificam a variabilidade gentica e outras que afetam o destino desta variao,
como bem destacou Charles Darwin, em sua obra A origem das espcies (1859). O efeito
conjunto das mutaes, aqui includas todas as modificaes de DNA em condies naturais,
e das recombinaes entre mutantes, promove o surgimento de uma ampla gama de
associaes allicas (Allard, 1960; Fehr, 1987), cujo destino ento dependente das diversas
foras evolutivas como seleo, migrao e deriva. Os primeiros agricultores selecionaram
estas novas associaes allicas que melhor se adaptavam a sua maneira de cultivar em
cada situao. Assim, no cabe aqui falar de transgenia, mas sim de processo evolutivo.

2.2-GENES MARCADORES E GENES REPRTERES PARA SELEO
Os genes marcadores so utilizados para possibilitar a discriminao entre clulas
transformadas e no transformadas, e conseqentemente a seleo das primeiras. Tais genes
so introduzidos para facilitar o trabalho de identificao das mesmas, pois so uma minoria
em relao ao total de clulas submetidas a transformao.
Os genes marcadores so geralmente genes de resistncia a antibiticos. Assim, no
momento da regenerao das plantas a partir de uma clula, a adio de antibitico ao meio,
permitir apenas o crescimento daquelas clulas transformadas que expresses a referida
protena.
Os genes marcadores (e suas respectivas protenas) mais utilizados so: gene neo,
isolado do transposon Tn5 de Escherichia coli, codifica para neomicina fosfotransferase
(NPTII), que confere resistncia a kanamicina, e o gene hpt, tambm isolado de Escherichia
coli, codifica para higromicina fosfotransferase (HPT).
Genes de resistncia a herbicidas tambm esto sendo utilizados; Dentre eles
destacam-se: gene bar, isolado de Streptomyces hygroscopicus, codifica para fosfinotricina
acetiltransferase (PAT) que induz a resistncia a herbicidas a base de fosfinotricina; gene
aroA, isolado de Salmonella typhimurium, que induz a resistncia a herbicidas a base de
glifosato e o gene csr1, que induz a resistncia a herbicidas a base de imidazolidonas e
sulfonilureas.
Genes reprteres codificam para protenas que so facilmente detectveis. Dentre os
genes reportes, os mais utilizados so: gene uidA, extrado de Escherichia coli, codifica para a
glucuronidase (GUS), detectada por mtodos histoqumicos; gene gfp, extrado da medusa

45
Aequorea victoria, codifica par a protena fluorescente verde (GFP); gene luc, isolado do
vagalume Photinus pyralis, codifica para a luciferase.

3-DIFERENAS ENTRE OS MTODOS DE MELHORAMENTO CONVENCIONAIS E
BIOTECNOLGICOS
Os agricultores, assim como os melhoristas, utilizam os princpios da diversidade
gentica quando fazem cruzamentos, e da segregao quando selecionam plantas ou animais
considerados superiores. O melhoramento gentico pode ser considerado uma forma de
biotecnologia, empregada h milnios para diversos propsitos, incluindo a introduo novas
variedades de plantas no ambiente. De fato, o melhoramento envolve a manipulao gentica,
mas no envolve as tcnicas da engenharia gentica conforme ficaram conhecidas desde
1973.
Por meio dos mtodos de melhoramento, agora tambm chamados de convencionais,
tradicionais ou clssicos, novas combinaes genticas so geradas por meio de cruzamentos
sexuais entre plantas que apresentam as caractersticas consideradas como desejadas.
Cruzamentos so feitos entre plantas da mesma espcie e, ocasionalmente, quando a
variao gentica desejada no existe dentro da espcie, alelos ou genes so transferidos ou
substitudos de outras espcies do mesmo gnero. Juntamente com os genes desejados,
outros segmentos de DNA do gentipo doador, podem tambm ser transferidos ou
substitudos e podem expressar caractersticas indesejveis. Desta forma, a amplitude do
estoque gentico (gene-pool) para o melhoramento determinada pela compatibilidade sexual
de uma espcie e espcies aparentadas. Tcnicas radicais como resgate de embrio e o
cultivo de embries tm contribudo para aumentar o gene-pool, mas de forma muito limitada.
Quando se utilizam mtodos de melhoramento, os cruzamentos sexuais possibilitam a
substituio de alelos via recombinao homloga e no a adio de uma quimera como na
transgenia.
Das metodologias utilizadas pelo melhoramento de plantas, a introgresso de genes,
feita por retrocruzamentos sucessivos do F
1
para o gentipo recorrente, a que mais se
assemelha transgenia, em termos de obteno de uma nova associao allica. Contudo,
existem muitas diferenas entre ambas, que esto explicitadas na Tabela 4.
Na transgenia, seqncias de DNA (genes) podem ser removidas de um organismo,
modificadas ou no, ligadas a outras seqncias, incluindo as regulatrias, e inseridas em
outros organismos. A fonte destes genes pode ser qualquer organismo vivo (microorganismo,
planta, animal) ou vrus.
Uma das principais implicaes da transgenia o rompimento da barreira sexual.
Desta forma, a transformao gentica possibilita uma alternativa de introduo de genes em
plantas. A rigor, isto implica que, teoricamente, qualquer gene, natural ou sinttico, pode ser
introduzido numa espcie vegetal. Assim, o pool gnico de uma espcie se torna
extraordinariamente grande. As oportunidades para o melhoramento aumentam
drasticamente, pois alm dos recombinantes produzidos naturalmente pela meiose, possvel
obter recombinantes no convencionais. Desta forma, problemas de difcil soluo ou mesmo
a expresso de caractersticas em outros organismos poderiam ser adequadamente
resolvidos.

Tabela 4. Comparao entre o mtodo do retrocruzamento e a transgenia.
Retrocruzamento Transgenia
Objetivo Alterar ou introduzir uma
caracterstica
Alterar ou introduzir uma
caracterstica
Natureza Substituio de alelos Introduo de seqncias novas
(quimera)

46
Tempo 3 a 6 anos Varivel
Tecnologia Simples Sofisticada
Pool gnico Limitado Ilimitado
Custo Baixo Elevado
Resultados Previsveis
Limitados
Imprevisveis
Ilimitados
Efeitos adversos Raros
Ex: alelos indesejveis
Freqentes
Ex.: genes marcadores, promotores
e outras seqncias
filogeneticamente bem distintas;
efeitos pleiotrpicos
Distribuio dos
benefcios
Instituies pblicas e privadas,
pequenos agricultores,
consumidores.
Grandes empresas, grandes
agricultores, melhoristas

Neste cenrio, e considerando-se o ponto de vista cientfico, duas limitaes
restringem o uso de genes via transgenia: a criatividade e o julgamento inadequado do valor
de um gene, desde que h disponibilidade de tecnologias de isolamento e transformao de
uma dada espcie. Esta ltima limitao refere-se a situaes em que o pesquisador no
consegue perceber ou no tem informaes sobre a utilidade de um gene num programa de
melhoramento de uma espcie.
Alm dessas limitaes, j esto sendo adicionadas outras, como: a real necessidade
de um determinado OGM (comparao com outras alternativas) e a magnitude das
implicaes que ele possa apresentar se cultivado e ou consumido em larga escala.
A transgenia introduz novos genes exticos e cria recombinaes no naturais cujas
localizaes no genoma do organismo so imprevisveis, ou seja, a tecnologia ainda no
permite o controle do local da insero. Isto pode resultar em efeitos imprevisveis no
metabolismo, fisiologia e bioqumica do organismo receptor. O relatrio do Governo da
Noruega, divulgado em 1999, denominado Too early maybe too late: ecological risks
associated with the use of naked DNA as a biological tool for research, production and therapy,
concluiu que qualquer OGM deve sofrer avaliao de impacto ambiental antes de ser liberado.
Este relatrio refuta a idia de que a transgenia em plantas similar ao melhoramento
gentico convencional (Traavik, 1999).
O desenvolvimento de OGMs pode ser denominado de Tecnologia? Tradicionalmente
uma tecnologia est associada com (i) previsibilidade, (ii) controle e (iii) reproducibilidade.
Contudo, o atual estgio das tecnologias utilizadas na obteno de OGMs podem ser
caracterizadas como (i) sem previsibilidade; (ii) sem controle dos stios alvos; (iii) sem controle
do destino do transgene ou partes dele; (iv) sem controle nas mudanas de expresso gnica;
(v) sem controle dos transgenes no ecossistema e (vi) de difcil reproducibilidade.
Ou seja, ainda no existe tecnologia disponvel para a insero da construo
quimrica num loco especfico do genoma da espcie recipiente. Um exemplo disto o fato de
que duas sequncias de DNA (72 e 250 pb) derivadas da transformao original foram
inesperadamente encontradas na Soja RR (The Scientist 14[15]:20, Jul. 24, 2000) Elas esto
separadas do transgene que condiciona a resistncia ao herbicida Roundup. "Isto demonstra
que a modificao gentica inerentemente imprevisvel. que seqncias. Tampouco os
resultados das transformaes so previsveis, sendo que algumas do o resultado esperado,
outras no. Tambm no possvel controlar a expresso gnica do gene inserido. Um
exemplo disco que diferentes variedades de milho com o mesmo gene de Bt produzem
diferentes quantidades de toxina nos diferentes rgos estudados e comparados. Outro
aspecto importante que no se consegue controlar o transgene inserido, uma vez que ele
pode se disseminar para outras espcies e causar poluio gentica, e como tal enormes e

47
irreparveis danos. Exemplo disto foi a contaminao de vrias plantaes de milho nos
Estados Unidos provocada pelo cultivo de uma variedade transgnica, StarLink, que causou
enormes prejuzos aos agricultores, aos consumidores e empresa.

4-OPORTUNIDADES
PLANTAS
Como aproximadamente 90% das calorias provem de plantas, no reino vegetal que
existe um grande potencial de oportunidades para as diversas biotecnologias, incluindo-se a
transgenia, especialmente na produo de alimentos e energia. Contudo, na rea da sade
so esperados investimentos financeiros elevados e o desenvolvimento de muitos produtos,
muitos deles, de aplicao praticamente pessoal.
O aumento da resistncia de plantas a pragas e molstias pela ao de produtos
naturais com auxlio da engenharia gentica a oportunidade importante. A maioria dos genes
inseridos em plantas inclui aqueles que conferem resistncia a insetos, fungos, vrus e
herbicidas. Outros genes controlando o teor de protenas e leos em plantas esto sendo
utilizados. A partir de 1994, foram identificados, clonados e sequenciados vrios genes de
resistncia a doenas. O conhecimento pleno destes genes possibilitar um melhor
entendimento de como ocorrem as reaes de resistncia ou susceptibilidade de plantas
fungos, bactrias e vrus, bem como desenhar estratgias apropriadas de melhoramento e
seleo de plantas resistentes.
Oportunidades agrcolas incluem ainda genes que conferem tolerncia a estresses
climticos (altas temperaturas e seca) e de solo (baixos teores de nutrientes e altos teores de
elementos txicos). Embora, no se saiba ao certo o mecanismo de tolerncia, novas
abordagens para a manipulao gentica visando a tolerncia aos estresses esto sendo
desenvolvidas.
Caractersticas relacionadas a reproduo das plantas tambm esto sendo alvo de
modificao. Assim, genes engenheirados de macho esterilidade para obteno de hbridos
ou de genes responsveis pela apomixia esto sendo introduzidos em plantas com o objetivo
de controlar a reproduo das mesmas.
Uma segunda rea de grande atividade da engenharia gentica relacionada com o
aumento do valor de certas espcies agrcolas pode ser alcanado atravs de modificaes
genticas que alteram a quantidade ou composio de compostos de reservas no proticos,
os quais podem substituir inclusive certos produtos derivados do petrleo.
O valor de muitas plantas de importncia econmica determinado pela presena de
compostos cuja concentrao no ultrapassa 1% do peso seco, como o caso dos compostos
usados como medicinais, pesticidas, fragrncias, corantes e aromatizantes. Na medida em
que os genes envolvidos na expresso destes compostos se tornam disponveis, novas
oportunidades surgem para aumentar ou modificar a produo destes compostos. Alm disso,
estima-se que mais de cem mil metablitos secundrios so produzidos pelas plantas;
entretanto, geralmente em baixas quantidades. A manipulao de genes de enzimas que
catalisam os principais passos da rota de produo ou dos fatores de transcrio, podem
aumentar a produo destes metablitos e tornar exequvel o cultivo de plantas transgnicas
com tal finalidade.
Agora existe a possibilidade de introduzir genes que modificam enzimas para produzir
amidos modificados. Vrios genes envolvidos na biosntese de amilose e amilopectina foram
clonados. Genes antisenso que reduzem a produo de amilose em batata foram clonados,
sugerindo que a produo deste composto manipulvel.
As plantas tambm podero se tornar fbricas de produtos ou substncias, j que, na
maioria dos pases, a produo de uma substncia em cultura de clulas ou em determinados
microrganimos tem inmeras restries. Exemplo disto so os testes em andamento para a

48
produo de produtos como o hormnio do crescimento humano em milho, vacinas,
anticoagulantes entre outros. Mas neste caso, o benefcio no chega ao agricultor.
Embora o uso de biofrmacos (frmacos produzidos biologicamente) um fenmeno
recente, diversas protenas teraputicas tm recebido ampla aceitao e esto sendo
rotineiramente utilizadas. Exemplos incluem eritropoietina, calcitonina e -1 antitripsina. Mais
recentemente, alguns destes frmacos esto sendo produzidos por plantas transformadas,
como o caso de as hirudina (Parmenter et al., 1996). Hirudina um poderoso anticoagulante
do sangue que produzido pela sanguessuga Hirudo medicinalis, que agora pode ser extrado
de sementes destas plantas transgnicas. A produo do antigeno de superfcie do vrus da
Hepatite B (HBsAg) foi obtida em plantas e vacinas orais esto sendo utilizadas em testes
clnicos com humanos desde 1997 contra uma linhagem de E. coli enterotoxigenica. Vacinas
orais so apropriadas para proteo contra patgenos que infectam as superfcies mucosas,
particularmente contra bactrias e vrus causadores de diarrias (Mason et al., 1992).
Vacinas comestveis produzidas por plantas, advogam alguns cientistas, um sistema
bastante apelativo, pois apresenta inmeras vantagens sobre as formas convencionais:
armazenamento em condies menos sofisticadas, simplicidade de aplicao, custos
reduzidos, fcil produo e diminuio dos riscos de transmisso de outras doenas com
equipamentos e materiais contaminados. Contudo, uma questo ainda pendente a
segurana e a eficincia destas vacinas produzidas por plantas. Outra preocupao relaciona-
se com a quantidade da fruta ou alimento a ser ingerido, bem como o controle da produo
dos mesmos. Embora o assunto complexo e polmico, vrios laboratrios em muitos pases
esto desenvolvendo este tipo de vacinas utilizando estratgias diferentes.
Uma outra aplicao relacionada com a manipulao dos metablitos secundrios a
produo de polmeros biodegradveis. Tais polmeros so na realidade uma mistura de
amido e polietileno. Quando o amido o maior componente, temos os plsticos complexos, j
em comercializao como Novon e Fertec. (Novon - 80% amido mais etileno-acetato de vinil
ou co-polmero etileno-cido acrlico; Fertec - 50% amido e polmeros). Os filmes so
resultantes de misturas com baixos teores de amido.
Do ponto de vista alimentar, novas promessas esto sendo anunciadas. So as
chamadas segunda e terceira ondas, cujas aplicaes da engenharia gentica esto
relacionadas com o aumento da qualidade dos produtos alimentcios. Como exemplo
menciona-se que esto sendo desenvolvidos OGMs com alto teor de aminocidos, protenas
ou alta qualidade do leo e plantas que produzem altas quantidades de vitaminas, como
experimentalmente j obtido em cenoura e arroz. Tais alimentos so chamados de
nutracuticos.

ANIMAIS
A primeira leva de animais transgnicos foi destinada a produzir substncias para uso
na sade humana ou para fornecer rgos para transplante, tambm para a espcie humana.
Dentre as protenas humanas produzidas em animais transgnicos destaca-se o fator de
coagulao, necessrio no tratamento da hemofilia, a eritropoietina, que utilizada para
estimular a medula ssea quando deprimida por outras drogas e a alfa-1 antitripsina, utilizada
no tratamento de enfisema pulmonar.
Peixes transgnicos j esto prestes a chegar mesa do consumidor americano. A
liberao de salmo transgnico depende apenas da aprovao da FDA, a agncia que regula
a entrada de alimentos e medicamentos no mercado americano. Quando isto acontecer, ser
a primeira vez que um animal transgnico estar disponvel para consumo humano. A
diferena entre os salmes naturais e os transgnicos que nestes foi inserido um gene que
acelera seu crescimento, isolado de outro peixe, a lampria. Os genes introduzidos estimulam
a produo contnua de hormnios de crescimento.

49
Alm disso, os animais transformados com genes humanos destinados produo de
rgos para xenotransplantes, como o caso de sunos, esto sendo alvo de inmeras
discusses, no s do ponto de vista tico, mas tambm biolgico. Em relao a sade
humana, os riscos dos xenotransplantes esto basicamente centralizados na disseminao de
vrus ou outras entidades (micoplasmas e partculas infecciosas) que tambm podem causar
doenas ou injrias sade humana. Do ponto de vista tico e religioso, pertinente uma
discusso mais ampla com os diversos segmentos da sociedade, uma vez que este assunto
extremamente polmico.
Mais recentemente, galinhas transgnicas foram desenvolvidas para render mais carne
como o caso da Terminator Chicken da empresa AviGenics. A mesma empresa
engenheirou galinhas com genes humanos para produzir medicamentos. Em ambas, a
empresa inseriu tambm uma seqncia de DNA que considera segredo e que possibilita ser
detectada, visando a rastreabilidade para fins comerciais, ou seja, impedir que algum use as
galinhas sem pagar pela tecnologia. Animais de outras espcies tambm j foram modificados
via transgenia como vacas, ovelhas e ratos.

MICRORGANISMOS
Com relao aos microorganismos (especialmente bactrias e fungos) existe grande
potencial para obteno de produtos industrializados, como por exemplo para a medicina
humana, pois podem ser produzidos aminocidos e vitaminas nestes microrganismos.
Bactrias geneticamente transformadas podem ser usadas para produzir muitas proteinas
importantes, hormnios de crescimento humano (hGH), interferons e vacinas (como contra a
Hepatite B) para imunizao contra viroses. O uso dos microorganismos tambm se estende
para a fermentao Lctea e alcolica e a degradao de poluentes.
O primeiro produto comercial decorrente do uso da tecnologia do DNA Recombinante
foi a insulina, comercializada a partir de 1982 nos Estados Unidos, justamente a partir de uma
microorganismo transgnico. O gene humano responsvel pela insulina foi isolado na espcie
humana e introduzido na bactria Escherichia coli, que passou a produzir e excretar este
produto. Aps a purificao, a insulina produzida em laboratrio passou a substituir a insulina
extrada de pncreas de animais, uma vez que proporciona menos riscos aos diabticos, que
dependem deste medicamento. No Brasil, a insulina tambm j vem sendo produzida com
microrganismos transgnicos. Cabe destacar que o produto no transgnico, uma vez que
a expresso do prprio gene humano, mas somente o organismo que o produz.
Outro aspecto importante, que estes produtos destinados sade humana oriundos
de microrganismos transgnicos passam pelos mesmos testes que passam os medicamentos
convencionais. Sendo assim, a expectativa de que estes produtos apresentam mais riscos
relacionados a contaminaes do que propriamente decorrentes do uso per se da tecnologia
do DNA Recombinante.

TERAPIA GENTICA
Na espcie humana, a terapia gnica se constitui numa das reas de maior pesquisa.
Trata-se de uma estratgia que visa disseminar no corpo humano ou num rgo especfico,
um gene normal para que o mesmo possa expressar seu produto adequadamente, naqueles
casos onde um ser humano portador de defeito gentico. Os elementos que auxiliam o
transporte e expresso destes genes so previamente modificados in vitro de forma a garantir
sua inocuidade como elementos transportadores de sequncias gnicas. Mesmo dos
retrovrus, modificados in vitro para carrear genes codificadores de protenas de amplo
interesse mdico, como a expresso de adenosina deaminase - ADA, cuja ausncia impede a
maturao dos linfcitos e, conseqentemente, leva ausncia de qualquer resposta
imunolgica, espera-se no causarem doenas nos pacientes que esto recebendo este tipo
de vrus transgnico como carreador de um gene de interesse.

50
Vrias experincias resultaram em mortes de pacientes ou de aparecimento de
doenas como a leucemia, aps o tratamento com terapia gentica.

5-EVOLUO DO CULTIVO DAS PLANTAS TRANSGNICAS
Nos Estados Unidos os testes de campo iniciaram em 1987 e o primeiro cultivo
comercial s ocorreu em 1994 com a liberao do tomate FLAVR SAVR, que apresenta a
caracterstica de retardar a maturao. A insero do gene da poligalacturonase (do prprio
tomate) no sentido anti-senso retarda a o acumulo desta enzima em quantidades suficientes
para a degradao das paredes celulares, causando um atraso na maturao.
No h uma estatstica oficial da rea cultivada com transgnicos no mundo. Assim,
utiliza-se dados de uma organizao mantidas pelas empresas interessadas. A rea plantada
com plantas transgnicas saltou de pouco mais de 1,7 milhes de hectares em 1996 para 43
milhes de hectares em 2000 (Tabela 5). Embora o nmero de pases que plantaram
transgnicos no ano de 2000 era 12, os trs pases responsveis por 98% da produo
mundial de gros transgnicos so os Estados Unidos, a Argentina e o Canad (Tabela 5).
Portanto, o cultivo destas variedades ainda um fenmeno restrito. Extra oficialmente sabe-se
que na China existem dezenas de cultivares transgnicas em cultivo, carregando diferentes
caractersticas. Contudo, as cifras oficiais so desconhecidas.
As estimativas para o ano de 1999 eram de que soja, milho, algodo e canola eram
responsveis por 58%, 12%, 12% e 7% to total da rea plantada com transgnicos no mundo
todo. Comparativamente a rea plantada com no transgnicos, os transgnicos de soja,
milho, algodo e canola representavam 34%, 7%, 16% e 11%, respectivamente. O total
mundial em termos de rea plantada neste ano de 2000 com estas 4 espcies atingiu 273
milhes de hectares (72 de soja, 140 de milho, 34 de algodo e 25 de canola). Desta forma, a
rea total com transgnicos (43 milhes de ha) equivale a 16% da rea total plantada com
estas espcies. Com exceo da soja transgnica, que j alcanou um tero da rea total, as
demais variedades transgnicas de outras espcies ainda so plantadas em baixa proporo.
Do total da rea plantada em 1999, estimou-se que as variedades das empresas Monsanto,
Aventis, Syngenta, Basf e DuPont contriburam com 80%, 7%, 5%, 5%, e 3%,
respectivamente.

Tabela 5. Principais pases produtores de plantas transgnicas.
rea (milhes de ha)/Ano
Pas 1966 1997 1998 1999 2000
USA 1,7 8,1 20,5 28,7 (72%) 30,0 (70%)
Argentina 1,4 4,3 6,7 (17%) 9,0 (21%)
Canad 1,3 2,8 4,0 (10%) 3,0 (7%)
Austrlia 0,1 0,1 0,1 0,1
Mxico < 0,1 < 0,1 < 0,1
Espanha - < 0,1 < 0,1
Frana - < 0,1 < 0,1
frica do Sul - < 0,1 0,1 0,1
Portugal - - < 0,1
Ucrnia - - < 0,1
Romnia - - < 0,1
China ? ? ? 0,3
Total 1,7 11,0 27,8 39,9 43,0
Fonte: ISAAA

51

Estima-se que a safra de 2007 alcanou 8% da rea cultivada no planeta. Mas, 176
pases do mundo (92%) no cultivam transgnicos. Apenas quatro paises (Estados Unidos,
Canad, Argentina e Brasil) so responsveis por aproximadamente 90% da produo
mundial de OGMs. E apenas quatro espcies (soja, milho, algodo e canola) so
aproximadamente 99% das colheitas transgnicas.

Dentre as caractersticas introduzidas nestas variedades mais cultivadas destacam-se
resistncia a herbicidas, resistncia a insetos ou ambas (Tabela 6). Projetos de alterao na
composio nutricional esto em andamento. Um exemplo disto o arroz dourado, assim
chamado porque foi introduzido numa variedade de arroz um gene que dever produzir
vitamina A. A produo em grandes quantidades da pr-vitamina A no arroz ainda no est
garantida, razo pela qual, uma pessoa deveria ingerir quantidades elevadas de arroz
(estimativas riam de de 1,9 a 4,3 kg/dia) para satisfazer as necessidades dirias deste
componente alimentar.


Tabela 6: Principais caractersticas introduzidas
1998 2000
Caracterstica Milhes de h (%) Percentagem da rea
Resistncia herbicidas 17,3 (63) 73
Resistncia insetos 10,0 (36) 22
Resistncia herbicidas/insetos <0,3 (<1) 5
Qualidade <0,3 (<1) <1
Total (ha) 27,5 43,0
Fonte: ISAAA

Este quadro no se alterou muito nos ltimos anos, pois os dois principais genes so
os de resistncia a herbicidas ou de produo de toxinas mortais a insetos. Estas cifras
sugerem que a tecnologia no se alastrou como se esperava, nem tampouco alcanou a
maioria dos paises ou das espcies.

Na Europa existe uma grande controvrsia a respeito de plantas transgnicas que
tambm apresentam genes de resistncia a antibiticos esto sendo proibidas para cultivo. A
rigor, desde 2004, nenhuma nova variedade transgnica pode aprovada para plantio ou
consumo se contm genes de resistncia a antibiticos.

E o Brasil ?
No Brasil existe a Soja Roundup Ready (Soja RR), da Monsanto, liberada pela CTNBio
(setembro de 1998), registrada no o Ministrio da Agricultura e Abastecimento (junho de
1999), mas com cultivo e consumo suspenso por deciso judicial at que sejam feitos os
estudos de impacto ambiental e relatrio de impactos no meio ambiente (EIARIMA) e
cumpridas outras exigncias como elaborao de normas de fiscalizao e rotulagem.
Posteriormente, por meio de Medidas Provisrias o Governo decidiu e o Congresso aprovou a
colheita da safra ilegal de 2002/2003 e o plantio e colheita da safra 2003/2004. Por fim, a nova
Lei de Biossegurana ( Lei n 11.105, de 24 de maro de 2005) incluiu artigos que aprovaram o
cultivo e o consumo da Soja RR. Mesmo assim, o processo judicial no est concludo.

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possvel que na safra 2008/2009 o cultivo com soja RR alcance os 50%. Contudo
no h cifras oficiais a este respeito.
Os testes com plantas transgnicas no Brasil ultrapassavam a casa dos 900 (em
meados de 2001), sendo que aproximadamente a metade como lavouras demonstrativas. Os
demais so relacionados a testes de performance agronmica, valor de cultivo e uso, de
transferncia de transgenes de uma variedade para outra, mas poucos para avaliar os
impactos ambientais. Nos anos de 1997 a 2000 foram liberados 50, 360, 344 e 99
experimentos, respectivamente. Com exceo de 1998, nos demais anos os experimentos
estavam concentrados no Sudeste e Centro-oeste.
Um agravante que se apresentou neste processo que at 1999 grandes reas
experimentais estavam em mos de agricultores inexperientes no trato com plantas
transgnicas. E estas lavouras no podem, a rigor, ser consideradas planejadas. Como s
existem normas com respeito s experimentaes planejadas, estas delegadas iniciativa
privada ficam margem de qualquer fiscalizao.
De 1997 a fevereiro de 2001 foram realizados experimentos em 12 estados do pas. Os
experimentos esto concentrados da seguinte forma: Gois, 386,98 ha, Minas Gerais, 153,13
ha; So Paulo, 138,85 ha; Paran, 86,63 ha; Rio Grande do Sul, 37,17ha; Mato Grosso, 28,18
ha; Distrito Federal, 6,45 ha; Mato Grosso do Sul, 1,2 ha; Bahia, 0,681 ha; Santa Catarina,
0,604 ha; Piau, 0,008; Roraima, 0,005 ha. De 1997 a 2001, a rea de lavoura transgnica
atingiu 882,2 ha.
Atualmente centenas de testes so feitos em diferentes estados da federao com
diferentes OGMs.
Variedades transgnicas de poucas espcies tm sido utilizadas na experimentao no
Brasil. Elas se restringem s lavouras de algodo, cana-de-acar, fumo, batata, arroz,
eucalipto, mamo, milho e soja. As empresas notadamente esto apostando em trs espcies:
milho, soja e algodo, mas de fato concentram-se em duas: milho e soja. Estas
lavouras tiveram suas reas experimentais aumentadas desde 1997
De um total de 904 experimentos, o Grupo Monsanto detinha 678 e as outras
empresas 226. Isso representava na poca 75% dos experimentos, contra 25% das
outras organizaes. A maioria dos testes estavam concentrados em torno de plantas
resistentes herbicidas e no desenvolvimento de plantas bioinseticidas.
Outra deciso judicial proibiu o plantio pelo perodo de 3 anos, mesmo que
experimental, de plantas biocidas, ou seja, aquelas que produzem substncias
agrotxicas ou afim agrotxicas, conforme explicitado na sentena Judicial, cuja
parte final :
Ante o exposto DEFIRO A LIMINAR com fundamento no art. 12, da Lei n. 7.347/85 para
determinar que se suspendam todas as autorizaes para cultivo de quaisquer sementes
geneticamente modificadas com caractersticas de agrotxicos ou afins em que os
interessados no detenham o Registro Especial Temporrio RET, bem ainda, para que no
sejam expedidas novas autorizaes sem a observncia desse requisito. Dever a CTNBio
abster-se de emitir qualquer concluso sobre a biossegurana de cultivares que receberam o
gene de resistncia a insetos transportado da bactria BACILLUS THURINGIENSIS, sob pena
de multa diria de R$ 10.000,00 (dez mil reais). Oficie-se ao IBAMA para que proceda
fiscalizao dos locais onde efetuada a manipulao desses organismos, atendendo-se as
determinaes desta deciso. (CHARLES RENAUD FRAZO DE MORAES, Juiz Federal
Substituto da 14 Vara-DF, Braslia, 27 de abril de 2001).
Atualmente, a nica restrio legal que existe de transgnicos que contenham
tecnologias genticas de restrio de uso, tambm denominadas de GURTs. Alguns tipos de
GURTs so conhecidos como Terminator pelo fato que as plantas produzem os gros com o

53
embrio defeituoso. Isto impede a sua germinao e, assim, o agricultor obrigado a comprar
sementes, que so patenteadas, todos os anos.
Alm da soja RR, a CTNBio aprovou em 2005 o Algodo Bollgard (evento 531), que
contm o gene Cry1Ab, de Bacillus thuringiensis.
Neste ano de 2008, o CNBS decidiu no dar provimento aos recursos do IBAMA e da
ANVISA contra a deciso da CTNBio de liberar os milhos transgnicos:

Evento T25 ou milho LL 25, da Bayer, contendo uma verso sinttica do gene pat
isolado de Streptomyces viridochromogenes, raa T 494, que codifica para a sntese
da enzima fosfinotricina N acetiltransferase (PAT), enzima esta que catalisa a
converso de L-fosfinotricina, inativando o ingrediente ativo Glufosinato de Amnio e,
deste modo, conferindo planta a resistncia ao referido herbicida.
Evento MON 810 ou milho Yeldgard da Monsanto, que contm o gene cry1Ab,
proveniente de Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki, que codifica a protena Cry1Ab
com efeito txico sobre os insetos da ordem Lepidoptera lagarta-do-cartucho, lagarta-
da-espiga e lagarta-do-colmo;
Evento Bt 11 da Syngenta, contendo os genes (i) cryIA(b) que expressa uma
forma truncada da toxina; (ii) o gene pat que codifica a enzima
fosfinotricina-N-acetil transferase que confere resistncia ao herbicida
glufosinato de amnia (L-Fosfinotricina, PPT - Phosphinothricin), obtido da
bactria de solo Streptomyces viridochromogenes.

Adicionalmente a CTNBio continua liberando outros OGMs.

6-LIMITAES

Uma das principais limitaes da modificao de plantas a dificuldade de identificar e
isolar genes teis. A maioria dos genes inseridos em plantas proveniente de bactrias e
vrus porque o reduzido genoma desses organismos facilita a identificao e clonagem de
genes. Intensivos estudos em vrios laboratrios esto sendo feitos em Arabidopsis thaliana,
que hoje se constitui no organismo experimental para isolamento e clonagem de genes de
plantas. Aproximadamente 50% da seqncia genmica desta planta j conhecida e em
breve ser concludo o sequenciamento da espcie. Estimativas indicam a existncia de 21 a
25 mil genes. Da parte j sequenciada, no se conhece a funo de mais da metade dos
genes. Desta forma, o conhecimento da regulao gnica do referido gene fundamental
neste caso. O desenvolvimento de densos mapas de ligao gentica e o sequenciamento de
parte do genoma de outras plantas cultivadas facilitar a identificao e isolamento de
importantes genes. Outro fator limitante a necessidade de obteno de uma planta adulta a
partir de uma clula transformada. A regenerao no ocorre em todas as espcies. Nestes
casos, a transformao feita em tecidos cotiledonares. Embora existem muitos mtodos de
transformao de plantas, algumas espcies so bastante recalcitrantes. Em geral, pode-se
transformar a maioria das dicotiledneas com Agrobacterium tumefasciens. O mesmo no se
pode dizer das monocotiledneas. Para este grupo de plantas utiliza-se um dos mtodos
diretos. Contudo, para cada espcie ou tecido a ser transformado, h a necessidade de testes
sobre o mtodo e o protocolo de regenerao das clulas ou tecidos transformados.
Embora h preciso no isolamento do gene, no h possibilidade de controlar a
integrao do inserto no genoma. O local da insero da construo quimrica pode ser
qualquer ponto do cromossomo. Como consequncia, poder ocorrer a interrupo da
expresso gnica de um gene da planta se o inserto se integrar no referido loco. Ou ainda, a
insero do gene transferido poder ocorrer numa regio rica em heterocromatina, onde a

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expresso gnicapoder ser reduzida ou insignificante. Alm disso, uma vez inserido, a nova
sequncia poder ser alvo de metilao e a consequente inativao em termos de transcrio.
Outras vezes, o gene pode ser silenciado ou ocorrer a interferncia de outro gene ou insero
(Brasileiro e Dusi, 1999).
Como o nmero de cpias inseridas varivel, muitas plantas so descartadas por
possurem um nmero elevado de cpias. Nenhum mtodo controlvel a ponto de
possibilitar apenas uma insero.
Existem vrios casos, onde o gene isolado de uma espcie no se expressa
adequadamente em outra, em geral devido a diferena na preferncia de uso de codons pelas
diferentes espcies. Neste caso feita uma modificao feita em alguns codons do gene que
foi isolado de uma planta nativa da frica (Thaumatococus danielli) sem alterao do produto
final. Tem-se ento, os genes semi-sintticos. Este gene que codifica a protena denominada
de 'taumatina', cuja intensidade adocicante cerca de 3000 vezes superior a sacarose
(peso/peso), aps modificado, foi introduzido em leveduras para que a protena seja produzida
em larga escala. Na planta, a referida protena s produzida nas flores e em pequena
quantidade. O uso de genes semi-sintticos cada vez mais freqente. Um outro exemplo o
uso de um gene do Bt (-endotoxina) que foi sintetizado in vitro a partir do molde natural e que
proporciona resistncia a lagarta Heliotis em milho. Testes com plantas transgnicas (com
estes genes, parcialmente sintetizados in vitro) j foram concludos e variedades comerciais j
esto sendo cultivadas em vrios pases (inclusive na Amrica do Sul).

7-BIOSSEGURANA - REGULAMENTAO
Biossegurana, na viso da FAO, significa o uso sadio e sustentvel em termos de
meio ambiente de produtos biotecnolgicos e aplicaes para a sade humana,
biodiversidade e sustentabilidade ambiental, como suporte ao aumento da segurana
alimentar global. Desta forma, normas adequadas de biossegurana, anlise de riscos de
produtos biotecnolgicos, mecanismos e instrumentos de monitoramento e rastreabilidade so
necessrios para assegurar que no haver danos sade humana e efeitos danosos ao
meio ambiente.
Normas de biossegurana j tm sido utilizadas desde 1975 para experimentos
confinados. No incio, estas normas foram feitas pelos prprios cientistas e seguidas
voluntariamente. Posteriormente, com o a comercializao de produtos e processos, os paises
comearam a fazer suas leis ou normas relacionadas a liberao comercial de produtos
transgnicos.
Em outubro de 1991 a 'European Community' emitiu um documento, o qual inclui os
procedimentos para o manuseio dos testes e liberao de organismos transgnicos. Cada
Estado membro foi obrigado a estabelecer sua regulamentao (ou legislao) em harmonia
com as diretrizes emitidas pela EEC.
Em 1999, a Unio Europia decidiu rever as diretrizes de liberao de transgnicos.
Contudo, vrios pases j decretaram ou esto em fase de adotar uma moratria comercial,
at que novos estudos sobre biossegurana dos produtos transgnicos indiquem riscos
aceitveis para a sade humana e ao meio ambiente. Como resultado disto, no houve
nenhuma nova liberao para plantio comercial desde junho de 1999. Contudo, as presses
das grandes empresas comeam a surtir efeitos e j h indcios de que o processo de
liberao de novas variedades transgnicas seja retomado, embora, a contrariedade dos
Ministros de Meio Ambiente.
Em 14/02/2001 as novas diretrizes sobre a liberao de OGMs no ambiente (Reviso
da diretiva 90/220/EEC) foram aprovadas pelo European Parliament. Os principais aspectos
so mencionados a seguir:

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Genes marcadores eliminao dos genes de resistncia a antibiticos: at final de
2004 para fins comerciais; at 2008 para fins de pesquisa;
Responsabilidade ambiental Legislao sobre responsabilidade ambiental ainda em 2001,
cobrindo danos resultantes de OGMs;
Efeitos interativos de longo prazo entre o ambiente e os OGMs devem ser levados em conta
na anlise de risco antes da liberao;
Exceo para aos frmacos;
Experimentos devem ser registrados e detalhes dos mesmos tornados pblicos;
Aprovao por tempo limitado Primeira aprovao por 10 anos no mximo;
Rotulagem e rastreabilidade Regras gerais para OGMs; Comisso vai propor regras sobre
legislao da rastreabilidade e rotulagem de OGMs e derivados.
A nova Diretiva inclui ainda:
monitoramento obrigatrio aps o OGM ir para o comrcio;
consulta obrigatria a Comits Cientficos relevantes;
consulta pblica obrigatria em relao s liberaes experimentais e comerciais;
aplicao do princpio da precauo na implementao da Diretiva;
oportunidade para consultar Comits de tica sobre assuntos de natureza geral;
instituio de um novo procedimento inter-institutional de acordo com a deciso do
1999/468/EC.
O Brasil j tinha uma legislao de biossegurana desde 1995. A lei que trata do
assunto, Lei n8.974 (DOU de 6/1/95), foi votada pelo Congresso Nacional em dezembro de
1994 e sancionada pelo Presidente da Republica em 05 de janeiro de 1995. A lei estabelecia
normas de segurana e mecanismos de fiscalizao no uso das tcnicas de engenharia
gentica na construo, cultivo, manipulao, transporte, comercializao, consumo, liberao
e descarte de Organismos Geneticamente Modificados (OGMs), visando proteger a vida e a
sade do homem, dos animais e das plantas, bem como o meio ambiente. O aspecto mais
relevante da lei brasileira diz respeito que o que est sob regulamentao o produto oriundo
da engenharia gentica, ou seja, a lei regulamente o produto se oriundo de um processo
especfico.
Em 28/12/2000 entre as mais de 70 Medidas Provisrias baixadas pelo Presidente, a
MP 2137 (DOU de 29/12/2000) acresceu e alterou dispositivos da Lei n 8.974. A mais
importante foi a criao da CTNBio vetada cinco anos antes. Esta medida resolveu uma critica
do judicirio que considerou a CTNBio virtual, j que no tinha sido criada legalmente at
ento, sendo seus atos passveis de nulidade.
Em 2005, foi aprovada a nova Lei de Biossegurana, a Lei n11.105, de 24 de maro
de 2005. Regulamenta os incisos II, IV e V do 1 do art. 225 da Constituio Federal,
estabelece normas de segurana e mecanismos de fiscalizao de atividades que envolvam
organismos geneticamente modificados OGM e seus derivados, cria o Conselho Nacional de
Biossegurana CNBS, reestrutura a Comisso Tcnica Nacional de Biossegurana
CTNBio, dispe sobre a Poltica Nacional de Biossegurana PNB, revoga a Lei n 8.974, de
5 de janeiro de 1995, e a Medida Provisria n 2.191-9, de 23 de agosto de 2001, e os arts. 5,
6, 7, 8, 9, 10 e 16 da Lei n 10.814, de 15 de dezembro de 2003, e d outras providncias.
O fato mais relevante foi a incluso do Principio da Precauo na lei: Artigo 1 - Esta
Lei estabelece normas de segurana e mecanismos de fiscalizao sobre a construo, o
cultivo, a produo, a manipulao, o transporte, a transferncia, a importao, a exportao,
o armazenamento, a pesquisa, a comercializao, o consumo, a liberao no meio ambiente e
o descarte de organismos geneticamente modificados OGM e seus derivados, tendo como

56
diretrizes o estmulo ao avano cientfico na rea de biossegurana e biotecnologia, a
proteo vida e sade humana, animal e vegetal, e a observncia do princpio da
precauo para a proteo do meio ambiente.
A lei traz ainda artigos sobre definies, proibio, composio e atributos do Conselho
Nacional de Biossegurana (CNBS) e da Comisso Tcnica Nacional de Biossegurana
(CTNBio), alm das atribuies dos rgos e entidades de registro e fiscalizao.
Outra importante incluso foi o principio da publicidade. Na gesto das informaes de
biossegurana, h que ser observada a transparncia. Da mesma forma, a Legislao, atos
administrativos; processos em andamento; decises da CTNBio, do CNBS e dos rgos de
registro e fiscalizao; atas das reunies e outras informaes consideradas no sigilosas,
bem como os votos fundamentados de cada membro devero ser tornados pblicos.
Poucos pases da Amrica do Sul tm legislao referente aos testes e a
comercializao de produtos oriundos da engenharia gentica. Na Argentina no existe uma
lei de Biossegurana semelhante a do Brasil. Apenas um decreto. No Paraguai, s
recentemente houve uma portaria do governo criando uma comisso de biossegurana que
tem tambm representantes da universidade e de organizaes no governamentais. Em um
de seus primeiros atos, a Comisso de Biossegurana no autorizou a introduo da Soja RR
da Monsanto no Paraguai.
Nos Estados Unidos tambm no existe uma lei especfica. Basicamente as leis j
existentes foram emendadas para tratarem tambm dos produtos transgnicos. Como neste
pas, o processo no considerado relevante, importa o produto apenas. Se um produto
transgnico considerado equivalente a um no transgnico, os testes exigidos so de
comum acordo entre as agencias governamentais e as empresas, estando os consumidores
totalmente fora das decises. Naquele pas, nos primeiros anos, foram concedidos (em mdia)
autorizaes para 98,7 % do total de solicitaes feitas. Destas, 87% eram de empresas e
13% de instituies oficiais e universidades. O sistema aps anlise desregulamenta o
produto. O processo de concesso de autorizao baseado no fentipo da planta, na
segurana ambiental, utilizao do produto e risco do produto.
Uma pergunta frequente tem sido: a liberao destas plantas nos EUA foi precedida
por testes rigorosos e anlises rigorosas das agncias americanas Food and Drug
Administration - FDA, Environmental Protection Agency - EPA e United States Department of
Agriculture - USDA?
As plantas transgnicas, aprovadas para o cultivo comercial nos Estados Unidos,
tiveram sua liberao baseada no princpio da equivalncia substancial. Assim, a soja RR foi
considerada equivalente a sua antecedente natural, a soja convencional, porque no difere
dela nos aspectos cor, textura, teor de leo, composio e teor de aminocidos essenciais e
de nenhuma outra qualidade bioqumica. Desta forma, no foram submetidas rotulagem pela
agncia americana encarregada de sua liberao, a FDA.
Este conceito de equivalncia substancial tem sido alvo de crticas, entre outras,
porque a falta de critrios mais rigorosos pode ser til indstria, mas inaceitvel do ponto
de vista do consumidor e da sade pblica (Millstone et al., 1999). H dificuldades prticas no
conceito de equivalncia entre plantas engenheiradas e naturais, ou obtidas por tcnicas
convencionais de melhoramento gentico. Equivalncia significa dispor de igual valor ou outro
atributo, normalmente expresso em unidades ou parmetros: um grama do produto Y equivale
a X calorias. Equivalncia se refere sempre a quantidade ou algo mensurvel a que
corresponde um sentido tecnicamente comparvel (Momma, 1999). A rigor, em termos de
genoma, elas no so equivalentes nem iguais. S seriam iguais se uma fosse originria da
outra por multiplicao vegetativa ou micropropagao. A construo gentica inserida na
planta contm elementos bastante distintos daqueles naturais encontrados nas plantas, que
proporcionam novos produtos gnicos e que podem desencadear efeitos pleiotrpicos
substanciais, para que sejam considerados desprezveis.

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Por este critrio, a vaca louca seria equivalente, em termos de segurana, a vaca
sadia, j que a diferena entre ambas apenas da conformao espacial de uma proreina.
Uma das criticas se originou da anlise da documentao que foi utilizada pela FDA
para considerar a Soja RR substancialmente equivalente a soja convencional. Segundo
Barbara Keeler que fez a anlise, existem diferenas significativas entre soja no transgnica
e Soja RR: em 3 dos seis macronutrientes; em um cido graxo; 29% menos de choline; mais
(27%) de inibidor de tripsina, um potente alergnico. Para chegar a concluso de que ambas
variedades eram equivalentes, no foram aplicados testes estatsticos nas comparaes.
Alm disso, em um dos 3 experimentos feitos em Porto Rico foi omitido da publicao no
Journal of Nutrition, mas os dados foram submetidos ao FDA. Estes revelaram que a Soja RR
apresentou menor nvel de protena e de fenilalanina; o inibidor de tripsina foi 18% maior nas
tortas tostadas a base de Soja RR que nos controles e as lectinas apareceram em dobro.
Neste caso, por esta anlise a soja convencional e a Soja RR no seriam equivalentes.
Esta estratgia baseada na equivalncia substancial foi introduzida na dcada passada
para evitar que as indstrias tivessem custos maiores com testes de longa durao, como na
rea farmacolgica. Quando se utiliza a equivalncia substancial, nenhum teste requerido
para excluir a presena de toxinas prejudiciais, carcinognicas e mutagnicas. Este critrio da
equivalncia substancial equivocado, carece de base cientfica e deveria ser abandonado
em favor de testes biolgicos, toxicolgicos e imunolgicos mais aprofundados e eficazes
(Guerra e Nodari, 1999). Com base nesta equivalncia, o FDA exige apenas testes de curta
durao com animais e testes bioqumicos para avaliar, entre outros, a alergenicidade. Esta
insuficincia de dados, que no consegue subsidiar cientificamente a anlise da segurana
alimentar, est sendo questionada no s pela populao em geral, mas tambm por grande
parte da comunidade cientfica e agora (outubro de 2000) pelos governos, como o caso da
Itlia.
Como o transgene , na verdade, uma nova caracterstica em geral desconhecida
introduzida num genoma cultivado que vem sendo lapidado pelas selees natural e artificial,
ainda no h experincia acumulada, nem conhecimento suficiente para tratar
adequadamente este assunto. Contudo, a comunidade cientfica e os agricultores j tm
experincia acumulada com os agroqumicos ou agrotxicos que foram liberados, aps a
Segunda Guerra Mundial para uso, sem a realizao de testes adequados de biossegurana.
S posteriormente, parte dos efeitos nefastos causados por eles se tornaria conhecido. Foi
preciso a morte e a dor de inmeras pessoas contaminadas para que as restries de uso
aumentassem. At hoje no houve reparao alguma por partes das empresas fabricantes
destes produtos s vitimas intoxicadas ou mortas (Nodari e Guerra, 2001).
Na verdade as empresas biotecnolgicas americanas querendo segurana sobre o
retorno de seus investimentos nas reas farmacuticas e agrcola exerceram forte presso
sobre o governo para restringir o rigor regulatrio das agncias regulatrias americanas. A
deciso do uso da equivalncia substancial foi tomada para evitar os testes toxicolgicos e de
impacto ambiental de longa durao e de amplo espectro, que tornariam excessivo o custo de
desenvolvimento destes produtos. Esta estratgia possibilitou que os transgnicos fossem
aprovados de forma mais rpida e barata: 1/3 do tempo e 1/7 a 1/6 do custo,
comparativamente aos frmacos.
A equivalncia substancial utilizada tambm pelo Canad e Argentina. Nestes pases
a rotulagem no obrigatria. Nos Estados Unidos proibida (ver o caso da rotulagem do
leite de cava produzido em vacas alimentadas com hormnio transgnico).
A rigor, nenhum dos processos de solicitao de liberaes comerciais japrovadas
pela CTNBio continha os estudos de avaliao de risco sade humana ou ao meio
ambiente, razo pela qual ANVISA e IBAMA impetraram recurso junto ao CBNS contra a
deciso da CTNBio.
Nem mesmo os princpios e a metodologia estabelecidos no Anexo III do protocolo de
Cartagena sobre Biossegurana tm sido seguido. De um lado as empresas no fazem os

58
estudos recomendados, de outro lado a CTNBio no exige. Assim, nem a comunidade
cientifica dispe de informaes tcnico-cientficas a respeito dos riscos. Isto contribui para um
debate na sociedade, vazio de informaes cientficas e tcnicas.

Protocolo Internacional de Biossegurana
A Conveno sobre a Diversidade Biolgica CDB - estabeleceu nos itens 3 e 4 do
artigo 19 que: (3.) As Partes devem examinar a necessidade e as modalidades de um
protocolo que estabelea procedimentos adequados, inclusive, em especial, a concordncia
prvia fundamentada, no que respeita a transferncia, manipulao e utilizao seguras de
todo organismo vivo modificado pela biotecnologia, que possa ter efeito negativo para a
conservao e utilizao sustentvel da diversidade biolgica; e (4.) Cada Parte Contratante
deve proporcionar, diretamente ou por solicitao, a qualquer pessoa fsica ou jurdica sob sua
jurisdio provedora dos organismos a que se refere o 3 acima, Parte Contratante em que
esses organismos devam ser introduzidos, todas as Informaes disponveis sobre a
utilizao e as normas de segurana exigidas por essa Parte Contratante para a manipulao
desses organismos, bem como todas as Informaes disponveis sobre os potenciais efeitos
negativos desses organismos especficos.
Nas vrias rodadas realizadas para negociar o referido Protocolo Internacional de
Biossegurana, duas posies, praticamente antagnicas se firmaram. De um lado estavam
os Estados Unidos e os demais pases do Grupo de Miami (Argentina, Austrlia, Canad,
Chile e Uruguai) e de outro lado, os demais pases. Os primeiros (i) queriam exportar
commodities geneticamente modificadas (OGMs e seus derivados) como alimentos, frmacos
e rao para animais sem solicitar permisso aos pases importadores e (ii) tornar o protocolo
um instrumento legal independente ou ligado a organizao mundial do comrcio (OMC). Os
demais pases queriam (i) anlise de impacto scio-econmico inserido na anlise de impacto
ambiental a ser realizada previamente a liberao comercial; (ii) que o protocolo contenha
instrumentos de compensao em caso de acidentes de transporte com OGMs e (iii) que o
protocolo no deveria conflitar com outros acordos internacionais atualmente existentes.
Alguns pases, como os da frica, querem ainda que o protocolo assegure compensao
financeira em caso de impactos negativos na sade humana ou danos ao ambiente.
Finalmente, na rodada realizada em janeiro de 2000, na cidade de Montreal, o referido
Protocolo foi acordado. Os dois principais pontos so: (i) o princpio da precauo deve ser
adotado em caso de dvida ou falta de conhecimento cientfico e (ii) os produtos transgnicos
devem ser rotulados (art. 18a). O referido protocolo tem cerca de 40 artigos e trata
basicamente da movimentao de transgnicos entre pases, com atribuio de
responsabilidades em caso de danos. Garante ainda, que o pas importador recuse o produto
caso no esteja acompanhado de estudo de risco adequado. Um terceiro aspecto, explicitado
no artigo 15 e anexo II, impe que a anlise de risco seja conduzida cientificamente pelo
exportador. Na ausncia desta anlise, os importadores podem se negar a receber os
produtos.
J foram realizadas quatro reunies anuais (denominadas de MOP), nas quais foram
tomadas decises consensuadas sobre vrios temas, sendo o mais polmico os requisitos em
termos de informao sobre o OGM que deve acompanhar o documento fiscal nos
carregamentos de OGM em movimentos transfronteirios.
At o final de 2007, 143 pases haviam assinado o Protocolo Internacional, incluindo o
Brasil. Mas no ratificaram o Protocolo, Estados Unidos e Argentina, por exemplo.

Situao em Santa Catarina
No nosso Estado, existem duas leis promulgadas pela Assemblia Legislativa, que foram
vetadas pelo governador, mas o veto derrubado pelos parlamentares. A primeira a Lei

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Promulgada N 11.403, de 10/05/2000, que dispe sobre pesquisas, testes, experincias ou
atividades nas reas de Biotecnologia e Engenharia Gentica e adota outras providncias.
Seu Art. 1 diz As empresas nacionais ou estrangeiras, que desenvolverem no Estado
de Santa Catarina pesquisas, testes, experincias e outras atividades nas reas da
biotecnologia e engenharia gentica, envolvendo Organismos Geneticamente Modificados
(OGMs), bem como os produtos advindos desta tecnologia, devero notificar o Poder
Executivo na forma disposta nesta Lei. J o Art. 3 probe a comercializao em todo o
Estado de Santa Catarina dos produtos advindos da tecnologia.
A segunda a Lei Promulgada 11.643, de 4/06/2000, que cria o Conselho Tcnico
Catarinense de Biossegurana CTCBio e adota outras providncias. Seu Art. 1 diz: Fica
criado o Conselho Tcnico Catarinense de Biossegurana CTCBio , rgo normativo-
jurisdicional, consultivo e de assessoramento vinculado diretamente ao Poder Executivo, com
a finalidade de deliberar sobre matria relacionada a sua rea de competncia.
Ambas as leis embora vigentes ainda no foram implementadas at esta data (junho/2001).
Paralelamente e com apoio da Assemblia Legislativa, foi criado o Forum dos Transgnicos,
do qual participam vrias instituies pblicas e ONGs como as Comisses de Sade e Meio
Ambiente, Direitos Humanos e do Consumidor, Agricultura e Tecnologia e Cooperativismo da
AL, rgos da Secretarias de Estado da Sade (Vigilncia Sanitria) e da Agricultura
(EPAGRI, CIDASC, PROCOM-SC), Ministrio Pblico, OAB, AMC, UFSC, CEPAGRO, ACATS
(Associao Catarinense de Supermercados), Associao Cvica 21/SC, Comit de Defesa do
Consumidor Organizado (DECONOR), CUT, Federao dos Trabalhadores na Agricultura
Familiar (FETRAF/SUL), Federao dos Trabalhadores na Agricultura (FETAESC), Sindicato
dos Engenheiros Agrnomos (SEAGRO), Federao das Associaes de Apicultores
(FAAS/SC) e Federao Catarinense das Associaes dos Municpios (FECAM).
Umas das aes deste Forum foi a obteno de uma acordo negociado entre o Ministrio
Pblico e empresas que cujos produtos so suspeitos de conter ingredientes transgnicos.
Nestes casos, as empresas custeiam as anlises laboratoriais que sero realizadas por
laboratrios pblicos. De outro lado, os supermercados iniciaram um processo de conhecer
no s a legislao mas tambm a opinio dos consumidores.

8-DETERMINAAO DE RISCO
Apesar da Legislao Brasileira de Biossegurana ter sido promulgada desde 1995 e
da CTNBio ter sido implantada em 1996 e re-implantada em 2005, a operacionalizao da
fiscalizao dos produtos transgnicos nas Unidade da Federao tem enfrentado vrias
dificuldades. A fiscalizao tanto de experimentos quanto de rea plantada clandestina no
est sendo feita a contento. At abril de 1999, apenas 5% dos experimentos haviam sido
fiscalizados. A situao no mudou muito depois disso.
Com o objetivo de levantar os principais problemas e entraves que tm dificultado o
cumprimento da legislao de biossegurana na rea de competncia do Ministrio da
Agricultura e contribuir para a soluo dos problemas da fiscalizao, a Diviso de Controle do
Trnsito e Quarentena Vegetal DTQ/CPP, em 23/11/00, encaminhou o fax n 150/2000-
Circular para todas as DDA e SEDAG das DFA. Quatorze Unidades da Federao (AM, BA,
CE, DF, GO, RR, RS, SC, TO, PA, PR, MG, MS, MT) responderam no prazo estipulado e, com
base nessas respostas, o presente documento foi elaborado (por Paccelli M. Zahler).
Os problemas enfrentados pela fiscalizao federal agropecuria dos transgnicos podem ser
divididos em trs tipos: pessoal, operacionais e legislativos.
1) Problemas de pessoal:
falta de tcnicos em nmero suficiente para realizar as fiscalizaes;
falta de treinamento em biossegurana;
falta de uma Comisso de Biossegurana no Ministrio da Agricultura, de modo que as
posies defendidas sejam posies institucionais.


60
2) Problemas operacionais:
falta de um manual de procedimentos de fiscalizao de transgnicos;
desconhecimento do contedo dos processos submetidos CTNBio;
falta de recursos financeiros para a intensificao das fiscalizaes;
falta de mtodos de amostragem e de kits para a deteco das modificaes genticas;
falta de laboratrios credenciados para a anlise de transgnicos;
falta de um Plano Operativo especfico nas reas de defesa e produo das DFA
destinado ao cumprimento da legislao de biossegurana;
falta de informao;
inexistncia de encontros e reunies entre membros da CTNBio e o corpo tcnico das
DFA;
falta de recursos financeiros para o pagamento de anlises.

3) Problemas legislativos:
falta de Instruo Normativa regulamentando a importao de transgnicos destinados
ao consumo humano e animal;
falta de instncias de julgamento e de valores de multa para as infraes cometidas com
transgnicos;
dificuldade no cumprimento das decises da CTNBio;
falta de clareza em alguns pontos da legislao de biossegurana, dificultando a
classificao dos organismos geneticamente modificados quanto ao grupo de risco ao
qual pertencem;

Os problemas no s pelo lado do governo. As empresas tambm contribuem para tornar
os problemas ainda mais graves conforme dois exemplos ilustrativos. O primeiro deles refere-
se s inmeras irregularidades apontadas no Relatrio de viagem de fiscalizao de 33
ensaios com OGMs no RS feito pelo Eng Agr Jos de Ribamar Costa Jnior-DFA/RS.
Dentre elas cabem destaque para: 6 processos onde os croquis no permitiram a localizao
dos ensaios; 2 ensaios destrudos e no comunicados a CTNBio pela Empresa; 2 ensaios
onde os OGMs estavam em risco de escape descontrolado.
Em 31/05/2001, a Folha do Paran publica uma notcia dando conta de que o Ministrio
Pblico Federal estaria investigando denncia de plantio de soja transgnica em escala
comercial no Paran. As reas apontadas com soja transgnica esto em Ponta Grossa, de
propriedade da multinacional Monsanto, e em Cascavel, de propriedade da Cooperativa
Central de Pesquisa (Codetec), rgo de pesquisa das cooperativas de produo agrcola.
A denncia que tanto a Monsanto como a Codetec, que tinham permisso para plantar a
soja transgnica, em carter experimental, extrapolaram no plantio. A Monsanto tinha uma
autorizao para produzir um hectare de soja transgnica em seus campos experimentais de
Ponta Grossa e plantou aproximadamente 25 hectares. J a Codetec que tinha permisso
para plantar 1,5 hectare em Cascavel, tambm em carter experimental, plantou 97 hectares.
Alm da interdio da rea, foram apreendidas 340 toneladas de sementes da Codetec e
outras 853 sacas da Monsanto. Esses produtos tambm se encontram disposio da Justia
e as empresas flagradas esto como fiel depositrias. O presidente da Codetec, Irineo da
Costa Rodrigues, disse que a cooperativa vai se defender na Justia porque toda a rea
plantada com soja transgnica estava sob a superviso do Ministrio da Agricultura e que
nada estava escondido. Ele disse que para efeito de pesquisa necessrio plantar uma rea
maior, at para a Codetec se preparar para o mercado, caso a liberao do plantio de soja
transgncia saia ainda este ano. "Se o plantio for liberado, as cooperativas precisam ter o
material para plantio", argumentou.
O Art. 13. da Lei 8974 dizia que constituem crimes:
V - a liberao ou o descarte no meio ambiente de OGM em desacordo com as
normas estabelecidas pela CTNBio e constantes na regulamentao desta Lei.
Pena - recluso de um a trs anos.
Pergunta: algum ir para a cadeia se esta denncia for comprovada??

61
Tanto a Lei 8974 quanto a nova MP no deixam dvida de quem a responsabilidade pela
fiscalizao.
O Art. 7
o
da MP 2131 dizia que Caber aos rgos de fiscalizao do Ministrio da
Sade, do Ministrio da Agricultura e do Abastecimento e do Ministrio do Meio Ambiente, no
campo das respectivas competncias, observado o parecer tcnico prvio conclusivo da
CTNBio e os mecanismos estabelecidos na regulamentao desta Lei:
...
II - a fiscalizao e o monitoramento das atividades e projetos relacionados a OGM;
...
X - a expedio de autorizao temporria de experimento de campo com OGM.

Na poca vigncia da lei anterior, no houve a aplicao de infraes ou d eoutras
penalidades.

Mesmo com a nova lei em 2005, pouco ou nada mudou. Fatos comprovados por
jornalistas e mesmo pela fiscalizao comprovaram a existncia de algodo e milho
transgnicos antes de terem sido liberados no pas. Assim, a fiscalizao praticamente
ineficiente para proteger o pas de cultivos ilegais e de contaminao por transgenes.


9-ANLISE DE RISCO
As Biotecnologias tm sido utilizadas por milnios para diversos propsitos, incluindo
as fermentaes para produo de alimentos e bebidas e a seleo de novas variedades de
plantas ou animais. Na ltima metade do sculo passado, novas biotecnologias foram
desenvolvidas, dentre as quais merecem destaque a micropropagao, a fuso de
protoplastos, os marcadores moleculares, a clonagem de animais, DNA recombinante e a
transgenia. Conseqentemente, a preciso e o poder de manipulao dos organismos vivos
aumentou consideravelmente com o avano da gentica molecular. De todas elas, o que
causa maior apreenso a transgenia, no em si pela tecnologia, mas pelas implicaes que
seus produtos podem apresentar sade humana e ao meio ambiente.
Se um transgnico diferente de uma variedade comum e o gene nele inserido pode
apresentar um determinado risco, h a necessidade da avaliao do risco, tanto para a sade
humana como para o meio ambiente. A razo disto est no fato de que os genes transferidos
de fora do gene-pool de uma espcie, produzem produtos com os quais temos pouca ou
nenhuma experincia. No se conhecem as implicaes que podem ser provocadas pela
introduo desses genes em plantas. Desta forma, h um consenso entre os pesquisadores
que a sociedade precisa desenvolver regras para o desenvolvimento, testes e comrcio de
OGMs.
Estes aspectos constituem um grande desafio, pois at o advento dos OGMs nenhuma
nova cultivar passava por testes de biossegurana. Embora a engenharia gentica transfira
somente seqncias curtas de DNA, comparativamente ao genoma de uma variedade, o
fentipo resultante, que inclui a caracterstica transgnica, possivelmente acompanhado de
mudanas nas caractersticas e pode produzir um organismo novo em termos de relaes
ecolgicas (Wolfenbarger e Phifer, 2000). Segundo estes autores, os ecossistemas so
complexos e nem todo o risco associado com a liberao de um OGM pode ser identificado e
considerado. Os testes a serem realizados, os protocolos mais apropriados, os termos de
referncia, os instrumentos mais adequados ainda so pouco conhecidos e esto sendo
discutidos e desenvolvidos.
Risco pode ser definido como uma medida dos efeitos de uma ocorrncia em termos
de sua probabilidade e da magnitude de suas conseqncias. Em seu texto-depoimento
(1999) ao Parlamento Ingls, o Prof. Dr. Chris Glidon, da University of Wales, definiu avaliao
de risco (risk assessment) como sendo o processo com base cientfica que consiste na
identificao e caracterizao dos perigos, da avaliao da exposio e da caracterizao dos
efeitos dos riscos. Por perigo entende-se a propriedade de uma substncia ou processo que

62
cause dano. Ou seja, dano a materializao do perigo. Ento, se o potencial de dano
elevado, mesmo uma baixa probabilidade pode significar um risco inaceitvel.
A avaliao de segurana deve ser baseada nos riscos potenciais impostos pelo
produto obtido (Fontes et al., 1996). Assim, a avaliao deve levar em considerao as
caractersticas do doador, do recipiente, ou quando apropriado, do organismo parental. Devem
ainda ser avaliadas as caractersticas e a utilizao pretendida do OGM, incluindo a escala e a
freqncia das introdues e consideraes ambientais e de sade.
O manejo dos riscos deve levar em conta as alternativas decorrentes da avaliao de
riscos e, se necessrio, a seleo e implementao de opes de controle apropriadas,
incluindo normas regulatrias. Os danos podem ser diretos ou indiretos, intencionais ou
involuntrios, imediatos ou no. Segundo o Dr. Chris Glidon, espera-se, ao final do processo,
eliminar ou reduzir o risco que possa causar um dano de fato. A diretriz maior a de que o
produto deve ser seguro e sadio para a espcie humana e para o meio ambiente. Portanto, o
impacto de um transgene no ambiente e na sade humana deve ser criteriosamente avaliado
(Glidon, 1999).
Pode-se tambm definer Risco como sendo a medida dos efeitos (injrias, ambientais,
econmicos) de uma ocorrncia em termos de probabilidade e da magnitude de suas
conseqncias. Neste caso, um OGM poderia ser POTENCIALMENTE PERIGOSO, em razo
de apresentar, como propriedade, uma substncia ou processo que causa dano (injria ou
perda). Assim, DANO seria a manifestao de uma substncia ou processo perigoso. Tais
danos podem se Diretos ou Indiretos, Imediato ou Longo prazo, Naturais ou Tecnolgicos e
Intencionais ou Imprevisveis.
Em tese, os riscos no esto relacionados ao que os cientistas sabem, mas ao que
eles no sabem (Caruso, 2006). Ou seja, riscos esto associados a incertezas. Neste mesmo
sentido no contexto da incerteza que viceja a esperana, o juzo e a valorao da
subjetividade, capaz de concretizar o inusitado, segundo Lieber e Romano-Lieber (2003).
J em 1989, pelo menos 15 anos antes da liberaao no meio amniente da primeira
planta transgenica, o tomate Flavr Svr, Tiedje et al. (1989) anteciparam os sete principais
riscos ambientais:
criao de novas pragas e plantas daninhas;
um aumento das pragas j existentes por meio da recombinao gnica entre a planta
transgnica e outras espcies filogeneticamente relacionadas;
a produo de substncias que so ou poderiam ser txicas a organismos no-alvos;
o efeito disruptivo em comunidades biticas e o desperdcio de valiosos recursos
genticos, seguido de contaminao de espcies nativas com caractersticas
originadas de parentes distantes ou de espcies no relacionadas e efeitos adversos
em processos dos ecossistemas;
origem de substncias secundrias txicas aps a degradao incompleta de qumicos
perigosos;
efeito adverso nos processos ecolgicos;
extravagncia de recursos biolgicos valorosos.

Praticamente todos os efeitos adversos previstos ocorreram com os OGMs liberados.
Portanto, no correto dizer que os mesmo so imprevistos, pois os efeitos adversos ou os
danos foram alertados por parte da prpria comunidade cientifica.


Riscos sade humana
A maioria das plantas transgnicas desta primeira gerao de OGMs contm genes de
resistncia a antibiticos, cuja funo possibilitar a seleo das clulas transformadas. O
que os genes de resistncia a antibiticos tem a ver com a sade humana? Nos ltimos 20
anos, mais de 30 novas doenas ocorreram na espcie humana (AIDS, ebola e hepatites,
entre outras). Alm disso, houve o ressurgimento de doenas como a tuberculose, malria,
clera e difteria com muito mais agressividade por parte dos microrganismos patognicos.

63
Paralelamente, houve um decrscimo na eficincia dos antibiticos. Nos anos 40, um
antibitico tinha uma vida til de 15 anos. Nos anos 80, a vida til passou para cinco anos, ou
seja, trs vezes menos. Os estudos comprovam de que tanto a recombinao como a
transferncia horizontal entre bactrias acelerara a disseminao de regies genmicas
destes organismos causadores de doenas, bem como a disseminao de genes de
resistncia a antibiticos (Ho et al., 1998). bem conhecido o exemplo da estreptomicina em
sunos. Aps um ano de aplicao aos animais (1983), genes de resistncia a estreptomicina
estavam presentes nos plasmdeos de bactrias que viviam na garganta e estmago dos
sunos. Um ano mais tarde, bactrias humanas dos familiares que lidavam com estes animais
tambm apresentaram resistncia a estreptomicina. Esta uma prova inequvoca de
transferncia lateral de genes entre bactrias. Em 1990, este antibitico foi retirado de
circulao.
Embora a frequncia de transformao e, consequentemente, a transferncia
horizontal em bactrias extremamente baixa, os genes de resistncia a antibiticos inseridos
em plantas transgnicas, podero ser transferidos para bactrias humanas, o que se constitui
num risco a ser considerado. Tem sido sugerido o desenvolvimento de OGMs sem genes de
resistncia a antibiticos para evitar os riscos acima mencionados. Cabe ento o
aperfeioamento do sistema de seleo tanto via desenvolvimento de outras formas de
seleo ou utilizao de outros genes.
Um segundo tipo de risco relaciona-se com as reaes adversas dos alimentos OGMs
ingeridos, que podem ser agrupadas em duas categorias: alergnicos e intolerantes. Neste
grupo esto os alimentos que causam hipersensibilidade ou alergia. No segundo grupo esto
as alteraes fisiolgicas, como reaes metablicas anormais, toxicidade, reaes
farmacolgicas e idiossincrticas (Finardi, 1999).
Ento faz sentido saber se uma nova variedade transgnica intensifica ou no a
alergia. No caso da Soja RR, os testes realizados no foram suficientes para discriminar as
possveis variaes nas 16 protenas alergnicas desta espcie. Os testes revelaram que
houve um aumento (26,7%) do inibidor de tripsina, tambm alergnico e antinutricional
(Padgette et al., 1996), alm de uma maior reatividade de uma banda relativa a uma protena
alergnica. Segundo a anlise feita por uma pesquisadora independente, Barbara Keeler, a
documentao que a empresa forneceu a FDA demonstra que em um dos experimentos
tambm o teor de lectina, que alergnico, produzido pela Soja RR foi maior (o dobro) que na
convencional. O desafio neste caso sabe quais os tipos de ensaios que fornecem os dados
mais inequvocos sobre alergenicidade.
Existe ainda uma srie de outros riscos sade humana que devem ser analisados com
protocolos adequados. Um deles o efeito txico que um alimento transgnico pode causar
sade humana.

Riscos ao meio ambiente
A avaliao de risco ambiental a avaliao sistemtica dos riscos associados sade
e segurana humana e ambiental. Os procedimentos devem incluir a identificao dos
perigos e a estimativa de suas magnitudes e freqncias de ocorrncia, bem como das
alternativas ao OGM. Como os riscos associados a uma variedade transgnica dependem das
interaes complexas decorrentes da modificao gentica, da histria natural dos
organismos envolvidos e das propriedades do ecossistema no qual o OGM liberado
(Peterson et al., 2000; Wolfenbarger e Phifer, 2000), estes procedimentos devem ser
aplicados em escala ampla, em termos espaciais e sociais (ver Figura 1).
O conhecimento dos riscos tambm indispensvel porque possibilita a elaborao de planos
de seu gerenciamento. O manejo dos riscos um processo que envolve a anlise das
alternativas decorrentes dos resultados alcanados com a avaliao destes. Quando
requerido, o manejo seleciona e implementa opes apropriadas de controle, incluindo normas
reguladoras (Glidon, 1999). Assim, o manejo de riscos deve tambm fazer parte do estudo de
impacto ambiental para fins de licenciamento de atividades com plantas transgnicas.
Na ausncia de efeitos pleiotrpicos, os efeitos diretos do transgene numa planta
seriam razoavelmente previsveis. Quando os bilogos moleculares dizem que foram feitos

64
estudos e no foram detectados efeitos adversos, eles normalmente esto se referindo
primeira das vrias clulas possveis de serem analisadas (Figura 7). Existem tambm
estudos de parcela (segunda clula da Figura 7), associados predominantemente
performance agronmica do OGM, e que, a rigor, no podem ser tomados como estudos de
impactos e riscos ambientais. No h estudos cientficos relacionados a todas as clulas
relevantes desta matriz. Existem sim, relatos cientficos de estudos isolados com algumas
espcies e que sero apresentados mais adiante.


Figura 7. Efeitos diretos e indiretos de variedades transgnicas (OGM) e as interaes
complexas que fazem parte da avaliao de risco ambiental (Adaptado de Peterson
et al., 2000).

A complexidade da avaliao decorrente do fato de que os riscos e os benefcios
associados a uma cultura especfica mudam e tornam-se mais difceis de serem avaliados na
medida que a rea de cultivo aumenta e outros aspectos so considerados. Impactos indiretos
nos ecossistemas so muito mais difceis de investigar, monitorar e, portanto, predizer
(Peterson et al., 2000). Segundo estes autores, esta uma das origens da controvrsia
estabelecida entre os ambientalistas e os bilogos moleculares. Enquanto os primeiros
referem-se aos impactos sociais e nos ecossistemas, os ltimos fazem meno aos testes
feitos com uma ou poucas plantas em laboratrio ou em casa de vegetao.
A complexidade tambm decorrente do fato de que inmeros trabalhos cientficos
demonstraram que o padro de variao fenotpica, sua base gentica e a seleo natural
sobre eles variam em diferentes condies ambientais (Susuki et al., 1986; Ackerly et al.,
2000). O problema da biologia que, em contraste com outros ramos do mundo fsico, nos
quais poucas grandes foras dominam os fenmenos, o organismo vivo resultante de um
grande nmero de caminhos fracos causais determinantes, fazendo com que seja
extremamente difcil proporcionar explanaes completas (Lewontin, 2000). Em seu recente
texto, o autor afirma ainda que um organismo vivo num momento qualquer de sua vida a
conseqncia nica da histria do desenvolvimento que resulta de interaes e determinaes
de foras internas e externas.
Devido aos contextos histricos, polticos e econmicos da biotecnologia seria
apropriado questionar o que vem sendo praticado em termos de avaliao de risco. As
agncias regulatrias no tm utilizado critrios ecologicamente compreensveis para avaliar
os riscos de organismos transgnicos (Peterson et al., 2000). Uma reviso dos pedidos de
liberao para a comercializao de OGM na Comunidade Europia revelou claramente que a
avaliao de risco ambiental no foi feita ou interpretada adequadamente pelos Estados
Membros (Glidon, 1999). A recomendao de bastidores destes experimentos de campo
sugere que est sendo aplicado o ditado popular no olhe, no encontre. Tampouco esta
avaliao de riscos e dos impactos ambientais foi adequadamente feita no Brasil com os
OGMs cuja liberao para cultivo foi solicitada por empresas a CTNBio.
Entre os riscos ambientais, a poluio gentica, por meio da transferncia vertical e da
transferncia horizontal, a ameaa considerada mais importante. Em decorrncia disto,
espcies que adquirirem certos transgenes podero alterar seu valor adaptativo e,

65
conseqentemente, a dinmica de suas populaes e de outras espcies as quais interagem
estar desafiada. Contudo, outros riscos so possveis como efeitos danosos em espcies
no-alvo (aves, minhocas, peixes, entre outros), contaminao de solo e gua, cujas
dimenses tambm so impossveis de prever antes dos estudos a serem realizados (Nodari e
Guerra, 2000a). Do ponto de vista agrcola, a transferncia de genes pode provocar o
surgimento de plantas daninhas e pragas resistentes, bem como variantes genticos, cujas
caractersticas no se pode antecipar. Alm disso, a agrodiversidade, que a diversidade
gentica em cultivo mantida pelos agricultores, poder ser afetada.


Transferncia vertical
Refere-se ao acasalamento sexual entre indivduos sexualmente compatveis,
geralmente da mesma espcie e, raramente, de espcies afins. O acasalamento uma via
para o fluxo gnico, entre plantas da mesma espcie, como entre plantas de diferentes
espcies. Assim, de longa data tm sido observados cruzamentos entre indivduos de
populaes em estado incipiente de especiao ou de espcies aparentadas. Exemplos disso
so os cruzamentos entre o arroz cultivado e o arroz perene, milho e teosinto, um de seus
possveis ancestrais (Doebley, 1990), beterraba cultivada e beterraba no domesticada e
entre espcies cultivadas e inos do gnero das abboras (Wilson, 1990).
Os impactos ecolgicos da transferncia de plen, um mecanismo reprodutivo pelo
qual a introgresso pode ocorrer, dependem da capacidade dos hbridos em sobreviver e
reproduzir. Taxas de sobrevivncia ou de reproduo indicam a oportunidade da introgresso
de transgenes em populaes naturais, dependendo do fluxo gnico subseqente e da
presso de seleo (Wolfenbarger e Phifer, 2000). Estes autores relataram 11 casos de
formao de hbridos entre variedades transgnicas e plantas aparentadas e/ou daninhas.
Para se tornar uma ameaa, como uma planta invasiva, os hbridos precisam ser viveis e
competitivos, alm de frteis quando dependem da reproduo sexual para propagao. Com
base no se conhece hoje, nem todos os hbridos vo atingir a ltima fase.
Os poucos estudos associados introgresso de transgenes e suas conseqncias
ecolgicas em populaes naturais ainda no permitem fazer previses confiveis. Contudo, a
experincia anterior com plantas de lavoura sugere que os efeitos negativos so possveis.
Para doze das treze espcies de maior importncia econmica mundial, a hibridizao com
parentes selvagens contribuiu para a evoluo de algumas espcies de ervas daninhas. Em
alguns casos, os elevados nveis de introgresso a partir de parentes cultivados ou
introduzidos eliminaram a diversidade gentica e contriburam para sua extino (Ellstrand et
al., 1999).
Quando so viveis e havendo fertilidade, mesmo baixa, a sobrevivncia dos hbridos
interespecficos se torna possvel, e estes podem cruzar com plantas de qualquer uma das
duas espcies parentais. Caracteriza-se, ento, o processo de introgresso de genes de uma
espcie para outra. No caso do cruzamento entre canola transgnica e a mostarda silvestre, o
nmero de sementes da segunda gerao do hbrido foi dez vezes maior do que o F
1
.
Algumas plantas descendentes do cruzamento produziram 10 mil sementes e o gene de
resistncia ao herbicida ainda permanecia numa grande quantidade de plantas. Isto
demonstra que a transferncia de genes que condicionam resistncia a herbicidas pode
ocorrer com maior intensidade e facilidade do que se imaginava antes desta descoberta
(Chvre et al., 1998).
Uma vez dentro de populaes silvestres, os transgenes podero tornar estas plantas
mais invasivas e, portanto, potencialmente perigosas para a agricultura ou a biodiversidade
(Fontes et al., 1996). Mas tambm pode ocorrer, segundo as autoras, que a presena do
transgene diminua a adaptao natural, o que tornaria a populao vulnervel extino. No
caso de transferncia de outras caractersticas para outras espcies afins, praticamente nada
pode ser antecipado, devido ausncia de dados. Contudo, se o valor adaptativo de um
hbrido interespecfico for aumentado com a presena deste gene transferido, factvel que tal
gene se mantenha via introgresso.

66
O nmero dce contaminaes de variedades crioulas ou mesmo convencionais por
transgenes aumenta todo o ano. Um conjunto de organizaes da sociedade civil vem
acompanhando e registrando estas contaminaes
(http://www.gmcontaminationregister.org). Entre 1997 e 2006 ocorreram 107 contaminaes
genticas; 24 cultivos ilegais e 8 efeitos colaterais agrcolas negativos. Destes 144 casos
comprovados, envolveram 44 pases, sendo a media de 14,2 ao ano. O mais espantoso que
35% ocorreram com milho, que um alimento nobre!
Diante disso comearam as preocupaes com a coexistncia. A coexistncia,
segundo a Diretiva 556/03/ECC, significa a possibilidade efetiva, para os agricultores, de
escolherem entre o modo de produo convencional ou biolgico, ou ainda a produo de
culturas GM, no respeito das obrigaes legais em matria de rotulagem ou de normas de
pureza. A rigor, impossivel ocorrer a coexistncia sem contaminao.
A CTNBio baixou a Resoluao Normativa n4, de 16 de agosto de 2007 e publicada no
DOU, n163 de 23/08/2007, p.19. Nela esta estabelecido que Para permitir a coexistncia, a
distncia entre uma lavoura comercial de milho geneticamente modificado e outra de milho
no geneticamente modificado, localizada em rea vizinha, deve ser igual ou superior a 100
(cem) metros ou, alternativamente, 20 (vinte) metros, desde que acrescida de bordadura com,
no mnimo, 10 (dez) fileiras de plantas de milho convencional de porte e ciclo vegetativo
similar ao milho geneticamente modificado (art. 2).
Ironicamente ou intrigantemente, no mesmo dia a CTNBio aprovou o evento MON810,
milho transgenico, por meio do Parecer Tcnico n 1.100/2007, de 16 de agosto de 2007.
Nele, est escrito que Comparando-se as concentraes a 1 m da cultura fonte sob ventos
baixos a moderados estimou-se que, aproximadamente, 2% de plen so anotados a 60 m,
1,1% a 200 m e 0,75-0,5% a 500 m de distncia.
Ou seja, a RN n 4 totalmente ineficiente para garantir a coexistncia sem
contaminaao caso o que est contido no prprio parecer da CTNBio, o pollen do milho deve
se disseminar pelo menos a 500 m de distncia.

Tambm a transgenia ainda pode afetar o processo reprodutivo em plantas. Um
aumento da taxa de fecundao cruzada foi verificado em Arabidopsis thaliana. Bergelson et
al. (1998) constataram um aumento de 20 vezes na freqncia de fecundao cruzada em
plantas transgnicas comparativamente s plantas no-transgnicas.


Tabela 8. Exemplos selecionados de transferncia de genes de resistncia a herbicida de
plantas transgnicas para suas plantas daninhas.
Cultura Planta daninha Herbicida Autor
Canola Mostarda silvestre Basta Chvre et al., 1998
Trigo Aegilops cylindrica Round-up Steven et al.,1998
Sorgo Johnson grass Round-up Arriola e Ellstrand,
1998
Beterraba Beterraba no domesticada Round-up New Scientist,
21/10/2000
Agrostis stolonifera A. canina, A. capillaris, A.
castellana, A. Gigantea e A.
Pallens.
Round-up Wipff e Fricker, 2000

As plantas daninhas resistentes a herbicidas tambm podem se originar pela presso
de seleo sobre os recombinantes cada vez mais tolerantes, gerados naturalmente, ao
herbicida aplicado. Dentre as mais de 100 plantas resistentes a herbicidas, trs delas so
plantas daninhas resistentes a formulaes comerciais base de glifosato: poaia-branca
(Richardia brasiliensis), trapoeraba (Commelina virginica) e erva-quente (Spermacoce latifolia)
(CTNBio, 1998).
A prpria soja RR se tornou uma planta invasora, porque os gros que ficam na
susperficie do solo aps a colheita germinam e so resistentes ao glifosato.Isto est obrigando

67
os agricultores a utilziar outros herbicidas igualmente ou mais txiucos que o glufosato. O fato
de empresas produtoras do herbicida 2,4-D terem solicitado registro para uso deste produto
visando p controle da soja RR como planta invasoa a demonstrao do fato.

Transferncia horizontal ou lateral (TH)
Quando existe transferncia de genes entre espcies filogeneticamente diferentes, na
ausncia do acasalamento sexual, configura-se a transferncia lateral ou transferncia
horizontal. Neste caso, o material gentico transmitido de uma espcie para outra,
provavelmente com auxlio de vetores (plasmdios, transposons e vrus). Elementos similares
a transposons so veculos para cortar e ligar DNA genmico de um organismo noutro. Vrus
tambm poderiam ser responsveis pela transmisso de genes entre eucariotos. Na verdade,
os mecanismos de transferncia lateral so pouco estudados e, portanto, praticamente
desconhecidos.
Diversos casos de absoro de DNA por parte de clulas eucariotas foram tambm
registrados (Tappeser et al., 1999). Num deles, foi demonstrado que o DNA fornecido na
alimentao de ratos no s no era totalmente destrudo no trato gastrointestinal, mas
tambm poderia alcanar a corrente sangnea e temporariamente ser detectado nos
leuccitos ou clulas do fgado. Outros exemplos de deteco de DNA de eucariotos em
bactrias e animais, como DNA de milho transgnico em bactrias de intestino de abelhas ou
DNA de milho transgnico em vrios rgos de galinhas, esto sendo noticiados pela
imprensa, mas necessitam aparecer em publicaes cientficas ou serem validados
cientificamente. A transferncia horizontal bem mais conhecida em bactrias, sendo os
eventos menos comuns em animais e no homem comparativamente a plantas e
microrganismos.
A filogenia de plantas indica que a TH de genes est envolvida no processo evolutivo.
A fuso endosimbitica a mitocndria e o cloroplasto fundidos com a clula nucleada em
plantas seria um caso especfico de TH. Os genes citocromo c e gapdhA (gliceraldeido-3-
fosfato-desidrogenase) devem ter sido transferidos de microrganismos para plantas (Syvanen,
1994). A transfernciade material gentico de Agrobacterium tumefasciens para plantas
tambm um exemplo bem ilustrativo. A edio de 21/05/99 da revista Science (1999) inclui
inmeros exemplos de transferncia horizontal de genes. Assim, genes humanos j foram
detectados em Mycobacterium tuberculosis, a bactria que causa a tuberculose.
Experimentalmente, Nielsen et al. (2000) verificaram que o DNA de beterraba
transgnica pode ser transferido para Acinetobacter sp. Strain BD413, uma bactria de solo.
Neste caso, a TH ocorreu de um extrato celular para plasmdeos de bactrias. Casos de
transferncia via recombinao homloga so mais freqentes do que se imaginava (Nielsen
et al., 1998).
Um outro estudo recente demonstrou tambm que a promiscuidade na transferncia de
DNA entre plantas maior que se suspeitava. O intron do grupo I do genoma mitocondrial de
plantas vasculares, que est localizado no gene coxl da espcie Peperomia polybotrya, teria
sido adquirido por transferncia horizontal (ou lateral) de um fungo. Analisando o DNA de 335
plantas de diferentes gneros, Cho et al. (1998) verificaram que este intron est amplamente
disperso nos genes cox1 das angiospermas. O referido intron est presente em 48 gneros
diferentes, a partir de 32 eventos independentes de transferncia horizontal. Esta constatao
revela a grande freqncia das trocas de material gentico na natureza e traz preocupaes,
em especial quanto possvel interao entre plantas transgnicas e outros vegetais.
Uma pergunta comumente feita relaciona-se com as conseqncias da introduo em
plantas de genes (intactos ou modificados) originados de vrus patognicos. Trocas de
material gentico tambm podem ocorrer entre plantas e vrus. A primeira evidncia
experimental sobre a recombinao entre uma planta transgnica contendo genes virais e um
vrus foi obtida por Greene e Allison, em 1994, embora este tipo de recombinao j fosse
conhecido desde os anos 80. A introduo de genes que codificam a capa protica originada
de vrus patognicos, ou outras seqncias virais, utilizada para conferir s plantas
resistncia aos prprios vrus doadores. difcil estabelecer as conseqncias, caso este
gene seja transferido para outras plantas. Contudo, um vrus poder infectar um planta

68
transgnica que tem a protena do encapsulamento de outro vrus. Neste caso ocorrer uma
transencapsidao, cujas conseqncias so totalmente desconhecidas.
Recentemente tambm, um estudo com arroz transgnico, conduzido no John Innes
Institute, da Inglaterra, corroborou a evidncia de que o promotor do vrus do mosaico-da-
couve-flor (CaMV), que tambm est presente na maioria das plantas transgnicas e nas suas
prognies, um stio de alta freqncia de recombinao gnica. Recombinao gnica a
troca de material gentico entre duas molculas de DNA, altamente similares geneticamente,
que pode resultar numa terceira molcula diferente das duas parentais, e, portanto, um
variante. O mais intrigante, entretanto, que os autores verificaram que a maioria dos eventos
era do tipo de recombinao ilegtima ou no-homloga e no requeriam uma similaridade
substancial na seqncia de bases. Tais eventos podiam ocorrer mesmo na ausncia de
genes virais (Kohli et al., 1999). Alm disso, a seqncia de bases do promotor do CaMV,
usado em vrias plantas transgnicas, como a soja e o milho, similar a regies de vrus
patognicos espcie humana. Desta forma, no se pode descartar a possibilidade de
recombinaes entre o transgene e outros vrus, resultando em novas combinaes genticas,
cujas propriedades no so conhecidas, mas que necessitam ser estudadas antes do cultivo
em larga escala de plantas que contm estas seqncias. A priori, no se pode descartar,
ento, que a inseroinsero de seqncias virais em plantas poder tornar os vrus mais
promscuos e com isto provocar mais doenas em plantas.
Embora no se conhea a magnitude da contribuio da engenharia gentica para a
transferncia horizontal, possvel levantar a hiptese de que o cultivo em larga escala de
plantas transgnicas deve favorecer a TH. Geralmente, as plantas transgnicas contm
elementos mediadores da transformao in vitro, ou parte deles, e tambm da TH, como
plasmdeos, transposons e vrus. Os vetores utilizados para a obteno de plantas
transgnicas freqentemente apresentam na construo quimrica origem de replicao,
seqncias de transferncia, promotores fortes e genes de resistncia a antibiticos. Todos
estes elementos facilitam a recombinao e a transferncia de genes. Plasmdeos e vrus
quimricos esto sujeitos a instabilidades estruturais, o que facilita tambm a recombinao
(Ho et al., 1998). Na natureza, a poluio com metais pesados pode se constituir em fator
benfico para a transferncia de genes. Como parte das seqncias introduzidas so
homlogas a muitos procariotos, a transferncia de material gentico para eles via
recombinao factvel. Dependendo das seqncias introduzidas na planta transgnica,
haver uma maior ou menor probabilidade de favorecimento para a TH.
Outro aspecto importante est relacionado com a freqncia de ocorrncia da TH.
Embora, algumas estimativas sejam baixas, como 2x10
-17
, o nmero de cpias em cultivo
poder ser muito alto. O fato de que uma planta pode conter mais de dois trilhes de clulas, e
um hectare de soja mais de 300 mil plantas, permite supor a probabilidade da existncia de
mais de 1,2 x 10
-18
de cpias por hectare, de um transgene. Considerando o cultivo em pelo
menos cinco milhes de hectares, no difcil concluir que uma ou mais recombinaes
podem de fato ocorrer, mesmo porque, a probabilidade de sua ocorrncia, embora baixa,
finita, ou seja, tem um valor que influenciado por vrios fatores.
De crucial importncia tambm o efeito individual de cada transgene. Na tecnologia
denominada de terminator, os embries contidos nas sementes a serem colhidas pelos
agricultores so defeituosos. Um dos componentes do sistema a enzima recombinase, a
qual tem o potencial de misturar genomas. Esta foi a concluso a que chegaram Schmidt e
colegas (2000). A recombinase Cre parte do stio especfico de recombinao Cre/lox,
originalmente isolado do bacterifago P1. Cre catalisa a recombinao entre dois stios lox,
retirando qualquer pedao de DNA entre ambos. Estes stios 'ilegtimos' freqentemente
carregam pouca similaridade em relao ao elemento lox. No h dados sobre o
reconhecimento ilegtimo em animais e plantas. Segundo os autores, altos nveis de
expresso de Cre nas espermtides de ratos transgnicos heterozigotos levam a 100% de
esterilidade em machos, mesmo na ausncia dos stios lox. A esterilidade seria causada pela
quebra e reunio de DNA em stios inapropriados. Embries fertilizados por estes espermas

69
no passam do estgio de quatro clulas. Estes resultados indicam que Cre tem
conseqncias patolgicas em animais concluram os autores.
So duas, ento, as principais implicaes da TH. A primeira refere-se maior
probabilidade de transferncia horizontal de genes a partir de plantas transgnicas
comparativamente s variedades tradicionais. A segunda refere-se ao fato de que os genes
com potencial de disseminao podem dar vantagem seletiva aos organismos receptores, o
que poder alterar dramaticamente a dinmica das populaes e a paisagem. Como ainda
no possvel determinar a probabilidade de um evento de TH ocorrer, bem como suas
conseqncias, torna-se praticamente impossvel fazer qualquer previso realstica na
ausncia de novos estudos.

Transferncia horizontal em bactrias
Estudos comprovaram que a recombinao e a transferncia horizontal entre bactrias
aceleram a disseminao de regies genmicas destes organismos causadores de doenas,
bem como a disseminao de genes de resistncia a antibiticos (Ho et al., 1998). bem
conhecido o exemplo da estreptomicina em sunos. Aps um ano de aplicao deste
antibitico em animais (1983), genes de resistncia estreptomicina estavam presentes em
bactrias que viviam na garganta e estmago dos sunos. Um ano mais tarde, bactrias
humanas dos familiares que lidavam com estes animais tambm apresentaram resistncia
estreptomicina. Esta uma prova inequvoca de transferncia lateral de genes entre bactrias.
Em 1990, este antibitico foi praticamente retirado de circulao porque j no era mais
efetivo.
A maioria das plantas transgnicas desta primeira gerao de OGMs contm genes de
resistncia a antibiticos, cuja funo possibilitar a seleo das clulas transformadas.
Embora a freqncia de transformao e, conseqentemente, a transferncia horizontal em
bactrias seja extremamente baixa, os genes de resistncia a antibiticos inseridos em
plantas transgnicas podero ser transferidos para bactrias humanas, o que se constitui num
risco a ser considerado.
A relao entre os genes de resistncia a antibiticos e a sade humana est no fato
de que nos ltimos 20 anos, mais de 30 novas doenas ocorreram na espcie humana (AIDS,
ebola e hepatites, entre outras). Alm disso, houve o ressurgimento de doenas como a
tuberculose, a malria, a clera e a difteria com muito mais agressividade por parte dos
microrganismos patognicos. Paralelamente, houve um decrscimo na eficincia dos
antibiticos. Nos anos 40, um antibitico tinha uma vida til de 15 anos. Nos anos 80, a vida
til passou para cinco anos, ou seja, trs vezes menos (Ho et al., 1998).
A transferncia horizontal de material gentico entre diferentes bactrias
relativamente comum. Sendo assim, o desenvolvimento de OGMs sem genes de resistncia a
antibiticos pode evitar os riscos acima mencionados.
Ameaas diretas aos componentes da biodiversidade As ameaas aos componentes da
biodiversidade so mltiplas, pois, em um ecossistema devem ser considerados no somente
os organismos vivos, mas tambm os processos ecolgicos.
Um trabalho que causou grande impacto na comunidade cientfica avaliou o efeito do
plen de milho transgnico em lagartas da borboleta monarca (Danaus plexippus). A taxa de
mortalidade destas lagartas atingiu 44% quando se adicionaram ao seu alimento natural folhas
de Asclepias curassavica, plen de uma variedade de milho transgnico, que contm um gene
de Bacillus thuringiensis (Bt) que codifica para uma toxina, que txica a vrios insetos.
Entretanto, todas as lagartas que receberam plen de milho no-transgnico ou nenhum
plen, sobreviveram (Losey et al., 1999). O trabalho recebeu crticas metodolgicas, porm,
um ano depois, resultados semelhantes foram obtidos em experimentos no campo. Neste
caso, o plen das variedades de milho transgnicas KnockOut (evento 176) e YieldGard (Bt
11), ambos da Novartis Seeds, tambm provocou mortalidade (Hansen Jesse e Olbrycki,
2001).
Tambm se conhece pouco sobre as possveis alteraes na associao entre plantas
e fungos micorrzicos. O primeiro estudo sobre os exudatos na rizosfera de plantas
transgnicas foi publicado recentemente (Saxena et al., 1999). Nesse trabalho observou-se

70
que as toxinas inseticidas Bt podem permanecer ativas no solo, onde se ligam a argila e
cidos hmicos. Mesmo ligadas a estes componentes do solo, as toxinas mantm suas
propriedades inseticidas e so protegidas contra a degradao por microrganismos porque
esto ligadas s partculas do solo, onde podem persistir por pelo menos 234 dias. Quais so
as implicaes destes fatos?
Uma reviso recente feita por Wolfenbarger e Phifer (2000) assinala nove estudos
focalizados no perigo de variedades transgnicas sobre organismos no alvo, incluindo os j
mencionados. Em um tero deles, nenhum efeito negativo foi observado nas caractersticas
avaliadas. Os resultados revelaram que as variedades transgnicas causaram maior
mortalidade e diminuram a viabilidade de ovos e a longevidade dos adultos de insetos no
alvos, alm de diminuir a diversidade bacteriana na rizosfera. Como conseqncia, a taxa de
decomposio dos restos culturais e dos nveis de carbono e nitrognio poder diminuir e
afetar a fertilidade do solo.
Assim, a produtividade dos cultivos poder decrescer em face da diminuio da
diversidade dos microrganismos de solo.
Um dos aspectos relevantes na atualidade a preservao da identidade do produto
como requisito de qualidade. No se trata apenas de segregao, mas de manter a identidade
de um produto desde sua origem at o consumo. Contudo, na agricultura, esta preservao de
identidade est longe de ser atingida. Nem a segregao simples pode ser garantida, mesmo
por pases como Estados Unidos. ilustrativo o caso do milho transgnico StarLink (da
Aventis CropScience) um tipo de Bt que contm o gene Cry9C, aprovado pela Environmental
Protection Agency (EPA) para alimentao animal mas no para consumo humano. Este milho
contm uma protena (Cry9C) que pode causar reaes alrgicas em humanos, uma vez que
ela no foi quebrada imediatamente nos testes de digesto. Tanto gros quanto subprodutos
foram misturados com gros no-transgnicos, conforme anlise de produtos alimentcios de
consumo humano. Alm disso, houve tambm a contaminao de colheitas que deveriam ser
no-transgnicas devido disseminao do plen.
No s o cultivo de variedades melhoradas no-transgnicas, mas a agrodiversidade,
que pode ser definida como a diversidade de espcies agrcolas, composta de variedades
crioulas mantidas pelos agricultores, tambm pode ser ameaada pelo cultivo dos
transgnicos. Na anlise dos riscos est sendo ignorada uma realidade fundamental: o plen
de milho pode ser carregado pelo vento at 9,6 km. Segundo o professor Walter Fehr,
melhorista da Iowa State University, "no somente o que voc faz. tambm o que seu
vizinho faz", ressaltando que agricultura vizinhana, quando se trata de identificao,
segregao e rotulagem de cultivos transgnicos. Com esta mobilidade do plen, uma simples
lavoura de transgnicos pode contaminar vrias outras no-transgnicas, numa rea
relativamente grande. Como decorrncia, separar os agricultores em duas classes, uma que
produz transgnicos e outra que no os cultiva, no ajuda muito (Washington Bureau,
01/10/2000). Este alerta corroborado por vrios episdios de contaminao de lavouras de
milho com plen de milho transgnico. Alguns destes casos esto sendo analisados pela
justia americana.
Em diversos municpios do Sul do Brasil, esto sendo organizadas anualmente Feiras
de Sementes. Na segunda edio de uma delas, realizada em 15 de julho de 2000 em Porto
Unio (PR), 49 representantes de comunidades situadas em 13 municpios expuseram
amostras de 41 variedades crioulas de milho e 46 de feijo, para citar apenas duas das 51
espcies identificadas na referida feira. Surpreendentemente, formas de teosinte tambm so
mantidas pelos agricultores daquela regio. Assim como esta, uma ampla diversidade de
espcies e formas dentro de espcies exposta ano a ano nestas feiras de sementes.
Ensaios com variedades crioulas feitas por tcnicos da Emater/RS, em David Canabarro,
revelaram que seu potencial chegou a mais de seis toneladas por hectare (Dados no
publicados). Alm do rendimento, estas variedades crioulas contm uma ampla gama de
caractersticas, com alta variabilidade gentica, estando continuamente submetidas ao
processo evolutivo e gerando, anualmente, novas recombinaes. Esta agrodiversidade deve
ser considerada nas avaliaes de riscos ambientais. O mnimo que se pode fazer informar

71
aos agricultores o que poder acontecer com seus materiais, caso transgnicos sejam
cultivados nas proximidades e levar em considerao a opinio deles.
Nas regies de ocorrncia natural de alta diversidade gentica de uma espcie ou
espcies afins, como o caso de algodo ou amendoim no Brasil, o cultivo de plantas
transgnicas destas espcies merece anlise mais rigorosa. No Mxico, por exemplo, ainda
no foi liberado o cultivo comercial de milho transgnico, devido existncia de extensas
reas com populaes ancestrais e parentes silvestres da espcie. O Brasil ainda bero de
vrias espcies cultivadas ou apresenta regies com alta variabilidade gentica nas
populaes crioulas ainda em cultivo, situao esta que requer muita cautela. Como avaliar
adequadamente este tipo de risco sem dvida um grande desafio.
A determinao de riscos de plantas transgnicas que contm inseticidas complexa.
No se conhece ainda profundamente o efeito destas sobre insetos ou outros organismos
benficos. Tampouco, os poucos estudos sobre pssaros ou outros animais que se alimentam
de insetos que se alimentam de plantas transgnicas no proporcionam um conhecimento
amplo do assunto.

Riscos socioeconmicos, com nfase na agricultura
Dentre eles, os mais relevantes seriam o aumento da populao de pragas e
microrganismos resistentes e/ou patognicos, o aumento ou promoo de plantas daninhas
resistentes a herbicidas, a contaminao de variedades crioulas mantidas pelos agricultores, a
contaminao de produtos naturais como o mel, a diminuio da diversidade em cultivo com o
aumento da vulnerabilidade gentica, a dependncia dos agricultores a poucas empresas
produtoras de sementes, produtividade e os preos ainda indefinidos.
Um fato inquestionvel: os insetos que hoje so susceptveis ao Bt, no futuro, sero
resistentes ao Bt. Resta saber em quanto tempo. Se houver uma grande rea plantada com
variedades transgnicas resistentes a um inseto, somente os resistentes sobrevivero,
gerando prognies recombinantes, que eventualmente apresentaro maior nvel de resistncia
toxina. Aps vrios ciclos de recombinao, devero aparecer insetos resistentes ao gene
Bt. No caso de esta resistncia ser condicionada por genes dominantes, a velocidade do
aumento da freqncia dos alelos de resistncia extraordinariamente maior,
comparativamente quela observada para alelos recessivos (Figura 8; Crow, 1986). Com isto,
cria-se uma superpraga, como j ocorreu com o uso de agrotxicos. O fato de que a
resistncia da lagarta European corn borer (Ostrinia nubitalis) s formulaes comerciais de Bt
(ex: Dipel) seja controlada por um gene parcialmente dominante (Huang et al., 1999) indica
que o sistema de refgio s ser efetivo por poucos anos, porque a maioria da prognie dos
insetos ser resistente toxina e, portanto, atacar as variedades Bt. O que de fato
acontecer com a freqncia dos insetos resistentes, alvos e no-alvos, nas condies
brasileiras, difcil de prever.















Figura 8. Evoluo da freqncia de um alelo de resistncia (p) quando recessivo (h=1),
dominante (h=0) ou quando existe co-dominncia. (h=1/2). Para esta simulao, o indivduo deve
estar sob presso de seleo e o coeficiente de seleo deve ser igual a 1, ou seja, no caso de
insetos susceptveis, eles morrem aps se alimentarem de tecidos de uma planta que contm a
toxina de Bt por exemplo. Para aquelas pragas cujos genes de resistncia s toxinas so
recessivos, o aumento da freqncia ocorrer lentamente. O contrrio ocorrer com aquelas
pragas que carregam genes dominantes para a resistncia (Adaptado de Crow, 1986).


72

O sistema de refgio apregoado como uma prtica de manejo, que retardaria o
aumento na freqncia de insetos resistentes, consiste no cultivo de uma pequena faixa com
variedades susceptveis, o que permitiria o acasalamento entre insetos susceptveis e
resistentes. Uma das premissas para que o sistema seja duradouro, que a resistncia dos
insetos toxina Bt deve ser recessiva. Em caso contrrio, rapidamente os alelos de
resistncia sero prevalentes. Com o aumento rpido da freqncia de insetos resistentes ao
Bt, o uso atual de formulaes comerciais base de Bt em lavouras orgnicas fica
comprometido, como tambm a produo de produtos com este tipo de inseticida,
considerado muito menos txico que os demais.

O aumento dos custos de produo j uma realidade em vrios pases. Na China, por
exemplo, a estratgia de refgio para algodo Bt transgnico no foi empregada pelos
agricultores. Como resultado, as pragas secundrias se tornaram importantes e o custo com
inseticidas aumentou a tal ponto de que a rentabilidade das tecnologias convencional ou
transgnica se equivalem cinco anos aps sua implementao (Wang et al., 2006). O aumento
do uso dos agrotxicos nos cultivos transgnicos foi decorrente da alterao do status de
algumas pragas que eram secundrias e passaram a ser primrias e predominantes.
Sobre a rpida evoluo de pragas secundrias tornarem-se primrias na China, a
empresa atribui o fato inexistncia de um programa de manejo de insetos. Segundo o
mesmo artigo, em certas regies da China, o custo com inseticidas em lavouras de algodo
Bollgard aumentou a tal ponto que a rentabilidade das tecnologias convencional ou
transgnica se equivaleram cinco anos aps sua implementao.

A soja RR tambm est perdendo a competitividade no Brasil. Pela primeira vez, os
produtores de soja convencional tiveram mais rentabilidade do que os de soja transgnica. A
Confederao Nacional da Agricultura (CNA) revelou que, este ano, a comercializao da
saca de soja convencional dever render ao produtor R$ 0,27 a mais do que a da
convencional no Mato Grosso. A explicao para a inverso o aumento de 46,2% no preo
do glifosato, principal herbicida utilizado na cultura. No Brasil, a Monsanto praticamente a
nica empresa a comercializar o glifosato, com cerca de 90% do mercado. De acordo com a
CNA, na Argentina, o produto custa entre US$ 2 e US$ 2,50 o litro, mas no Brasil, embora
comercializado pela mesma empresa, chega a US$ 5 o litro. Por isso, os produtores preferem
import-lo. Apesar do aumento do custo, vamos insistir na produo do transgnico. No
podemos perder este mercado, porque h oportunidades para os dois produtos - disse Fbio
de S Meirelles, da CNA. Com o aumento do preo, o custo de produo ficou extremamente
alto - disse Meirelles. O preo do litro do glifosato no Mato Grosso passou de de R$ 8 para R$
11,63 o litro na safra 2007/2008, o que gerou uma acrscimo de 23% nas despesas em
lavouras transgnicas e de 14,3% nas convencionais. O resultado foi um aumento de 7,5% no
custo operacional da soja geneticamente modificada e de 3,8% no da convencional. (Cludia
Dianni Viviane Monteiro - Jornal do Brasil 19/12/2007)

A transgenia tambm pode levar ao aumento de pragas de solo. Na cultivar
transgnica de algodoeiro, Paymaster 1560 BG, resistente ao glifosato, observou-se um
aumento na susceptibilidade ao nematide-das-galhas (Meloidogyne incognita Kofoid e
White), quando comparado com o parental no-transgnico Paymaster 1560 (Colyer et al.,
2000). Embora um nmero limitado de cultivares tenha sido avaliado, os dados demonstram
diferenas na susceptibilidade ao nematide das galhas entre algumas cultivares transgnicas
e seus parentais no-transgnicos. O resultado deste trabalho tambm indica a necessidade
de estudos sobre a reao de plantas transgnicas s pragas e doenas antes da liberao
para cultivo.

A dinmica das populaes de microrganismos de solo tambm poder ser afetada
pelo cultivo de plantas transgnicas. O uso de glifosato combinado ou no com outros
herbicidas nas doses recomendadas sobre o cultivo de Soja RR apresentou maior incidncia

73
de fusarium nas razes uma semana aps a aplicao, comparativamente soja no-
transgnica que no recebeu (Kremer et al, 2000). Os testes que foram realizados no campo
no perodo 1997-2000 revelaram que a freqncia de fusarium nas razes aumentou de 0,5 a
5 vezes entre a segunda e a quarta semana aps a aplicao dos herbicidas. O fusarium
causa a sndrome da morte repentina (SDS) em soja.
O artigo More "Funny" Honey, publicado no FOEE Biotech Mailout, aborda aquesto da
perda de status do mel como alimento sadio e natural, como resultado da poluio causada
pelos OGM. Anlises efetuadas no mel indicaram a presena de plen de canola transgnica
tolerante a um herbicida. Este mel, coletado na Inglaterra em 1999 e analisado no Austrian
Federal Laboratory em Vienna revelou a presena de DNA do gene de resistncia ao mesmo
herbicida. Os apicultores do Canad tambm esto tendo problemas com a comercailizao
do mel, pois anlises feitas na Europa detectaram contaminao com plen de canola de
variedades transgnicas. Agora, diante das novas normas da Europa, os apicultores se
sentem sem o menor poder de reao e os preos do mel (contaminado) despencaram.
Ainda so desconhecidos outros efeitos dos transgnicos sobre as abelhas, pois isto
depender das protenas codificadas pelos genes engenheirados. Contudo, dentre os
trabalhos efetuados em abelhas com inibidores de proteases, cabe destacar um que
demonstrou seus efeitos adversos quando abelhas foram alimentadas com acar contendo
os referidos inibidores (Pham-Delgue M.-H., 1997). Este inibidores podero se converter em
estratgias de resistncia a insetos, como j foi demonstrado em canola. Neste caso o efeito
sobre abelhas poder ser grande. Entretanto, ainda no est clara a associao entre a
concentrao dos inibidores e a magnitude dos efeitos. O autor verificou ainda que plen de
canola e soja transgnicas encurtou o ciclo de vida e alterou comportamentos associados ao
olfato e habilidade de apreender de abelhas melferas.
Os resultados dos primeiros experimentos sobre os efeitos da incluso de derivados de
OGM na rao animal feitos por pesquisadores independentes comeam a ser analisados.
Segundo o jornal britnico The Guardian, de 04/11/2000, os pesquisadores Steve Kestin e
Toby Knowles, da University of Bristol, verificaram que a mortalidade de frangos alimentados
com milho transgnico foi praticamente o dobro (7,14%) comparativamente mortalidade de
frangos tratados com milho convencional (3,57%). Os cientistas questionaram ainda os
mtodos e concluses dos estudos da Aventis submetidos para anlise das autoridades
britnicas visando liberao do milho transgnico. Contudo, estes resultados ainda devem
ser validados cientificamente, pois este tipo de experimento deve ser efetuado para diferentes
combinaes de nutrientes, raas e condies climticas.
Em resumo, s ameaa a diversidade biolgica decorre da liberao de um OGM devido
as propriedades do transgene ou de sua transferncia e expresso em outras espcies. A
adio de um novo gentipo numa comunidade de plantas pode proporcionar vrios efeitos
indesejveis: deslocamento ou eliminao de espcies no domesticadas, exposio de
espcies a novos patgenos ou agentes txicos, poluio do pool gnico, eroso da
diversidade gentica e interrupo da reciclagem de nutrientes e energia.
As alternativas s plantas transgnicas - As principais demandas dos mais de seis
milhes de pequenos agricultores familiares no Brasil, os quais, historicamente, ainda
produzem a maior parte dos alimentos que chega mesa dos consumidores, no esto
associadas necessidade das plantas transgnicas, mas, sim, necessidade de uma poltica
agrcola e agrria que vise sustentabilidade e rentabilidade de suas atividades. Assim, a
necessidade e a urgncia das plantas transgnicas para a agricultura brasileira uma falsa
questo. importante mencionar que as plantas transgnicas desenvolvidas at o presente
momento no atendem s necessidades da pequena propriedade familiar, ainda
preponderante no pas. As evidncias cientficas da utilizao de plantas transgnicas com
caractersticas de resistncias a herbicidas (por exemplo, RR) ou portadoras de biocidas (por
exemplo, Bt) na produo de commodities agrcolas nas grandes propriedades revelam o
aumento na freqncia de plantas invasoras e insetos resistentes aos transgenes, implicando
a vida curta dessas tecnologias. Isto gerar demandas de novas tecnologias (variedades
transgnicas e/ou agrotxicos), o que aumentar o grau de dependncia dos agricultores. A

74
avaliao de risco deve necessariamente conter informaes sobre outras alternativas que
poderiam ser utilizadas, bem como um comparativo entre os riscos das diversas solues.
Assim, preciso avaliar simultaneamente alternativas sustentveis do ponto de vista
agrcola e ambiental. Uma delas seria a agrodiversidade, termo empregado para definir a
diversidade gentica (intra-especfica) e a diversidade de espcies (interespecfica) em cultivo
nas propriedades agrcolas. Recentemente, pesquisadores chineses demonstraram que a
heterogeneidade das culturas uma alternativa possvel vulnerabilidade das monoculturas
s doenas. Observou-se que variedades de arroz susceptveis doena bruzone, cultivadas
em mistura com variedades resistentes a esta doena, apresentaram 89% de acrscimo na
produtividade e uma reduo de 94% de severidade dessa molstia comparativamente
monocultura (Zhu et al., 2000). O sucesso dessa tcnica, que a simples mistura de
diferentes variedades, foi to significativo que, no segundo ano, no foi necessria a aplicao
de fungicidas. Os resultados mostraram que a diversificao intra-especfica das culturas
proporciona um ambiente adequado para o controle de doenas que pode ser efetivo em
grandes reas, podendo contribuir para a sustentabilidade da produo agrcola.
O pas que detm a maior diversidade de espcies vegetais certamente deve ter um nmero
de espcies comestveis e agricultveis capaz de proporcionar diferentes dietas balanceadas
para as diferentes populaes, respeitando-se sua cultura e suas necessidades. Vitamina A
ou caroteno, por exemplo, so encontrados em dezenas de espcies comestveis.
O fato que as plantas transgnicas esto sendo consideradas como a nica maneira de
aumentar a competitividade. Mas anlises comparativas com outras matrizes de produo
agrcola ainda no foram feitas.

A Pertinncia dos Estudos de Impacto Ambiental
Embora a matria seja complexa, h o entendimento de que estes estudos so necessrios
conforme determinam o artigo 225 da Constituio Federal, a Lei Ambiental e a Resoluo
237/97 do Conama, o que no teria sido observado pela Comisso Tcnica Nacional de
Biossegurana - CTNBio - no caso do pedido de liberao da Soja RR em 1998. Utilizando as
competncias inclusas no art. 2 do Decreto 1.752, que diz no item XIV exigir como
documento adicional, se entender necessrio, Estudo de Impacto Ambiental (EIA) e respectivo
Relatrio de Impacto no Meio Ambiente (RIMA) de projetos e aplicao que envolvam a
liberao de OGM no meio ambiente, alm das exigncias especficas para o nvel de risco
aplicvel, a CNTBio decidiu pela sua no exigncia. Com base no artigo 225 da Constituio
Federal, a sentena judicial exarada pelo Juiz Antonio Prudente exige o Estudo de Impacto
Ambiental -EIA - acompanhado do Relatrio de Impacto no Meio Ambiente - RIMA - como
condio indispensvel para o plantio em escala comercial da Soja RR.
No bastasse isto, a Conveno sobre a Diversidade Biolgica - CDB - estabeleceu no
Art. 14 que trata da Avaliao de Impacto e Minimizao de Impactos Negativos, que cada
Parte Contratante, na medida do possvel e conforme o caso, deve estabelecer procedimentos
relacionados com a avaliao de impacto ambiental de projetos que possam ter sensveis
efeitos negativos na diversidade biolgica, a fim de evitar ou minimizar tais efeitos e, conforme
o caso, permitir a participao pblica nesses procedimentos.
Uma srie de perguntas relacionadas com as conseqncias da introduo em plantas
de genes originados de outros organismos, incluindo os patognicos (como genes de vrus ou
parte deles) ainda permanece sem resposta. Um dos desafios, ento, o estabelecimento de
um conjunto mnimo de protocolos e termos de referncia que devero nortear os testes para
a obteno de informaes adequadas durante a realizao da avaliao de riscos.
Assim, a avaliao de riscos deve fazer parte do estudo de impacto ambiental de uma
planta transgnica, como parte imprescindvel do pedido de licenciamento ambiental para
atividades com OGMs.

10-PRINCIPIO DA PRECAUAO

importante ter em mente que a engenharia gentica opera com base na manipulao
do DNA de organismos vivos. Esta interveno ocorre em mbito muito mais complexo do que

75
qualquer outra tecnologia j anteriormente aplicada. Esta tecnologia aplicada em um nvel
de funcionamento da natureza a respeito do qual nossa base de conhecimento cientfico
ainda insuficiente (Griffiths, 1999).
Embora tenha havido avanos no conhecimento cientfico sobre os riscos associados
ao cultivo de plantas transgnicas, o desenvolvimento da tecnologia de OGM ainda se baseia
em processos do tipo tentativa e erro, portanto, imprecisos e pouco cientficos. Assim, os
cientistas tm poucas condies de prever o comportamento do novo gene no organismo
hospedeiro, sendo inadequado caracterizar-se a transgenia como science-based technology.
Em suma, a engenharia gentica encontra-se em seu estgio bsico de pesquisa e cincia,
sendo ainda prematura a liberao comercial de plantas transgnicas (Guerra e Nodari, 1999).
Desta forma, assume importncia a adoo do Princpio da Precauo, estabelecido
em acordos internacionais, como um princpio tico que afirma que a responsabilidade pelas
futuras geraes e pelo meio ambiente deve ser combinada com as necessidades
antropocntricas do presente. Adotado no prembulo da CDB-, o Princpio da Precauo
destaca que quando exista ameaa de sensvel reduo ou perda de diversidade biolgica, a
falta de plena certeza cientfica no deve ser usada como razo para postergar medidas para
evitar ou minimizar essa ameaa. Assim, a adoo do Princpio da Precauo, se constitui em
alternativa concreta a ser adotada diante de tantas incertezas cientficas. Desta associao
respeitosa e funcional do homem com a natureza, surgem as aes antecipatrias para
proteger a sade das pessoas e dos ecossistemas. Este princpio deve guiar as atividades
humanas, mas incorpora outros atributos, como justia, equidade, respeito, senso comum e
preveno (Raffensperger e Tikner, 1999). Tambm, este princpio admite que a adoo de
cautela poderia evitar conseqncias danosas que, eventualmente, um OGM possa
apresentar como resultado de sua liberao apressada ao meio ambiente.
As avaliaes, ainda iniciais, dos impactos ambientais potenciais, podem permitir uma
deciso balanceada entre os possveis benefcios e a extenso e irreversibilidade dos danos e
riscos. importante que a toxicidade ambiental relativa seja incorporada na anlise das
mudanas de padres de uso e quantidade de pesticidas, e que os impactos das culturas
tolerantes a herbicidas na conservao do solo sejam quantificados. Por outro lado, devem ser
tomadas medidas que possam prevenir a transferncia de genes para populaes selvagens,
bem como reduzir a evoluo da resistncia aos transgenes.
Como concluem Wolfenbarger e Phifer (2000), tanto os riscos quanto os benefcios dos
OGM podem variar temporal e espacialmente e devem ser analisados caso a caso. A
elucidao destes riscos e benefcios dos OGM envolve a necessidade de estudos
comparativos com outros sistemas e prticas agrcolas, tais como a agricultura orgnica.
Nossa capacidade de predizer os impactos ecolgicos de espcies introduzidas, incluindo
OGM, imprecisa e os dados empregados para avaliar impactos ecolgicos potenciais
apresentam limitaes. Esta inabilidade de predizer acuradamente as conseqncias
ecolgicas, especialmente no longo prazo, aumentam a incerteza associada avaliao de
riscos, exigindo modificaes nas estratgias de manejo destes riscos.
O intrigante neste momento de crise no uso das biotecnologias ditas modernas que
muitos dos riscos potenciais previamente anunciados esto de fato ocorrendo. Em 1989,
Tiedje e colegas, e Pimentel e colegas mencionaram que os principais riscos potenciais dos
OGM ao meio ambiente seriam: criao de novas pragas e plantas daninhas e um aumento
das pragas j existentes por meio da recombinao gnica entre a planta transgnica e outras
espcies filogeneticamente relacionadas; a produo de substncias que so ou poderiam ser
txicas a organismos no-alvos; o efeito disruptivo em comunidades biticas e o desperdcio
de valiosos recursos genticos, seguido de contaminao de espcies nativas com
caractersticas originadas de parentes distantes ou de espcies no relacionadas e efeitos
adversos em processos dos ecossistemas e origem de substncias secundrias txicas aps
a degradao incompleta de qumicos perigosos. Trabalhos publicados confirmaram os dois
primeiros. Quanto aos dois ltimos h a necessidade de estudos.
O Principio da Precauao est estabelecido no artigo 1 da nova lei de biossegerurana.
Portanto obrigao de todos os brasileiros observarem.


76
11. ROTULAGEM

A rotulagem dos alimentos est prevista no Cdigo de Defesa do Consumidor (Lei n
8.078, de 11/09/90 art. 6, III e art. 8). Trata-se ento de uma norma, que garante ao
cidado ser informado sobre um produto, o que lhe permite o direito de escolha. Alm disso, a
rotulagem permite a rastreabilidade, pois em casos de efeitos na sade humana, os produtos
rotulados seriam facilmente identificados e recolhidos.
No Brasil, a fiscalizao sobre a rotulagem est a cargo da Vigilncia Sanitria.
Contudo, a deciso e mesmo o contedo e outras caractersticas do rtulo, est no mbito do
Ministrio da Justia.
O Decreto n 4.680, de 24 de abril de 2003, regulamenta o direito informao,
assegurado pela Lei no 8.078, de 11 de setembro de 1990, quanto aos alimentos e
ingredientes alimentares destinados ao consumo humano ou animal que contenham ou sejam
produzidos a partir de organismos geneticamente modificados, sem prejuzo do cumprimento
das demais normas aplicveis. Na comercializao de alimentos e ingredientes alimentares
destinados ao consumo humano ou animal que contenham ou sejam produzidos a partir de
organismos geneticamente modificados, com presena acima do limite de um por cento do
produto, o consumidor dever ser informado da natureza transgnica desse produto. Tanto
nos produtos embalados como nos vendidos a granel ou in natura , o rtulo da embalagem ou
do recipiente em que esto contidos dever constar, em destaque, no painel principal e em
conjunto com o smbolo a ser definido mediante ato do Ministrio da Justia, uma das
seguintes expresses, dependendo do caso: "(nome do produto) transgnico", "contm (nome
do ingrediente ou ingredientes) transgnico(s)" ou "produto produzido a partir de (nome do
produto) transgnico". O consumidor dever ser informado sobre a espcie doadora do gene
no local reservado para a identificao dos ingredientes. A informao tambm dever constar
do documento fiscal, de modo que essa formao acompanhe o produto ou ingrediente em
todas as etapas da cadeia produtiva.
A rotulagem consitui-se em:
NECESSIDADE DE SABER - A rotulagem plena um requisito fundamental e
imprescindvel para se estabelecer uma efetiva vigilncia dos alimentos
contendo OGMs e seus derivados.
DIREITO DE SABER Direito previsto no Cdigo de Defesa do Consumidor. O
tipo de gene inserido, os aspectos religiosos e os valores culturais e pessoais
devem ser considerados.
CONVENINCIA DE SABER um requisito que considera o quantitativo de
ADN e de protena recombinante no produto final (Ex: acima de 1%).

Em termos de sade pblica, tudo tem que ser rotulado, no importa quanto tem dentro
da embalagem.
A nvel internacional, existe um Grupo de Trabalho de Rotulagem que foi encarregado
de preparar uma verso preliminar a ser discutida na reunio do Codex Alimentarius.
Tomando-se em considerao o que houve na Conferncia de Partes da CDB, pode ser que
ainda no ano de 2000, a reunio do Codex tambm aprove as normas internacionais de
rotulagem dos alimentos transgnicos ou que contenham ingredientes de OGMs.

12. O CASO DA SOJA TRANSGNICA RESISTENTE AO HERBICIDA ROUNDUP
O pedido de desregulamentao de soja transgnica que a Comisso Tcnica Nacional
de Biossegurana (CTNBio) analisou, merece uma reflexo profunda por parte da sociedade
brasileira. Com a liberao para plantios comerciais da Soja RR (Roundup Ready), todas as
variedades contendo o gene cp4 epsps, que condiciona resistncia ao herbicida glifosate,
estaro livres para registro, uso, ensaios, plantios, transporte, armazenamento,
comercializao, consumo, importao, liberao e descarte.
O glifosate, princpio ativo do herbicida Roundup, controla plantas daninhas atravs de
seu efeito inibitrio sobre a enzima 5-enolpiruvato-chiquimato-3-fostato-sintase (EPSPS). Esta
enzima catalisa uma reao na cadeia de biossntese dos amino cidos aromticos (como

77
fenilalanina, triptofano e tirosina) em plantas e microrganismos. Esta cadeia est ausente em
animais, peixes e aves.
Existem vrias questes no processo de liberao sem informaes ou com
informaes incompletas ou no inequvocas Assim, no informado no referido processo: 1)
o nome completo da espcie doadora do gene cp4 epsps, 2) a sequncia de nucleotdeos da
construo quimrica presente nas linhagens transgnicas, 3) os possveis efeitos
pleiotrpicos da construo quimrica inserida, 4) a toxicidade para a espcie humana, 5) o
efeito da aplicao do glifosate na planta, 6) o cultivo do cultivo desta soja transgnica mais
glifosato na diversidade biolgica do ambiente e 7) os riscos de transferncia horizontal de
genes. Tais informaes so exigidas pelas Instrues Normativas da prpria CTNBio.
Tambm no informado no processo sobre o efeito do transgene no processo de fixao
simbitica do nitrognio intermediado pelo Rhizobium. Tampouco no h informao sobre o
impacto do cultivo destas variedades transgnicas na microbiota dos solos brasileiros. Outras
questes tcnicas foram formuladas a CTNBio por vrias organizaes civis brasileiras
aguardam respostas.
Mas o mais grave relaciona-se com a qualidade dos poucos dados apresentados.
Assim, os poucos testes so de curta durao e insuficientes. Por exemplo: no h uma
anlise profunda sobre alergenicidade ou reaes imunolgicas. Alm disso, os resultados
apresentados a CTNBio so oriundos da Soja RR sem a aplicao do Roundup. O que ocorre
com o Rloundup ou seu efeito na alimentao humana via gros com resduos do referido
herbicida ainda so desconhecidos.
Alm disso, trabalhos cientficos publicados indicam que os produtos comerciais a base
de glifosato se acumulam no solo, so prejudiciais a peixes e a ratos. Tais trabalhos
demonstraram ainda que o referido herbicida prejudicial a minhocas e insetos, alm de
causar problemas reprodutivos em ratos. Na verdade, o processo no informa sobre a
degradao do herbicida nos diferentes solos e regies brasileiras onde esta espcie
cultivada. Um fato grave que omitido no processo trata-se das reaes txicas que o
herbicida poderia causar na espcie humana, sendo que na Califrnia, a terceira causa mais
frequente de reaes txicas. A questo saber se estas novas variedades intensificam ou
no a alergia, uma vez que trs protenas associadas a reao alrgica j foram identificadas
em outros gentipos de soja. Contudo, o efeito mais drstico na sade humana a forte
associao entre a exposio prolongada a este agrotxico e um aumento de risco de um
cncer do tipo linfoma non-Hodgkin (Hardell e Eriksson, 1999). Roundup tambm inibe a
sntese de esterides atravs da interrupo da expresso da protena StAR (Walsh et al.,
2000), causando distrbios reprodutivos em mamferos.
O fato de que estas plantas transgnicas foram aprovadas nos Estados Unidos no
significa que elas no impem riscos. Ao contrrio, pois naquele pas adotado o princpio da
equivalncia substancial. Anlises em rgos internos, caractersticas reprodutivas ou testes
com a espcie humana no foram realizados. Portanto, os dados so insuficientes do ponto
de vista cientfico, para subsidiar a anlise da segurana ambiental e alimentar. Em havendo
poucos dados, no h o que afirmar em relao aos riscos.
O que de fato ocorreu foi que a CTNBio tomou a ausncia de evidncias como a
evidncia da ausncia de riscos. E isto tem sido considerado um equvoco muito grande.

12. IMPLICAES SCIO-ECONMICAS
O desenvolvimento de um OGM tem um custo elevado o que significa dizer que um
pequeno nmero de empresas, que dispe de capital e tecnologia, est conseguindo produzir
plantas ou animais transgnicos, para serem cultivados ou criados em escala mundial. No
caso de plantas nos Estados Unidos, as variedades transgnicas fazem parte de um pacote,
pois se uma variedade de soja resistente a um herbicida, o agricultor obrigado, por fora
de contrato, a usar o herbicida produzido pela mesma empresa. Desta forma, a dominao
tecnolgica levar aos pases perifricos a uma dependncia na produo de alimentos, o que
de fato uma questo de segurana nacional.
O alto retorno econmico, devido ao efeito de escala, proporcionar um novo salto
destas empresas, com as quais dificilmente as empresas nacionais ou mesmo instituies

78
podero competir. No se descarta a hiptese de que a maioria dos programas de
melhoramento no pas ou sero absorvidos pelas grandes empresas multinacionais ou
fecharo.
Do ponto de vista comercial, j existem fatos concretos relacionados aos transgnicos.
Assim, grandes cadeias de supermercados na Europa (Ex: ASDA na Inglaterra e Carrefour na
Frana) esto banindo de suas prateleiras produtos transgnicos ou produtos feitos com
materiais transgnicos. Recentemente, a Austrlia, que ainda no cultiva canola transgnica,
teve uma encomenda especial a maior exatamente por no ser transgnica. Algumas
cooperativas brasileiras esto tentando estabelecer comrcio com pases Europeus e Japo
para garantir o envio de soja no transgnica, j que estes pases assim a preferem. Embora
j existam indcios fortes de algum prmio a ser pago a maior por organismos no
transgnicos (varivel de 5 a 20%, para a safra de soja de 2000), ainda cedo para prever o
que acontecer no futuro.
Das liberaes para cultivo comercial, alguns produtos transgnicos esto com
problemas de comercializao. O tomate FLAVR SAVR, o primeiro transgnico a ser cultivado
em larga escala, foi retirado de mercado no hemisfrio norte em 1999, face ao sabor inferior
(gosto de verde, mesmo quando maduro) ao no transgnico, a problemas de processamento
e desinteresse pelo consumidor.
A safra de milho Bt americana est sem comercializao garantida, uma vez que vrios
compradores de porte significativo (como cervejarias japonesas, empresas processadoras de
alimentos, etc) no querem utilizar os transgnicos em seus produtos, o que est causando a
reduo no preo do milho Bt transg6enico. A contaminao de milhos Bt ou no transgnicos
com o Starlink tambm gerou cancelamentos de compra de milho americano, principalmente
por pases asiticos. Segundo estimativas da associao de produtores americanos de milho,
a safra de milho Bt transgnico do ano 2000 foi inferior a de 1999.
A soja transgnica tambm enfrenta resistncia por parte dos consumidores. Este fato
levou a empresas compradoras de gros a exigirem a segregao das sementes e um prmio
a soja no transgnica.
A liberaao da soja RR est prejudicando quem nda ter a ver com isso: os produtores
orgnicos. Abaixo est o relato de um entre centenas de casos j comprovados.
Dedicado ao cultivo de produtos orgnicos, sem agrotxicos e com sementes naturais,
por mais de 30 anos, o agricultor Max Enro Dockhorn, de 73 anos, desistiu, no ano
passado, da lavoura de soja que mantinha em uma rea de 70 ha no municpio gacho
de Trs Passos. "Na safra de 2005 para 2006 perdi metade da minha produo
orgnica. No momento de vender, testes identificaram protena transgnica na minha
soja", conta Dockhorn, desapontado com os meses de dedicao lavoura. Alm da
perda de valor, que superava os 10 reais por saca, ele teve de pagar royalties por ter
sido acusado de usar sementes transgnicas. ...bastou que, ao redor de minha
propriedade, outros produtores usassem sementes transgnicas para haver a
contaminao". Os riscos da omisso, Revista Carta Capital, p.22-29, 18/07/2007

11-PERCEPO PBLICA
Embora est ocorrendo um aumento da discusso na sociedade, a questo das
plantas e animais transgnicos quase que desconhecido da maioria da populao brasileira.
Tambm para a maioria das pessoas que tm um diploma de ensino superior, estes tpicos
so indecifrveis. preciso ento desenvolver aes junto a populao no sentido de
desconstruir esta novidade. Para tal, a mdia bem como os cientistas tm um papel
preponderante, se engajados num processo educativo, sem paixes ou crenas. H a
necessidade do envolvimento de pessoas que tm conhecimento sobre o assunto de
participarem sem preconceitos ou interesses alm daquele de desconstruir este assunto
complexo.
Inmeras ONGs esto envolvidas na discusso desta questo. Dias globais de ao
contra a Biotecnologia foram organizados. Contudo, nem tudo o que dito ou escrito tem base

79
cientfica ou tcnica. Um posicionamento pessoal com base em crenas pode levar o processo
ao descrdito.
Vrios pases realizaram pesquisas de opinio publica. Existem diferenas bastante
expressivas entre as populaes de diferentes pases com relao a aceitabilidade de
produtos transgnicos. Enquanto na ustria, Luxemburgo e mesmo Inglaterra a maioria da
populao rejeita, os japoneses manifestam-se favorveis ao consumo destes produtos. Mas
querem que o produto seja sadio e seguro. Em 1998, a Sua realizou um plebiscito para
decidir se o pas deveria banir ou no os produtos transgnicos em seu territrio. Entre os
votantes, um tero optou pela banio. A rigor, na maioria dos pases europeus, a rejeio aos
alimentos transgncos superior a 80%.
A questo da transgenia causa profunda perplexidade nas pessoas por vrios motivos.
Em primeiro lugar, a passagem da doena da vaca louca do alimento para as vacas e destas
para as pessoas ocorreu de fato, embora cientistas e polticos afirmaram que isto no iria
ocorrer. Um outro aspecto que a tcnica muito poderosa e isto assusta as pessoas. O
homem pode reprogramar o cdigo gentico e as pessoas no tm idia das consequ6encias
disto. Um outro aspecto est relacionado com o tipo de produtos. Os primeiros transgenes
diminuem a qualidade dos alimentos. Os consumidores querem algo melhor.
As pessoas reagem de maneira diferente. A maioria boicota as compras. Outras
praticam atos de sabotagem nas reas cultivadas com variedades transgnicas. Tanto na
Irlanda quanto na Inglaterra, dezenas de propriedades tiveram suas lavouras destrudas ou
altamente danificadas por grupos contrrios a biotecnologia.
No Brasil, os debates pblicos sobre a transgenia e suas conseqncias desde 1998
vm possibilitando o conhecimento da questo pela sociedade. Mas o fato que, a maioria da
populao ainda no est suficientemente informada, nem mesmo tem conhecimento
suficiente para entender e opinar a respeito de plantas transgnicas. Da a responsabilidade
inadivel do poder pblico, das universidades e dos tcnicos de prestar este tipo de servio
populao brasileira.
Os consumidores brasileiros, na sua grande maioria, tambm no querem consumir
alimentos transgnicos conforme pesquisas efetuadas neste ms de julho de 2000 pelos
jornais O Globo (72%), Correio Brasiliense (70%) e Gazeta Mercantil (60%).
O International Rice Research Institute (IRRI), que co-patrocina o arroz dourado
(transgnico para produzir vitamina A), fez uma pesquisa de opinio pblica agora em 2001
perguntando: voc comeria arroz que foi geneticamente modificado? Dos 1815 entrevistados,
76,97% responderam que no.

TICA E TRANSGENTICA
Na maior parte dos casos de liberao de plantas transgnicas predominou o interesse
comercial destas grandes empresas. Isto pode ser comprovado pelas investidas frequentes do
governo americano junto aos pases europeus e Japo. Para citar apenas um exemplo, os
EUA atacaram a Comisso Europia que havia decidido pela rotulagem dos produtos
transgnicos, em junho de 1997, argumentando que isto contrariava o livre comrcio. Na
poca Dan Glickman, Secretrio da Agricultura, disse que os Estados Unidos no tolerariam
a segregao de produtos geneticamente modificados dos tradicionais. A resposta americana
pode ser exemplificada pela atitude da companhia Monsanto que misturou os gros
transgnicos com no transgnicos, obrigando os europeus a comprarem apenas o bulk com
a mistura.
Mais recentemente, devido s restries no comrcio de alguns produtos transgnicos,
algumas empresas americanas esto decididas a segregar e rotular os produtos. Este fato
demonstra que a sociedade tem a fora necessria para intervir no processo de apropriao

80
do conhecimento e sua utilizao comercial. O consumidor se tornou um componente
extremamente importante no processo de liberao comercial destes produtos.
Em junho de 1999, Ministros do Meio Ambiente dos pases Europeus, decidiram que
cada estado membro poderia solicitar estudos adicionais para a liberao de plantas
transgnicas. Isto na prtica se constitui numa moratria branca, pois dependendo do estudo,
vrios anos sero necessrios para a obteno de dados. De fato, j so praticamente dois
anos sem nenhuma nova aprovao de alimento transgnico no Europa.
Um dos impactos menos discutidos no mbito da transgenia em plantas refere-se
dependncia tecnolgica dos agricultores ao grande complexo industrial-gentico, expresso
utilizada por Berlan e Lewontin (1999) para designar as grandes empresas transnacionais do
setor biotecnolgico, que nos ltimos 20 anos passaram a atuar de forma agressiva na
apropriao dos recursos genticos.
Em seu artigo publicado no Le Monde Diplomatique (janeiro de 1999), os referidos
autores apresentam e discutem quatro argumentos sobre a apropriao dos recursos
genticos vegetais por parte deste complexo gentico-industrial, cuja sntese pode ser assim
descrita:
1) A riqueza das variedades agrcolas foi criada por agricultores de todo o mundo, em especial
aqueles do terceiro mundo. A domesticao e a seleo feita por agricultores por milhares de
anos gerou uma herana biolgica que beneficiou as naes industrializadas. A agricultura
norte-americana, por exemplo, foi construda em cima desses recursos, livremente importados
do resto do mundo. No justo que poucas companhias agora se apropriem dessa herana
biolgica universal.
2) O aumento (sem precedentes) nas colheitas do mundo industrializado, assim como do
terceiro mundo, pode ser atribudo ao livre movimento de conhecimento, aos recursos
genticos e pesquisa pblica. As colheitas aumentaram cinco vezes em duas geraes,
depois de serem necessrias 15 geraes anteriores para esta colheita dobrar. Na dcada de
70, quase todos os hbridos norte-americanos de milho resultaram do cruzamento de duas
linhagens, originadas de programas de melhoramento de universidade pblicas.
3) A experincia mostra que o custo de privatizar o progresso gentico e ser exorbitante.
Estudos feitos na Frana pelo Institut National de la Recherche Agronomique (INRA), mostram
que o custo adicional das sementes de trigo hbrido equivale a US$ 500 milhes (oramento
do INRA) para um ganho gentico que poderia ser mais facilmente obtido usando-se
variedades crioulas produzidas pelos agricultores.
4) Desistir dos direitos sobre essa herana significa liberar o complexo gentico-industrial para
direcionar o progresso tecnolgico unicamente para os lucros. Da forma como a questo vem
sendo conduzida pelas grandes empresas, no h uma demanda social para OGMs. O termo
somente uma cortina de fumaa para as demandas desse complexo gentico-industrial.
Como possvel perceber, so muitas as implicaes dessa tecnologia e estas precisam ser
profundamente avaliadas, explicitadas e discutidas, pois do interesse de toda a sociedade a
percepo clara dos seus possveis riscos e benefcios.

A RELAO DA COMUNIDADE CIENTFICA COM O GOVERNO
A investigao que ocorre na Inglaterra visando elucidar o veredicto final da comisso
especialmente formada para aconselhar uma deciso do governo a respeito da vaca louca,
est trazendo a tona, uma discusso a respeito da relao entre cientistas e governo.
Em sua edio de 5 de agosto deste ano, a Revista Nature, alm de considerar o
assunto em seu editorial, informa na pgina 490, que os membros do Spongiform
Encephalopathy Advisory Committee (SEAC) foram pressionados por representantes
governamentais no sentido de endossar um parecer sobre a segurana da carne. Membros da

81
referida comisso declararam que foram procurados por membros de rgos governamentais
que solicitaram-lhes a aprovao de um texto que a carne bovina era segura. Segundo o
Presidente desta comisso, os membros se sentiram inconfortveis e apreensivos em ter que
aprovar uma nota to curta.
intrigante o fato de que as verses do parecer circulou por diversas autoridades
inglesas para comentrios. A temeridade da reao pblica expressada por autoridades
governamentais fez com que a comisso retirasse frases do parecer final tipo nenhum
cientista diria que no haveria risco em comer carne bovina.
A abdicao de se basear em dados puramente cientficos por parte de membros da
comunidade cientfica quando convocada para aconselhar o governo, como est sendo
constatado neste episdio, se constitui num perigo para a populao.
O balano feito em maio de 2001 indicou que mais de 100 pessoas j morreram na Inglaterra
e Frana, e que a doena j atingiu vrios pases europeus, tanto no gado quanto na espcie
humana. O fato de que carne e gado europeu foram importados por outros pases nos ltimos
anos, se constitui numa ameaa, pois os agentes infecciosos desta doena, os prions, podem
ter sido disseminados.
Esta relao entre cientistas membros de comisses governamentais e governo deve
ser melhor definida. O recado vem da prpria populao, que j no acredita mais nas
decises governamentais sobre questes que envolvem riscos sade e ao ambiente. Este
fato no exclusividade da Inglaterra. A polmica em torno das implicaes dos alimentos
transgnicos um exemplo notrio em vrios pases..
No Brasil, a aprovao para liberao comercial da soja transgnica pela Comisso
Tcnica Nacional de Biossegurana (CTNBio) tambm foi tomada de forma apressada? Algum
paralelo com a Inglaterra? A deciso se deu sem os dados dos estudos de impacto ambiental
nos diversos ecossistemas brasileiros e do efeito do herbicida a base de glifosate, que ser
aplicado na referida soja, na sade humana e meio ambiente.
Neste momento, cabe uma reflexo acompanhada de um conjunto de aes, a respeito
do comportamento e das relaes entre cientistas e governo. Para evitar tais tipos de
episdios como o da vaca louca, h a necessidade de uma definio clara do papel destas
comisses, a forma de escolha, bem como transparncia nos trabalhos das mesmas.
possvel rejeitar o princpio da precauo quando a populao corre risco? Devem os
interesses maiores da populao no podem ser sobrepostos por interesses econmicos
imediatos?

O QUE SE ESPERA DOS PROFISSIONAIS DA BIOLOGIA?
1) uma atitude crtica e imparcial face aos riscos e s potencialidades;
2) uma atitude eticamente responsvel, engajada em acompanhar individual e publicamente
os atos da biotecnocincia e em praticar tanto uma "sabedoria prudencial" quanto uma
preveno eficaz;
3) obedincia as normas legais e precaucionrias.
Como as naes e os grupos internacionais movem-se na direo do desenvolvimento ou
evoluo das normas de biossegurana, essencial que existam mtodos cientficos para
avaliar os riscos associados com as introdues na agricultura (Barton et al., 1997). O estado
de valores do pesquisador to importante para a qualidade da cincia que produz quanto
sua titulao, competncia metodolgica e capacitao tcnica (Azevedo, 1995).
A biotica deve identificar racionalmente e responsavelmente as implicaes sociais e
culturais das descobertas nas cincias da vida concernentes a sade, agricultura, alimentos,
ambiente e estratgias de desenvolvimento. As aplicaes da biotecnologia no podem ser

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restritas a um territrio. Ento a biotica, inevitavelmente, tem uma dimenso internacional, o
que no quer dizer que a dimenso nacional deve ser relegada (Kutukdjian, 1997).
O paradigma biotico tem como princpio fundamental um tipo de solidariedade
antropocsmica, que seja ao mesmo tempo dialgica, procedural, pragmtica, aberta aos
afetos e evolutiva (Schramm, 1996). dever dos cientistas atuar como debatedores,
decodificadores e facilitadores deste debate abrangente e polmico, atual e de extrema
importncia para o pas. Anlises com bases em dados cientficos evitam a promiscuidade dos
debates e permitem a distino entre cincia e crena.
A NECESSIDADE DE UM DEBATE PBLICO COM A SOCIEDADE
A ampla gama de implicaes que este tema dos OGM engendra, ultrapassa hoje os
limites da cincia. As questes ticas, sociais, econmicas e polticas no podem estar
dissociadas do tema e do eixo das discusses. Parte da sociedade comunga a percepo de
que este assunto est sendo conduzido de forma inadequada, como demonstram protestos de
grupos de presso e ONG. Esta percepo encontra respaldo nos episdios recentes da
doena da vaca louca, entre outros. Portanto, o dilogo deve ser social e extrapolar as
paredes dos laboratrios cientficos e gabinetes governamentais.
Por fim, tambm preciso avaliar os impactos sobre o domnio no acesso e uso dos
recursos genticos. Afirma-se, com freqncia, que o insumo mais importante para o novo
milnio o conhecimento. As tecnologias decorrentes deste conhecimento podero acentuar
assimetrias nas relaes econmicas e sociais entre as naes mais desenvolvidas e menos
desenvolvidas, caso no forem estabelecidos mecanismos compensatrios e regulatrios.
No se pode admitir que interesses econmicos de uma minoria se sobreponham aos
interesses maiores da sociedade.
Contudo, os recursos genticos no tero papel menos importante que o
conhecimento. Biotecnologias sem diversidade so mero exerccio acadmico, como afirma
um documento da FAO (1999). Desta forma, imperiosa a manuteno da diversidade bem
como fundamental tomar as medidas para evitar as ameaas sua eroso gentica.
CONCLUSES
As sociedades secularizadas e complexas esto dispostas a renunciar aos benefcios
da biotecnocincia? O fato que existem muitas biotecnologias e h a necessidade de avaliar
individualmente a aplicao de cada uma delas nos mais diversos aspectos.
importante ter em mente que a engenharia gentica opera com base na manipulao
do DNA de organismos vivos. Esta interveno ocorre em um nvel muito mais complexo do
que qualquer outra tecnologia j anteriormente aplicada. Esta tecnologia aplicada em um
nvel de funcionamento da natureza a respeito do qual nossa base de conhecimento cientfico
ainda insuficiente (Griffiths, 1999).
Depois de quase 30 anos de desenvolvimento a tecnologia de OGM ainda se baseia
em processos do tipo tentativa e erro, portanto imprecisos e pouco cientficos. Assim, os
cientistas tm poucas condies de prever o comportamento do novo gene no organismo
hospedeiro, sendo inadequado chamar-se esta tecnologia de science-based. Em suma, a
engenharia gentica encontra-se em seu estgio bsico de pesquisa e cincia, sendo
prematura a liberao comercial de plantas transgnicas.

83
PARTE 4 LEGISLAO PERTINENTE
1-DIREITOS DE PROTEO E PATENTES
A proteo propriedade intelectual incide sobre criaes do intelecto humano, no
abrangendo a descoberta de algo preexistente. Assim a patente a expresso legal do
privilgio temporrio (explorao comercial) concedido pelo Estado pessoa fsica ou jurdica,
pela criao de algo novo. Para ser patentevel o invento deve ser descrito de tal maneira que
possa ser reproduzido por qualquer pessoa que tem competncia na arte. Alm disso a
inovao deve ter uso prtico definido.
Para obter a patente, a inveno deve ser tambm novidade. Uma criao mecnica
nova quando ainda no foi divulgada publicamente. No caso de microrganismos, mesmo que
identificados recentemente, existiu previamente em estado natural e ento no seria novidade.
A maioria dos pedidos de patentes em biotecnologia se constituem em descobertas em no
em invenes, e ento no seriam patenteveis. Um invento no pode ser bvio: deve
expressar soluo inovadora, em relao ao estado da arte - distinto de descoberta, referente
a algo desconhecido, porm preexistente (Schneider, 1993). Neste caso, tanto as enzimas
quanto os genes utilizados em plantas transgnicas preexistiam na natureza assim como os
princpios ativos de organismos vivos usados na industrializao de produtos diversos.
O Congresso Nacional aprovou a lei n 9.279 de 14 de maio de 1996 (DOU de
15/05/96), que regula direitos e obrigaes relativos propriedade industrial. Apesar dos
quatro anos de tramitao, a discusso deste complexo projeto na comunidade cientfica e
mesmo na sociedade ocorreu de forma tmida, infreqente e superficial Sua aprovao
ocorreu num ambiente de divergncia de opinies e presses polticas e econmicas, as mais
diversas. Entre as caractersticas da lei, merecem destaque:
- A sua complexidade: a lei possui 243 artigos e complexa do ponto de vista tcnico.
- Ao detentor de patentes so conferidos amplos direitos e praticamente nenhum dever.
- Uma vez concedida a patente, se cria o monoplio. A lei, ento restringe a soberania
com relao a proteo de determinados setores da economia nacional.
- patentevel a inveno que atenda aos requisitos de novidade, atividade inventiva
e aplicao industrial.
-No se considera inveno nem modelo de utilidade: ..., o todo ou parte de seres vivos
naturais e materiais biolgicos, encontrados na natureza, ou ainda que dela isolados,
inclusive o genoma ou germoplasma de qualquer ser vivo natural e os processos biolgicos
naturais (grifos nossos),...
- No so patenteveis:..., o todo ou parte de seres vivos, exceto microorganismos
transgnicos que atendam aos trs requisitos de patenteabilidade - novidade, atividade
inventiva e aplicao industrial e que no sejam mera descoberta... Neste caso,
microorganismos transgnicos so organismos, exceto o todo ou parte de plantas e animais,
que expressem, mediante interveno humana direta em sua composio gentica, uma
caracterstica normalmente no alcanvel pela espcie em condies naturais.
Patente perdida. Em 1985 foi extrado lectina do caroo da jaca, cuja descoberta foi
publicada pelo Journal of Immunology (vol. 34, n 3, p.1740-1743). Atualmente a empresa
Norte americana Pearce produz e comercializa a lectina de jaca sem mesmo a autorizao
dos descobridores. Entretanto a jacalina pode ser produzida por qualquer pessoa. O Brasil
exporta apenas o caroo (matria prima), cujo valor agregado extremamente baixo. A
divulgao da inveno antes da solicitao da patente, inviabiliza qualquer pedido de registro
a posteriori, tanto pelos descobridores, quanto pelos que querem produzir e comercializar a
descoberta.

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Patente encontrada. A Zidovudina (AZT) um nucleosdeo, cuja descoberta foi
publicada no Journal of Organic Chemistry em 1964. Quatorze anos depois, a empresa
britnica Wellcome patenteou o uso desta substncia no combate a AIDS, e comercializa por
US$ 180.00 cada 100 cpsulas. No Brasil a empresa Microbiolgica sintetizou por processo
prprio e poderia comercializar a mesma quantidade por US$ 80.00 se o 'uso do produto' no
fosse patenteado.
O patenteamento de genes poder vir a conflitar com o registro de uma nova cultivar,
nos pases onde adotado o esquema de Direito de Proteo de Cultivares. Caso o gene seja
isolado por um laboratrio mas inserido em plantas por uma outra instituio, o direito de
comercializar e cultivar a nova variedade provavelmente dever reembolsar duas novas
operaes at agora no feitas no Brasil. Como conseqncia, o custo da semente dever
aumentar significativamente, dependendo do gene transferido. Nos pases da Europa, a
companhia de melhoramento pagar os 'royalties' pelo uso do gene nos seu programa e
cobrar 'royalties' sobre o uso e comrcio de eventuais OGMs que desenvolver com tal gene.
O tipo de acordo entre as partes ainda est sendo estudado. A regulamentao nos pases
europeus vai ainda prever a transferncia de genes inseridos de PTs para outras cultivares.
Muitas patentes 'amplas' (ex: qualquer mtodo de modificao de genes de Bacillus
thuringiensis) tem sido concedidas no Estados Unidos. Em decorrncia disso, est havendo
uma srie de aes na Justia de vrias empresas contra a empresa detentora da patente.

2-LEI DE PROTEO DAS CULTIVARES
Um dos primeiros pases a adotar a proteo de cultivares foi os Estados Unidos em
1930, com o Plant Patent Act. Esta medida garantia ao melhorista o direito de propagar as
mudas de variedades protegidas por um perodo de 17 anos. A justificativa utilizada para a
implantao da medida foi incentivar o investimento em pesquisas com plantas de propagao
vegetativa. Somente 40 anos mais tarde os Estados Unidos implantaram o sistema de
proteo de cultivares com propagao sexuada, o Plant Variety Protection Act.
O desenvolvimento de novas cultivares e de outras tecnologias agrcolas provocou um
grande impacto na agricultura mundial. Concomitantemente a isto ocorreu uma grande
mobilizao para estabelecer sistemas de proteo nos pases industrializados. No ano de
1961, em Paris, ocorreu a primeira conveno internacional que resultou na criao da Unio
Internacional para a Proteo de Obtenes Vegetais (UPOV). A UPOV um organismo
internacional, que estabelece os direitos de melhorista ou de propriedade intelectual sobre as
variedades melhoradas. Posteriormente esta conveno foi revisada em 1972, 1978 e 1991. A
adeso a uma das duas ltimas convenes (1978 ou 1991) requer que o pas tenha
estabelecido uma legislao prpria e compatvel com as diretrizes estabelecidas. Alm disso,
a Organizao Mundial de Propriedade Industrial (WIPO ou OMPI) determinou que os pases
membros que no tivessem estabelecido legislao sobre o assunto no poderiam aderir
Conveno de 78, estando automaticamente includos na Conveno de 1991.
O Brasil, que agora tem sua Lei de Proteo de Cultivares (Lei n 9456 de 25/04/97),
solicitou adeso a Conveno de 1978, a qual tem a preferncia da maioria dos pases, uma
vez que este o sistema de proteo mais adequado para o desenvolvimento agrcola
mundial. Atualmente, j assinaram esta conveno mais de 20 pases, entre os quais Canad,
Estados Unidos, pases da Europa, Argentina, Uruguai e Chile. Especialistas do mundo inteiro
tem sido unnimes em afirmar que a conveno de 1991 satisfaz preferencialmente as
grandes empresas produtoras de sementes em detrimento do interesse social. Por isto
mesmo, poucos pases aderiram a esta ltima conveno.
Embora em alguns pases exista o direito de patente sobre variedades, o acordo
TRIPS permitiu aos estados membros o direito de excluir da patenteabilidade as cultivares de
plantas e as raas de animais. O Brasil utilizou esta prerrogativa. A nova lei de propriedade
industrial (Lei n 9.279), tambm chamada de Lei de Patentes, aprovada em maio de 1996,

85
prev em seu art. 18 que as variedades vegetais no so patenteveis. Com a lei 9456, as
cultivares melhoradas passaram a ser protegidas pelos direitos de melhorista. A diferena
entre o sistema de patentes e o de direitos de melhorista, est basicamente restrita aos efeitos
da proteo. Ou seja, a proteo no to severa com os pesquisadores, agricultores e
consumidores, como o caso das patentes. Nos pases onde as patentes de cultivares so
permitidas, a proteo abrange at a fase de industrializao do produto primrio.
Alm desta lei, existem outros instrumentos que afetam o uso de recursos genticos
vegetais como a Conveno da Biodiversidade Biolgica (de 5/6/1992) e a Lei de Acessos,
que ora tramita no Senado Federal (PLS n 306, de 1995).

Principais aspectos da Lei de Proteo de Cultivares
Em consonncia com a legislao disponvel, o rgo a quem compete a proteo das
cultivares o Servio Nacional de Proteo de Cultivares (SNPC), vinculado ao Ministrio
da Agricultura e Abastecimento. A lei n 9456 no especifica claramente a estrutura nem as
atribuies deste rgo, o que foi feito recentemente atravs do MAA.
Para o registro de uma determinada cultivar no SNPC, a mesma deve ter nome prprio
e apresentar as caratersticas de distinguibilidade, homogeneidade e estabilidade
(simbolicamente abreviadas por DHE). Portanto, a variedade a ser protegida no poder ser
idntica a uma j registrada no pas ou em pases com os quais o Brasil tem tratados. No caso
de cultivares de autofecundao ou hbridos, a cultivar tambm deve apresentar a
caracterstica de homogeneidade, ou seja no poder apresentar misturas. Finalmente, a
cultivar tem que ser estvel, ou seja manter suas caractersticas atravs das geraes.
A Lei de Proteo de Cultivares protege pelo perodo de 18 anos as videiras, plantas
frutferas, florestais e ornamentais e por 15 anos, as demais espcies. A ata vigente da UPOV
a de 1978, pela qual os Estados membros devem aplicar a Conveno para um mnimo de
24 espcies ou gneros num prazo de 8 anos, aps a entrada em vigor lei. Em seu artigo 4, a
lei prev a incluso das mesmas gradativa. Assim, num primeiro momento a Lei abranger 5
espcies, s quais sero acrescidas de mais 5 aps 3 anos da regulamentao da lei. Outras
14 espcies sero incorporadas at o oitavo ano aps a regulamentao. Quando protegida, o
detentor do registro, chamado de titular, detm os direitos de melhorista. Ou seja, o produtor
de sementes (ou mudas) que quer utilizar a cultivar em lavoura comercial de produo de
sementes (ou mudas) dever ter licena do titular, a ser obtida mediante acordo. Por ocasio
da compra de semente (ou muda) de cultivar protegida para o primeiro plantio de lavoura
comercial, o agricultor estar pagando os royalties referente a proteo no preo final do
produto.
A lei ainda prev salvaguardas que permitem a interferncia do Ministrio da
Agricultura na multiplicao e comercializao das cultivares protegidas. A primeira delas a
licena compulsria que permite a explorao de uma cultivar protegida sem a autorizao de
seu titular. Nos casos de emergncia nacional ou abuso do poder econmico, uma cultivar
protegida poder ser tornar de uso pblico restrito. Entretanto, em ambos os casos, o titular
ter assegurado a remunerao referente a explorao e o assunto ter especificidade em
regulamento posterior.

PRINCIPAIS IMPLICAES DA LEI
Do ponto de vista do produtor, a lei tambm flexvel ao lhe permitir utilizar como
semente para a safra seguinte, material colhido no ano anterior, com exceo da cana-de-
acar. Para os pequenos produtores, a lei permite alm do uso da prpria semente, a troca
de material protegido com outros pequenos agricultores sem ferir a legislao. Para tanto, o
interessado deve atender o que est previsto nas normas do INCRA para seu enquadramento
como pequeno produtor rural.

86
No mbito do Mercosul a existncia de um mercado livre, num curto prazo de tempo,
implica na necessidade de compatibilizao das legislaes dos Estados membros, que hoje
apresentam diferenas marcantes. Dos pases membros do Mercosul, agora s o Paraguai
no tem legislao prpria. Atualmente variedades desenvolvidas no Brasil esto sendo
cultivadas nos diversos pases da Amrica Latina e vice-versa, sem nenhum pagamento de
royaties. Por certo, esta situao dever ser outra aps esta lei.
Do ponto de vista tcnico, a questo mais polmica a possibilidade de proteo de
cultivar essencialmente derivada. O problema estabelecer as diferenas mnimas entre uma
cultivar essencialmente derivada e a cultivar ancestral protegida. Estas diferenas mnimas
so difceis e onerosas de serem estabelecidas. A prpria lei no seu artigo 3 (incisos III e IX),
no determina com preciso qual a margem mnima que separa ambas, ao remeter para
rgo competente o estabelecimento dos critrios de diferenciao.
Embora a lei de patentes proba o patenteamento de plantas e animais, ela permite o
patenteamento de processos, inclusive os biotecnolgicos. Neste caso haveria a
possibilidade de uma planta transgnica ser duplamente protegida, pela lei de cultivares e
pela lei de patentes. No Brasil, esta tm sido a forma preferida por empresas do setor para
tentar obter o patenteamento de plantas transgnicas. Este aspecto vm gerando
controvrsias em vrios pases, inclusive no mbito da Comunidade Europia uma vez que
alguns pases membros aceitam a dupla proteo Guerra e Nodari, 1997).

3- BIODIVERSIDADE, BIOTECNOLOGIAS E AGRICULTURA
A biodiversidade no seu conceito mais amplo compreende todas as formas de vida,
ecossistemas e processos ecolgicos, reconhecendo hierarquias nos nveis gentico,
taxonmico e do ecossistema. A magnitude da biodiversidade brasileira no conhecida
com preciso tal a sua complexidade. A estimativa de que no territrio brasileiro existam
mais de 2 milhes de espcies distintas de plantas, animais e microorganismos. O Brasil o
pas com a maior diversidade gentica vegetal do mundo, contando com mais de 55.000
espcies catalogadas de um total estimado entre 350.000 e 550.000. Cerca de 2/3 destas
espcies se encontram nos trpicos, estimando-se que o Brasil detenha cerca de 75% de
todas as espcies existentes nas grandes florestas. Apenas 8% das espcies vegetais tem
sido estudadas em termos de compostos fitoterpicos bioativos e apenas 1.100 espcies de
plantas foram exaustivamente estudadas em suas propriedades medicinais (Guerra e
Nodari, 1996).
O potencial de utilizao sustentvel da biodiversidade fruto da disponibilidade de
matria-prima, tecnologia e mercado (Dias, 1996). Por exemplo, um parente silvestre do
trigo originrio da Turquia proporcionou genes para a resistncia a doenas, que
transferidos para variedades comerciais de trigo resultam num ganho anual de US$ 50
milhes, somente nos EUA. Uma variedade de cevada da Etipia forneceu um gene de
resistncia a vrus que transferido para variedades em cultivo na Califrnia, proporciona uma
economia de US$ de 160 milhes. Outro exemplo elucidativo o de Catharantus roseus,
originrio de Madagascar. As vendas pela Eli Lilly das drogas anti-leucmicas vincristina e
vinblastina, derivadas desta planta, atingem valores anuais de US$ 200 milhes.
Apesar da riqueza da nossa biodiversidade vegetal, a maior parte das atividades
econmicas baseia-se em espcies exticas: cana-de-acar originada de Nova Guin, caf
da Etipia, arroz das Filipinas, soja da China, cacau do Mxico, citros da China, trigo da Asia
Menor, eucaliptos da Austrlia, pinheiros da Amrica Central e gramneas forrageiras da
frica, entre outras.
Afirma-se que desde o incio da agricultura, em torno de 90% de todas as variedades
vegetais desenvolveram-se pelas "foras da natureza"; 9,9% por meio dos esforos da
humanidade at o incio deste sculo e apenas 0,1% pela utilizao de mtodos modernos
de melhoramento gentico. Apesar de no ser possvel precisar com segurana, as

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chamadas variedades hbridas modernas, geradas principalmente nos pases com pesquisa
mais avanada, respondem por uma grande parte da produo agrcola mundial e a
expanso de grandes reas de monocultura com estas variedades poderia colocar em risco
o total da diversidade gentica. Afirma-se tambm que as sementes so um reflexo do
cdigo gentico da sociedade que as desenvolvem, produzindo rplicas dos sistemas
agrcolas destas sociedades e colocando novamente em cena a diviso entre um Hemisfrio
Norte rico em tecnologia mas pobre em recursos genticos e um Hemisfrio Sul pobre em
tecnologia mas riquissimo em diversidade biolgica. Estima-se que um gene potencialmente
til do Sul pode representar negcios de US$ 1 bilho no Norte e que o germoplasma do Sul
contribua com valores estimados em US$ 66 bilhes por ano na economia dos EUA,
prevendo-se o advento da revoluo do gene com genes patenteados pelas grandes
corporaes transnacionais, associando os recursos genticos como estratgia central para
controle do suprimento mundial de alimentos (Machado, 1996).

REVOLUO VERDE, BIODIVERSIDADE E BIOTECNOLOGIAS
A emergncia das biotecnologias na produo agrcola mundial vem ocorrendo em
um contexto de esgotamento de um modelo de explorao agrcola baseado na chamada
"revoluo verde". Estas tecnologias fundamentadas no uso intensivo de energia e insumos
no beneficiaram todas as culturas e todos os agricultores, especialmente os pequenos
produtores. De uma maneira geral estas tcnicas visavam uma adequao do ambiente
variedade melhorada. Os programas de melhoramento vegetal baseados na utilizao
racional da biodiversidade e orientados a uma agricultura sustentvel consistem em um
processo de ajuste de uma determinada variedade a um determinado ambiente.
A chamada revoluo verde caracterizou-se por alguns equvocos merecedores de
reflexo. O primeiro diz respeito ao fato de que os geneticistas foram solicitados a criar
variedades altamente produtivas em condies de abundncia de fertilizantes e gua e
apesar do xito inicial, essas variedades demonstraram suscetibilidade a pragas e doenas,
necessitando-se agregar mais um componente oneroso ao sistema de produo, os
pesticidas. O segundo relaciona-se excessiva sub-estimao dos desgastes ambientais
causados por concentraes excessivas de fertilizantes e pesticidas que acabaram por
contaminar mananciais de gua implicando em riscos para a populao. O terceiro diz
respeito ameaa a diversidade gentica em consequncia da disseminao em escala
global de poucas variedades (Sachs, 1995).
O fluxo relativamente livre de materiais e informaes entre pesquisadores agrcolas
em diferentes pases do mundo essencial para reduzir as disparidades na capacidade de
pesquisa destes pases. Uma das maiores diferenas entre o sistema de pesquisa durante a
revoluo verde e aquele que emerge das biotecnologias que, enquanto o primeiro
caracterizou-se pela predominncia do domnio pblico nos investimentos e resultados da
pesquisa e pelo fluxo relativamente livre de informaes, o segundo vem se caracterizando
pelo domnio privado de investimentos e pelas restries no fluxo de informaes (Bonte-
Friedheim, 1989).
BIOTECNOLOGIAS E AGRICULTURA
Os setores da agroindstria, florestal e pesqueiro respondem por 40%, 4% e 1% do
PIB brasileiro, respectivamente. Produtos da biodiversidade respondem por 31% das
exportaes brasileiras, especialmente atravs do caf, soja e laranja (Dias, 1996). A
biomassa vegetal atravs do lcool da cana-de-acar, da lenha e do carvo derivados de
florestas nativas e plantadas, responde por 17% da matriz energtica nacional.
A obteno de plantas transgnicas depende basicamente da possibilidade de
identificar, isolar, clonar, transferir e integrar caractersticas importantes, sendo que, em
ltima anlise, o sucesso das tcnicas de engenharia gentica baseia-se na expresso
adequada do gene inserido. O escasso conhecimento sobre estes genes o principal

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entrave para a aplicao destas biotecnologias avanadas na agricultura brasileira e uma
vez eliminados os entraves relacionados com a lei de patentes e de biossegurana, os
produtos a serem ofertados no mercado sero as variedades transgnicas resistentes a
herbicidas e as que contm genes de Bacillus thuringensis para resistncia a insetos. Outro
entrave a grande dificuldade na resoluo e manipulao de caracteres quantitativos, os
de maior importncia do ponto de vista econmico. Estas abordagens so estratgicas para
a ampliao de mercado de grandes empresas do setor no Hemisfrio Norte. No por
acaso, no ano de 1994, nos EUA, foram realizados 1.500 testes de campo com plantas
transgnicas, 28% dos quais sobre resistncia a herbicidas e 23% sobres resistncia a
insetos.
Dado o avano das biotecnologias na agricultura mundial cabe uma apreciao de
sua pertinncia no modelo agrcola brasileiro. Por biotecnologias pertinentes entende-se
aquelas tecnologias que contribuem ao desenvolvimento sustentado por serem
tecnicamente factveis dentro do nvel de desenvolvimento tcnico-cientfico do pas, por
trazerem benefcios mensurveis aos destinatrios, por serem ambientalmente seguras e
por serem socioeconomica e culturalmente aceitveis (Izquierdo et al., 1995). Desta maneira
cabe questionar quais as biotecnologias pertinentes ao atual estgio de desenvolvimento da
agricultura brasileira. Das chamadas biotecnologias avanadas nfase poderia ser dada s
modificaes dos constituintes dos produtos agrcolas, visando o aumento de sua qualidade,
como por exemplo a alterao da biossntese de carboidrato e protenas de reserva.
Tcnicas de engenharia gentica podem ser aplicadas para a produo de tipos especficos
de amido ou alterar outros carboidrato como celulose e pectina. Genes que regulam a
produo de amilose e batatinha j foram clonados, sugerindo que a produo deste
composto pode ser manipulada. A engenharia gentica tambm poder contribuir para
minimizar os efeitos do estresse abitico sobre as cultura agrcolas. Plantas submetidas a
condies limitantes de seca, temperaturas e salinidade acumulam compostos de baixo
peso molecular e a insero de genes originados de bactrias permite o acmulo compostos
de alto peso molecular elicitando mecanismos de tolerncia nestas plantas.
J as chamadas biotecnologias intermedirias apresentam um potencial maior de
aplicao a curto prazo na agricultura brasileira. Entre elas cabe citar o desenvolvimento de
variedades com capacidade de fixao biolgica do nitrognio e de biofertilizantes como
fungos micorrzicos. Tcnicas associadas produo de bioinseticidas j so rotineiramente
empregadas na agricultura brasileira como o caso da produo do fungo entomopatgeno
Beauveria bassiana. Com isto pode-se diminuir os custos de produo bem como eliminar
os impactos negativos dos pesticidas sobre o ambiente e sade humana. Entre as
biotecnologias intermedirias observa-se um grande potencial para a utilizao dos
marcadores moleculares no mapeamento gentico. Uma das principais aplicaes destes
mapas genticos relaciona-se com a seleo assistida por marcadores (MAS). Esta
metodologia se baseia na escolha do marcador molecular como critrio de seleo na
expectativa de selecionar-se de forma indireta os alelos de interesse a ele ligados.
nas tcnicas de cultura de tecidos vegetais ou de micropropagao que se
observa o maior impacto das biotecnologias hoje no Brasil, principalmente no que tange
espcies ornamentais, frutferas e florestais. A propagao clonal massal de variedades
melhoradas e isentas de patgenos vem sendo empregada rotineiramente nos setores mais
avanados destas reas no Brasil. No estado do RS, o emprego de variedades de
moranguinho originadas da cultura de meristemas a partir da metade da dcada de 80, foi o
ponto de partida para a melhoria do sistema de produo desta cultura permitindo que a
produtividade mdia passasse de 3,6 para 40 t/ha. Hoje em todo o Brasil empregam-se
mudas provindas desta tcnica relativamente simples e de baixo custo. Impacto similar vem
ocorrendo com a cultura da batatinha, cuja produtividade mdia elevou-se de 10,7 t/ha em
1980 para 15,2 t/ha em 1995. Este aumento de produtividade foi atribudo principalmente ao
plantio de batatas-semente certificadas, livres de vrus, produzidas pela Embrapa. Em Santa
Catarina, nos laboratrios da EPAGRI foram desenvolvidos protocolos para a

89
micropropagao de mudas de bananeira livres de nematides e da broca da bananeira,
reduzindo drasticamente a necessidade de aplicao de pesticidas de alto impacto
ambiental, humano e com possveis efeitos residuais no fruto. Paralelamente a isto, instalou-
se um laboratrio de produo do fungo entomopatgeno Beauveria bassiana, permitindo o
controle biolgico do moleque da bananeira.
Os exemplos anteriores mostram que, paradoxalmente, as biotecnologias
intermedirias so as que vem tendo maior aplicao no atual estgio de desenvolvimento
agrcola do pas. Esta constatao tambm valida para diversos pases da Amrica Latina
e do Caribe. Na Costa Rica, Honduras, Colmbia e em Cuba, a maior parte das mudas de
abacaxizeiros e bananeiras so produzidas por tcnicas de micropropropagao. Em
laboratrios da Costa Rica, Honduras e Cuba, tcnicas biotecnolgicas relativamente
simples como a seleo de linhagens celulares resistentes permitiram a obteno de
variedades de bananeiras resistentes molstia fngica sigatoka-negra (Mychosphaerella
fijiensis) (Izquierdo, 1995). Nos bananais de Cuba estima-se um gastos de US$ 700,00/ha
para o controle desta molstia. Em pases da sia um programa da FAO intitulado "Do
laboratrio ao campo: biotecnologia agrcolas para pequenos produtores" identificou e
recomendou as biotecnologias que deveriam estar disponveis e seu custos passveis de
serem .absorvidos pelos pequenos produtores. Estas biotecnologias incluem a cultura de
tecidos para a micropropagao de variedades sadias de razes e tubrculos, frutferas e
ornamentais, inoculantes derivados de bactrias, fungos e algas, bioinseticidas, produo de
fungos comestveis. Este projeto vem revelando timos resultados nos pases de sua
abrangncia: Bangladesh, India, Indonsia, Nepal, Filipinas, Sri Lanka, Tailndia e Vietname
(Knudsen, 1991).
DESAFIO ATUAL
At o momento ainda no foi possvel estabelecer com clareza o papel e a insero
das biotecnologias na agricultura brasileira. Esta tarefa complexa e paradoxal, se
considerarmos o carter geralmente excludente das tecnologias de ponta, ditas sofisticadas
e caras. Contudo, dependendo da evoluo e consolidao de tcnicas biotecnolgicas
pertinentes, elas podero se tornar "janelas de oportunidades" para a produo agrcola,
aumentando as chances para os agricultores menos capitalizados. Este aspecto j vem
sendo observado em pases perifricos ao redor do mundo (Bergamasco et al, 1995).
Contudo, como notaram Rojas e Jaff (1994) esta janela de oportunidades poder no
existir por muito tempo, a menos que os pases em desenvolvimento criarem condies e
capacidades para em curto espao de tempo utilizarem seus recursos, antes que as grandes
corporaes do Hemisfrio Norte o faam. Alm disto, como afirma Van de Sande (1994) o
desenvolvimento de tecnologias durante a revoluo verde foi um processo padronizado e
unidirecional, dos pesquisadores para os agricultores. J o desenvolvimento das
biotecnologias pode ser bi-direcional e permitir respostas a problemas regionais especficos.
Por isso o sucesso das biotecnologias depende, em grande escala, do estoque de
conhecimento acumulado ao longo do tempo pelos agricultores. Por exemplo o
conhecimento das populaes nativas sobre plantas medicinais, sobre espcies e
variedades nativas e sobre os sistemas de manejo de fundamental importncia para o
desenvolvimento de biotecnologias pertinentes. Duas afirmaes feitas por Sachs (1995)
merecem anlise e reflexo. A primeira observa que a produo de alimentos necessita
tornar-se menos intensiva em energia e, ao mesmo tempo, mais eficiente do ponto de vista
energtico. A segunda diz que um reexame radical dos objetivos e critrios de avaliao dos
sistemas de pesquisa agrcola gerados no mbito da revoluo verde, demonstra que o
futuro da agricultura pertence aos sistemas de produo intensivos no conhecimento e no
nos insumos.

90
PARTE 5 - BIOTICA
1-INTRODUO
A expresso tica resultante da fuso de duas palavras gregas: ethos - modo de ser
ou carter; mos ou mores - costume ou costumes. Refere-se avaliao normativa das aes
e do carter de indivduos e grupos sociais. Usada alternativamente com moralidade para se
referir s obrigaes e deveres que governam a ao individual. "A tica a teoria ou cincia
do comportamento moral dos homens em sociedade" (Vazquez, 1980). O estudo da tica a
reviso crtica sobre valores. Para tal h necessidade de liberdade e ausncia de
preconceitos.
A BIOTICA um neologismo: bios e ethos - modo de ser (tica) da vida. Trata das
questes ticas da medicina, da sade pblica e das cincias da vida. A biotica pergunta-se
sobre a legitimidade dos projetos de efeitos biotecnolgicos.
2-HISTRICO
Em 1948 o Cdigo de Nuremberg foi estabelecido e contm normas para a pesquisa com
seres humanos. Estabelece ainda a responsabilidade individual do pesquisador.
Posteriormente, em 1964 houve um aperfeioamento do mesmo com a Declarao de
Helsinque e suas verses seguintes com as revises de 1975 (Japo), 1983 e 1989
(Venezuela).
A primeira Conferncia de Biossegurana foi realizada em Asilomar no ano de 1975. Foram
estabelecidas recomendaes para manuseio, conteno e armazenamento de produtos
perigosos bem como protocolos laboratoriais e os procedimentos associados aos diversos
tipos de riscos. Tambm foi declarada uma moratria voluntria com relao s pesquisas na
espcie humana (Science, 188:991-994, 1975) porque as previses dos impactos eram
impossveis de serem adequadamente conhecidas. O maior saldo foi o respeito do pblico
pelo gesto de precauo dos cientistas.
Em 1992 foi realizada a Conveno sobre a Diversidade Biolgica (CDB) no Rio de Janeiro, a
qual contemplou a necessidade de um protocolo de internacional de biossegurana visando
proteger a sade e o meio ambiente.
Uma segunda conferncia, 25 anos depois, ou seja, no ano 2000, foi realizada em Asilomar.
Nesta conferncia, foram enfatizados o estreitamento do investimento privado e o avano da
cincia; a ampliao e o fortalecimento das leis de proteo, notadamente a de patentes; a
pressa na comercializao dos produtos e servios da biotecnologia; a omisso de resultados;
a falta de precauo e o rompimento de valores ticos. Em decorrncia, os cientistas
comearam a perder a credibilidade da sociedade e uma reao aos produtos das
biotecnologias, em especial os transgnicos.
3-SITUAO NA EUROPA E EUA
Na EUROPA, os 32 membros da Conveno Europia em Biotica aprovaram um
documento em fevereiro de 1995, mas sem muito consenso. Em abril de 1997, a Comisso
Europia deliberou sobre a obrigatoriedade de rotular os produtos geneticamente modificados
como tal, para diferenciar dos demais (Nature, 386:532, 1997). Em 2001 o Parlamento
Europeu e do Conselho aprovou a Diretiva 2001/18/CE sobre biossegurana de transgnicos
e derivados, em substituio a 90/220/CEE. O Princpio da Precauo fortemente saliente
no processo de anlise de liberao intencional no meio ambiente de OGMs.
A Suia realizou um plebiscito sobre a possvel banio de produtos transgnicos. Um tero
da populao votou pela banio. O envolvimento da sociedade na discusso sobre OGMs
cada vez mais crescente, atingindo inclusive os Estados Unidos. Nestas discusses, muitas
questes ticas so levantadas, o causa tenso com as questes cientficas.


91
4-SITUAO NO BRASIL
Em 1988 o Ministrio da Sade baixou a Resoluo 1/88 que trata de Pesquisas com Seres
Humanos, em especial na rea Mdica. Parte operacional no implantada. Segundo vrios
cientistas, misturou-se fiscalizao com tica.
Sete anos mais tarde uma Comisso de 14 pessoas foi formada para revisar a Resoluo 1/88
a partir de 30.000 questionrios e reunies e audincias pblicas.
Em relao aos OGMs, em 2005 foi sancionada a nova Lei da Biossegurana (Lei n
11.105). Especificamente com a espcie humana, a lei de biossegurana apresenta:
Art. 6
o
Fica proibido:
I implementao de projeto relativo a OGM sem a manuteno de registro de seu
acompanhamento individual;
II engenharia gentica em organismo vivo ou o manejo in vitro de ADN/ARN natural ou
recombinante, realizado em desacordo com as normas previstas nesta Lei;
III engenharia gentica em clula germinal humana, zigoto humano e embrio humano;
IV clonagem humana;
V destruio ou descarte no meio ambiente de OGM e seus derivados em desacordo com as
normas estabelecidas pela CTNBio, pelos rgos e entidades de registro e fiscalizao, referidos no art.
16 desta Lei, e as constantes desta Lei e de sua regulamentao;
VI liberao no meio ambiente de OGM ou seus derivados, no mbito de atividades de pesquisa,
sem a deciso tcnica favorvel da CTNBio e, nos casos de liberao comercial, sem o parecer tcnico
favorvel da CTNBio, ou sem o licenciamento do rgo ou entidade ambiental responsvel, quando a
CTNBio considerar a atividade como potencialmente causadora de degradao ambiental, ou sem a
aprovao do Conselho Nacional de Biossegurana CNBS, quando o processo tenha sido por ele
avocado, na forma desta Lei e de sua regulamentao;
VII a utilizao, a comercializao, o registro, o patenteamento e o licenciamento de tecnologias
genticas de restrio do uso.
Pargrafo nico. Para os efeitos desta Lei, entende-se por tecnologias genticas de restrio do
uso qualquer processo de interveno humana para gerao ou multiplicao de plantas geneticamente
modificadas para produzir estruturas reprodutivas estreis, bem como qualquer forma de manipulao
gentica que vise ativao ou desativao de genes relacionados fertilidade das plantas por
indutores qumicos externos.
Em1996, a Resoluo 196/96 de 16/10/96 Cria Conselho Nacional de tica de
Pesquisa e Comits de tica de Pesquisa Institucional (CEPI) com pelo menos 6 membros. Os
CEPI passaram (i) a ser co-responsvel pelas decises e a ter as funes de (ii) consultoria e
(iii) educao. Cada comit deve ser registrado no Ministrio da Sade.
UFSC institui seu CEPI, com um representante de cada Centro, em 1997. Mais tarde, em
1999, a UFSC institui a Comisso Interna de Biossegurana (CIBio) composta de 5 membros.

5-IMPLICAES DA CLONAGEM DE ANIMAIS
A Dolly popularizou a questo e gerou problemas e dvidas. A Polly que uma ovelha com
genes humanos no recebeu ateno da mdia. A discusso sobre os xenotransplantes
(transplante de rgos de animais para seres humanos) comea a se ampliar.
A clonagem em animais mais recente que em plantas. Nos anos 60 foi obtida a clonagem
em sapos e 10 anos depois, em ratos. Em 1994 nasce Astrid, a porca transgnica com genes
humanos, que produzem uma protena de membrana, capaz de diminuir ou mesmo eliminar

92
os riscos de rejeio de transplantes de rgos do porco para seres humanos. ("Porco-
irmo"). Em 1997 a clonagem alcanou outros animais (ovelhas, vacas e macacas).
A Clonagem humana vai acontecer num curto espao de tempo? Embora no seja possvel
responder esta questo de modo conclusivo, existem fatos relacionados ao assunto que
merecem reflexo:
gmeos so clones;
a clonagem animal pressionar a clonagem humana;
demandas individuais (ex: em So Paulo pai que perde filho em acidente quer um clone;
me doa vulo para filha gerar neto; mulheres podem gerar filho sem fecundao);
a terapia gnica com clulas somticas quase uma realidade;
fertilizao in vitro (ou bebs de provetas) - Em 1780 na Inglaterra foi feita a primeira
tentativa de inseminao artificial com o esperma do marido. Mais tarde, em 1884 foi feita
a inseminao com esperma de um doador. Em 1978, o primeiro beb de proveta. No
Brasil, nasce em 1984 o primeiro beb (uma menina que hoje tem 17 anos. Os bebs de
provetas, uma realidade nos anos 1980 da realizao de uma idia surgida duzentos anos
antes.
doao de rgos - crianas so geradas para doao de medula a irmos;
clonagem de embries humanos no utilizados para reproduo (por serem defeituosos)
at o estdio de 32 clulas (Science, 262:652-653, 1993);
os xenotransplantes (transplantes de rgos de animais para humanos);
recomposio de rgos humanos via cultura de tecidos (clonagem);
bebs com material gentico de duas mulheres (impropriamente denominados de
geneticamente modificados) criana gerada com a fertilizao por um espermatozide de
um vulo contendo genoma nuclear da me e mitocndrias de uma doadora.

Porque a discusso hoje?
1) que anteriormente no havia massa crtica para a discusso. No incio do sculo havia
em torno de 8 mil cientistas e qumicos na Europa. Nos anos 80 este nmero cresceu para
mais de 5 milhes, com a incluso dos engenheiros. Portanto, a cincia e a tecnologia so
consideradas dois dos principais componentes da cultura contempornea.
2) O potencial das tecnologias pode reprogramar o cdigo gentico, e conseqentemente a
vida dos organismos.
3) A existncia de vrios conflitos decorrentes de diferentes interesses.
4) A gerao da Dolly popularizou a questo, mas provocou problemas e dvidas.
5) A percepo pblica, aps o episdio da vaca louca;
6) Os possveis riscos associados aos alimentos transgnicos.

6-RELEVNCIA DA BIOTICA
O prefixo bio, indica ao mesmo tempo uma inovao e o retorno a uma tradio pr-
moderna. A relevncia do paradigma biotecnocientfico decorre do fato de que, em princpio,
todo o mundo est (ou vir a estar) envolvido nos efeitos da Revoluo Biolgica (fecundao
in vitro e transferncia de embries; clonagem; remdios obtidos pelo saber-fazer das
biotecnologias; tratamento do cncer, da AIDS e de outras caractersticas indesejveis;

93
modificao de plantas e animais pela manipulao e reprogramao de seus genes; combate
s grandes endemias e fome; etc.)
Com esta revoluo, foram adquiridas novas competncias: o tratamento da informao dos
seres vivos. Ento, agora determinadas condies podem ser alteradas em funo dos
desejos e projetos humanos. A Revoluo Biolgica no permite somente descrever e
compreender a vida, mas tambm modific-la, graas a uma nova forma de saber-fazer
proporcionado pela aliana entre tecnocincias da linguagem e tecnocincias biolgicas
(Schramm, 1996).
O paradigma biotecnolgico constitui um padro de competncia em adaptar a prpria
natureza humana aos desejos e projetos humanos, por exemplo, para aliviar o sofrimento,
prevenir doenas, melhorar as condies de vida, programar a qualidade de vida dos
descendentes, programar o fim da vida, etc. Desta forma, a biotecnocincia levanta uma srie
de questes morais inditas, pois o novo tipo de competncia infringe um tabu milenar
(Schramm, 1996). Como conseqncia, existe tambm um novo paradigma moral que deve
enfrentar os problemas relativos ao paradigma biotecnocientfico. Trata-se do paradigma
biotico (Hottois, 1990), expresso proposta por Potter, ainda em 1970. O paradigma biotico
atual refere-se ao padro de reflexo e argumentao sobre os valores e suas justificativas a
respeito da vigncia de competncia biotecnocientfica em reprograma o fenmeno vida.
Na opinio de Schramm (1996), esta discusso se d num contexto pblico em que se
defrontam duas posies fundamentais: uma viso essencialmente leiga, secularizada e
pluralista, e uma viso religiosa. Entretanto, tal discusso acerca do paradigma biotico est
muito restrito aos especialistas, incluindo-se neste grupo os filsofos, telogos, juristas e
cientistas.
Com a clonagem da ovelha Dolly, o assunto chegou at sociedade como um todo. So cada
vez mais comuns artigos em jornais, artigos em revistas cientficas e de divulgao,
programas na televiso, mesas redondas em congressos cientficos, discusses sobre
projetos de leis relacionados ao assunto, entre outros. Com o avano nas pesquisas sobre
xenotransplantes e a possibilidade de que os defeitos genticos se transformem
imediatamente em doenas para as seguradoras, a populao, em vrios pases
industrializados comeou a participar ativamente nos debates. No Brasil, desde 1998, os
debates com os diferentes segmentos da sociedade tomaram vulto.
Face a profundidade da competncia gerada pela associao entre estas duas revolues, o
debate pblico sobre biotica necessrio. Esta forma de competncia realiza antigas
aspiraes de controle da vida e da morte, j amplamente relatadas pelos mitos, as artes e as
tcnicas desde a antiguidade. Portanto, ela no , em princpio um fato qualitativamente
indito. O novo, contudo, o fato que a revoluo da biotecnocincia no se limitar apenas a
considerar o conceito de essncia, mas tambm a projetar e reprogramar o prprio fenmeno
da vida na sua totalidade (Schramm, 1996). O prprio conceito de doena est sendo
alterado, pois ele poder no mais se restringir a um conjunto de sinais e sintomas, mas
estender-se a predisposies genticas para a manifestao de futuras sintomatologias
(Beiguelman, 1997).

POSSVEL UMA NOVA ALIANA ENTRE FATOS E VALORES?
Esta uma questo complexa. O mundo regido por uma pluralidade de interesses e valores
contraditrios entre si. O denominador comum, na melhor das hipteses, ser uma mera
tolerncia entre pequenas diferenas suportveis. A nova aliana seria, quando muito, algo
como uma tica mnima, produzida para que exista alguma forma de compromisso aceitvel
pelas partes. Neste caso, o princpio da no-autocontradio deve ser respeitado (Schramm,
1996).
A vigncia de uma tica mnima torna possvel estabelecer um conjunto mnimo de
proposies pertinentes sobre a biotecnocincia, como maneira de iniciar um jogo lingustico

94
racional, imparcial e no-excrudente num mundo secularizado e politesta: 1) a dimenso
biotecnocientfica do saber-fazer contemporneo afeta a qualidade de vida de um nmero
crescente de indivduos e populaes, e a rigor de outros sistemas vivos no-humanos, assim
como de seus ambientes naturais que, por sua vez, afetam a prpria vida humana; 2) ignorar
este fato pode levar a atitudes igualmente problemticas para a auto-realizao da vida
humana.
A afirmao no se pode escolher determinados aspectos da cincia e recusar outros, mas
to-somente aceitar tambm o lado imprevisvel e inquietante (Jacob, 1990) provavelmente
decorrente do fato de que a populao jamais participou da discusso e das decises sobre o
uso do avano cientfico na forma de tecnologias. Na verdade, estamos precisando uma nova
era. De um lado, as industrias juntamente com o auxlio de parte da comunidade cientfica
trabalhando para o desenvolvimento de tecnolgias, sem o necessrio conhecimento cientfico
sobre os efeitos das mesmas na sade humana o e no ambiente, e de outro lado, os
consumidores se organizando para exigir segurana e precauo. Disso pode resultar o
avano dos princpios de bitica, que basilar o uso das biotecnologias no futuro.
A competncia biotecnocientfica precisa de um acompanhamento racional e imparcial,
fornecido pela competncia biotica, capaz de trazer no espao do debate pblico a crtica a
eventuais guinadas autoritrias e tecnocrticas, prejudiciais aos direitos das pessoas
(Schramm, 1996).

7-A BIOTICA LEIGA
As principais caractersticas da biotica leiga podem ser resumidas da seguinte forma
(Schramm, 1996):
1) no ter nenhum princpio de autoridade heteronomamente estabelecido, a no ser a
autoridade construda pelo consenso livre entre as partes numa sociedade determinada;
2) no ter nenhum princpio absoluto norteador das discusses em mbito pblico e
legitimador da maior ou menor relevncia de um argumento, mas somente princpios prima
facie, reguladores de conflito;
3) ser, em princpio, tolerante, respeitosa dos argumentos racionais (publicamente relevantes)
e das emoes privadas quando estas no ferirem concretamente os iguais interesses de
terceiros nem o interesse pblico.
Como um interesse um interesse, seja l de quem for esse interesse (Singer,
1984), a discusso deve ocorrer num ambiente de liberdade e sem preconceitos. Desta
forma estaria garantido o pluralismo do espao pblico bem como o politesmo e a tolerncia,
caractersticas do espao privado.

8-AS NOVAS BIOTECNOLOGIAS - ESPCIE HUMANA
Terapia gentica ou gnica - diz respeito possibilidade de corrigir defeitos ou
prejuzos para a qualidade de vida saudvel de indivduos e populaes. Na viso dos
defensores da tecnologia, a terapia gentica deve ser considerada como qualquer outra
terapia, e no us-la significaria infringir os prprios princpios da beneficncia e de no-
maleficncia que imperam desde Hipcrates. No haveria, portanto, nenhuma objeo
moralmente relevante contra o uso da terapia gentica, desde que seja tambm respeitados o
princpio da autonomia do consumidor e o princpio da justia (ou de eqidade).
Contudo, h objees de cunho religioso ("brincar de Deus") e naturalista (liceidade de
interferir na autopoiese do mundo natural) (Schramm, 1996). Mas as objees religiosas e
naturalistas no consideram adequadamente o ponto de vista segundo o qual a natureza
humana algo dinmico, suscetvel de ser remoldado pela prpria competncia
biotecnocientfica em rpida expanso. H, contudo, uma objeo mais pertinente que refere-

95
se a terapia gentica aplicada a linha germinal. Neste caso, a alegao que as
conseqncias a mdio e longo prazos so amplamente desconhecidas. H tambm outras
objees. Ainda no se conhecem os efeitos colaterais da terapia gnica na espcie humama.
Outra questo polmica origina-se do Projeto Genoma Humano. Na realidade, o
mapeamento do genoma tornar disponvel um nmero praticamente ilimitado de dados sobre
indivduos e populaes. O fato que as informaes possuem dupla face. De um lado
permitem encontrar terapias e estratgias preventivas. De outro lado, podem revelar
informaes a terceiros. Neste caso, a questo pertinente refere-se ao controle da informao
para evitar abusos. provvel que o controle poder ser resolvido pela legislao. Desta
forma, deixaria de ser um problema para a biotica (Schramm, 1996).
Cientistas como Richard Lewontin, diz em seu livro a Triple Helix (2000), que a
expresso fenotpica resultante da ontogenia de um indivduo. Ou seja, depende da
composio gentica, dos eventos ao acaso durante a ontogenia e do ambiente. No atual
estgio de conhecimento, pouco ou nada adiantar a disponibilidade de uma seqncia de 3
bilhes de pares de bases.

PERCEPO PBLICA
Quanto mais o foco situar-se na segurana do produto para homens e o ambiente,
mais as decises devem ser tomadas com base no conhecimento cientfico do que na
novidade em si (Porter, 1997). No se admite que questes da mais alta relevncia como a
vida, a sade e a morte do homem, sejam decididas por pequenos grupos de cientistas (Silva,
1997).
Ano a ano, tem aumentado a participao da sociedade na discusso e nas
manifestaes a respeito das biotecnologias. "Dias globais de ao contra a Biotecnologia", de
20 a 27 de abril de 1997, organizado por Jeremy Rifkin. Mais de 200 grupos em 24 pases,
principalmente da Europa. Principal razo: alimentos de plantas transgnica podem no ser
sadios e podem causar impactos negativos no ambiente.
Numa pesquisa de opinio pblica (1998), as pessoas que mais conhecem o assunto
so da Alemanha, ustria e Portugal. O nvel de preocupao na Alemanha, ustria,
Dinamarca e Japo era superior a 80%, enquanto que na Grcia e Espanha era inferior a
40%. Contudo se a disposio para comprar produtos das biotecnologias acima de 70% no
Canad, USA, Portugal e Japo, de menos que 30% na Alemanha e ustria.
No Brasil centenas de debates j foram realizados, cartilhas produzidas.
Possveis conflitos
Alguns autores consideram que o avano inexorvel da tecnocincia leva a um
imperativo categrico: tudo aquilo que tecnicamente possvel fazer ser inevitavelmente feito
cedo ou tarde, independentemente do fato de ser moralmente lcito ou no. Alm disso, o
imperativo tecnolgico desloca os prprios limites morais, pois o que antes no caa no campo
do moralmente lcito ou ilcito (pela simples razo que era impensvel) pode ser hoje objeto de
avaliao moral e at de questionamento moral (Schramm, 1996). Contudo, a tecnologia
poder ser controlada pela sociedade, que tambm decidir o que poder ser feito ou no.
Todas as correntes bioticas parecem estar apoiadas em cinco princpios bsicos
consensuais, isto , os princpios paradigmticos de autonomia, privacidade, justia,
qualidade e eqidade (Knoppers e Chadwick, 1994; Beiguelman, 1997). Juntos com os
princpios da beneficncia e no-malificncia refletem na realidade o pensamento anglo-
americano individual da questo, segundo o padre Lo Pessini (1997).

CONFLITOS NA REA DE PRODUO DE ALIMENTOS

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CONFLITO I
Posio "naturalista" (defendida por ambientalistas, ecologistas e religiosos), segundo a qual
o homem deveria respeitar o finalismo intrnseco dos fenmenos naturais, no podendo, em
princpio, "brincar de Deus" nem interferir nos processos de criao.
Posio "artificialista" (defendida pelas empresas e alguns cientistas), segundo a qual o que
possvel fazer em prol do bem-estar e do progresso cientfico tem em princpio o direito de
ser feito e at deve, em determinados casos, ser feito, mesmo que com isso se assumam
atitudes anti-naturais.
Contudo, cresce no mundo inteiro, o nmero de partidrios do princpio da precauo. O
Princpio da Precauo foi estabelecido em acordos internacionais (ex: CDB), como um
princpio tico e implica que a responsabilidade pelas futuras geraes e pelo meio ambiente
deve ser combinadas com as necessidades antroprocntricas do presente.
CONFLITO II
Enquanto muitos consumidores apregoam o consumo de produtos naturais ou orgnicos,
produtores esto procurando cortar custos de produo e aumentar rendimento, movendo-se
em direo oposta atravs do uso de cultivares que tem sido engenheiradas ou medicamentos
e outros produtos transgnicos. O conflito praticamente inevitvel.

CONFLITO III
O conflito comercial entre naes j comeou. A finalizao do Protocolo Internacional de
Biossegurana no teve adeso de muitos pases. Desta forma, qualquer operao com
OGMs dever haver prvio consentimento do pas importador. Isto est criando grandes
dificuldades de comercializao. Seus artigos entram em choque com o que apregoa a
Organizao Mundial do Comrcio.
Dentre os vrios aspectos, o princpio da precauo, que deve ser adotado em caso de dvida
ou falta de conhecimento cientfico e a rotulagem dos produtos transgnicos, devem causar
tenso, pois o pas importador pode recusar o produto caso no esteja acompanhado de
estudo de risco adequado.
Um episdio que ocorreu no ano de 2000, cujas conseqncias ainda no findaram,
ilustra vrios tipos de conflitos. O maior fiasco da biotecnologia como j considerado, trata-
se do StarLink. StarLink, um tipo de Bt que contm o gene Cry9C, foi aprovada nos EEUU
para alimentao animal mas no para consumo humano, pois contm uma protena que pode
causar reaes alrgicas em humanos, uma vez que a protena Cry9C no quebrada
imediatamente nos testes de digesto. A empresa produtora desta variedade (Aventis),
distribuiu as sementes sem nenhuma ressalva. Assim, houve contaminao de lavouras
vizinhas com plen desta variedade. Tambm, os milhos foram colhidos e misturados com os
demais. Resduos desta protena foram detectados em produtos alimentcios e bebidas, tanto
nos Estados Unidos quanto em outros pases. Conseqncias: alergia detectada em 7 de 54
pessoas suspeitas, necessidade de recolher no s o milho colhido mas tambm os produtos
j processados que poderiam contem a farinha contaminada com este milho, indenizao dos
supermercados, indenizao dos compradores no pas e no exterior, indenizao de
agricultores que tiveram sua lavoura contaminada pelo plen do StarLink. Estima-se um gasto
entre 100 milhes e 1 bilho de dlares, o custo da operao.
Dentre as vrias lies, duas so relevantes: 1) no foi possvel localizar 12% da produo
desta variedade, o que demonstra que uma vez liberado no ambiente, dificilmente existir
controle sobre um OGM; 2) as empresas no esto preocupadas com a sade das pessoas
nem com os agricultores, mas em vender seus produtos. Um outro tipo de conflito comercial
poder ocorrer entre agricultores, basicamente devido a contaminaes pelos transgnicos.
Ocorrendo cruzamentos entre plantas transgnicas e no transgnicas espcie, poder criar
conflitos entre produtores que utilizam transgnicos e produtores de alimentos chamados

97
orgnicos, que so considerados de alta qualidade biolgica. Como ser resolvido este
impasse? Um caso nos Estados Unidos implicou no prejuzo de US$170.000 a um produtor
cuja produo orgnica foi contaminada por milho transgnico Bt. Na Inglaterra e outros
pases existem muitas aes tramitando na justia, sobre esta questo, que ainda no tem
soluo fcil. O que acontecer no Brasil? Pergunta ainda sem resposta.
Plen de plantas transgnicas esto sendo coletados pelas abelhas e espalhados no
mel. Em 1999, Friends of the Earth, uma ONG, descobriu plen de canola tolerante a
herbicida (Arventis, ex AgrEvo) em abelhas cujas colmias estavam localizadas a 4 km de
distncia do experimento de OGM mais prximo. Implicao da poluio gentica: o mel est
perdendo o status de alimento sadio e natural. Os apicultores esto sendo forados a se
retirar das reas prximas dos testes com OGMs: danos aos produtores de frutas e hortalias.
Os danos so tanto para os apicultores como para os produtores de frutas, cujas
consequncias podero ser muito srias. A questo da responsabilidade sobre a poluio
ainda no est resolvida na Inglaterra.
Recentemente (2001) a Unio Europia proibiu a importao de mel porque estava
contaminado com plen de canola transgnica.

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