Instituto Federal de Educao, Cincia e Tecnologia do Rio de Janeiro

Curso Superior de Bacharelado em Qumica com !tri"ui#es Tecnol$gicas

!n%lise de &guas' (em"rana Filtrante
!lessandra Car)alho de Sou*a e Sil)a
+ohan Cha)es Sessa
,riscila Faustino dos Santos
-ctor de Car)alho (artins
.il$polis/RJ
0123
Relat$rio entregue 4 ,ro5essora (%rcia !ng6lica .e)es como e7posio escrita de
um procedimento pr%tico da disciplina !n%lise Quantitati)a do Instituto Federal
de Educao, Cincia e Tecnologia do Rio de Janeiro 8 Campus .il$polis, Curso
Superior de Bacharel em Qumica com !tri"ui#es Tecnol$gicas9
Relat$rio entregue 4 ,ro5essora (%rcia !ng6lica .e)es como e7posio escrita de
um procedimento pr%tico da disciplina !n%lise Quantitati)a do Instituto Federal
de Educao, Cincia e Tecnologia do Rio de Janeiro 8 Campus .il$polis, Curso
Superior de Bacharel em Qumica com !tri"ui#es Tecnol$gicas9
Relat$rio entregue 4 ,ro5essora (%rcia !ng6lica .e)es como e7posio escrita de
um procedimento pr%tico da disciplina !n%lise Quantitati)a do Instituto Federal
de Educao, Cincia e Tecnologia do Rio de Janeiro 8 Campus .il$polis, Curso
Superior de Bacharel em Qumica com !tri"ui#es Tecnol$gicas9
Relat$rio entregue 4 ,ro5essora (%rcia !ng6lica .e)es como e7posio escrita de
um procedimento pr%tico da disciplina !n%lise Quantitati)a do Instituto Federal
de Educao, Cincia e Tecnologia do Rio de Janeiro 8 Campus .il$polis, Curso
Superior de Bacharel em Qumica com !tri"ui#es Tecnol$gicas9
Relat$rio entregue ao ,ro5essor :Sc Edmir Fernandes Ferreira como
a)aliao da disciplina (icro"iologia II do Instituto Federal de
Educao, Cincia e Tecnologia do Rio de Janeiro 8 Campus
.il$polis, Curso Superior de Bacharelado em Qumica com
!tri"ui#es Tecnol$gicas9
1. Introduo
; n<mero casos de doenas in5ecciosas e de parasitoses de transmisso 5ecal
oral tem aumentado a cada ano, de)ido ao seu r%pido potencial de disseminao, essas
doenas representam um importante risco 4 sa<de humana, e so respons%)eis por um
alto n<mero no percentual de mortalidade, inclusi)e a in5antil9
! t6cnica de mem"rana 5iltrante 6 um m6todo r%pido e preciso para isolamento e
identi5icao de col=nias de "act6rias indicadoras de contaminao 5ecal, pois em
condi#es naturais estas "act6rias no esto presentes em %guas naturais e sim em
grande >uantidade nos intestinos e 5e*es humanas e de animais de sangue >uente
e)idenciando contaminao da %gua por microorganismo das 5e*es pertencentes 4
5amlia Entero"acteriaceae9
Segundo a Fundao .acional de Sa<de as "act6rias do grupo coli5orme so
de5inidas como "acilos aer$"icos e anaer$"icos 5acultati)os, ?ram@negati)os, no
5ormadores de esporos, capa*es de crescer na presena de concentra#es relati)amente
ele)adas de sais "iliares e 5ermentar a lactose na temperatura de AB @ ACDC, com
5ormao de %cido, g%s e aldedo, em 03 a 3E horas9 ! Escherichia coli e os coli5ormes
termo tolerantes so um su"grupo dos coli5ormes totais >ue podem 5ermentar a lactose
em temperaturas mais ele)adas, sendo a E9coli a principal neste grupo por ser a <nica
>ue tem o ha"itat e7clusi)amente no trato intestinal de humanos e de animais de sangue
>uente9
Sendo assim a t6cnica de mem"rana 5iltrante 6 um dos m6todos usualmente
usado nos la"orat$rios para >uanti5icar a presena de coli5ormes em %guas, por ser uma
t6cnica'
Com "oa reproduti"ilidadeF
0
Gtili*ada para grandes )olumes de %guaF
; resultado r%pido comparado com a t6cnica de tu"os m<ltiplos
H <til no monitoramento da %gua de consumo humano e outras %guas naturais9
2. Objetivos
! t6cnica mem"rana 5iltrante destina se a a)aliar a >ualidade da %gua pot%)el, ou
seIa, a>uela >ue direta ou indiretamente ser)ir% para o consumo humano, tendo como
parJmetros as .ormas >ue adotadas e preconi*adas pelo Standard Methods for the
Examination of Water and Wastewater, pu"licado pela American Public Health
Association (APHA), American Water Works Association (AWWA) e Water Environment
ederation, em 011B9
3. Materiais e Mtodos
29 ,reparo de (eios e -idrarias K,ara TurmaL
Materiais !tili"ados
Balana
Esp%tula
(eio Chromocult
(eio Endo FC
(eio Cetrimide
Caldo ,! K,resena@!usnciaL
ErlenmeMer K0 unidadesL
,lacas de ,etri de 3C mm de diJmetro K2E unidadesL
Bal#es de Fundo Chato de B11 m+ KN unidadesL
,ro)eta de B11 m+ KN unidadesL
,ipetas de 21 m+ KA unidadesL
!utocla)e
Jornais e Bar"ante
Sistema de Filtrao com Bom"a 4 -%cuo
Pre#aro dos Meios
(EI; COR;(;CG+T
A
,esou@se em um pedao de papel alumnio 1,C g de meio chromocult, trans5eriu@
se para um erlenmeMer e adicionou@se 0B m+ de %gua de diluio est6ril com au7ilio de
uma pro)eta9 !>ueceu@se no "ico de Bunsen at6 completa dissoluo e, ap$s, trans5eriu@
se com pipeta est6ril 0 m+ de meio para cada placa de ,etri pre)iamente esterili*ada9
(EI; E.:;
,esou@se em um pedao de papel alumnio 2,0 g de meio Endo, trans5eriu@se
para um erlenmeMer e adicionou@se 1,B m+ de %lcool e 03,B m+ de %gua de diluio
est6ril com au7ilio de uma pro)eta9 !dicionou@se 1,3 g de %gar e a>ueceu@se no Bico de
Bunsen at6 completa dissoluo9 !p$s, trans5eriu@se com pipeta est6ril 0 m+ de meio
para cada placa de ,etri pre)iamente esterili*ada9
(EI; CETRI(I:E
,esou@se 2,0 gramas do meio desidratado e dissol)eu@se em 0B m+ de %gua
destilada9 !crescentou@se 1,0B m+ de glicerol e homogenei*ou@se o meio9 !p$s,
esterili*ou@se o meio a 202PC K2 Qg/cm
0
de pressoL em autocla)e por 2B minutos,
sendo en)asado nas placas de petri pre)iamente esterili*adas9
C!+:; ,!
,esou@se 3,N gramas e dissol)eu@se em B1 m+ de %gua destilada9 Este
procedimento 5oi reali*ado em N "al#es de 5undos chatos9 Esterili*ou@se os "al#es a
202PC K2 Qg/cm
0
de pressoL em autocla)e por 2B minutos9
Pre#aro das $idrarias
!s placas de ,etri e as pipetas 5oram em"rulhadas em 5olhas de Iornal para
posterior esterili*ao9 ,ara os "al#es, 5oram utili*adas rolhas de algodo para )edar os
mesmo9 Foram retiradas os suportes de pl%stico das pro)etas e estas 5oram )edadas com
5olhas de Iornal9
; porta@5iltro e o copo 5oram em"rulhados em 5olhas de Iornal e tam"6m
esterili*ados a 202DC K2 Qg/cmR de pressoL por 2B min9
09 Coleta da !mostra
Foi utili*ada uma amostra de %gua mineral da marca So +oureno, o"tida em
um supermercado de .o)a Iguau 8 RJ9
A9 Inoculao dos (eios e Caldo ,!
3
.os meios Chromocult, Endo e Cetrimide'
! inoculao nesses trs meios 5oi reali*ada utili*ando@se a t6cnica da mem"rana
5iltrante de por#es de 211 m+ da amostra9 ; sistema de 5iltrao 4 )%cuo 5oi montado e
em seguida, retirou@se a a parte superior do 5iltro Kpapel de colorao a*ulL e com o
au7lio de uma pina pre)iamente 5lam"ada e 5ria, pegou@se o 5iltro, com 1,3B Sm de
porosidade, e o colocou no porta@5iltro, 5echando@o utili*ando uma garra9 Em seguida,
5oi colocado 211 m+ da amostra no porta@5iltro e a "om"a de )%cuo ligada9 !p$s a
5iltrao da amostra com uma pina 5lam"ada e 5ria, 5oi retirado o 5iltro do suporte e
colocado numa placa de petri contendo um dos seguintes meios' Chromocult, Endo e
Cetrimide9
Reali*a@se esse procedimento para as 0 placas de petri de cada meio, totali*ando@
se N placas9 E por 5im, as placas de petri so incu"adas a ABPC durante 03 horas9
.o Caldo ,!'
.os "al#es de)idamente esterili*ados em autocla)e, I% contendo B1 m+ do caldo
,! adiciona@se 2B1 m+ da amostra em cada "alo9 Em seguida, de)e@se colocar os
"al#es para incu"ao 4 ABPC9
4. Resultados e Discusso
Foram reali*adas duas )eri5ica#es dos resultados das pr%ticas reali*adas, a
primeira ap$s 03 horas da inoculao, e no 5oi perce"ido >ual>uer tipo de crescimento
"acteriano, tanto no caldo ,!, >uanto nos meios' Chromocult, Endo e Cetrimide9
!p$s 3E horas da inoculao, reali*ou@se outra )eri5icao desses meios e
o"ser)ou@se >ue os meios Chromocult, Endo e Cetrimide, nos >uais 5oi utili*ada a
t6cnica de mem"rana 5iltrante, no hou)e crescimento "acteriano, re)elando a ausncia
de Escherichia coli, Pseudomonas aeru%inosa e Enterococos nas amostras da %gua
analisada9 !s imagens dos resultados o"tidos seguem a"ai7o KFigura 2L'
B
Figura 1 Meios !ndo" #$ro%ocult e #etri%ide
J% um dos "al#es contendo o caldo ,!, apresentou crescimento de "act6rias
con5orme seguem comparati)amente as 5iguras 0 e A, sendo de respecti)amente, 03
horas e 3E horas ap$s a inoculao'
N
I.C+G:E,ICTGRE Thttps'//5"cdn@sphotos@h@a9aUamaihd9net/hphotos@aU@
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Figura 2 #aldo &' a()s 24 $oras *+!,'-I.O/
C
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Figura 3 #aldo &' a()s 40 $oras *+!,'-I.O1/
Concluiu@se >ue o aparecimento de "act6rias no caldo ,! ap$s 3E horas da
inoculao, en>uanto nenhum outro meio apresentou tal crescimento, 5oi pro)eniente de
contaminao e7terna, no momento da pr$pria inoculao, por conseguinte 5oi o"tido o
resultado de ausncia de Escherichia coli, Pseudomonas aeru%inosa e Enterococos na
amostra analisada9
2. #oncluso
,odemos concluir >ue a t6cnica da mem"rana 5iltrante trata@se de um m6todo
r%pido e simples9 E com "ase nos resultados o"tidos, 5oi demonstrado >ue a %gua
mineral da marca So +oureno 5oi apro)ada >uanto 4 presena de Escherichia coli,
E
Pseudomonas aeru%inosa e Enterococos na t6cnica de mem"rana 5iltrante, pois no 5oi
encontrada nenhuma "act6ria >ue indicasse contaminao, logo a amostra est% em
con5ormidade com a legislao9 J% no caldo ,! de)e ter ocorrido contaminao e7terna,
de)ido aos di5erentes resultados analisando@se os dois "al#es com esse meio9
3. Re4er5ncias 6ibliogr74icas
BR!SI+9 Fundao .acional de Sa<de @ FG.!S!9 Manual &r7tico de 'n7lise
de 8gua. 0] ed9 re)9 Braslia' Fundao .acional de Sa<de, 011N9 23N p9
W