Dra. Ktia R. P.

de Arajo Sgrillo
katiasgrillo@uesc.br

So protenas sintetizadas nas clulas

vivas que catalizam ou aceleram uma
reao termodinamicamente possvel, de
modo que seja compatvel com o
processo bioqumico essencial para a
prpria clula.

As enzimas so altamente
especficas, interagindo com um
ou alguns substratos e catalizando
somente um tipo de reao
qumica.

Localizao intracelular de algumas vias

bioqumicas importantes

Quantidade de produto
formado (B)

Em geral as enzimas aumentam de

1 milho at mais de 1 trilho de
vezes a velocidade da reao, em
relao a reao correspondente
sem a presena da enzima.

com
enzima

Reao: A

A enzima no consumida
no processo.

sem enzima

tempo

Uma mesma molcula de enzima pode agir repetidamente

na converso de muitas molculas de A em B. No modifica
a constante de equilbrio de uma reao. Trabalha em
concentraes extremamente baixas.

Praticamente todas as reaes qumicas tm uma barreira de

energia separando os reagentes e produtos. Esta barreira
denominada de energia livre de ativao.
A

reagente

estado de
transio

Intermedirio de
alta energia livre

B
produto

As molculas de enzimas contm um

bolso ou fendas especial denominado

Os stios ativos contm aminocidos cujas cadeias laterais

criam uma superfcie tridimensional complementar ao
substrato.
substrato

+ enzima

stio ativo

(ES)

complexo
enzima-substrato

Toda enzima possui um

SITIO ATIVO. O sitio ativo
da enzima e o substrato
apresentam
estruturas
complementares e desse
modo ajustam-se como uma
chave-fechadura. Enquanto
eles
esto
unidos
no
complexo enzima-substrato,
a reao cataltica ocorre.
Os produtos da reao
deixam a superfcie da
enzima, liberando-a para
que combine com uma
outra molcula.

O stio ativo consiste em diferentes partes da cadeia protica

(a enzima). Estas partes so colocadas juntas atravs do
dobramento e da flexo da cadeia protica (estruturas
secundrias e tercirias), e assim o stio ativo ocupa uma rea
relativamente pequena.
B)

A)

A)

Representao esquemtica
de um sitio ativo em uma
enzima.

B)

Enzima desnaturada partes

do sitio ativo no esto mais
em proximidade.

De fato uma molcula, para ser

aceita como substrato,
substrato deve ter
a forma espacial adequada
para alojar-se no no centro ativo
da enzima e os grupos qumicos
capazes de estabelecer reaes
precisas com os radicais do
centro ativo.

Como cada enzima possui uma

organizao estrutural especfica, o seu
centro ativo permite a ligao apenas
do seu substrato,
substrato trazendo grande
especificidade para a catalise.

Com grau de especificidade varivel, algumas enzimas apresentam :

especificidade absoluta
atuam unicamente sobre um nico
substrato. Por exemplo: succinato
desidrogenase que catalisa
a
converso de c. succinico para c.
fumrico, produz apenas o ismero
trans e nunca o ismero cis.

ligao

especfica

estereoespecificidade

tais
enzimas podem detectar a diferena entre
ismeros pticos e selecionar apenas um
desses ismeros. Por exemplo :
a
enzima arginase catalisa a hidrlise da Larginina, mas no tem qualquer efeito na
hidrlise da D-arginina.

rompe
ligaes
apenas
entre
grupos
especficos. Por exemplo : a enzima
trombina rompera as ligaes entre
aminocidos arginina e glicina e no
afetara as ligaes entre os outros
aminocidos.

especificidade por grupos catalisam somente certos grupos

especficos. Por exemplo : a
quimiotripsina catalisa a hidrlise
somente de protenas contendo
fenilalanina, triptofano ou tirisina.

especificidade de reao
catalisam certos tipos de
reaes. Por exemplo : a
esterases catalisam a hidrlise
de steres em geral, e as
carboidrases, a hidrlise de
carboidratos.

Substrato + Enzima se transformam em um complexo ES que

dissocia-se em enzima e produto.

O nmero de molculas de substrato convertidas em produto por

molcula de enzima por segundo denominado nmero de tunover.

Milhares de reaes qumicas

enzimaticamente catalisadas nas
clulas
so
funcionalmente
organizadas em muitas seqncias
diferentes de reaes consecutivas,
chamadas
O ATP o intermedirio qumico
que une os processos celulares
liberadores de energia com aqueles
que a consomem. Na clula, seu
papel anlogo quele do dinheiro na
economia: ele produzido/ganho
nas
reaes
exergnicas
e
gasto/consumido
naquelas
endergnicas.

O,oh...
As enzimas so protenas e portanto esto
sujeitas a todas as reaes que as protenas
podem sofrer. Portanto as enzimas podem ser
coaguladas quando expostas as calor, lcool,
cidos fortes, reagentes alcalidicos
(agentes desnaturantes).
desnaturantes

As enzimas sofrem influncia de inmeros fatores,

tendo sua melhor atuao em condies ideais de

temperatura, pH, concentrao da

enzima e do substrato.
Muitas enzimas tem sido atualmente
preparadas na forma cristalina.

Temperatura tima
para a maioria das
enzimas

40 - 45C

A velocidade de todas as
reaes qumicas e afetada
pela temperatura: quanto
maior a temperatura, mais
rpida e a reao. Isto
tambm e verdadeiro nas
reaes
envolvendo
enzimas. Contudo, se a
temperatura
for
exageradamente elevada, a
enzima (protena) ser
desativada
por
desnaturao e perdera sua
funo biolgica.

Efeito
Efeitoda
datemperatura
temperaturasobre
sobreaaatividade
atividadeenzimtica
enzimtica

Atividade enzimtica

40 C

50 C

30 C

60 C
tempo

Cada enzima apresenta uma

faixa de pH na qual o seu
funcionamento melhor. Essa
chamada de faixa tima de
pH,
pH para aquela enzima em
particular. Como os fluidos
corporais so tamponados, o
pH geralmente no varia
muito alm dos valores
timos.

Mistura de reao
deve ser controlada
por tampes

Afeta o carter inico dos

grupos carboxlicos e aminos

Do mesmo modo que nas reaes

qumicas, a velocidade da reao
aumentada com o aumento nas
concentraes dos reagentes.
reagentes Com
uma maior concentrao de substrato,
a velocidade de reao aumentar at
que a enzima disponvel torne-se
saturada com o substrato.
substrato Alm
disso, com o aumento da quantidade
de enzima, a velocidade de reao
aumentar supondo um suprimento
ilimitado de substrato.

Algumas enzimas necessitam ser ativadas

para atuarem como catalisadores.
Exemplo: a papana, uma enzima proteoltica fica inerte
quando exposta ao oxignio; quando se adiciona um redutor
adequado para converter -S-S- em -SH, a papana se torna
completamente ativada (desde que seja protegida do O).
Grupos prostticos - cofator firmemente preso
protena enzimtica

cofator
ajudante

Coenzimas - molcula orgnica pequena, estvel

ao calor, que se dissocia facilmente da enzima.
Ativadores metlicos - grande nmero de enzimas
exigem ctions (K+, Mn 2+, Mg 2+, Ca 2+ ou Zn 2+ )
como ativadores

Um complexo enzima cofator catalicamente ativo

chamado de holoenzima.
holoenzima A protena enzimaticamente
inativa resultante da remoo do co-fator da holoenzima
chamado de apoenzima,
apoenzima isto :
Apoenzima (inativa) + cofator

As coenzimas so quimicamente
modificadas pelas reaes
enzimticas em que participam.
Portanto devem ser regeneradas.

Holoenzima (ativa)

As vitaminas so
coenzimas que no
podem ser
sintetizadas pelo
organismo e que
portanto devem estar
presentes na dieta.

Fatores de crescimento para

microrganismos
Substncias que curam
doenas causadas por
deficincias nutricionais
Por exemplo a nicotinamida, que uma
poro que compe o NAD+ ou seu cido
carboxlico anlogo. O cido nicotnico,
alivia a doena, que pode ser fatal,
causada pela deficincia nutricional da
nicotinamida
em
seres
humanos,
conhecida por pelagra (sintomas: diarria,
dermatite e demncia).

O termo niacina o nome oficial

para a vitamina representada pelo
cido nicotnico ou nicotinamida.
Funo
bioqumica:
Os nucleotdeos de
piridina so
coenzimas para
enzimas conhecidas
como desidrogenases
que catalizam reaes
de xido-reduo.

As formas coenzimticas da vitamina so os nucleotdeos de piridina

NAD+
coenzima I

NADP+

coenzima
II

denominados
nicotinamidaadenina
dinucleotdeo
(NAD+) ou
coenzima I e
fosfato de
nicotinamidaadenina
dinucleotdeo
(NADP+) ou
coenzima II.

enzimas

substrato

Desidrogenase
alcolica
Desidrogenase
isoctroca

etanol

Desidrogenase
lctica

isocitrato
lactato

produto

coenzima

acetaldedo
-cetoglutarato + CO2

NADP+

piruvato
cofator

apoenzima
Mlica

L-malato

piruvato + CO2

Desidrogenase de
glicose-6-fosfato

Glicose-6-fosfato

c. 6-fosfoglicnico

Desidrogenase
glutmica

c. L-glutmico

-cetoglutarato + NH3

NAD+

H+

O -

:CH2

C
+

As frmulas do acetilCoA
tem uma tpica estrutura
em que um nuclefilo tal
como H2O, R-S:- ou o
-carbono do
acetilCoA pode atacar o
local com carga positiva.

CoA

Acetil-CoA como
um nuclefilo
Acetil-CoA metablito
central. Participa do
metabolismo de
lipdeos, carboidratos e
protenas.

O :CH3

C
+

Acetil-CoA como
um eletrfilo

CoA

Segundo a propriedade
especfica da enzima
1. xidorredutases enzimas que catalizam reaes
de oxi-reduo (desidrogenases,
oxidases, oxigenases).

6. Ligases enzimas que catalizam

unindo duas molculas
conjugadamente com a
ruptura de uma ligao
pirofosfrica

2. Transferases enzimas que catalizam

reaes de transferncia de
grupos
(transaminases,
quinases, transacetilases).

5. Isomerases enzimas que catalizam

diferentes tipos de
isomerao (racemases,
epimerases, cis-trans
isomerase, cetol
isomerases
intramoleculares,
mutases)

3. Hidrolases 4. Liases - enzimas que

catalizam reversivelmente a
remoo no hidroltica de
grupos (furase,
descarboxilase).

enzimas
que catalizam reaes de
hidrlise de vrios compostos
(hidrolases do substrato hidrolase de ster do glicerol)

Enzima: uma biomolcula, protena, que catalisa uma

reao qumica especifica. Ela no afeta o equilbrio da
reao catalisada; ela aumenta a velocidade da
reao atravs do fornecimento de uma via de reao
com menor energia de ativao.

Cofator: on inorgnico ou uma coenzima necessria

para atividade de uma enzima.

Coenzima: cofator orgnico necessrio para a ao de

certas enzimas; freqentemente utiliza uma vitamina como
um dos componentes.

Grupo prosttico: on metlico ou composto orgnico

(diferente de um aminocido), que se liga covalentemente a
uma protena e essencial para sua atividade.

Holoenzima: a molcula cataliticamente ativa de uma

enzima, incluindo todas as subunidades necessrias,
grupos protticos e cofatores.

Dra. Ktia R. P. de Arajo Sgrillo

katiasgrillo@uesc.br

A
concentrao
de
enzimas intracelulares no
plasma e centenas de
vezes menor que no
interior das clulas, onde
elas so sintetizadas.

Em
condies
patolgicas,
quando as clulas so lesadas,
suas concentraes plasmticas
tornam-se
anormalmente
elevadas,
elevadas revelando a instalao
da molstia. Ainda mais o tipo de
enzima
cuja
concentrao
plasmtica aumenta pode indicar o
tecido ou rgo que sofreu a
injuria.
injuria Por isso a dosagem de
enzimas no plasma e pratica
corrente para a elucidao e o
acompanhamento de muitos casos
patolgicos.

Enzimas
Enzimascujas
cujasconcentraes
concentraesplasmticas
plasmticasso
soalteradas
alteradasem
em
determinadas
determinadascondies
condiespatolgicas
patolgicas

Enzimas
Transaminases

Molstias
Hepatite

Creatinina quinase, lactato

desidrogenase

Enfarte do miocrdio

Amilase, lipase
Fosfatase alcalina, -glutamil
transferase
Fosfatase cida
Creatinina quinase
Lactato desidrogenase
Amilase
Valores de referncia Marzzoco pag. 74

Pancreatite
Processos obstrutivos
biliares
Neoplasia de prstata
Leso cerebral grave
Anemia hemoltica
Parotidite (caxumba)

A regulao da velocidade de reao das enzimas essencial

para o organismo coordenar seus inmeros processos
metablicos.

Algumas enzimas com funes

reguladoras especializadas
respondem a efetores alostricos.
Enzima Reguladora: enzima que possui
uma

funo

reguladora

graas

sua

capacidade de apresentar alteraes na

sua atividade cataltica por mecanismos
alostrico ou por modificaes covalentes.

Efetores - so molculas que se

ligam de modo no-covalente
a um stio diferente do stio
ativo. Podem ser: o prprio
substrato (homotrfico) ou
algum produto da via
metablica (heterotrfico).

Enzimas alostricas so
reguladas por molculas
denominadas efetores
que se ligam de modo
no-covalente a um
stio diferente do stio
ativo.

Efetores
A B C D E
Homotrficos:
quando
o
prprio substrato serve como
efetor. Normalmente funciona
como efetor positivo.
A presena de uma molcula
em um stio na enzima aumenta
as propriedades catalticas dos
outros stios de ligao ao
substrato.
Stios
exibem
cooperatividade.
Quanto +
substrato tem, mas
a enzima funciona

Heterotrficos:
efetor
diferente
do
substrato.
Exemplo: A enzima que
converte A em B possui um
stio alostrico, que se liga
ao produto final E. Se a [E]
aumenta a enzima inicial na
rota inibida. Inibio por
feedback serve para coordenar o
fluxo de molculas de substrato
nas reaes de acordo com a
necessidade da clula (rota
especfica).

A velocidade da
maioria das enzimas
sensvel a alteraes
na concentrao de
substrato [S]

>>> [S]

>>>>Vo

A velocidade de uma reao (v) catalisada por uma enzima

aumenta conforme a concentrao do substrato ate atingir uma
velocidade maxima (Vmax).
(Vmax) A obteno de um plat na
velocidade de reao em altas concentraes de substrato
reflete a saturao pelo substrato de todos os stios ativos de
ligao disponveis na enzima.

Descreve como a velocidade de

reao varia com a [S]
S+E

K1

ES

K2

P+E

K-1
Onde:

Vo = Vmax [S]
Km+ [S]

S - substrato
E
- enzima
ES complexo transitrio enzima-substrato P produto
K1 , K-1 e K2 -constantes de velocidade

Onde:
Vo - velocidade inicial de reao
Vmax velocidade mxima
Km - constante de Michaelis-Menten = (K1 + K2)/ K1
[S] - concentrao do substrato

Km = (K1 + K2)/ K1

Km - caracterstico da enzima
e do substrato. No varia com a
concentrao da enzima.

Km pequeno - numericamente
pequeno (baixo) reflete alta
afinidade da enzima com o
substrato.

Km grande - numericamente
grande (alto) reflete baixa
afinidade da enzima com o
substrato.

 Primeira ordem: quando a [S] muito menor que

o Km, a velocidade de reao proporcional
concentrao do substrato.
Ordem zero: quando a [S] muito maior
que o Km, a velocidade de reao constante
e igual a Vmax.

Efeito da concentrao do substrato

na velocidade de reao para uma
reao catalisada por enzimas

Nem sempre possvel determinar quando Vmax foi atingida. (ver

grfico anterior).
Quando se traa o grfico 1/Vo versus 1/ [S] , uma linha reta obtida. Esta
curva denominada de Lineweaver-Burke ou curva duplo-recproca, e pode
ser usada para calcular o Km e Vmax, bem como para determinar o
mecanismos de ao dos inibidores enzimticos.

Equao descrevendo a curva

de Lineweaver-Burke
1 = Km
Vo Vmax[S]
Obs.: 1/Vmax onde a curva corta o eixo Y
e 1/Km onde a curva corta o eixo X.

1
Vmax

Compostos que tem a capacidade de se

combinar com certas enzima e bloqueiam
a sua capacidade cataltica.
competitivos
Quando um composto compete com o
substrato ou com uma coenzima pelo
stio ativo na protena enzimtica

No
competitivos
O tipo de inibio que no pode ser
anulado com o aumento da
concentrao do substrato.

A. Efeito do inibidor competitivo na curva de

velocidade de reao (Vo) versus substrato.
B. Grfico de Lineweaver-Burke
competitiva de uma enzima

da

inibio

A. Efeito do inibidor no-competitivo na curva de velocidade de reao (Vo)

versus substrato.
B. Grfico de Lineweaver-Burke da inibio no-competitiva de uma enzima.

Enzima Alostrica: uma enzima reguladora com

atividade cataltica modulada pela ligao no
covalente de um metablito especfico em um stio
diferente do stio ativo.

Enzima Homotrpica: enzima alostrica que utiliza

seu substrato como modulador.

Enzima Heterotrpica: enzima alostrica que

requer um outro modulador diferente do seu substrato.

Enzima Reguladora: enzima que possui uma funo

reguladora graas a sua capacidade de apresentar
alteraes na sua atividade cataltica por mecanismos
alostrico ou por modificaes covalentes.

Enzima repressvel: ocorre normalmente nas bactrias,

enzima cuja sntese inibida quando o seu produto de
reao estiver facilmente disponvel.

Enzimas Constitutivas: enzimas necessrias clulas

durante todo o tempo e presentes em nvel quase constante;
por exemplo, muitas enzimas das vias metablicas centrais.
Algumas vezes so chamadas de enzimas da
administrao interna.