Enzimas - cinética

Cálculo do Km
Reação catalisada pela enzima carboxipeptidase

Carbobenzoxiglicil- + H2O Carbobenzoxiglicina +

L-triptofano L- triptofano

[S] mM V mmóis/s Calcule o valor do Km

usando o método de
2,5 0,024 Lineweaver e Burke
5,0 0,036
10,0 0,053 Por que, com os dados
15,0 0,060 disponíveis, não é possível
20,0 0,064 determinar o Km pelo método
direto (Michaelis-Menten)?
[S] mM V mmóis/s 1/[S] mM 1/V mmóis/s

2,5 0,024 0,4 42

5,0 0,036 0,2 27
10,0 0,053 0,1 19
15,0 0,060 0,06 16
20,0 0,064 0,05 15

1/v -0,15 = -1/km

Km= 6,6
1/Vmáx = 12
Vmáx=0,083

0,1 0,2 0,3 04

-1/Km 1/[s]
 Enzimas
• Inibição enzimática
• Regulação enzimática
– Enzimas Constitutivas e Adaptativas
• Ampliação enzimática

• Isoenzimas
• Uso de enzimas em diagnóstico
 Inibição Enzimática
Quanto ao tipo:
inespecífica - inibidor  a atividade de todas
as enzimas
ex: agentes desnaturantes

específica -inibidor  a atividade de uma

única enzima ou de um grupo
restrito de enzimas
irreversível
reversível competitiva
não-competitiva
incompetitiva
 Inibição Enzimática
– Inibição Enzimática Irreversível
• inibidor se combina com um grupo
funcional (sítio ativo) da enzima

• inibidor se liga à enzima formando

um complexo ESTÁVEL

• forma-se uma ligação COVALENTE

entre o inibidor e a enzima
 Inibição Enzimática Irreversível
Ex: Inibição da enzima ciclo-oxigenase pelo acetilsalicilato

Ciclo-oxigenase SÍNTESE Prostaglandinas

Processo biológicos, ex. sensação de dor

 Inibição Enzimática Irreversível
Uteís para o estudo do mecanismo de reação
determinação do aminoácido que se liga covalentemente
ao inibidor depois que a enzima está inibida

H+ F

Enz - CH2-OH + DIFP

Serina
diisopropilfluorfosfato

Ex. DIFP inibe aceticolinesterase hidrolisa aceticolina

Neurotransmissor
Contração e peristaltismo intestinal
Bradicardia
 Inibição Enzimática Irreversível
Inibidores Suicidas
ou
Inibidores com Base no Mecanismo

Compostos, em geral, pouco reativos até se

ligarem à enzima

Convertido em um composto Forma um produto que é

muito reativo que se combina um potente inibidor do
IRREVERSIVELMENTE próximo passo da via
com a enzima metabólica
 Exemplo de Inibidor Suicida

Reações do Ciclo de Krebs

Oxalacetato + Acetil-CoA  Citrato  Isocitrato  

Oxalacetato + Fluoroacetato  Fluorocitrato

Inibidor suicida
 Inibição Enzimática
– Inibição Enzimática Reversível
• inibidor forma com a enzima um
composto INSTÁVEL
• inibição NÃO envolve modificação
COVALENTE
• Tipos de inibidores reversíveis
• competitivos
• não competitivos
• incompetitivos
 Inibição Competitiva
Inibidor competitivo
Estrutura semelhante à do substrato
Liga-se ao Sítio Ativo da Enzima
E+S ES E+P
+
I

EI
Enzima
 Inibição Competitiva
Enzima S S
Sítio Ativo
S
S S
P S
IC
S
P
IC
S
P IC
P IC
P IC
P S
 Inibição Competitiva
Na presença do inibidor competitivo

afinidade da enzima pelo substrato

[substrato] necessária para que a enzima

funcione normalmente

Km da enzima
 Inibição Competitiva
Análise Gráfica
v
V 1/V

V/2
1/V

Km Km s -1/Km -1/Km
1/s [s] 1/[s]
Com inibidor
Sem inibidor
 Inibição Competitiva
Exemplo: inibidor do metabolismo energético

FAD FADH2
CH2 – COOH- CH - COOH
-

CH2 – COOH- Succinato CH - COOH-

Ácido Succínico Desidrogenase Ácido Fumárico
Succinato Fumarato

COOH- inibidor competitivo

CH2
COOH-
Ácido Malônico (inibidor)
Malonato
 Inibição Competitiva
Intoxicação por Metanol

URINA Metanol Formaldeído

Álcool
desidrogenase
Causa lesão
tecidual
Infusão EV
Etanol cegueria
 Inibição Competitiva
Terapias com drogas

Conceitos de inibição enzimática

Drogas projetadas para inibirem uma enzima específica

ANTIMETABÓLITOS

Antivirais, antibacterianos, antitumorais

 Inibição Competitiva

Exemplo
antibacteriano

Sulfanilamida

PABA Ácido fólico

Diidropteroato
sintetase
bacteriana Essencial para o
crescimento bacteriano
Inibição Competitiva
Exemplo: Quimioterápico - Leucemia
 Inibição Competitiva

Metotrexano

Diidrofolato Síntese de purinas

Diidrofolato redutase pirimídinas
Cofator ácido fólico

Multiplicação das
células leucêmicas
 Inibição Não-Competitiva
• Inibido competitivo
NÃO se liga ao sítio ativo da enzima
E+S ES E+P
+ +
I I Enzima

EI + S EIS
 Inibição Enzimática
Não-Competitiva
• Inibidor não tem semelhança estrutural com o
substrato
• NÃO se liga no sítio ativo da enzima
• Aumento da [substrato] não diminui a inibição
• Km da enzima NÃO se altera
• A VELOCIDADE máxima DIMINUI na
presença do inibidor
Inibição Não-Competitiva
Diminui a concentração
de enzima ativa

Velocidade Máxima
da Reação

Exemplos: Metais pesados - Pb+2

 Inibição Não-Competitiva
Análise Gráfica

v V 1/v
1/V

V
V/2 1/V

V/2 1/V

km s -1/Km 1/s
Km [s] 1/Km [1/s]

Com inibidor
Sem inibidor
Mecanismos de Regulação
da Atividade Enzimática
 Mecanismos de Regulação da
Atividade Enzimática
• Disponibilidade de substrato
• Enzimas alostéricas
• Modificação covalente
• Clivagem proteolítica de pró-enzimas
• Controle à nivel gênico
– indução
– repressão
 Regulação da Atividade Enzimática
Enzimas Alostéricas
• Reguladas por
efetores ou moduladores alostéricos

fora do sítio ativo

modo não covalente

positivos negativos
Regulação da Atividade Enzimática
Enzimas Alostéricas

Efetores
Homotrópicos Substrato +

Heterotrópicos Não é o substrato Feedback

negativo

-
A B C D E

Coordena o fluxo de moléculas por uma via metabólica