ENZIMAS –

COMPONENTES DA REAÇÃO

E+S ES P+E

Substrato se liga ao
SÍTIO ATIVO
da enzima
 ENZIMAS
ATIVIDADE ENZIMÁTICA

Fatores que alteram a velocidade de reações

enzimáticas:
- pH;
- temperatura;
- concentração das enzimas;
- concentração dos substratos;
- presença de inibidores.
Fatores que interferem na atividade enzimática

ENZIMAS: INFLUÊNCIA DO PH

O efeito do pH sobre a enzima deve-se às variações

no estado de ionização dos componentes do sistema à
medida que o pH varia.
Enzimas  grupos ionizáveis, existem em ≠ estados
de ionização.
 ENZIMAS
INFLUÊNCIA DA TEMPERATURA
  temperatura dois efeitos ocorrem:
(a) a taxa de reação aumenta, como se observa na
maioria das reações químicas;
(b) a estabilidade da proteína decresce devido a
desativação térmica. Em altas tpt a enzima sofre
desnaturação.
 Enzima  temperatura
ótima para que atinja sua
atividade máxima, é a
temperatura máxima na
qual a enzima possui uma
atividade cte. por um
período de tempo.
 ENZIMAS –
INFLUÊNCIA DA [E]
 Velocidade da reação é diretamente proporcional à
concentração da enzima
 Desvios da linearidade ocorrem:
- Presença de inibidores na solução de enzima;
- Presença de substâncias tóxicas;
- Presença de um ativador que dissocia a
enzima;
Velocidade da reação enzim ática em função da
concentração de enzim a

4
Velocidade inicial

2
1
0
0 1 2 3 4
Concentração de enzim a
 ENZIMAS –
INFLUÊNCIA DA [S]
 [S] varia durante o curso da reação à medida que S
é convertido em P.
 Medir Vo = velocidade inicial da reação.
[E] = cte.
[S] pequenas  Voaumenta
vo
linearmente. Vmax
[S] maiores  Vo cresce por
incrementos cada vez menores.
Vmax  altas [S]  aumento em Vo
são insignificantes.
Vmax é atingida  quando toda
enzima estiver na forma ES e a [E] livre
é insignificante, então, enzima está
saturada com o S. A Velocidade não
aumenta com o aumento da [S]. [S]
 ENZIMAS –
INFLUÊNCIA DA [S]
Na curva Vo X [S] identificam-se 2
regiões:

vo
Região 1: Uma região em que a Vmax
velocidade aumenta linearmente
com o aumento da concentração do Região 2
substato, indicando que durante a
reação havia moléculas de enzimas
livres;
Região 2: Uma região em que a Região 1
velocidade permanece constante,
igual à Vmáx, apesar do aumento
de concentração do substrato,
[S]
indicando que todas as moléculas
de enzima estão ligadas ao
substrato.
 ENZIMAS –
CINÉTICA ENZIMÁTICA

 Victor Henri (1903): E + S  ES

1913
Leonor Michaelis -Enzimologista
Maud Menten - Pediatra

K1 Kp
E+S ES E+P
K-1

Etapa rápida Etapa lenta

 ENZIMAS
CINÉTICA ENZIMÁTICA

Vmax [S]
v=
Km + [S]

v = Vmax [S]
v 1
Km
v = Vmax
2

1- [S]  Km>>[S]
Vmax
2
3 2- [S]  [S]>>Km
3- v = Vmax
2
Km [S]
 Constante de Michaelis-Menten: Km

 Quando Vo = 1/2Vmáx, então Km=[S]

O Km é uma medida da afinidade da enzima pelo substrato

Quanto maior o Km, menor é a afinidade da enzima pelo

substrato, pois uma maior concentração de substrato é requerida
para que se alcance a metade da velocidade máxima.

Quanto menor o Km maior é a afinidade da enzima pelo

substrato.

ENZIMA SUBSTRATO Km (mM)

Glicoquinase D-Glicose 10
Hexoquinase D-Glicose 0,15
D-Frutose 1,5

Glicoquinase: fígado
Hexoquinase: tecidos extra-hepáticos
 MEDIDA DA EFINCIÊNCIA ENZIMÁTICA: kcat

 Mede a eficiência da catálise.

 Equivale ao número máximo de moléculas de substrato que um

sítio ativo converte em produtos por segundo.

Indica a rapidez que uma enzima pode operar, quando todos os

centros ativos estão ocupados.

kcat = Vmáx/[Et]

Constante catalítica ou
número de renovação
(turnover)
 ENZIMAS
MÉTODOS GRÁFICOS
 Gráfico dos Recíprocos de Lineweaver-Burk
1 Km 1
 
v Vmax [S] Vmax

1
v Inclinação =
Km
Vmax

1
Vmax

-1 1
Km [S]
 ENZIMAS
INIBIÇÃO ENZIMÁTICA

 Qualquer substância que reduz a velocidade de uma

reação enzimática.

INIBIDORES

REVERSÍVEIS IRREVERSÍVEIS

COMPETITIVOS NÃO COMPETITIVOS

 ENZIMAS
INIBIÇÃO COMPETITIVA
 Inibidor competitivo concorre com o Substrato pelo sitio
ativo da Enzima livre.
 Inibidor  análogo não metabolizável, derivado de um S
verdadeiro, S substituto da E ou um P da reação.

I compostos com estrutura

molecular lembra S

afinidade da enzima pelo

substrato

[substrato] necessária para

obter a mesma [ES]

Km aparente
da enzima
 ENZIMAS
INIBIÇÃO COMPETITIVA

1- sem inibidor
2- com inibidor na concentração [I1]
3- com inibidor na concentração [I2] > [I1]
 ENZIMAS
INIBIÇÃO NÃO-COMPETITIVA

 Inibidor não-competitivo se liga reversivelmente,

aleatória e independentemente em um sítio que lhe é
próprio.
I não tem semelhança
estrutural com o S

[substrato] não diminui a

inibição

Km da enzima NÃO se altera

Vmax na presença do
inibidor
 ENZIMAS
INIBIÇÃO NÃO-COMPETITIVA

1- sem inibidor
2- com inibidor na concentração [I1]
3- com inibidor na concentração [I2] > [I1]
 ENZIMAS –
INIBIÇÃO IRREVERSÍVEL
 Inibidor se combina com um grupo funcional, na
molécula da Enzima, que é essencial para sua
atividade.
 Podem promover a destruição do grupo funcional
 Forma-se uma ligação COVALENTE entre o Inibidor e
a Enzima.
 Vmax   parte da E é completamente removida do
sistema e Km permanece a mesma.
K1 K2
E+S ES E+P
+
I

EI
 ENZIMAS ENZIMAS REGULATÓRIAS

 Não obedecem a cinética de Michaelis-Menten.

 Controlam a etapa limitante em uma cadeia de
reações enzimáticas.
 Tem sua atividade catalítica aumentada ou diminuída
em resposta a determinados sinais, moléculas
sinalizadoras (pequenos metabólicos ou cofatores).
 Classes de enzimas reguladoras:
 Enzimas alostéricas;
 Enzimas reguladas pela modificação covalente
reversível.
 ENZIMAS
ENZIMAS REGULATÓRIAS

 Enzimas alostéricas
Funcionam através da ligação não-covalente e reversível
de um metabólito regulador chamado modulador;
Moduladores podem ser inibidores ou ativadores;
São maiores e mais complexas, possuem duas ou mais
cadeias polipeptídicas.

 Enzimas reguladas pela modificação covalente

reversível
Grupos químicos são ligados covalentemente e
removidos da enzima reguladora por enzimas ≠, podem
ser: fosfato, adenosina monofosfato, grupos metil, etc.