13/10/2010

A atividade enzimtica influenciada por:

pH temperatura

Cintica Enzimtica
Disciplina: do tomo Vida III Faculdade de Ceilndia - UnB Prof. Otvio Nbrega

co-fatores concentrao da enzima e substratos presena de inibidores

Porque estudar a cintica enzimtica?

Determinar as constantes de afinidade do S e dos inibidores; Conhecer as condies timas da catlise; Ajudar a elucidar os mecanismos de reao; Determinar a funo de uma determinada enzima em uma rota metablica.

Cintica enzimtica o modelo de MichaelisMichaelisMenten (1913)

Na dcada de 1950: A velocidade (v) da reao apresenta duas regies de comportamentos diferentes medida que se aumenta a concentrao do substrato:
-parte a: velocidade tende a aumentar proporcionalmente aos incrementos de S. -parte b: velocidade no aumenta mais, tendendo a um valor mximo (Vmax), independentemente da [S]

Fatores que Influenciam a Ao Enzimtica

Concentrao do Substrato

Inicialmente a velocidade da reao diretamente proporcional a [S].

13/10/2010

Fatores que Influenciam a Ao Enzimtica

Concentrao do Substrato

A [substrato] cai na mesma razo em que a [produto] aumenta em funo do tempo. A enzima existe sob duas formas: enzima livre E e complexo enzimasubstrato ES. No incio da reao, a [E] livre cai e a do complexo [ES] aumenta e atinge um mximo, em que no h mais [E] livre no meio. Nessa situao (indicada no retngulo cinza), diz-se que a enzima est saturada (s existe no complexo ES). A velocidade da reao a mxima.
concentrao

A quantidade de reagente o suficiente grande para saturar todos os stios catalticos enzimas.

tempo

O grfico ilustra como as concentraes de E, S e P variam ao longo do tempo da reao.

E + S

k1 k-1

ES

k2

constantes de velocidade

continuando..

Na estabilidade dinmica: Vo = k2 [ES] (1) (2) (3)

[E]T [S] - [ES][S] = KM [ES] [E]T [S] - [ES][S] = KM [ES] [E]T [S] = [ES](K M + [S])

k1 [E][S] = k -1[ES] + k 2[ES]

[E] = [E] T - [ES]
rearranjando 2 e 3 :

[ES]

[E]T [S] KM + [S]

([E]T - [ES]) [S] [ES]

k -1 + k 2 k1

= KM

Levando-se em conta a eq. (1):

Vo = k2 [ES]

V init = k 2 [ES]

k 2[E]T [S] KM + [S]

O grfico hiperblico mostra um conjunto de reaes que esto acontecendo simultaneamente, conforme as equaes abaixo:

= k 2 [E]T = V max = k

V0 ou V init =
V
V mx

V max [S] KM + [S]

Michaelis-Menten Equao de equation Michaelis-Menten

onde cada constante de dissociao (k) pode ser expressa por: k1 = __[ES]__ [E] x [S] k2 = [E] x [P] [ES] k-1 = [E] x [S] [ES]

e de onde surge a constante de Michaelis-Menten: Km = k2 + k-1 k1 [S]

13/10/2010

Representao grfica:

CONCENTRAO DOS SUBSTRATOS

[S] varia durante o curso da reao medida que S convertido em P.

[E] = cte. [S] crescente Vo linearmente. Vmax Vo insignificantes. Vmax atingida se E estiver na forma ES e a [E] livre for insignificante, ento, E saturada com o S e V no com de [S]. [S] vo Vmax

A constante de Michaelis-Menten (KM) um parmetro cintico que traz Michaelisinformaes sobre a afinidade que a enzima tem pelo substrato. substrato. O KM numericamente igual [substrato] que produz metade da Vmax .

Consequncias importantes de Km
Km Km Afinidade da enzima pelo substrato Afinidade da enzima pelo substrato

Km: Caracterstico de cada enzima Reflete a afinidade da enzima pelo seu substrato

Nmero de renovao kcat (s-1)

kcat = Vmax [Et]

Representao grfica em duplo recproco (Lineweaver Burk) 1934 Aplicando-se o

inverso a ambos os lados da equao de MichaelisMentem, obtem-se a equao de Lineweaver-Burk, que uma funo linear (uma reta):

Tang

=KM/Vmax

y = a . x + b
Onde:

equao de reta

a = coef. angular = Km/Vmax (tangente ngulo alfa) b = coef. linear = 1/Vmax (intercepto no eixo y)

13/10/2010

Em suma, como age uma enzima...?

A cintica enzimtica influenciada concentrao de enzima e substrato. pela

- Constantes cintica auxiliam na determinao das condies timas de atuao de uma enzima, tais como a [S] em que se aproxima de sua Vmax. - A qualquer momento, a velocidade de uma enzima funo de sua Vmax, da [S] e de seu Km.