Cinética Enzimática
Estuda as velocidades das reações enzimáticas e a
forma como esta varia com diversos fatores:
• Temperatura
• Concentração
• pH
• Presença de Ativadores e inibidores
Na prática -> medem-se as velocidades da reação em
diferentes condições
Teoricamente -> constroem-se modelos matemáticos
que se ajustem aos resultados experimentais. Estes
modelos possuem parâmetros que têm significado
físico.
A infirmação recolhida pode:
• Ser útil do ponto de vista experimental
• Usada para estabelecer mecanismos catalíticos
e identificar os aa envolvidos na catálise
Curvas de evolução temporal S ou P em função de t
A velocidade da reação é obtida através do cálculo do
declive das curvas de evolução de S diminui com o
tempo até se atingir o equilíbrio:
ⅆ[𝑆] ⅆ[𝑃]
𝑣=− = temporal das 4 espécies
ⅆ𝑡 ⅆ𝑡
A reação inversa torna-se predominante com a
acumulação dos produtos
No equilíbrio a velocidade de conversão em S e em P
iguala a velocidade de conversão de P e S v=0
A enzima torna-se instável no decurso da reação
O grau de saturação da enzima pelo substrato diminui à
medida que o substrato é consumido
Os produtos da reação inibem a enzima
Qualquer combinação dos fatores anteriores
Velocidades iniciais, v0
A evolução das curvas depende essencialmente do pH,
temperatura, polaridade, tipo de substrato e da
concentração de enzima.
Na situação observada observamos várias situações que
podem contribuir para que não exista a formação
global de + de 1 produto ao longo do tempo (equilíbrio-
velocidade nula). Por este motivo em laboratório
evitamos trabalhar perto do equilíbrio, sendo medidas as
velocidades em condições de velocidade inicial.
Modelo Michaelis-Menten:
4 variáveis = 4 concentrações: [S], [P], [E], [ES]
4 parâmetros = 4 constantes de velocidade
2 constantes de 1ª ordem (k1 e k2) -> uni. s-1
2 constantes de 2ª ordem (k1 e k2) -> uni. M-1 s-1
Só se pode comparar constantes com as mesmas
unidades-> transforma-se as constantes de 2ª ordem
em constantes de pseudo-primeira ordem
4 equações diferencias -> descrevem a variação
2 equações de balanço de massas:
Substrato [S0] = [S] + [ES] + [P]
Enzima [Et] = [E] + [ES]
Hipóteses Restritivas:
Do ponto de vista laboratorial existem situações que
tem de ser validadas e só nessas condições podemos
aplicar a equação de Michaelis – Menten -> pode ser
utilizada para interpretar dados e determinar
parâmetros cinéticos:
• VM (velocidade máxima)
• KM (constante de Michaelis-Menten)
• KI (constante de inibição)
Condição de velocidade inicial (v0) -> as velocidades são
determinadas a partir da tangente na origem da curva
de evolução temporal [P] vs tempo -> nestas
condições é possível desprezar a reação de conversão
de produto em ES porque a concentração de produto
é muito baixa
Determinação experimental: Balanço de Massas:
No início da reação S -> P ~ 0 [𝑠0 ] = [𝑠] ([𝑆] ≫ [𝐸𝑇 ])
A reação inversa é desprezada (é anulado qualquer [𝐸𝑇 ] = [𝐸] + [𝐸𝑆] -> aqui temos a conservação total
efeito dos produtos e a enzima mantém-se estável) de enzima
equilíbrio
Nas deduções estão contempladas as hipóteses
restritivas
ⅆ[𝑃]
𝑣0 = ( ) , 𝑒𝑥𝑝𝑜𝑛𝑒𝑛𝑐𝑖𝑎𝑙 Velocidade inicial
ⅆ𝑡 0

Objetivo: expressar v0 em função dos parâmetros do

modelo (k1, k-1, kcat) e de concentrações conhecidas [S0]
e [ET]

𝑣0 = 𝑓([𝑆0 ]), 𝑣0 𝑒𝑚 𝑓𝑢𝑛çã𝑜 Velocidade inicial

ⅆ𝑒 [𝑆 (ℎ𝑖𝑝𝑒𝑟𝑏𝑜𝑙𝑒)] Estado
Estacionário

Conservação total da enzima

Determinar as tangentes na origem das curvas [P] vs Velocidade inicial

tempo, para diferentes valores de concentrações de
substrato [Er] constante
As curvas de evolução são normalmente lineares até
20% de conversão do substrato
Equação de Michaelis-Menten
Hipótese do estado estacionário [S0] >> [ET]
KM constante de Michaelis-Menten
Se a concentração de substrato for muito superior à
Vmax velocidade máxima
concentração de enzima, a concentração do
intermediário ES é sempre muito baixa e pode Representação Gráfica da equação -> hipérbole
considerar-se constante ao longo do tempo: retangular
ⅆ[𝐸𝑆] Reação de 1ª ordem
=0
ⅆ𝑡
Á excepção dos instantes iniciais, normalmente
milissegundos [ES] é constante até à exastao de S -> a Reação de ordem zero
velocidade de formação de ES terá de ser igual à
velocidade de consumo
Significado Físico dos parâmteros Vmax e KM
Equações Diferenciais:
ⅆ[𝑃]
𝑣= = 𝑘𝑐𝑎𝑡 [𝐸𝑆]
ⅆ𝑡
Velocidade inicial
ⅆ[𝐸𝑆]
𝑣= = 𝑘−1 [𝐸][𝑆] − (𝑘−1 [𝐸𝑆] + 𝑘𝑐𝑎𝑡 [𝐸𝑆]) = 0
ⅆ𝑡

Estado Estacionário
 2. Inibição Incompetitiva

1. Ajuste direto do modelo recorrendo a

regressões não-lineares:

Melhores valores para:

V = 81.1 K = 38.62

3. Inibição não Competitiva

2. Linearizações da equação:

V0 é dependente da concentração de enzima:

As reções catalisadas por enzimas exibem uma

cinética de saturação
Tipos de inibição enzimática
1. Inibição Competitiva
 Efeito da temperatura na atividade enzimática
A curva da atividade enzimática em função da
temperatura apresenta um máximo que
corresponde à temperatura ótima da enzima. A
temperatura ótima varia de enzima para enzima
.
Na região de temperaturas baixas -> atividade
aumenta exponencialmente de acordo com a lei de
Arrhenius
A temperaturas elevadas -> atividade cai
abruptamente devido à desnaturação da enzima.
Efeito do pH na atividade enzimática
As proteínas são sensíveis ao pH. A maior parte
das enzimas está apenas ativa numa gama
relativamente estreita de valores de pH.
• Ligação ao substrato à enzima
• Atividade catalítica
• Ionização do substrato
• Estrutura da proteína (desnaturação a pH
extremos)
O estudo da dependência da atividade com o pH pode
dar informação acerca dos valores de pKa dos aa do
centro ativo.
Introdução ao Metabolismo:
Os organismos vivos não se encontram em equilíbrio –
requerem um input contínuo de energia
Os sistemas vivos mantêm-se vivos em estado
estacionário
Metabolismo é uma atividade celular altamente
coordenada em que vários sistemas multi-enzimáticos
(caminhos metabólicos) cooperam para:
Obtenção de energia a partir do sol ou da degradação
de nutrientes do ambiente ricos em energia ->
Bioenergia
Sintetizar e degradar as biomoléculas necessárias para
as funções especializadas da célula (lípidos das
membranas, mensageiros intercelulares ou pigmentos)
-> acoplamento de reações exergónicas de oxidação
(degradação) de nutrientes aos processos endergónicos
para manutenção da célula (movimento, transporte
ativo, biossíntese de macromoléculas)
Anabolismo e Catabolismo
Caminhos Caminhos metabólicos
metabólicos Degradativos
Biossintéticos
Fornecem energia
Blocos
Anabolismo
percursores
As vias metabólicas-> conjunto de reações enzimáticas
consecutivas e estas podem ser cíclicos ou divergentes.
As vias metabólicas são irreversíveis -> a dua
direccionalidade é determinada pela ocorrência de
reações irreversíveis onde ΔG0 < 0 -> reação
irreversível -> via irreversível
As vias catabólicas e anabólicas são quase sempre
distintas por razões energéticas
Os caminhos anabólicos e catabólicos empregam
frequentemente enzimas comuns nos passos
reversíveis -> maior economia
A ocorrência de vias de interconversão independentes
permite regulação independente:
Todas as vias têm um paço limitante. Apesar das vias TransportadorGrupo Vitamina
serem irreversíveis, a maioria das reações encontram.se Transferido Percursora
perto do equilíbrio, no início há sempre um paço ATP Fosforilo
irreversível (exergónico) -> obriga ao escoamento dos NADH e NADPH Eletrões Niacina (B3)
produtos. FADH2 e Eletrões Riboflavina (B2)
FMNH2
Todas as vias são reguladas -> necessidade da célula, Tiamina Aldeído Tiamina (B1)
sendo feita na maioria por enzimas que catalisam Pirofosfato
reações irreversíveis (regulação dos passos limitantes). Lipoamida Acilo
Coenzima A acilo Ácido
A regulação independente é feita nos passos
Pantoténico
irreversíveis (pontos em que os caminhos divergem) (B5)
nos quais as enzimas regulatórias são reguladas
reciprocamente por efetores alostéricos comuns.
Nas células eucarióticas as vias metabólicas ocorrem em
diferentes compartimentos celulares -> transporte de
metabolitos/ interdependência metabólicas de órgão.
Vias metabólicas estão relacionadas entre si e envolvem
motivos comuns

• Reações química e metabolitos comuns

• Sequências de regulações comuns
• Estratégias regulatórias comuns.
A utilização do ATP como “moeda energética”

Transportadores de eletrões:
Nicotinamida Adenina Dinucleótido (NAD+/NADH),
transportador de e- na oxidação dos nutrientes
(catabolismo)
Nicotinamida Adenina Dinucleótido Fosfato (NADPH);
transportador de e- na biossíntese (anabolismo)
NAD(P)+ + 2H+ + 2e- NAD(P)H + H+

Reação Global

AH2 + NAD+ → A + NADH + H+

A + NADPH + H+ → AH2 + NADP+

AH2/A = substrato reduzido/oxidado

Enzimas -> oxidorredutases ou disidrogenases
Flavina Adenina Dinucleótido (FAD/ FADH2) ->
transportador de e- na oxidação dos nutrientes
Flavina Mononucleótido (FMN/FMNH2)
FAD + 2H+ + 2e- ↔FADH2
Tiamina pirofosfato (TPP) -> transportador de grupos
aldeído
• Entra na Glicose
Lipoamida -> transportador de grupos acilo
Coenzima A (CoA) -> transportador de grupos acilo
ativados:
Regulação dos processos metabólicos
A velocidade dos processos degradativos é controlada
pelas necessidades da célula em ermos de poder
redutor (NADH / FADH2) e de potencial de fosforilação
((pf=[ATP] / ( [ADP] [Pi] ))
Formas de regulação
1. Regulação da quantidade das enzimas ->
balanço entre a velocidade de síntese proteica
(transcrição e tradução) e a velocidade de
degradação das enzimas
2. Regulação da atividade enzimática -> controlo
alostérico de enzimas em pontos chave dos
percursos metabólicos
3. Modificação covalente reversível ->
compartimentação celular Ex: oxidação de
ácidos gordos dá-se na mitocôndria e a sua
síntese dá-se no citoplasma
No entanto todo o metabolismo é controlado pela
energia disponível (carga energética)
carga energética = [ATP] + 0.5 [ADP]
[ATP] + [ADP] + [AMP]
• catabolismo é inibido por ce elevada
• anabolismo é estimulado por ce alta
O controlo dos caminhos está feito para manter os
limites dentro de 0.80 < ce < 0.95
Tal como o pH, a ce está tamponizada dentro da célula
Alternativa -> também se pode usar o potencial de
fosforilação: ((pf=[ATP] / ( [ADP] [Pi] ))
pf depende de [Pi] e está relacionado com a energia
livre que se obtém quando o ATP é hidrolisado nas
condições da célula
• Controle da concentração da enzima (lento –
minutos)
• Controle alostérico
• Modificação covalente reversível
• Isoenzimas
• Activação proteolítica
• Hormonas
Controle da concentração da enzima -> durante a
síntese proteica:
Pós tradução -> não havendo a ativação da proteína
Pré-Tradução -> não há a formação da proteína
Pré-transcrição -> não há a formação do mRNA
Controle Alostérico -> estabilização das proteínas nas
suas duas formas
Ativar -> Ativador alostérico -> estabilização da
proteína
Inibir -> inibidor alostérico -> estabilização da proteína
inativa
Fosforilação e desfosforilação -> Cinases / Fosfatases
M4 predominante no musculo esquelético e fígado
H4 inibida alostéricamente por altos níveis de piruvato,
mas não a M4
Diferentes valores de Km para o piruvato -> +
otimização
M4 tem Km menor -> + quantidade no musculo
esquelético que é anaeróbico
H4 tem Km maior -> existindo em maior quantidade no
musculo cardíaco que é aeróbico
Ativação Proteolítica -> enzimas são sintetizadas como
percursores inativos (zimogénios) -> sendo estas
ativadas pela sua quebra

São as + comuns • Enzimas digestivas (zimogénios sintetizados no

estomago e pâncreas)
O grupo fosfato é volumoso e carregado -> induzindo
• Enzimas de coagulação do sangue (cascata
alterações conformacionais
proteolítica de ativação)
Envolvem enzimas Cinases e Fosfatases • Hormonas (proinsulina -> insulina ou a
degradação do glicogénio)
Piruvato desidrogenases é inativa fosforilada e ativa
desfosforilada Energia livre de Gibbs
Piruvato desidrogenase é inativa fosforilada e ativa aA + bB cC + dD
desfosforilada
[𝐶]𝐶 [𝐷]𝑑
Os aminoácidos com grupo OH são os alvos para esta 𝛥𝐺 = 𝛥𝐺0 + 𝑅𝑇 ln ( 𝑎 𝑏 )
[𝐴] [𝐵]
modificação (serina, treonina, tirosina)
𝛥𝐺 → 𝑣𝑎𝑟𝑖𝑎çã𝑜 ⅆ𝑎 𝑒𝑛𝑒𝑟𝑔𝑖𝑎 𝑙𝑖𝑣𝑟𝑒 𝑝𝑎𝑟𝑎 𝑢𝑚𝑎
Isoenzimas
𝑟𝑒𝑎çã𝑜 𝑐𝑎𝑡𝑎𝑙𝑖𝑧𝑎ⅆ𝑎 𝑒𝑛𝑧𝑖𝑚𝑎𝑡𝑖𝑐𝑎𝑚𝑒𝑛𝑡𝑒
[𝐶]𝐶 [𝐷]𝑑
Formas diferentes da enzima que diferem na sequência Keq = ( 𝑎 𝑏 )
[𝐴] [𝐵]
de aminoácidos
𝛥𝐺 = 𝛥𝐺0 + 𝑅𝑇 ln(𝐾𝑒𝑞)
Diferem nas suas propriedades cinéticas e na sua
distribuição tecidular 𝛥𝐺0
→ 𝑣𝑎𝑟𝑖𝑎çã𝑜 ⅆ𝑎 𝑒𝑛𝑒𝑟𝑔𝑖𝑎 𝑙𝑖𝑣𝑟𝑒 𝑒𝑚 𝑐𝑜𝑛ⅆ𝑖çõ𝑒𝑠
Ex: Lactato desidrogenase (LDH) -> catalisa a
conversão do lactato a piruvato 𝑝𝑎ⅆ𝑟ã𝑜 ([𝑟𝑒𝑎𝑔𝑒𝑛𝑡𝑒𝑠] = [𝑝𝑟𝑜ⅆ𝑢𝑡𝑜𝑠]) = 1𝑀
M4

M3H
𝑇 → 𝑡𝑒𝑚𝑝𝑒𝑟𝑎𝑡𝑢𝑟𝑎 (25º) 𝑠ã𝑜 298𝐾
M2H2 𝑃 = 1𝑎𝑡𝑚
𝑅 = 1.987 ∗ 10−3 𝑘𝑐𝑎𝑙 ∗ 𝑚𝑜𝑙 −1 ∗ 𝐾 −1
MH3

M4
Convenção Q-F: substancias puras a:
Tetrâmero com subunidades H e M pH= 0 -> 𝛥𝐺 0
H4 + dominante no musculo cardíaco pH= 7 -> 𝛥𝐺 0
′
𝛥𝐺′ = 𝛥𝐺 0′ + 𝑅𝑇 ln(𝐾′𝑒𝑞)
𝛥𝐺 ′ < 0 𝑟𝑒𝑎çã𝑜 𝑒𝑥𝑒𝑟𝑔ó𝑛𝑖𝑐𝑎 → 𝑠𝑒𝑛𝑡𝑖ⅆ𝑜 ⅆ𝑖𝑟𝑒𝑡𝑜
𝛥𝐺 ′ > 0 𝑟𝑒𝑎çã𝑜 𝑒𝑛ⅆ𝑒𝑟𝑔ó𝑛𝑖𝑐𝑎 →
𝑠𝑒𝑛𝑡𝑖ⅆ𝑜 𝑖𝑛𝑣𝑒𝑟𝑠𝑜
𝛥𝐺 ′ = 0 𝐸𝑞𝑢𝑖𝑙í𝑏𝑟𝑖𝑜
As variações da energia livre são aditivas:
Compostos de Fosforilação de alta e baixa energia:
Bases químicas para a variação da energia livre
resultante da hidrolise do ATP:
1 –Hidrólise provoca uma separação de cargas aliviando
a repulsão electroestática entre 4 cargas negativas do
ATP
2 – Fosfato inorgânico (Pi) libertado é estabilizado por
formas de ressonância
3-ADP ioniza-se libertando um p+ para o meio de baixa
[H+] (pH = 7)
Ex: Hidrólise do fosfoenolpiruvato (PEP) -> reacção de
hidrólise é seguida por uma tautomerização espontânea do
produto. Ocorre também por ressonância do Pi
Hidrólise da fosfocreatina -> quebra da ligação P-N na
fosfocreatina dá origem a creatina e Pi. Ambos os produtos
são estabilizados por ressonância
Reações de Oxidação-Redução
Os e- armazenados sob a forma de poder redutor nos
compostos NADH, NADPH, FADH2 são transferidos para
espécies com + afinidade a e- -> produzindo energia (ATP)
Potenciais de redução (Medida de Afinidade para e-)
Os potenciais de redução são medidos relativamente ao
elétrodo padrão de hidrogénio (H2) ao qual foi por
convecção atribuído o valor de 0 V a pH=0. O padrão do
elétrodo de H2 é pH= 7 é 0.414 V sendo designado E0
O potencial depende da natureza das espécies e da sua
concentração em solução
Equação de Nernts -> relaciona o potencial de redução de
uma solução (E) com o potencial de redução padrão (E0’) e
a concentração das espécies oxidada e reduzida.
1 𝑅𝑇 𝑑𝑜𝑎𝑑𝑜𝑟 𝑑𝑒 𝑒−
𝐸 ′ = 𝐸 0 − (𝑛𝐹) ln (𝑎𝑐𝑒𝑖𝑡𝑎𝑑𝑜𝑟 𝑑𝑒 𝑒−)
𝐹 → 𝑐. ⅆ𝑒 𝐹𝑎𝑟𝑎ⅆ𝑎𝑦 = 23.06 𝑘𝑐𝑎𝑙 ∗ 𝑉 −1 ∗ 𝑚𝑜𝑙 −1
𝑛 = 𝑛º ⅆ𝑒 𝑒 − 𝑡𝑟𝑜𝑐𝑎ⅆ𝑜𝑠 𝑛𝑎 𝑟𝑒𝑎çã𝑜
𝛥𝐺 ′ = −𝑛𝐹𝛥𝐸 ′
′
𝛥𝐺 0 = −𝑛𝐹𝛥𝐸 ′
𝛥𝐸 ′ > 0 𝑟𝑒𝑎çã𝑜 𝑒𝑥𝑒𝑟𝑔ó𝑛𝑖𝑐𝑎 → 𝑠𝑒𝑛𝑡𝑖ⅆ𝑜 ⅆ𝑖𝑟𝑒𝑡𝑜
𝛥𝐸 ′ < 0 𝑟𝑒𝑎çã𝑜 𝑒𝑛ⅆ𝑒𝑟𝑔ó𝑛𝑖𝑐𝑎 →
𝑠𝑒𝑛𝑡𝑖ⅆ𝑜 𝑖𝑛𝑣𝑒𝑟𝑠𝑜
𝛥𝐸 ′ = 0 𝐸𝑞𝑢𝑖𝑙í𝑏𝑟𝑖𝑜
Glicólise:
Localização: citoplasma de células cerebrais, músculos
esqueléticos, eritrócitos
Objetivo: produção de energia e de intermédios para a
biossíntese
1. Fosforilação dos intermédios
A carga negativa impede a saída da célula -> não há
difusão através da membrana não se gasta energia a
manter os compostos no seu interior
G -> G6P permite manter o gradiente de
concentração
Os grupos fosforilo ativados são muito importantes na
conservação da energia metabólica (composto de
elevada energia)
A presença dos grupos fosfato aumenta a
especificidade das enzimas. Os sítios ativos são
específicos para os complexos de Mg2+ -> nucleótidos
(ATP e ADP)
2. Intermédios fosforilados são convertidos em
compostos com elevado potencial de
transferência do grupo fosforilo.
3. Reações exergónicas são acopladas à síntese
por ATP por fosforilação a nível do substrato
 3 Fases:

Fermentação homoláctica -> conversão da glucose em

lactato em condições anaeróbias (ou quase anaeróbias)
Glucose + 2ADP + 2Pi ⎯→ 2lactato + 2ATP + 2H2O + 2H+

Perfil da variação da energia de Gibs da glicólise

realizada em condições anaeróbias.

Fermentação lática e alcoólica: Destino final da glicólise

Na ausência do oxigénio o NAD+ é regenerado pela
redução do piruvato a lactato -> a glicólise pode
continuar. Permite obter energia na ausência de
oxigénio (2ATPs)
 Fermentação a Etanol Fermentação com lactato em
(leveduras) músculos e microrganismos Este depende de 120g/ dia dos 160g/dia necessários ao
Condições anaeróbias funcionamento do organismo sendo apenas necessárias
Glucose Condições anaeróbias
190g + 20g fluidos corporais -> 1 dia

2 Etanol + 2CO2 2 Piruvato 2 Lactato

2CO2 2 Acetil-
CoA

4CO2 + 4H2o

Condições aeróbias
Animais, Plantas e muitos microrganismos Piruvato -> Glucose A
A gluconeogénese não é o inverso da glicólise ->
A Glicólise nos glóbulos vermelhos:
passos irreversíveis da glicólise são contornados~
Há uma alteração da capacidade de transporte de O2,
1. Piruvato é convertido em fosfoenolpiruvato
pelo sangue em glóbulos vermelhos deficientes nas
passando por oxaloacetato (enzimas piruvato
enzimas hexocinase ou piruvato cinase.
carboxilase e fosfoenolpiruvato carboxicinase)

2. Frutose-6-fosfato é formada a partir de frutose

1,6-bifosfato por hidrólise de um éster fosfato
no carbono 1 enzima frutose 1,6-bisfosfatse

3. Glucose é formada a partir de glucose 6-

Ponto de entrada de outros substratos (glicogénio,
amido, dissacáridos e hexoses) na glicólise:
Convergência
Muitos carboidratos além da glucose são degradados
através do caminho glicolítico. Os mais frequentes são
polissacáridos de armazenamento de energia (amido e
glicogénio), os dissacáridos (maltose, lactose, trealose e
sucrose) e monossacáridos (frutose, manose e
galactose).
Gluconeogénese
Objetivo: manter os níveis de glucose no sangue e no
cérebro, glóbulos vermelhos (ativos); ocorre no fígado
(e rins) -> síntese de glucose e outros hidratos de
carbono a partir do piruvato (ou compostos análogos
de 3 C, tais como o lactato, glicerol ou alanina)
Processo importante para o funcionamento do cérebro:
fosfato (enzima glucose 6-fosfatase)
Estratégia:
A enzima piruvato carboxilase existe na mitocôndria,
sendo a única as outras encontram-se no citoplasma e
no caso da glucose-6-fosfato está no retículo
O transporte de malato da mitocôndria -> Citosol e a
sua conversão para oxalato servem para transferir o
NADH para o citosol (onde a razão de [NADH]/[NAD + ]
é muito mais baixa), que depois será usado na
conversão de 1,3 -bifosfoglicerato em gliceraldeído - 3 -
fosfato
A conversão de piruvato em fosfoenolpiruvato
(Go’=+31 kJmol-1 para a reacção inversa da que
ocorre na glicólise) torna-se possível devido ao gasto de
uma molécula de ATP para activar e ligar o CO2 , com
formação de oxaloacetato; a descarboxilação e a
fosforilação posteriores (com gasto de GTP)
possibilitam a formação do enol instável. A conversão A Glicólise a Gluconeogénese têm regulação recíproca
de piruvato em fosfoenolpiruvato na gluconeogénese
(2 passos) tem Go’=+0,8 kJmol-1

Na conversão Fosfoenolpiruvato → Frutose 1,6-

bisfosfato, são usadas enzimas da glicólise
Os passos são reversíveis -> ΔG0’ -> direção é
controlada pelas concentrações

Frutose 1,6-bisfosfato → Frutose 6-fosfato é

irreversível -> controlo alostérico (enzima frutose 1,6-
bisfosfatase)
A enzima glucose 6 só está presente nos tecidos cuja
função é manter constante a concentração de glucose
no sangue ->fígado e rins
A formação de glucose livre constitui também um
ponto de controlo importante. Esta reacção dá-se no
lúmen do retículo endoplasmático
Regulação da hexocinase:
Hexocinase-> catalisa o primeiro passo irreversível da
glicólise
É inibida pelo produto glucose 6-fosfato (G-6P) Níveis
elevados de G-6P indicam que a célula não necessita
de glucose para obter energia, armazenamento
(glicogénio) ou precursores de biossíntese. Nestas
condições a glucose é deixada no sangue
Regulação da PPK1
Fosfofrutocinase (PFK-1) é o ponto de regulação mais
importante da glicólise (passo limitante da via glicolítica)
2 piruvato + 2 GTP + 4 ATP + 2 NADH + 2 H+ + 6 H2O -
-> Glucose + 2 GDP + 4 ADP + 6 Pi + 2 NAD+ É uma enzima alostérica regulada por:

(Go ’ = -38 kJmol-1 ) A frutose-2,6-bifosfato é um activador da PFK-1 e é

produzida por fosforilação da frutose-6P (F6P) pela
Gastam-se 6 nucleótidos trifosfato (apenas 2 se acção da PFK-2
produzem na glicólise)  os 4 ATP extra são
necessários para tornar o inverso da glicólise (Go ’ =
+84 kJmol-1 ) num processo termodinamicamente
favorável
O Ciclo de Cori:

PFK-1 inibida por ATP, H+ e citrato e activada por

AMP e frutose 2,6–bifosfato

Ativação:
1. [AMP] / [ATP] -> muito elevado -> sinalização
de necessidade de energia
2. [frutose 2,6- bisfosfato] -> muito elevado -> é
um activador alostérico que desloca o equilíbrio
T R no sentido da forma R, aumentando a
afinidade para o substrato (frutose 6-fosfato). A
formação de frutose 2,6-bisfosfato é
dependente dos níveis de insulina e glucagon
via a PFK-2
Inibição:
1. [H+] -> alto (impede a descida brusca do pH no
sangue devido à excessiva produção de
lactato);
2. [citrato] -> alto (intermediário do ciclo de Krebs,
indicando que há blocos precursores suficientes
para a biossíntese)
A síntese e degradação da frutose-2,6
bisfosfato (F-2, 6-BP) tem controle hormonal
A F-2,6-BP é um modulador importante (+)
fosfofrutocinase (glicólise) (-) frutose
2,6-bisfosfatase (gluconeogénese)
Regulação da PFK-1 pela PFK-2
enzima bifuncional:
– No fígado quando o nível de glucose no sangue é
baixa, o glucagon activa a síntese de cAMP, a PFK-2 é
fosforilada pela proteína cinase A
o domínio com função de fosforilação da PFK-2 é
inactivado e o seu domínio de fosfatase é activado,
convertendo a F-2,6-PP em F6P:
na forma desfosforilada é uma cinase – fosfofrutose
cinase (frutose-6P + ATP  frutose-2,6-PP)
na forma fosforilada é uma fosfatase – frutose-1,6-
bifosfatase (frutose-2,6-PP  frutose-6P + Pi)
O glucagon e a epinefrina estimulam a produção de
cAMP no fígado:
[F-2,6-PP] → inibição da PFK-1 e inibição da função
de frutose1,6-bifosfatase da PFK-2 → activação da
gluconeogénese
Regulação da piruvato cinase
É uma enzima alostérica:
Activação por: frutose 1,6-BP. A frutose-1,6-BP (produto
da reacção catalisada pela PFK, reacção nº 3 = ponto
mais importante da regulação). [F-1,6-BP]   PFK
está activa e a glicólise deve prosseguir –
Inibição por: ATP e alanina que indicam que não há
necessidade de energia nem blocos precursores para
biossíntese e a glicólise deve ser inibida
Dentro da mesma célula a glicólise e a
gluconeogénese nunca podem ocorrer em simultâneo,
pois conduziriam apenas a dissipação de energia
Regulação das actividades das enzimas:
 Quando a carga energética é baixa ([AMP]↑) e oxidação de ácidos gordos, glucose e alguns
há falta de precursores para a biossíntese aminoácidos conduzem à produção de Acetil-CoA
([citrato]↓), a glicólise é estimulada e a (forma ativada do acetato)
gluconeogénese inibida

A F-2,6-BP responde ao nível de glucose no 1. A conversão do piruvato em Acetil-CoA e

sangue; quando este é elevado a glicólise é CO2 é efetuada através de reações de
estimulada e a gluconeogénese inibida, quando descarboxilação e desidrogenação
este é baixo dáse o contrário (descarboxilação oxidativa)

O caminho da gluconeogénese só se inicia a 2. A oxidação dos grupos acetil no ciclo de

partir do piruvato se houver energia e blocos
precursores suficientes ([ADP]↓) e ([acetil-CoA]
↑)
Regulação das quantidades das enzimas:
As quantidades das enzimas são também
reguladas por hormonas que afectam a
expressão dos genes, quer a nível da
velocidade de transcrição quer a nível da
degradação dos RNAs mensageiros:
Insulina (aumenta a seguir às refeições).
Estimula a produção da fosfofrutocinase e da
piruvato cinase (enzimas da glicólise) e da
enzima bifuncional que produz e degrada F-
2,6-BP
Glucagon (aumenta se há fome). Inibe a
expressão destes genes e estimula a
fosfoenolpiruvato carboxicinase e a frutose 1,6-
bisfosfatase (enzimas da gluconeogénese)
Krebs conduz à formação de poder redutor
(NADH E FADH2), GTP/ATP E CO2
3. Os e- transportados pelo NADH e FADH2 são
transferidos para a cadeia de transporte
eletrónico reduzindo no final O2 e H2O e
levando à síntese de ATP
Cadeia Respiratória -> Reoxidação dos cofatores
reduzidos nma sequência de reações de transferência
de e- em que o O é o aceitador final. A energia
libertada é utilizada para formar ATP (fosforilação
oxidativa)
Objetivos:
Oxidação completa de unidades de 2 carbonos para a
obtenção de enrgia (GTP, NADH e FADH2)

O controle da transcrição é lento, ocorre na

escala de tempo de horas ou dias, em
comparação com o controle alostérico que se
dá em segundos ou minutos

Ciclo de Krebs
(ciclo do ácido cítrico ou dos ácidos tricarboxílicos)
É o caminho final comum para a oxidação completa das
moléculas que fornecem energia (açucares, ácidos
gordos, aminoácidos)
são de precursores para a biossíntese (aminoácidos,
bases aromáticas, colesterol, porfirinas)
Localização:
O O2 não intervém diretamente nas reações do ciclo,
Ciclo dá-se na:
mas é necessário para reoxidar as moléculas de NADH
e FADH2 -> o ciclo do ácido cítrico só funciona em Matriz mitocondrial
condições aeróbicas
O ATP é formado na cadeia respiratória como
resultado da reoxidação dos cofatores reduzidos (NADH
e FADH2)

O Caráter anfibólico do ciclo de Krebs

Fornece precursores para biossíntese -> reações
anfibólicas
Os intermediários do ciclo são repostos por reações
anapleróticas
Formação de acetil-CoA
O complexo de multienzimático piruvato desidrogenase
(PDH) catalisa a descarboxilação oxidativa do piruvato a
acetato (reação irreversível) por remoção de CO2 com
formação de NADH. Nos animais o acetil-CoA não pode
ser convertido em glucose.
Piruvato + CoA + NAD+ -> acetil-CoA + CO2 + NADH

As reações anapleróticas
Balanço energético do ciclo de Kreps Regulação piruvato desidrogenase (PDH)
O complexo piruvato desidrogenase é:
1. Regulado alostéricamente: inibido pelos
produtos da reação, acetil-coenzimaA e NADH.
2. Inibido quando a carga energética é elevada e
os intermediários para a biossíntese abundantes
3. Inibido por modificação covalente, por
Cada unidade acetato dá origem a 10 ATP fosforilação: a cinase que catalisa a fosforilação
Os cofatores reduzidos, NADH e FADH2, são da PHD é inibida por piruvato e ATP
reoxidados na cadeia respiratória; a energia produzida é
aproveitada para formar ATP por fosforilação oxidativa:
10 NADH -> 25 ATP
2 FADH2 -> 3 ATP
-Balanço global: 1 glucose -> 6CO2
28 ATP (fosforilação oxidativa)
4 ATP (fosforilação a nível do substrato)
Em condições aeróbicas formam-se 32 ATP na
oxidação completa de uma molécula de glucose
(em condições anaeróbicas 2 ATP)
Regulação do ciclo de Krebs:
O ciclo do ácido cítrico é controlado em vários pontos
(reações irreversíveis):
1. Isocitrato desidrigenase:
Ativação alostérica por ADP e inibição por
NADH e ATP

2. α-cetoglutarato desidrogenase
Inibição por succinilCoA, NADH e ATP

3. Em muitas bactérias a entrada no ciclo também

é controlada:
Citrato sintase: inibição alostérica por ATP
(aumenta Km para acetilCoA)

Fermentação homoláctica, conversão da glucose em

lactato em condições anaeróbias ou quase anaeróbicas
Glucose + 2ADP + 2Pi ⎯→ 2lactato + 2ATP + 2H2O + 2H+

Regulação coordenada da Glicólise e do ciclo de
Krebs:
Em condições normais as velocidades da
glicólise e do ciclo de Krebs estão controladas
pelos níveis de ATP e NADH, componentes
comuns aos dois caminhos, e também pela
concentração de citrato que é um inibidor da
fosfofrutocinase (enzima que catalisa o passo
limitante da glicólise)
A cadeia de transporte eletrónico:
A cadeia respiratória é constituída por 4
complexos membranares -> o complexo II está
fisicamente ligado ao ciclo de Krebs (succinato–
Q redutase), os outros 3 são bombas de
protões
Dois transportadores móveis fazem a ligação
entre os vários complexos:
• Coenzima Q, transportador de 2
electrões e 2 protões, lipossolúvel

• Citocromo c, pequena proteína com

um grupo hemo; transporta 1 electrão
[ATP] / [ADP] e é solúvel em água
[NADH]/[NAD+]

[citrato] inibe a glicólise e

estimula a glucogénese

Cadeia Respiratória:

Os transportadores de electrões

Os transportadores de electrões da cadeia respiratória

mitocondrial são, maioritariamente, proteínas membranares
Em cada complexo os electrões são transferidos para
cofactores. À excepção do NAD+ e da coenzima Q, todos
os cofactores encontram-se covalentemente ligados às suas
apoproteínas
Para além do NAD+ , FAD e FMN, a cadeia respiratória
envolve mais 4 tipos de transportadores de e − :

Anatomia da Mitocôndria: 1. Ubiquinona (Coenzima Q ou Q)

Benzoquinona lipossolúvel (hidrófoba) constituída por um
nº variável de isopreno Nas quinonas as reacções de
transferência de electrões estão acopladas à
transferência de protões [2x(H+ + 1e - ] → permite
gerar o gradiente de protões à custa do transporte
electrónico

2. . Citocromos (Fe2+/Fe3+)
 3. Proteínas de Ferro-enxofre (FeS): o ferro pode transferência de electrões do citocromo c para o
estar Fe3+ ou Fe2+ aceitador final (O2)
Contagem do ATP formado na oxidação completa da
glucose

4. Proteínas de Cobre

Entrada de electrões na cadeia respiratória

A entrada de electrões na cadeia de transporte
electrónico mitocondrial ocorre, sempre, via um
cofactor flavínico

Transportadores do NADH citoplasmático

Transportador malato – aspartato (células de fígado,
rins e coração)
1 - O NADH citoplasmático transfere os dois electrões
para o oxaloacetato originando malato. Este é
transportado pelo transportador malato--cetoglutarato
para a matriz mitocôndrial. Aí transfere os dois electrões
para o NAD+ e o NADH resultante é oxidado pela
cadeia respiratória

REACÇÕES CATALISADAS PELOS COMPLEXOS Neste caso 1 NADH citoplasmático origina 2.5 ATP
TRANSPORTADORES DE ELECTRÕES
Complexo I (principal ponto de entrada de electrões na
cadeia respiratória)

NADH + CoQ(ox) → NAD+ + CoQ(red)

Complexo I (segundo ponto de entrada de electrões na
cadeia respiratória, contém a enzima succinato
desidrogenase a única enzima membranar do ciclo do ácido
citrico)

FADH2 + CoQ(ox) → FAD + CoQ(red)

Complexo I I

CoQ(red) + cit c(ox)→ CoQ(red) + cit c(red)

Complexo IV Transportador glicerol-fosfato (células de músculos
cit c(red)+ 1/2O2 → cit c(ox) + H2O esqueléticos)

Os complexos I e II catalisam a transferência de 2 - O NADH citoplasmático transfere os dois electrões

electrões do NADH e do succinato para a ubiquinona,
respectivamente O complexo III transfere electrões da
ubiquinona para o citocromo c O complexo IV catalisa a
para a dihidroxiacetona-fosfato. A enzima glicerol-3-
fosfato desidrogenase ligada à membrana interna da
mitocôndria recebe na co-enzima FAD os dois
electrões do glicerol-3-fosfato cedendo-os em seguida
à ubiquinona
Neste caso 1 NADH citoplasmático origina 1.5 ATP
E0’ dos transportadores da cadeia respiratória - perfil
energético da respiração
A ENERGIA LIBERTADA PELA OXIDAÇÃO DO NADH
(FADH2 ) É UTILIZADA PARA CONDUZIR A
BIOSÍNTESE ENDERGÓNICA DO ATP
A energia associada ao transporte de electrões
Por cada par de electrões transferidos para o
O2 , 10H+ são bombeados para o espaço
intermembranar, de acordo com a equação
vectorial:
NADH + 11H+ N + ½O2 → NAD+ + 10H+ P + H2O
FOSFORILAÇÃO OXIDATIVA (TEORIA
QUIMIOSMÓTICA -TEORIA DE MITCHELL)
Os electrões do NADH e de outros substractos
oxidáveis passam através de uma série de
transportadores electrónicos localizados na membrana
interna da mitocôndria. Acoplado a este fluxo de
electrões existe transferência de protões através da
membrana.
O gradiente electroquímico resultante é utilizado para
formar ATP pela ATPsintase. Dada a impermeabilidade
da membrana interna aos protões estes retornam à
matriz mitocondrial através de canais específicos
existentes na sub-unidade F0 da ATPsintase. Este fluxo
de protões gera energia que conduz à síntese ATP na
subunidade F1 da ATPsintase
Inibição dos complexos da cadeia
Efeito de substratos e inibidores da cadeia de
transporte electrónico mitocondrial
A fosforilação oxidativa é regulada pela carga
energética
Se a carga energética é elevada, a velocidade de
transporte electrónico baixa e a concentração de
cofactores oxidados (NAD+ e FAD) baixa -> diminuição
da velocidade do ciclo do ácido cítrico:

• Acumulação de citrato  inibição da glicólise

• Acumulação de acetilCoA  activação da
piruvato carboxilase / gluconeogése (e também
activação da síntese de ácidos gordos)

Se houver excesso de energia, o sistema reage

activando a biossíntese de hidratos de carbono e
de ácidos gordos, i.e., armazena energia